АЛКИЛРЕЗОРЦИНЫ В КАЧЕСТВЕ ЦИТОПРОТЕКТИВНОГО АГЕНТА Российский патент 2023 года по МПК C07C39/08 A61K31/05 

Область техники, к которой относится изобретение

Настоящее изобретение относится к области медицины и ветеринарии, а именно, к лечению и профилактике инфекционно-воспалительных заболеваний. Заявлена фармацевтическая композиция, содержащая алкилрезорцин и глюканы, в частности, соединения группы бета-глюкана, которая может использоваться при лечении различных инфекционно-воспалительных заболеваний, в том числе заболеваний, вызываемых штаммами бактерий, резистентных и/или чувствительных к антибиотикам. Кроме того, настоящее изобретение относится к применению алкилрезорцина в качестве цитопротективного агента.

Уровень техники

Воспалительные заболевания, вызываемые заражением бактериальными патогенами, (инфекционно-воспалительные заболевания) являются одними из самых распространенных у человека и сельскохозяйственных животных. Главным подходом в лечении инфекционно-воспалительных заболеваний в настоящее время является использование антибиотиков. Их широкое внедрение в медицине и ветеринарии позволило значительно снизить летальность при инфекционно-воспалительных заболеваниях. Тем не менее, резистентность микроорганизмов к антибиотикам и снижение их эффективности является главной проблемой их применения.

Заражение многоклеточных эукариотических организмов, в частности, млекопитающих бактериальными патогенами, начинается с проникновения бактерии (бактериальной инвазии) в их внутреннюю среду, затем следует активная бактериальная экспансия и гибель многоклеточного организма в результате этой экспансии.

В ходе эволюции многоклеточные эукариоты сформировали ряд механизмов, позволяющих противостоять бактериальной инвазии и элиминировать проникшие бактериальные патогены. Многочисленные исследования установили, что отсутствие или значительное ослабление этих механизмов приводит к активной инвазии бактерий и развитию инфекционного процесса. И наоборот, усиление механизмов устойчивости к бактериальной инвазии способствует повышению защиты от бактериальной инвазии.

Таким образом, усиление механизмов устойчивости клеток к бактериальной инвазии является еще одним подходом к терапии инфекционно-воспалительных заболеваний, наряду с применением антибиотиков.

Важным механизмом устойчивости клеток организма млекопитающих к бактериальной инвазии является так называемая колонизационная резистентность, которая в свою очередь определяется целостностью и полноценным функционированием клеток, граничащих с внешней средой (покровный эпителий кожи и слизистых). Жизнеспособные, нормально функционирующие клетки покровного эпителия кожи и слизистых обеспечивают колонизационную резистентность за счет формирования плотного пласта клеток, трудно проницаемого для бактериальных патогенов, синтеза и секреции компонентов барьера, механической эвакуации патогенов ресничками апикальной части клеток и, что крайне важно, синтезом антибактериальных веществ (пептиды, сурфактанты, органические кислоты). Как указано выше, первоначальным этапом бактериальной инвазии является механическое разрушение и/или метаболическое (включая воспалительное) нарушение функциональной активности клеток покровного эпителия, после чего происходит перемещение бактериальных клеток и их компонентов, то есть лигандов PRR (патоген распознающий рецептор), в подслизистый слой и инициация воспалительных реакций с высвобождением медиаторов воспаления.

Возникающие на месте бактериальной инвазии воспалительные реакции с высвобождением медиаторов воспаления приводят к повреждению и дисфункции прилежащих участков покровного эпителия (так называемой вторичной альтерации), что снижает колонизационную резистентность и, в результате, приводит к генерализации инфекционно-воспалительного процесса. Таким образом, снижение количества медиаторов воспаления с целью повышения колонизационной резистентности и сохранения функциональной целостности клеток является подходом для усиления механизмов устойчивости клеток к бактериальной инвазии, то есть борьбы с инфекционно-воспалительным заболеванием.

Основными медиаторами воспаления, приводящими к некрозу и апоптозу клеток эпителия, являются активные формы кислорода, включая синглетный кислород, гидроксильный радикал, перекись водорода и тому подобное. При этом, активные формы кислорода обладают цитопатогенным действием на бактерии, которые вызывали воспалительную реакцию. Таким образом, уменьшение продукции активных форм кислорода на месте бактериальной инвазии не является оптимальным походом. Необходимо повысить жизнеспособность и поддержание функциональной целостности клеток эпителия в присутствии бактерицидных и цитотоксических концентраций медиаторов воспаления. Такое повышение будет способствовать сохранению колонизационной резистентности клеток покровного эпителия и ограничивать распространение инфекционно-воспалительного процесса.

Клетки покровного эпителия способны синтезировать и секретировать биологически активные вещества, обладающие про- и противовоспалительной активностью в ответ на стимулы, ассоциированные с бактериальными патогенами и повреждением тканей. Смещение спектра таких биологически активных молекул в сторону веществ с противовоспалительной активностью также будет полезно для повышения колонизационной резистентности и лечения инфекционно-воспалительных заболеваний.

Таким образом, авторы настоящего изобретения предлагают сосредоточить усилия на повышении противовоспалительной активности и повышении колонизационной резистентности при лечении инфекционно-воспалительных заболеваний. На этом основании была создана композиция, содержащая алкилрезорцин и 1—3/1-6 бета глюкан.

Из уровня техники известен патент РФ 2665006, 28 февраля 2017, относящийся к композиции, содержащей антибиотик и С-алкилрезорцин, а также солюбилизатор. В частности, в патенте описана композиция, включающая антибиотик и С4-7-алкилрезорцин, способная замедлять развитие резистентности к антибиотику. В отличие от композиции, описанной в патенте 2665006, настоящая композиция не содержит антибиотик.

В статье Brown D. et al. Antibiotic resistance breakers: can repurposed drugs fill the antibiotic discovery void? Nat Rev Drag Discov. 2015, декабрь; 14(12):821-32), описаны лекарственные вещества, которые усиливают действие антибиотиков. Комбинации антибиотиков и усиливающих агентов являются новым направлением в поиске новых антибактериальным средств, но проблема резистентности к антибиотикам сохраняется для таких комбинаций. В отличие от описанных композиций, композиция по настоящему изобретению не содержит антибиотик.

В другом патенте, RU 2465576, 19 сентября 2011, описан способ защиты ДНК при детекции результатов гель-электрофореза, в котором применяется гексилрезорцин. Патент не относится к композиции алкилрезорцина с соединением группы бета-глюканом для лечения инфекционно-воспалительных заболеваний.

