СОЕДИНЕНИЕ ДВОЙНОГО НАЦЕЛИВАНИЯ, СПОСОБ ЕГО ПОЛУЧЕНИЯ И ПРИМЕНЕНИЕ Российский патент 2025 года по МПК A61K47/64 A61K51/08 C07K7/64 A61K38/12 A61P35/00 A61P17/02 A61P29/00 A61P9/10 

ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ

[1] Настоящее изобретение относится к области ядерной медицины и молекулярной визуализации, и, в частности, оно относится к меченому радионуклидом соединению двойного нацеливания на белок активации фибробластов (FAP) и интегрин α_vβ₃, способу его получения и применению этого соединения в диагностике или лечении заболеваний, характеризующихся сверхэкспрессией FAP и/или интегрина α_vβ₃.

УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ

[2] Белок активации фибробластов (FAP) представляет собой трансмембранную серин-пептидазу, которая экспрессируется на поверхностях активируемых опухолевой стромой фибробластах, а также играет важную роль в онкогенезе и развитии опухолей. Предыдущие исследования показали, что FAP в основном не экспрессируется в здоровых тканях, однако он обладает выборочной высокой экспрессией на поверхностях стромальных фибробластов более 90% эпителиальных злокачественных опухолей, в том числе при раке молочной железы, раке яичника, раке легких, раке толстого кишечника, раке желудка, раке поджелудочной железы и т. п. Интегрин α_vβ₃ представляет собой гетеродимерный рецептор, который локализуется на клеточных поверхностях и редко экспрессируется в здоровых сосудистых эндотелиальных и эпителиальных клетках, однако он экспрессируется на высоком уровне на клеточных поверхностях различных солидных опухолей, в том числе при раке легких, остеокарциноме, нейробластоме, раке молочной железы, раке предстательной железы, раке мочевого пузыря, глиобластоме, инвазивной меланоме и т. п., а также высоко экспрессируется в неоваскулярных эндотелиальных клеточных мембран всех опухолевых тканей, что свидетельствует о том, что интегрин α_vβ₃ играет важную роль в процессе роста, инвазии и метастазах опухолей. Полипептиды, содержащие последовательность аргинилглициласпарагиновой кислоты (RGD), могут специфически связываться с интегрином α_vβ₃. Вследствие широкой экспрессии и важных эффектов FAP и интегрина α_vβ₃ в опухолях, FAP и интегрин α_vβ₃ стали важными мишенями для визуализации и лечении опухолей.

[3] Для дополнительного повышения эффективности диагностики и лечения опухолей, в уровне техники имеются разработанные зонды двойного нацеливания, которые обладают аффинностью одновременно к двум мишеням. Например, в документе авторства Anna Orlova et al. описан зонд двойного нацеливания, обладающий аффинностью к специфическому мембранному антигену простаты (PSMA) и гастрин-высвобождающему пептидному рецептору (GRPR). Поскольку PSMA и GRPR высоко экспрессируются в предстательной железе, зонд двойного нацеливания обладает недостатком, который заключается в том, что он может использоваться в рентгенодиагностике и лечении только лишь рака предстательной железы, но не других опухолей.

РАСКРЫТИЕ СУЩНОСТИ ИЗОБРЕТЕНИЯ

[4] Поскольку FAP и интегрин α_vβ₃ главным образом распространены в стромальных клетках и новых кровеносных сосудах опухолей, FAP и интегрин α_vβ₃ одновременно высоко экспрессируются в различных типах опухолей и являются идеальными мишенями для разработки зондов двойного нацеливания для «обширных опухолей». Учитывая гетерогенность опухолей, для дополнительного улучшения повышения эффективности диагностики и лечения опухолей существует необходимость в разработке нацеливающегося соединения, которого могло бы достигать эффекта нацеливания на две мишени: FAP и интегрин α_vβ₃. Соединение двойного нацеливания должно одновременно обладать высокой аффинностью к двум мишеням, чтобы синергетическим образом нацеливаться на мишень FAP и мишень интегрин α_vβ₃ в опухолях, а также оно должно обладать превосходными фармакокинетическими свойствами in vivo, чтобы улучшать поглощение опухолью и продлевать время удержания в опухоли. Меченное радионуклидом соединение двойного нацеливания, основанное на соединении двойного нацеливания, может одновременно использовать мишень FAP и мишень интегрин α_vβ₃, чтобы увеличить количество эффективных рецепторов в опухоли и повысить эффективность использования, тем самым решая задачу повышения эффективности выявления и/или эффективности лечения позитивных опухолей.

[5] Для решения приведенных выше проблем, основной задачей настоящего изобретения является разработка структуры нового соединения, способного синергетическим образом нацеливаться на мишень FAP и мишень интегрин α_vβ₃в опухолях, чтобы улучшить поглощение и время удержания лекарственных средств в опухолях.

[6] Еще одной задачей настоящего изобретения является обеспечение способа получения нового соединения, чтобы синтезировать соединение, способное синергетическим образом нацеливаться на мишень FAP и мишень интегрин α_vβ₃в опухолях, удобным и легкодоступным путем синтеза.

[7] Еще одной задачей настоящего изобретения является обеспечение применения соединения в диагностике или лечении заболеваний, характеризующихся сверхэкспрессией FAP и/или интегрина α_vβ₃.

[8] Указанные выше задачи настоящего изобретения решаются следующими техническими решениями.

[9] В первом аспекте настоящего изобретения представлено соединение двойного нацеливания, способное нацеливаться на FAP и интегрин α_vβ₃, структура которого одновременно содержит структуры лигандов специфического связывания FAP и интегрина α_vβ₃, при этом структура соединения показана в формуле (I) ниже:

(I).

[10] Во втором аспекте настоящего изобретения также представлено способное к мечению радионуклидом соединение двойного нацеливания на FAP и интегрин α_vβ₃, структура которого одновременно содержит структуры лигандов специфического связывания FAP и интегрина α_vβ₃, а также структуру, хелатирующую нуклид, которая в настоящем изобретении обозначена, как структура FAPI-RGD, а структура соединения показана в формуле (I-1) или формуле (I-2) ниже,

формула (I-1);

формула (I-2).

[11] В третьем аспекте настоящего изобретения представлено меченное радионуклидом соединение двойного нацеливания на FAP и интегрин α_vβ₃, которое получено путем мечения радионуклидом соединения, описанного во втором аспекте настоящего изобретения.

