Изобретение относится к соединению, фармацевтической композиции, содержащей или состоящей из указанного соединения, набору, содержащему или состоящему из указанного соединения или фармацевтической композиции, и к применению соединения или фармацевтической композиции в диагностике или лечении заболевания, характеризующегося сверхэкспрессией белка активации фибробластов (FAP).
Уровень техники
Рост и распространение опухоли определяются не только раковыми клетками, но также доброкачественными составляющими злокачественного очага, которые относятся к термину «строма». Строма может составлять более 90% опухолевой массы в опухолях с десмопластической реакцией, таких как карцинома молочной железы, толстой кишки и поджелудочной железы. В частности, известно, что субпопуляция фибробластов, называемая связанными с раком фибробластами (CAF), участвует в росте, миграции и прогрессировании опухоли. Таким образом, эти клетки представляют привлекательную мишень для диагностики и противоопухолевой терапии.
Отличительной особенностью CAF является экспрессия сепразы или белка-альфа-активации фибробластов (FAP-α), мембраносвязанного гликопротеина типа II, принадлежащего к семейству дипептидил пептидазы 4 (DPP4). FAP-α обладает активностью как дипептидил пептидазы, так и эндопептидазы. Активность эндопептидазы отличает FAP-α от других членов семейства DPP4. Идентифицированными субстратами для активности эндопептидазы на данный момент являются денатурированный коллаген I типа, α1-антитрипсин и несколько нейропептидов. FAP-α участвует в нормальных процессах развития во время эмбриогенеза и в моделировании тканей. Он не экспрессируется в нормальных тканях взрослого человека или экспрессируется только в незначительных количествах. Однако высокая экспрессия наблюдается при заживлении ран, артрите, атеросклеротических бляшках, фиброзе и более чем в 90% эпителиальных карцином.
Появление FAP-α в CAF во многих эпителиальных опухолях и тот факт, что сверхэкспрессия связана с худшим прогнозом у онкологических больных, привели к гипотезе о том, что активность FAP-α вовлечена в развитие рака, а также в миграцию и распространение раковых клеток. Таким образом, нацеливание на этот фермент для визуализации и эндолучевой терапии можно рассматривать как многообещающую стратегию обнаружения и лечения злокачественных опухолей. Авторы настоящего изобретения разработали небольшую молекулу на основе специфического ингибитора FAP-α и смогли продемонстрировать специфическое поглощение, быструю интернализацию и успешную визуализацию опухолей на животных моделях, а также у пациентов с опухолями. Сравнение с широко используемой радиоактивной меткой 18F-фтордезоксигпюкозой (18F-FDG) выявило явное превосходство нового лиганда FAP-α у пациентов с местнораспространенной аденокарциномой легких. Таким образом, настоящее изобретение обеспечивает, помимо прочего: (i) обнаружение более мелких первичных опухолей и, таким образом, возможность более ранней диагностики, (ii) обнаружение более мелких метастазов и, таким образом, лучшую оценку стадии опухоли, (iii) точный контроль во время проведения операции, способствующий полному хирургическому удалению опухолевой ткани, (iv) лучшая дифференциация между воспалением и опухолевой тканью, (v) более точное стадирование пациентов с опухолями, (vi) лучшее последующее наблюдение за опухолевыми очагами после противоопухолевой терапии, (vii) возможность использовать молекулы в качестве тераностических агентов для диагностики и терапии. Кроме того, молекулы можно применять для диагностики и лечения незлокачественных заболеваний, таких как хроническое воспаление, атеросклероз, фиброз, ремоделирование тканей и келоидные нарушения.
Краткое описание изобретения
В первом аспекте настоящее изобретение обеспечивает соединение формулы (I):
где
Q, R, U, V, W, Y, Z индивидуально присутствуют или отсутствуют при условии, что по меньшей мере три из Q, R, U, V, W, Y, Z присутствуют;
Q, R, U, V, W, Y, Z независимо выбраны из группы, состоящей из О, СН2, NR4, С=O, C=S, C=NR4, HCR4 и R4CR4, при условии, что два О не являются напрямую смежными друг с другом;
R1 и R2 независимо выбраны из группы, состоящей из -Н, -ОН, галогено, C1-6-алкила, -O-C1-6-алкила, S-C1-6-алкила;
R3 выбран из группы, состоящей из -Н, -CN, -В(ОН)2, -С(O)-алкила, -Сварила, -С=С-С(O)-арила, -C=C-S(O)2-арила, -CO2H, -SO3H, -SO2NH2, -PO3H2 и 5-тетразолила;
R4 выбран из группы, состоящей из -Н, -C1-6-алкила, -O-C1-6-алкила, -S-C1-6-алкила, арила и -C1-6-аралкила, при этом каждый -C1-6-алкил необязательно замещен 1-3 заместителями, выбранными из -ОН, оксо, галогено, и необязательно соединен с Q, R, U, V, W, Y или Z;
R5 выбран из группы, состоящей из -Н, галогено и C1-6-алкила;
R6 и R7 независимо выбраны из группы, состоящей из -Н, 
и 
при условии, что R6 и R7 одновременно не представляют собой Н;
где L представляет собой линкер,
где D, А, Е и В индивидуально присутствуют или отсутствуют, при этом предпочтительно присутствуют по меньшей мере А, Е и В, при этом в случае присутствия:
D представляет собой линкер;
А выбран из группы, состоящей из NR4, О, S и СН2;
Е выбран из группы, состоящей из
C1-6-апкила, 
где i равно 1, 2 или 3;
где j равно 1, 2 или 3;
где k равно 1, 2 или 3;
где m равно 1, 2 или 3;
А и Е вместе образуют группу, выбранную из циклоалкила, гетероциклоалкила, арила и гетероарила, где А и Е могут быть моно-, би- и полициклическими, предпочтительно моноциклическими. Каждый А и Е необязательно замещен 1-4 остатками из группы, состоящей из -Н, -С1-6-алкила, -О-С1-6-алкила, -S-C1-6-алкила, алкенила, гетероалкенила, циклоалкенила, циклогетероалкенила, алкинила, арила и -C1-6-аралкила, при этом каждый указанный -С1-6-алкил необязательно замещен 1-3 заместителями, выбранными из -ОН, оксо, галогено; и необязательно соединен с А, В, D, Е или 
В выбран из группы, состоящей из NR4, NR4-O, NR4-C1-6-алкила, NR4-C1-6-алкил-NR4, и 5-10-чпенного N-содержащего ароматического или неароматического моно- или бипиклического гетероцикла, предпочтительно дополнительно содержащего 1 или 2 гетероатома, выбранных из О, N и S, предпочтительно дополнительно содержащего 1 или 2 атома азота, предпочтительно где NR4-C1-6-алкил-NR4 и N-содержащий гетероцикл замещены 1-3 заместителями, выбранными из группы, состоящей из C1-6-алкила, арила, С1-6-аралкила; и
R8 выбран из группы, состоящей из радиоактивного фрагмента, хелатирующего агента, флуоресцентного красителя, контрастного агента и их комбинаций;
представляет собой 1-нафтильный фрагмент или 5-10-членный N-содержащий ароматический или неароматический моно- или бициклический гетероцикл, где между атомом N и X находятся 2 кольцевых атома; указанный гетероцикл необязательно дополнительно содержит 1, 2 или 3 гетероатома, выбранных из О, N и S; и X представляет собой атом С;
или его фармацевтически приемлемый таутомер, рацемат, гидрат, сольват или соль.
Во втором аспекте настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции, содержащей или состоящей по меньшей мере из одного соединения по первому аспекту и необязательно фармацевтически приемлемого носителя и/или вспомогательного вещества.
В третьем аспекте настоящее изобретение относится к соединению по первому аспекту или фармацевтической композиции по второму аспекту для применения в диагностике или лечении заболевания, характеризующегося сверхэкспрессией белка активации фибробластов (FAP) у субъекта-животного или субъекта-человека.
В четвертом аспекте настоящее изобретение относится к набору, содержащему или состоящему из соединения по первому аспекту или фармацевтической композиции по второму аспекту и инструкций по диагностике или лечению заболевания.
Описание фигур
Далее приведена информация о фигурах, включенных в данное описание. В этой связи просим также обратиться выше и/или ниже к подробному описанию изобретения.
Фигура 1: Характеристика in vitro 125I-FAPI-01 и 177Lu-FAPI-02.
А. Связывание радиоактивно меченных FAPI-01 и FAPI-02 с различными линиями раковых клеток человека, а также с линиями клеток, трансфицированными FAP-α человека (HT-1080-FAP), мышиным FAP-α (HEK-muFAP) и CD26 человека (HEK-CD26) после инкубации в течение 60 мин. В. Интернализация радиоактивно меченных FAPI-01 и FAPI-02 в клетки HT-1080-FAP после инкубации в течение от 10 мин до 24 ч. Интернализованная часть показана серым и черным цветом, соответственно; внеклеточно-связанная фракция обозначена белыми столбцами. С. Конкурентное связывание радиоактивно меченных FAPI-01 и FAPI-02 с клетками НТ-1080-FAP после добавления возрастающих концентраций немеченых FAPI-01 и Lu-FAPI-02. D. Интернализация FAPI-02 в FAP-α-положительные и отрицательные клеточные линии. Синий: DAPI; зеленый: FAPI-02-Atto488. E+F. Кинетика эффлюкса FAPI-01 и FAPI-02 после 1 ч инкубации клеток HT-1080-FAP с радиоактивно меченными соединениями с последующей инкубацией со средой без соединения в течение от 1 до 24 ч. Все значения приведены в процентах от общей применяемой дозы, нормализованной на 1 миллион клеток (% ID/1 млн клеток).
Фигура 2: Специфичность связывания и относительные скорости интернализации производных FAPI.
А-С. Скорости связывания и интернализации FAPI-03-FAPI-15 по отношению к FAPI-02 (определяется как 100%). Скорости интернализации после 1, 4 и 24 ч инкубации показаны серым цветом; внеклеточно-связанная фракция представлена белыми столбцами. D. Связывание выбранных производных FAPI с клетками HEK, экспрессирующими мышиный FAP-α и человеческий CD26, после 60 мин инкубации. Правая сторона: соотношение связывания muFAP и CD26. Е. Конкурентное связывание выбранных производных FAPI с клетками HT-1080-FAP после добавления возрастающих концентраций немеченого соединения.
Фигура 3: Визуализация FAPI-02 и -04 у мышей, несущих FAP-положительный (HT-1080-FAP) и отрицательный (Capan-2, SK-LMS-1) ксенотрансплантаты опухоли.
А+С, E+G. PET-визуализацию мелких животных проводили после внутривенного введения 4 нмоль 68Ga-FAPI-02 и -04 (10 МБк, соответственно) в указанные моменты времени. Радиоактивный индикатор быстро накапливался внутри опухоли (обозначено красной стрелкой), при этом не накапливаясь в незлокачественной ткани. Кроме того, наблюдается быстрое выведение через почки и мочевой пузырь. B+D, F+H. Количественная оценка изображений PET демонстрирует прочный клиренс 68Ga-FAPI-02 и -04 из сердечно-сосудистой системы и постоянное проникновение в опухоль.
Фигура 4: Блокирующие эксперименты для анализа специфичности связывания in vivo.
A+D. Блокирование накопления в опухоли 68Ga-FAPI-02 и -04 путем совместного введения 30 нмоль немеченого соединения мышам, несущим опухоль НТ-1080-FAP. В+С, E+F. Кривые зависимости активности 68Ga-FAPI-02 и -04 в выбранных органах от времени после внутривенного введения с немеченым соединением и без него в качестве конкурента.
Фигура 5: Распределение 177Lu-FAPI-02 и -04 в органах у бестимусных мышей, несущих опухоль HT-1080-FAP
А-С. Биораспределение 177Lu-FAPI-02 и -04 измеряли ex vivo в указанные моменты времени после внутривенного введения 1 МБк мышам, несущим человеческие FAP-положительные ксенотрансплантаты опухоли НТ-1080; n=3 для каждого момента времени. Указанные значения выражены в процентах от введенной дозы на грамм ткани (% ID/г). Показано, что радиоактивные индикаторы накапливаются в опухоли, экспрессирующей FAP, показывая наибольшее обогащение через 1 ч для FAPI-02 (4,5% ID/г) и через 2 ч для FAPI-04 (5,4% ID/г). D-F. Отношения опухолевой ткани к нормальной 177Lu-FAPI-02 и -04 через 1, 4 и 24 ч после внутривенного введения.
Фигуры 6-9: РЕТ/СТ-визуализация FAPI-02 у онкологических больных
6А-С. Проекции максимальной интенсивности (MIP) РЕТ/СТ-снимков у пациента, страдающего метастазирующим раком молочной железы. D. Максимальное поглощение тканями 68Ga-FAPI-02 через 10 мин, 1 ч и 3 ч после внутривенного введения пациенту с метастазирующим раком молочной железы.
7. MIP РЕТ/СТ-снимков у пациентов с раком поджелудочной железы, немелкоклеточным раком легкого (NSCLC) и карциномой пищевода и прямой кишки через 1 ч после введения 68Ga-FAPI-02.
8. MIP РЕТ/СТ-снимков у пациентов с карциномой носоглотки и гортани через 1 ч после введения 68Ga-FAPI-02.
9А+В. РЕТ/СТ-визуализация всего тела (MIP) через 1 ч после введения 18F-FDG и 68Ga-FAPI-02 пациенту с местнораспространенной аденокарциномой легких. C+D. Трансаксиальный вид пациента с аденокарциномой легкого через 1 ч после введения 18F-FDG и 68Ga-FAPI-02. FAPI-02 избирательно накапливается в ткани, экспрессирующей FAP-α, и демонстрирует значительно более высокое поглощение в злокачественных очагах по сравнению с 18F-FDG.
Фигуры 10-16: РЕТ/СТ-визуализация FAPI-04 у онкологических больных
10 Проекции максимальной интенсивности (MIP) РЕТ/СТ-снимков у пациента, страдающего метастазирующим раком молочной железы, через 10 мин, 1 и 3 ч после введения 68Ga-FAPI-04.
11 MIP РЕТ/СТ-снимков у пациентов с сигма-карциномой, карциномой гипофаринкса, нейроэндокринными опухолями, холангиом, карциномой яичников и тонкой кишки через 1 ч после введения 68Ga-FAPI-04.
12 MIP РЕТ/СТ-снимков у пациента с раком легкого через 1 ч после введения 68Ga-FAPI-04.
13 MIP РЕТ/СТ-снимков у пациента с онкогенным рахитом через 1 ч после введения 68Ga-FAPI-04.
14 Сравнительная визуализация одного пациента с метастазирующим раком простаты. MIP РЕТ/СТ-снимки через 1 ч после применения радиоактивно меченных DOTATOC, PSMA и FAPI-04.
15 Проекция максимальной интенсивности (MIP) и кривые время-активность динамического РЕТ/СТ-сканирования 68Ga-FAPI-04 у пациента с раком поджелудочной железы.
16 Относительные скорости связывания Lu-177-меченных производных FAPI по сравнению с FAPI-04 (установлено на 100%) после инкубации в течение 1, 4 и 24 ч на FAP-экспрессирующих клетках НТ-1080; n=3.
Фигура 17: Конкурентное связывание выбранных производных FAPI с клетками HT-1080-FAP после добавления возрастающих концентраций немеченого соединения (от 10-10 до 10-5 М, инкубация в течение 60 мин, n=3).
Фигура 18: Связывание производных FAPI с клетками HEK, экспрессирующими мышиный FAP и человеческий CD26, после 60 мин инкубации, n=3. Значения выражены в виде процента от примененной дозы (% ID) на 1 млн клеток.
Фигура 19: Биораспределение выбранных производных FAPI в ксенотрансплантатах HT-1080-FAP через 1, 4 и 24 ч после внутривенного введения радиоактивных индикаторов, n=3. Значения выражены в виде процента от введенной дозы на грамм ткани (% ID/г).
Рисунок 20: Отношение опухоли к крови выбранных производных FAPI в ксенотрансплантатах HT-1080-FAP через 1, 4 и 24 ч после внутривенного введения радиоактивных индикаторов, n=3.
Фигура 21: РЕТ-визуализация Ga-68-меченных FAPI-21 и FAPI-46 у мышей, несущих опухоль HT-1080-FAP; n=1.
Фигура 22: Максимальные стандартизованные значения поглощения (SUV) выбранных производных FAPI у мышей, несущих опухоль HT-1080-FAP; n=1.
Фигура 23: Максимальные (SUV max, фигура 23 А) и средние (SUV mean, фигура 23 В) стандартизованные значения поглощения Ga-68, меченного FAPI-02 и FAPI-04, у онкологических больных; n=25.
Фигура 24: Внутрииндивидуальное сравнение 6 пациентов с 6 различными опухолевыми образованиями, которым проводилась визуализация FDG-PET и FAPI-РЕТ в течение <9 дней.
Фигура 25: РЕТ/СТ-визуализация Ga-68-меченного FAPI-04 у пациентов с карциноматозным перитонитом (А), миокардитом (В) и артрозом тазобедренного сустава (С) через 1 час после введения.
Фигура 26: РЕТ/СТ-визуализация Ga-68-меченного FAPI-21 у онкологических больных через 1 час после введения.
Фигура 27: РЕТ/СТ-визуализация Ga-68-меченного FAPI-46 через 1 час после введения и интратерапевтическая визуализация Sm-153-меченного FAPI-46 через 30 мин после введения у онкологических пациентов.
Фигура 28: Интратерапевтическая визуализация Sm-153-меченного FAPI-46 через 20 ч после введения.
Фигура 29: А. Проекция максимальной интенсивности (MIP) через 1 ч после внутривенного введения 68Ga-FAPI-46 пациенту с метастазирующей колоректальной карциномой. В. Визуализация тормозного излучения через 2 ч после терапевтического лечения 90Y-FAPI-46 того же пациента.
Фигура 30: РЕТ/СТ-визуализация Ga-68-меченного FAPI-46 через 1 час после введения у пациентов с раком легких с идиопатическим фиброзом легких. А, В. Максимальное поглощение индикатора тканью опухоли значительно выше, чем в не обостренных фиброзных поражениях. С. Максимальное поглощение индикатора в ткани опухоли немного ниже, чем в ткани с обострением фиброза.
Фигура 31: А. Связывание Тс-99m-меченного FAPI-19 с клетками НТ-1080-FAP, n=3. В. Конкурентное связывание меченного Tc-99m FAPI-19 с клетками НТ-1080-FAP после добавления возрастающих концентраций немеченого соединения (10-10-10-5 М, инкубация в течение 60 мин, n=3). С. Сцинтиграфия Тс-99m-меченного FAPI-19 в ксенотрансплантатах HT-1080-FAP, n=1.
Фигура 32: А. Связывание Тс-99m-меченного FAPI-34 с клетками НТ-1080-FAP, n=3. В. Сцинтиграфия Тс-99m-меченного FAPI-34 в ксенотрансплантатах НТ-1080-FAP, n=1.
Фигура 33: Сцинтиграфия Тс-99m-меченного FAPI-34 у одного пациента с метастазирующей карциномой поджелудочной железы.
Фигура 34: А. Связывание Pb-203-меченных производных FAPI с клетками НТ-1080-FAP, n=3. В. Кинетика эффлюкса Pb-203-меченных производных FAPI после инкубации клеток HT-1080-FAP с радиоактивно меченным соединением в течение 60 мин и последующей инкубации с нерадиоактивной средой в течение 1-24 часов, n=3. С. Конкурентное связывание Pb-203-меченых FAPI с клетками HT-1080-FAP после добавления возрастающих концентраций немеченого соединения (10-10-10-5 М, инкубация в течение 60 мин, n=3).
Фигура 35: Сцинтиграфия Pb-203-меченных FAPI-04 и FAPI-46 в ксенотрансплантатах HT-1080-FAP, n=1.
Фигура 36: Биораспределение Pb-203, меченных FAPI-04 и FAPI-46, в ксенотрансплантатах HT-1080-FAP через 1, 4, 6 и 24 ч после внутривенного введения радиоактивных индикаторов, n=3. Значения выражены в виде процента от введенной дозы на грамм ткани (% ID/г).
Рисунок 37: А. Связывание Cu-64-меченных FAPI-42 и FAPI-52 с клетками НТ-1080-FAP, n=3. В. Конкурентное связывание Cu-64-меченных FAPI-42 и FAPI-52 с клетками HT-1080-FAP после добавления возрастающих концентраций немеченого соединения (10-10-10-5 М, инкубация в течение 60 мин, n=3). С. Кинетика эффлюкса Cu-64-меченных FAPI-42 и FAPI-52 после инкубации клеток HT-1080-FAP с радиоактивно меченным соединением в течение 60 мин и последующей инкубации с нерадиоактивной средой в течение 1-24 часов, n=3.
Фигура 38: РЕТ-визуализация Cu-64-меченных FAPI-42 и FAPI-52 у мышей, несущих опухоль HT-1080-FAP; n=1.
Фигура 39: РЕТ-визуализация AlF-18-меченных FAPI-42 и FAPI-52 у мышей, несущих опухоль HT-1080-FAP; n=1.
Фигура 40: а. РЕТ-визуализация мелких животных 68Ga-меченого FAPI-02 у несущих опухоль U87MG бестимусных мышей в течение 140 мин после внутривенного введения радиоактивного индикатора. Опухоль обозначена красной стрелкой. b. Биораспределение 177Lu-меченных FAPI-02 и FAPI-04 у бестимусных мышей, несущих опухоль U87MG, через 1, 4 и 24 ч после внутривенного введения радиоактивных индикаторов; n=3.
Фигура 41: Соотношения опухоль-орган для 177Lu-меченных FAPI-02 и -04 у мышей, несущих опухоль U87MG, через 1, 4 и 24 ч после внутривенного введения.
Фигура 42: Проекция максимальной интенсивности (MIP) РЕТ/СТ сканирования у пациента с глиобластомой через 10 мин, 1 и 3 ч после введения 68Ga-FAPI-02.
Фигура 43: Приведенные в качестве примера изображения (Т1-взвешенные с контрастным усилением изображения MRI, FAPI-PET и объединенные изображения обеих модальностей) глиобластом IDH wt, IDH-мутантных глиом II степени ВОЗ и IDH-мутантных глиобластом.
Фигура 44: Абсолютные значения SUVmax для всех 18 глиом.
Фигура 45: Статистический анализ значений SUVmax/BG. Коробчатые диаграммы значений SUVmax/BG и соответствующие ROC-кривые для GBM по сравнению с не-GBM (а, b), IDH-мутантной по сравнению с глиомами IDH-дикого типа (с, d) и глиомы II степени по сравнению с глиомами III/IV степени (е, f).
Фигура 46: Дозозависимое ингибирование ферментативной активности FAP с помощью FAPI-04 и Talabostat. В отличие от Talabostat, мощного ингибитора DPP4 с незначительной активностью в отношении FAP, FAPI-04 демонстрирует устойчивое дозозависимое ингибирование FAP.
Фигура 47: Обратный захват 177Lu-меченных FAPI-04 и FAPI-46 в клетках НТ-1080-FAP. После инкубации клеток с радиоактивными индикаторами в течение 60 мин при 37°С соединения удаляют и добавляют нерадиоактивную среду с (+Comp.) и без (-Comp.) немеченого соединения, и инкубируют в течение от 10 мин до 6 ч. Уже в течение первых десяти минут инкубации происходит возобновление поглощения немеченых производных FAPI, вытесняющих части радиоактивно меченой фракции, что приводит к значительно более низким значениям радиоактивности по сравнению с чистой средой без конкурента. После 6 ч инкубации произошло почти полное замещение радиоактивно меченных FAPI. Эти данные указывают на непрерывный обратный захват интактных молекул FAP обратно на клеточную мембрану при начальной интернализации, что позволяет возобновить связывание и интернализацию лигандов FAP.
Фигура 48: Распределение по органам 177Lu-меченного FAPI-04 после однократной и многократной инъекции бестимусным мышам, несущим опухоль НТ-1080-FAP. Введение двух равных доз 177Lu-FAPI-04 с интервалами в 4 ч приводит к увеличению общей активности органов, включая опухоль, измеренной через 8 ч и 24 ч после первой инъекции. Напротив, введение трех доз (более высокая начальная доза, более низкие последующие дозы) не выявляет изменений в общих активностях органов.
Фигура 49: Связывание производных F-18-FAPI с клетками НТ1080, экспрессирующими человеческий FAP, через 10, 30, 60 и 90 мин инкубации, n=3. Значения выражены в виде процента от примененной дозы (% ID) на 1 млн клеток.
Фигура 50: РЕТ-изображение AlF-18-меченных FAPI-74 и FAPI-52 у мышей, несущих опухоль HT-1080-FAP; n=1.
Фигура 51: Биораспределение FAPI-75 в ксенотрансплантатах HT-1080-FAP через 1, 4 и 24 ч после внутривенного введения радиоактивного индикатора, n=3. Значения выражены в виде процента от введенной дозы на грамм ткани (% ID/г).
Фигура 52: РЕТ-изображение пациента с не мелкоклеточным раком легкого: сильное накопление Е18-меченного FAPI-74 во множественных метастазах.
Фигура 53: Кривые активности в зависимости от времени области сердца (SUVmean) для FAPI-04 и -46 в качестве иллюстрации быстрого клиренса пула крови.
Фигура 54: FAPI-02 и FAPI-04 в разные моменты времени визуализации (10 мин, 1 ч и 3 ч после введения) у двух пациентов с метастазирующим раком молочной железы. За быстрым нацеливанием на опухоль и быстрым клиренсом из крови следует длительная фаза плато без существенного изменения контраста изображения (наверху). По сравнению с FAPI-02 лиганд FAPI-04 характеризуется более длительным временем удерживания в опухоли (внизу).
Фигура 55: Эффективная доза FAPI-02 составила 1,80×10-2 мЗв/МБк, рассчитанная с помощью OLINDA (1,82×10-2 с IDAC1/ICRP60, 1,79×10-2 с IDAC2/ICRP103). Эффективная доза для FAPI-04 РЕТ/СТ составила 1,64×10-2 мЗв/МБк, рассчитанная с помощью OLINDA (1,66×10-2 с IDAC1/ICRP60, 1,35×10-2 с IDAC2/ICRP103). Если отсроченное сканирование через 3 ч после введения не используется в клинической практике, обычная активность для исследования FAPI может быть сокращена до 200 МБк 68Ga; следовательно, доза облучения при таком FAPI-PET/CT-сканировании составит 3-4 мЗв.
Фигура 56: A) 68Ga-FAPI-04 через 1 ч после инъекции в различных опухолевых образованиях при РЕТ/СТ. Самое высокое среднее значение SUVmax (>12) обнаружено при саркоме, раке пищевода, молочной железы, холангиоцеллюлярной карциноме и раке легкого. Наименьшее поглощение FAPI (среднее значение SUVmax <6) наблюдалось в почечно-клеточной карциноме, дифференцированной карциноме щитовидной железы, аденокистозной карциноме, карциноме желудка и феохромоцитоме. Среднее значение SUVmax для гепатоцеллюлярной карциномы, колоректальной карциномы, рака головы-шеи, карциномы яичников, карциномы поджелудочной железы было промежуточным (SUV 6<х<12). В пределах всех опухолевых образований наблюдалась высокая внутрииндивидуальная вариабельность. Из-за низкой фоновой активности (SUV 2) соотношения опухоль/фон были >2 раза больше в промежуточной группе и в >4 раза больше в группе с высокой интенсивностью поглощения. В) Первичные опухолевые образования продемонстрировали сходное поглощение SUV по сравнению с опухолевыми образованиями с использованием FAPI-04.
Фигура 57: Иллюстративные PET-изображения различных опухолевых образований, которые использовали для количественной оценки, показанной на фигуре 56 А-В.
Подробное описание изобретения
Прежде чем настоящее изобретение будет подробно описано ниже, следует понимать, что это изобретение не ограничивается конкретной методологией, протоколами и реагентами, описанными в настоящем документе, поскольку они могут меняться. Также следует принять к сведению, что используемая в настоящем документе терминология необходима только для целей описания конкретных вариантов осуществления и не предназначена для ограничения объема настоящего изобретения, который будет ограничен только прилагаемой формулой изобретения. Если не указано иное, все технические и научные термины, используемые в настоящем документе, имеют те же смысловые значения, которые обычно вкладываются в них специалистом в данной области.