Авторам настоящего изобретения удалось найти новый подход к проблеме лечения инфекционно-воспалительных заболеваний за счет повышения противовоспалительной активности и колонизационной резистентности клеток покровного эпителия.

Такой подход основан на обнаружении новых свойств известного вещества алкилрезорцина, или его аналогов, с длиной алкильной углеводородной цепи от 4 до 12 атомов углерода и модифицированным ароматическим кольцом.

Созданная композиция позволяет:

(а) уменьшить численность бактериальной популяции без использования антибиотиков;

(b) избежать развития резистентности к антибиотикам;

(c) снизить цитотоксический эффект бактериальных токсинов;

(d) снизить цитотоксический эффект продуктов воспаления на клетки покровного эпителия кожи и слизистых для сохранения их жизнеспособности и функциональной активности;

(e) стимулировать противоинфекционный врожденный иммунный ответ, то есть стимулировать фагоцитоз, продукцию антибактериальных факторов, в частности антибактериальных пептидов.

Наконец, настоящее изобретение позволяет эффективно устранять повреждающее воздействие воспалительного процесса на окружающие воспалительный локус (очаг, зону, место, локализацию, и тому подобное) здоровые ткани, сохраняя их физическую целостность и функциональную компетентность (то есть, обладает цитопротекторным действием).

Раскрытие сущности изобретения

В первом аспекте настоящее изобретение относится к композиции алкилрезорцина, или его аналогов, с длиной алкильной углеводородной цепи от 4 до 12 атомов углерода и модифицированным ароматическим кольцом, и соединением группы бета-глюкана. В одном из вариантов осуществления такой композиции алкилрезорцин представляет собой бутилрезорцин, гексилрезорцин или гептилрезорцин. В еще одном варианте осуществления композиция по настоящему изобретению содержит глюкан, в частности, соединение группы бета-глюкана, которое представляет собой хитозан. В частности, хитозан в композиции находится в виде наночастиц размером менее 200 мкм. Кроме того, композиция по настоящему изобретению может содержать нейтральные вспомогательные вещества, использующиеся в фармацевтики.

Во другом аспекте, композиция по настоящему изобретению повышает противовоспалительную активность клеток, граничащих с внешней средой, а также поддерживает их барьерную функцию. В частности, композиция повышает противовоспалительную активностью и барьерную функцию клеток покровного эпителия и слизистых.

В еще одном аспекте настоящее изобретение относится к композиции по настоящему изобретению для лечения и профилактики инфекционно-воспалительного заболевания у животных и человека. В частности, композицию по изобретения можно использовать при лечении конкретных инфекционно-воспалительных заболеваний, в частности, инфекционно-воспалительных заболеваниях кожи, ротовой полости, урогенитального тракта, ЖКТ. В частности, настоящее изобретение эффективно для лечения и профилактики мастита, например, мастита коров.

Также изобретение относится к способу лечения инфекционно-воспалительного заболевания, включающему применение композиции по настоящему изобретению. В частности, к способу лечения, включающему местное применение композиции по настоящему изобретению.

В еще одном аспекте настоящее изобретение относится к комбинированной терапии для лечения инфекционно-воспалительного заболевания, включающему применение композиции по настоящему изобретению и любого антибактериального средства, в частности, антибиотика. В одном из вариантов осуществления, в качестве антибактериального средства можно использовать серу и другие противомикробные средства.

В особом аспекте композицию по настоящему заболеванию относится можно использоваться в способе лечения инфекционно-воспалительного заболевания, вызванного патогеном с резистентностью и/или чувствительностью к действию антибиотика.

Также настоящее изобретение относится к составу для местного применения, содержащему композицию по настоящему изобретению. Состав можно наносить на пораженный участок при лечении или профилактики инфекционно-воспалительного заболевания. В частности, состав можно использовать для лечения или профилактики первичного и вторичного инфицирования раны, ожога и любого другого поражения, которое может быть инфицировано.

Настоящее изобретение относится к применению композиции по настоящему изобретению для лечения или профилактики инфекционно-воспалительных заболеваний. В частности, настоящее изобретение относится к применению композиции по настоящему изобретению при лечении или профилактики конкретных инфекционно-воспалительных заболеваний, в частности, инфекционно-воспалительных заболеваниях кожи, ротовой полости, урогенитального тракта, ЖКТ. В еще одном варианте осуществления, композицию по настоящему изобретению применяют в комбинации с антибактериальным средством, в частности, в комбинации с антибиотиком или другим противомикробным средством.

Кроме того, заявитель обнаружил, что алкилрезорцин обладает цитопротективными эффектами, поэтому также в настоящем изобретении заявлено применение алкилрезорцина, самостоятельно или в комбинации с другими подходящими веществами, в том числе, с глюканами, для цитопротекции.

Настоящее изобретение также включает в себя набор, содержащий композицию по настоящему изобретению в любой фармацевтической форме, как описано выше, а также инструкцию или другие соответствующие компоненты. В качестве примера, настоящее изобретение относится к набору, содержащему заранее заполненный шприц и инструкцию для применения.

Краткое описание чертежей

На фиг.1 показаны результаты исследования, описанного в примере 1. Представленные результаты демонстрируют дозо-зависимый эффект 4-гексилрезорцина и 5-гептилрезорцина на опухолевую линию клеток эпителия толстой кишки человека HT-29, обработанных один из токсических медиаторов воспаления.

На фиг.2 показана экспрессия некоторых генов в клетках HT-29 через 18 часов после обработки алкилоксибензолами. *- p<0,05, n=4, парный критерий Уилкоксона-Манна-Уитни. По оси ординат отношение количества мРНК по отношению к контролю (клетки HT-29 инкубировались без АОБ). По оси абсцисс: 0,2 мкM 4-HexR – обработка 0,2 мкМ 4-гексилрезорцинолом; 2 мкM 4-HexR – обработка 2 мкМ 4-гексилрезорцинолом; 0,2 мкM 5-HepR – обработка 0,2 мкМ 5-гептилрезоцинолом; 2 мкM 5-HepR – 2 мкМ 5-гептилрезоцинолом.

На фиг.3 показана схема действия композиции по настоящему изобретению.

Осуществление изобретения

Все использованные в настоящем описании термины хорошо известны среднему специалисту в данной области. Ниже приведены некоторые определения.

«Воспалительные заболевания, вызываемые заражением бактериальными патогенами», и «инфекционно-воспалительные заболевания» используются в тексте описания взаимозаменяемо.

Под «инфекционно-воспалительным заболеванием» понимают комплексный, местный и общий патологический процесс, возникающий в ответ на действие возбудителя инфекционного заболевания и проявляющийся в реакциях, направленных на устранение продуктов, а если возможно, то и возбудителя. Важно отметить, что механизм воспаления является общим для всех организмов, независимо от локализации, вида раздражителя.

