ПРИМЕНЕНИЕ ЭКСТРАКТА PULSATILLA CHINENSIS ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ ЛЕКАРСТВЕННОГО СРЕДСТВА ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ ВИРУСНЫХ И/ИЛИ БАКТЕРИАЛЬНЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ Российский патент 2023 года по МПК A61K31/704 A61P15/14 A61P31/04 A61P31/12 

Область техники

Настоящее изобретение относится к применению экстракта Pulsatilla Chinensis для получения лекарственного средства для лечения вирусных и/или бактериальных заболеваний.

Уровень техники

Pulsatilla Chinensis (Bge.) Regel представляет собой растение пульсатилла из семейства Ranunculaceae, основной лекарственной частью которого являются его высушенные корни. Самые ранние сведения о пульсатилле встречаются в "Shen Nong's Materia Medica". Она имеет горький вкус, охлаждающие свойства и поступает в желудок, почки и сечение толстой кишки. Основные функции пульсатиллы представляют собой детумесценцию, охлаждение крови, прекращение диареи, снижение внутреннего тепла и т.д. Пульсатиллу традиционно применяют для лечения бактериальной дизентерии, а также она обладает хорошими терапевтическими эффектами при симптомах озноба и лихорадки, отека и боли в глазах. Пульсатилла обладает разнообразным фармакологическим действием, в основном для улучшения способности организма распознавать инородное тело и противостоять ему, снижать скорость пролиферации опухолевых клеток, уменьшать количество патогенных микроорганизмов и эффективно ингибировать реакцию окисления свободных радикалов. Среди них наиболее перспективным применением является разработка новых противовоспалительных и противоопухолевых лекарственных средств.

Feng Xiuzhi et al. изучал роль пульсатиллы в апоптозе клеток и полагал, что пульсатилла оказывает хорошее индукционное действие на клетки рака желудка. Кроме того, пролиферация раковых клеток и репликация ДНК связаны с активными ингредиентами пульсатиллы, которые могут подавлять рост клеток HL260 и ингибировать пролиферацию клеток рака груди (MCF-7), клеток рака легких (PG), клеток рака толстой кишки (SW480), клеток злокачественной глиомы (U87MG) и других опухолевых клеток путем индукции апоптоза. Li Wenchao et al. применил спиртовой экстракт пульсатиллы к различным патогенным бактериям и изучил антибактериальный эффект экстрактов на различных растворителях. Было обнаружено, что все эти экстракты обладают антибактериальным действием, хотя эффекты различаются.

Мастит дойных коров является одной из трех основных болезней коров, признанных в мире. Он часто возникает в период лактации. Основной причиной его возникновения является патогенная микробная инфекция. Другие причины включают неправильное доение, механические повреждения, вызванные травмами, и повреждения, вызванные химическими реагентами. Мастит дойных коров не только влияет на производство молока и вызывает экономические потери, но также влияет на качество молока и вредит здоровью человека.

Мастит дойных коров можно разделить на две основные категории: латентный мастит и клинический мастит. Клинический мастит проявляется явными клиническими симптомами и видимыми изменениями в молоке и может быть разделен на три степени в зависимости от степени начала: 1 степень: ненормальное молоко; 2 степень: ненормальное молоко, вымя становится горячим, болезненным и увеличенным; 3 степень: ненормальное молоко, вымя становится горячим, болезненным и увеличенным, у коров проявляются симптомы системной инфекции. Клинический мастит в настоящее время является основной целью лечения в клинической практике. При выявлении у коров клинического мастита необходимо изолирующее лечение. Латентный мастит, также известный как субклинический мастит, является наиболее распространенным типом мастита у дойных коров. Этот тип мастита обычно не имеет клинических симптомов, разницу между молоком при нем и нормальным молоком нельзя отличить невооруженным глазом, и для диагностики требуются лабораторные реактивы. Кроме того, если этот тип мастита не достигает определенной доли в стаде, его обычно не лечат. Из-за скрытой заболеваемости латентный мастит дойных коров вызывает очень серьезные экономические потери.

В настоящее время для лечения мастита дойных коров в основном применяют такие способы как инфузия в вымя и внутривенная инъекция, и применяемые терапевтические лекарственные средства представляют собой в основном антибиотики, такие как цефкином, энрофлоксацин, пенициллин, стрептомицин и тому подобные. Однако длительное применение антибиотиков имеет тенденцию вызывать устойчивость к лекарственным средствам и влияет на лечебный эффект; в то же время, когда для лечения применяют антибиотики, остатки антибиотиков легко загрязняют источники молока и представляют опасность для здоровья человека. Стоит отметить, что, если мастит является грамотрицательной бактериальной инфекцией, применение лактамных антибиотиков вызывает разрушение клеточной стенки и выделение эндотоксина, вызывая покраснение, отек, жар и боль во всей области вымени, что усугубит состояние. Поэтому очень важно найти безопасный и эффективный способ лечения мастита у дойных коров.

В настоящее время нет сведений о применении соединений согласно настоящему изобретению для лечения вирусного и/или бактериального мастита у дойных коров.

Краткое описание изобретения

Для решения указанной выше технической проблемы в настоящем изобретении предложено применение соединения сапонина B4 пульсатиллы, представленного формулой I, или его фармацевтически приемлемой соли для получения лекарственного средства для лечения вирусных и/или бактериальных заболеваний:

В дополнительном аспекте лекарственное средство представляет собой состав, полученный из вышеуказанного соединения сапонина B4 пульсатиллы или его фармацевтически приемлемой соли в качестве активного ингредиента и фармацевтически приемлемых вспомогательных веществ.

В дополнительном аспекте состав представляет собой инъекцию, интрамаммарную инфузию, порошок, мазь, лосьон; предпочтительно состав для инъекции, интрамаммарной инфузии; более предпочтительно состав представляет собой инъекцию.

В другом аспекте заболевание представляет собой мастит дойных коров.

В дополнительном аспекте мастит дойных коров представляет собой клинический мастит, латентный мастит.

В дополнительном аспекте клинический мастит представляет собой клинический мастит, который лечат впервые, стойкий клинический мастит, т.е. клинический мастит, который лечили в течение длительного времени, но не излечили.

В настоящем изобретении также предложено лекарственное средство для лечения вирусных и/или бактериальных заболеваний, которое представляет собой состав, полученный из вышеуказанного соединения сапонина B4 пульсатиллы или его фармацевтически приемлемой соли в качестве активного ингредиента и фармацевтически приемлемых вспомогательных материалов.

В дополнительном аспекте состав представляет собой инъекцию, интрамаммарную инфузию, порошок, мазь, лосьон; предпочтительно состав представляет собой инъекцию, интрамаммарную инфузию; более предпочтительно состав представляет собой инъекцию.

В другом аспекте заболевание представляет собой мастит дойных коров.