Предпочтительно используемые в настоящем документе термины определяются согласно описанию в "A multilingual glossary of biotechnological terms: (IUPAC Recommendations)", Leuenberger, H.G.W, Nagel, B. and Klbl, H. eds. (1995), Helvetica Chimica Acta, CH-4010 Basel, Switzerland).
Во всем этом описании и формуле изобретения, которая следует ниже, если контекст не требует иного, слово «содержать» и вариации, такие как «содержит» и «содержащий», будут подразумевать включение заявленного целого числа, стадии или группы целых чисел или стадий, но не исключение любого другого целого числа, стадии или группы целых чисел или стадий. В следующих разделах различные аспекты изобретения определены более подробно. Каждый определенный таким образом аспект может быть объединен с любым другим аспектом или аспектами, если явно не указано иное. В частности, любой признак, указанный как необязательный, предпочтительный или выгодный, может быть объединен с любым другим признаком или признаками, указанными как необязательные, предпочтительные или выгодные.
Несколько документов цитируются по всему тексту описания. Каждый из документов, процитированных в настоящем документе (включая все патенты, патентные заявки, научные публикации, спецификации производителя, инструкции и т.д.), процитированные либо выше, либо ниже по тексту, включены таким образом в качестве ссылки в полном объеме. Ничто в настоящем документе не следует истолковывать как допущение того, что изобретение не имеет права противопоставлять данное описание более раннему приоритету на основании предшествующего изобретения. Некоторые из документов, цитированных в настоящем документе, характеризуются как «включенные путем ссылки». В случае конфликта между определениями или учениями таких включенных ссылок и определений или учений, приведенных в настоящем описании, текст настоящего описания имеет приоритет.
Далее будут описаны элементы настоящего изобретения. Эти элементы перечислены с конкретными вариантами осуществления; однако следует понимать, что они могут быть объединены любым способом и в любом количестве для создания дополнительных вариантов осуществления. Описанные по-разному примеры и предпочтительные варианты осуществления не должны рассматриваться как ограничивающие настоящее изобретение только явно описанными вариантами осуществления. Следует понимать, что это описание поддерживает и охватывает варианты осуществления, которые объединяют ясно описанные варианты осуществления с любым количеством раскрытых и/или предпочтительных элементов. Кроме того, любые перестановки и комбинации всех описанных элементов в данной заявке следует рассматривать как раскрытые описанием настоящей заявки, если контекст не указывает иное.
Определения
Ниже приводятся некоторые определения терминов, часто используемых в данном описании. Эти термины в каждом случае их использования в оставшейся части описания имеют должным образом определенное значение и предпочтительные значения.
Используемые в данном описании и прилагаемой формуле изобретения формы единственного числа включают в себя множественное число, если контекст явным образом не предписывает иного.
Далее представлены определения следующих терминов: алкил, гетероалкил, циклоалкил, гетероциклоалкил, арил, аралкил, гетероарил, гетероаралкил, алкенил и алкинил. Эти термины в каждом случае их использования в остальной части описания будут иметь соответственно определенное значение и предпочтительные значения.
Термин «алкил» относится к насыщенной прямой или разветвленной углеродной цепи. Предпочтительно цепь содержит от 1 до 10 атомов углерода, то есть 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10, например, метил, этилметил, этил, пропил, изопропил, бутил, изобутил, трет-бутил, пентил, гексил, пентил или октил. Алкильные группы являются необязательно замещенными.
Термин «гетероалкил» относится к насыщенной прямой или разветвленной углеродной цепи. Предпочтительно эта цепь содержит от 1 до 9 атомов углерода, т.е. 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, например, метил, этил, пропил, изопропил, бутил, изобутил, втор-бутил, трет-бутил, пентил, гексил, пентил, октил, которая прерывается один или несколько раз, например, 1, 2, 3, 4, 5 раз, одинаковыми или различными гетероатомами. Предпочтительно гетероатомы выбирают из О, S и N, например, -О-СН3, -S-СН3, -СН2-О-СН3, -СН2-О-С2Н5, -CH2-S-CH3, -CH2-S-C2H5, -С2Н4-О-СН3, -С2Н4-О-С2Н5, -C2H4-S-СН3, -C2H4-S-C2H5 и т.д. Гетероалкильные группы являются необязательно замещенными.
Термины «циклоалкил» и «гетероциклоалкил» сами по себе или в сочетании с другими терминами представляют, если не указано иное, циклические версии «алкила» и «гетероалкила», соответственно, предпочтительно с 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 атомами, образующими кольцо, например, циклопропил, циклобутил, циклопентил, циклогексил, циклогептил, циклооктил и т.д. Термины «циклоалкил» и «гетероциклоалкил» также включают их бициклические, трициклические и полициклические варианты. Термин «гетероциклоалкил» предпочтительно относится к насыщенному кольцу, имеющему пять атомов, из которых по меньшей мере один член представляет собой атом N, О или S, и которое необязательно содержит один дополнительный О или один дополнительный N; насыщенному кольцу, имеющему шесть членов, из которых по меньшей мере один член представляет собой атом N, О или S и которое необязательно содержит один дополнительный О или один дополнительный N, или два дополнительных атома N; или насыщенному бициклическому кольцу, имеющему девять или десять членов, из которых по меньшей мере один член представляет собой атом N, О или S и которое необязательно содержит один, два или три дополнительных атома N. «Циклоалкильная» и «гетероциклоалкильная» группы являются необязательно замещенными. Кроме того, в случае гетероциклоалкила, гетероатом может занимать положение, через которое гетероцикл присоединен к остальной части молекулы. Примеры циклоалкила включают циклопропил, циклобутил, циклопентил, циклогексил, 1-циклогексенил, 3-циклогексенил, циклогептил, спиро[3,3]гептил, спиро[3,4]октил, спиро[4,3]октил, спиро[3,5]нонил, спиро[5,3]нонил, спиро[3,6]децил, спиро[6,3]децил, спиро[4,5]децил, спиро[5,4]децил, бицикло[2.2.1]гептил, бицикло[2.2.2]октил, адамантил и т.п. Примеры гетероциклоалкила включают 1-(1,2,5,6-тетрагидропиридил), 1-пиперидинил, 2-пиперидинил, 3-пиперидинил, 4-морфолинил, 3-морфолинил, 1,8-диазо-спиро-[4,5]-децил, 1,7-диазо-спиро[4,5]децил, 1,6-диазо-спиро[4,5]децил, 2,8-диазо-спиро[4,5]-децил, 2,7-диазо-спиро[4,5]децил, 2,6-диазо-спиро[4,5]децил, 1,8-диазо-спиро[5,4]-децил, 1,7-диазо-спиро[5,4]децил, 2,8-диазо-спиро[5,4]децил, 2,7-диазо-спиро[5,4]-децил, 3,8-диазо-спиро[5,4]децил, 3,7-диазо-спиро[5,4]децил, 1-азо-7,11-диоксо-спиро-[5,5]ундецил, 1,4-диазабицикло[2.2.2]окт-2-ил, тетрагидрофуран-2-ил, тетрагидрофуран-3-ил, тетрагидротиен-2-ил, тетрагидротиен-3-ил, 1-пиперазинил, 2-пиперазинил и т.п.
Термин «арил» предпочтительно относится к ароматическому моноциклическому кольцу, содержащему 6 атомов углерода, ароматической бициклической кольцевой системе, содержащей 10 атомов углерода, или ароматической трициклической кольцевой системе, содержащей 14 атомов углерода. Примерами являются фенил, нафтил или антраценил. Арильная группа является необязательно замещенной.
Термин «аралкил» относится к алкильной группе, которая замещена арилом, где алкил и арил имеют значения, указанные выше. Примером является бензильный радикал. Предпочтительно в этом контексте алкильная цепь содержит от 1 до 8 атомов углерода, то есть 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 или 8, например, метил, этилметил, этил, пропил, изопропил, бутил, изобутил, втор-бутенил, трет-бутил, пентил, гексил, пентил, октил. Аралкильная группа является необязательно замещенной в алкильной и/или арильной части группы.
Термин «гетероарил» предпочтительно относится к пяти- или шестичленному ароматическому моноциклическому кольцу, в котором по меньшей мере один из атомов углерода заменен 1, 2, 3 или 4 (для пятичленного кольца) или 1, 2, 3, 4 или 5 (для шестичленного кольца) одинаковыми или различными гетероатомами, предпочтительно выбранными из О, N и S; к ароматической бициклической кольцевой системе, в которой 1, 2, 3, 4, 5 или 6 атомов углерода из 8, 9, 10, 11 или 12 атомов углерода заменены одинаковыми или различными гетероатомами, предпочтительно выбранными из О, N и S; или к ароматической трициклической кольцевой системе, в которой 1, 2, 3, 4, 5 или 6 атомов углерода из 13, 14, 15 или 16 атомов углерода заменены одинаковыми или различными гетероатомами, предпочтительно выбранными из О, N и S. Примерами являются: оксазолил, изоксазолил, 1,2,5-оксадиазолил, 1,2,3-оксадиазолил, пирролил, имидазолил, пиразолил, 1,2,3-триазолил, тиазолил, изотиазолил, 1,2,3,-тиадиазолил, 1,2,5-тиадиазолил, пиридинил, пиримидинил, пиразинил, 1,2,3-триазинил, 1,2,4-триазинил, 1,3,5-триазинил, 1-бензофуранил, 2-бензофуранил, индоил, изоиндоил, бензотиофенил, 2-бензотиофенил, 1H-индазолил, бензимидазолил, бензоксазолил, индоксазинил, 2,1-бензозоксазоил, бензотиазолил, 1,2-бензизотиазолил, 2,1-бензизотиазолил, бензотриазолил, хинолинил, изохинолинил, хиноксалинил, хиназолинил, хинолинил, 1,2,3-бензотриазинил или 1,2,4-бензотриазинил.
Термин «гетероаралкил» относится к алкильной группе, которая замещена гетероарилом, где алкил и гетероарил имеют значения, указанные выше. Примером является 2-алклипиридинил, 3-алкилпиридинил или 2-метилпиридинил. Предпочтительно в этом контексте алкильная цепь содержит от 1 до 8 атомов углерода, то есть 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 или 8, например, метил, этилметил, этил, пропил, изопропил, бутил, изобутил, втор-бутенил, трет-бутил, пентил, гексил, пентил, октил. Гетероаралкильная группа является необязательно замещенной в алкильной и/или гетероарильной части группы.
Термины «алкенил» и «циклоалкенил» относятся к олефиновым ненасыщенным атомам углерода, содержащим цепи или кольца с одной или несколькими двойными связями. Примерами являются пропенил и циклогексенил. Предпочтительно алкенильная цепь содержит от 2 до 8 атомов углерода, т.е. 2, 3, 4, 5, 6, 7 или 8, например, этенил, 1-пропенил, 2-пропенил, изопропенил, 1-бутенил, 2-бутенил, 3-бутенил, изобутенил, втор-бутенил, 1-пентенил, 2-пентенил, 3-пентенил, 4-пентенил, гексенил, пентенил, октенил. Предпочтительно циклоалкенильное кольцо содержит от 3 до 8 атомов углерода, т.е. 3, 4, 5, 6, 7 или 8, например, 1-циклопропенил, 2-циклопропенил, 1-циклобутенил, 2-циклобутенил, 1-циклопентенил, 2-циклопентенил, 3-циклопентенил, циклогексенил, циклопентенил, циклооктенил.
Термин «алкинил» относится к ненасыщенным атомам углерода, содержащим цепи или кольца с одной или несколькими тройными связями. Примером может служить пропаргильный радикал. Предпочтительно алкинильная цепь содержит от 2 до 8 атомов углерода, т.е. 2, 3, 4, 5, 6, 7 или 8, например этинил, 1-пропинил, 2-пропинил, 1-бутинил, 2-бутинил, 3-бутинил, 1-пентинил, 2-пентинил, 3-пентинил, 4-пентинил, гексинил, пентинил, октинил.
В одном варианте осуществления атомы углерода или атомы водорода в алкильных, гетероалкильных, циклоалкильных, арильных, аралкильных, алкенильных, циклоалкенильных, алкинильных радикалах могут быть независимо друг от друга замещены одним или несколькими элементами, выбранными из группы, состоящей из О, S, N, или группами, содержащими один или несколько элементов, выбранных из группы, состоящей из О, S, N.
Варианты осуществления включают радикалы: алкокси, циклоалкокси, арилокси, аралкокси, алкенилокси, циклоалкенилокси, алкинилокси, алкилтио, циклоалкилтио, арилтио, аралкилтио, алкенилтио, циклоалкенилтио, алкинилтио, алкиламино, циклоалкиноламино, ариламино, аралкиламино, алкениламино, циклоалкениламино, алкиламино.
Другие варианты осуществления включают радикалы: гидроксиалкил, гидроксициклоалкил, гидроксиарил, гидроксиаралкил, гидроксиалкенил, гидроксициклоалкенил, гидроксиалкинил, меркаптоалкил, меркаптоциклоалкил, меркаптоарил, меркаптоаралкил, меркаптоалкенил, меркаптоциклоалкил, меркаптоалкинил, аминоалкил, аминоциклоалкил, аминоарил, аминоаралкил, аминоалкенил, аминоциклоалкенил, аминоалкинил.
В другом варианте осуществления атомы водорода в алкильных, гетероалкильных, циклоалкильных, арильных, аралкильных, алкенильных, циклоалкенильных, алкинильных радикалах могут быть независимо друг от друга замещены одним или несколькими атомами галогена. Одним из радикалов является трифторметильный радикал.
Если два или более радикалов или два или более остатков могут быть выбраны независимо друг от друга, то термин «независимо» означает, что радикалы или остатки могут быть одинаковыми или могут быть различными.
Используемая в настоящем документе формулировка, определяющая пределы диапазона длины, например, «от 1 до 6» означает любое целое число от 1 до 6, т.е. 1, 2, 3, 4, 5 и 6. Другими словами, любой диапазон, определенный двумя конкретно указанными целыми числами, означает включение и раскрытие любого целого числа, определяющего указанные пределы, и любого целого числа, содержащегося в указанном диапазоне.
Используемый в настоящем документе термин «галоген» относится к галогеновому остатку, выбранному из группы, состоящей из F, Br, I и Cl. Предпочтительно галоген представляет собой F.
Используемый в настоящем документе термин «линкер» относится к любому химически подходящему линкеру. Предпочтительно линкер не расщепляется или только медленно расщепляется в физиологических условиях. Таким образом, предпочтительно, чтобы линкер не содержал узнающих последовательностей для протеаз или узнающих структур для других разрушающих ферментов. Поскольку предпочтительно, чтобы соединения по изобретению вводились системно для обеспечения широкого доступа ко всем компартментам организма и последующего обогащения соединениями по изобретению повсюду, где бы ни была локализована опухоль в организме, предпочтительно, чтобы линкер был выбран таким образом, чтобы он не расщеплялся или только медленно расщеплялся в крови. Расщепление считается медленным, если менее 50% линкеров расщепляются через 2 часа после введения соединения пациенту-человеку. Подходящие линкеры, например, содержат или состоят из необязательно замещенного алкила, гетероалкила, циклоалкила, циклогетероалкила, арила, гетероарила, аралкила, гетероаралкила, алкенила, гетероалкенила, циклоалкенила, циклогетероалкенила, алкинила, сульфонила, аминов, эфиров, тиоэфиров, фосфинов, фосфорамидатов, карбоксамидов, сложных эфиров, сложных имидоэфиров, амидинов, сложных тиоэфиров, сульфонамидов, 3-тиопирролидин-2,5-диона, карбаматов, мочевин, гуанидинов, тиомочевин, дисульфидов, оксимов, гидразинов, гидразидов, гидразонов, диаза связей, триазолов, триазолинов, тетразинов, комплексов платины и аминокислот или их комбинаций. Предпочтительно линкер содержит или состоит из 1,4-пиперазина, 1,3-пропана и простого фенольного эфира или их комбинаций.
Выражение «необязательно замещенный» относится к группе, в которой один, два, три или более атомов водорода могут быть заменены независимо друг от друга соответствующими заместителями.
Используемый в настоящем документе термин «аминокислота» относится к любой органической кислоте, содержащей один или несколько амино-заместителей, например, α-, β- или γ-амино, производные алифатических карбоновых кислот. В используемом здесь обозначении полипептидов, например, Хаа5, то есть Хаа1Хаа2Хаа3Хаа4Хаа5, где каждый из Хаа1-Хаа5 независимо выбран из аминокислот, как определено, левосторонним направлением является аминоконцевое направление, а правосторонним направлением является карбоксиконцевое направление, в соответствии со стандартным применением и условным обозначением в данной области.
Термин «традиционная аминокислота» относится к двадцати встречающимся в природе аминокислотам и охватывает все стереомерные изоформы, то есть их D, L-, D- и L-аминокислоты. Эти общепринятые аминокислоты в настоящем документе могут также называться по их общепринятым трехбуквенным или однобуквенным сокращениям, и их сокращения соответствуют общепринятому применению (см., например, Immunology-A Synthesis, 2nd Edition, Е.S. Golub and D.R. Gren, Eds., Sinauer Associates, Sunderland Mass. (1991)).
Термин «нестандартная аминокислота» относится к неприродным аминокислотам или химическим аналогам аминокислот, например α,α-дизамещенным аминокислотам, N-алкильным аминокислотам, гомо-аминокислотам, дегидроаминокислотам, ароматическим аминокислотам (отличным от фенилаланина, тирозина и триптофана) и орто-, мета- или пара-аминобензойной кислоте. Нестандартные аминокислоты также включают соединения, которые содержат аминовую и карбоксильную функциональную группу, разделенные в 1,3 или большей схеме замещения, такие как β-аланин, γ-аминомасляная кислота, лактам Фрейдингера, бициклический дипептид (BTD), амино-метилбензойная кислота и другие, хорошо известные в данной области. Также могут быть использованы статиноподобные изостеры, изостеры гидроксиэтилена, изостеры с восстановленной амидной связью, изостеры тиоамида, изостеры мочевины, изостеры карбамата, изостеры тиоэфира, изостеры винила и другие изостеры амидных связей, известные в данной области. Использование аналогов или нетрадиционных аминокислот может улучшить стабильность и биологический период полужизни добавленного пептида, поскольку они более устойчивы к разрушению в физиологических условиях. Специалисту в данной области будут известны аналогичные типы замены, которые могут быть выполнены. Неограничивающий список нетрадиционных аминокислот, которые могут быть использованы в качестве подходящих строительных блоков для пептида, и их стандартные сокращенные обозначения (в скобках) представляют собой следующие: α-аминомасляная кислота (Abu), L-N-метилаланин (Nmala), α-амино-α-метилбутират (Mgabu), L-N-метиларгинин (Nmarg), амино циклопропан (Cpro), L-N-метиласпарагин (Nmasn), карбоксилат L-N-метиласпарагиновая кислота (Nmasp), аниино изо масляная кислота (Aib), L-N-метилцистеин (Nmcys), аминонорборнил (Norb), L-N-метилглутамин (Nmgln), карбоксилат L-N-метилглутаминовая кислота (Nmglu), циклогексилаланин (Chexa), L-N-метилгистидин (Nmhis), циклопентилаланин (Cpen), L-N-метилизолейцин (Nmile), L-N-метиллейцин (Nmleu), L-N-металлизин (Nmlys), L-N-метилметионин (Nmmet), L-N-метилнорлейцин (Nmnle), L-N-метилнорвалин (Nmnva), L-N-метил орнитин (Nmorn), L-N-метилфенилаланин (Nmphe), L-N-метилпролин (Nmphe), L-N-метилпролин (Nmpro), L-N-метилеерин (Nmser), L-N-метилтреонин (Nmthr), LN-метилтриптофан (Nmtrp), D-орнитин (Dorn), L-N-метилтирозин (Nmtyr), L-N-метилвалин (Nmval), L-N-метилэтилглицин (Nmetg), L-N-метил-трет-бутил глицин (Nmtbug), L-норлейцин (NIe), L-норвалин (Nva), α-метил-аминоизобутират (Maib), α-метил-γ-аминобутират (Mgabu), D-α-метилаланин (Dmala), α-метилциклогексилаланин (Mchexa), D-α-метиларгинин (Dmarg), α-металцилкопентилаланин (Mcpen), D-α-метиласпарагин (Dmasn), α-метил-α-нафтилаланин (Manap), D-α-метиласпартат (Dmasp), α-метилпеницилламин (Mpen), D-α-метилцистеин (Dmcys), N-(4-аминобутил)глицин (NgIu), D-α-метилглутамин (Dmgln), N-(2-аминоэтил)глицин (Naeg), D-α-метилгистидин (Dmhls), N-(3-аминопропил)глицин (Norn), D-α-метилизолейцин (Dmile), N-амино-α-метилбутират (Nmaabu), D-α-метиллейцин (Dmleu), α-нафтилаланин (Anap), D-α-метиллизин (Dmlys), N-бензилглицин (Nphe), D-α-метилметионин (Dmmet), N-(2-карбамилэтил)глицин (NgIn), D-α-метилорнитин (Dmorn), N-(карбамилметил)глицин (Nasn), D-α-метилфенилаланин (Dmphe), N-(2-карбоксиэтил)глицин (NgIu), D-α-метилпролин (Dmpro), N-(карбоксиметил)глицин (Nasp), D-α-метилсерин (Dmser), N-циклобутилглицин (Ncbut), D-α-метилтреонин (Dmthr), N-циклогептилглицин (Nchep), D-α-метилтриптофан (Dmtrp), N-циклогексил глицин (Nchex), D-α-метилтирозин (Dmty), N-циклодецилглицин (Ncdec), D-α-метилвалин (Dmval), N-циклододецилглицин (Ncdod), D-N-метилаланин (Dnmala), N-циклооктилглицин (Ncoct), D-N-метиларгинин (Dnmarg), N-циклопропилглицин (Ncpro), D-N-метиласпарагин (Dnmasn), N-циклоундецилглицин (Ncund), D-N-метиласпартат (Dnmasp), N-(2,2-дифенилэтил)глицин (Nbhm), D-N-метилцистеин (Dnmcys), N-(3,3-дифенилпропил)глицин (Nbhe), D-N-метилглутамин (Dnmgln), N-(3-гуанидинопропил)глицин (Narg), D-N-метилглутамат (Dnmglu), N-(1-гидроксиэтил)глицин (Ntbx), D-N-метилгистидин (Dnmhis), N-(гидроксиэтил))глицин (Nser), D-N-метилизолейцин (Dnmile), N-(имидазолилэтил))глицин (Nhis), D-N-метиллейцин (Dnmleu), N-(3-индолилэтил)глицин (Nhtrp), D-N-металлизин (Dnnilys), N-метил-γ-аминобутират (Nmgabu), N-метилциклогексилаланин (Nmchexa), D-N-метилметионин (Dnmmet), D-N-метилорнитин (Dnmorn), N-метилциклопентилаланин (Nmcpen), N-метилглицин (NaIa), D-N-метилфенилаланин (Dnmphe), N-метиламиноизобутират (Nmaib), D-N-метилпролин (Dnmpro), N-(1-метилпропил)глицин (Nile), D-N-метилсерин (Dnmser), N-(2-метилпропил)глицин (Nleu), D-N-метилтреонин (Dnmthr), D-N-метилтриптофан (Dnmtrp), N-(1-метилэтил)глицин (Nval), D-N-метилтирозин (Dnmtyr), N-метил-нафтилаланин (Nmanap), D-N-метилвалин (Dnmval), N-метилпеницилламин (Nmpen), γ-аминомасляная кислота (Gabu), N-(п-гидроксифенил)глицин (Nhtyr), L-/-бутил глицин (Tbug), N-(тиометил)глицин (Ncys), L-этилглицин (Etg), пеницилламин (Pen), L-гомофенилаланин (Hphe), L-α-метилаланин (Mala), L-α-метиларгинин (Marg), L-α-метиласпарагин (Masn), L-α-метиласпартат (Masp), L-α-метил-трет-бутилглицин (Mtbug), L-α-метилцистеин (Mcys), L-метилэтилглицин (Metg), L-α-метилглутамин (MgIn), L-α-метилглутамат (MgIu), L-α-метилгистидин (Mhis), L-α-метилгомофенилаланин (Mhphe), L-α-метилизолейцин (Mile), N-(2-метилтиоэтил)глицин (Nmet), L-α-метиллейцин (Mleu), L-α-метиллизин (Mlys), L-α-метилметионин (Mmet), L-α-метилнорлейцин (MnIe), L-α-метилнорвалин (Mnva), L-α-метилорнитин (Morn), L-α-метилфенилаланин (Mphe), L-α-метилпролин (Mpro), L-α-метилсерин (Mser), L-α-метилтреонин (Mthr), L-α-метилтриптофан (Mtrp), L-α-метилтирозин (Mtyr), L-α-метилвалин (Mval), L-N-метилгомофенилаланин (Nmhphe), N-(N-(2,2-дифенилэтил)карбамилметил)глицин (Nnbhm), N-(N-(3,3-дифенилпропил)-карбамил метил)глицин (Nnbhe), 1-карбокси-1-(2,2-дифенилэтиламино)циклопропан (Nmbc), L-O-метилсерин (Omser), L-O-метилгомосерин (Omhser).
Используемый в настоящем документе термин «N-содержащий ароматический или неароматический моно- или бициклический гетероцикл» относится к циклическому насыщенному или ненасыщенному углеводородному соединению, которое содержит по меньшей мере один атом азота в качестве компонента циклической цепи.
Термин «радиоактивный фрагмент», используемый в настоящем документе, относится к молекулярному агрегату, который несет радиоактивный нуклид. Нуклид связан либо ковалентными, либо координационными связями, которые остаются стабильными в физиологических условиях. Примерами являются [131I]-3-йодбензойная кислота или 68Ga-DOTA.
Используемый в настоящем документе термин «флуоресцентный изотоп» испускает электромагнитное излучение после возбуждения электромагнитным излучением с более короткой длиной волны.
Термин «радиоактивный изотоп», используемый в настоящем документе, означает радиоактивный изотоп элемента (включенного в термин «радионуклид»), излучающий α-, β- и/или γ-излучение.
Термин «радиоактивное лекарственное средство» используется в контексте настоящего изобретения для обозначения биологически активного соединения, которое модифицировано радиоактивным изотопом. В частности, могут использоваться интеркалирующие вещества для доставки радиоактивности в непосредственную близость от ДНК (например, производное Hoechst-33258, несущее 131I).
Термины «хелатирующий агент» или «хелат» используются взаимозаменяемо в контексте настоящего изобретения и относятся к молекуле, часто к органической молекуле, и часто к основанию Льюиса, имеющим две или более неподеленные электронные пары, доступные для передачи иону металла. Ион металла обычно координируется с хелатирующим агентомс помощью двух или более электронных пар. Выражения «бидентатный хелатирующий агент», «тридентатный хелатирующий агент» и «тетрадентатный хелатирующий агент» относятся к хелатирующим агентам, имеющим, соответственно, две, три и четыре электронные пары, легко доступные для одновременной отдачи координированному с хелатирующим агентом иону металла. Обычно электронные пары хелатирующего агента образуют координационные связи с одним ионом металла; однако в некоторых примерах хелатирующий агент может образовывать координационные связи с более чем одним ионом металла при использовании для этого различных возможных способов связывания.
Термин «флуоресцентный краситель» используется в контексте настоящего изобретения для обозначения соединения, которое испускает видимый или инфракрасный свет после возбуждения электромагнитным излучением более короткой и подходящей длины волны. Специалисту понятно, что каждый флуоресцентный краситель имеет заданную длину волны возбуждения.
Термин «контрастный агент» используется в контексте настоящего изобретения для обозначения соединения, которое увеличивает контраст структур или жидкостей при медицинской визуализации. Усиление достигается за счет поглощения электромагнитного излучения или изменения электромагнитных полей.
Используемый в настоящем документе термин «парамагнитный» относится к парамагнетизму, индуцированному неспаренными электронами в среде. Парамагнитное вещество индуцирует магнитное поле, если приложено внешнее магнитное поле. В отличие от диамагнетизма направление индуцированного поля такое же, как и у внешнего поля, и в отличие от ферромагнетизма поле не поддерживается в отсутствие внешнего поля.