Инфекционно-воспалительные заболевания, которые рассматриваются в рамках настоящее изобретения, включают инфекционно-воспалительные заболевания, связанные с покровным эпителием и слизистой.

В частности, инфекционно-воспалительные заболевания включают инфекционно-воспалительные заболевания кожи и слизистых, инфекционно-воспалительные заболевания полости рта и горла, инфекционно-воспалительные заболевания ухо, горла и носа, инфекционно-воспалительные заболевания желудочно-кишечного тракта (ЖКТ), инфекционно-воспалительные заболевания урогенитального тракта. Указанные варианты приведены только в качестве примера и не являются ограничивающими.

К инфекционно-воспалительным заболеваниям кожи относятся заболевания кожи, вызываемые, в частности, золотистым стафилококком (Staphylococcus aureus), эпидермальным стафилококком (Staphylococcus epidermidus), а также стрепококками. К инфекционно-воспалительным заболеваниям кожи относятся синдром стафилококкового поражения кожи, абсцесс кожи, фурункул и карбункул, флегмона, различные местные инфекции кожи и подкожной клетчатки. Стафилококковые пиодермии также включают остиофолликулит, фолликулит, гидраденит, сикоз, ячмень, потницу и везикулопустулез. К ним также относится эпидемическая пузырчатка новорожденных, эксфолиативный дерматит новорожденных Риттера. Стрептококковые пиодермии включают стрептококковое импетиго, буллезное импетиго, импетиго углов рта, поверхностный панариций, интертригинозную стрептодермию, интертригинозную стрептодермию, послеэрозивный сифилоид, простой лишай, сухую поверхностную стрептодермию, эктиму вульгарную, множественные эктимы, рожистое воспаление, рожистое воспаление у младенца, а также осложнения рожистого воспаления - флебиты, флегмоны и тому подобное. Примером инфекционно-воспалительных заболеваний кожи является смешанная стрептостафилококковая пиодермия, стрептостафилококковое импетиго, хроническая язвенная и язвенно-вегетирующая пиодермия, шанкриформная пиодермия, пиогенная гранулема, эритразма. Кроме того, отдельно следует выделить инфекционно-воспалительные заболевания кожи у детей. В частности, к ним относятся аллергодерматозы (атопический дерматит, экземы, строфулюс), вирусные заболевания (ветряная оспа, герпес), паразитарные заболевания (чесотка, педикулез), которые у детей осложняются вторичным инфицированием, приводящим к развитию разнообразных форм пиодермий. В одном из вариантов осуществления, инфекционно-воспалительные заболевания кожи включают гидраденит подростков, артифициальные дерматиты, экскориированные акне, онихофагии, сопровождающиеся присоединением пиодермий. В еще одном варианте осуществления, инфекционно-воспалительные заболевания кожи включают хроническую язвенную и язвенно-вегетирующую пиодермию, карбункулы, сикозы.

Отдельную группу воспалительных-заболеваний кожи включают паразитарные болезни кожи. К ним относятся, в частности, чесотка, при которой образуются папулы, пустулы, эрозии, расчесы, гнойные и геморрагические корочки, а также пост-воспалительные пятна пигментации, с присоединенной вторичной инфекцией. Отдельно следует выделить чесотку, осложненную пиодермией, и чесотку у ребенка, при которых характерно присоединение вторичной инфекции с развитием распространенных форм пиодермии.

Другим паразитарным заболеванием кожи является педикулез, при котором также характерно присоединение инфекции.

К инфекционно-воспалительным заболеваниям полости рта и горла относятся фарингит, тонзиллит, пародонтит, гингивит, стоматит.

К инфекционно-воспалительным заболеваниям уха, горла и носа относятся, в частности, аденоиды, риниты, гаймориты, синуситы, отиты, тимпаниты, евстахииты. Болезни уха, носа и горла зачастую являются осложнениями перенесенных вирусных и бактериальных инфекций.

К инфекционно-воспалительным заболеваниям урогенитального тракта относятся заболевания, вызываемые таким возбудителями, как стафилококки, уреаплазмы, энтерококки, хламидии, вирус герпеса, грибок Candida, кишечная палочка, гонококк, трихомонада. Примеры заболеваний, в отношении которых применение композиции по настоящему изобретению будет эффективно, включают баланит, уретрит, цистит, эндометрит, баланопостит, оофорит, сальпингит.

Инфекционно-воспалительные заболевания по настоящему изобретению также включают в себя инфекционно-воспалительные заболевания ЖКТ, к которым относятся острый и хронический гастрит, дуоденит, пострезекционный синдром (демпинг-синдром), язва желудка и двенадцатиперстной кишки, эрозии желудка и двенадцатиперстной кишки, язвенная болезнь, воспалительные болезни кишечника, геморрой, дивертикулез ободочной кишки, дивертикулы пищеварительного тракта, инфекционное воспаление кишечника, ишемический колит, неспецифический язвенный колит, неспецифическое воспаление кишечника, острый колит, острый энтерит, хронический колит, хронический энтерит, энтерит, язвенный колит и тому подобное, связанные с воспалительным и/или инфекционным компонентом в своем патогенезе.

Также к инфекционно-воспалительным заболеваниям по настоящему изобретению относится мастит, в частности, мастит коров.

Под «клетками покровного эпителия и слизистых» понимают клетки эпителиальной ткани, то есть, клетки, выстилающие поверхность тела, полость тела, слизистые оболочки внутренних органов, в частности пищевого тракта, дыхательной системы, мочеполовые пути.