[12] В решениях по настоящему изобретению радионуклид может быть выбран из изотопов, излучающих α-лучи, изотопов, излучающих β-лучи, изотопов, излучающих γ-лучи, изотопов, излучающих оже-электроны, или изотопов, излучающих рентгеновские лучи, и т. п., таких как любой из ¹⁸F, ⁵¹Cr, ⁶⁷Ga, ⁶⁸Ga, ¹¹¹In, ^99mTc, ¹⁸⁶Re, ¹⁸⁸Re, ¹³⁹La, ¹⁴⁰La, ¹⁷⁵Yb, ¹⁵³Sm, ¹⁶⁶Ho, ⁸⁶Y, ⁹⁰Y, ¹⁴⁹Pm, ¹⁶⁵Dy, ¹⁶⁹Er, ¹⁷⁷Lu, ⁴⁷Sc, ¹⁴²Pr, ¹⁵⁹Gd, ²¹²Bi, ²¹³Bi, ⁷²As, ⁷²Se, ⁹⁷Ru, ¹⁰⁹Pd, ¹⁰⁵Rh, ^101mRh, ¹¹⁹Sb, ¹²⁸Ba, ¹²³I, ¹²⁴I, ¹³¹I, ¹⁹⁷Hg, ²¹¹At, ¹⁵¹Eu, ¹⁵³Eu, ¹⁶⁹Eu, ²⁰¹Tl, ²⁰³Pb, ²¹²Pb, ⁶⁴Cu, ⁶⁷Cu, ¹⁹⁸Au, ²²⁵Ac, ²²⁷Th, ⁸⁹Zr или ¹⁹⁹Ag; при этом радионуклид, предпочтительно, представляет собой ¹⁸F, ⁶⁴Cu, ⁶⁸Ga, ⁸⁹Zr, ⁹⁰Y, ¹¹¹In, ^99mTc, ¹⁷⁷Lu, ¹⁸⁸Re или ²²⁵Ac.

[13] В четвертом аспекте настоящего изобретения представлен способ получения соединения двойного нацеливания, описанного во втором аспекте, и его меченого радионуклидом соединения (а именно, соединения двойного нацеливания, описанного в третьем аспекте настоящего изобретения). Способ получения, предусмотренный настоящим изобретением, включает следующие этапы, на которых:

[14] (1) сначала проводят реакцию конденсации амида между карбоксилом 6-гидроксихинолин-4-карбоновой кислоты и амино трет-бутил глицината; подсоединяют BOC-защищенный пиперазинил алкильной цепью в положении гидроксила продукта реакции конденсации амида; удаляют Boc и трет-бутил защитные группы в кислых условиях, и вводят Boc-защитную группу в пиперазиновое кольцо; затем проводят реакцию конденсации амида с (S)-пирролидин-2-карбонитрил гидрохлоридом; после удаления Boc-защитной группы проводят реакцию конденсации с N-Boc-3-[2-(2-аминоэтокси)этокси]пропионовой кислотой; затем удаляют Boc-защитную группу и проводят реакцию с 5-трет-бутиловым сложным эфиром Fmoc-L-глутаминовой кислоты; после удаления трет-бутилового сложного эфира получают активированный сложный эфир, а затем проводят реакцию с c(RGDfK) с амино-диполиэтиленгликолем с получением соединения двойного нацеливания; после удаления Fmoc-защитной группы проводят реакцию с агентом, хелатирующим нуклид, причем агент, хелатирующий нуклид, представляет собой 1,4,7,10-тетраазациклододекан-N,N',N,N'-тетрауксусную кислоту или 1,4,7-триазациклононан-1,4,7-триуксусную кислоту; а затем удаляют защитную группу трет-бутилового сложного эфира на хелатирующей группе с получением соединения двойного нацеливания, способного к мечению радионуклидом, а именно, соединения двойного нацеливания, описанного во втором аспекте настоящего изобретения;

[15] (2) проводят реакцию между полученным на этапе (1) соединением двойного нацеливания, способным к мечению радионуклидом, и соединением, содержащим радионуклид, с помощью существующего мечения влажным способом или способом мечения лиофилизацией для получения меченого радионуклидом соединения двойного нацеливания на FAP и интегрин α_vβ₃, описанного в третьем аспекте настоящего изобретения.

[16] В пятом аспекте настоящего изобретения представлена фармацевтическая композиция. Фармацевтическая композиция содержит соединение двойного нацеливания, способное нацеливаться на FAP и интегрин α_vβ₃, которое описано в первом аспекте настоящего изобретения, соединение двойного нацеливания, способное к мечению радионуклидом, для FAP и интегрина α_vβ₃, описанное во втором аспекте настоящего изобретения, меченное радионуклидом соединение двойного нацеливания на FAP и интегрин α_vβ₃, описанное в третьем аспекте, или любой их фармацевтически приемлемый таутомер, рацемат, гидрат, сольват или соль.

[17] Кроме того, в шестом аспекте настоящего изобретения представлено применение соединения двойного нацеливания, способного нацеливаться на FAP и интегрин α_vβ₃, которое описано в первом аспекте настоящего изобретения, соединения двойного нацеливания, способного к мечению радионуклидом, для FAP и интегрина α_vβ₃, описанного во втором аспекте, меченого радионуклидом соединения двойного нацеливания на FAP и интегрин α_vβ₃, описанного в третьем аспекте, или фармацевтической композиции, описанной в пятом аспекте, в приготовлении лекарственных средств для диагностики или лечения заболеваний, характеризующихся сверхэкспрессией FAP и/или интегрина α_vβ₃, у индивидуумов-животных или индивидуумов-людей.

[18] Заболевания, характеризующиеся сверхэкспрессией FAP и/или интегрина α_vβ₃, при применении настоящего изобретения включают в себя, но без ограничения: рак, хроническое воспаление, атеросклероз, фиброз, заболевания с ремоделированием ткани и шрамами; и, предпочтительно, рак также выбран из рака молочной железы, рака поджелудочной железы, рака тонкой кишки, рака толстой кишки, рака прямой кишки, рака легких, рака головы и шеи, рака яичника, гепатоцеллюлярной карциномы, рака пищевода, гипофарингеальной карциномы, назофарингеальной карциномы, карциномы гортани, клеток миеломы, рака мочевого пузыря, холангиоцеллюлярной карциномы, светлоклеточной почечноклеточной карциномы, нейроэндокринных новообразований, канцерогенной остеомаляции, саркомы, рака неизвестного первичного происхождения (CUP), карциномы тимуса, глиомы, нейроглиомы, астроцитомы, рака шейки матки или рака предстательной железы.