Используемый в настоящем документе термин «наночастица» относится к частицам предпочтительно сферической формы с диаметрами от 1 до 100 нанометров. В зависимости от состава наночастицы могут обладать магнитными, оптическими или физико-химическими качествами, которые можно оценить. Кроме того, для многих типов наночастиц возможна модификация поверхности.
Термин «фармацевтически приемлемая соль» относится к соли соединения по настоящему изобретению. Подходящие фармацевтически приемлемые соли соединения по настоящему изобретению включают кислотно-аддитивные соли, которые могут, например, быть образованы путем смешивания раствора холина или его производного с раствором фармацевтически приемлемой кислоты, такой как хлористоводородная кислота, серная кислота, фумаровая кислота, малеиновая кислота, янтарная кислота, уксусная кислота, бензойная кислота, лимонная кислота, винная кислота, угольная кислота или фосфорная кислота. Кроме того, если соединение по изобретению содержит кислотный фрагмент, его подходящие фармацевтически приемлемые соли могут включать соли щелочных металлов (например, соли натрия или калия); соли щелочноземельных металлов (например, соли кальция или магния); и соли, образованные с подходящими органическими лигандами (например, катионами аммония, четвертичного аммония и амина, образованными с использованием противоанионов, таких как галогенид, гидроксид, карбоксилат, сульфат, фосфат, нитрат, алкилсульфонат и арилсульфонат). Иллюстративные примеры фармацевтически приемлемых солей включают, но без ограничения: ацетат, адипат, альгинат, аскорбат, аспартат, бензолсульфонат, бензоат, бикарбонат, бисульфат, битартрат, борат, бромид, бутират, эдетат кальция, камфорат, камфорсульфонат, камсилат, карбонат, хлорид, цитрат, клавуланат, циклопентанепропионат, диглюконат, дигидрохлорид, додецилсульфат, эдетат, эдисилат, эстолат, эзилат, этансульфонат, формиат, фумарат, глюцептат, глюкогептонат, глюконат, глутамат, глицерофосфат, гликолиларсанилат, гемисульфат, гептаноат, гексаноат, гексилрезорцинат, гидрабамин, гидробромид, гидрохлорид, гидроиодид, 2-гидроксиэтансульфонат, гидроксинафтоат, йодид, изотионат, лактат, лактобионат, лаурат, лаурилсульфат, малат, малеат, малонат, манделат, мезилат, метансульфонат, метилсульфат, мукат, 2-нафталинсульфат, напсилат, никотинат, нитрат, аммониевая соль N-метилглюкамина, олеат, оксалат, памоат (эмбонат), пальмитат, пантотенат, пектинат, персульфат, 3-фенилпропионат, фосфат/дифосфат, пикрат, пивалат, полигалактуронат, пропионат, салицилат, стеарат, сульфат, субацетат, сукцинат, таннат, тартрат, теоклат, тозилат, триэтиодид, ундеканоат, валерат и т.п. (см., например, Berge, S.М., et al., "Pharmaceutical Salts", Journal of Pharmaceutical Science, 1977, 66, 1-19). Некоторые конкретные соединения по настоящему изобретению содержат как основные, так и кислотные функциональные группы, которые позволяют превращать соединения в соли присоединения либо основания, либо кислоты.
Нейтральные формы соединений можно регенерировать путем взаимодействия соли с основанием или кислотой и выделением исходного соединения обычным способом. Исходная форма соединения отличается от различных солевых форм по некоторым физическим свойствам, таким как растворимость в полярных растворителях, но в других отношениях соли эквивалентны исходной форме соединения для целей настоящего изобретения.
В дополнение к солевым формам настоящее изобретение обеспечивает соединения, которые находятся в форме пролекарства. Пролекарства описанных в настоящем документе соединений представляют собой такие соединения, которые легко претерпевают химические изменения в физиологических условиях с образованием соединения формулы (I). Пролекарство представляет собой активное или неактивное соединение, которое химически модифицируется посредством физиологического действия in vivo, такого как гидролиз, метаболизм и т.п., в соединение по настоящему изобретению после введения пролекарства пациенту. Кроме того, пролекарства могут быть превращены в соединения по настоящему изобретению химическими или биохимическими способами в среде ex vivo. Например, пролекарства могут медленно превращаться в соединения по настоящему изобретению, когда их помещают в резервуар трансдермального пластыря вместе с пригодным ферментом. Пригодность и методы, связанные с получением и применением пролекарств, хорошо известны специалистам в данной области. Для общего обсуждения пролекарств, включающих сложные эфиры, см. Svensson and Tunek Drag Metabolism Reviews 16.5 (1988) and Bundgaard Design of Prodrugs, Elsevier (1985). Примеры замаскированного карбоксилат-аниона включают множество сложных эфиров, таких как алкил (например, метил, этил), циклоалкил (например, циклогексил), аралкил (например, бензил, п-метоксибензил) и алкилкарбонилоксиалкил (например, пивалоилоксиметил). Амины маскируются как арилкарбонилоксиметилзамещенные производные, которые расщепляются эстеразами in vivo, высвобождая свободное лекарственное средство и формальдегид (Bungaard J. Med. Chem. 2503 (1989)). Кроме того, лекарственные средства, содержащие кислотную NH-группу, такие как имидазол, имид, индол и т.п., были замаскированы N-ацилоксиметильными группами (Bundgaard Design of Prodrugs, Elsevier (1985)). Гидроксильные группы маскируются как сложные эфиры и простые эфиры. В ЕР 0039051 (Sloan and Little, Apr. 11, 1981) описаны пролекарства-основания Манниха, получаемые из гидроксамовых кислот, их получение и применение.
Соединения в соответствии с изобретением могут быть синтезированы одним или несколькими из следующих способов. Следует отметить, что показаны общие методики, которые относятся к получению соединений, имеющих неопределенную стереохимию. Однако такие методики обычно применимы к тем соединениям, имеющим определенную стереохимию, например, когда стереохимия у группы является (S) или (R). Кроме того, соединения, имеющие одну стереохимию (например, (R)), часто можно использовать для получения соединений с противоположной стереохимией (например, (S)) с использованием хорошо известных методов, например, путем инверсии.
Некоторые соединения по настоящему изобретению могут существовать в несольватированных формах, а также в сольватированных формах, включая гидрированные формы. В общем, сольватированные формы эквивалентны несольватированным формам, и предполагается, что они входят в объем настоящего изобретения. Некоторые соединения по настоящему изобретению могут существовать во множестве кристаллических или аморфных форм. В общем, все физические формы эквивалентны для областей применения, предусмотренных настоящим изобретением, и предполагается, что они находятся в пределах объема настоящего изобретения.
Некоторые соединения по настоящему изобретению имеют асимметричные атомы углерода (оптические центры) или двойные связи; предполагается, что рацематы, диастереомеры, геометрические изомеры и индивидуальные изомеры входят в объем настоящего изобретения.
Соединения по настоящему изобретению также могут содержать неприродные пропорции атомных изотопов у одного или нескольких атомов, которые составляют такие соединения. Например, соединения могут быть мечены радиоактивными изотопами, такими как, например, тритий (3Н), йод-125 (125I) или углерод-14 (14С). Предполагается, что все изотопные варианты соединений по настоящему изобретению, радиоактивные или нет, входят в объем настоящего изобретения.
Термин «фармацевтическая композиция», используемый в настоящей заявке, относится к веществу и/или комбинации веществ, используемых для идентификации, предупреждения или лечения состояния ткани или заболевания. Фармацевтическая композиция составлена так, чтобы быть подходящей для введения пациенту с целью предупреждения и/или лечения заболевания. Кроме того, фармацевтическая композиция относится к комбинации активного агента с носителем, инертным или активным, что делает композицию подходящей для терапевтического применения. Фармацевтические композиции могут быть составлены для перорального, парентерального, местного, ингаляционного, ректального, сублингвального, трансдермального, подкожного или вагинального способов применения в соответствии с их химическими и физическими свойствами. Фармацевтические композиции включают твердые, полутвердые, жидкие трансдермальные терапевтические системы (TTS). Твердые композиции выбирают из группы, состоящей из таблеток, таблеток с покрытием, порошка, гранул, пеллет, капсул, шипучих таблеток или трансдермальных терапевтических систем. Также включены жидкие композиции, выбранные из группы, состоящей из растворов, сиропов, инфузий, экстрактов, растворов для внутривенного введения, растворов для инфузий или растворов систем носителей по настоящему изобретению. Полутвердые композиции, которые можно использовать в контексте изобретения, включают эмульсию, суспензию, кремы, лосьоны, гели, глобулы, буккальные таблетки и суппозитории.
«Фармацевтически приемлемый» означает одобренный регулирующим органом федерального правительства или правительства штата, или перечисленный в Фармакопее США или другой общепризнанной фармакопее для применения у животных и, в частности, у людей.
Используемый в настоящем документе термин «носитель» относится к разбавителю, адъюванту, вспомогательному веществу или наполнителю, с которым вводят терапевтический агент. Такими фармацевтическими носителями могут быть стерильные жидкости, такие как солевые растворы в воде и маслах, включая растворы нефтяного, животного, растительного или синтетического происхождения, такие как арахисовое масло, соевое масло, минеральное масло, кунжутное масло и т.п. Солевой раствор является предпочтительным носителем при внутривенном введении фармацевтической композиции. Солевые растворы и водные растворы декстрозы и глицерина также можно использовать в качестве жидких носителей, особенно для растворов для инъекций. Подходящие фармацевтические вспомогательные вещества включают крахмал, глюкозу, лактозу, сахарозу, желатин, солод, рис, муку, мел, силикагель, стеарат натрия, моностеарат глицерина, тальк, хлорид натрия, сухое обезжиренное молоко, глицерин, пропилен, гликоль, воду, этанол и т.п. Композиция, если желательно, также может содержать незначительные количества смачивающих или эмульгирующих агентов или буферизующих веществ для доведения рН. Примеры подходящих фармацевтических носителей описаны в "Remington's Pharmaceutical Sciences" by E.W. Martin.
Используемый в настоящем документе термин «белок активации фибробластов (FAP)» также известен под термином «сепраза». Оба термина могут использоваться в настоящем документе взаимозаменяемо. Белок активации фибробластов представляет собой гомодимерный интегральный белок со сворачиванием, подобным дипептидилпептидазе IV (DPPIV), включающий альфа/бета-гидролазный домен и восьмилопастный бета-пропеллерный домен.
Варианты осуществления
Далее более подробно описаны различные аспекты изобретения. Каждый аспект, определенный таким образом, может быть объединен с любым другим аспектом или аспектами, если явно не указано иное. В частности, любой признак, указанный как предпочтительный или выгодный, может быть объединен с любым другим признаком или признаками, указанными как предпочтительные или выгодные.
В первом аспекте настоящее изобретение обеспечивает соединение формулы (I):
где
Q, R, U, V, W, Y, Z индивидуально присутствуют или отсутствуют, при условии, что по меньшей мере три из Q, R, U, V, W, Y, Z присутствуют;
Q, R, U, V, W, Y, Z независимо выбраны из группы, состоящей из О, СН2, NR4, С=O, C=S, C=NR4, HCR4 и R4CR4, при условии, что два О не являются напрямую смежными друг с другом; предпочтительно из шести групп присутствуют четыре, из которых две представляют собой С=O, одна представляет собой CH2 и одна представляет собой NH; более предпочтительно присутствуют четыре группы, из которых две представляют собой С=O, одна представляет собой CH2 и одна представляет собой NH; наиболее предпочтительно присутствуют V, W, Y и Z, из которых V и Z представляют собой С=O, а W и Y независимо выбраны из СН2 и NH;
R1 и R2 независимо выбраны из группы, состоящей из -Н, -ОН, галогено, С1-6-алкила, -О-С1-6-алкила, S-C1-6-алкила;
R3 выбран из группы, состоящей из -Н, -CN, -В(ОН)2, -С(O)-алкила, -С(О)-арила, -С=С-С(O)-арила, -C=C-S(O)2-арила, -CO2H, -SO3H, -SO2NH2, -PO3H2 и 5-тетразолила;
R4 выбран из группы, состоящей из -Н, -C1-6-алкила, -O-C1-6-алкила, -S-C1-6-алкила, алкенила, гетероалкенила, циклоалкенила, циклогетероалкенила, алкинила, арила и -C1-6-аралкила, при этом каждый указанный -C1-6-алкил необязательно замещен 1-3 заместителями, выбранными из -ОН, оксо, галогено, и необязательно соединен с Q, R, U, V, W, Y или Z;
R5 выбран из группы, состоящей из -Н, галогено и C1-6-алкила;
R6 и R7 независимо выбраны из группы, состоящей из -Н, 
и 
при условии, что R6 и R7 одновременно не представляют собой Н; предпочтительно R6 присоединен к 7- или 8-хинолшгьному положению, и R7 присоединен к 5- или 6-хинолильному положению; более предпочтительно R6 присоединен к 7-хинолильному положению, и R7 присоединен к 6-хинолильному положению,
где L представляет собой линкер,
где D, А, Е и В индивидуально присутствуют или отсутствуют, предпочтительно при этом присутствуют по меньшей мере А, Е и В, где в случае присутствия:
D представляет собой линкер;
А выбран из группы, состоящей из NR4, О, S и CH2;
Е выбран из группы, состоящей из
C1-6-алкила, 
где i равно 1, 2 или 3;
где j равно 1, 2 или 3;
где k равно 1, 2 или 3;
где m равно 1, 2 или 3;
более предпочтительно Е представляет собой C1-6-алкил, наиболее предпочтительно Е представляет собой С3 или С4 алкил;
А и Е вместе образуют группу, выбранную из: циклоалкила, гетероциклоалкила, арила и гетероарила, предпочтительно гетероциклоалкила, где А и Е могут быть моно-, би- и полициклическими, предпочтительно моноциклическими. Каждый А и Е необязательно замещен 1-4 заместителями, выбранными из -Н, -С1-6-алкила, -S-С1-6-алкила, -S-C1-6-алкила, алкенила, гетероалкенила, циклоалкенила, циклогетероалкенила, алкинила, арила и -C1-6-аралкила, при этом каждый указанный -C1-6-алкил необязательно замещен 1-3 заместителями, выбранными из -ОН, оксо, галогено; и необязательно соединен с А, В, D, Е или 
В выбран из группы, состоящей из S, NR4, NR4-O, NR4-C1-6-алкила, NR4-C1-6-алкил-NR4, и 5-10-членного N-содержащего ароматического или неароматического моно- или бициклического гетероцикла, предпочтительно дополнительно содержащего 1 или 2 гетероатома, выбранных из О, N и S, предпочтительно дополнительно содержащего 1 или 2 атома азота, предпочтительно при этом NR4-C1-6-алкил-NR4 и N-содержащий гетероцикл замещены 1-3 заместителями, выбранными из группы, состоящей из С1-6-алкила, арила, С1-6-аралкила; и
R8 выбран из группы, состоящей из радиоактивного фрагмента, хелатирующего агента, флуоресцентного красителя, контрастного агента и их комбинаций;
представляет собой 1-нафтильный фрагмент или 5-10-членный N-содержащий ароматический или неароматический моно- или бициклический гетероцикл, где имеется 2 кольцевых атома между атомом N и X; указанный гетероцикл необязательно дополнительно содержит 1, 2 или 3 гетероатома, выбранных из О, N и S; и X представляет собой атом С;
или его фармацевтически приемлемый таутомер, рацемат, гидрат, сольват или соль. Предпочтительно, C1-6-алкил выбран из группы, состоящей из метила, этила, пропила, изопропила, бутила, втор-бутила, трет-бутила, пентила и гексила.
В предпочтительном варианте осуществления А и Е вместе образуют группу, выбранную из группы, состоящей из С3, С4, С5, С6, С7 и C8 моноциклического, предпочтительно С5 или С6 моноциклического, или С7, C8, С9, С10, С11 или С12 бициклического, предпочтительно С7, C8, С9 и С10 бициклического гетероциклоалкила, содержащего 1, 2, 3 или 4, предпочтительно 1 или 2 гетероатома, независимо выбранных из группы, состоящей из N, О и S, предпочтительно N и О, наиболее предпочтительно 1 или 2 N.
В предпочтительном варианте осуществления первого аспекта настоящего изобретения обеспечено соединение формулы (I):
где
Q, R, U, V, W, Y, Z индивидуально присутствуют или отсутствуют, при условии, что по меньшей мере три из Q, R, U, V, W, Y, Z присутствуют;
Q, R, U, V, W, Y, Z независимо выбраны из группы, состоящей из О, CH2, NR4, С=O, C=S, C=NR4, HCR4 и R4CR4, при условии, что два О не являются напрямую смежными друг с другом; предпочтительно из шести групп присутствуют четыре, из которых две представляют собой С=O, одна представляет собой CH2 и одна представляет собой NH; более предпочтительно присутствуют четыре группы, из которых две представляют собой С=O, одна представляет собой CH2 и одна представляет собой NH; наиболее предпочтительно присутствуют V, W, Y и Z, из которых V и Z представляют собой С=O, а W и Y независимо выбраны из CH2 и NH;
R1 и R2 независимо выбраны из группы, состоящей из -Н, -ОН, галогено, C1-6-алкила, -O-C1-6-алкила, S-C1-6-алкила;
R3 выбран из группы, состоящей из -Н, -CN, -В(ОН)2, -С(О)-алкила, -С(О)-арила-, -С=С-С(O)-арила, -C=C-S(O)2-арила, -CO2H, -SO3H, -SO2NH2, -PO3H2 и 5-тетразолила;
R4 выбран из группы, состоящей из -Н, -C1-6-алкила, -O-C1-6-алкила, -S-C1-6-алкила, алкенила, гетероалкенила, пиклоалкенила, циклогетероалкенила, алкинила, арила и -C1-6-аралкила, при этом каждый указанный -C1-6-алкил необязательно замещен 1-3 заместителями, выбранными из -ОН, оксо, галогено и необязательно соединен с Q, R, U, V, W, Y или Z;
R5 выбран из группы, состоящей из -Н, галогено и C1-6-алкила;
R6 и R7 независимо выбраны из группы, состоящей из -Н, 
и 
при условии, что R6 и R7 одновременно не представляют собой Н, предпочтительно R6 присоединен к 7- или 8-хинолильному положению, и R7 присоединен к 5- или 6-хинолильному положению; более предпочтительно R6 присоединен к 7-хинолильному положению, и R7 присоединен к 6-хинолильному положению,
где L представляет собой линкер,
где D, А, Е и В индивидуально присутствуют или отсутствуют, предпочтительно при этом по меньшей мере А, Е и В присутствуют, где в случае присутствия:
D представляет собой линкер;
А выбран из группы, состоящей из NR4, О, S и СН2;
Е выбран из группы, состоящей из
C1-6-алкила, 
где i равно 1, 2 или 3;
где j равно 1, 2 или 3;
где k равно 1, 2 или 3;
где m равно 1, 2 или 3;
более предпочтительно Е представляет собой C1-6-алкил, наиболее предпочтительно Е представляет собой С3 или С4 алкил;
В выбран из группы, состоящей из S, NR4, NR4-O, NR4-C1-6-алкила, NR4-C1-6-алкил-NR4, и 5-10-членного N-содержащего ароматического или неароматического моно- или бициклического гетероцикла, предпочтительно дополнительно содержащего 1 или 2 гетероатома, выбранных из О, N и S, предпочтительно дополнительно содержащего 1 или 2 атома азота, предпочтительно при этом NR4-C1-6-алкил-NR4 и N-содержащий гетероцикл замещены 1-3 заместителями, выбранными из группы, состоящей из C1-6-алкила, арила, C1-6-аралкила; и
R8 выбран из группы, состоящей из радиоактивного фрагмента, хелатирующего агента, флуоресцентного красителя, контрастного агента и их комбинаций;
представляет собой 1-нафтильный фрагмент или 5-10-членный N-содержащий ароматический или неароматический моно- или бициклический гетероцикл, при этом имеется 2 кольцевых атома между атомом N и X; указанный гетероцикл необязательно дополнительно содержит 1, 2 или 3 гетероатома, выбранных из О, N и S; и X представляет собой атом С;
или его фармацевтически приемлемый таутомер, рацемат, гидрат, сольват или соль. Предпочтительно С1-6-алкил выбран из группы, состоящей из метила, этила, пропила, изопропила, бутила, втор-бутила, трет-бутила, пентила и гексила.
В другом предпочтительном варианте осуществления первого аспекта настоящего изобретения А и Е вместе образуют группу, состоящую из С3, С4, С5, С6, С7 и С8 моноциклического, предпочтительно С5 или С6 моноциклического, или С7, C8, С9, С10, С11 или С12 бициклического, предпочтительно С7, С8, С9 и С10 бициклического гетероциклоалкила, предпочтительно содержащего 1, 2, 3 или 4, более предпочтительно 1 или 2 гетероатома, независимо выбранных из группы, состоящей из N, О и S, предпочтительно N и О, наиболее предпочтительно 1 или 2 N. Предпочтительные моноциклические гетероциклоалкилы выбраны из группы, состоящей из пирролидинила, пиперидинила, имидазолидинила, 1,2-диазациклогексанила, 1,3-диазациклогексанила, пиперазинила, 1-оксо-2-азациклогексанила, 1-оксо-3-азациклогексанила или морфолинила, предпочтительно пиперидинила, пиперазинила и пирролидинила. Предпочтительные бициклические гетероциклоалкилы выбраны из группы, состоящей из бицикло[2.2.1]2,5-диазагептанила, 3,6-диазабицикло[3.2.1]октанила, 3,6-диазабицикло[3.2.2]нонила, октагидропирроло[2,3-b]пирролила, октагидропирроло[3,2-b]пирролила, октагидропирроло[3,4-b]пирролила, октагидропирроло[3,4-с]пирролила, 9-метил-3,7,9-триазабицикло[3.3.1]нонанила.
Связь между гетероциклом, образованным А и Е и В, с одной стороны, и/или R6 или R7 с другой стороны, предпочтительно осуществляется через гетероатом, предпочтительно через N.
В частности, предпочтительные примеры гетероцикла, образованного А и Е, выбраны из группы, состоящей из:
В предпочтительном варианте осуществления первого аспекта настоящего изобретения:
Q, R, U представляют собой CH2 и индивидуально присутствуют или отсутствуют; предпочтительно Q и R отсутствуют;
V представляет собой CH2, С=O, C=S или C=NR4; предпочтительно V представляет собой С=O;
W представляет собой NR4; предпочтительно W представляет собой NH;
Y представляет собой HCR4; предпочтительно Y представляет собой CH2; и
Z представляет собой С=O, C=S или C=NR4, предпочтительно Z представляет собой С=O.
В следующем предпочтительном варианте осуществления первого аспекта настоящего изобретения:
Q, R, U отсутствуют;
V представляет собой CH2;
W представляет собой NH;
Y представляет собой CH2; и
Z представляет собой С=O.
В следующем предпочтительном варианте осуществления первого аспекта настоящего изобретения:
R1 и R2 независимо выбраны из группы, состоящей из -Н и галогено; предпочтительно R1 и R2 представляют собой галогено; более предпочтительно R1 и R2 представляют собой F;
R3 выбран из группы, состоящей из -Н, -CN и -В(ОН)2; предпочтительно R3 представляет собой -CN или -В(ОН)2; более предпочтительно R3 представляет собой -CN;
R4 выбран из группы, состоящей из -Н и -С1-6-алкила, где -С1-6-алкил необязательно замещен 1-3 заместителями, выбранными из -ОН. Предпочтительно С1-6-алкил выбран из группы, состоящей из метила, этила, пропила, изопропила, бутила, втор-бутила, трет-бутила, пентила и гексила.
В следующем предпочтительном варианте осуществления первого аспекта настоящего изобретения:
Q, R, U отсутствуют;
V представляет собой СН2;
W представляет собой NH;
Y представляет собой CH2;
Z представляет собой С=O;
R1 и R2 независимо выбраны из группы, состоящей из -Н и галогено; предпочтительно R1 и R2 представляют собой галогено; более предпочтительно R1 и R2 представляют собой F;
R3 выбран из группы, состоящей из -Н, -CN и -В(ОН)2; предпочтительно R3 представляет собой -CN или В(ОН)2; более предпочтительно R3 представляет собой -CN;
R4 выбран из группы, состоящей из -Н и -C1-6-алкила, где -C1-6-алкил необязательно замещен 1-3 заместителями, выбранными из -ОН. Предпочтительно С1-6-алкил выбран из группы, состоящей из метила, этила, пропила, изопропила, бутила, втор-бутила, трет-бутила, пентила и гексила.
В следующем предпочтительном варианте осуществления первого аспекта настоящего изобретения:
Q, R, U отсутствуют;
V представляет собой СН2;
W представляет собой CH2;
Y представляет собой NH;
Z представляет собой С=O;
R1 и R2 независимо выбраны из группы, состоящей из -Н и галогено; предпочтительно R1 и R2 представляют собой галогено; более предпочтительно R1 и R2 представляют собой F;
R3 выбран из группы, состоящей из -Н, -CN и -В(ОН)2; предпочтительно R3 представляет собой -CN или -В(ОН)2; более предпочтительно R3 представляет собой CN;
R4 выбран из группы, состоящей из -Н и -C1-6-алкила, где -С1-6-алкил необязательно замещен 1-3 заместителями, выбранными из -ОН. Предпочтительно С1-6-алкил выбран из группы, состоящей из метила, этила, пропила, изопропила, бутила, втор-бутила, трет-бутила, пентила и гексила.
В следующем предпочтительном варианте осуществления первого аспекта настоящего изобретения:
выбран из группы, состоящей из 
необязательно дополнительно содержащей 1 или 2 гетероатома, выбранных из О, N и S.
В следующем предпочтительном варианте осуществления первого аспекта настоящего изобретения:
представляет собой
необязательно дополнительно содержащий 1 или 2 гетероатома, выбранных из О, N и S.
В следующем предпочтительном варианте осуществления первого аспекта настоящего изобретения
выбран из группы, состоящей из:
R6 и R7 независимо выбраны из группы, состоящей из -Н, 
при условии, что R6 и R7 одновременно не представляют собой Н, и предпочтительно R6 и R7 присоединены по положениям 5, 6 и 7.
В предпочтительном варианте осуществления 
выбран из группы, состоящей из 
В другом предпочтительном варианте осуществления 
представляет собой 
В следующем предпочтительном варианте осуществления первого аспекта настоящего изобретения R5 и R6 представляют собой Н;
R7 представляет собой 
предпочтительно R7 присоединен к 5- или 6-хинолильному положению; более предпочтительно R7 присоединен к 6-хинолильному положению, где
D отсутствует;
А представляет собой О, S, СН2, NH, NCH3;
Е представляет собой C1-6-алкил или 
, где m равно 1, 2 или 3; предпочтительно C1-6-алкил выбран из группы, состоящей из метила, этила, пропила, изопропила, трет-бутила, пентила и гексила; более предпочтительно Е представляет собой C1-6-алкил, наиболее предпочтительно Е представляет собой С3 или С4 алкил;
или
А и Е вместе образуют группу, выбранную из: 
В представляет собой NR4-C1-6-алкил или 5-10-членный N-содержащий ароматический или неароматический моно- или бициклический гетероцикл, предпочтительно дополнительно содержащий 1 или 2 гетероатома, выбранных из О, N и S, предпочтительно дополнительно содержащий 1 или 2 атома азота, при этом предпочтительно N-содержащий гетероцикл замещен 1-3 заместителями, выбранными из группы, состоящей из C1-6-алкила, арила, C1-6-аралкила. Предпочтительно C1-6-алкил выбран из группы, состоящей из метила, этила, пропила, изопропила, бутила, втор-бутила, трет-бутила, пентила и гексила.
В следующем предпочтительном варианте осуществления первого аспекта настоящего изобретения:
R5 и R6 представляют собой Н;
R7 представляет собой 
предпочтительно R7 присоединен к 5- или 6-хинолильному положению; более предпочтительно R7 присоединен к 6-хинолильному положению, где
D отсутствует;
А представляет собой О;
Е представляет собой C1-6-алкил или 
, где m равно 1, 2 или 3; предпочтительно C1-6-алкил выбран из группы, состоящей из метила, этила, пропила, изопропила, бутила, втор-бутила, трет-бутила, пентила и гексила; более предпочтительно Е представляет собой C1-6-алкил, наиболее предпочтительно Е представляет собой С3 или С4 алкил; В представляет собой NR4-C1-6-алкил или 5-10-членный N-содержащий ароматический или неароматический моно- или бициклический гетероцикл, предпочтительно дополнительно содержащий 1 или 2 гетероатома, выбранных из О, N и S, предпочтительно дополнительно содержащий 1 или 2 атома азота, при этом предпочтительно N-содержащий гетероцикл замещен 1-3 заместителями, выбранными из группы, состоящей из C1-6-алкила, арила, C1-6-аралкила. Предпочтительно C1-6-алкил выбран из группы, состоящей из метила, этила, пропила, изопропила, бутила, втор-бутила, трет-бутила, пентила и гексила.