В дополнительном аспекте мастит дойных коров представляет собой клинический мастит, латентный мастит; предпочтительно, клинический мастит представляет собой клинический мастит, который лечат впервые, стойкий клинический мастит.

Экстракт пульсатиллы, предложенный в настоящем изобретении, представляет собой соединение сапонин B4 пульсатиллы, и его название на английском языке представляет собой Анемозид B4. Его номер CAS 129741-57-7, молекулярная формула C₅₉H₉₆O₂₆, молекулярная масса 1221,38, и он представляет собой белый кристаллический порошок.

В настоящее время для лечения мастита в основном применяют антибиотики. Среди них чаще применяют дезинфицирующие и повреждающие нуклеиновые кислоты клетки антибиотики широкого спектра действия. Во время лечения и через 4-5 дней после лечения молоко необходимо выбрасывать, что приводит к большим экономическим потерям для фермеров и риску возникновения лекарственной устойчивости. Сапонин B4 пульсатиллы представляет собой натуральный активный ингредиент, извлеченный из китайской лекарственной травы пульсатиллы, не является токсичным и не вызывает устойчивости к лекарственным средствам. Соединение сапонин B4 пульсатиллы согласно настоящему изобретению обладает сильной биологической активностью и превосходным терапевтическим эффектом при мастите дойных коров. Нет необходимости выбрасывать молоко во время лечения и в конце лечения, что не только снижает экономические потери фермеров, но и снижает риск возникновения лекарственной устойчивости. Кроме того, сапонин B4 пульсатиллы не только обладает превосходным терапевтическим эффектом при клиническом мастите, но также обладает превосходным терапевтическим эффектом при стойком клиническом мастите и латентном мастите. В то же время инъекция сапонина пульсатиллы обладает такими преимуществами, как безопасность, высокая эффективность, отсутствие остатков, отсутствие лекарственной устойчивости и отсутствие токсических и побочных эффектов при лечении мастита дойных коров.

Очевидно, что в соответствии с вышеуказанным содержанием настоящего изобретения, в соответствии с обычными техническими знаниями и традиционными техническими средствами в данной области техники, различные формы модификации, замены или изменения могут быть выполнены без отступления от вышеуказанной основной технической идеи настоящего изобретения.

Вышеуказанное содержание настоящего изобретения будет дополнительно подробно описано ниже посредством конкретных вариантов реализации в форме примеров. Однако не следует толковать, что объем вышеуказанного предмета настоящего изобретения ограничивается следующими примерами. Все технологии, реализованные на основе вышеуказанного содержания настоящего изобретения, входят в объем настоящего изобретения.

Краткое описание чертежей

На фигуре 1 представлена стандартная кривая для определения содержания сапонина B4 пульсатиллы.

На фигуре 2 представлено сравнение молока коров, страдающих клиническим маститом, до и после лечения инъекцией сапонина B4 пульсатиллы.

На фигуре 3 представлено сравнение молока коров, страдающих клиническим маститом, до и после лечения инъекцией сапонина B4 пульсатиллы.

На фигуре 4 показан результат лечения коровы №8558, которую лечили в течение длительного времени, но не вылечили.

На фигуре 5 показан результат лечения коров с латентным маститом.

Варианты реализации

Пример 1. Получение соединения согласно настоящему изобретению

Отбирали 100 кг лекарственного материала пульсатиллы, добавляли 10-кратное количество 70% этанола и дважды экстрагировали путем нагревания и кипячения с обратным холодильником. Экстракт концентрировали при пониженном давлении при 75°C, центрифугировали при 4000 об/мин в течение 10 минут. Супернатант пропускали через колонку с полярной макропористой адсорбционной смолой, и затем последовательно элюировали водой, 30% этанолом и 70% этанолом. Фракцию, элюируемую 70% этанолом, концентрировали при пониженном давлении при 75°C, а затем сушили распылением с получением 3450 г общего экстракта сапонинов пульсатиллы. После растворения экстракта в воде и фильтрации фильтрат загружали в динамическую аксиальную препаративную хроматографическую систему 200 (заполненную 10 мкм ODS), элюировали 50% метанолом, соответствующий элюент собирали в соответствии с хроматографическим пиком, концентрировали при пониженном давлении и лиофилизировали с получением 1700 г сапонина B4 пульсатиллы.

Пример 2. Определение содержания соединения согласно настоящему изобретению

1. Инструменты и реагенты

Высокоэффективный жидкостный хроматограф Agilent 1260 и ультрафиолетовый детектор DAD были приобретены у Agilent Technologies (China) Co., Ltd., электронные аналитические весы BP211D были приобретены у немецкой компании Sartorius, а ультразвуковой очиститель с цифровым программным управлением KQ-400DB был приобретен у Kunshan Ultrasonic Instrument Co., Ltd.

Образец сапонина B4 пульсатиллы, приготовленный в примере 1.

Стандартное вещество сапонин B4 пульсатиллы (номер партии: 111766-201702, содержание: 94,7%) было приобретено в Национальном институте контроля пищевых продуктов и лекарственных средств.

2. Условия хроматографии

Хроматографическая колонка: Sepax Bio-C18 (4,6×250 мм, 5 мкм); подвижная фаза: метанол-вода (64:36); длина волны детектирования: 201 нм; скорость потока: 1,0 мл/мин.

3. Приготовление раствора стандартного вещества

Точно взвешивали необходимое количество стандартного вещества сапонина B4 пульсатиллы, помещали его в мерную колбу объемом 10 мл, добавляли подвижную фазу для растворения и доводили объем до метки, чтобы получить раствор стандартного вещества (содержащий 1 мг мл сапонина B4 пульсатиллы).

4. Приготовление раствора образца

Точно взвешивали 10 мг образца сапонина B4 пульсатиллы, полученного в примере 1, помещали его в мерную колбу на 10 мл, добавляли подвижную фазу для растворения и доводили объем до метки, чтобы получить раствор образца.

5. Определение

Точно отмеряли по 20 мкл раствора стандарта и раствора образца, вводили их в жидкостной хроматограф, регистрировали хроматограмму и рассчитывали содержание в соответствии с методом внешнего стандарта.

6. Кривая стандарта и уравнение линейной регрессии

Отбирали стандартное вещество сапонина B4 пульсатиллы, точно взвешивали и помещали его в мерную колбу на 10 мл, добавляли подвижную фазу для растворения, доводили объем до метки, чтобы приготовить растворы стандартного вещества с концентрацией примерно 1 мг/мл, 5 мг/мл, 10 мг/мл, 15 мг/мл и 20 мг/мл соответственно. Точно отмеряли 20 мкл каждого раствора, вводили его в жидкостный хроматограф и регистрировали хроматограмму.