Под «антибиотиками» понимают вещества, продуцируемые микроорганизмами, клетками животных и растений, а также производные и синтетические продукты, которые обладают селективной способностью подавлять и задерживать рост микроорганизмов. К антибиотикам в рамках настоящего изобретения относятся все известные антибиотики, включая антибиотики, к которым у микроорганизмов имеется резистентность и/или чувствительность, в частности, бета-лактамные антибиотики (пенициллины, цефалоспорины, карбапенемы), макролиды, тетрациклины, аминогликозиды, линкозамиды, хлорамфеникол, гликопептидные антибиотики, полимиксины, сульфаниламидные антибактериальные препараты, хинолоны, производные нитрофурана, противотуберкулёзные препараты, противогрибковые антибиотики. Неограничивающими примерами антибиотиков являются: бета-лактамные антибиотики - бензилпенициллин (пенициллин), феноксиметилпенициллин, метициллин, оксациллин, нафциллин, амоксициллин, ампициллин, тикарциллин, карбенициллин, уреидопенициллины (мезлоциллин, азлоциллин), амидинопенициллины (мециллам); цефалоспорины – цефалоридин, цефалотин, цефапирин, цефрадин, цефазолин, цефалексин, цефадроксил, цефуроксим, цефаклор, цефамандол, цефотиам, цефсулодин, цефокситин, цефотаксим, цефоперазон, цефтриаксон, цефтибутен, цефтазидим, цефиксим, цефподоксим, цефодизим, цефетамет, цефпиром, цефепим, цефтобипрол, цефтаролин, цефтолозан; карбапенемы – биапенем, эртапенем, дорипенем, фаропенем, меропенем, имипенем; макролиды - эритромицин, олеандомицин, мидекамицин, спирамицин, лейкомицин, джозамицин, рокситромицин, кларитромицин, диритромицин, флуритромицин, телитромицин, азитромицин, рокитамицин, тетрациклины – тетрациклин, окситетрациклин, хлортетрациклин; аминогликозиды – стрептомицин, канамицин, неомицин, гентамицин, тобрамицин, нетилмицин, сизомицин, амикацин, изепамицин; линкозамиды – антибиотик линкомицин и его полусинтетический аналог клиндамицин; хлорамфеникол – левомицетин, синтомицин; гликопептидные антибиотики - ванкомицин, тейкопланин, телаванцин, блеомицин, рамопланин и декапланин; полимиксины - полимиксин В и полимиксин М; сульфаниламидные антибактериальные препараты – белый стрептоцид, красный стрептоцид; хинолоны - налидиксовая, оксолиновая, пипемидовая кислоты, норфлоксацин, офлоксацин, пефлоксацин, ципрофлоксацин, левофлоксацин, спарфлоксацин, моксифлоксацин; нитрофураны – нифурател; противотуберкулёзные препараты - изониазид, рифампицин, стрептомицин, канамицин, амикацин, этамбутол, пиразинамид, офлоксацин, ципрофлоксацин, этионамид, протионамид, капреомицин, циклосерин, ПАСК, тиоацетазон; противогрибковые антибиотики – нистатин, амфотерицин B.

Под «патогенными микроорганизмами», в данном случае, понимают любой микроорганизм, в том числе грибы, вирусы, бактерии, вызывающие заболевание у человека. В частности, к патогенным микроорганизмам относятся представители родов Staphylococcus и Streptococcus, уреаплазмы, энтерококки, хламидии, вирус герпеса, грибок Candida, кишечная палочка, гонококк, трихомонада, цитомегаловирус, папилломавирус, микоплазма и тому подобное.

Под «резистентностью к антибиотикам» понимают феномен устойчивости штамма возбудителей инфекции к действию одного или нескольких антибактериальных препаратов, снижение чувствительности культуры микроорганизмов к действию антибактериального вещества. В основе резистентности к антибиотикам лежат эволюционно возникшие механизмы, обеспечивающие уникально высокий уровень приспособляемости микроорганизмов к новым антибактериальным средствам. Ключевыми механизмами развития резистентности к антибиотикам являются:

(1) гены антибиотикорезистентности, контролирующие процессы, обеспечивающие освобождение или ускользание микроорганизма от антибиотика;

(2) гены антибиотикотолерантности, в основном, принадлежащие системе токсинов-антитоксинов, функционирование которых обеспечивает временное снижение метаболического уровня бактериальной клетки и/или пролиферативной активности клеток, что делает бактерии нечувствительными к антипролиферативным или антиметаболическим эффектам антибиотиков. Клетки, которые фактически «переживают» период антибиотикотерапии, называют «персистерами». Их основное отличие от антибиотикорезистентных клеток заключается в последующей способности вновь восстанавливать собственную популяцию.

«Алкилрезорцин» представляет собой фенольный липид, состоящий из длинной алифатической цепи и резорцина. Алкилрезорцин синтезируется высшими растениями, в наибольших количествах зерновыми культурами, некоторыми видами водорослей, мхов, микроорганизмов. Алкилрезорцины состоят из бензольного кольца с двумя гидрокси-группами в положениях 1 и 3 и алкильным заместителем в положении 5. Алкилрезорцины отличаются длиной цепи углеводородного заместителя, который состоит из нечетного количества углеродных атомов со степенью ненасыщенности от 0 до 4. Длиноцепочечные алкилрезорцины (длина алкильного радикала С11–С29) известны своей антиоксидантной активностью. Короткоцепочечные алкилрезорцины (С1–С6) также проявляют антиоксидантную активность, при этом установлено, что последняя возрастает с увеличением длины алкильного радикала. В качестве неограничивающих примеров, такие дополнительные вещества включают алкилрезорцин представляет собой бутилрезорцин, гексилрезорцин или гептилрезорцин. Алкилрезорцины демонстрируют отсутствие мутагенного, канцерогенного и канцерогенного эффектов, поэтому могут применяться в фармакологии и медицине. В настоящем изобретении в качестве предпочтительных аналогов алкилрезорцина рассматривается бутилрезорцин, гексилрезорцин и гептилрезорцин.

Под «глюканом» понимают молекулу полисахарида из мономеров D-глюкозы, связанных гликозидными связями. Глюканы классифицируют на альфа-глюканы и бета-глюканы. Альфа-глюканы представляют собой полисахариды из D-глюкозы, связанные гликозидными связями по альфа типу:

Бета-глюканы представляют собой полисахариды β-D-глюкозы, образующие линейный скелет с 1–3 β-гликозидных связей. Молекулы бета-глюканов разнообразны по своей молекулярной массе, растворимости, вязкости, структуре боковых цепей и желатинирующим свйоствам, что вызывает разлинчые физиологичекие эффекты у животных.

В частности, «соединение группы бета-глюкана» по настоящему изобретению представляет собой смесь из бета-1,3-глюкана и бета-1,6-глюкана. Бета-глюканы являются эффективными иммуномодулирующими средствами.

Одним из представителей бета-глюканов является хитозан, полисахаридный полимер, состоящий из случайно повторяющихся звеньев β-(1-4)-связанного N-ацетил-d-глюкозамина и d-глюкозамина. Хитозан используется в пищевой промышленности, сельском хозяйстве, медицине и фармацевтике, является нетоксичным и биоразлагаемым.

«Противомикробные средства» включают серу, галогены и галогенсодержащие соединения, в частности, хлорамин, пантоцид, йодоформ, йодинол, йод и его препараты, раствор перекиси водорода, калия перманганат, салициловую кислоту, борную кислотe, раствор формальдегида, гексаметилентетрамин, различные медицинские спирты, в частности, этиловый спирт, соли тяжелых металлов, в частности ртути окись желтая, протаргол, колларгол, цинка сульфат, пластырь свинцовый.