В следующем предпочтительном варианте осуществления первого аспекта настоящего изобретения:
R5 и R6 представляют собой Н;
R7 представляет собой 
, предпочтительно R7 присоединен к 5- или 6-хинолильному положению; более предпочтительно R7 присоединен к 6-хинолильному положению, где
D отсутствует;
А представляет собой S;
Е представляет собой C1-6-алкил или 
, где m равно 1, 2 или 3; предпочтительно C1-6-алкил выбран из группы, состоящей из метила, этила, пропила, изопропила, бутила, втор-бутила, трет-бутила, пентила и гексила; более предпочтительно Е представляет собой C1-6-алкил, наиболее предпочтительно Е представляет собой С3 или С4 алкил; В представляет собой NR4-C1-6-алкил или 5-10-членный N-содержащий ароматический или неароматический моно- или бициклический гетероцикл, предпочтительно дополнительно содержащий 1 или 2 гетероатома, выбранных из О, N и S, предпочтительно дополнительно содержащий 1 или 2 атома азота, при этом предпочтительно N-содержащий гетероцикл замещен 1-3 заместителями, выбранными из группы, состоящей из C1-6-алкила, арила, C1-6-аралкила. Предпочтительно C1-6-алкил выбран из группы, состоящей из метила, этила, пропила, изопропила, бутила, втор-бутила, трет-бутила, пентила и гексила.
В следующем предпочтительном варианте осуществления первого аспекта настоящего изобретения:
R5 и R6 представляют собой Н;
R7 представляет собой 
предпочтительно R7 присоединен к 5- или 6-хинолильному положению; более предпочтительно R7 присоединен к 6-хинолильному положению, где
D отсутствует;
А представляет собой CH2;
Е представляет собой C1-6-алкил или 
, где m равно 1, 2 или 3; предпочтительно C1-6-алкил выбран из группы, состоящей из метила, этила, пропила, изопропила, бутила, втор-бутила, трет-бутила, пентила и гексила; более предпочтительно Е представляет собой C1-6-алкил, наиболее предпочтительно Е представляет собой С3 или С4 алкил; В представляет собой NR4-C1-6-алкил или 5-10-членный N-содержащий ароматический или неароматический моно- или бициклический гетероцикл, предпочтительно дополнительно содержащий 1 или 2 гетероатома, выбранных из О, N и S, предпочтительно дополнительно содержащий 1 или 2 атома азота, при этом N-содержащий гетероцикл замещен 1-3 заместителями, выбранными из группы, состоящей из C1-6-алкила, арила, C1-6-аралкила. Предпочтительно C1-6-алкил выбран из группы, состоящей из метила, этила, пропила, изопропила, бутила, втор-бутила, трет-бутила, пентила и гексила.
В следующем предпочтительном варианте осуществления первого аспекта настоящего изобретения:
R5 и R6 представляют собой Н;
R7 представляет собой 
, предпочтительно R7 присоединен к 5- или 6-хинолильному положению; более предпочтительно R7 присоединен к 6-хинолильному положению, где
D отсутствует;
А представляет собой NH;
Е представляет собой C1-6-алкил или, 
где m равно 1, 2 или 3; предпочтительно, C1-6-алкил выбран из группы, состоящей из метила, этила, пропила, изопропила, бутила, втор-бутила, трет-бутила, пентила и гексила; более предпочтительно Е представляет собой C1-6-алкил, наиболее предпочтительно Е представляет собой С3 или С4 алкил; В представляет собой NR4-C1-6-алкил или 5-10-членный N-содержащий ароматический или неароматический моно- или бициклический гетероцикл, предпочтительно дополнительно содержащий 1 или 2 гетероатома, выбранных из О, N и S, предпочтительно дополнительно содержащий 1 или 2 атома азота, при этом предпочтительно N-содержащий гетероцикл замещен 1-3 заместителями, выбранными из группы, состоящей из C1-6-алкила, арила, C1-6-аралкила. Предпочтительно C1-6-алкил выбран из группы, состоящей из метила, этила, пропила, изопропила, бутила, втор-бутила, трет-бутила, пентила и гексила.
В следующем предпочтительном варианте осуществления первого аспекта настоящего изобретения:
R5 и R6 представляют собой Н;
R7 представляет собой 
, предпочтительно R7 присоединен к 5- или 6-хинолильному положению; более предпочтительно R7 присоединен к 6-хинолильному положению, где
D представляет собой аминокислоту, предпочтительно несущую заряженную боковую цепь;
А представляет собой О;
Е представляет собой C1-6-алкил или 
, где m равно 1, 2 или 3; предпочтительно C1-6-алкил выбран из группы, состоящей из метила, этила, пропила, изопропила, бутила, втор-бутила, трет-бутила, пентила и гексила; более предпочтительно Е представляет собой C1-6-алкил, наиболее предпочтительно Е представляет собой С3 или С4 алкил; В представляет собой NR4-C1-6-алкил или 5-10-членный N-содержащий ароматический или неароматический моно- или бициклический гетероцикл, предпочтительно дополнительно содержащий 1 или 2 гетероатома, выбранных из О, N и S, предпочтительно дополнительно содержащий 1 или 2 атома азота, при этом предпочтительно N-содержащий гетероцикл замещен 1-3 заместителями, выбранными из группы, состоящей из C1-6-алкила, арила, C1-6-аралкила. Предпочтительно C1-6-алкил выбран из группы, состоящей из метила, этила, пропила, изопропила, бутила, втор-бутила, трет-бутила, пентила и гексила.
В следующем предпочтительном варианте осуществления первого аспекта настоящего изобретения:
R5 и R6 представляют собой Н;
R7 представляет собой 
, предпочтительно R7 присоединен к 5- или 6-хинолильному положению; более предпочтительно R7 присоединен к 6-хинолильному положению, где
D представляет собой аминокислоту, предпочтительно несущую заряженную боковую цепь;
А представляет собой S;
Е представляет собой C1-6-алкил или 
, где m равно 1, 2 или 3; предпочтительно C1-6-алкил выбран из группы, состоящей из метила, этила, пропила, изопропила, бутила, втор-бутила, трет-бутила, пентила и гексила; более предпочтительно Е представляет собой C1-6-алкил, наиболее предпочтительно Е представляет собой С3 или С4 алкил; В представляет собой NR4-C1-6-алкил или 5-10-членный N-содержащий ароматический или неароматический моно- или бициклический гетероцикл, предпочтительно дополнительно содержащий 1 или 2 гетероатома, выбранных из О, N и S, предпочтительно дополнительно содержащий 1 или 2 атома азота, при этом предпочтительно N-содержащий гетероцикл замещен 1-3 заместителями, выбранными из группы, состоящей из C1-6-алкила, арила, C1-6-аралкила. Предпочтительно C1-6-алкил выбран из группы, состоящей из метила, этила, пропила, изопропила, бутила, втор-бутила, трет-бутила, пентила и гексила.
В следующем предпочтительном варианте осуществления первого аспекта настоящего изобретения:
R5 и R6 представляют собой Н;
R7 представляет собой 
, предпочтительно R7 присоединен к 5- или 6-хинолильному положению; более предпочтительно R7 присоединен к 6-хинолильному положению, где
D представляет собой аминокислоту, предпочтительно несущую заряженную боковую цепь;
А представляет собой СН2;
Е представляет собой C1-6-алкил или 
, где m равно 1, 2 или 3; предпочтительно C1-6-алкил выбран из группы, состоящей из метила, этила, пропила, изопропила, бутила, втор-бутила, трет-бутила, пентила и гексила; более предпочтительно Е представляет собой C1-6-алкил, наиболее предпочтительно Е представляет собой С3 или С4 алкил; В представляет собой NR4-C1-6-алкил или 5-10-членный N-содержащий ароматический или неароматический моно- или бициклический гетероцикл, предпочтительно дополнительно содержащий 1 или 2 гетероатома, выбранных из О, N и S, предпочтительно дополнительно содержащий 1 или 2 атома азота, при этом предпочтительно N-содержащий гетероцикл замещен 1-3 заместителями, выбранными из группы, состоящей из C1-6-алкила, арила, C1-6-аралкила. Предпочтительно C1-6-алкил выбран из группы, состоящей из метила, этила, пропила, изопропила, бутила, втор-бутила, трет-бутила, пентила и гексила.
В следующем предпочтительном варианте осуществления первого аспекта настоящего изобретения:
R5 и R6 представляют собой Н;
R7 представляет собой 
, предпочтительно R7 присоединен к 5- или 6-хинолильному положению; более предпочтительно R7 присоединен к 6-хинолильному положению, где
D представляет собой аминокислоту, предпочтительно несущую заряженную боковую цепь;
А представляет собой NH;
Е представляет собой C1-6-алкил 
или, где m равно 1, 2 или 3; предпочтительно C1-6-алкил выбран из группы, состоящей из метила, этила, пропила, изопропила, бутила, втор-бутила, трет-бутила, пентила и гексила; более предпочтительно Е представляет собой C1-6-алкил, наиболее предпочтительно Е представляет собой С3 или С4 алкил; В представляет собой NR4-C1-6-алкил или 5-10-членный N-содержащий ароматический или неароматический моно- или бициклический гетероцикл, предпочтительно дополнительно содержащий 1 или 2 гетероатома, выбранных из О, N и S, предпочтительно дополнительно содержащий 1 или 2 атома азота, при этом предпочтительно N-содержащий гетероцикл замещен 1-3 заместителями, выбранными из группы, состоящей из C1-6-алкила, арила, C1-6-аралкила. Предпочтительно C1-6-алкил выбран из группы, состоящей из метила, этила, пропила, изопропила, бутила, втор-бутила, трет-бутила, пентила и гексила.
В следующем предпочтительном варианте осуществления первого аспекта настоящего изобретения:
R5 и R6 представляют собой Н;
R7 представляет собой 
, предпочтительно R7 присоединен к 5- или 6-хинолильному положению; более предпочтительно R7 присоединен к 6-хинолильному положению, где D отсутствует; А представляет собой О;
Е представляет собой C1-6-алкил или 
, где m равно 1, 2 или 3; предпочтительно Е представляет собой С1-6-алкил, и C1-6-алкил выбран из группы, состоящей из метила, этила, пропила, изопропила, бутила, втор-бутила, трет-бутила, пентила и гексила; более предпочтительно Е представляет собой C1-6-алкил, наиболее предпочтительно Е представляет собой С3 или С4 алкил;
В представляет собой 5-10-членный N-содержащий ароматический или неароматический моно- или бициклический гетероцикл, предпочтительно дополнительно содержащий 1 или 2 атома азота.
В следующем предпочтительном варианте осуществления первого аспекта настоящего изобретения:
R5 и R6 представляют собой Н;
R7 представляет собой 
, предпочтительно R7 присоединен к 5- или 6-хинолильному положению; более предпочтительно R7 присоединен к 6-хинолильному положению, где
D отсутствует;
А представляет собой О;
Е представляет собой С3 или С4 алкил; более предпочтительно Е представляет собой пропил или бутил;
В представляет собой 5-10-членный N-содержащий ароматический или неароматический моно- или бициклический гетероцикл, предпочтительно дополнительно содержащий 1 или 2 атома азота.
В следующем предпочтительном варианте осуществления первого аспекта настоящего изобретения N-содержащий гетероцикл, содержащийся в В, представляет собой ароматический или неароматический моноциклический гетероцикл:
, где
гетероцикл необязательно дополнительно содержит 1 или 2 гетероатома, выбранных из О, N и S, необязательно дополнительно содержит 1 атом азота;
присоединен к положению 1, 2 или 3, предпочтительно к положению 2;
1 равно 1 или 2.
В дополнительном предпочтительном варианте осуществления первого аспекта настоящего изобретения N-содержащий гетероцикл, содержащийся в В, представляет собой ароматический или неароматический моноциклический гетероцикл:
, где
гетероцикл необязательно дополнительно содержит 1 или 2 гетероатома, выбранных из О, N и S, необязательно дополнительно содержит 1 атом азота;
присоединен к положению 1, 2 или 3, предпочтительно к положению 2;
1 равно 1 или 2;
где N-содержащий гетероцикл замещен C1-6-алкилом.
В дополнительном предпочтительном варианте осуществления первого аспекта настоящего изобретения N-содержащий гетероцикл, содержащийся в В, выбран из группы, состоящей из:
где N-содержащий гетероцикл замещен C1-6-алкилом,
при этом, если N-содержащий гетероцикл, содержащийся в В, представляет собой
, гетероцикл необязательно дополнительно содержит 1 или 2 гетероатома, выбранных из О, N и S, необязательно дополнительно содержит 1 атом азота, необязательно компрометирует одну или несколько (например, происходящих из аминокислот) боковых цепей;
присоединен к положению 1, 2 или 3, предпочтительно к положению 2;
о равно 1 или 2;
предпочтительно, если N-содержащий гетероцикл, содержащийся в В, представляет собой 
, N-содержащий гетероцикл, содержащийся в В, выбран из группы, состоящей из 
и 
более предпочтительно, если N-содержащий гетероцикл, содержащийся в В, представляет собой 
, N-содержащий гетероцикл, содержащийся в В, представляет собой 
В дополнительном предпочтительном варианте осуществления первого аспекта настоящего изобретения N-содержащий гетероцикл, содержащийся в В, выбран из группы, состоящей из:
при этом, если N-содержащий гетероцикл, содержащийся в В, представляет собой 
, гетероцикл необязательно дополнительно содержит 1 или 2 гетероатома, выбранных из О, N и S, необязательно дополнительно содержит 1 атом азота, необязательно компрометирует одну или несколько (например, происходящих из аминокислот) боковых цепей;
присоединен к положению 1, 2 или 3, предпочтительно к положению 2;
о равно 1 или 2;
предпочтительно, если N-содержащий гетероцикл, содержащийся в В, представляет собой 
, N-содержащий гетероцикл, содержащийся в В, выбран из группы, состоящей из 
и
более предпочтительно, если N-содержащий гетероцикл, содержащийся в В, представляет собой 
, N-содержащий гетероцикл, содержащийся в В, представляет собой 
В следующем предпочтительном варианте осуществления первого аспекта настоящего изобретения N-содержащий гетероцикл, содержащийся в В, выбран из группы, состоящей из:
и
В следующем предпочтительном варианте осуществления первого аспекта настоящего изобретения N-содержащий гетероцикл, содержащийся в В, выбран из группы, состоящей из:
, где В замещен C1-3-алкилом. В следующем предпочтительном варианте осуществления первого аспекта настоящего изобретения:
R5 и R6 представляют собой Н;
R7 представляет собой 
, предпочтительно R7 присоединен к 6-хинолильному положению, при этом
D отсутствует;
А представляет собой О;
Е представляет собой пропил или бутил;
В представляет собой
В следующем предпочтительном варианте осуществления первого аспекта настоящего изобретения:
Q, R, U отсутствуют;
V представляет собой С=О;
W представляет собой NH;
Y представляет собой СН2;
Z представляет собой С=O;
R1 и R2 независимо выбраны из группы, состоящей из -Н и галогено; предпочтительно R1 и R2 независимо выбраны из группы, состоящей из -Н и F; более предпочтительно R1 и R2 являются одинаковыми и выбраны из группы, состоящей из H и F;
R3 представляет собой -CN;
R5 и R6 представляют собой Н;
R7 представляет собой 
, предпочтительно R7 присоединен к 6-хинолильному положению, где
D отсутствует;
А представляет собой О;
Е представляет собой C1-6-алкил или 
,
где m равно 1, 2 или 3; предпочтительно Е представляет собой C1-6-алкил; предпочтительно C1-6-алкил выбран из группы, состоящей из метила, этила, пропила, изопропила, бутила, втор-бутила, трет-бутила, пентила и гексила; более предпочтительно Е представляет собой C1-6-алкил, наиболее предпочтительно Е представляет собой С3 или С4 алкил;
В представляет собой NH-C1-6-алкил, 
предпочтительно C1-6-алкил выбран из группы, состоящей из метила, этила, пропила, изопропила, бутила, втор-бутила, трет-бутила, пентила и гексила;
предпочтительно В представляет собой 
; и
представляет собой 
В следующем предпочтительном варианте осуществления первого аспекта настоящего изобретения:
Q, R, U отсутствуют;
V представляет собой С=О;
W представляет собой NH;
Y представляет собой СН2;
Z представляет собой С=O;
R1 и R2 являются одинаковыми и выбраны из группы, состоящей из -Н и F;
R3 представляет собой -CN;
R5 и R6 представляют собой Н;
R7 представляет собой 
, предпочтительно R7 присоединен к 6-хинолильному положению, где
D отсутствует;
А представляет собой О, S, СН2, NH, NCH3;
Е представляет собой метил, этил, пропил или бутил;
А и Е вместе образуют группу, выбранную из: 
, 
В представляет собой
или 
, необязательно В замещен С1-3-алкилом; предпочтительно В представляет собой 
; и
представляет собой 
В дополнительном предпочтительном варианте осуществления первого аспекта настоящего изобретения:
Q, R, U отсутствуют;
V представляет собой С=О;
W представляет собой NH;
Y представляет собой СН2;
Z представляет собой С=O;
R1 и R2 являются одинаковыми и выбраны из группы, состоящей из -Н и F;
представляет собой -CN; R5 и R6 представляют собой Н;
R7 представляет собой 
, предпочтительно R7 присоединен к 6-хинолильному положению, где
D отсутствует;
А представляет собой О;
Е представляет собой метил, этил, пропил или бутил;
В представляет собой 
или 
; предпочтительно В представляет собой 
; и
представляет собой 
В дополнительном предпочтительном варианте осуществления первого аспекта настоящего изобретения:
Q, R, U отсутствуют;
V представляет собой С=O;
W представляет собой NH;
Y представляет собой CH2;
Z представляет собой С=О;
R1 и R2 являются одинаковыми и выбраны из группы, состоящей из -Н и F;
R3 представляет собой -CN;
R5 и R6 представляют собой Н;
R7 представляют собой 
, R7 присоединен к 6-хинолильному положению, где
D отсутствует;
А представляют собой О;
Е представляют собой метил, этил, пропил или бутил;
В представляет собой 
или 
; предпочтительно В представляет собой 
; и
представляет собой 
R7 представляет собой
, предпочтительно R7 присоединен к 6-хинолильному положению, где
D отсутствует;
А представляет собой О;
Е представляет собой метил, этил, пропил или бутил;
В представляет собой is 
или 
; предпочтительно В представляет собой 
; и
представляет собой
В следующем предпочтительном варианте осуществления первого аспекта настоящего изобретения C1-6-алкил выбран из группы, состоящей из метила, этила, пропила, изопропила, бутила, втор-бутила, трет-бутила, пентила и гексила.
В следующем предпочтительном варианте осуществления первого аспекта настоящего изобретения C1-3-алкил выбран из группы, состоящей из метила, этила, пропила и изопропила.
В следующем предпочтительном варианте осуществления первого аспекта настоящего изобретения C1-6-аралкил выбран из группы, состоящей из бензила, фенил-этила, фенил-пропила и фенил-бутила.
В предпочтительном варианте осуществления первого аспекта настоящего изобретения соединение по первому аспекту изобретения выбрано из соединений, представленных в таблице 1. Более предпочтительно соединение по первому аспекту изобретения выбрано из соединений, представленных в таблице 2. Более предпочтительно соединение по первому аспекту изобретения выбрано из группы, состоящей из FAPI-02 и FAPI-04.
В предпочтительном варианте осуществления первого аспекта настоящего изобретения соединение по первому аспекту изобретения выбрано из соединений, представленных в таблице 1 и/или таблице 3. Более предпочтительно соединение по первому аспекту изобретения выбрано из соединений, представленных в таблице 2 и/или таблице 4. Более предпочтительно соединение по первому аспекту изобретения выбрано из группы, состоящей из FAPI-02, FAPI-04, FAPI-46, FAPI-34, FAPI-42, FAPI-52, FAPI-69, FAPI-70, FAPI-71, FAPI-72 и FAPI-73.
Таблица 1: Предпочтительные соединения по первому аспекту изобретения.
§ флуоресцентные соединения; $ 99mTc-хелаторы; * Pb-хелаторы; R1 и R2 расположены в 4-пирролидиновом положении; Q, R, U отсутствуют; 
представляет собой, R5 представляет собой Н; R6 присоединен к 7-хинолильному положению; R7 присоединен к 6-хинолильному положению; «-» означает, что R6 или R7 представляет собой Н; «+» означает, что R6 или R7 представляет собой 
; V представляет собой С=O; W представляет собой NH; Y представляет собой CH2; Z представляет собой С=О; R3 представляет собой -CN; А представляет собой О (за исключением FAPI-01: А отсутствует, R7 присоединен к 5-хинолильному положению).
Таблица 2: Соединения, представляющие особый интерес.Q, R, U, D отсутствуют; R1 и R2 расположены в 4-пирролидиновом положении; 
представляет собой 
, R5, R6 представляют собой Н; R7 присоединен к 6-хинолильному положению; V представляет собой С=O; W представляет собой NH; Y представляет собой CH2; Z представляет собой С=О; R3 представляет собой -CN; В представляет собой 1,4-пиперазин; Е представляет собой 1,3-пропан; А представляет собой О.
Таблица 3: Дополнительные предпочтительные соединения по первому аспекту изобретения. § флуоресцентные соединения; $ 99mTc-хелаторы; * прекурсоры для 18F-мечения; Q, R, U отсутствуют; R1 и R2 расположены в 4-пирролидиновом положении;
представляет собой 
, R5 и R6 представляют собой Н; R7 присоединен к 6-хинолильному положению и представляет собой
; V представляет собой С=O; W представляет собой NH; Y представляет собой CH2; Z представляет собой С=O; R3 представляет собой -CN.
В другом предпочтительном варианте осуществления первого аспекта настоящего изобретения R8 представляет собой радиоактивный фрагмент, при этом радиоактивный фрагмент представляет собой флуоресцентный изотоп, радиоактивный изотоп, радиоактивное лекарственное средство или их комбинации. Предпочтительно радиоактивный фрагмент выбран из группы, состоящей из изотопов, испускающих альфа-излучение, изотопов, испускающих бета-излучение, изотопов, испускающих гамма-излучение, изотопов, испускающих оже-электроны, изотопов, испускающих рентгеновское излучение, изотопов, испускающих флуоресценцию, таких как 11С, 18F, 51Cr, 67Ga, 68Ga, 111In, 99mTc, 186Re, 188Re, 139La, 140La, 175Yb, 153Sm, 166Ho, 88Y, 90Y, 149Pm, 165Dy, 169Er, 177Lu, 47Sc, 142Pr, 159Gd, 212Bi, 213Bi, 72As, 72Se, 97Ru, 109Pd, 105Rh, 101mRh, 119Sb, 128Ba, 123I, 124I, 131I, 197Hg, 211At, 151Eu, 153Eu, 169Eu, 201Tl, 203Pb, 212Pb, 64Cu, 67Cu, 188Re, 186Re, 198Au, 225Ac, 227Th и 199Ag. Предпочтительно 18F, 64Cu, 68Ga, 90Y, 99mTc, 153Sm, 177Lu, 188Re.
В следующем предпочтительном варианте осуществления первого аспекта настоящего изобретения R8 представляет собой флуоресцентный краситель, выбранный из группы, состоящей из следующих классов флуоресцентных красителей: ксантены, акридины, оксазины, цинины, стириловые красители, кумарины, порфины, комплексы металл-лиганд, флуоресцентные белки, нанокристаллы, перилены, бор-дипиррометены и фталоцианины, а также конъюгаты и комбинации этих классов красителей.
В следующем предпочтительном варианте осуществления первого аспекта настоящего изобретения R8 представляет собой хелатирующий агент, который образует комплекс с катионами двухвалентных или трехвалентных металлов. Предпочтительно хелатирующий агент выбран из группы, состоящей из 1,4,7,10-тетраазациклододекан-N,N',N,N'-тетрауксусной кислоты (DOTA), этилендиаминтетрауксусной кислоты (EDTA), 1,4,7-триазациклононан-1,4,7-триуксусной кислоты (NOTA), триэтилентетр амина (ТЕТА), иминодиуксусной кислоты, диэтилентриамин-N,N,N',N',N'-пентауксусной кислоты (DTPA), бис-(карбоксиметилимидазол)глицина и 6-гидразинопиридин-3-карбоновой кислоты (HYNIC).
В следующем предпочтительном варианте осуществления первого аспекта настоящего изобретения R8 представляет собой контрастный агент, который содержит парамагнитный агент или состоит из него, при этом предпочтительно парамагнитный агент содержит парамагнитные наночастицы или состоит из них.
В следующем предпочтительном варианте осуществления первого аспекта изобретения R8 выбран из любого R8 из таблиц 1-5.
Во втором аспекте настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции, содержащей по меньшей мере одно соединение по первому аспекту или состоящей из него, и необязательно фармацевтически приемлемый носитель и/или вспомогательное вещество.
В третьем аспекте настоящее изобретение относится к соединению по первому аспекту или фармацевтической композиции по второму аспекту для применения в диагностике или лечении заболевания, характеризующегося сверхэкспрессией белка активации фибробластов (FAP), у субъекта животного или человека. Предпочтительно заболевание, характеризующееся сверхэкспрессией белка активации фибробластов (FAP), выбрано из группы, состоящей из рака, хронического воспаления, атеросклероза, фиброза, ремоделирования ткани и келоидного нарушения.
Предпочтительно, если заболевание, характеризующееся сверхэкспрессией белка активации фибробластов (FAP), представляет собой рак, при этом рак выбран из группы, состоящей из рака молочной железы, рака поджелудочной железы, рака тонкой кишки, рака толстой кишки, рака прямой кишки, рака легких, рака головы и шеи, рак яичников, гепатоцеллюлярной карциномы, рака пищевода, рака гортанной части глотки, рака носоглотки, рака гортани, миеломных клеток, рака мочевого пузыря, холангиоцеллюлярной карциномы, светлоклеточной карциномы почек, нейроэндокринной опухоли, онкогенной остеомаляция, саркомы, CUP-синдрома (carcinoma of unknown primary), карциномы тимуса, десмоидных опухолей, глиомы, астроцитомы, карциномы шейки матки и рака предстательной железы. Предпочтительно рак представляет собой глиому, рак молочной железы, рак толстой кишки, рак легких, рак головы и шеи, рак печени или рак поджелудочной железы. Более предпочтительно рак представляет собой глиому.
Предпочтительно, если заболевание, характеризующееся сверхэкспрессией белка активации фибробластов (FAP), представляет собой хроническое воспаление, при этом хроническое воспаление выбирают из группы, состоящей из ревматоидного артрита, остеоартрита и болезни Крона. Предпочтительно хроническое воспаление представляет собой ревматоидный артрит.
Предпочтительно, если заболевание, характеризующееся сверхэкспрессией белка активации фибробластов (FAP), представляет собой фиброз, при этом фиброз выбран из группы, состоящей из фиброза легких, такого как идиопатический фиброз легких, и цирроза печени.
Предпочтительно, если заболевание, характеризующееся сверхэкспрессией белка активации фибробластов (FAP), представляет собой ремоделирование ткани, при этом ремоделирование ткани происходит после инфаркта миокарда.
Предпочтительно, если заболевание, характеризующееся сверхэкспрессией белка активации фибробластов (FAP), представляет собой келоидное заболевание, при этом келоидное заболевание выбрано из группы, состоящей из образования рубцов, келоидных опухолей и келоидных рубцов.
В четвертом аспекте настоящее изобретение относится к набору, содержащему или состоящему из соединения по первому аспекту или фармацевтической композиции по второму аспекту и инструкций по диагностике или лечению заболевания. Предпочтительно заболевание представляет собой заболевание, указанное выше.