[19] Соединение структуры FAPI-RGD, представленное в настоящем изобретении, обладает высокой аффинностью к мишени FAP и мишени интегрину α_vβ₃, может синергетическим образом нацеливаться на мишень FAP и мишень интегрин α_vβ₃ в опухолях, а также проявляет высокое поглощение опухолью и длительное время удержания в опухоли, что, как ожидается, будет использоваться в диагностике или лечении заболеваний, характеризующихся сверхэкспрессией FAP и/или интегрина α_vβ₃.

[20] Кроме того, способ получения соединения FAPI-RGD, представленный в настоящем изобретении, имеет простой путь реакции, простое исполнение, в нем используются недорогие и доступные сырьевые материалы, он имеет низкие производственные затраты, а также подходит для промышленного производства.

КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ЧЕРТЕЖЕЙ

[21] На ФИГ. 1 изображена схема водородного спектра ядерного магнитного резонанса соединения 7.

[22] На ФИГ. 2 изображена схема углеродного спектра ядерного магнитного резонанса соединения 7.

[23] На ФИГ. 3 изображена масс-спектрограмма соединения 7.

[24] На ФИГ. 4 изображена масс-спектрограмма соединения 8.

[25] На ФИГ. 5 изображена масс-спектрограмма соединения 9.

[26] На ФИГ. 6 изображена масс-спектрограмма соединения 12.

[27] На ФИГ. 7 изображена масс-спектрограмма соединения 13.

[28] На ФИГ. 8 изображена масс-спектрограмма соединения 14.

[29] На ФИГ. 9 изображена масс-спектрограмма соединения 15.

[30] На ФИГ. 10 изображены результаты эксперимента стабильности ⁶⁸Ga-меченого комплекса FAPI-RGD (формула I-1) в физиологическом растворе, согласно настоящему изобретению.

[31] На ФИГ. 11 изображены результаты эксперимента клеточного поглощения и клеточного связывания ⁶⁸Ga-меченого комплекса FAPI-RGD (формула I-1), согласно настоящему изобретению.

[32] На ФИГ. 12 изображены результаты визуализации MicroPET ⁶⁸Ga-меченого комплекса FAPI-RGD (формула I-1), а также мономеров ⁶⁸Ga-FAPI-02 и ⁶⁸Ga-C(RGDfK) у мышей с опухолью HT1080-FAP, согласно настоящему изобретению.

[33] На ФИГ. 13 изображены статистика результатов визуализации MicroPET ⁶⁸Ga-меченого комплекса FAPI-RGD (формула I-1) после совместного введения с C(RGDfK) и/или FAPI-02 в течение 30 мин и результаты поглощения опухолями и жизненно важными органами, согласно настоящему изобретению.

[34] На ФИГ. 14 изображены результаты визуализации SPECT комплекса ¹⁷⁷Lu-FAPI-RGD, полученного в Примере 4, у мышей с опухолью HT1080-FAP, согласно настоящему изобретению.

[35] На ФИГ. 15 изображена молекулярная структура комплекса ⁶⁸Ga-меченого контрольного соединения FAPI-RGD, а также статистика результатов визуализации MicroPET контрольного соединения, после введения мышам с опухолью HT1080-FAP в течение 30 мин и 2 ч, а также результаты поглощения опухолями и жизненно важными органами.

[36] На ФИГ. 16 изображены результаты визуализации PET/CT ⁶⁸Ga-меченого комплекса FAPI-RGD (формула I-1), ¹⁸F-FDG и ⁶⁸Ga-FAPI46 после внутривенной инъекции пациентам, страдающим от рака поджелудочной железы, немелкоклеточного рака легких, мелкоклеточного рака легких и назофарингеальной карциномы, в течение 3 ч, согласно настоящему изобретению.

ОПИСАНИЕ ВАРИАНТОВ РЕАЛИЗАЦИИ

[37] Технические решения по настоящему изобретению проиллюстрированы и описаны ниже на конкретных вариантах реализации в сочетании с сопроводительными чертежами.

[38] Пример 1: Получение соединения I-1

[39] Синтез соединения 2:

[40] Соединение 1 (6-гидроксихинолин-4-карбоновая кислота, 1,89 г, 10,0 ммоль), трет-бутил глицинат (1,89 г, 10,0 ммоль), HATU (3,8 г, 10,0 ммоль) и N,N-диизопропилэтиламин (2,6 г, 20,0 ммоль) последовательно помещали в 30 мл N,N-диметилформамида в колбе объемом 100 мл, соответственно. Реакционную смесь перемешивали в течение ночи и подвергали дистилляции при пониженном давлении для удаления растворителя с получением неочищенного продукта. Очистку выполняли с помощью силикагелевой колонны (с дихлорметаном и метанолом в соотношении 30:1) с получением белого твердого соединения 2 с выходом 87%.

[41] Синтез соединения 3:

[42] Соединение 2 (1,51 г, 5,0 ммоль), 1-бром-3-хлорпропан (1,55 г, 10,0 ммоль) и карбонат калия (1,38 г, 10,0 ммоль) последовательно помещали в 50 мл N,N-диметилформамида в колбу объемом 100 мл, соответственно. Систему нагревали до температуры 60°C, перемешивали в течение ночи при температуре 60°C и подвергали дистилляции при пониженном давлении для удаления растворителя с получением неочищенного продукта. Очистку выполняли с помощью силикагелевой колонны (с дихлорметаном и метанолом в соотношении 50:1) с получением белого твердого соединения 3 с выходом 63%.

[43] Синтез соединения 4:

[44] Соединение 3 (0,76 г, 2,0 ммоль), трет-бутил 1-пиперазинкарбоксилат (0,55 г, 3,0 ммоль) и йодид калия (0,49 г, 3,0 ммоль) последовательно помещали в 30 мл ацетонитрила в колбу объемом 100 мл, соответственно. Систему нагревали до температуры 60°C, перемешивали в течение ночи при температуре 60°C и подвергали дистилляции при пониженном давлении для удаления растворителя с получением неочищенного продукта. Очистку выполняли с помощью силикагелевой колонны (с дихлорметаном и метанолом в соотношении 30:1) с получением белого твердого соединения 4 с выходом 58%.