Таблица 1. Уравнение линейной регрессии для определения содержания стандартного вещества сапонина B4 пульсатиллы

Образец Концентрация (мг/мл) Площадь пика Уравнение регрессии 1 0,98488 115,7 Y=100,07+10,721
R=0,9999 2 4,92440 529,5 3 9,84880 1057,8 4 14,77320 1560,3 5 19,69760 2097,9

Из экспериментальных результатов видно, что сапонин B4 пульсатиллы имеет хорошую линейную зависимость в диапазоне концентраций 1,04-20,80 мг/мл, R = 0,9999 и подходит для определения содержания сапонина B4 пульсатиллы.

7. Определение содержания сапонина B4 пульсатиллы в образце

В соответствии со способом, описанным в пункте «3» выше, точно взвешивали 2 части стандартного вещества сапонина B4 пульсатиллы, по 10 мг каждой, помещали его в мерную колбу на 10 мл, добавляли подвижную фазу для растворения и доводили объем до метки для получения стандартного раствора 1 и стандартного раствора 2.

В соответствии со способом, описанным в пункте «4» выше, точно взвешивали 2 части образца сапонина B4 пульсатиллы, по 10 мг каждой, помещали его в мерную колбу на 10 мл, добавляли подвижную фазу для растворения и доводили объем до метки для получения раствора образца 1 и раствора образца 2.

В соответствии с указанными выше условиями хроматографии точно отмеряли 20 мкл каждого раствора, вводили его в жидкостный хроматограф и регистрировали хроматограмму.

Таблица 2. Результаты определения содержания сапонина B4 пульсатиллы

Образец Масса (мг) Площадь пика Конц. (мг/л) Содержание (%) Среднее содержание (%) Стандартный раствор 1 10,22 1039,6 0,968 // // 1044,4 Стандартный раствор 2 10,05 1025,6 0,952 // // 1022,5 Раствор образца 1 10,13 1081,8 1,013 99,7 99,4 1092,6 Раствор образца 2 10,10 1075,1 1,010 99,1 1079,2

Согласно результатам испытаний, содержание сапонина B4 пульсатиллы, полученное в данном эксперименте, составило 99,4%.

Пример 3. Получение инъекции сапонина B4 пульсатиллы

1) Состав: 1000 мл раствора для инъекций, приготовленного из 50 г сапонина B4 пульсатиллы с водой.

2) Способ получения: Взвешивали 50 г сапонина B4 пульсатиллы, полученного в примере 1, добавляли 800 мл воды для инъекций для его полного растворения, фильтровали, доводили pH до 7,0, добавляли воду для инъекций до объема 1000 мл, фильтровали на фильтре тонкой очистки, помещали в емкость, закрывали и стерилизовали при 100°С в течение 30 мин.

Пример 4. Получение порошка сапонина B4 пульсатиллы

1) Состав: 1000 г порошка получали из 1000 г сапонина B4 пульсатиллы.

2) Способ получения: Взвешивали 1000 г сапонина B4 пульсатиллы, полученного в примере 1, измельчали в мелкий порошок, пропускали через сито 100 меш и хорошо перемешивали.

Пример 5. Получение интрамаммарной инфузии сапонина B4 пульсатиллы

1) Состав: 1000 мл интрамаммарной инфузии получали из 50 г сапонина B4 пульсатиллы.

2) Способ получения: Взвешивали 50 г сапонина B4 пульсатиллы, полученного в примере 1, добавляли 800 мл дистиллированной воды для его полного растворения, фильтровали, доводили pH до 7,0, добавляли дистиллированную воду до объема 1000 мл, фильтровали на фильтре тонкой очистки, помещали в емкость, закрывали, стерилизовали при 100°С в течение 30 мин.

Благоприятные эффекты настоящего изобретения будут описаны ниже посредством экспериментальных примеров.

Экспериментальный пример 1. Влияние различных путей введения соединения согласно настоящему изобретению на терапевтический эффект при лечении мастита дойных коров

В настоящее время пути введения для лечения мастита включают инфузию в вымя, внутримышечную инъекцию и внутривенную инъекцию.

Среди них инфузия в вымя представляет собой наиболее распространенный путь введения. Лекарственные средства вводят непосредственно в пораженную область вымени через соски для достижения эффекта местного применения и прецизионной терапии. В настоящее время существует множество коммерческих фармацевтических лекарственных средств для инфузии в вымя, таких как Aonaikang ( интрамаммарная инфузия сульфата цефкинома) от Eastern Along Pharmaceutical Co., Ltd., Ruchang (инъекция цефотифура) от Pfizer и т. д.

Внутримышечная инъекция заключается во введении лекарственных средств в мышечную ткань животных, чтобы лекарственные средства достигли пораженной области вымени через кровоток и оказали терапевтический эффект. Внутримышечная инъекция проста в применении и может в определенной степени контролировать симптомы системного воспаления и лихорадки, вызванные маститом.

Внутривенная инъекция заключается в введении лекарственного средства непосредственно в венозную кровь животного, чтобы лекарственное средство попало в пораженную область вымени через кровоток. При внутривенной инъекции лекарственное средство быстро достигает места действия и может лечить системные симптомы. Однако внутривенная инъекция предъявляет определенные требования к свойствам лекарственного средства, который не может представлять собой суспензию и иметь незначительное раздражение кровеносных сосудов. Bayer (Германия) рекомендует лечение мастита путем внутривенного введения своего продукта Baytrli (энрофлоксацин), который может достигать более высокой концентрации в пораженной области вымени и оказывать в ней терапевтический эффект, и в то же время может контролировать системные инфекции.

Три вышеуказанных пути введения для лечения мастита дойных коров имеют свои преимущества и недостатки. Этот эксперимент направлен на изучение терапевтического эффекта сапонина B4 пульсатиллы на мастит дойных коров и определение наиболее подходящего пути введения. Результаты данного исследования послужат важной информацией о том, как добиться наилучшего терапевтического эффекта сапонина B4 пульсатиллы, и для будущей разработки и упаковки лекарственного средства.

1. Тестируемые лекарственные средства

Инъекция сапонина B4 пульсатиллы, полученная в примере 3, в концентрации 50 мг/мл; интрамаммарная инфузия сапонина B4 пульсатиллы, полученная в примере 5, в концентрации 50 мг/мл.

Положительный контроль: Интрамаммарная инфузия сульфата цефкинома, 8 г/единица (Eastern Along Pharmaceutical Co., Ltd., Nanhai, Foshan).

2. Тестируемые животные

Были отобраны 130 больных коров (клинический мастит 2 степени) и случайным образом разделены на 13 групп по 10 коров в каждой группе.