«Нейтральные вспомогательные вещества» с точки зрения фармацевтики представляют собой дополнительные вещества, необходимые для придания лекарственному средству соответствующей лекарственной формы, а также для придания лекарственному средству необходимых свойств.

К вспомогательным веществам относятся природные вещества, например, крахмал, который используют в таблетках в качестве наполнителя; в пилюлях в качестве наполнителя; в мазях в качестве загустителя; в суспензиях и эмульсиях в качестве стабилизатора; в качестве сорбента в энтеральных лекарственных формах. Также природные вспомогательные вещества включают альгинаты, которые применяют в качестве загустителей, стабилизаторов и связующих агентов при производстве эмульсий, мазей, в качестве разрыхлители в составе таблеток. Агар-агар обладает стабилизирующими свойствами, а также разрыхляет и придает скользящие свойства таблетируемым материалам. Его также можно вместе с глицерином использовать в качестве мазевой основы. Агар обладает также корригирующим эффектом, смягчая неприятный вкус лекарственных веществ. Другим примером природного вспомогательного вещества является пектин, который используют в качестве основы для жевательных таблеток, в качестве загустителя для мазей и сиропов. Целлюлозу, в частности, микрокристаллическую целлюлозу используют в качестве наполнителя. Коллаген широко использует для формирования пленок, содержащих активное вещество (например, для получения глазных пленок с антибиотиками). Коллаген также используют в составе гемостатических губок. Он обеспечивает оптимальную активность лекарственных веществ, что связано с глубоким проникновением и продолжительным контактом лекарственных веществ, включенных в коллагеновую основу, с тканями организма. Частным вариантом коллагена является желатин, который является активным эмульгатором и стабилизатором. Его также используют для изготовления мазей, суппозиториев и желатиновых капсул.

В качестве вспомогательных средств также можно использовать природные неорганические полимеры, такие как бентониты. Их применяют в качестве адсорбента, для повышения вязкости, обеспечения дисперсности, стабильности лекарственным составам. В качестве скользящего вспомогательного вещества в фармацевтике используется аэросил, который обеспечивает равномерное распределение лекарственных веществ. Тальк используют для улучшения гидрофобность, реологических свойств, стабильности хранения. Его используют в составе мазей в качестве антиперсперанта. Аналогичным образом используют полусинетические производные талька. В основе мазей и линиментов используют метилцеллюлозу, а также карбоксиметилцеллюлозу. Также в фармакологических составах используют оксипропилметилцеллюлозу, ацетилцеллюлозу и другие производные этого метилцеллюлозы.

В качестве синтетических вспомогательные вещества используют поливинол, который применяют в качестве эмульгатора, загустителя и стабилизатора суспензий; в качестве мазевых основ и глазных пленок. Также используют поливинилпирролидон в качестве стабилизатора эмульсий и суспензий, а также как пролонгирующий компонент. Биорастворимый полимер полиакриламида широко используют для создания лекарственных биорастворимых пленок, обеспечивающих максимальное время контакта активного вещества состава с поверхностью. Полиэтиленоксиды используют для изготовления мазей, эмульсий суспензий, суппозиториев и других лекарственных форм. Твин-80, представляющий собой моноэфир олеиновой кислоты, используют в качестве солюбилизатора, эмульгатора и стабилизатора.

В качестве формообразующих агентов (наполнителей или растворителей) можно использовать лактозу, сахар, крахмал; масло какао, парафин, воск; очищенную воду, спирт, полиэтилен гликоль; желатин, эфиры целлюлозы.

К стабилизирующим вспомогательным веществам относят антиоксиданты - бутилоксианизол, бутилокситолуол, токоферолы, каротиноиды, производные серы низкой валентности (натрия сульфит и метабисульфит, ронголит, метионин), аскорбиновая кислота, комплексы с ионами металлов, лимонная кислота, винная кислота, ЭДТА, трилон Б. К противомикробным стабилизующим веществам относятся антисептики и консерванты - хлорбутанолгидрат, фенол, хлороформ, мертиолат, нипагин, нипазол, сорбиновая кислота, этанол, бензиловый спирт, хлорбутанолгидрат, фенол, парабены (нипагин, нипазол), метиловый и пропиловый эфиры, хлорид бензалкония, диметилдодецилбензиламмония хлорид, эфирные масла.

В качестве консервантов используют молочную кислоту, борную кислоту, перекись водорода, сорбиновую кислоту, муравьиную, уроторопин, формальдегид и тому подобное.

В качестве эмульгаторов используют вещества, обладающие способностью придавать устойчивость эмульсиям. Эмульгирующими свойствами обладают мыла одновалентных металлов жирных или синтетических алкилсульфокислот (натрия лаурилсульфат, полиоксиэтиленовые эфиры спиртов (спены, твины), коллоиды большого молекулярного веса, белки (казеин, альбумин, желатин), углеводы (декстрин), сапонины, танины, соли желчных кислот. Для получения эмульсий типа «вода-в-масле» применяют гидрофобные эмульгаторы: жирорастворимые эмульгаторы (мыла поливалентных металлов), липоиды (фосфолипиды, лицетин, ланолин, смолы и воск). К отдельной группе эмульгаторов относятся твердые, высокодисперсные, минеральные порошки, такие как глины, бентониты, окислы, карбонаты, сульфаты кальция, алюминия, кремния (аэросил).

В качестве солюбилизаторов используют глицирин, полиэтиленгликоль.

Кроме того, в качестве вспомогательных средств следует рассматривать плюроники (pluronics), также известные как полоксамеры. Плюроники представляют собой блок-сополимеры полиоксиэтилена и полиоксипропилена, обладают свойствами поверхностно-активных веществ и обеспечивают замедленное освобождения действующих веществ. В зависимости от общей молекулярной массы и соотношения размеров полиоксиэтиленовых и полиоксипропиленовых блоков, различные марки плюроников представляют из себя жидкости, пасты или воскоподобные твердые вещества.

Более подробная информация о вспомогательных веществах, а также об их применении представлена в литературе по фармации, например, в Remington: The Science and Practice of Pharmacy (Hardcover).

Композиция по настоящему изобретению также может находиться в наборе, содержащем композицию по настоящему изобретению, как правило в эффективном количестве, и любой другой соответствующий компонент. В качестве другого соответствующего компонента может, например, выступать основа для создания фармацевтической формы для немедленного применения. Кроме того, набор содержит инструкция по применению композиции. Кроме того, набор может содержать одноразовые перчатки, одноразовый шприц и любые другие компоненты для удобства введения, применения композиции по настоящему изобретению. В качестве примера, настоящее изобретение относится к набору, содержащему заранее заполненный композицией по настоящему изобретению шприц и инструкцию для применения.

