Способ получения тканевого препарата с гепатопротекторными свойствами и средство на его основе Российский патент 2023 года по МПК A61K35/36 A61K35/57 A61P1/16 

Область техники, к которой относится изобретение

Предлагаемое изобретение относится к ветеринарной медицине, конкретно к способам и лекарственным средствам для лечения гепатопатий животных.

Известен способ приготовления тканевого препарата, в котором используют кожу и другие органы от только что убитых животных. Кожу освобождают от подкожной жировой клетчатки, разрезают на небольшие кусочки массой 2,5-20,0 г, отмывают от крови и помещают на сутки в 2% раствор хлорацида с содержанием в 1 л 400-500 мг хлора. Раствор хлорацида меняют ежедневно по мере обесцвечивания в течение 3-4 дней и на 6-й день от начала консервирования (Даричева Н.Н., Ермолаев В.А Тканевая терапия в ветеринарной медицине: монография. Ульяновск: УГСХА, 2011. 168 с.). Недостатком является то, что хлорацид согласно инструкции предназначен для дезинфекции поверхностей из различных материалов неживой природы, при длительной обработке им тканевых препаратов невозможно их полностью от него промыть.

Известен способ приготовления тканевого препарата из слизистой оболочки и покровного эпителия мышечного желудка кур или уток. Сырье берут от птицы в возрасте 2-6 месяцев во время убоя, обрабатывают солевым раствором, содержащим хлоргексидин в соотношении 20:1 в течение 10-15 минут, затем промывают солевым раствором до исчезновения специфического запаха хлоргексидина, измельчают, замораживают при температуре -20-30°С в течение 50-60 минут, подвергают сублимационной сушке и досушиванию (RU 2414917 C1). Недостатком является то, что сублимационная сушка дорогой технологический процесс, не обеспечивающий стерильность.

Известен способ приготовления биогенного препарата из субпродуктов и боенских отходов (печень, селезенка, лимфоузлы, матки с плодом 2-3 мес.). Сырье выдерживают в условиях холодильника в течение 5-7 дней при температуре +2-+4°С, измельчают, обрабатывают раствором гипохлорита натрия в соотношении сырье: гипохлорит натрия как 1:2-1:3 при последующей экстракции сырья в условиях холодильника при температуре +2-+4°С. Затем проводят фильтрацию, фасовку и стерилизацию в автоклаве в течение часа при температуре 120°С, экстракцию в условиях холодильника проводят в течение 8-10 часов при последующем разведении экстракта до соотношения сырье: гипохлорит натрия как 1:4-1:5 и экстракцией раствора под воздействием ультразвука частотой 20 кГц в течение 2,5-3 часов при температуре не выше 50°С. Активный раствор гипохлорита натрия используют в концентрации 300,0-600,0 мг/л. Биогенный препарат, полученный данным способом предназначен для подкожных и внутримышечных введений животным (RU 2698707 C1). Недостатком является длительность и многоступенчатость технологического процесса со сменой температурного режима.

Наиболее близким по технической сущности к заявляемому техническому решению и принятым за прототип, является фармацевтическая пероральная композиция, предназначенная для лечения и профилактики рецидивов заболеваний печени, обусловленных нарушением липидно-холестеринового обмена, выбранных из группы: алкогольный и неалкогольный стеатогепатит, первичный билиарный цирроз печени, холестероз желчного пузыря, лекарственное и токсическое поражение печени, включающая в качестве активных начал гепатопротекор из группы желчных кислот или эссенциальных фосфолипидов, а в качестве пребиотика лактулозу или фруктоолигосахариды, взятых в эффективных дозах (ЕА019985 В1 (ДИКОВСКИЙ А.В.) 27.12.2014). Недостатком является сложность изготовление и требовательность к условиям хранения.

Раскрытие изобретения

Задачей изобретения является разработка высокоэффективного и безопасного средства для профилактики и лечения гепатопатий, изготовление которого способствует безотходной переработке водоплавающей птицы.