3. Дозировка и режим введения

Таблица 3. Дозировка и режим введения

Группа Дозировка (мл/пораженная область вымени/время) Режим введения Группа холостого контроля Нормальный физиологический раствор / Группа положительного контроля 1 единица Внутрипротоковая инфузия Инъекция сапонина B4 пульсатиллы, внутримышечная инъекция, группа низкой дозы 10 Внутримышечная инъекция Инъекция сапонина B4 пульсатиллы, внутримышечная инъекция, группа средней дозы 20 Внутримышечная инъекция Инъекция сапонина B4 пульсатиллы, внутримышечная инъекция, группа высокой дозы 30 Внутримышечная инъекция Инъекция сапонина B4 пульсатиллы, внутривенная инъекция, группа низкой дозы 40 Внутривенная инъекция Инъекция сапонина B4 пульсатиллы, внутривенная инъекция, группа средней дозы 60 Внутривенная инъекция Инъекция сапонина B4 пульсатиллы, внутривенная инъекция, группа высокой дозы 80 Внутривенная инъекция Интрамаммарная инфузия сапонина B4 пульсатиллы, группа низкой дозы 20 Внутрипротоковая инфузия Интрамаммарная инфузия сапонина B4 пульсатиллы, группа средней дозы 30 Внутрипротоковая инфузия Интрамаммарная инфузия сапонина B4 пульсатиллы, группа высокой дозы 40 Внутрипротоковая инфузия

Введение посредством внутримышечной инъекции в пораженную область вымени: инъекцию сапонина B4 пульсатиллы применяли для местной внутримышечной инъекции в пораженную область вымени один раз каждое утро и вечер в течение 7 дней;

Введение посредством внутривенной инъекции: сапонин B4 пульсатиллы вводили внутривенно один раз в день в течение 7 дней;

Введение интрамаммарной инфузии: интрамаммарную инфузию сапонина B4 пульсатиллы и положительный контроль (интрамаммарная инфузия цефкинома сульфата) вводили посредством внутрипротоковой инфузии в пораженную область вымени один раз каждое утро и вечер в течение 7 дней.

Для каждого пути введения сапонина В4 пульсатиллы согласно настоящему изобретению обеспечивали группу холостого контроля, которой вводили физиологический раствор в том же объеме.

4. Руководство по оценке

Перед каждым введением проверяли температуру тела коровы, дыхание, психическое состояние, статус кормления и другие показатели для наблюдения изменений в вымени и молоке.

Полное излечение: Клинические симптомы, такие как покраснение, отек, жар и боль в пораженной области вымени, полностью исчезли, и лактация восстановилась до нормального уровня.

Клиническое излечение: Клинические симптомы, такие как покраснение, отек, жар и боль в пораженной области вымени, по существу исчезли, и лактация практически восстановилась до нормального уровня.

Отсутствие эффекта: Отсутствие значительного улучшения или даже ухудшения клинических симптомов в пораженной области вымени или рецидив в течение двух недель после отмены лекарственного средства, оба следует считать отсутствием эффекта.

Степень излечения рассчитывали следующим образом:

Степень излечения

5. Результаты

Таблица 4. Степень излечения и время излечения мастита дойных коров, получавших лечение посредством различных путей введения

Группа Степень излечения (%) Время излечения Группа холостого контроля 0 / Группа положительного контроля 60 5-7 Инъекция сапонина B4 пульсатиллы, внутримышечная инъекция, группа низкой дозы 50 5-7 Инъекция сапонина B4 пульсатиллы, внутримышечная инъекция, группа средней дозы 60 5-6 Инъекция сапонина B4 пульсатиллы, внутримышечная инъекция, группа высокой дозы 80 4-6 Инъекция сапонина B4 пульсатиллы, внутривенная инъекция, группа низкой дозы 40 5-7 Инъекция сапонина B4 пульсатиллы, внутривенная инъекция, группа средней дозы 60 5-6 Инъекция сапонина B4 пульсатиллы, внутривенная инъекция, группа высокой дозы 70 4-7 Интрамаммарная инфузия сапонина B4 пульсатиллы, группа низкой дозы 40 6-7 Интрамаммарная инфузия сапонина B4 пульсатиллы, группа средней дозы 50 5-6 Интрамаммарная инфузия сапонина B4 пульсатиллы, группа высокой дозы 70 4-7

Общая степень излечения и время излечения сапонином B4 пульсатиллы, вводимым различными путями, показаны в таблице 4: Все способы введения оказывают значительный эффект на лечение мастита дойных коров, и степень излечения в группе высокой дозы при каждом способе введения выше, чем для положительного контроля (интрамаммарная инфузия цефкинома сульфата). Среди них внутримышечная инъекция сапонина B4 пульсатиллы имеет наилучший лечебный эффект и самый короткий период лечения.

Экспериментальный пример 2. Исследование сапонина B4 пульсатиллы согласно настоящему изобретению для лечения клинического мастита

1. Тестируемые лекарственные средства

Инъекция сапонина B4 пульсатиллы, полученная способом получения согласно примеру 3, в концентрации 50 мг/мл;

Контрольное лекарственное средство: Инъекция SHUANGDING (10 мл/единица, номер партии: DV3180701), Hebei Yuanzheng Pharmaceutical Co., Ltd.

2. Тестируемые животные

Отбирали 60 коров китайской голштинской породы массой приблизительно 612±47 кг, возрастом 3-5 лет, количеством родов 2-4, здоровых при клиническом обследовании и с клиническим маститом, возникшим естественным путем в период лактации, и случайным образом разделяли их на 5 групп, по 12 в каждой группе.

3. Способ тестирования

3.1 Дозировка и режим введения

Таблица 5. Дозировка и режим введения

Группа Дозировка (мл/кг массы тела) Режим введения Группа холостого контроля Нормальный физиологический раствор Внутримышечная инъекция Группа положительного контроля 0,1 Внутримышечная инъекция Инъекция сапонина B4 пульсатиллы, внутримышечная инъекция, группа низкой дозы 0,025 Внутримышечная инъекция Инъекция сапонина B4 пульсатиллы, внутримышечная инъекция, группа средней дозы 0,05 Внутримышечная инъекция Инъекция сапонина B4 пульсатиллы, внутримышечная инъекция, группа высокой дозы 0,1 Внутримышечная инъекция

После начала тестирования коров, день перед введением регистрировали как D0. Рассчитывали дозируемое количество на основе массы тела в соответствии с заранее разработанным дозируемым веществом и дозировкой (таблица 5). Начиная с дня D1, каждой группе коров с клиническим маститом вводили тестируемое лекарственное средство (инъекция сапонина B4 пульсатиллы) или контрольное лекарственное средство (инъекция SHUANGDING) посредством внутримышечной инъекции один раз в день в течение 4-7 дней, в зависимости от излечения заболевания. Осуществляли наблюдение за клиническими симптомами коров в каждой группе до и после введения лекарственного средства (D0~D12), оценивали в соответствии со стандартом (более подробно см. в таблице 6) и регистрировали дозировку. В конце испытания (D12) на основании результатов наблюдения за вышеуказанными показателями оценивали терапевтический эффект для каждой коровы в соответствии со стандартом, и рассчитывали степень излечения и степень эффективности для каждой группы коров.