Композиция по настоящему изобретению может содержать алкилрезорцин в количестве от 1 до 200 мг/литр и 1-3 бета-глюкан в количестве от 50-500 мг/литр. В конкретном варианте осуществления, композиция по настоящему изобретению находится в смеси с ланолином (вазилином) в соотношении 1:10 и образует мазь. В еще одном варианте осуществления композиция по настоящему изобретению представляет собой 2% раствор для примочек. В еще одном варианте осуществления композиция по настоящему изобретению находятся в форме ушных капель. В еще одном варианте осуществления композиция представляет собой 5-10%, 12% и 20% мазь.

В конкретных вариантах, количественное содержание алкилрезорцина составляет от 0,1-20% и бета-глюкана составляет от 5-50% в фармацевтической композиции или составе. В другом конкретном варианте, количественное содержание алкилрезорцина составляет от 10 мг до 2 г и бета-глюкана составляет от 500 мг до 5 г на 10 г фармацевтической композиции или состава. В предпочтительных вариантах, в качестве алкилрезорцина использовался гексилрезорцинол в количестве от 10 мг до 1 г, в более предпочтительных вариантах осуществления гексилрезорцинол находился в количестве 10, 20, 30, 40, 50, 60 мг на 1 литр готового препарата. Бета-глюкан составлял 100 мг, 200 мг, 300 мг, 400 мг, 500 мг на 1 литр готового препарата.

Кроме того, в конкретном варианте осуществления в качестве основы используется вода для инъекций и/или гидрогель, представляющий собой полимеры акриловой кислоты (ПАК), поперечно-сшитые полиалкильными эфирами сахаров или многотомных спиртов. Концентрация ПАК может варьировать от 0,5 до 30 г/л готового состава, от 1 до 30 г/л готового состава или от 1 до 20 г/литр готового состава.

Кроме этого, в качестве основы могут использоваться стабильные эмульсии «вода в масле» или «масло в воде», при соотношении объёмов компонентов масло/вода в конечном продукте от 1/9 до 9/1. Под термином «масло» понимаются триглицериды органических кислот, а также жидкие смеси высококипящих (высокомолекулярных) углеводородов (температура кипения 300—600°C), главным образом алкилнафтеновых и алкилароматических, получаемые переработкой нефти, разрешённые к применению в медицинской и ветеринарной практике - например, вазелиновое масло.

Кроме этого, в состав препарата входит метиловый эфир параоксибензойной кислоты в количестве от 0,1 г/л готового препарата до 3 г/л готового препарата, в особенно предпочтительном варианте от 0,5 г/л до 2,5 г/л готового состава.

Также, в состав препарата входит диметилсульфоксид (ДМСО) в концентрации от 10 до 200 г, от 20 до 100 г или от 22 до 110 г на литр готового состава.

В предпочтительном варианте осуществления изобретения состав по изобретению содержит Карбапол 980 NF («Lubrizol» USA) в количестве 1, 1,5, 2, 3, 4 грамма на 1 литр готового раствора, содержание метилового эфира параоксибензойной кислоты (или нипагина) составляет от 0,1 г до 1 г на литр, предпочтительно, 0,2, 0,3, 0,5 г/л готового состава, содержание ДМСО составляет от 30 до 60 г/л, предпочтительно 35, 45 и 55 г/л готового состава, воду для инъекции – quantum satis (предпочтительно до 1 л).

Примеры

Пример 1. Дозозависимый эффект 4-гексилрезорцина и 5-гептилрезорцина на клетки линии НТ-29, обработанные медиатором воспаления

Клетки опухолевой линии эпителия толстой кишки человека НТ-29 культивировали в среде DMEM с добавлением 10 об.% фетальной бычьей сыворотки (кат. Номер SV30160.03, Hyclone, США), 1 мг/мл глутамина (кат. Номер. Ф032, ПанЭко, Россия), 50 Ед/мл пенициллина и 50 мкг/мл стрептомицина (кат. Номер А065, ПанЭко, Россия) при 37°С в атмосфере, содержащей 5% CO₂. После достижении монослоя, клетки промывали раствором Версена и клетки снимали трипсином (0,25% в растворе Версена). Количество клеток подсчитывали с использованием камеры Горяева и рассевали клетки, исходя из расчета – 100000 клеток на см2.

В день проведения эксперимента, клетки НТ-29 достигшие монослоя снимали с подложки, как описано выше и рассевали в 96 –луночные планшеты (SPL Lifesciences, Ю. Корея, кат. Номер 30096, ПанЭко, Россия), по 20000 клеток на лунку. Клетки инкубировали 4 часа, при 37°С, в атмосфере, содержащей 5% CO2. После окончания инкубации, питательную среду вместе с неадгезированными клетками удаляли и в лунки добавляли свежую питательную среду, содержащую 4-гексилрезорцин и 5-гептилрезорцин в конечной концентрации 0 М/л, 10^-5 М/л, 10^-6 М/л и 10^-7 М/л. В контрольные лунки вносили эквивалентный объём питательной среды. Клетки культивировали 18 часов при 37°С, в атмосфере, содержащей 5% CO2 и после окончания инкубации препараты удаляли, клетки промывали свежей питательной средой и вносили Н₂О₂ в конечной концентрации 2×10^-6 М/л. В контрольные лунки вносили эквивалентный объем питательной среды.

Клетки НТ-29 инкубировали с Н₂О₂ в течение 16 часов, при 37°С, в атмосфере, содержащей 5% CO₂. Затем, лунки промывали питательной средой (трижды по 200 мкл) и вносили 100 мкл раствора кристаллического фиолетового (“РЕАХИМ”, Россия) в 10% этаноле. Инкубировали 10 мин и не связавшийся краситель удаляли промыванием планшета водой, до отсутствия окрашивания промывных вод. Оптическую плотность в лунках измеряли на приборе «ClarioStar» (BMG Labtech, Германия) при длине волны 620 нм.

Результаты исследования представлены на фигуре 1.

Представленные результаты демонстрируют дозозависимый цитопротективный эффект 4-гексилрезорцина и 5-гептилрезорцина в отношении опухолевой линии клеток эпителия толстой кишки человека НТ-29, обработанных одним из токсических медиаторов воспаления, в частности, пероксидом водорода.