Технический результат, который может быть достигнут с помощью предлагаемого изобретения, сводится к получению высокоэффекивного гепатопротекторного недорого средства из натуральных материалов, отходов переработки водоплавающей птицы, что приведет к снижению затрат на лечение животных при гепатопатиях и увеличению рентабельности предприятий по выращиванию и переработке уток.

Технический результат достигается тем, что способ получения тканевого препарата с гепатопротекторными свойствами и средство на его основе включает обеззараживание и автоклавирование на конечном этапе приготовления продукта, при чем в качестве сырья используют эпидермис тазовых конечностей уток, являющийся отходами производства переработки водоплавающей птицы, дополнительно проводят замораживание сырья для накопления и хранения при температуре -20°C, после чего размораживают при температуре 22°C и проводят тщательную промывку под проточной водой с последующей двукратной обработкой 0,05% раствором хлоргексидина и промывкой сырья 0,9% раствором NaCl, в последующем проводят высушивание в суховоздушном шкафу при температуре 105°C до абсолютно сухого вещества в течение 24 часов, сухой остаток измельчают в лабораторной мельнице со скоростью 14 000 об/мин в течение 60 секунд, получают порошок с частицами от 20 до 50 мкм, содержащий в 100 мг продукта 40,2% действующего вещества. Порошок смешивают с 0,9% раствора NaCl в соотношении 1:4 и дополнительно добавляют 5% сверх объема дистиллированной воды (испаряется при автоклавировании), гомогенизируют в гомогенезаторе со скоростью 1500 об/мин в течение 60 секунд, разливают в стерильные флаконы, которые заполняют на 1/3, стерилизуют при температуре 120 °C и давлении в 1,1 атмосферы 45 минут, укупоривают стерильными резиновыми пробками и обкатывают алюминиевыми колпачками.

Под гепатопатиями понимают группу заболеваний печени различной этиологии, характеризующимися токсико-воспалительными и дегенеративными повреждениями паренхимы печени. Гепатопатии у животных и птиц встречаются в различные возрастные периоды и наносят большой ущерб животноводству и птицеводству. Поэтому, востребованными являются вопросы нахождения и изучения кормовых добавок нового поколения, экологически безопасных и имеющих гепатопротектерные свойства.

Предлагаемый препарат - суспензия из порошка мелкодисперсных частиц, размером 20-50 мкм и 0,9% раствора NaCl, бактериологически безопасная, не токсичная (фиг. 1-3), со сроком хранения не менее 1 года при температуре от +4°C до +8°C, с гепатопротекторными свойствами со следующими характеристиками в сухом веществе: влага - не более 2,03% и сырой протеин - 88,77%. Сырой протеин состоит на 87,831% из аминокислот, на азотистые вещества небелкового происхождения приходится - 0,939% (фиг. 4), имеет в составе и семнадцать аминокислот, семь из которых незаменимы для млекопитающих (валин, изолейцин, лейцин, лизин, метионин, треонин, фенилаланин) и десять - для птиц (дополнительно аргинин, гистидин, тирозин). Все семнадцать аминокислот участвуют в обменных процессах в печени, шесть из которых обладают выраженными антиоксидантными (глицин, аланин, цистин), детоксикационными (глютаминовая кислота, треонин, аргинин, метионин) и липотропными (аргинин, метионин) свойствами. Количественный состав аминокислот в процентном выражении в сухом веществе следующий: аспарагиновая кислота (5,872), треонин (2,734), серин (8,255), глютаминовая кислота (10,583), пролин (4,467), глицин (11,546), аланин (3,017), цистин (2,133), валин (3,907), метионин (3,464), изолейцин (3,319), лейцин (6,781), тирозин (6,652), фенилаланин (4,271), гистидин (1,111), лизин (3,049), аргинин (6,676). В сухом веществе выявлены три микроэлемента (Cu, Zn, Mn), играющие важную роль в метаболических процессах в печени (фиг. 5). Совокупное действие всех ингредиентов средства и оказывает высокий гепатопротекторный эффект.