3.2 Стандарт оценки клинических симптомов дойных коров с клиническим маститом

В D0 (после выявления клинического мастита перед введением), D1 (после первого введения, перед вторым введением), D2~D7 (излеченные коровы прекращают получать лекарственное средство, и неизлеченные коровы продолжают получать лекарственное средство), D8~D12 (все коровы прекращают получать лекарство), регулярно проверяли клинические симптомы и симптомы, касающиеся вымени, каждой коровы, такие как психическое состояние, аппетит и питье и т.д., и выставляли оценку в соответствии со следующей таблицей (см. таблицу 6). Регистрировали клинические симптомы (оценка местных симптомов, касающихся вымени).

Таблица 6. Стандарт оценки клинических симптомов дойных коров с клиническим маститом

Наблюдения Оценка Стандарт оценки Психическое состояние 0 Хорошее 1 Немного хуже 2 Возбужденное или подавленное 3 Лежит на полу или даже без сознания Аппетит и питье 0 Хороший аппетит; умеренное питье 1 Немного сниженный прием пищи; немного сниженное или увеличенное питье 2 Значительно сниженный прием пищи; значительно сниженное или увеличенное питье 3 Потеря аппетита; пьет много воды или отказывается от питья Объем лактации 0 Нормальная выработка молока 1 Сниженная выработка молока 2 Значительно сниженная выработка молока 3 Почти полное прекращение лактации Качество молока 0 Нормальное качество молока 1 Молоко имеет незначительное количество хлопьев и комков 2 Много комков в молоке 3 Молоко имеет следы крови, гной и очевидный запах Местные симптомы, касающиеся вымени 0 Нормальное 1 Небольшое покраснение и припухлость, без явной тепловой болевой реакции при пальпации 2 Среднее покраснение и припухлость, с тепловой болевой реакции при пальпации 3 Большое покраснение и припухлость, с явной тепловой болевой реакцией при пальпации

3.3 Способ определения количества соматических клеток в коровьем молоке

Собирали молоко коров, страдающих клиническим маститом, на D0, D7 и D12 теста, определяли и регистрировали количество соматических клеток.

3.4 Оценка эффективности

Проводили по оценке обследования клинических симптомов

Суточная степень излечения в дни 2-7: Начиная с D2, если корова, страдающая маститом, соответствовала «сумме оценок <1», ее считали излеченной. Суточная степень излечения в дни 2-7=; степень излечения в течение 7 дней представляет собой сумму суточных степеней излечения при лечении в дни 2-7.

Суточная степень эффективности в дни 2-7: Начиная с D2, если корова, страдающая маститом, соответствовала «1 ≤ сумма оценок ≤ 2», лечение считали эффективным. Суточная степень эффективности лечения в дни 2-7=; степень эффективности в течение 7 дней представляет собой сумму суточных степеней эффективности при лечении в дни 2-7.

Частота рецидивов: В течение периода с D5 по D12, если больная корова, признанная успешно вылеченной, после отмены лекарственного средства соответствовала «сумме оценок > 2», это рассматривали как рецидив. Частота рецидивов=.

Степень излечения в день 12 (общая степень излечения): В D12, если корова, страдающая маститом, соответствовала «сумме оценок <1», ее считали излеченной в день 12. Степень излечения в день 12=.

Степень эффективности лечения в день 12 (общая степень эффективности): В D12, если корова, страдающая маститом, соответствовала «1 ≤ сумма оценок ≤ 2», лечение считали эффективным. Степень эффективности в день 12=.

С применением степени излечения в качестве основного индикатора и эффективности, оценки клинических симптомов и количества соматических клеток в качестве вторичных индикаторов, в полном объеме оценивали терапевтический эффект тестируемого лекарственного средства (инъекция сапонина B4 пульсатиллы) на клинический мастит у инфицированных естественным образом коров, и сравнивали его с терапевтическим эффектом контрольного лекарственного средства (инъекция SHUANGDING) для определения клинической рекомендуемой дозировки тестируемого лекарственного средства.

4. Результаты тестирования

4.1 Результаты лечения коров с клиническим маститом в каждой группе

Из таблицы 7 видно, что при применении инъекции сапонина B4 пульсатиллы для лечения клинического мастита дойных коров, независимо от низкой, средней и высокой дозы, степень излечения за 7 дней и общая степень излечения выше таковых для контрольной группы, в которой применяли инъекцию SHUANGDING, и среднее время излечения меньше, чем в контрольной группе, что указывает на то, что инъекция сапонина B4 пульсатиллы превосходит инъекцию SHUANGDING в лечении клинического мастита. Общая степень излечения в группе высокой дозы выше, чем в группах средней и низкой доз. Общая степень излечения в группе средней дозы является такой же, как и в группе низкой дозы, но рецидивы отсутствуют, а среднее время излечения меньше, чем в группе низкой дозы, что демонстрирует определенный дозозависимый эффект.

Таблица 7. 4.1 Результаты терапевтических эффектов для коров с клиническим маститом в каждой группе

Группа Степень излечения за 7 дней Частота рецидивов Общая степень излечения Общая степень эффективности Среднее время излечения Группа низкой дозы 83,33% 8,33% 75,00% 100% 6,33 дней Группа средней дозы 66,67% 0 75,00% 100% 6,11 дней Группа высокой дозы 75,00% 0 91,67% 100% 6,91 дней Контрольная группа 41,67% 0 58,33% 66,67% 7,00 дней

4.2 Оценка обследования клинических симптомов дойных коров с маститом в каждой группе

Из таблицы 8 видно, что оценка обследования клинических симптомов дойных коров с маститом в группе низкой дозы существенно не различалась между D0-D4 и D5-D12 (p>0,05), но значительно различалась между D5-D12 и D0-D2, между D7-D12 и D0-D4 (p<0,05), что указывает на то, что в группе низкой дозы у коров с маститом значительно улучшилось состояние на D5 и значительное количество излечилось на D7. Оценка обследования клинических симптомов дойных коров с маститом в группе средней дозы существенно не различалась между D0-D1, между D2-D5 и между D4-D12 (p>0,05), но значительно различалась между D3-D12 и D0-D2, между D6-D12 и D0-D3 (p<0,05), что указывает на то, что в группе средней дозы у коров наблюдалось значительное улучшение на D3 и значительное количество излечилось на D6. Оценка обследования клинических симптомов у дойных коров с маститом в группе высокой дозы существенно не различалась между D0-D3, между D1-D5, между D3-D6 и между D7-D12 (p>0,05), но значительно различалась между D4-D12 и D0, между D6-D12 и D0-D2, и между D7-D12 и D0-D6 (p<0,05), что указывает на то, что в группе высокой дозы у коров с маститом, как правило, улучшение началось в D4, количество излеченных коров значительно увеличилось на D6, и несколько коров излечилось на D7. Оценка обследования клинических симптомов у дойных коров с маститом в контрольной группе существенно не различалась между D0-D4, D2-D6 и D3-D12 (p>0,05), но значительно различалась между D5-D12 и D0-D4 и между D7-D12 и D0-D6 (p<0,05), что указывает на то, что в контрольной группе у коров наблюдалось улучшение на D5, и определенное количество коров излечилось на D7.