Пример 2. Гексилрезорцины дозозависимо увеличивают экспрессию генов ARG1, IDO1 в клетках опухолевой линии кишечного эпителия НТ-29

Клетки НТ-29 культивировали в среде DMEM с добавлением 10 об.% фетальной бычьей сыворотки (кат. Номер SV30160.03, Hyclone, США), 1 мг/мл глутамина (кат. Номер. Ф032, ПанЭко, Россия), 50 Ед/мл пенициллина и 50 мкг/мл стрептомицина (кат. Номер А065, ПанЭко, Россия) при 37°С в атмосфере, содержащей 5% CO₂. После достижении монослоя, клетки промывали раствором Версена и клетки снимали трипсином (0,25% в растворе Версена). Количество клеток подсчитывали с использованием камеры Горяева и рассевали клетки, исходя из расчета – 100 000 клеток на см². В день проведения эксперимента, клетки НТ-29, достигшие монослоя снимали с подложки, как описано выше и рассевали в 24 –луночные планшеты (SPL Lifesciences, Ю. Корея, кат. Номер 30096, ПанЭко, Россия), по 100 000 клеток на лунку. Клетки инкубировали 4 часа, при 37°С, в атмосфере, содержащей 5% CO₂. После окончания инкубации, питательную среду вместе с неадгезированными клетками удаляли и в лунки добавляли свежую питательную среду, содержащую 4-гексилрезорцин и 5-гептилрезорцин в конечной концентрации 0 М/л, 10^-5 М/л, 10^-6 М/л и 10^-7 М/л. В контрольные лунки вносили эквивалентный объём питательной среды. Клетки культивировали 18 часов при 37°С, в атмосфере, содержащей 5% CO₂ и после окончания инкубации препараты удаляли, а клетки лизировали в растворе «ExtractRNA» (ЗАО «Евроген», Россия). Лизаты клеток хранили при -80⁰ С, до использования. Выделение мРНК, синтез кодирующей цепи ДНК и проведение реакции RT-PCR проводили с использованием коммерческих наборов производства ЗАО «Евроген», Россия, согласно прилагаемых протоколов.

Уровень экспрессии генов оценивали по содержанию мРНК в клетках НТ–29 с использованием праймеров, представленных в таблице 1.

Таблица 1. Исследованные гены и последовательности использованных праймеров.

Ген Название гена Праймер «Forward» Праймер «Reverse» Длина
ампликона ACTb актин бета TGATGGTGGGCATGGGTCA ATACCCCTCGTAGATGGGCA 380 ARG1 аргиназа 1 TGGACAGACTAGGAATTGGCA CCAGTCCGTCAACATCAAAACT 102 IDO1 индолеамин 2,3-диоксигеназа 1 GCCAGCTTCGAGAAAGAGTTG TTTCTTGGAGAGTTGGCAGTAAG 194 NFIA ядерный фактор I A TCTACGAGCTCCACAAAGCG CCAGGATTGGTGACGTGGG 616 NFkB1 ядерный фактор каппа B субъединица 1 ACCAGGCTGGCAGCTCTTC AACTCTGGCTCATATGGTTTCCCA 197 PTEN фосфатаза и тензиновый гомолог TGGATTCGACTTAGACTTGACCT GGTGGGTTATGGTCTTCAAAAGG 231 SPI1 протоонкоген Spi-1 CTGGATGTTACAGGCGTGCAA CAGGTAGGAGACCTGGTG 346

Результаты проведенных экспериментов представлены на Фиг.2.

Как видно из представленных данных, гексилрезорцины дозозависимо увеличивают экспрессию генов ARG1, IDO1 в клетках опухолевой линии кишечного эпителия НТ-29. Продукты экспрессии этих генов – ферменты аргиназа 1 и индолеамин-пиррол-2,3-диоксигеназа обладают выраженной способностью супрессировать иммунологические механизмы поддержания воспалительного процесса. Кроме этого, аргиназа 1 и индолеамин-пиррол-2,3-диоксигеназа участвуют в уничтожении бактерий, усиливая неспецифическую резистентность барьерных тканей к бактериальной инвазии.

Анализ экспрессии генов NFIA и SPI1 подтверждают ранее установленный факт цитопротективного действия алкилоксибензолов на клетки опухолевой линии кишечного эпителия НТ-29. Показано, что продукты экспрессии этих генов участвуют в защите клеток неблагоприятного воздействия микроокружения.

Пример 3. Действие препарата на основе комбинации по настоящему изобретению для лечения мастита коров в производственных условиях.

Препарат представляет собой однородный гель от бесцветного до желтого цвета с опалесценцией. В препарате содержатся алкилрезорцин, 1-3/1-6 бета-глюкан и вспомогательные вещества (диметилсульфоксид, нипагин, карбопол, вода для инъекций). Препарат представлен в виде пластиковых шприцев по 10 г.

Состав препарата (г/л готового препарата):

Алкилрезорцин 0,45 г/л

Бета-глюкан – 0,55 г/л

Карбапол 980 NF («Lubrizol» USA)- 2,5 г/л,

Метиловый эфир параоксибензойной кислоты (нипагин) - 1 г/л;

ДМСО - 50 г/л;

Вода для инъекции – до 1 л.

Препарат применяли коровам для лечения клинической и субклинической форм мастита бактериальной этиологии в период лактации.

Методы исследования:

При определении эффективности действия препарата учитывались характеристики, в том числе схема применения препарата, возможные ограничения, индивидуальная чувствительность к компонентам препарата, эффект после применения препарата, а также иные характеристики и действия препарата, которые могли быть выявлены в производственных условиях. Исследование проводилось на базе ряда молочных хозяйств в Республике Беларусь и РФ.

Схема проведения исследования:

- Период введения препарата;

- Мониторинг/контроль эффективности в периоды с 3-го по 7 день и с 8-го по 14 день после последнего введения препарата;

- контроль состояния животных после 14 дней с момента окончания лечения.

Из коров с субклинической (n=32) и клинической (n=24) формами мастита были сформированы две опытные группы (1 и 2 группы). Группы формировали постепенно по мере выявления больных животных. Количество пораженных долей вымени составляло от 1 до 4.

Группа, мастит Количество голов Количество долей 1, субклинический 32 57 2, клинический 24 33 Итого: 56 90

Диагноз мастита ставили на основании комплекса диагностических исследований, который включал: общее клиническое обследование животного с проведением пробного сдаивания и внешнего осмотра секрета молочной железы; лабораторное исследование секрета молочной железы с помощью быстрых диагностических тестов (CMT, Kerba test, Беломастин М и др.) и пробы отстаивания; бактериологическое исследование секрета молочной железы, с определением чувствительности выделенной микрофлоры к антибиотикам. При диагностике клинически выраженных маститов (катаральный и фибринозный) прежде всего учитывали характерные изменения со стороны молочной железы и ее секрета, а также данные анамнеза. Исследование молочной железы включало три диагностических приема: осмотр, пальпацию и доение.