[45] Синтез соединения 5:

[46] Соединение 4 (0,52 г, 1,0 ммоль) растворяли в 10 мл смешанного раствора дихлорметана и трифторуксусной кислоты (в объемном соотношении 9:1) в условиях ледяной ванны. Систему нагревали до комнатной температуры для проведения реакции в течение 2 ч. После завершения реакции выполняли дистилляцию при пониженном давлении для удаления растворителя, и систему растворяли в 10 мл N,N-диметилформамида с получением соединения 5 для последующего использования.

[47] Синтез соединения 6:

[48] Ди-трет-бутил карбонат (0,22 г, 1,0 ммоль) и N,N-диизопропилэтиламин (0,39 г, 3,0 ммоль) по отдельности добавляли в раствор N,N-диметилформамида соединения 5, перемешивали в течение ночи при комнатной температуре и подвергали дистилляции с пониженным давлением для удаления растворителя с получением неочищенного продукта. Очистку выполняли с помощью силикагелевой колонны (с дихлорметаном и метанолом в соотношении 10:1) с получением белого твердого соединения 6 с выходом 72%.

[49] Синтез соединения 7:

[50] Соединение 6 (0,47 г, 1,0 ммоль), (S)-пирролидин-2-карбонитрил гидрохлорид (0,13 г, 1,0 ммоль), HATU (0,38 г, 1,0 ммоль) и N,N-диизопропилэтиламин (0,26 г, 2,0 ммоль) последовательно помещали в 10 мл N,N-диметилформамида в колбу объемом 100 мл, соответственно. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре до завершения реакции и подвергали дистилляции при пониженном давлении для удаления растворителя с получением неочищенного продукта. Очистку выполняли с помощью силикагелевой колонны (с дихлорметаном и метанолом в соотношении 50:1) с получением белого твердого соединения 7 с выходом 85%. На ФИГ. 1 изображен водородный спектр ядерного магнитного резонанса соединения 7. На ФИГ. 2 изображен углеродный спектр ядерного магнитного резонанса соединения 7. На ФИГ. 3 изображена масс-спектрограмма соединения 7.

[51] Синтез соединения 8:

[52] Соединение 7 (2,50 г, 4,5 ммоль), моногидрат п-толуолсульфоновой кислоты (2,58 г, 13,6 ммоль) и 25 мл ацетонитрила добавляли в реакционную колбу для проведения реакции при температуре 65°C в течение 1 ч. В соответствии с данными слежения с помощью тонкослойной хроматографии (TLC, с метанолом и дихлорметаном в соотношении 5:1), соединение 7 прореагировало полностью. Выпаривание проводили при пониженном давлении при температуре 40°C. Добавляли 14 мл DMF и DIPEA (3,05 г, 23,6 ммоль) и перемешивали при температуре 25°C для проведения реакции, пронумерованной (1), и, иными словами, с пиперазинила соединения 7 снимали защиту с получением промежуточного соединения. N-трет-бутоксикарбонил-диполиэтиленгликоль-карбоновую кислоту (1,62 г, 4,8 ммоль), HATU (2,60 г, 6,8 ммоль) и 10 мл DMF добавляли в другую реакционную колбу для проведения реакции, пронумерованной (2), при температуре 25°C в течение 30 мин, и систему реакционного раствора реакции (2) добавляли в систему реакции (1) для проведения реакции в течение 1 ч. Выпаривание проводили при пониженном давлении при температуре 40°C. Добавляли 50 мл очищенной воды, проводили экстракцию DCM дважды, каждый раз с объемом 50 мл, и объединяли DCM. Сушку проводили с помощью безводного сульфата натрия, а также проводили фильтрацию и выпаривание с получением неочищенного продукта. Неочищенный продукт очищали с помощью колоночной хроматографии с получением 1,68 г целевого продукта. Теоретическая молекулярная масса составляет 709,3799, измеренная молекулярная масса составляет 709,38801, а результаты масс-спектрометрии соответствуют таковым целевого продукта. На ФИГ. 4 изображена масс-спектрограмма соединения 8.

[53] Синтез соединения 9:

[54] Соединение 8, моногидрат п-толуолсульфоновой кислоты (1,61 г, 8,5 ммоль) и 20 мл ацетонитрила добавляли в реакционную колбу для проведения реакции при температуре 65°C в течение 1 ч, и выпаривание проводили при пониженном давлении при температуре 40°C. Добавляли 20 мл DMF и DIPEA (1,83 г, 14,2 ммоль) и перемешивали при температуре 25°C для проведения реакции, пронумерованной (1). 5-трет-бутиловый сложный эфир Fmoc-L-глутаминовой кислоты (1,43 г, 3,4 ммоль), HATU (1,29 г, 3,4 ммоль) и 20 мл DMF добавляли в другую реакционную колбу для проведения реакции, пронумерованной (2), при температуре 25°C в течение 30 мин, и систему реакционного раствора реакции (2) добавляли в систему реакции (1) для проведения реакции в течение 1 ч. Выпаривание проводили при пониженном давлении при температуре 40°C с получением неочищенного продукта, и неочищенный продукт очищали с помощью колоночной хроматографии с получением 1,19 г целевого продукта. Теоретическая молекулярная масса составляет 1016,5008, измеренная молекулярная масса составляет 1016,51094, а результаты масс-спектрометрии соответствуют таковым целевого продукта. На ФИГ. 5 изображена масс-спектрограмма соединения 9.

[55] Синтез соединения 12:

[56] c(RGDfK) (1,00 г, 1,7 ммоль), ттрет-бутиламино-диполиэтиленгликоль-сукцинимид (0,74 г, 1,9 ммоль), DIPEA (0,44 г, 3,4 ммоль) и 20 мл DMF добавляли в реакционную колбу для проведения реакции при температуре 30°C в течение 20 ч. Выпаривание проводили при пониженном давлении при температуре 40°C, добавляли 10 мл метанола и 60 мл MTBE добавляли каплями для выпадения в осадок твердого вещества с получением промежуточного соединения 11. Проводили вакуумную фильтрацию и вакуумную сушку при температуре 40°C в течение 2 ч. Твердое промежуточное соединение 11 добавляли в реакционную колбу, добавляли 30 мл TFA и 1,5 мл очищенной воды для проведения реакции при температуре 30°C в течение 1 ч, и выполняли охлаждение до температуры 0-5°C. Каплями добавляли 200 мл MTBE и перемешивали при температуре 0-5°C в течение 30 мин, выполняли вакуумную фильтрацию, выполняли промывание с помощью MTBE, и проводили вакуумную сушку при температуре 40°C с получением продукта A, при этом теоретическая молекулярная масса составляет 762,4024, измеренная молекулярная масса составляет 762,40768, а результаты масс-спектрометрии соответствуют таковым целевого продукта. На ФИГ. 6 изображена масс-спектрограмма соединения 12.