Оценка обследования клинических симптомов в группе средней дозы на D0 была значительно выше, чем в группе низкой дозы и в группе высокой дозы (p<0,05), указывая на то, что заболевание у коров в группе средней дозы было более тяжелым; оценка клинических симптомов в группе средней дозы на D1 была значительно выше, чем в других 3 группах (p<0,05), оценка клинических симптомов в группе средней дозы на D2 была значительно выше, чем в группе низкой дозы и в группе высокой дозы (p<0,05), что указывает на то, что на ранней стадии лечения группа средней дозы оказывает очевидный эффект на улучшение клинических симптомов у коров с маститом; различия в оценке обследования клинических симптомов у коров между четырьмя группами на D3-D5 и D7 не были значительными (p>0,05); оценка обследования клинических симптомов у коров в контрольной группе на D12 была значительно выше, чем у коров в группе высокой дозы (p<0,05), что указывает на то, что терапевтический эффект в контрольной группе уступает таковому в группе, получавшей лечение с помощью пульсатиллы.

Таблица 8. Оценка обследования клинических симптомов дойных коров в каждой группе

G N D0 D1 D2 D3 D4 D5 D6 D7 D12 L 12 1,58±0,67^A_B 1,42±0,51^A_B 1,17±0,58^AB_B 1,08±0,29^AB_A 1,08±0,29^AB_A 0,83±0,58^BC_A 0,83±0,83^BC_AB 0,33±0,89^C_A 0,50±1,00^C_AB M 12 2,92±2,11^A_A 2,67±1,61^A_A 2,17±1,11^AB_A 1,42±0,90^B_A 1,08±0,67^BC_A 1,00±0,74^BC_A 0,50±0,52^C_B 0,33±0,49^C_A 0,25±0,45^C_AB H 12 1,50±0,67^A_B 1,33±0,65^AB_B 1,42±0,67^AB_B 1,17±0,58^ABC_A 1,00±0,43^BC_A 1,00±0,60^BC_A 0,83±0,58^C_AB 0,33±0,65^D_A 0,08±0,29^D_B C 12 2,08±0,67^A_AB 1,83±0,72^AB_B 1,75±0,75^AB_AB 1,50±0,67^ABC_A 1,42±0,90^ABC_A 1,33±0,78^BC_A 1,17±0,83^BC_A 0,92±1,00^C_A 0,92±1,24^C_A

Примечание: «G» обозначает «группа», «N» обозначает «количество коров», «L» обозначает «группу низкой дозы», «M» обозначает «группу средней дозы», «H» обозначает «группу высокой дозы»; «C» обозначает «контрольную группу»; и

В той же строке верхние индексы с разными заглавными буквами указывают на существенные различия (p<0,05), а верхние индексы с одинаковыми заглавными буквами указывают на отсутствие существенных различий (p>0,05); в том же столбце нижние индексы с разными заглавными буквами указывают на существенные различия (p<0,05), а индексы с одинаковыми заглавными буквами указывают на отсутствие существенных различий (p>0,05). То же самое относится к таблице ниже.

4.3 Результаты обнаружения соматических клеток в коровьем молоке в каждой группе

Таблица 9. Результаты обнаружения соматических клеток в молоке излеченных коров в каждой группе (10⁴/мл)

Группа Количество коров D0 D7 D12 Группа низкой дозы 9 255,8±38,9^A_A 90,5±55,8^B_AB 47,5±35,6^B_AB Группа средней дозы 9 244,6±42,0^A_A 65,8±51,5^B_B 38,1±23,0^B_B Группа высокой дозы 11 310,6±132,4^A_A 182,3±151,7^B_A 48,8±58,9^C_AB Контрольная группа 7 267,9±123,7^A_A 180,7±119,2^A_A 88,8±67,4^B_A

Из таблицы 9 видно, что количество соматических клеток в молоке коров в каждой группе продемонстрировало тенденцию к снижению на D0-D7. Разница между D7 и D12 в группе низкой дозы, группе средней дозы и контрольной группе была незначительной, но D7 значительно отличался от D0, что указывает на то, что при лечении лекарственным средством количество соматических клеток в молоке значительно улучшилось на D7, и после этого не произошло рецидива. В группе высокой дозы D0, D7 и D12 все значительно различались, что, с одной стороны, показало значительное улучшение количества соматических клеток в молоке, а с другой стороны, также было связано с более длительным средним временем выздоровления коров в этой группе. Различие в соматических клетках в молоке четырех групп коров в D0 не было значительным, что указывает на то, что с точки зрения соматических клеток в молоке коровы в каждой группе имели схожий статус заболевания на момент начала. В D7 количество соматических клеток в молоке у коров группы средней дозы было значительно ниже, чем у коров группы высокой дозы и контрольной группы, что было связано с более коротким средним временем излечения в группе средней дозы. В D12 день количество соматических клеток в молоке у коров в контрольной группе было значительно выше, чем у коров группы средней дозы, что указывает на то, что терапевтический эффект от инъекции сапонина B4 пульсатиллы при мастите дойных коров лучше, чем от инъекции SHUANGDING.

Из терапевтического эффекта инъекции сапонина B4 пульсатиллы при клиническом мастите дойных коров, количества соматических клеток в молоке, степени клинического излечения и наблюдений за тестами на излечение, можно увидеть, что все инъекции сапонина B4 пульсатиллы с различными концентрациями оказывают очевидное терапевтическое действие на клинический мастит дойных коров, и данный эффект лучше, чем для положительного контроля, инъекции SHUANGDING. Кроме того, инъекция сапонина B4 пульсатиллы не является токсичной и не вызывает устойчивости к лекарственным средствам, и не существует необходимости выбрасывать молоко во время лечения и в конце лечения, что не только снижает экономические потери фермеров, но и снижает риск возникновения устойчивости к лекарственным средствам.

На фигурах 2 и 3 показано сравнение молока коров с клиническим маститом до и после лечения инъекцией сапонином B4 пульсатиллы. Как видно из фигур 2 и 3, в первый день лечения у коров с клиническим маститом в молоке было больше хлопьев. По мере увеличения времени лечения количество хлопьев постепенно уменьшалось, и молоко постепенно возвращалось к норме. После шестого дня лечения молоко нормализовалось. Это продемонстрировало, что инъекция сапонина B4 пульсатиллы оказывает значительное влияние на лечение клинического мастита и улучшение качества молока.