Примеры
Пример 1: Синтез соединений и радиационная химия
На основе специфического ингибитора FAP-α (Jansen et al., ACS Med Chem Lett, 2013) были синтезированы два радиоактивных индикатора. Меченный радиоактивным йодом FAPI-01 получали из оловоорганического станнилированного предшественника, который получали путем катализируемого палладием обмена бром/олово. FAPI-02 является предшественником для хелатирования радиоактивных металлов, который был синтезирован в пять этапов. Дополнительные соединения получали путем применения тех же или немного измененных методик. Структуры этих соединений представлены в таблицах 1 и 2. Радиоиодирование станнилированного предшественника проводили с перуксусной кислотой. Для хелатирования с Lu-177 и Ga-68 рН реакционной смеси доводили ацетатом натрия и нагревали до 95°С в течение 10 мин. Стабильность в сыворотке человека анализировали с помощью преципитации и анализа супернатанта с помощью radio-ВЭЖХ (с радиометрическим детектированием).
Реагенты
Все растворители и нерадиоактивные реагенты получали «чистые для анализа» от ABCR (Karlsruhe, Germany), Sigma-Aldrich (München, Germany), Acros Organics (Geel, Belgium) или VWR (Bruchsal, Germany) и использовали без дополнительной очистки. Atto 488 NHS-эфир получали от AttoTec (Siegen, Германия). 2,2',2''-(10-(2-(4-нитрофенил)окси)-2-оксоэтил)-1,4,7,10-тетраазациклододекан-1,4,7-триил)-триуксусную кислоту (DOTA-PNP) синтезировали в соответствии с протоколом Mier et al. (Mier et al., Bioconjug Chem, 2005). Промежуточные продукты 6-метоксихинолин-4-карбоновую кислоту (7), 5-бромхинолин-4-карбоновую кислоту (3) и (S)-1-(2-аминоацетил)пирролидин-2-карбонитрил 4-метилбензолсульфонат синтезировали в соответствии с протоколами Jansen et al. (Jansen et al., ACS Med Chem Lett, 2013). Продукт (S)-N-(2-(2-цианопирролидин-1-ил)-2-оксоэтил)-5-бромхинолин карбоксамид синтезировали по модифицированному протоколу амидирования HBTU.
Синтез соединений
На схеме 1 изображен первоначальный синтез FAPI-01, который достигался путем выполнения обмена Br/Li при действии н-бутиллития на 5-бромхинолин-4-карбоновую кислоту (3) и гашения элементарным йодом с получением йодхинолина 4. Это соединение подвергали реакции сочетания с фрагментом Gly-Pro-CN посредством HBTU/HOBt-активации с получением нерадиоактивного эталонного продукта FAPI-01 (1)
Для синтеза радиоактивного FAPI-01 (1*) станнилированный прекурсор 6 получали путем катализируемого палладием станнилирования ингибитора 5 в диоксане при 80°С (Схема 2).
Для того, чтобы сделать возможным мечение радиоактивным изотопом путем включения радиоактивных металлов, хелатор DOTA химически связывали с основным каркасом ингибитора FAP. Как показали Jansen et al. (Jansen et al., ACS Med Chem Lett, 2013), модификации в положении 6 хинолин-4-карбоновой кислоты хорошо переносятся без нарушения аффинности и специфичности мишени. Таким образом, бифункциональный линкер был присоединен к гидроксильной группе 8 через эфирную связь, что привело к синтезу, показанному на Схеме 3. Легкодоступный 1-бром-3-хлорпропан выбирали для создания спейсера, который сохранялся во время омыления одновременно образовавшейся сложноэфирной связи в конце однореакторного процесса. Соединение 9 превращали в N-Вос-защищенную хинолинкарбоновую кислоту 10, которую затем подвергали сочетанию с H-Gly-Pro-CN посредством HBTU. Из-за высокой гигроскопичности свободного амина соединение 11 напрямую превращалось в FAPI-02 (2) после удаления Вое, замены растворителя и нейтрализации избытка п-толуолсульфоновой кислоты.
В случае соединений, включающих группу А ≠ О, промежуточные соединения хинолин-4-карбоновой кислоты синтезировали по другой схеме реакции. Ключевой стадией этого подхода является катализируемая палладием реакция сочетания (например, перекрестное сочетание Бухвальда-Хартвига), которая требует дополнительной защиты до и депротекции функциональной группы карбоновой кислоты после реакции кросс-сочетания (схема 4).
(S)-N-(2-(2-Цианопирролидин-1-ил)-2-оксоэтил)-5-триметилстаннилхинолин кабоксамид (6)
3,88 мг (10,0 мкмоль) (S)-N-(2-(2-цианопирролидин-1-ил)-2-оксоэтил)-5-бромхинолин кабоксамида, 20 мкл (32 мг; 96 мкмоль) гексаметилолова и 0,75 мг (1,07 мкмоль) бис(трифенилфосфин)палладия(II) дихлорида в 1 мл сухого диоксана перемешивали при 80°С в течение ночи в инертной атмосфере. Летучие вещества удаляли, остаток растворяли в 2 мл смеси 50% ацетонитрил/вода и фильтровали через картридж C18-light перед очисткой HPLC. После сушки вымораживанием получали 2,78 мг (5,90 мкмоль; 59%) продукта. LC-MS Rt 14.77 мин, m/z 473.0786 [M(120Sn)+H]+
5-Йодохинолин-4-карбоновая кислота (4)
5,42 мг (136 мкмоль) суспензии гидрида натрия (60% в минеральном масле) добавляли к раствору 30,27 мг (120 мкмоль) 5-бромхинолин-4-карбоновой кислоты (3) в 3 мл сухого THF в атмосфере Ar при 0°С. Ледяную баню убирали и реакционную смесь охлаждали до -78°С, после чего по каплям добавляли 100 мкл (160 мкмоль) nBuLi (1,6М в гексанах). Через 15 мин по каплям добавляли 64,71 мг (254 мкмоль) йода в 2 мл THF и реакционную смесь перемешивали в течение 30 мин при -78°С, прежде чем дать ей нагреться до комнатной температуры. Через 1 ч реакцию гасили путем добавления 1 мл 0,5М NaHCO3 и приблизительно 30 мг (170 мкмоль) дитионита натрия для удаления избытка йода. После удаления THF при пониженном давлении смесь подкисляли до рН 2 и трижды экстрагировали этилацетатом (25 мл). Объединенные органические фазы выпаривали до сухого состояния и очищали с помощью HPLC. После сушки вымораживанием получали 18,14 мг (60,7 мкмоль; 45%) указанного в заголовке соединения.
1Н ЯМР (500 МГц, DMSO-d6) 13.95 (br, 0.3Н), 8.93 (s, 1H), 8.34 (d, J=7.2 Гц, 1H), 8.12 (d, J=8.4 Гц, 1H), 7.60 (s, 1H), 7.52 (t, J=7.9 Гц, 1H); 13С ЯМР (125 МГц, DMSO-d6) 168.8, 150.3, 148.8, 141.3, 130.6, 121.0, 109.5; LC-MS Rt 8.65 мин, m/z 299.9383 [М+Н]+
(S)-N-(2-(2-Цианопирролидин-1-ил)-2-оксоэтил)-5-триметилстаннилхинолин кабоксамид (1; FAPI-01)
9,07 мг (23,9 мкмоль) HBTU в 50 мкл DMF добавляли к раствору 6,21 мг (20,8 мкмоль) 5-йодхинолин-4-карбоновой кислоты, 7,45 мг (55,2 мкмоль) HOBt и 10 мкл DIPEA в 50 мкл DMF. Через 15 мин добавляли (29,9 мкмоль) (S)-1-(2-аминоацетил)-пирролидин-2-карбонитрил 4-метилбензолсульфонат в 50 мкл DMF. Реакцию гасили 850 мкл воды и очищали с помощью HPLC. Сушка вымораживанием обеспечила получение 6,86 мг (15,8 мкмоль; 76%) продукта.
1Н ЯМР (600 МГц, DMSO-d6) 9.06, 8.97, 8.33, 8.13, 7.56, 7.51, 4.81, 4.34, 4.06, 3.74, 3.56, 2.21, 2.17, 2.09, 2.05; 13С ЯМР (150 МГц, DMSO-d6) 167.1, 150.2, 148.8, 145.3, 141.5, 130.7, 125.3, 121.9, 119.3, 92.0, 46.3, 45.4, 42.1, 29.5, 24.9; LC-MS Rt 11.95 мин, m/z 435.0102 [М+Н]+
6-Гидроксихинолин-4-карбоновая кислота (8)
105 мг (477 мкмоль) неочищенной 6-метоксихинолин-4-карбоновой кислоты (7) растворяли в 3 мл 48% бромистоводородной кислоты в воде. Раствор нагревали до 130°С в течение 4 ч. После достижения комнатной температуры раствор доводили до слегка щелочного рН с помощью 6М NaOH. 79,2 мг (419 мкмоль; 88%) продукта получали после очистки с помощью HPLC и лиофилизации.
1Н ЯМР (500 МГц, DMSO-d6) 13.65 (br, 0.6Н) 10.24 (s, 1H), 8.78 (d, J=4.4 Гц, 1H), 8.06 (d, J=2.6 Гц, 1H), 7.95 (d, J=9.1 Гц, 1H), 7.84 (d, J=4.4 Гц, 1H), 7.37 (dd, J=9.1, 2.6 Гц, 1H), 13C ЯМР (125 МГц, DMSO-d6) 167.7, 156.9, 146.5, 144.1, 133.4, 131.2, 126.2, 122.3, 122.6, 106.5; LC-MS Rt 6.66 мин, m/z 190.0415 [M+H]+
трет-Бутил-6-бромхинолин-4-карбоксилат
98,3 мг (390 мкмоль) 6-бромхинолин-4-карбоновой кислоты (неочищенной) суспендировали в 5 мл тетрагидрофурана и 25,0 мкл (18,3 мг; 181 мкмоль) триэтиламина, и добавляли к О-трет-бутил-N,N'-дициклогексилизомочевине (полученной накануне из чистых 426 мг (2,07 ммоль) дициклогексилкарбодиимида, 173 мг (2,33 ммоль) трет-бутанола и 10,2 мг (103 мкмоль) хлорида меди(I)). Смесь нагревали до 50°С в течение ночи. Смесь фильтровали, растворители выпаривали и продукт выделяли с помощью HPLC. 49,7 мг (161 мкмоль; 41%) указанного в заголовке соединения получали после сушки вымораживанием.
LC-MS Rt 20.40 мин, m/z 251.9642 [M-tBu]+
6-(3-Хлор-1-пропокси)хинолин-4-карбоновая кислота (9)
42,4 мкл (67,4 мг; 430 мкмоль) 1-бром-1-хлорпропана добавляли к суспензии 23,2 мг (123 мкмоль) 6-гидроксихинолин-4-карбоновой кислоты (8) и 190 мг (1,38 мкмоль) карбоната калия в 250 мл. мкл DMF и нагревали до 60°С в течение ночи. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры, разбавляли 500 мкл воды и 500 мкл ацетонитрила перед добавлением 100 мкл 6М NaOH. Реакционную смесь очищали непосредственно с помощью HPLC (5-40%) после завершения полного гидролиза сложного эфира. После лиофилизации получали 26,45 мг (99,4 мкмоль; 81%) продукта.
1Н ЯМР (500 МГц, DMSO-d6) 13.75 (br, 0.4Н), 8.88 (d, J=4.4 Гц, 1H), 8.19 (d, J=2.0 Гц, 1H), 8.04 (d, J=9.2 Гц, 1H), 7.94 (d, J=4.4 Гц, 1H), 7.52 (dd, J=9.2, 2.0 Гц, 1H), 4.24 (t, J=5.95 Гц, 2H), 3.85 (t, J=6.5 Гц, 2H), 2.27 (m, 2H); 13C ЯМР (125 МГц, DMSO-d6) 167.6, 157.5, 147.6, 144.8, 134.0, 131.2, 125.9, 122.7, 122.2, 104.5, 64.7, 41.9, 31.6; LC-MS Rt 11.46 мин, m/z 266.0461 [M+H]+
трет-Бутил-6-(3-гидроксипропилметиламино)хинолин-4-карбоксилат
204,6 мг (664 мкмоль) трет-бутал 6-бромхинолин-4-карбоксилата, 34,10 мг (54,7 мкмоль) BINAP, 21,51 мг (23,5 мкмоль) Pd2(dba)3 и 480,3 мг (1,47 ммоль) карбоната цезия растворяли в 6 мл толуола и добавляли 128,0 мкл (118 мг; 1,32 ммоль) N-метил-1,3-пропаноламина. Смесь перемешивали при 90°С в течение ночи перед удалением растворителей, остаток суспендировали в смеси вода/ацетонитрил 1:1 и фильтровали перед очисткой с помощью HPLC. После сушки вымораживанием получали 172,7 мг (547 мкмоль; 82%) указанного в заголовке соединения.
трет-Бутил-6-(3-(4-Вос-пиперазин-1-ил)пропил-1-(метил)амино)хинолин-4-карбоксилат
62,8 мг (199 мкмоль) трет-бутил 6-(3-гидроксипропилметиламино)хинолин-4-карбоксилата растворяли в 5 мл дихлорметана и 90,0 мкл (66,6 мг; 659 мкмоль) триэтиламина. Добавляли 20,0 мкл (29,6 мг; 258 мкмоль) метансульфонилхлорида при 0°С, и реакция в смеси протекала в течение 60 мин. Перед удалением летучих веществ добавляли 194,6 мг (1,05 ммоль) 1-Вос-пиперазина. К остатку добавляли 500 мкл диметилформамида и 47,4 мг (286 мкмоль) йодида калия. Смесь встряхивали при 60°С в течение 120 минут перед выделением продукта с помощью HPLC. После сушки вымораживанием получали 81,05 мг (167 мкмоль; 84%) указанного в заголовке соединения.
LC-MS Rt 13.99 мин, m/z 485.3086 [М+Н]+
6-(3-(4-трет-Бутоксикарбонилпиперазин-1-ил)-1-пропокси)хинолин-4-карбоновая кислота(10)
15,13 мг (56,9 мкмоль) 6-(3-хлор-1-пропокси)хинолин-4-карбоновой кислоты (9), 55,43 мг (298 мкмоль) N-трет-бутоксикарбонилпиперазина и 51,05 мг (30,8 мкмоль) йодида калия в 250 мкл DMF. Реакционную смесь встряхивали при 60°С в течение ночи. Полученную суспензию разбавляли 750 мкл воды перед очисткой продукта с помощью HPLC. После сушки вымораживанием получали 28,73 мг (54,3 мкмоль; 95%) продукта в виде соответствующей соли TFA.
1Н ЯМР (500 МГц, D2O) 8.93 (d, J=5.5 Гц, 1H), 8.17 (d, J=9.3 Гц, 1H), 7.94 (d, J=5.5 Гц, 1H), 7.79 (dd, J=9.3, 2,5 Гц, 1H), 7.65 (d, J=2.5 Гц, 1H), 4.36 (t, J=5.6 Гц, 2Н), 4.27 (d, J=13.55 Гц, 2Н), 3.67 (d, J=11.95 Гц), 3.47 (t, J=15.5 Гц, 2 H), 3.27 (t, J=12.7 Гц), 3.12 (td, J=12.2, 2.65 Гц), 2.37 (m2 H), 1.47 (s, 9H); 13C ЯМР (125 МГц, D2O) 155.5, 153.5, 149.0, 141.4, 134.4, 127.9, 126.6, 122.3, 118.4, 110.0, 105.1, 82.8, 65.5, 54.3, 51.5, 48.6, 40.7, 29.6, 27.4; LC-MS Rt 10.62 мин, m/z 416.1997 [M+H]+
6-(3-(4-Вос-пиперазин-1-ил)пропил-1-(метил)амино)хинолин-4-карбоновая кислота
100,12 мг (206 мкмоль) трет-бутил 6-(3-(4-Вос-пиперазин-1-ил)пропил-1-(метил)амино)хинолин-4-карбоксилата обрабатывали 900 мкл трифторуксусной кислоты, 25 мкл триизопропилсилана. 25 мкл воды и 50 мкл трифторметансульфоновой кислоты в течение 60 мин. Соединение со снятой защитой осаждали диэтиловым эфиром, сушили и подвергали реакции с 60,83 мг (279 мкмоль) ди-трет-бутилдикарбоната и 50,0 мкл (36,5 мг; 361 мкмоль) триэтиламина в 1 мл диметилформамида в течение еще 60 мин. 55,42 мг (129 мкмоль; 65% за 2 стадии) получали после очистки с помощью HPLC и сушки вымораживанием. LC-MS Rt 10.52 мин, m/z 429.2463 [М+Н]+
(S)-N-(2-(2-Цианопирролидин-1-ил)-2-оксоэтил)-6-(3-(4-трет-бутоксикарбонилпиперазин-1-ил)-1-пропокси)хинолин-4-карбоксамид (11)
9,43 мг (24,9 мкмоль) HBTU в 50 мкл DMF добавляли к раствору 10,56 мг (19,9 мкмоль) 6-(3-(4-трет-бутоксикарбонилпиперазин-1-ил)-1-пропокси)хинолин-4-карбоновой кислоты (10), 5,38 мг (39,8 мкмоль) HOBt и 10 мкл DIPEA в 50 мкл DMF. Через 15 мин добавляли (29,9 мкмоль) (S)-1-(2-аминоацетил)пирролидин-2-карбонитрил 4-метилбензолсульфоната в 50 мкл DMF. Реакцию гасили 850 мкл воды и очищали с помощью HPLC. Сушка вымораживанием обеспечила получение 12,88 мг (19,4 мкмоль; 97%) указанного в заголовке соединения.
1H ЯМР (500 МГц, DMSO-d6) 9.04 (d, J=5.5 Гц, 1H), 8.24 (d, J=9.6 Гц, 1H), 8.10 (d, J=5.5 Гц, 1Н), 7.89 (d, J=2.3 Гц, 1H), 7.85 (dd, J=9.6, 2.3 Гц, 1H), 4.84 (t, J=6 Гц, 1 H), 4.46-4.36 (m, 4H), 4.26 (d, J=12.0 Гц, 2H), 3.83 (m, 1H), 3.67 (m, 3H), 3.47 (t, J=7.7 Гц, 2H), 3.27 (br, 2H), 3.11 (t, J=11.5 Гц), 2.37 (m, 4H), 2.22 (m, 2H), 1.46 (s, 9H); 13C ЯМР (125 МГц, DMSO-d6) 168.6, 168.0, 159.4, 155.5, 147.7, 141.8, 135.1, 128.2, 127.5, 123.1, 120.0, 119.1, 104.7, 82.9, 66.0, 54.3, 51.5, 47.0, 46.3, 42.3, 29.4, 27.4, 24.7, 23.1; LC-MS Rt 11.81 мин, m/z 551.2736 [M+H]+
(S)-N-(2-(2-Циано-4,4-дифторпирролидин-1-ил)-2-оксоэтил)-6-(3-(4-трет-бутоксикарбонил-пиперазин-1-ил)-1-пропокси)хинолин-4-карбоксамид
13,2 мг (22,4 мкмоль; 75%) получали в соответствии с предыдущим протоколом.
LC-MS Rt 11.84 мин, m/z 605.2610 [М+Н]+
N-(2-(2-циано-4,4-дифторпирролидин-1-ил)-2-оксоэтил)-6-(3-(4-Вос-пиперазин-1-ил)пропил-1-(метил)амино)хинолин-4-карбоксамид
1,17 мг (1,95 мкмоль; 92%) получали в соответствии с предыдущим протоколом.
LC-MS Rt 12,66 мин, m/z 600.3057 [М+Н]+
FAPI-02 (2)
4,85 мг (8,80 ммоль) (S)-N-(2-(2-цианопирролидин-1-ил)-2-оксоэтил)-6-(3-(4-трет-бутоксикарбонил-пиперазин-1-ил)-1-пропокси)хинолин-4-карбоксамида (11) растворяли в 1 мл ацетонитрила и добавляли 4,2 мг (22,0 мкмоль) моногидрата 4-метилбензолсульфоновой кислоты. Реакционную смесь встряхивали при 45°С в течение ночи, летучие компоненты удаляли при пониженном давлении. Остаток растворяли в 190 мкл диметилформамида и 10 мкл (7,3 мг; 72 мкмоль) триэтиламина перед добавлением 6,77 мг (12,9 ммоль) DOTA-п-нитрофенольного сложного эфира. Реакционную смесь разбавляли 1 мл воды и очищали с помощью HPLC после встряхивания в течение двух часов. После сушки вымораживанием получали 5,04 мг (6,02 мкмоль; 68%).
1Н ЯМР (600 МГц, D2O) 9.02, 8.23, 8.07, 7.87, 7.83, 4.85, 4.45, 4.41, 4.40, 4.39, 3.83, 3.67, 3.50, 3.49, 2.40, 2.38, 2.36, 2.26, 2.22, 2.16; 13С ЯМР (150 МГц, D2O) 167.9, 159.1, 147.2, 141.8, 135.4, 127.9, 127.2, 119.8, 119.0, 104.5, 65.8, 54.1, 46.8, 46.1, 42.1, 29.2, 24.5, 23.0: LC-MS Rt 8.37 мин, m/z 837.3872 [М+Н]+
FAPI-04
3,97 мг (4,55 мкмоль; 57%) получали в соответствии с предыдущим протоколом.
LC-MS Rt 8.80 мин, m/z 873.3664 [М+Н]+
FAPI-42
1,91 мг (2,47 мкмоль; 88%) получали в соответствии с предыдущим протоколом.
LC-MS Rt 9.37 мин, m/z 386.6807 [М+2Н]2+
FAPI-46
39,21 мг (44,3 мкмоль; 85%) получали в соответствии с предыдущим протоколом.
LC-MS Rt 9.03 мин, m/z 443.7196 [М+2Н]2+
1,09 мг (1,86 мкмоль) (S)-N-(2-(2-циано-4,4-дифторпирролвдин-1-ил)-2-оксоэтил)-6-(3-(4-трет-бутоксикарбонилпиперазин-1-ил)-1-пропокси)хинолин-4-карбоксамид подвергали снятию Вос-защиты с помощью способа, применяемого для FAPI-02, и подвергали реакции с 2,74 мг (5,91 мкмоль) бис((1-(2-(трет-бутокси)-2-оксоэтил)-1Н-имидазол-2-ил)метил)глицина, которые предварительно активировали 2,13 мг (5,62 мкмоль) HBTU и 2,50 мкл (1,85 мг; 14,3 мкмоль) DIPEA. После очистки с помощью HPLC и удаления растворителя остаток обрабатывали 200 мкл 2,5% трифторметансульфоновой кислоты в смеси 1:1 ацетонитрил/трифторуксусная кислота. После осаждения диэтиловым эфиром и очистки с помощью HPLC получали 1,06 мг (1,29 мкмоль; 70%) указанного в заголовке соединения.
LC-MS Rt 8.91 мин, m/z 820.2933 [М+Н]+
1,00 мкл (0,74 мг; 5,73 мкмоль) DIPEA добавляли к раствору 0,95 мг (1,16 мкмоль) FAPI-19, 0,42 мг (3,14 мкмоль) HOBt и 1,10 мг (2,89 мкмоль) HBTU в 50 мкл DMF. Через 10 мин добавляли 2,30 мг (5,34 мкмоль) II-Asn (Trt)-OtBu и оставляли для протекания реакции в течение 120 мин. трет-Бутильные защитные группы удаляли с помощью 2,5% TfOH в смеси 8:2 TFA/ацетонитрил. После очистки с помощью HPLC и сушки вымораживанием получали 0,79 мг (0,75 мкмоль; 65%) указанного в заголовке соединения. LC-MS Rt 9.23 мин, m/z 524.7100 [М+2Н]2+
1,01 мг (0,87 мкмоль; 52%) получали в соответствии с предыдущим протоколом.
LC-MS Rt 8.87 мин, m/z 583.6988 [M+2Н]2+
3,91 мг (6,66 мкмоль) (S)-N-(2-(2-циано-4,4-дифторпирролидин-1-ил)-2-оксоэтил)-6-(3-(4-трет-бутоксикарбонилпиперазин-1-ил)-1-пропокси)хинолин-4-карбоксамида подвергали депротекции в течение 30 мин с помощью 50 мкл ацетонитрила и 100 мкл трифторуксусной кислоты. После выпаривания растворителей и промывки диэтиловым эфиром предварительно инкубированную в течение 10 мин смесь 8,02 мг (9,27 мкмоль) ацетил-Cys(Trt)-Gly-Cys(Trt)-Gly-ОН, 4,31 мг (31,9 мкмоль) HOBt и 4,47 мг (11,8 мкмоль) HBTU в 150 мкл диметилформамида и 2,50 мкл (1,85 мг; 14,3 мкмоль) DIPEA добавляли к остатку и подвергали реакции в течение 120 мин. После очистки с помощью HPLC и сушки вымораживанием получали 4,66 мг (3,49 мкмоль; 52%) указанного в заголовке S-тритил-защищенного соединения. В 50 мкл ацетонитрила растворяли 3,36 мг (2,52 мкмоль) тритил-защищенного соединения. Добавляли 3 мкл триэтилсилана и 100 мкл трифторуксусной кислоты и подвергали реакции в течение 30 мин. 2,01 мг (2,36 мкмоль; 94%; 49% за две стадии) указанного в заголовке соединения получали после очистки с помощью HPLC и сушки вымораживанием.
LC-MS Rt 10.26 мин, m/z 871.2703 [M+Na]+
0,59 мг (0,60 мкмоль; 39%) получали в соответствии с предыдущим протоколом.
LC-MS Rt 10.25 мин, m/z 991.3490 [М+Н]+
0,61 мг (0,54 мкмоль; 33%) получали в соответствии с предыдущим протоколом.
LC-MS Rt 10.14 мин, m/z 1120.3884 [М+Н]+
0,79 мг (0,66 мкмоль; 34%) получали в соответствии с предыдущим протоколом.
LC-MS Rt 10.17 мин, m/z 596.7075 [М+2Н]2+
0,66 мг (1,20 мкмоль) соединения 11 обрабатывали 1,33 мг (6,96 мкмоль) моногидрата 4-метилбензолсульфоновой кислоты в 250 мкл ацетонитрила при 45°С в течение 4 часов. После удаления растворителя остаток растворяли в 95 мкл диметилформамида и 5 мкл (3,65 мг; 36,1 мкмоль) триэтиламина. Добавляли 0,54 мг (0,55 мкмоль) Atto 488 NHS-эфира в 25 мкл DMSO. Через 60 минут 0,49 мг (0,43 мкмоль; 78%) указанного в заголовке соединения выделяли с помощью HPLC и сушили вымораживанием.
LC-MS Rt 10.19 мин, m/z 1022.2706 [М]+
10,95 мг (18,7 мкмоль) (S)-N-(2-(2-циано-4,4-дифторпирролидин-1-ил)-2-оксоэтил)-6-(3-(4-трет-бутоксикарбонилпиперазин-1)-ил)-1-пропокси)хинолин-4-карбоксамида подвергали депротекции в течение 30 мин с помощью 100 мкл ацетонитрила и 200 мкл трифторуксусной кислоты. После выпаривания растворителей и промывания диэтиловым эфиром добавляли 15,02 мг (9,27 мкмоль) N,N,N-триметил-5-((2,3,5,6-тетрафторфенокси)карбонил)пиридин-2-аминия хлорида и смесь растворяли в 200 мкл диметилформамида и 10,0 мкл (7,30 мг; 72,3 мкмоль) триэтиламина. Через 120 мин смесь очищали с помощью HPLC и после сушки вымораживанием получали 11,24 мг (14,7 мкмоль; 79%) указанного в заголовке соединения.
LC-MS Rt 9.37 мин, m/z 649.2892 [M-CF3CO2]+
9,80 мг (12,6 мкмоль; 70%) получали в соответствии с предыдущим протоколом.