[57] Синтез соединения 13:

[58] Соединение 9, моногидрат п-толуолсульфоновой кислоты (0,34 г, 1,8 ммоль) и 20 мл ацетонитрила добавляли в реакционную колбу для проведения реакции при температуре 65°C в течение 4 ч, и выпаривание проводили при пониженном давлении при температуре 40°C. Добавляли 20 мл DMF, DIPEA (0,36 г, 2,8 ммоль), DCC (0,14 г, 0,7 ммоль) и NHS (0,08 г, 0,7 ммоль) для проведения реакции при температуре 35°C в течение 15-20 ч с получением промежуточного соединения 10. Выполняли охлаждение до температуры 25°C, добавляли соединение 12 для проведения реакции в течение 1 ч и проводили выпаривание при пониженном давлении при температуре 40°C с получением неочищенного продукта. Неочищенный продукт очищали с помощью препаративной жидкостной хроматографии с получением 66,5 мг целевого продукта. Теоретическая молекулярная масса составляет 1704,8300, измеренная молекулярная масса составляет 1704,84518, а результаты масс-спектрометрии соответствуют таковым целевого продукта. На ФИГ. 7 изображена масс-спектрограмма соединения 13.

[59] Синтез соединения 14:

[60] Соединение 13, 0,5 мл пиперидина и 2 мл DMF добавляли в реакционную колбу для проведения реакции при температуре 25°C в течение 1 ч, каплями добавляли 10 мл этилацетата для кристаллизации и перемешивали в течение 30 мин, выполняли вакуумную фильтрацию, и твердое вещество подвергали вакуумной сушке при температуре 40°C в течение 2 ч с получением 50,8 мг продукта. Соединение 13 без Fmoc-защиты растворяли в 2 мл DMF, NOTA-ди-трет-бутил-NHS-активированный сложный эфир и DIPEA (0,010 г, 0,08 ммоль) добавляли для проведения реакции при температуре 25°C в течение 1 ч и выполняли выпаривание при пониженном давлении при температуре 40°C. Добавляли 2 мл этилацетата и 2 мл MTBE для кристаллизации, а затем перемешивали в течение 20 мин, выполняли вакуумную фильтрацию, а твердое вещество подвергали вакуумной сушке при температуре 40°C с получением 43,2 мг продукта. Теоретическая молекулярная масса составляет 1880,0196, измеренная молекулярная масса составляет 1880,0369, а результаты масс-спектрометрии соответствуют таковым целевого продукта. На ФИГ. 8 изображена масс-спектрограмма соединения 14.

[61] Синтез соединения 15:

[62] Соединение 14 и 2 мл трифторуксусной кислоты добавляли в реакционную колбу для проведения реакции при температуре 25°C в течение 1 ч, и выполняли выпаривание при пониженном давлении при температуре 40°C с получением неочищенного продукта. Неочищенный продукт очищали с помощью препаративной жидкостной хроматографии, а затем подвергали лиофилизационной сушке с получением соединения 15 с выходом 42%. Теоретическая молекулярная масса составляет 1767,8944, измеренная молекулярная масса составляет 1767,91036, а результаты масс-спектрометрии соответствуют таковым целевого продукта. На ФИГ. 9 изображена масс-спектрограмма соединения 15.

[63] Путь синтеза приведенного выше этапа является следующим.

[64] Пример 2

[65] Ссылаясь на Пример 1, способ получение в Примере 2 включает замену NOTA-ди-трет-бутил-NHS-активированного сложного эфира в приведенном выше примере на DOTA-три-трет-бутил-NHS-активированный сложный эфир с получением приведенной ниже структуры:

формула (I-2).

[66] Пример 3: Получение радиоактивного ⁶⁸Ga-меченого комплекса FAPI-RGD (формула I-1) (⁶⁸Ga-FAPI-RGD)

[67] Влажный способ: Раствор соляной кислоты приблизительно 18,5-1850 МБк ⁶⁸GaCl₃ (промытый с помощью генератора германия-галлия) добавляли в центрифужную трубку, содержащую 0,5 мл раствора уксусной кислоты-ацетата (1,0 г/л) соединения со структурой, показанной в формуле (I-1), полученного в Примере 1, для проведения реакции при температуре 37°C в течение 20 мин. Брали небольшую C18 сепарационную колонну, медленно промывали 10 мл безводного этанола, а затем промывали 10 мл воды. После разбавления 10 мл воды в сепарационную колонну добавляли меченый раствор, сначала обрабатывали 10 мл воды для удаления немеченых ионов ⁶⁸Ga, а затем промывали 0,3 мл раствора этанола 10 мМ HCl с получением ⁶⁸Ga-меченого комплекса FAPI-RGD. Промытый раствор разбавляли нормальным физиологическим раствором, а затем подвергали стерильной фильтрации с получением впрыска ⁶⁸Ga-меченого комплекса FAPI-RGD.

[68] Способ лиофилизационной сушки: Раствор соляной кислоты приблизительно 18,5-1850 МБк ⁶⁸GaCl₃ (промытый с помощью генератора германия-галлия) добавляли в высушенный лиофилизационной сушкой медицинский бокс, содержащий соединение, показанное в формуле (I-1), и перемешивали равномерно для проведения реакции при температуре 37°C в течение 20 мин. Брали небольшую C18 сепарационную колонну, медленно промывали 10 мл безводного этанола, а затем промывали 10 мл воды. После разбавления 10 мл воды в сепарационную колонну добавляли меченый раствор, сначала обрабатывали 10 мл воды для удаления немеченых ионов ⁶⁸Ga, а затем промывали 0,3 мл раствора этанола 10 мМ HCl с получением промытого раствора комплекса. Промытый раствор разбавляли нормальным физиологическим раствором, а затем подвергали стерильной фильтрации с получением впрыска ⁶⁸Ga-меченого комплекса FAPI-RGD.