Краткое описание чертежей

На фиг. 1- Размеры частиц эпидермиса тазовых конечностей уток после измельчения до порошкового состояния; ув. ×400.

На фиг. 2 - Протокол испытаний на биологическую безопасность.

На фиг. 3 - Результаты химического и токсикологического анализа эпидермиса тазовых конечностей уток.

На фиг. 4 - Количество сырого протеина и аминокислотный состав исследуемых образцов.

На фиг. 5 - Содержание микроэлементов в сухом веществе эпидермиса.

На фиг. 6 - Биохимические показатели крови кошек с диагнозом стеатоз до лечения и на шестой день после начала лечения.

Осуществление изобретения

Предложенный способ осуществляют следующим образом. Примеры конкретного выполнения предложенного способа.

Пример № 1. Сырье получают от уток в возрасте сорока и более суток во время убоя. Освобождают от примеси пера, замораживали при температуре -20°C для накопления материала, размораживают при температуре 22°C тщательно промывают под проточной водой, помещают в 0,05% раствор хлоргексидина на 1 час в соотношении сырья к хлоргексидину как 1:4 по массе. Бактерицидное действие хлоргексидина проявляется в концентрации более 0,01% при температуре 22 °C и воздействии в течение 1 мин, при попадании внутрь практически не всасывается из ЖКТ (из 300 мг за 30 минут в пищеварительном тракте может всосаться 0,206 мкг/л, относится к 4 классу малоопасных веществ по ГОСТ 12.1.007-76, выводится кишечником 90 % и менее 1 % выделяется почками), меняют раствор хлоргексидина в таком же соотношении и выдерживают еще 30 мин. Затем промывают сырье 0,9% раствором NaCl, дают возможность избытку жидкости стечь на металлическом сите. В суховоздушном шкафу 1 кг сырье раскладывают высотой не белее 10 см, высушивают при температуре 105 °С до абсолютно сухого вещества в течение 24 часов, взвешивают сухой остаток на лабораторных электронных аналитических весах ВЛТЭ-210 с дискретностью 0,0001 г производства НПП «Госметр», затем материал помещают в суховоздушный шкаф на 30 минут, после чего пробу опять взвешивают и при неизменных показателях массы сушку прекращают. Сухой остаток измельчают в лабораторной мельнице со скоростью 14 000 об/мин в течение 60 секунд, при фасовке стерильные флаконы различного объема заполняют на 1/3 из расчета, что одна доза соответствует 0,6 г порошка и содержит 240 мг действующего вещества. Перед применением на одну дозу добавляют 2,5 мл 0,9% раствор NaCl, тщательно встряхивают до образования суспензии и применяют внутрь (per os). Неиспользованный остаток препарата хранят в холодильнике в течение двух суток. Полученный препарат представляет собой рыхлый порошок бежевого или светло-желтого цвета, хорошо смачиваемый, но не растворимый в воде, сохраняет свой цвет в течение года. Недостатком этого способа является нативное состояние белка, замедляющее его усвоение и необходимость готовить суспензию перед ее применением.

Пример № 2. Проводят аналогично примеру № 1, но после измельчения сухого остатка в лабораторной мельнице его смешивают с 0,9% раствором NaCl в соотношении 1:4, добавляют к объему 5% дистиллированной воды для компенсации испарения, гомогенизируют в однофазном гомогенезаторе со скоростью 1500 об/мин в течение 60 секунд, разливают в стерильные флаконы в зависимости от количества доз из расчета действующего вещества на килограмм массы животного (1 доза=0,6 г порошка =240 мг действующего вещества). Флаконы заполняют на 1/3, стерилизуют автоклавированием при температуре 120 °C и давлении в 1,1 атмосферы 45 минут. Полученный тканевой препарат представляет собой суспензию светло-бежевого или светло-желтого цвета, готовую к применению, выдерживающую установленный срок хранения - 1 год.