LC-MS Rt 9.28 мин, m/z 662.3237 [M-CF3CO2]+
Общее присоединение Fmoc-аминокислот с защищенными боковыми цепями
(S)-N-(2-(2-Циано-4,4-дифторпирролидин-1-ил)-2-оксоэтил)-6-(3-(4-(γ,γ-ди-трет-бутил)-L-карбокси-глутамилпиперазин-1-ил)-1-пропокси)хинолин-4-карбоксамид
14,04 мг (23,9 мкмоль) (S)-N-(2-(2-циано-4,4-дифторпирролидин-1-ил)-2-оксоэтил)-6-(3-(1-трет-бутоксикарбонил-пиперидин)-4-ил)-1-пропокси)хинолин-4-карбоксамид растворяли в 50 мкл ацетонитрила и 100 мкл трифторуксусной кислоты. Через 10 мин летучие вещества удаляли; остаток промывали диэтиловым эфиром. К высушенному остатку добавляли раствор 14,95 мг (28,4 мкмоль) Fmoc-L-Gla(tBu)2-OH, 7,74 мг (57,4 мкмоль) HOBt, 13,46 мг (35,5 мкмоль) HBTU и 20,0 мкл (14,8 мг; 115 мкмоль) DIPEA в 200 мкл диметилформамида. Через 60 мин добавляли 50,0 мкл (50,4 мг; 578 мкмоль) морфолина и продукт выделяли с помощью HPLC через 30 мин. После сушки вымораживанием получали 15,95 мг (20,7 мкмоль; 86%) указанного в заголовке соединения.
LC-MS Rt 12.85 мин, m/z 772.3643 [М+Н]+
3,37 мг (4,37 мкмоль) (S)-N-(2-(2-циано-4,4-дифторпирролидин-1-ил)-2-оксоэтил)-6-(3-(4-(γ,γ-ди-трет-бутил)-1-карбоксиглутамилпиперазин-1-ил)-1-пропокси)хинолин-4-карбоксамид и 4,52 мг (10,7 мкмоль) NOTA-п-нитрофенола растворяли в 100 мкл диметилформамида и 10,0 мкл (7,30 мг; 72,3 мкмоль) триэтиламина. После очистки с помощью HPLC и сушки вымораживанием промежуточное соединение подвергали депротекции путем инкубации в течение 60 мин в растворе 50 мкл ацетонитрила, 100 мкл трифторуксусной кислоты, 2,5 мкл триизопропилсилана и 2,5 мкл воды. После очистки с помощью HPLC и сушки вымораживанием получали 2,62 мг (2,77 мкмоль; 63%).
LC-MS Rt 9.38 мин, m/z 945.3668 [М+Н]+
3,23 мг (3,06 мкмоль; 73%) получали в соответствии с общим протоколом модификации активного сложного эфира. Примечание: трет-бутильные защитные группы удаляли после радиофторирования, очистки с помощью HPLC и выпаривания растворителей путем обработки чистым TFA при 95°С в течение 3 минут с последующей обработкой SPE.
LC-MS Rt 16.02 мин, m/z 1219.5858 [М+Н]+
2-(2-(4,7,10-трис(2-(трет-бутокси)-2-оксоэтил)-1,4,7,10-тетраазациклододекан-1-ил)ацетокси)уксусная кислота
28,99 мг (50,6 мкмоль) трис-tBu-DOTA, 90,65 (278 мкмоль) карбоната цезия и 10,28 мкл (15,0 мг; 65,5 мкмоль) бензил-2-бромацетата суспендировали в 300 мкл диметилформамида и встряхивали в течение 2 ч. Продукт выделяли с помощью HPLC, сушили вымораживанием и растворяли в 25 мл 10% уксусной кислоты в метаноле. Добавляли 50 мг 10% Pd/C и водород (давление окружающей среды). Через 2 часа растворители удаляли и указанное в заголовке соединение выделяли с помощью HPLC. После сушки вымораживанием получали 25,19 мг (39,9 мкмоль; 79%) указанного в заголовке соединения.
LC-MS Rt 14.14 мин, m/z 631.4784 [М+Н]+
2,00 мг (3,41 мкмоль) (S)-N-(2-(2-циано-4,4-дифторпирролидин-1-ил)-2-оксоэтил)-6-(3-(1-трет-бутоксикарбонил-пиперидин-4-ил)-1-пропокси)хинолин-4-карбоксамида растворяли в 50 мкл ацетонитрила и 100 мкл трифторуксусной кислоты. Через 10 мин летучие вещества удаляли; остаток промывали диэтиловым эфиром. 4,20 мг (6,60 мкмоль) 2-(2-(4,7,10-трис(2-(трет-бутокси)-2-оксоэтил)-1,4,7,10-тетраазациклододекан-1-ил)ацетокси)уксусной кислоты и 3,35 мг (8,84 мкмоль) HBTU растворяли в 100 мкл диметилформамида и к высушенному остатку добавляли 10,0 мкл (7,40 мг; 57,4 мкмоль) DIPEA, и подвергали реакции в течение 60 мин. После очистки HPLC и сушки вымораживанием получали 2,26 мг (2,06 мкмоль; 60%) указанного в заголовке соединения.
LC-MS Rt 12.98 мин, m/z 1099.7481 [М+Н]+
2,26 мг (2,06 мкмоль) tBu-FAPI-79 растворяли в 25 мкл ацетонитрила и 100 мкл трифторуксусной кислоты и встряхивали при 35°С в течение 30 мин. После выпаривания растворителей продукт выделяли с помощью HPLC. После сушки вымораживанием получали 1,58 мг (1,70 мкмоль; 82%) указанного в заголовке соединения.
LC-MS Rt 8.84 мин, m/z 466.2737 [М+2Н]2+
Анализ соединений
Обращенно-фазовую высокоэффективную жидкостную хроматографию (RP-HPLC) выполняли с использованием линейных градиентов ацетонитрила в воде (0-100% ацетонитрила за 5 минут; 0,1% TFA; скорость потока 2 мл/мин) на колонке Chromolith Performance RP-18e (100×3 мм, Merck KGaA Darmstadt, Germany). УФ-поглощение определяли при 214 нм. Дополнительный γ-детектор использовали для HPLC-анализа радиоактивных соединений. Определение характеристик HPLC-MS проводили на масс-спектрометре ESI (Exactive, Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, USA), подключенном к системе HPLC Agilent 1200 с колонкой Hypersil Gold C18 1,9 мкм (200×2,1 mm; 0-100% ацетонитрила за 20 мин; скорость потока 200 мкл/мин). Аналитическую Radio-HPLC выполняли с использованием колонки Chromolith Performance RP-18e (100×3 мм; Merck; 0-30% ацетонитрила за 10 мин; скорость потока 2 мл/мин). Очистки методом HPLC выполняли на системе LaPrep PI 10 (Knauer, Berlin, Germany) и на колонке Reprosil Pur 120 (C18-aq 5 мкм 250×25 мм; Dr. Maisch, Ammerbuch-Entringen, Germany). Градиент вода/ацетонитрил (15 или 25 мин; 0,1% TFA; скорость потока 20 мл/мин) был изменен для отдельных продуктов.
Радиационная химия
Радиоактивный йод (I-125) приобретали у фирмы Hartmann Analytik (Gottingen, Germany); радиоактивный лютеций (Lu-177) получали от фирмы ITG (Munchen, Germany); радиоактивный галлий (Ga-68) элюировали из генератора Ge-68/Ga-68, приобретенного у фирмы Themba Labs (Somerset West, South Africa). Tc-99m элюировали с помощью генератора Mo-99/Tc-99m (Curium Pharma, Berlin, Germany). Cu-64 получали от фирмы UKT Tubingen (Tubingen, Germany). Sm-153 получали от фирмы DSD Pharma (Purkersdorf, Austria). Pb-203 получали от фирмы Lantheus (N. Billerica MA, USA). F-18-FDG и F-18-фторид получали от фирмы ZAG Zyklotron AG (Eggenstein, Germany). Набор CRS для трикарбонила получали от фирмы Paul Scherrer Institut (Villingen-PSI, Switzerland).
Для йодирований 10 мкл оловоорганического прекурсора FAPI-01 (1 мкмоль/мл в этаноле) разбавляли 10 мкл 1М HCl и 10 мкл воды перед добавлением 1-20 МБк йода-125 в 0,05М NaOH. Реакцию начинали с добавления 5 мкл свежеприготовленного 1,9% раствора перуксусной кислоты в ледяной уксусной кислоте. Через 60 сек добавляли 15 мкл 1М NaOH и реакцию гасили добавлением 5 мкл 5% аскорбиновой кислоты в воде перед очисткой с помощью HPLC. Полученный раствор непосредственно использовали для экспериментов in vitro или выпаривали до сухого состояния при пониженном давлении и поглощали в 0,9% NaCl (Braun, Melsungen, Germany) в случае исследований на животных.
Мечение DOTA-соединений Cu-64, Lu-177 и Pb-203 проводили путем добавления 5 МБк радионуклида к 100 мкл 10 мкМ раствора индивидуального прекурсора в 0,1М NaOAc (рН 5) и инкубации при 95°С в течение 10 мин. Раствор непосредственно использовали для экспериментов in vitro или разбавляли 0,9% NaCl (Braun, Melsungen, Germany) в случае исследований биораспределения. Для визуализации на мышах (сцинтиграфия, PET) радиоактивный индикатор обрабатывали методом твердофазной экстракции (sep-pak light С18, Waters).
Мечение Тс(I) выполняли путем добавления 1 мл Тс-99m-пертехнетата в 0,9% солевом растворе в набор CRS Kit и инкубации в течение 20 мин. После охлаждения до комнатной температуры добавляли смесь 25,0 мкл прекурсора (1 мМ в воде), 150 мкл фосфатного буфера (0,4М, рН 7,4) и 240 мкл хлористоводородной кислоты (1,0М), и конечную смесь, при необходимости, доводили до рН 5. Реакцию проводили при 95°С в течение 20 минут и обрабатывали путем твердофазной экстракции (sep-pak light CI8, Waters). Для экспериментов in vivo и исследований на животных мечение проводили с помощью одной пятой реагентов и 200 мкл раствора CRS Kit после восстановления Tc(VII).
Мечение Tc(V) выполняли путем инкубации 30 мкл раствора SnCh, содержащего 200 мМ глюкогептоната, с 200 мкл Тс-99m-пертехнетата в 0,9% солевом растворе в течение 10 мин при комнатной температуре. Добавляли 5,00 мкл прекурсора (1 мМ в воде) и 3,75 мкл раствора гидроксида натрия (0,1М в воде), и конечная смесь реагировала при 95°С в течение 20 мин. Для визуализации на мышах (сцинтиграфия) радиоактивный индикатор обрабатывали путем твердофазной экстракции (sep-pak light C18, Waters).
Мечение Ga-68 для исследований на животных выполняли путем инкубации 255 мкл элюата генератора (0,6М HCl; приблизительно 230 МБк) со смесью 1 нмоль DOTA-прекурсора, 1 мкл 20% аскорбиновой кислоты в воде и 72 мкл NaOAc (2,5 М) при 95°С в течение 10 мин. Оставшуюся свободную радиоактивность удаляли путем разбавления 2 мл воды, твердофазной экстракциии (sep-pak light С18, Waters), промывания 2 мл воды и элюирования продукта 1 мл воды/этанола 1:1. Полученный раствор выпаривали до сухого состояния при пониженном давлении и остаток поглощали в 0,9% NaCl (Braum).
Для образования комплексов AlF-NOTA фторид F-18 улавливали на картридже Waters Sep-Pak QMA Plus Light (46 мг сорбента; предварительно кондиционировали 0,5М NaOAc, рН 3,9), промывали водой и элюировали 500 мкл 0,1М NaOAc (рН 3,9). Для исследований на животных 150 мкл элюата предварительно инкубировали с 2 мкл раствора AlCl3 (10 мМ в воде) и 50 мкл DMSO. Через 5 мин к смеси добавляли 40 нмоль NOTA-прекурсора (10 мкл 4 мМ раствора в воде) и 1 мкл 20% аскорбиновой кислоты в воде. Раствор реагировал при 95°С в течение 15 мин. Продукт выделяли с помощью HPLC (0-20% ацетонитрила за 10 мин), освобождали от растворителей и поглоащли в 0,9% солевом раствор перед инъекцией.
Для образования 6-фтороникотинамидов фторид F-18 улавливали на картридже Waters Sep-Pak QMA Plus Light (46 мг сорбента; предварительно кондиционировали 0,5М КНСО3), промывали водой, сушили и элюировали смесью 7,50 мг (19,9 мкмоль) cryptofix 222, 1,99 мг (1,99 мкмоль) КНСО3 в 450 мкл ацетонитрила и 50 мкл воды. После удаления растворителя остаток сушили путем азеотропной перегонки с 3×1 мл ацетонитрила. Остаток поглощали в 100 мкл смеси 1:1 трет-бутанол/ацетонитрил и добавляли к 1 мг (приблизительно 1,3 мкмоль) прекурсора триметилпиридин-2-аминия. Раствор реагировал при 75°С в течение 10 мин. Продукт выделяли с помощью HPLC (0-30% ацетонитрила за 10 мин), освобождали от растворителей и поглощали в 0,9% солевом растворе перед инъекцией.
Альтернативно, 6-фтороникотинамиды синтезировали путем улавливания фторида F-18 на картридже Waters Sep-Pak QMA Plus Light (46 мг сорбента; предварительно кондиционировали 0,5М КНСО3), промывали ацетонитрилом, сушили и элюировали 0,5 мг (приблизительно 0,4-0,6 мкмоль) (защищенного) FAPI-прекурсора в 0,5 мл метанола. Растворитель удаляли в вакууме, а остаток поглощали в 100 мкл смеси 1:4 ацетонитрил/трет-бутанол. Через 20 мин при 70°С реакционную смесь разбавляли водой и защищенные промежуточные соединения обрабатывали твердофазной экстракцией (sep-pak light CI8, Waters). Растворители удаляли и к остатку добавляли 200 мкл трифторуксусной кислоты. Смесь нагревали до 95°С в течение 3 мин, сушили в вакууме и разбавляли водой перед выделением продукта с помощью HPLC, которую проводили непосредственно с разбавленной реакционной смесью в случае соединений, лишенных защитных групп. В случае исследований на животных продукты освобождали от растворителей и помещали в 0,9% солевой раствор перед инъекцией. (Нескорректированный радиохимический выход приблизительно 25%.)
Для определения стабильности в сыворотке человека радиоактивно меченные соединения (приблизительно 2,5 МБк для I-125 или 15 МБк для Lu-177) очищали (HPLC или твердофазная экстракция) и освобождали от растворителя. Остатки помещали в 250 мкл человеческой сыворотки (Sigma-Aldrich) и инкубировали при 37°С. Образцы осаждали 30 мкл ацетонитрила и анализировали с помощью HPLC (0-30% ацетонитрила за 10 мин).
Пример 2: Характеристика производных FAPI in vitro
Исследования связывания in vitro проводили с использованием линий опухолевых клеток человека ВхРС3, Capan-2, MCF-7 (приобретенных у Sigma Aldrich Chemie GmbH) и SK-LMS-1 (приобретенной у АТСС), а также стабильно трансфицированных FAP-клеточных линий HT-1080-FAP, HEK-muFAP, и CD26-экспрессирующей линии клеток HEK-CD26 (полученной от Stefan Bauer, NCT Heidelberg). Все клетки культивировали в среде Игла, модифицированной Дульбекко (DMEM), содержащей 10% фетальной телячьей сыворотки, при 37°С/5% диоксид углерода. Для экспериментов по флуоресценции после интернализации клетки высевали на покровные стекла и окрашивали FAPI-02-Atto488 и DAPI для окрашивания ядра клетки. Изображения получали на лазерном сканирующем конфокальном микроскопе с иммерсионным объективом 63х. Исследования связывания радиолиганда проводили с использованием клеток HT-1080-FAP. Радиоактивно меченное соединение добавляли к культуре клеток и инкубировали в течение различных интервалов времени от 10 мин до 24 ч. Конкурентные эксперименты проводили путем одновременного подвергания воздействию немеченого (от 10-5 М до 10-9 М) и радиоактивно меченного соединения в течение 60 мин. Для экспериментов с оттоком радиоактивную среду удаляли после инкубации в течение 60 мин и заменяли нерадиоактивной средой на интервалы времени от 1 до 24 ч. Для экспериментов по интернализации активность, связанную с поверхностью, удаляли путем инкубации клеток с 1М глицин-HCl буфером в течение 10 мин. Радиоактивность измеряли с помощью γ-счетчика, нормировали на 1 млн клеток и рассчитывали как процент от примененной дозы (% ID).
Окрашивание клеток и микроскопия
Для экспериментов по интернализации клетки HT-1080-FAP и НЕК muFAP высевали на покровные стекла без покрытия в 24-луночный планшет и культивировали в культуральной среде, содержащей 10% фетальной телячьей сыворотки, до конечного слияния приблизительно 80-90%. Среду удаляли, и клетки промывали 2 раза 0,5 мл PBS рН 7,4. К клеткам добавляли FAPI-02-Atto488 (20 мкМ в DMEM) и инкубировали в течение 2 ч при 37°С. Клетки промывали 3 раза 0,5 мл PBS рН 7,4 и фиксировали параформальдегидом (2% в PBS) в течение 15 мин. Разросшиеся покровные стекла помещали на предметные стекла микроскопа, используя среду для закрепления, содержащую DAPI, для окрашивания ядер клеток (Fluoroshield, Sigma-Aldrich). Изображения получали на лазерном сканирующем конфокальном микроскопе (Zeiss LSM 700; Zeiss, Oberkochen, Germany) с использованием иммерсионного объектива Zeiss Plan-Apochromat 63х/1.4 Oil DIC III с настройками ху пикселей 0,099×0,099 мкм и размером точечного отверстия в 1 единицу Эйри для каждого используемого флуорофора (488 нм для FAPI-02-Atto488, 405 нм для DAPI). Изображения обрабатывали последовательно с помощью программного обеспечения ZEN 2008 и ImageJ.
Исследования связывания радиолигандов
Для исследований связывания радиолигандов клетки высевали в 6-луночные планшеты и культивировали в течение 48 ч до конечного слияния приблизительно 80-90% (1,2-2 млн клеток/лунку). Среду заменяли 1 мл свежей среды без фетальной телячьей сыворотки. Радиоактивно меченное соединение добавляли к культуре клеток и инкубировали в течение различных интервалов времени от 10 мин до 24 ч. Конкурентные эксперименты проводили путем одновременного подвергания воздействию немеченого (от 10-5 М до 10-9 М) и радиоактивно меченного соединения в течение 60 мин. Для экспериментов с оттоком радиоактивную среду удаляли после инкубации в течение 60 мин и заменяли нерадиоактивной средой на интервалы времени от 1 до 24 ч. Во всех экспериментах клетки промывали 2 раза 1 мл фосфатно-буферного солевого буфера с рН 7,4 и затем лизировали 1,4 мл буфера для лизиса (0,3M NaOH, 0,2% SDS). Радиоактивность определяли с помощью γ-счетчика (Cobra II, Packard), нормализовали на 1 млн клеток, и рассчитывали как процент от примененной дозы (% ID). Каждый эксперимент проводили 3 раза, и было получено 3 повтора для каждого независимого эксперимента.
Для экспериментов по интернализации клетки инкубировали с радиоактивно меченным соединением в течение 60 мин при 37°С и 4°С. Поглощение клетками прекращали путем удаления среды из клеток и промывки 2 раза 1 мл PBS. Затем клетки инкубировали с 1 мл глицин-HCl (1М в PBS, рН 2,2) в течение 10 мин при комнатной температуре для удаления поверхностно-связанной активности. Клетки промывали 2 мл ледяного PBS и лизировали 1,4 мл буфера для лизиса для определения интернализованной фракции. Для клеток, инкубированных при 4°С, все стадии промывки и элюирования выполняли с использованием ледяных буферов. Радиоактивность измеряли с помощью γ-счетчика, нормализовали на 1 млн клеток и рассчитывали как процент от примененной дозы (% ID).
FAPI-01 избирательно нацелен на человеческий и мышиным FAP-α
Для анализа свойств связывания FAPI-01 с его белком-мишенью выполняли анализы связывания с радиолигандом с использованием различных линий раковых клеток и линий клеток, трансфицированных человеческим и мышиным FAP, а также близкородственным мембранным белком CD26, также известным как DPPIV. Как мышиный FAP, так и CD26 показали высокую гомологию с человеческим FAP-α (muFAP: 90% идентичности и 94% сходства на аминокислотном уровне; CD26: 52% идентичности и 71% сходства с высоким структурным сходством) (Kelly Т., Drug Resist Updat, 2005).
Как показано на фигуре 1А, FAPI-01 не показал значительного связывания с FAP-отрицательными линиями раковых клеток, при этом направленно воздействуя на человеческие и мышиные FAP-α-экспрессирующие клетки с высокой аффинностью (IC50 человеческого FAP-α=39,4 нМ). Кроме того, не наблюдалось существенного связывания с СВ26-экспрессирующими клетками (0,05±0,01%), подтверждая, что FAPI-01 избирательно нацеливается на FAP-α. Это особенно важно, поскольку CD26 на высоком уровне экспрессируется в различных нормальных тканях, включая почки, печень и тонкий кишечник. Чтобы избежать высокого фонового сигнала из-за неспецифического CD26-связывания, высокая селективность лиганда к FAP-α является большим преимуществом, что обеспечивает оптимальное качество изображения.
FAPI-01 быстро интернализуется в FAP-положительные клетки, но демонстрирует зависимый от времени эффлюкс и устойчивое дейодирование.
Анализы интернализации на основе клеток демонстрируют быстрое поглощение FAPI-01 клетками (фигура 1В). Через 10 мин инкубации 95% всей связанной фракции находится внутриклеточно (всего 19,70±0,28%). В течение 4 ч наблюдается лишь незначительное снижение активности (всего 17,00±0,40%, из которых интернализовано 94%).
Меченные йодом соединения часто проявляют зависимое от времени ферментативное дейодирование. Это также наблюдалось для FAPI-01, что приводило к низкой внутриклеточной радиоактивности этого соединения после более продолжительного времени инкубации (3,25±0,29% через 24 ч). Дейодирование можно свести к минимуму за счет снижения активности дейодиназы после снижения температуры до 4°С, что приводит к повышению радиоактивности на 26,66±1,59% через 24 ч.
FAPI-02 демонстрирует повышенное связывание и захват FAP-α человека по сравнению с FAPI-01.
Для того чтобы избежать быстрой потери активности FAPI-01 из-за ферментативного дейодирования, было разработано негалогеновое производное FAPI-02, в котором FAP-связывающий фрагмент химически связан с хелатирующим агентом DOTA. Помимо повышения стабильности, эта модификация дает возможность легко включать диагностические или терапевтические радионуклиды, что позволяет использовать FAPI-02 в качестве тераностического соединения. Подобно своему йодированному аналогу, FAPI-02 специфически связывается с клетками, экспрессирующими человеческий и мышиный FAP-α (IC50 человеческого FAP-α=21 нМ), не обращаясь к CD26 (%ID=0,13±0,01%; фигура 1А). FAPI-02 быстро интернализируется в FAP-α-экспрессирующие клетки (20,15±1,74% ID через 60 мин, из которых 96% интернализовано; фигура 1 В), демонстрируя более стабильные и более высокие скорости захвата с течением времени. По сравнению со связыванием FAPI-01 после 10 мин инкубации, только 5% активности сохраняется через 24 ч. Напротив, 34% исходной радиоактивности FAPI-02 детектируется через 24 ч инкубации. Эксперименты с эффлюксом продемонстрировали, что FAPI-02 удаляется значительно медленнее, чем FAPI-01, показывая удерживание 12% от первоначально накопленной радиоактивности через 24 ч (FAPI-01 1,1% ID через 24 ч; фигура 1Е).
Устойчивая интернализация FAPI-02 в клетки, экспрессирующие FAP-α человека и мыши, подтверждалась с помощью флуоресцентной лазерной сканирующей микроскопии. С этой целью клетки HT-1080-FAP и HEK-muFAP окрашивали флуоресцентно меченным производным FAPI-02 (FAPI-02-Atto488) в течение 1-2 ч. Как показано на фигуре 1D, соединение полностью интернализовалось и накапливалось внутри FAP-α-экспрессирующих клеток, тогда как в FAP-α-отрицательных клетках HEK-CD26 поглощение не было детектировано.
Дизайн производных FAPI с улучшенными связывающими свойствами и фармакокинетикой
Дополнительные варианты FAPI-02 конструировали для увеличения времени удерживания в опухоли с целью разработки тераностического нацеленного на FAP агента. Варианты FAPI-03-FAPI-15 охарактеризованы в отношении связывания с мишенью, скорости интернализации и специфичности к мишени. Результаты показаны на фигуре 2.
Пример 3: РЕТ-визуализация и анализ биораспределения у мышей
Все эксперименты проводились в соответствии с немецкими законами о защите животных и правилами Европейской комиссии по уходу и использованию лабораторных животных. Мышей анестезировали ингаляцией изофлураном.
Для экспериментов in vivo 8-недельным мышам BALB/c пи/пи (Charles River) подкожно инокулировали в правый ствол 5×106 клеток HT-1080-FAP, Сарап-2 или SK-LMS-1, соответственно. Когда размер опухоли достигал приблизительно 1 см3, через хвостовую вену вводили радиоактивно меченное соединение (~10 МБк для РЕТ-визуализации мелких животных; ~1 МБк для распределения по органам). РЕТ-визуализацию выполняли в течение 140 минут после внутривенной инъекции 1 МБк меченного Ga-68 соединения на мышь с использованием РЕТ-сканера для мелких животных Inveon (Siemens). Изображения реконструировали итеративно с использованием метода 3D-OSEM+MAP и преобразовывали в изображение стандартизованного поглощения (SUV). Количественную оценку проводили с использованием метода ROI и выражали в виде среднего значения SUV. Для распределения в органах меченного Lu-177 соединения (приблизительно 10 МБк на мышь), животных (n=3 для каждого момента времени) умерщвляли через указанные моменты времени (от 30 минут до 24 ч). Распределенную радиоактивность измеряли во всех вырезанных органах и в крови с использованием гамма-счетчика (Cobra Autogamma, Packard). Значения выражены в виде процента от введенной дозы на грамм ткани (% ID/г).
Для фармакокинетического моделирования константу переноса К1 и константы скорости k2-k4 рассчитывали с использованием модели двух тканевых компартментов, реализованной в программе PMOD [4], с учетом сосудистой фракции (vB), которая связана с объемом крови, обменивающимся с тканью в VOL Константы скорости, которые описывают компартментные потоки, включают k1 (связывание с рецептором), k2 (открепление), а также k3 (интернализацию) и k4 (эффлюкс) в ткани опухоли. В этой модели фракционный объем распределения (DV=К1/k2) представляет собой долю представляющей интерес области, в которой распределяется 15O-меченая вода.
Варианты FAPI накапливаются в человеческих FAP-экспрессирующих ксенотрансплантатах, а также в ксенотрансплантатах без экспрессии FAP путем рекрутинга и активации мышиных фибробластов
Накопление FAPI-02 и -04 в опухоли оценивали методом PET-визуализации мелких животных мышей, несущих ксенотрансплантаты как FAP-положительных, так и отрицательных опухолевых клеток человека. В обоих случаях радиоактивный индикатор быстро накапливался в опухоли и сохранялся в течение по меньшей мере 140 мин (фигура 3А, С, Е, G). В то же время FAPI-02 и -04 показали пренебрежимо низкое неспецифическое связывание и быстро выводились из крови, преимущественно через почки и мочевой пузырь, что привело к низкому фону и благоприятным соотношениям опухоль-орган. Одновременное введение немеченого соединения в качестве конкурента привело к полному отсутствию радиоактивности в опухоли, демонстрируя специфичность радиоактивного индикатора по отношению к его белку-мишени (фигура 4). Интересно, что высокое поглощение опухолью FAPI-02 наблюдалось у мышей, несущих FAP-α-положительные (HT-1080-FAP), а также FAP-α-отрицательные (Сарап-2) линии опухолевых клеток из-за рекрутинга и активации активированных мышиных фибробластов. Фармакокинетические характеристики радиоактивного индикатора, рассчитанные на основе данных PET с использованием модели с двумя тканевыми компартментами в соответствии с Burger et al., Nucl Med, 1997, представлены в таблице 6.