[69] Пример 4: Получение радиоактивного ¹⁷⁷Lu-меченого комплекса FAPI-RGD (формула I-2) (¹⁷⁷Lu-FAPI-RGD)

[70] Получение буферного раствора со значением pH 5,5: 57,6 мг уксусной кислоты, 189 мг гентизиновой кислоты и 525 мг тригидрата ацетата натрия взвешивали и растворяли в 48 мл чистой воды, а значение pH регулировали до 5,5 с помощью раствора гидроксида натрия. 200 мкг соединения со структурой, показанной в формуле (I-2), полученного в Примере 2, полностью растворяли в 200 мкл буферного раствора со значением pH 5,5, а затем добавляли 5 мл буферного раствора со значением pH 5,5 и раствора соляной кислоты приблизительно 150 мКи ¹⁷⁷LuCl₃. Смесь равномерно встряхивали и нагревали до температуры 80°C для проведения реакции в течение 20 мин. После завершения реакции выполняли охлаждение до комнатной температуры. Реакционный раствор разбавляли нормальным физиологическим раствором, а затем подвергали стерильной фильтрации с получением впрыска комплекса FAPI-RGD, меченого 10 мКи/мл ¹⁷⁷Lu.

[71] Анализ экспериментальных примеров и эффект применения

[72] 1. Анализ стабильности ⁶⁸Ga-меченого комплекса FAPI-RGD (формула I-1)

[73] 20 мкл раствора ⁶⁸Ga-FAPI-RGD (с активностью 3,7 МБк/20 мкл), полученного в Примере 3, всасывали и добавляли в центрифужную трубку, содержащую 100 мкл нормального физиологического раствора или PBS (со значением pH 7,4) для совместной инкубации при температуре 37°C в течение 0,5 ч, 1 ч и 4 ч с получением раствора совместной инкубации. Отбирали 20 мкл раствора совместной инкубации, фильтровали с помощью 0,22 мкм фильтрационной мембраны игольчатого типа и анализировали с помощью ВЭЖХ с получением радиохимической чистоты. Результаты испытаний показаны на ФИГ. 10. ⁶⁸Ga-FAPI-RGD очевидным образом не разлагается после инкубации в нормальном физиологическом растворе и имеет радиохимическую чистоту более 99%, что свидетельствует о том, что ⁶⁸Ga-FAPI-RGD, полученный в настоящем изобретении, обладает превосходной стабильностью.

[74] 2. Анализ клеточного эксперимента с ⁶⁸Ga-меченым комплексом FAPI-RGD (формула I-1)

[75] Эксперимент клеточного поглощения ⁶⁸Ga-FAPI-RGD проводили на опухолевых клетках HT1080-FAP, и результаты испытания показаны в Части А на ФИГ. 11. ⁶⁸Ga-FAPI-RGD обладает быстрым клеточным поглощением и максимальным поглощением после инкубации в течение 30 мин, а также сохраняет подобный уровень поглощения в течение 2 ч. Кроме того, эксперимент блокирования доказывает, что клеточное поглощение ⁶⁸Ga-FAPI-RGD может частично ингибироваться C(RGDfK) или FAPI-02, и может полностью блокироваться FAPI-RGD (ссылаясь на Часть А на ФИГ. 11). Эксперимент связывания с клетками проводили на опухолевых клетках HT1080-FAP и U87MG, и результаты испытания показаны в Части В и Части С на ФИГ. 11, соответственно. В эксперименте на клетках HT1080-FAP было измерено, что ⁶⁸Ga-FAPI-RGD и ⁶⁸Ga-FAPI-02 имели значение IC₅₀ 11,17 нМ и 4,14 нМ, соответственно. В эксперименте на клетках HT1080-FAP было измерено, что ⁶⁸Ga-FAPI-RGD и ⁶⁸Ga-C(RGDfK) имели значение IC₅₀ 18,93 нМ и 11,49 нМ, соответственно. Результаты экспериментов показывают, что по сравнению с соответствующими мономерами, FAPI-RGD обладает подобной аффинностью к соответствующим рецепторам FAP и интегрина α_vβ₃.

[76] 3. MicroPET-визуализация ⁶⁸Ga-меченого комплекса FAPI-RGD (формула I) у мышей с опухолями

[77] ⁶⁸Ga-FAPI-RGD получали способом, описанным в Примере 3, а мышам с опухолью HT1080-FAP, которых группировали случайным образом, вводили 7,4 МБк ⁶⁸Ga-FAPI-RGD, ⁶8Ga-FAPI-02 и ⁶⁸Ga-C(RGDfK), соответственно, с помощью внутривенной инъекции через хвост. Затем, под анестезией изофлураном, группу ⁶⁸Ga-FAPI-RGD подвергали MicroPET-визуализации после введения в течение 0-240 мин, соответственно, а другие группы подвергали MicroPET-визуализации после введения в течение 0-120 мин, соответственно. Результаты показаны на ФИГ. 12. На ФИГ. 12, Часть A, Часть C и Часть E, показаны MicroPET-изображения проекции с максимальной плотностью мышей с опухолями HT1080-FAP (n=3) в разные моменты времени после внутривенной инъекции у трех групп мышей, соответственно, а Часть B, Часть D и Часть F показывают поглощение различными органами или тканями (например, кровью, печенью, почками, опухолями и мышцами) трех групп мышей в разные моменты времени после инъекции, соответственно, причем три количества поглощения в каждой группе соответствуют, слева направо, 0,5 ч, 1 ч и 2 ч после инъекции, соответственно. На ФИГ. 12 изображено, что в моменты времени сбора и визуализации опухоли хорошо видны, а поглощение опухолью ⁶⁸Ga-FAPI-RGD выше, чем таковое у мономеров ⁶⁸Ga-FAPI-02 и ⁶⁸Ga-C(RGDfK). Эксперимент блокирования доказывает, что ⁶⁸Ga-FAPI-RGD обладает свойством специфического связывания с интегрином α_vβ₃ и FAP in vivo. ⁶⁸Ga-FAPI-RGD и C(RGDfK) или FAPI-02 совместно инъецировали мышам с опухолями HT1080-FAP, при этом результаты MicroPET-визуализации и поглощения органами показаны на ФИГ. 13. На ФИГ. 13 четыре изображены в Части A соответствуют, слева направо, изображениям, полученным путем отдельной инъекции ⁶⁸Ga-FAPI-RGD, совместной инъекции ⁶⁸Ga-FAPI-RGD с C(RGDfK), совместной инъекции ⁶⁸Ga-FAPI-RGD с FAPI-02, и совместной инъекции ⁶⁸Ga-FAPI-RGD с C(RGDfK) и FAPI-02, соответственно; а Часть B и Часть C показывают поглощение ⁶⁸Ga-FAPI-RGD различными органами или тканями (например, кровью, печенью, почками, опухолями и мышцами) мышей, которым провели инъекции четырьмя разными способами, и соотношение мишень/не мишень, соответственно, причем четыре гистограммы каждого органа или ткани в Части B и Части C соответствуют, слева направо, четырем способам инъекции в Части A. Как можно увидеть на ФИГ. 13, совместная инъекция ⁶⁸Ga-FAPI-RGD с RGD или FAPI-02 может снизить поглощение ⁶⁸Ga-FAPI-RGD опухолями, совместная инъекция ⁶⁸Ga-FAPI-RGD с C(RGDfK) и FAPI-02 может дополнительно снизить поглощение ⁶⁸Ga-FAPI-RGD опухолями, а эксперимент с блокированием доказывает, что ⁶⁸Ga-FAPI-RGD может достигать специфического нацеливания опухолей путем связывания с интегрином α_vβ₃ и FAP in vivo.