Коровам 1 группы (субклинический мастит) вводили в пораженную долю вымени 3-4 кратно с интервалом 12 часов согласно инструкции. Коровам 2 группы (клинический мастит) вводили в пораженную долю вымени 4-8 кратно с интервалом 12 часов согласно инструкции. Во всех опытных группах кратность введения препарата регулировалась в сторону увеличения/уменьшения в зависимости от сроков и степени выздоровления животных, а также индивидуальной чувствительности животных на компоненты препарата.

Препарат вводили в пораженную четверть вымени коровы в разовой дозе 10 г (содержимое 1 шприца). Перед применением препарата секрет из больных четвертей вымени сдаивали и утилизировали, сосок тщательно обрабатывали очищающей салфеткой, затем снимали защитный колпачок, вводили наконечник шприца в канал соска и осторожно выдавливали содержимое. После этого наконечник извлекали, верхушку соска пережимают пальцами и слегка массировали сосок снизу вверх для лучшего распределения лекарственного препарата.

Показанием к прекращению введения препарата являлись значительное уплотнение ткани вымени, повышение температуры вымени и болезненности при пальпации, воспалительные изменения сосков вымени.

Контроль эффективности и мониторинг состояния животных, динамики инфекционно-воспалительного процесса на фоне применения препарата осуществлялись на основании комплекса исследований:

- Микроскопия окрашенных по Романовскому-Гимзе клеточных осадков проб молока.

- Определение микробной нагрузки и идентификация возбудителя в пробе молока, с использованием метода полимеразной цепной реакции (ПЦР) и количественной ПЦР в реальном времени (ПЦР-РВ).

Пробы молока отбирали индивидуально из пораженной доли до введения препарата, ежедневно во время лечения, на 3-й, 7-й и 14-й день после последнего введения препарата. Для диагностики также использовали быстрые диагностические тесты (Kerba test и др.). По результатам обследования и лабораторных исследований животных распределяли на следующие группы:

- Положительная динамика (Д+) – органолептическое улучшение секрета молочной железы, уменьшение количества соматических клеток в молоке, качественное улучшение при осмотре и пальпации вымени, при клинических формах мастита –исчезновение видимых характерных клинических изменений со стороны молочной железы и/или ее секрета;

- Негативная динамика (Д-) - органолептическое ухудшение секрета молочной железы, увеличение количества соматических клеток в молоке, видимое ухудшение при осмотре и пальпации вымени, проявление видимых характерных клинических признаков развития инфекционно-воспалительного процесса;

- Выздоровление (Выздоровление) – секрет молочной железы соответствует норме, количество соматических клеток в молоке не превышает 200 тыс. клеток/мл, клинические изменения в пределах нормы.

Для контроля местного инфекционно-воспалительного процесса в молочной железе животных и оценки продолжительности терапевтического эффекта проводились лабораторные исследования молока на наличие с помощью микроскопии окрашенных по Романовскому-Гимзе клеточных осадков проб молока, а также определение микробной нагрузки и идентификация возбудителя в пробе молока, с использованием метода ПЦР и ПЦР-РВ. Анализ проб и осмотр осуществляли выборочно после 14 дней с момента завершения лечения препаратом.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Таблица 1. Динамика и контроль терапевтической эффективности препарата в период с 3-7 дней с момента окончания терапии.

Группа Кол-во долей Кратность введения, доз Д+долей, (%) Д-долей, (%) Выздоровление, долей, (%) 1
Субклиника 36 3-4 7 (19,4) 2 (05,6) 27 (75,0) 21 >4 2 (09,5) 3 (14,3) 16 (76,2) 57 9 (15,8) 5 (08,8) 43 (75,4) 2
Клиника 18 4-8 3 (16,7) 2 (11,1) 13 (72,2) 15 >8 3 (20,0) 2 (13,3) 10 (66,7) 33 6 (18,2) 4 (12,1) 23 (69,7)

Таблица 2. Динамика и контроль терапевтической эффективности препарата в период с 8-14 дней с момента окончания терапии.

Группа Кол-во долей Кратность введения, доз Д+долей, (%) Д-долей, (%) Выздоровление долей, (%) 1
Субклиника 36 3-4 5 (13,9) 0 (00,0) 31 (86,1) 21 >4 3 (14,3) 1 (04,7) 17 (81,0) 57 8 (14,0) 1 (01,8) 48 (84,2) 2
Клиника 18 4-8 3 (16,7) 0 (00,0) 15 (83,3) 15 >8 2 (13,3) 2 (13,3) 11 (73,4) 33 5 (15,2) 2 (06,1) 26 (78,7)

Анализ данных Таблицы 1 и Таблицы 2 показывает, что лечебная эффективность препарата при субклиническом и клиническом мастите коров составила 84,2% и 78,7% соответственно. Специфика механизма действия препарата и особенности его состава обеспечивают устойчивую терапевтическую эффективность в период применения препарата и отсроченный эффект после прекращения введения препарата (при сохранении положительной динамики в сторону выздоровления), заключающийся в купировании воспалительных изменений в молочной железе и снижении риска рецидива заболевания.

По результатам контроля животных по продолжительности терапевтического эффекта негативной динамики или наличия повторных заболеваний маститом на момент проведения осмотра и анализа проб молока не наблюдалось.

На фоне введения препарата не выявлено никаких побочных действий, не наблюдалось каких-либо нежелательных эффектов, связанных с введением препарата. Все животные завершили исследование в полном соответствии с протоколом. Полученные результаты исследования применения препарата в производственных условиях дают основание для его использования в качестве эффективного средства для лечения субклинического и клинического мастита.

Изобретение относится к применению алкилрезорцина в качестве цитопротективного агента. Предложено применение алкилрезорцина с длиной алкильной цепи от 4 до 12 атомов углерода в концентрации 10^-5 М/л, 10^-6 М/л или 10^-7 М/л в качестве цитопротективного агента, увеличивающего экспрессию генов аргиназы 1 (ARG1) и индолеамин-пиррол-2,3-диоксигеназы (IDO1) в клетках. Изобретение позволяет эффективно устранять повреждающее воздействие воспалительного процесса на окружающие воспалительный локус здоровые ткани. 3 ил., 4 табл., 3 пр.

Применение алкилрезорцина с длиной алкильной цепи от 4 до 12 атомов углерода в концентрации 10^-5 М/л, 10^-6 М/л или 10^-7 М/л в качестве цитопротективного агента, увеличивающего экспрессию генов аргиназы 1 (ARG1) и индолеамин-пиррол-2,3-диоксигеназы (IDO1) в клетках.