Эти наблюдения подтверждали с использованием 177Lu-FAPI-02 и -04 в исследовании биораспределения, подтверждая быстрое накопление в опухоли как в FAP-α-положительных, так и отрицательных опухолях человека с очень низкой активностью во всех других органах (количественные значения поглощения см. в таблице 7), что приводит к благоприятному соотношению опухоль-орган (фигура 5D-F). Аналогичные результаты получали для 177Lu-FAPI-04 у мышей, несущих опухоль HT-1080-FAP. По сравнению с FAPI-02, FAPI-04 показывает более высокое поглощение опухолью, особенно через 24 ч (фигура 5С). Расчет площади под кривой (AUC) показан в таблице 8.
Пример 4: Клинические исследования РЕТ/СТ.
Диагностическую визуализацию более 100 пациентов выполняли в соответствии с условиями обновленной Хельсинкской декларации, § 37 (Непроверенные вмешательства в клиническую практику), и в соответствии с §13 (2b) закона Германии о фармацевтических средствах (German Pharmaceuticals Law) по медицинским показаниям с использованием 68Ga-FAPI-02 или -04, который вводили внутривенно (20 нмоль, 122-336 МБк) через 10 минут, 1 и 3 часа после введения индикатора. Вариация активности введенного радиоактивного индикатора обусловлена коротким периодом полураспада 68Ga и различной эффективностью элюирования, полученной в течение жизни генератора 68Ge/68Ga. FDG-визуализацию одного пациента проводили через 1 ч после внутривенной инъекции 358 МБк 18F-FDG. Сканирования РЕТ/СТ выполняли с помощью РЕТ/СТ-сканера Biograph mCT Flow™ (Siemens Medical Solution), используя следующие параметры: толщина среза 5 мм, шаг 3-4 мм, ядро реконструкции мягких тканей, Care Dose. Сразу же после СТ-сканирования получали PET всего тела в 3D (матрица 200×200) в FlowMotion™ со скоростью 0,7 см/мин. Данные по излучению скорректировали на случайность, разброс и затухание. Реконструкцию проводили с помощью алгоритма максимизации ожидания OSEM с 2 итерациями/21 подмножеством и с использование фильтра Гаусса до трансаксиального разрешения 5 мм при полной ширине на половине максимума (FWHM). Коррекцию ослабления проводили с использованием данных КТ с низкой дозой без усиления. Количественную оценку стандартизованных значений поглощения (SUV) проводили с использованием метода области интереса исследования.
FAPI-02 и -04 быстро накапливаются в метастазах рака молочной железы, поджелудочной железы, легких, HNO, тонкой кишки и яичников у людей.
Диагностическое сканирование РЕТ/СТ выполняли через 1 ч после внутривенного введения 68Ga-FAPI-02 и -04 пациентам с метастазирующим раком молочной железы, легких, поджелудочной железы, HNO, тонкой кишки и яичников. У всех пациентов наблюдалось устойчивое накопление индикатора в первичной опухоли, а также в лимфатических узлах и метастазах в кости с максимальными значениями SUV 48,0. Напротив, поглощение индикатора в нормальные ткани было очень низким (фигуры 6-14). Радиоактивность быстро очищалась из кровотока и выводилась преимущественно через почки, что давало высококонтрастные изображения. Сравнительная визуализация у одного пациента с местнораспространенной аденокарциномой легкого показала очевидное преимущество FAPI-02 по сравнению с обычно используемым РЕТ-индикатором 18F-FDG. Как показано на фигуре 9, FAPI-02 показал более высокое поглощение при более низкой фоновой активности, что приводит к более высокому контрасту с лучшей видимостью метастатических поражений. В отличие от FDG, который на высоком уровне накапливается в клетках с высоким потреблением глюкозы, например, в головном мозге, FAPI-02 избирательно нацеливается на ткани, в которых экспрессируется FAP-α. Сравнительная визуализация у одного пациента с раком предстательной железы выявила очевидное преимущество FAPI-04 по сравнению с обычно используемыми РЕТ-индикаторами 68Ga-DOTATOC и 68Ga-PSMA, что позволяет детектировать опухолевые поражения меньшего размера с уменьшенным накоплением индикаторов в почках (фигура 14).
Обсуждение
Надежный диагноз первичных опухолей, метастатических поражений и пораженных лимфатических узлов имеет первостепенное значение для эффективного и адекватного планирования терапии, включая определение стадии опухоли и выбор лечения. С этой целью методы визуализации представляют незаменимые инструменты для оценки многих типов рака. Благодаря высокой диагностической точности и возможности оценить как анатомические, так и физиологические детали, комбинированная РЕТ/СТ является методом выбора для современной диагностики опухолей. Однако, в отличие от неинвазивных методов визуализации, таких как взятых в отдельности MRI или СТ, комбинированная РЕТ/СТ требует использования радиоактивных индикаторов с высоким сродством к структурам-мишеням с повышенной экспрессией в опухолях по сравнению с нормальными тканями. Идеальный индикатор должен специфически связываться со своим белком-мишенью, чтобы гарантировать надежную дифференциацию злокачественной и здоровой ткани, а также низкие фоновые сигналы, что приводит к получению высококонтрастных изображений. Аффинность и специфичность становятся еще более важными, если радиоактивный индикатор представляет тераностическое соединение, то есть дает возможность быть нагруженным либо диагностическими, либо терапевтическими нуклидами, что облегчает и улучшает таргетное и персонализированное лечение. Что касается потенциального применения индикатора в терапевтических целях, высокая специфичность к мишеням обеспечивает снижение побочных эффектов, что особенно важно для защиты чувствительных к излучению тканей, таких как костный мозг, репродуктивные органы и органы пищеварения.
В этой связи авторы изобретения разработали тераностический индикатор, нацеленный на ассоциированные с раком фибробласты, которые образуют основной компонент стромы опухоли. Известно, что они играют решающую роль в росте, миграции и прогрессировании опухоли и генетически более стабильны, чем раковые клетки, поэтому менее подвержены развитию терапевтической устойчивости. В отличие от нормальных фибробластов CAF экспрессируют определенные белки, которые можно использовать в качестве опухолеспецифических маркеров. Среди них мембранный белок FAP-α, который широко экспрессируется в микроокружении различных опухолей и, таким образом, позволяет нацеливаться на различные опухолевые образования, включая злокачественные опухоли поджелудочной железы, молочной железы и легких, которые составляют большую часть всех солидных опухолей.
На основе низкомолекулярного ингибитора фермента с высоким сродством к его белку-мишени авторы изобретения разработали радиоактивные индикаторы FAPI-01-FAPI-73 путем целенаправленной химической модификации. Все соединения показали специфическое связывание с человеческим и мышиным FAP-α с быстрой и почти полной интернализацией без учета тесно связанного белка CD26/DPP4. Поскольку йодированные молекулы подвергаются ферментативному дейодированию с эффлюксом свободного йода, более длительное время инкубации приводит к низкой внутриклеточной радиоактивности. По этой причине FAPI-02 и последующие соединения были сконструированы с FAP-связывающим фрагментом, химически связанным с хелатирующим агентом DOTA. В результате был получен набор тераностических соединений с благоприятными фармакокинетическими и биохимическими свойствами, из которых FAPI-02, FAPI-04, FAPI-46, FAPI-34, FAPI-42, FAPI-52, FAPI-69, FAPI-70, FAPI -71, FAP 1-72 и FAPI-73 представляют наиболее предпочтительные лиганды. FAPI-02 и FAPI-04 удаляются значительно медленнее, чем FAPI-01, с удерживанием 12% (FAPI-02) и 49% (FAPI-04) первоначально накопленной радиоактивности через 24 ч (FAPI-01 1,1%) с другими предпочтительными соединениями, имеющими еще более сильное связывание (фигура 16). Они быстро интернализуются в FAP-α-экспрессирующие клетки и демонстрируют высокие скорости поглощения опухолью как у несущих опухоль мышей, так и у пациентов с метастазирующими эпителиальными карциномами. Напротив, наблюдается отсутствие накопления в нормальной ткани и быстрое выведение из системы кроветворения, что приводит к получению высококонтрастных изображений. Устойчивую интернализацию как в человеческие, так и в мышиные FAP-α-экспрессирующие клетки подтверждали конфокальной микроскопией с использованием флуоресцентно-меченого FAPI-02. В отличие от FAP-антитела F19 первого поколения, которое обладает высоким сродством к своему белку-мишени, но не интернализуется, FAPI-02 демонстрирует полное внутриклеточное поглощение после инкубации в течение 1 ч. Механизм интернализации после связывания FAP был изучен Fischer et а1. с использованием фрагментов (Fab) антитела FAP и антимышиного антитела DyLight 549 в клетках SK-Mel-187. Инкубация при 37°С привела к интернализации комплексов FAP-антитело. Как и в случае с нашей малой молекулой, процесс интернализации происходил быстро почти с полной интернализацией. Совместную локализацию фрагментов Fab с маркером для ранних эндосом наблюдали через 20 минут и с маркером для поздних эндосом и лизосом через 40 минут. Fab-опосредованная интернализация FAP-α подавлялась ингибитором динамин-зависимого эндоцитоза, что указывает на то, что эндоцитоз происходит по динамин-зависимому механизму.
FAPI-02 и -04 быстро выводились из организма за счет почечного клиренса, не задерживаясь в почечной паренхиме. В отличие от 18F-FDG, который на высоком уровне накапливался в клетках с высоким потреблением глюкозы, включая воспалительную ткань или головной мозг, FAPI-02 избирательно накапливался в тканях, в которых экспрессировался его белок-мишень. Это открывает новые перспективы для выявления злокачественных новообразований в этих областях. Кроме того, было показано, что FAP-α экспрессируется ревматоидными миофибробластоподобными синовиоцитами у пациентов с ревматоидным артритом и остеоартритом, атеросклерозом, фиброзом, а также в ишемической ткани сердца после инфаркта миокарда. Эти наблюдения позволяют предложить применение FAPI-02 и -04 в качестве индикаторов визуализации для других показаний к применению.
Ограничивающим фактором для обнаружения опухолевых очагов является степень экспрессии FAP-α в опухоли. Это в значительной степени зависит от количества активированных фибробластов, то есть процентного содержания в строме и/или числа молекул FAP-α на фибробласт, которое может определяться микроокружением. Поскольку рост опухоли, превышающий размер 1-2 мм, по существу, требует формирования поддерживающей стромы, визуализация небольших очагов в диапазоне 3-5 мм должна быть возможна с помощью FAPI-PET/CT.
Как и в случае любого другого целевого подхода, производные FAPI достигают оптимальных результатов только в тканях с достаточно высокой экспрессией FAP-α, которая, как известно, довольно неоднородна для различных типов рака и пациентов. Помимо рака молочной железы, толстой кишки и поджелудочной железы, которые являются отличными кандидатами для визуализации FAPI, дальнейший анализ должен выяснить, являются ли другие опухолевые образования, такие как рак легких, рак головы и шеи, рак яичников или гепатомы, благоприятными мишенями.
Кроме того, экспрессия FAP-α была продемонстрирована в заживающей ране и фиброзной ткани, что следует учитывать при интерпретации радиологических результатов. Эти факты подчеркивают необходимость правильной оценки того, какие пациенты могут получить пользу от потенциальной терапии FAPI. Учитывая возможность использования диагностических или терапевтических нуклидов, FAPI-02 и -04 позволяют выполнить простую стратификацию соответствующей когорты пациентов. В любом случае уже ясно, что оба индикатора FAPI представляют идеальные кандидаты для разработки таргетного радиофармацевтического препарата. Благодаря их высокой аффинности к мишеням, быстрой интернализации в опухоли и быстрому очищению из организма они уже являются идеально подходящими для визуализации опухолей.
Пример 5: Характеристика FAPI in vitro и in vivo
Экспериментальные процедуры и клиническая оценка
Все эксперименты in vitro и in vivo, а также клиническую оценку производных FAPI выполняли, как описано выше и в соответствии с Loktev et al.1 и Lindner et al.2. Предварительная дозиметрическая оценка для FAPI-02 и FAPI-04 основывалась на данных двух пациентов, обследованных через 0,2 ч, 1 ч и 3 ч после введения индикатора с использованием программного обеспечения для дозиметрии QDOSE. Дополнительные РЕТ/СТ сканирования пациентов с опухолями проводили через 1 ч после инъекции FAPI-02 (n=25) или FAPI-04 (n=25); для 6 пациентов было доступно внутрииндивидуальное FDG-сканирование (также полученное через 1 ч после введения (p.i.)). Для нормальной ткани 16 органов в паренхиму помещали 2 см Spheric-VOI, для опухолевых очагов использовали сегментированный по пороговому значению VOI для количественной оценки SUVmean/max3.
Характеристика производных DOTA-FAPI in vitro
Для оценки связывания с мишенью и скорости интернализации производных DOTA-FAPI по сравнению с FAPI-04, Lu-177-меченые соединения инкубировали с FAP-экспрессирующими клетками НТ-1080 в течение 1, 4 и 24 ч, соответственно (фигура 16). Мембранно-связанную фракцию удаляли путем кислотного элюирования с использованием глицин-HCl при рН 2,2 с последующим щелочным лизисом клеток для определения интернализованной фракции. Как показано на фигуре 16, все производные демонстрируют более высокое связывание с клетками по сравнению с FAPI-04 со значениями связывания до 500% от соединения-лидера после 1 ч инкубации (до 750% через 4 ч).
Для оценки аффинности и специфичности мишени выполняли анализы конкурентного связывания с использованием возрастающих концентраций немеченого соединения в качестве конкурента Lu-177-меченого соединения (фигура 17; соответствующие значения IC50 указаны в таблице 9). Специфичность связывания также подтверждали в анализе связывания радиолиганда с использованием мышиных FAP- и CD26-экспрессирующих клеток HEK (фигура 18).
Распределение производных DOTA-FAPI в органах несущих опухоль мышей
Для анализа фармакокинетического профиля, а также поглощения опухолью in vivo, Lu-меченые производные DOTA-FAPI вводили внутривенно мышам, несущим опухоль HT-1080-FAP. Распределение радиоактивно меченных соединений в органах определяли ex vivo в крови, здоровых тканях и опухоли. Как показано на фигуре 19, большинство соединений продемонстрировали более высокие скорости поглощения опухолью по сравнению с FAPI-02 и FAPI-04, особенно через 24 ч после введения. Из-за повышенной липофильности некоторые радиоактивные индикаторы показали более высокую активность крови, а также повышенное удерживание в почках. Определение соотношений опухоль-кровь однако выявило явное преимущество соединений FAPI-21 и FAPI-46, которые продемонстрировали значительно более высокие соотношения, чем FAPI-04, во все исследуемые периоды времени (фигура 20).
Визуализация на мелких животных производных DOTA-FAPI у несущих опухоль мышей
На основании этих результатов проводили РЕТ-визуализацию мелких животных с использованием Ga-68-меченых производных DOTA-FAPI в течение 140 минут после внутривенного введения радиоактивных индикаторов мышам, несущим опухоль HT-1080-FAP. Благоприятные соотношения опухоль-кровь FAPI-21 и FAPI-46 привели к получению высококонтрастных изображений, обеспечивая превосходную визуализацию FAP-положительных опухолей (фигура 21). Количественный анализ накопления индикатора в опухоли, почках, печени и мышечной ткани (представленных в виде значений SUV max) выявил немного более низкую мышечную, почечную и печеночную активности FAPI-46 по сравнению с FAPI-21 (фигура 22).
Оценка биораспределения и дозиметрии FAPI-02 и FAPI-04 по сравнению с FDG у онкологических больных
Очень близко к литературным значениям для F-18-FDG, Ga-68-DOTATATE или Ga-68-PSMA-ll, исследование с использованием 200 МБк Ga-68-FAPI-02 и -04 соответствует эквивалентной дозе приблизительно 3-4 мЗв. После быстрого клиренса через почки нормальные органы демонстрируют низкое поглощение индикатора с лишь минимальными изменениями в период между 10 мин и 3 ч после введения. В FAPI-02 поглощение опухолью в период от 1 ч до 3 ч после введения снижается на 75%, тогда как удерживание опухолью немного увеличивается при использовании FAPI-04 (50% вымывание). Через 1 ч после введения оба FAPI-индикатора работают одинаково (фигура 23). По сравнению с FDG поглощение опухолью почти одинаково (среднее значение SUV max FDG 7,41; SUV max FAPI-02 7,37; n.s.); фоновое поглощение в головном мозге (11,01 против 0,32), печени (2,77 против 1,69) и слизистой оболочке полости рта/глотки (4,88 против 2,57) значительно ниже при использовании FAPI-02; другие органы не имели существенных различий между FDG и FAPI-02 (фигура 24). Для получения подробной информации и результатов см. Giesel et at.3, который включен в настоящий документ посредством ссылки.
РЕТ-изображение FAPI-04 у пациентов с различными видами рака, а также с доброкачественными новообразованиями
Помимо быстрого поглощения Ga-68-меченого FAPI-04 при различных онкологических заболеваниях, включая опухоли молочной железы, поджелудочной железы, яичников и HNO, накопление индикаторов также было продемонстрировано при карциноматозном перитоните (фигура 25А), а также при некоторых воспалительных злокачественных новообразованиях, таких как миокардит (фигура 25В) и артроз (фигура 25С). Эти результаты указывают на потенциальное применение Ga-68-меченых FAPI для обнаружения доброкачественных новообразований, которые характеризуются хроническим воспалительным процессом с рекрутингом активированных фибробластов.
РЕТ-визуализация FAPI-21 и FAPI-46 у пациентов с различными видами рака
Как показано на фигуре 26, устойчивое накопление Ga-68-меченого FAPI-21 наблюдалось при различных видах рака, включая карциному яичников, прямой кишки и мукоэпидермоидную карциному. Сходное поглощение опухолью было показано для Ga-68-меченого FAPI-46, который быстро накапливался в холангиоцеллюлярной и колоректальной карциноме, раке легкого, а также в солитарной фиброзной саркоме (фигура 27). После исследования РЕТ/СТ с использованием Ga-68-меченого FAPI-46, у двух онкологических больных был применен первый терапевтический подход с использованием Sm-153-меченого радиоактивного индикатора. Как показано на фигуре 28, устойчивое накопление индикатора в опухоли можно обнаружить в течение 20 ч после введения.
Визуализация FAPI-46-PET/CT трех пациентов с раком легких с идиопатическим легочным фиброзом показала четкое различие в накоплении индикатора в раковых и фиброзных поражениях. Как показано на фигуре 30, поглощение опухолью Ga-68-меченого FAPI-46 было значительно выше у двух пациентов (А, В), но немного ниже у одного пациента (С) по сравнению с активностью, измеренной в фиброзной ткани. Пациент, показанный на рисунке С, страдал обострением фиброза легких в сравнении с двумя случаями без обострения. Таким образом, индикатор может быть полезен для дифференциации имеющих фиброз пациентов с плохим прогнозом от пациентов с хорошим прогнозом.
Производные FAPI для радиоактивного мечения альтернативными радионуклидами, например, TC-99m, Pb-203, Cu-64 и F18
Чтобы сделать возможным использование альтернативных радионуклидов, был разработан ряд производных FAPI и охарактеризован в отношении сродства к мишени, специфичности и фармакокинетики. В некоторых из этих соединений исходный хелатор DOTA был заменен другими хелатирующими фрагментами, которые идеально подходят для включения Tc-99m (FAPI-19, -27, -28, -29, -33, -34, -43, -44, -45, -60, -61, -62). Сродство к FAP in vitro и биораспределение у мышей с ксенотрансплантатом НТ-1080-FAP показаны в качестве примера для FAPI-19 и FAPI-34. Оба соединения продемонстрировали устойчивое связывание с человеческим FAP in vitro (IC50 FAPI-19: 6,4 нМ). В отличие от FAPI-19, который показал недостаточное поглощение опухолью in vivo, а также быстрое накопление в печени из-за сдвига почек в сторону выведения из печени, FAPI-34 постоянно обогащался внутри опухоли и продемонстрировал значительно меньшее поглощение печенью (фигуры 31, 32). Первое диагностическое применение Тс-99m-меченого FAPI-34 у пациента с раком поджелудочной железы с метастазами в печень показало стабильное накопление индикатора в опухоли до 4 ч после введения. Кроме того, общая фоновая активность является сравнительно низкой, что приводит к получению высококонтрастных изображений (фигура 33). Это дает возможность широкого применения для диагностики с помощью сцинтиграфии и терапии после мечения с помощью Re-188.
Радиоактивно меченные с помощью Pb-203 производные FAPI (FAPI-04, -32, -46 и FAPI-04tcmc) показали клеточное связывание с клетками HT-1080-FAP, сопоставимое с FAPI-32 и FAPI-04tcmc, достигая наивысших значений связывания после 60 мин инкубации. (26,93±0,846 и 21,62±0,61% ID/1 млн. клеток, фигура 34А). В то время как FAPI-32 быстро удалялся из опухолевых клеток после первоначального связывания 
, FAPI-04tcmc продемонстрировал значительно более медленный эффлюкс клеток 
, но также и самое низкое сродство к FAP, как показывает конкурентный анализ (IC50=5,7 мкМ, фигура 34С). По этой причине FAPI-04 и FAPI-46, характеризующиеся оптимальным периодом полураспада и значениями IC50, были выбраны для дальнейшего анализа in vivo. Как показано на фигуре 35, оба соединения непрерывно обогащались в опухоли, демонстрируя лишь пренебрежимо низкое связывание со здоровой тканью. Сцинтиграфические данные подтверждали исследованием биораспределения, в котором оба радиоактивных индикатора продемонстрировали устойчивое поглощение опухолью, общую низкую активность в органах, а также быстрое выведение через почки (фигура 36).
Для обеспечения возможности радиоактивного мечения с использованием Cu-64 были разработаны NOTA-производные FAPI-42 и FAPI-52, которые разрабатывали и характеризовали в отношении сродства к мишени, специфичности и фармакокинетики. Как показано на фигуре 37, оба индикатора показали устойчивое связывание с клетками HT-1080-FAP до 24 ч инкубации с аналогичными значениями IC50 в нижнем наномолярном диапазоне (фигура 37А, В). Тем не менее, FAPI-42 удаляется значительно медленнее, чем FAPI-52, в результате чего рассчитанный период полувыведения in vitro составляет 12 ч (фигура 37С). Эти результаты подтверждались с помощью метода визуализации мелких животных у мышей с ксенотрансплантатом НТ-1080-FAP. Как показано на фигуре 38, оба соединения продемонстрировали устойчивое поглощение опухолью, а также быстрый клиренс из кровотока in vivo. Примечательно, что выведение почками FAPI-42 происходило значительно быстрее по сравнению с FAPI-52, при этом его опухолевая активность оставалась несколько выше в течение 2-24 ч после введения.
NOTA-производные FAPI-42 и FAPI-52 применяли для образования комплексов фторида алюминия, что позволяет получать изображения с F-18. Как показано на фигуре 39, оба соединения продемонстрировали быстрое поглощение опухолью с помощью метода визуализации мелких животных у мышей с ксенотрансплантатом НТ-1080-FAP. Хотя оба соединения в основном выводились почками, также наблюдалось элиминация с желчью. Несмотря на то, что выведение почками происходит быстрее для FAPI-52, более высокое накопление в опухоли, более длительное удерживание в опухоли и меньшая доля выведения с желчью свидетельствуют в пользу FAPI-42.
Ссылки
1 Loktev, A. et al. A new method for tumor imaging by targeting cancer associated fibroblasts. Journal of nuclear medicine: official publication, Society of Nuclear Medicine, doi:10.2967/jnumed. 118.210435 (2018).
2 Lindner, T. et al. Development of quinoline based theranostic ligands for the targeting of fibroblast activation protein. Journal of nuclear medicine: official publication, Society of Nuclear Medicine, doi: 10.2967/jnumed. 118.210443 (2018).
3 Giesel, F. et al. FAPI-PET/CT: biodistribution and preliminary dosimetry estimate of two DOT A-containing FAP-targeting agents in patients with various cancers. Journal of nuclear medicine: official publication, Society of Nuclear Medicine, doi: 10.2967/jnumed. 118.215913 (2018).
Пример 6: Характеристика FAPI in vitro и in vivo
Доклинические данные
С целью избирательного нацеливания на FAP-положительные опухоли головного мозга, первоначальные эксперименты выполняли на мышах, несущих опухоль, с использованием модели ксенотрансплантата глиобластомы человека U87MG. Накопление в опухоли и распределение в органах радиоактивно меченных FAPI-02 и -04 анализировали с помощью метода РЕТ-визуализации мелких животных, а также в исследовании биораспределения. Как показано на фигурах 40 и 41, FAPI-02 и -04 продемонстрировали быстрое поглощение опухолью и пренебрежимо низкие активности в здоровых органах и крови.
Клинические данные
Согласно классификации ВОЗ от 2016 года, глиомы подразделяются на глиомы IDH-дикого типа I-IV степени по классификации ВОЗ и IDH-мутантные глиомы II-IV степени по классификации ВОЗ. Наиболее частыми глиомами IV степени по классификации ВОЗ являются глиобластомы.
Клиническую РЕТ-визуализацию проводили у 18 пациентов с глиомой (5 IDH-мутантных глиом, 13 глиобластом IDH-дикого типа; см. таблицу 10). Как показано на фигурах 42-44, глиобластомы IDH-дикого типа и IDH-мутантные глиомы III/IV степени, но не II степени, показали повышенное поглощение индикатора. В глиобластомах наблюдались пятна с повышенным поглощением в проекции на контрастные участки.
Вывод
Повышенное поглощение индикатора в глиобластомах IDH-дикого типа и IDH-мутантных астроцитомах высокой степени злокачественности, но не в диффузных астроцитомах, может позволить провести неинвазивное различие между IDH-мутантными глиомами низкой степени злокачественности и глиомами высокой степени злокачественности, и быть полезным для последующих исследований. Гетерогенное поглощение индикаторов глиобластомами может быть полезно для планирования биопсии.
Пример 7: Характеристика FAPI in vitro и in vivo
Эксперименты по обратному захвату
Для экспериментов по обратному захвату 177Lu-меченые FAPI-04 и -46 (5 МБк/нмоль в DMEM) добавляли к клеткам HT-1080-FAP и инкубировали в течение 60 мин при 4°C и 37°C, соответственно. Радиоактивную среду удаляли и клетки дважды промывали фосфатно-буферным солевым раствором (PBS), рН 7,4. Затем добавляли нерадиоактивную среду с немеченым FAPI и без него (1 мкМ) на интервалы времени от 10 мин до 6 ч. Клетки дважды промывали PBS рН 7,4. Для удаления поверхностно-связанной активности клетки инкубировали с глицин-HCl (1M в PBS, рН 2,2) в течение 10 мин при комнатной температуре. После двукратной промывки ледяным PBS клетки лизировали 1,4 мл буфера для лизиса (0,3M NaOH, 0,2% SDS) для определения интернализованной фракции. Для клеток, инкубированных при 4°C, все стадии промывки и элюирования выполняли с использованием ледяных буферов. Радиоактивность измеряли с помощью γ-счетчика (Packard Cobra II), нормализовали на 1 млн клеток и рассчитывали в виде процента от примененной дозы (%AD; см. фигуру 47).
Анализ ингибирования активности ферментов
Для определения потенциальных ингибирующих эффектов FAPI-04 на ферментативную активность FAP проводили анализы ингибирования активности ферментов с использованием рекомбинантного белка FAP человека (1 пмоль/лунку) в 48-луночном планшете. После инкубации FAPI-04 или Talabostat (0-1000 нМ/лунку) с человеческим FAP в течение 30 мин при 37°C, добавляли флуорогенный субстрат FAP Z-GP-AMC до конечной концентрации 0-200 мкМ/лунку и инкубировали в течение 60 мин при 37°C. Ферментативную активность FAP определяли путем измерения интенсивности флуоресценции продукта реакции АМС при 360/460 нм с использованием SpectraMax М2 Plate Reader (Molecular Devices, San Jose, USA) (см. фигуру 46).
Многократное введение FAPI-04 мышам, несущим опухоль HT-1080-FAP
Для экспериментов по биораспределению 8-недельным мышам BALB/c пи/пи (Charles River) подкожно инокулировали в правый ствол 5 млн клеток HT-1080-FAP, соответственно. Когда размер опухоли достигал примерно 1 см3, радиоактивно меченное соединение инъецировали через хвостовую вену. Первой группе животных вводили однократную дозу 177Lu-FAPI-04 (2 МБк на животное), тогда как вторая группа получала две дозы по 1 МБк каждая, при этом вторую дозу вводили через 4 ч после первой инъекции. Третьей группе вводили всего три дозы, при этом начальная доза составила 1 МБк на мышь, затем 0,5 МБк через 2 ч и дополнительно 0,5 МБк через 4 ч после первой инъекции. Животных (n=3 для каждого момента времени) умерщвляли через 8 ч и 24 ч после первой инъекции. Распределенную радиоактивность измеряли во всех вырезанных органах и в крови с использованием γ-счетчика (Cobra Autogamma, Packard). Значения выражены в виде процента от введенной дозы на грамм ткани (%ID/г) (см. фигуру 48).