Экспериментальный пример 3. Исследование сапонина B4 пульсатиллы согласно настоящему изобретению для лечения стойкого клинического мастита и латентного мастита

1. Тестируемые лекарственные средства

Инъекция сапонина B4 пульсатиллы, полученная способом получения согласно примеру 3, в концентрации 50 мг/мл;

2. Тестируемые коровы

В данном тесте было отобрано 8 коров, страдающих клиническим маститом, на молочной ферме Shijiazhuang Tianquan Dairy Cows Co., Ltd. Эти 8 коров получали лечение в течение примерно месяца, но не излечились (2 из них были почти утратили лактацию, т.е. почти не вырабатывали молока). Эти 8 коров лечили ветеринары фермы, лекарственные средства и способы лечения включали инфузию цефкинома сульфата в вымя, внутривенную инъекцию цефалоспоринов и желудочный зонд с Gongying San и т.д.

В данном тесте случайным образом было отобрано 6 коров с латентным маститом на молочной ферме Tianquan, у каждой из которых по меньшей мере одна область вымени имеет «++» или выше в последнем тесте LMT, проведенном ветеринаром.

3. Содержание исследования

Изучение влияние инъекции сапонина B4 пульсатиллы на стойкий клинический мастит и влияние инъекции сапонина B4 пульсатиллы на латентный мастит.

4. Тестируемые лекарственные средства, дозировка и режим введения

В данном тесте инъекцию сапонина B4 пульсатиллы, полученную способом получения из примера 3, применяли для лечения 6 коров со стойким клиническим маститом и 2 коров со стойким клиническим маститом и близких к прекращению лактации. Независимо от того, сколько участков вымени было воспалено, внутримышечную инъекцию (60 мл) осуществляли один раз в день.

6 случайным образом выбранным коровам с латентным маститом, независимо от того, сколько участков вымени было воспалено, вводили внутримышечную инъекцию (30 мл) один раз в день.

Таблица 10. Тестируемые лекарственные средства, дозировка и режим введения

Тестируемая корова Количество коров Объем инъекции Режим введения Стойкий клинический мастит 6 60 мл Внутримышечная инъекция, один раз в день Почти полное прекращение лактации 2 60 мл Внутримышечная инъекция, один раз в день Латентный мастит 6 30 мл Внутримышечная инъекция, один раз в день Всего 15 // Внутримышечная инъекция, один раз в день

5. Результаты тестирования

5.1 Результат лечения коров со стойким клиническим маститом

В данном тесте были отобраны и получали лечение 8 коров с клиническим маститом, которые долгое время не получали лечение. После 3 введений четыре коровы были вылечены, у одной коровы наблюдали значительное улучшение, и одна корова не продемонстрировала значительного эффекта; он не был эффективным для двух коров, близких к прекращению лактации. Результаты исследования показали, что сапонин B4 пульсатиллы хорошо влияет на мастит у дойных коров, лечение которого с применением антибиотиков или других средств не является эффективным.

Результаты лечения некоторых коров, которые не получали лечение в течение долгого времени: Для коровы с ушной биркой с номером 8558 молоко коровы до лечения было жидким и содержало небольшое количество хлопьев, и результат теста LMT был «+++»; после однократной внутримышечной инъекции 60 мл сапонина B4 пульсатиллы в молоке не было видимых хлопьев, и цвет молока был слегка желтоватым. После второго введения молоко нормализовалось, и результат теста LMT, проведенного ветеринаром, представлял собой «++». Затем ветеринар перевел корову в стойло.

На фигуре 4 представлено лечение коровы с номером 8558, которая долгое время не получала лечение. Из фигуры 4 видно, что по мере увеличения времени лечения секреция молока у коровы с номером 8558 постепенно нормализуется. После 2-разового введения молоко нормализовалось, корова была клинически излеченной.

5.2 Лечение коров с латентным маститом

Согласно результатам теста LMT, проведенного ветеринаром фермы, случайным образом было выбрано 6 коров с латентным маститом, у всех из которых была хотя бы одна область вымени с «++» или выше. Инъекцию 30 мл сапонина B4 пульсатиллы вводили посредством внутримышечной инъекции. Через три дня результаты теста LMT у 5 коров значительно улучшились. Улучшение состояния другой коровы (№532006) было незначительным, но ухудшения не произошло.

Таблица 11. Результаты теста латентного мастита

Номер ушной бирки Последние результаты LMT Соматические клетки до теста Результаты LMT через три дня после введения 131213 И передний правый, и задний правый +++ 1323 Передний правый -, задний правый ++ 0909041 Задний левый ++, передний правый +++ 1294 Задний левый +, передний правый - 131208 Передний правый +++, задний правый ++ 847 Передний правый -, задний правый - 160128 Четыре области вымени +++ 5450 Четыре области вымени +++ 532006 Четыре области вымени +++ 2041 Четыре области вымени +++ 1106021 Передний левый ++, задний левый +++ - Передний левый -, задний левый ++

Примечание: Поскольку на ферме нет детектора соматических клеток, тест необходимо проводить на других фермах. Ветеринар молочной фермы не выполнил тестирование соматических клеток, но результаты теста LMT после трех дней введения показали значительное улучшение у 5 коров с латентным маститом.

Замечания об отдельных коровах: Для коровы №1106021, перед введением, у которой две области вымени слева были поражены латентным маститом, результаты теста LMT спереди слева и сзади слева были «++» и «+++» соответственно; сзади справа лактация совершенно прекратилась и молоко не выделялось; молоко первых трех надавливаний спереди справа было густым и желтого цвета, а после нескольких надавливаний появилась кровянистая слизистая жидкость без признаков молока. Сапонин B4 пульсатиллы 30 мл вводили посредством внутримышечной инъекции один раз в день, и через 3 дня введения не было улучшения спереди справа, результаты теста LMT спереди слева и сзади слева были «-» и «++» соответственно, количество соматических клеток значительным образом снизилось, и эффект был значительным.

Другим 5 коровам, страдающим латентным маститом, один раз в день вводили внутримышечно 30 мл сапонина B4 пульсатиллы. После трех дней лечения состояние 4 коров улучшилось, и результаты LMT показали, что количество соматических клеток уменьшилось; улучшение у другой коровы (№532006) не было значительным. На фиг. 5 показаны результаты лечения некоторых коров, страдающих латентным маститом, после трех дней лечения инъекцией сапонина B4 пульсатиллы. Из фиг. 5 видно, что состояние коров, страдающих латентным маститом, улучшилось после приема лекарственного средства.

Результаты исследования показали, что сапонин B4 пульсатиллы хорошо влияет на латентный мастит.