[78] 4. SPECT-визуализация ¹⁷⁷Lu-меченого комплекса FAPI-RGD (формула II) у мышей с опухолями

[79] ¹⁷⁷Lu-FAPI-RGD получали способом в Примере 4. Мышам с опухолями HT1080-FAP вводили 37 МБк ¹⁷⁷Lu-FAPI-RGD с помощью внутривенной инъекции через хвост, соответственно. Затем, под анестезией изофлураном, мышей подвергали SPECT-визуализации после введения в течение 4 ч. Результаты показаны на ФИГ. 14. Как можно увидеть, опухоли явным образом видны после введения в течение 4 ч.

[80] 5. MicroPET-визуализация ⁶⁸Ga-меченого комплекса FAPI-RGD (контрольное соединение) у мышей с опухолями

[81] В качестве контроля, соединение, показанное на ФИГ. 15B, получали путем использования тиосукцинимидной связи, образованной малеимидом и меркаптаном, в качестве соединяющей структуры, и метили ⁶⁸Ga способом из Примера 3. Исследование MicroPET-визуализации проводили на мышах с опухолями HT1080-FAP. Результаты показаны на ФИГ. 15. На ФИГ. 15A показано, что в моменты сбора и визуализации основные радиоактивные сигналы распространяются в печени и почках, а поглощение опухолью является низким. На ФИГ. 15C также показано высокое поглощение печенью и почками и низкое поглощение опухолями. Таким образом, использование тиосукцинимидной связи в качестве соединительной структуры может привести к снижению аффинности между целевой группой и целевым рецептором, приводя к снижению поглощения органами-мишенями. Между тем, поглощение нецелевыми тканями является слишком высоким, что приводит к снижению соотношения мишень/не мишень, что с большей вероятностью может вызвать побочные реакции. Специфическая соединительная структура по настоящему изобретению может не только обеспечить высокую аффинность к рецептору, но и также обеспечить подходящие фармакокинетические свойства, тем самым гарантируя высокое абсолютное поглощение опухолями и высокое соотношение мишень/не мишень.

[82] 6. PET/CT-визуализация ⁶⁸Ga-меченого комплекса FAPI-RGD (формула I-1) у пациентов с опухолями

[83] Клиничское исследование ⁶⁸Ga-FAPI-RGD было одобрено Комитетом по этике клинических исследований первого филиала больницы Сямэньского университета, при этом все субъекты подписали форму письменного информированного согласия, в том числе пациент с раком поджелудочной железы, пациент с немелкоклеточным раком легких, пациент с мелкоклеточным раком легких и пациент с назофарингеальной карциномой. Дозу внутривенной инъекции ⁶⁸Ga-FAPI-RGD вычисляли исходя из массы тела каждого субъекта (1,8-2,2 МБк [0,05-0,06 мКи]/кг). После выполнения внутривенной инъекции в течение 3 ч получали данные с помощью гибридного PET/CT-сканера (Discovery MI, GE Health care, Milwaukee, штат Висконсин, США). Результаты визуализации показаны на ФИГ. 16. Значение максимального стандартного поглощения (SUV_max) автоматически вычисляли, используя интересующую область (ROI), нанесенную на изображение луча. Значение SUV_max ⁶⁸Ga-FAPI-RGD, нацеленного на две мишени, является выше, чем таковое у ⁶⁸Ga-FAPI-46, нацеленного на одну мишень, белок FAP, а значение SUV_max повышено приблизительно на 30-50%, что доказывает то, что дизайн с нацеливанием на две мишени может повысить количество эффективных рецепторов в опухолях и улучшить эффективность использования, тем самым улучшая поглощение опухолью.

[84] Резюмируя, структура FAPI-RGD, разработанная в рамках настоящего изобретения, обладает высокой аффинностью к мишени FAP и мишени интегрину α_vβ₃, может синергетическим образом нацеливаться на мишень FAP и мишень интегрин α_vβ₃ в опухолях, а также проявляет превосходную фармакокинетику, высокое поглощение опухолью и длительное время удержания в опухоли, что, как ожидается, будет использоваться в диагностике или лечении заболеваний, характеризующихся сверхэкспрессией FAP и/или интегрина α_vβ₃.

[85] Несмотря на то, что настоящее изобретение было подробно описано приведенным выше общим описанием, на конкретных вариантах реализации и испытаниях, специалистам в данной области техники очевидно, что могут быть реализованы некоторые модификации или улучшения настоящего изобретения. Таким образом, модификации и улучшения, реализованные без отклонения от сущности настоящего изобретения, входят в объем защиты, испрашиваемый настоящим изобретением.

Настоящее изобретение относится к областям ядерной медицины и молекулярной визуализации, и, в частности, оно относится к соединению двойного нацеливания, способу его получения и его применению. Предложено соединение двойного нацеливания формулы (I), соединение двойного нацеливания, способное к мечению радионуклидом, имеющее структуру формулы (I-1) или формулы (I-2). Соединение двойного нацеливания по настоящему изобретению обладает высокой аффинностью к мишени FAP и мишени интегрину α_vβ₃, может синергетическим образом нацеливаться на мишень FAP и мишень интегрин α_vβ₃ в опухолях, а также проявляет высокое поглощение опухолью и длительное время удержания в опухоли. Кроме того, в настоящем изобретении представлено меченное радионуклидом соединение двойного нацеливания, способ его получения и применение этого соединения в приготовлении лекарственных средств для диагностики или лечения заболеваний, характеризующихся сверхэкспрессией FAP и/или интегрина α_vβ₃. 7 н. и 4 з.п. ф-лы, 16 ил., 4 пр.