Пример 8: Характеристика FAPI in vitro и in vivo
Экспериментальные процедуры и клиническая оценка
Все эксперименты in vitro и in vivo, а также клиническую оценку производных FAPI выполняли, как описано в исходном документе и согласно Loktev et al.1 и Lindner et al.2
Результаты
Характеристика производных F-18-FAP I in vitro
Все эксперименты проводили аналогично FAP1-42 (мечение A1F-18) или FAPI-72 (мечение никотинамидом F-18).
Определение клиренса из пула крови
Для оценки скорости клиренса соединения значения времени полужизни рассчитывали по предполагаемому двухфазному экспоненциальному уменьшению из значений SUVmean (0,375-60 мин) сердца как представителя пула крови. Все выбранные соединения выводились очень быстро со значениями времени полужизни менее 10 мин. Расчетные значения плато, которые были выше для Ga-68-меченого FAPI-13, -21, -36, и AlF-18-меченого FAPI-74, теоретически соответствуют более высокой фракции соединения, которая не выводится из-за неспецифического связывания или остается в системном кровообращении (таблица 12). В качестве примера быстрого клиренса на фигуре 53 показаны кривые активности во времени для FAPI-04 и -46 в интервале между 0 и 15 мин.
Визуализация производных F-18-FAPI методом визуализации мелких животных у несущих опухоль мышей
На основании этих данных проводили РЕТ-визуализацию мелких животных с использованием F-18-меченых NOTA- и F-18-никотинамид-меченых производных FAPI в течение 140 мин после внутривенного введения радиоактивных индикаторов мышам, несущим опухоль HT-1080-FAP. Производные F-18-никотинамида FAPI-72, -73 и -77 показали неблагоприятное накопление в печени, а также выведение с желчью, тогда как FAPI-78 выводился почками, но не обнаруживал поглощения опухолью. В случае AlF-18-меченых производных NOTA FAPI-74 и -75 наблюдалась высокая специфичность к мишени и быстрый клиренс, что приводило к получению высококонтрастных изображений, которые обеспечивают возможность превосходной визуализации FAP-положительных опухолей (фигура 50).
Распределение по органам производных F-18-FAPI у несущих опухоль мышей
Для анализа фармакокинетического профиля, а также поглощения опухолью in vivo, AlF-18-меченый FAPI-75 вводили внутривенно мышам, несущим опухоль НТ-100-FAP. Распределение радиоактивно меченного соединения в органах определяли ex vivo в крови, здоровых тканях и опухоли. Как показано на фигуре 51, соединения продемонстрировали высокое поглощение опухолью, хотя по сравнению с Ga-68-мечеными производными DOTA наблюдается более высокое накопление в здоровой ткани, при этом выполнение РЕТ-визуализации было одинаковым.
Пункты
Следующие пункты представляют собой предпочтительные варианты осуществления настоящего изобретения.
1. Соединение формулы (I):
где
Q, R, U, V, W, Y, Z индивидуально присутствуют или отсутствуют при условии, что по меньшей мере три из Q, R, U, V, W, Y, Z присутствуют;
Q, R, U, V, W, Y, Z независимо выбраны из группы, состоящей из О, CH2, NR4, C=O, C=S, C=NR4, HCR4 и R4CR4, при условии, что два О не являются напрямую смежными друг с другом;
R1 и R2 независимо выбраны из группы, состоящей из -Н, -ОН, галогено, C1-6-алкила, -O-C1-6-алкила, S-C1-6-алкила;
R3 выбран из группы, состоящей из -Н, -CN, -В(ОН)2, -С(O)-алкила, -С(О)-арила, -С=С-С(O)-арила, -C=C-S(O)2-арила, -CO2H, -SO3H, -SO2NH2, -PO3H2 и 5-тетразолила;
R4 выбран из группы, состоящей из -Н, -C1-6-алкила, -O-C1-6-алкила, -S-C1-6-алкила, алкенила, гетероалкенила, циклоалкенила, циклогетероалкенила, алкинила, арила и -C1-6-аралкила, при этом каждый -C1-6-алкил необязательно замещен 1-3 заместителями, выбранными из -ОН, оксо, галогено, и необязательно соединен с Q, R, U, V, W, Y или Z;
R5 выбран из группы, состоящей из -Н, галогено и C1-6-алкила;
R6 и R7 независимо выбраны из группы, состоящей из -Н, 
и 
, при условии, что R6 и R7 одновременно не представляют собой Н;
где L представляет собой линкер,
где D, А, Е и В индивидуально присутствуют или отсутствуют, при этом предпочтительно присутствуют по меньшей мере А, Е и В, при этом в случае присутствия:
D представляет собой линкер;
А выбран из группы, состоящей из NR4, О, S и CH2;
Е выбран из группы, состоящей из
C1-6-алкила, 
где i равно 1, 2 или 3;
где j равно 1, 2 или 3;
где k равно 1, 2 или 3;
где m равно 1, 2 или 3;
А и Е вместе образуют группу, выбранную из: циклоалкила, гетероциклоалкила, арила и гетероарила, предпочтительно гетероциклоалкила, где А и Е могут быть моно-, би- и полициклическими, предпочтительно моноциклическими; каждый А и Е необязательно замещен 1-4 заместителями, выбранными из -Н, -C1-6-алкила, -O-C1-6-алкила, -S-C1-6-алкила, алкенила, гетероалкенила, циклогетероалкенила, алкинила, арила и -C1-6-аралкила, при этом каждый указанный -C1-6-алкил необязательно замещен 1-3 заместителями, выбранными из -ОН, оксо, галогено; и необязательно соединен с А, В, D, Е или 
;
В выбран из группы, состоящей из S, NR4, NR4-O, NR4-C1-6-алкила, NR4-C1-6-алкил-NR4, и 5-10-членного N-содержащего ароматического или неароматического моно- или бициклического гетероцикла, предпочтительно дополнительно содержащего 1 или 2 гетероатома, выбранных из О, N и S, предпочтительно дополнительно содержащего 1 или 2 атома азота, предпочтительно где NR4-C1-6-алкил-NR4 и N-содержащий гетероцикл замещены 1-3 заместителями, выбранными из группы, состоящей из C1-6-алкила, арила, C1-6-аралкила; и
R8 выбран из группы, состоящей из радиоактивного фрагмента, хелатирующего агента, флуоресцентного красителя, контрастного агента и их комбинаций;
представляет собой 1-нафтильный фрагмент или 5-10-членный N-содержащий ароматический или неароматический моно- или бициклический гетероцикл, где между атомом N и X находятся 2 кольцевых атома; указанный гетероцикл необязательно дополнительно содержит 1, 2 или 3 гетероатома, выбранных из О, N и S; и X представляет собой атом С;
или его фармацевтически приемлемый таутомер, рацемат, гидрат, сольват или соль.
2. Соединение по п. 1, отличающееся тем, что
(i) Q, R, U представляют собой CH2 индивидуально присутствуют или отсутствуют;
V представляет собой CH2, C=O, C=S или C=NR4;
W представляет собой NR4;
Y представляет собой HCR4; и
Z представляет собой C=O, C=S или C=NR4; и/или
(ii) Q и R отсутствуют;
U представляет собой CH2 и присутствует или отсутствует;
R1 и R2 независимо выбраны из группы, состоящей из -Н и галогено;
R3 выбран из группы, состоящей из -Н, -CN и -В(ОН)2;
R4 выбран из группы, состоящей из -Н и -C1-6-алкила, где -C1-6-алкил необязательно замещен 1-3 заместителями, выбранными из -ОН.
3. Соединение по п. 1 или 2, отличающееся тем, что
выбран из группы, состоящей из 
, 
, необязательно дополнительно содержащий 1 или 2 гетероатома, выбранных из О, N и S.
4. Соединение по любому из предшествующих пунктов, отличающееся тем, что выбран из группы, состоящей из
5. Соединение по любому из предшествующих пунктов, отличающееся тем, что R5 и R6 представляют собой Н;
R7 представляет собой 
, где
D отсутствует;
А представляет собой О, S, СН2, NH, NCH3;
Е представляет собой C1-6-алкил или 
, где m равно 1, 2 или 3;
А и Е вместе образуют группу, выбранную из: 
В представляет собой NR4-C1-6-алкил или 5-10-членный N-содержащий ароматический или неароматический моно- или бициклический гетероцикл, предпочтительно дополнительно содержащий 1 или 2 гетероатома, выбранных из О, N и S, предпочтительно дополнительно содержащий 1 или 2 атома азота, предпочтительно, где N-содержащий гетероцикл замещен 1-3 заместителями, выбранными из группы, состоящей из d-6-алкила, арила, G-6-аралкила.
6. Соединение по любому из предшествующих пунктов, отличающееся тем, что
(i) N-содержащий гетероцикл, содержащийся в В, представляет собой ароматический или неароматический моноциклический гетероцикл:
, где
гетероцикл необязательно дополнительно содержит 1 или 2 гетероатома, выбранных из О, N и S, необязательно дополнительно содержит 1 атом азота;
присоединен к положению 1, 2 или 3, предпочтительно к положению 2;
1 равно 1 или 2;
где N-содержащий гетероцикл необязательно замещен C1-6-алкилом; и/или
(ii) N-содержащий гетероцикл, содержащийся в В, выбран из группы, состоящей из:
где N-содержащий гетероцикл необязательно замещен Cl-6-алкилом;
где, если N-содержащий гетероцикл, содержащийся в В, представляет собой 
, гетероцикл необязательно дополнительно содержит 1 или 2 гетероатома, выбранных из О, N и S, необязательно дополнительно содержит 1 атом азота, необязательно компрометирует одну или несколько (например, происходящих из аминокислот) боковых цепей;
присоединен к положению 1, 2 или 3, предпочтительно к положению 2; о равно 1 или 2;
предпочтительно, если N-содержащий гетероцикл, содержащийся в В, представляет собой 
, N-содержащий гетероцикл, содержащийся в В, представляет собой 
или 
; более предпочтительно, если N-содержащий гетероцикл, содержащийся в В, представляет собой 
, N-содержащий гетероцикл, содержащийся в В, представляет собой 
или 
.
7. Соединение по любому из предшествующих пунктов, отличающееся тем, что
Q, R, U отсутствуют;
V представляет собой C=O;
W представляет собой NH;
Y представляет собой CH2;
Z представляет собой C=O;
R1 и R2 независимо выбраны из группы, состоящей из -Н и галогено;
R3 представляет собой -CN;
R5 и R6 представляют собой Н;
R7 представляет собой 
, где
D отсутствует;
А представляет собой О, S, CH2, NH, NCH3;
Е представляет собой C1-6-алкил или 
, где m равно 1, 2 или 3; или
А и E вместе образуют группу, выбранную из: 
, 
В представляет собой NH-C1-6-алкил, 
, необязательно В замещен C1-3-алкилом; и
представляет собой 
8. Соединение по любому из предшествующих пунктов, отличающееся тем, что C1-6-алкил выбран из группы, состоящей из метила, этила, пропила, изопропила, бутила, втор-бутила, трет-бутила, пентила и гексила, и/или
где C1-6-аралкил выбран из группы, состоящей из бензила, фенил-этила, фенил-пропила и фенил-бутила.
9. Соединение по любому из предшествующих пунктов, отличающееся тем, что R8 представляет собой радиоактивный фрагмент, при этом радиоактивный фрагмент представляет собой флуоресцентный изотоп, радиоактивный изотоп, радиоактивное лекарственное средство или их комбинации, предпочтительно, где радиоактивный фрагмент выбран из группы, состоящей из изотопов, испускающих альфа-излучение, изотопов, испускающих бета-излучение, изотопов, испускающих гамма-излучение, изотопов, испускающих оже-электроны, изотопов, испускающих рентгеновское излучение, изотопов, испускающих флуоресценцию, таких как 11С, 18F, 51Cr, 67Ga, 68Ga, 111In, 99mTc, 186Re, 188Re, 139La, 140La, 175Yb, 153Sm, 166Но, 88Y, 90Y, 149Pm, 165Dy, 169Er, 177Lu, 47Sc, 142Pr, 159Gd, 212Bi, 213Bi, 72As, 72Se, 97Ru, 109Pd, 105Rh, 101mRh, 119Sb, 128Ba, 123I, 124I, 131I, 197Hg, 211At, 151Eu, 153Eu, 169Eu, 201Tl, 203Pb, 212Pb, 64Cu, 67Cu, 188Re, 186Re, 198Au, 225Ac, 227Th и 199Ag, предпочтительно 18F, 64Cu, 68Ga, 90Y, 99mTc, 153Sm, 177Lu, 188Re.
10. Соединение по любому из пп. 1-8, отличающееся тем, что R8 представляет собой флуоресцентный краситель, выбранный из группы, состоящей из следующих классов флуоресцентных красителей: ксантены, акридины, оксазины, цинины, стириловые красители, кумарины, порфины, комплексы металл-лиганд, флуоресцентные белки, нанокристаллы, перилены, бор-дипиррометены и фталоцианины, а также конъюгаты и комбинации этих классов красителей.
11. Соединение по любому из пп. 1-8, отличающееся тем, что R8 представляет собой хелатирующий агент, который образует комплекс с катионами двухвалентных или трехвалентных металлов, предпочтительно при этом хелатирующий агент выбран из группы, состоящей из 1,4,7,10-тетраазациклододекан-N,N',N,N'-тетрауксусной кислоты (DOTA), этилендиаминтетрауксусной кислоты (EDTA), 1,4,7-триазациклононан-1,4,7-триуксусной кислоты (NOTA), триэтилентетрамина (ТЕТА), иминодиуксусной кислоты, диэтилентриамин-N,N,N',N',N''-пентауксусной кислоты (DTPA), бис-(карбоксиметилимидазол)глицина и 6-гидразинопиридин-3-карбоновой кислоты (HYNIC).
12. Соединение по любому из пп. 1-8, отличающееся тем, что R8 представляет собой контрастный агент, который содержит или состоит из парамагнитного агента, предпочтительно при этом парамагнитный агент содержит или состоит из парамагнитных наночастиц.
13. Фармацевтическая композиция, содержащая по меньшей мере одно соединение по любому из пп. 1-12 или состоящая из него; и необязательно фармацевтически приемлемый носитель и/или вспомогательное вещество.
14. Соединение по любому из пп. 1-12 или фармацевтическая композиция по п. 13 для применения в диагностике или лечении заболевания, характеризующегося сверхэкспрессией белка активации фибробластов (FAP) у субъекта-животного или человека, предпочтительно при этом заболевание, характеризующееся сверхэкспрессией белка активации фибробластов (FAP), выбрано из группы, состоящей из рака, хронического воспаления, атеросклероза, фиброза, ремоделирования ткани и келоидного нарушения, предпочтительно, при этом рак выбран из группы, состоящей из рака молочной железы, рака поджелудочной железы, рака тонкой кишки, рака толстой кишки, рака прямой кишки, рака легких, рака головы и шеи, рак яичников, гепатоцеллюлярной карциномы, рака пищевода, рака гортанной части глотки, рака носоглотки, рака гортани, миеломных клеток, рака мочевого пузыря, холангиоцеллюлярной карциномы, светлоклеточной карциномы почек, нейроэндокринной опухоли, онкогенной остеомаляция, саркомы, CUP-синдрома (carcinoma of unknown primary), карциномы тимуса, десмоидных опухолей, глиомы, астроцитомы, карциномы шейки матки и рака предстательной железы.
15. Набор, содержащий соединение по любому из пп. 1-12 или фармацевтическую композицию по п. 13, или состоящий из них, и инструкции по диагностике или лечению заболевания.
| название | год | авторы | номер документа |
|---|---|---|---|
| КОНЪЮГАТ, СОДЕРЖАЩИЙ ЛИГАНД РЕЦЕПТОРОВ НЕЙРОТЕНЗИНА, И ЕГО ПРИМЕНЕНИЕ | 2015 |
|
RU2743781C2 |
| КОНЪЮГАТ ЛИГАНД-ЛЕКАРСТВЕННОЕ СРЕДСТВО АНАЛОГА ЭКЗАТЕКАНА, СПОСОБ ЕГО ПОЛУЧЕНИЯ И ЕГО ПРИМЕНЕНИЕ | 2019 |
|
RU2793316C2 |
| N3-АЛКИЛИРОВАННЫЕ БЕНЗИМИДАЗОЛЬНЫЕ ПРОИЗВОДНЫЕ В КАЧЕСТВЕ ИНГИБИТОРОВ МЕК | 2003 |
|
RU2300528C2 |
| ПРОИЗВОДНОЕ ИНДОЛА И ФОРМАМИДА, СПОСОБ ЕГО ПОЛУЧЕНИЯ И ПРИМЕНЕНИЕ В МЕДИЦИНЕ | 2018 |
|
RU2742770C1 |
| СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ АЦИЛФОСФАТОВ | 2013 |
|
RU2719592C2 |
| СОЧЕТАННАЯ ТЕРАПИЯ | 2015 |
|
RU2695230C2 |
| ЛИГАНДЫ РЕЦЕПТОРА НЕЙРОТЕНЗИНА | 2013 |
|
RU2671970C2 |
| СИСТЕМЫ ДОСТАВКИ ЛЕКАРСТВ НА ОСНОВЕ МАЙТАНЗИНОИДА | 2018 |
|
RU2783076C2 |
| ДВОЙНЫЕ ИНГИБИТОРЫ ATM И DNA-PK ДЛЯ ПРИМЕНЕНИЯ В ПРОТИВООПУХОЛЕВОЙ ТЕРАПИИ | 2020 |
|
RU2800756C1 |
| СОЕДИНЕНИЕ 3,4-ДИГИДРОИЗОХИНОЛИНА И ЕГО ПРИМЕНЕНИЕ | 2021 |
|
RU2825312C1 |
Изобретение относится к области органической химии, а именно к соединению формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли, где Q, R и U отсутствуют, каждый из V, W, Y, Z индивидуально присутствуют или отсутствуют при условии, что по меньшей мере три из V, W, Y, Z присутствуют; V представляет собой С=O; W представляет собой NH; Y представляет собой СН2; Z представляет собой С=O; R1 и R2 независимо выбраны из группы, состоящей из -Н, галогена; R3 выбран из группы, состоящей из -CN; R4 выбран из группы, состоящей из -Н, -C1-6-алкила; R5 и R6 представляют собой Н; R7 представляет собой 
, где D присутствует или отсутствует, при этом по меньшей мере А, Е и В присутствуют, причем, когда присутствуют: D представляет собой линкер, выбранный из структур, указанных в п.1 формулы; А выбран из группы, состоящей из NR4, О, S и CH2; Е выбран из группы, состоящей из C1-6-алкила и 
, где m равно 1, 2 или 3; А и Е вместе образуют группу, выбранную из: 
В выбран из группы, состоящей из 5-9-членного N-содержащего ароматического или неароматического моно- или бициклического гетероцикла, необязательно дополнительно содержащего 1 или 2 гетероатома, выбранных из N, необязательно где N-содержащий гетероцикл замещен 1-2 заместителями, выбранными из группы, состоящей из C1-2-алкила, С2-аралкила; и R8 выбран из группы, состоящей из 18F, 68Ga, 99mTc, 186Re, 188Re, 153Sm, 90Y, 177Lu, 64Cu, а также из структур, указанных в п.1 формулы; 
представляет собой 10-членный N-содержащий ароматический бициклический гетероцикл, где между атомом N и X находятся 2 кольцевых атома; и X представляет собой атом С. Также изобретение относится к фармацевтической композиции и набору на основе соединения формулы (I) для лечения или диагностики указанных заболеваний, способу диагностики или лечения указанных заболеваний. Технический результат: эффективное лечение и диагностика заболеваний, характеризующихся сверхэкспрессией белка активации фибробластов (FAP). 7 н. и 6 з.п. ф-лы, 57 ил., 12 табл., 8 пр.
1. Соединение формулы (I)
где Q, R и U отсутствуют,
V, W, Y, Z индивидуально присутствуют или отсутствуют при условии, что по меньшей мере три из V, W, Y, Z присутствуют;
V представляет собой С=O, W представляет собой NH; Y представляет собой CH2; Z представляет собой С=O;
R1 и R2 независимо выбраны из группы, состоящей из -Н, галогена;
R3 выбран из группы, состоящей из -CN;
R4 выбран из группы, состоящей из -Н, -C1-6-алкила;
R5 и R6 представляют собой Н;
R7 представляет собой 
где D присутствует или отсутствует, при этом по меньшей мере А, Е и В присутствуют, причем, когда присутствуют,
D представляет собой линкер, выбранный из:
А выбран из группы, состоящей из NR4, О, S и СН2;
Е выбран из группы, состоящей из
C1-6-алкила и 
где m равно 1, 2 или 3;
А и Е вместе образуют группу, выбранную из: 
В выбран из группы, состоящей из 5-9-членного N-содержащего ароматического или неароматического моно- или бициклического гетероцикла, необязательно дополнительно содержащего 1 или 2 гетероатома, выбранных из N, необязательно где N-содержащий гетероцикл замещен 1-2 заместителями, выбранными из группы, состоящей из C1-2-алкила, С2-аралкила; и
R8 выбран из группы, состоящей из: 18F, 68Ga, 99mTc, 186Re, 188Re, 153Sm, 90Y,
представляет собой 10-членный N-содержащий ароматический бициклический гетероцикл, где между атомом N и X находятся 2 кольцевых атома; и X представляет собой атом С;
или его фармацевтически приемлемая соль.
2. Соединение по любому из предшествующих пунктов, отличающееся тем, что 
выбран из группы, состоящей из
3. Соединение по любому из предшествующих пунктов, отличающееся тем, что
R5 и R6 представляют собой Н;
R7 представляет собой 
где
D отсутствует;
А представляет собой О, S, CH2, NH или NCH3;
Е представляет собой C1-6-алкил или 
где m равно 1, 2 или 3.
4. Соединение по любому из предшествующих пунктов, отличающееся тем, что
(i) N-содержащий гетероцикл, содержащийся в В, представляет собой ароматический или неароматический моноциклический гетероцикл
где гетероцикл необязательно дополнительно содержит 1 или 2 гетероатома, выбранных из N;
присоединен к положению 1, 2 или 3, предпочтительно к положению 2; 1 равно 1 или 2;
необязательно где N-содержащий гетероцикл замещен C1-2-алкилом; и/или
(ii) N-содержащий гетероцикл, содержащийся в В, выбран из группы, состоящей из:
необязательно где N-содержащий гетероцикл замещен C1-2-алкилом;
где, если N-содержащий гетероцикл, содержащийся в В, представляет собой
гетероцикл необязательно дополнительно содержит 1 или 2 гетероатома, выбранных из N;
присоединен к положению 1, 2 или 3, предпочтительно к положению 2; о равно 1 или 2.
5. Соединение по любому из предшествующих пунктов, отличающееся тем, что
N-содержащий гетероцикл, содержащийся в В, выбран из группы, состоящей из:
причем о равно 1 или 2.
6. Соединение по любому из предшествующих пунктов, отличающееся тем, что
Q, R, U отсутствуют;
V представляет собой С=О;
W представляет собой NH;
Y представляет собой СН2;
Z представляет собой С=О;
R1 и R2 независимо выбраны из группы, состоящей из -Н и галогено;
R3 представляет собой -CN;
R5 и R6 представляют собой Н;
R7 представляет собой 
где
D отсутствует;
А представляет собой О, S, СН2, NH или NCH3;
Е представляет собой C1-6-алкил или 
где m равно 1, 2 или 3; или
А и Е вместе образуют группу, выбранную из 
В представляет собой 
или 
необязательно В замещен C1-2-алкилом; и
представляет собой 
7. Соединение по любому из предшествующих пунктов, отличающееся тем, что С1-6-алкил выбран из группы, состоящей из метила, этила, пропила, изопропила, бутила, втор-бутила, трет-бутила, пентила и гексила.
8. Фармацевтическая композиция для диагностики заболевания, характеризующегося сверхэкспрессией белка активации фибробластов (FAP), содержащая по меньшей мере одно соединение по любому из пп. 1-7 в эффективном количестве или состоящая из него и необязательно фармацевтически приемлемый носитель и/или вспомогательное вещество.
9. Фармацевтическая композиция для лечения заболевания, характеризующегося сверхэкспрессией белка активации фибробластов (FAP), содержащая по меньшей мере одно соединение по любому из пп. 1-7 в эффективном количестве или состоящая из него и необязательно фармацевтически приемлемый носитель и/или вспомогательное вещество.
10. Способ диагностики заболевания, характеризующегося сверхэкспрессией белка активации фибробластов (FAP) у субъекта-животного или человека, включающий введение эффективной дозы соединения по любому из пп. 1-7 или фармацевтической композиции по п. 8, предпочтительно где заболевание, характеризующееся сверхэкспрессией белка активации фибробластов (FAP), выбрано из группы, состоящей из рака, хронического воспаления, атеросклероза, фиброза, ремоделирования ткани и келоидного нарушения, предпочтительно, при этом рак выбран из группы, состоящей из рака молочной железы, рака поджелудочной железы, рака тонкой кишки, рака толстой кишки, рака прямой кишки, рака легких, рака головы и шеи, рака яичников, гепатоцеллюлярной карциномы, рака пищевода, рака гортанной части глотки, рака носоглотки, рака гортани, миеломных клеток, рака мочевого пузыря, холангиоцеллюлярной карциномы, светлоклеточной карциномы почек, нейроэндокринной опухоли, онкогенной остеомаляции, саркомы, CUP-синдрома (carcinoma of unknown primary), карциномы тимуса, десмоидных опухолей, глиомы, астроцитомы, карциномы шейки матки и рака предстательной железы.
11. Способ лечения заболевания, характеризующегося сверхэкспрессией белка активации фибробластов (FAP) у субъекта-животного или человека, включающий введение эффективной дозы соединения по любому из пп. 1-7 или фармацевтической композиции по п. 9, предпочтительно где заболевание, характеризующееся сверхэкспрессией белка активации фибробластов (FAP), выбрано из группы, состоящей из рака, хронического воспаления, атеросклероза, фиброза, ремоделирования ткани и келоидного нарушения, предпочтительно, при этом рак выбран из группы, состоящей из рака молочной железы, рака поджелудочной железы, рака тонкой кишки, рака толстой кишки, рака прямой кишки, рака легких, рака головы и шеи, рака яичников, гепатоцеллюлярной карциномы, рака пищевода, рака гортанной части глотки, рака носоглотки, рака гортани, миеломных клеток, рака мочевого пузыря, холангиоцеллюлярной карциномы, светлоклеточной карциномы почек, нейроэндокринной опухоли, онкогенной остеомаляции, саркомы, CUP-синдрома (carcinoma of unknown primary), карциномы тимуса, десмоидных опухолей, глиомы, астроцитомы, карциномы шейки матки и рака предстательной железы.
12. Набор, содержащий или состоящий из соединения по любому из пп. 1-7 или фармацевтической композиции по п. 8 и инструкции для диагностики заболевания, характеризующегося сверхэкспрессией белка активации фибробластов (FAP).
13. Набор, содержащий или состоящий из соединения по любому из пп. 1-7 или фармацевтической композиции по п. 9 и инструкции для лечения заболевания, характеризующегося сверхэкспрессией белка активации фибробластов (FAP).
| Многоступенчатая активно-реактивная турбина | 1924 |
|
SU2013A1 |
| Многоступенчатая активно-реактивная турбина | 1924 |
|
SU2013A1 |
| WO2017165473 A1, 28.09.2017 | |||
| AL JAMMAZ, I | |||
| и др | |||
| Способ использования делительного аппарата ровничных (чесальных) машин, предназначенных для мериносовой шерсти, с целью переработки на них грубых шерстей | 1921 |
|
SU18A1 |
| Journal of Labelled Compounds and Radiopharmaceuticals, 54(6), | |||