Ветеринары фермы лечили заболевших коров с помощью инфузии цефкинома сульфата в вымя, внутривенных инъекций цефалоспоринов и введения через желудочный зонд Gongying San в течение примерно месяца, но лечение было неэффективным, и болезнь перешла в хронический мастит, который проявлялся жидким молоком и постоянным скоплением хлопьев в молоке. Причина такой ситуации может заключаться в том, что: во-первых, разнообразные лекарственные средства для лечения мастита, применяемые на ферме, были простыми, в процессе лечения применяли только антибактериальные лекарственные средства, не уделяя внимания противовоспалительным; во-вторых, разнообразные применяемые антибиотики были простыми, и патогенные бактерии не выделяли и не идентифицировали, что приводило к устойчивости бактерий и отсутствию чувствительности к лекарственным средствам; в-третьих, длительное лечение приводило к гиперплазии ткани молочной железы, вызывая хроническое воспаление, что, в свою очередь, затрудняет попадание лекарственного средства в эффективную область, что делает состояние устойчивым. Когда инъекцию сапонина B4 применяли для лечения 8 коров, задействованных в эксперименте, после 3 введений четыре коровы были вылечены, у одной коровы наблюдали значительное улучшение, и одна корова не продемонстрировала значительного эффекта; он не был эффективным для двух коров, близких к прекращению лактации. Результаты исследования показали, что сапонин B4 пульсатиллы хорошо влияет на мастит у молочных коров, лечение которого с применением антибиотиков или других средств не является эффективным.

Латентный мастит является одним из наиболее распространенных типов мастита у дойных коров. Этот тип мастита обычно не имеет клинических симптомов, разницу между молоком при нем и нормальным молоком нельзя отличить невооруженным глазом, и для диагностики требуются лабораторные реактивы. Если этот тип мастита не достигает определенной доли в стаде, его обычно не лечат. Из-за скрытой заболеваемости латентный мастит дойных коров вызывает очень серьезные экономические потери. Когда инъекцию сапонина B4 пульсатиллы применяли для лечения 6 коров, страдающих латентным маститом, у четырех коров улучшилось состояние; одна корова продемонстрировала значительный эффект и снижение количества соматических клеток в тесте LMT; у одной коровы не было значительного улучшения. Результаты исследования показали, что сапонин B4 пульсатиллы хорошо влияет на латентный мастит.

Кроме того, во время лечения мастита у дойных коров случайным образом была выбрана испытанная инъекция сапонина B4 пульсатиллы, и Институту контроля лекарственных средств провинции Сычуань было поручено провести более 200 тестов на антибиотики, и антибиотический компонент не был обнаружен. На второй день после введения дойным коровам все молоко может пройти тест на остатки антибиотиков, проводимый на ферме. Сапонин B4 пульсатиллы мало влияет на иммуноглобулин и воспалительные факторы в коровьем молоке, таким образом, может гарантировать стабильность молочной композиции. Кроме того, отсутствие остатков не повлияет на качество свежего молока на молочных фермах.

В настоящее время для лечения мастита в основном применяют антибиотики. Среди них чаще применяют дезинфицирующие и повреждающие нуклеиновые кислоты клетки антибиотики широкого спектра действия. Во время лечения и через 4-5 дней после лечения молоко необходимо выбрасывать, что приводит к большим экономическим потерям для фермеров и риску возникновения лекарственной устойчивости. Сапонин B4 пульсатиллы представляет собой натуральный активный ингредиент, извлеченный из китайской лекарственной травы пульсатиллы, не является токсичным и не вызывает устойчивости к лекарственным средствам. Соединение сапонин B4 пульсатиллы согласно настоящему изобретению обладает сильной биологической активностью и превосходным терапевтическим эффектом при мастите дойных коров. Нет необходимости выбрасывать молоко во время лечения и в конце лечения, что не только снижает экономические потери фермеров, но и снижает риск возникновения лекарственной устойчивости. Кроме того, сапонин B4 пульсатиллы не только обладает превосходным терапевтическим эффектом при клиническом мастите, но также обладает превосходным терапевтическим эффектом при стойком клиническом мастите и латентном мастите. В то же время инъекция сапонина пульсатиллы обладает такими преимуществами, как безопасность, высокая эффективность, отсутствие остатков, отсутствие лекарственной устойчивости и отсутствие токсических и побочных эффектов при лечении мастита дойных коров.

Группа изобретений относится к фармацевтической промышленности, а именно к ветеринарии, применению соединения сапонина B4 пульсатиллы для получения лекарственного средства для лечения мастита дойных коров. Применение соединения сапонина B4 пульсатиллы, представленного формулой I, или его фармацевтически приемлемой соли для получения лекарственного средства для лечения мастита дойных коров:

Применение лекарственного средства для лечения мастита дойных коров, характеризующееся тем, что лекарственное средство представляет собой состав, содержащий соединение сапонина B4 пульсатиллы, представленное формулой I, или его фармацевтически приемлемую соль в качестве активного ингредиента и фармацевтически приемлемые вспомогательные вещества, где состав выбирают из группы, состоящей из инъекции и интрамаммарной инфузии, и где концентрация соединения сапонина B4 пульсатиллы в указанном составе составляет 50 мг/мл. Вышеописанное соединение сапонина B4 пульсатиллы формулы I эффективно для лечения мастита дойных коров. 2 н. и 5 з.п. ф-лы, 5 ил., 11 табл., 5 пр.

1. Применение соединения сапонина B4 пульсатиллы, представленного формулой I, или его фармацевтически приемлемой соли для получения лекарственного средства для лечения мастита дойных коров:

2. Применение по п. 1, характеризующееся тем, что лекарственное средство представляет собой состав, содержащий соединение сапонина B4 пульсатиллы по п. 1 или его фармацевтически приемлемую соль в качестве активного ингредиента, и фармацевтически приемлемые вспомогательные вещества.

3. Применение по п. 2, характеризующееся тем, что состав выбирают из группы, состоящей из инъекции, интрамаммарной инфузии, порошка, мази, лосьона; предпочтительно состав выбирают из группы, состоящей из инъекции, интрамаммарной инфузии; более предпочтительно состав представляет собой инъекцию.

4. Применение по п. 3, характеризующееся тем, что мастит дойных коров представляет собой клинический мастит, латентный мастит.

5. Применение по п. 4, характеризующееся тем, что клинический мастит представляет собой клинический мастит, который лечат впервые, стойкий клинический мастит.

6. Применение лекарственного средства для лечения мастита дойных коров, характеризующееся тем, что лекарственное средство представляет собой состав, содержащий соединение сапонина B4 пульсатиллы, представленное формулой I,

или его фармацевтически приемлемую соль в качестве активного ингредиента и фармацевтически приемлемые вспомогательные вещества,

где состав выбирают из группы, состоящей из инъекции и интрамаммарной инфузии, и где концентрация соединения сапонина B4 пульсатиллы в указанном составе составляет 50 мг/мл.

7. Применение по п. 6, характеризующееся тем, что мастит дойных коров представляет собой клинический мастит, латентный мастит; предпочтительно, клинический мастит представляет собой клинический мастит, который лечат впервые, стойкий клинический мастит.