1. Соединение двойного нацеливания, структура которого одновременно содержит структуры лигандов специфического связывания FAP и интегрина α_vβ₃, при этом структура соединения показана в формуле (I) ниже

2. Соединение двойного нацеливания, способное к мечению радионуклидом, структура которого одновременно содержит структуры лигандов специфического связывания FAP и интегрина α_vβ₃, а также структуру, хелатирующую нуклид, при этом структура соединения показана в формуле (I-1) или формуле (I-2) ниже

3. Способ получения соединения двойного нацеливания, способного к мечению радионуклидом, по п. 2, включающий следующие этапы, на которых: сначала проводят реакцию конденсации амида между карбоксилом 6-гидроксихинолин-4-карбоновой кислоты и амино трет-бутил глицината; подсоединяют BOC-защищенный пиперазинил алкильной цепью в положении гидроксила продукта реакции конденсации амида; удаляют Boc и трет-бутил-защитные группы в кислых условиях и вводят Boc-защитную группу в пиперазиновое кольцо; затем проводят реакцию конденсации амида с (S)-пирролидин-2-карбонитрил гидрохлоридом; после удаления Boc-защитной группы проводят реакцию конденсации с N-Boc-3-[2-(2-аминоэтокси)этокси]пропионовой кислотой; затем удаляют Boc-защитную группу и проводят реакцию с 5-трет-бутиловым сложным эфиром Fmoc-L-глутаминовой кислоты; после удаления трет-бутилового сложного эфира получают активированный сложный эфир, а затем проводят реакцию с c(RGDfK) с амино-диполиэтиленгликолем с получением соединения двойного нацеливания; после удаления Fmoc-защитной группы проводят реакцию с агентом, хелатирующим нуклид, причем агент, хелатирующий нуклид, представляет собой 1,4,7,10-тетраазациклододекан-N,N',N,N'-тетрауксусную кислоту или 1,4,7-триазациклононан-1,4,7-триуксусную кислоту; а затем удаляют защитную группу трет-бутилового сложного эфира на хелатирующей группе с получением соединения двойного нацеливания, способного к мечению радионуклидом.

4. Меченое радионуклидом соединение двойного нацеливания, представляющее собой соединение двойного нацеливания по п. 2, содержащее радионуклид, где радионуклид выбран из изотопов, излучающих α-лучи, изотопов, излучающих β-лучи, изотопов, излучающих γ-лучи, изотопов, излучающих оже-электроны, или изотопов, излучающих рентгеновские лучи.

5. Меченое радионуклидом соединение двойного нацеливания по п. 4, в котором радионуклид выбран из любого из ¹⁸F, ⁵¹Cr, ⁶⁴Cu, ⁶⁷Cu, ⁶⁷Ga, ⁶⁸Ga, ⁸⁹Zr, ¹¹¹In, ^99mTc, ¹⁸⁶Re, ¹⁸⁸Re, ¹³⁹La, ¹⁴⁰La, ¹⁷⁵Yb, ¹⁵³Sm, ¹⁶⁶Ho, ⁸⁶Y, ⁹⁰Y, ¹⁴⁹Pm, ¹⁶⁵Dy, ¹⁶⁹Er, ¹⁷⁷Lu, ⁴⁷Sc, ¹⁴²Pr, ¹⁵⁹Gd, ²¹²Bi, ²¹³Bi, ⁷²As, ⁷²Se, ⁹⁷Ru, ¹⁰⁹Pd, ¹⁰⁵Rh, ^101mRh, ¹¹⁹Sb, ¹²⁸Ba, ¹²³I, ¹²⁴I, ¹³¹I, ¹⁹⁷Hg, ²¹¹At, ¹⁵¹Eu, ¹⁵³Eu, ¹⁶⁹Eu, ²⁰¹Tl, ²⁰³Pb, ²¹²Pb, ¹⁹⁸Au, ²²⁵Ac, ²²⁷Th или ¹⁹⁹Ag.

6. Меченое радионуклидом соединение двойного нацеливания по п. 4, в котором радионуклид выбран из ¹⁸F, ⁶⁴Cu, ⁶⁸Ga, ⁸⁹Zr, ⁹⁰Y, ¹¹¹In, ^99mTc, ¹⁷⁷Lu, ¹⁸⁸Re или ²²⁵Ac.

7. Способ получения меченого радионуклидом соединения двойного нацеливания по п. 4, включающий этапы, на которых: проводят реакцию между соединением двойного нацеливания, способным к мечению радионуклидом, по п. 2 и соединением, содержащим радионуклид, с помощью существующего мечения влажным способом или способом мечения лиофилизацией для получения меченого радионуклидом соединения двойного нацеливания.

8. Фармацевтическая композиция для лечения заболевания, характеризующегося сверхэкспрессией FAP и/или интегрина α_vβ₃, содержащая: соединение двойного нацеливания по п. 1, соединение двойного нацеливания, способное к мечению радионуклидом, по п. 2 или меченое радионуклидом соединение двойного нацеливания по п. 4.

9. Применение любого из соединения двойного нацеливания по п. 1, соединения двойного нацеливания, способного к мечению радионуклидом, по п. 2, меченого радионуклидом соединения двойного нацеливания по п. 4 или фармацевтической композиции по п. 8, в приготовлении лекарственных средств для диагностики или лечения заболеваний, характеризующихся сверхэкспрессией FAP и/или интегрина α_vβ₃, у индивидуумов-животных или индивидуумов-людей.

10. Применение по п. 9, в котором заболевания, характеризующиеся сверхэкспрессией FAP и/или интегрина α_vβ₃, включают в себя: рак, хроническое воспаление, атеросклероз или заболевания со шрамами.

11. Применение по п. 10, в котором рак выбран из рака молочной железы, рака поджелудочной железы, рака тонкой кишки, рака толстой кишки, рака прямой кишки, рака легких, рака головы и шеи, рака яичника, гепатоцеллюлярной карциномы, рака пищевода, гипофарингеальной карциномы, назофарингеальной карциномы, карциномы гортани, клеток миеломы, рака мочевого пузыря, холангиоцеллюлярной карциномы, светлоклеточной почечноклеточной карциномы, нейроэндокринных новообразований, канцерогенной остеомаляции, саркомы, рака неизвестного первичного происхождения, карциномы тимуса, глиомы, нейроглиомы, астроцитомы, рака шейки матки или рака предстательной железы.