Действие предлагаемого тканевого препарата апробировано в ветеринарных клиниках по лечению мелких домашних животных на кошках с установленным диагнозами гепатоз (стеатоз), что доказало его положительное влияние на динамику выздоровления при лечении. Животным со средней степенью тяжести заболевания назначили комплексное лечение по трем схемам.

Схема № 1. Диетический корм, витамины (группы В, D), макроэлементы (Р, K, Mg), микроэлементы (Zn, Cr), в качестве гепатопротекторного средства использовали «Гепатовет» согласно инструкции.

Схема № 2. Диетический корм, витамины (группы В, D), макроэлементы (Р, K, Mg), микроэлементы (Zn, Cr), в качестве гепатопротекторного средства применяли разрабатываемое средство в виде порошка, который вводили индивидуально внутрь (per os) во время кормления 2 раза в день. Использовали порошок, расфасованный во флаконы по 20 мл, содержащие на 4 дозы для кошек до 4 кг.

Схема № 3. Диетический корм, витамины (группы В, D), макроэлементы (Р, K, Mg), микроэлементы (Zn, Cr), в качестве гепатопротекторного средства применяли разрабатываемое средство в виде суспензии, которую вводили индивидуально внутрь (per os) во время кормления 2 раза в день по 3 мл (1 доза 0,6 г порошка и 2,5 мл 0,9% раствора NaCl).

Биохимические показатели крови до и после применения тканевого препарата приведены в таблице (фиг. 6).

Группа изобретений относится к фармацевтической промышленности, а именно к способу получения препарата с гепатопротекторными свойствами. Способ получения тканевого препарата с гепатопротекторными свойствами, включающий взятие эпидермиса тазовых конечностей уток с последующим замораживанием сырья при температуре -20°C и размораживанием при температуре +22°C с промывкой под проточной водой с последующей двукратной обработкой 0,05% раствором хлоргексидина в соотношении сырья и хлоргексидина 1:4 по массе, и промывкой 0,9% раствором NaCl, после чего проводят высушивание в суховоздушном шкафу при температуре 105°C до абсолютно сухого вещества в течение 24 часов, сухой остаток измельчают на мельнице со скоростью 14000 об/мин в течение 60 секунд до размера частиц 20-50 мкм, полученный порошок смешивают с 0,9% раствора NaCl в соотношении 1:4, гомогенизируют со скоростью 1500 об/мин в течение 60 секунд, разливают в стерильные флаконы, которые заполняют на 1/3, стерилизуют при температуре 120°C и давлении 1,1 атмосферы 45 минут. Тканевый препарат с гепатопротекторными свойствами, полученный вышеописанным способом, содержит эпидермис и 0,9% раствор NaCl. Вышеописанный способ позволяет получить высокоэффективное гепатопротекторное средство из отходов переработки водоплавающей птицы. 2 н.п. ф-лы, 6 ил., 2 пр.

1. Способ получения тканевого препарата с гепатопротекторными свойствами, включающий взятие эпидермиса тазовых конечностей уток с последующим замораживанием сырья при температуре -20°C и размораживанием при температуре +22°C с промывкой под проточной водой, с последующей двукратной обработкой 0,05% раствором хлоргексидина в соотношении сырья и хлоргексидина 1:4 по массе и промывкой 0,9% раствором NaCl, после чего проводят высушивание в суховоздушном шкафу при температуре 105°C до абсолютно сухого вещества в течение 24 часов, сухой остаток измельчают на мельнице со скоростью 14000 об/мин в течение 60 секунд до размера частиц 20-50 мкм, полученный порошок смешивают с 0,9% раствора NaCl в соотношении 1:4, гомогенизируют со скоростью 1500 об/мин в течение 60 секунд, разливают в стерильные флаконы, которые заполняют на 1/3, стерилизуют при температуре 120°C и давлении 1,1 атмосферы 45 минут.

2. Тканевый препарат с гепатопротекторными свойствами, полученный способом по п. 1, содержащий эпидермис и 0,9% раствор NaCl.