Вакцина против сибирской язвы для коз живая Российский патент 2023 года по МПК A61K39/07 A61K39/116 

Область техники, к которой относится изобретение

Изобретение относится к ветеринарным иммунобиологическим лекарственным препаратам, а именно сибиреязвенным вакцинам, и может быть использовано для профилактики сибирской язвы для коз.

Уровень техники

Сущность изобретения заключается в том, что вакцинный штамм Bacillus anthracis 55-ВНИИВВиМ в дозе 5 млн живых спор при совместном с адъювантом введении козам, существенно повышает иммуногенную активность вакцины, при снижении местных и общих нежелательных реакций организма в поствакцинальный период по сравнению с существующим вакцинам против сибирской язвы: «Вакцина против сибирской язвы животных из штамма 55-ВНИИВВиМ живая сухая».

Раскрытие сущности и осуществление изобретения

Для профилактики сибирской язвы у животных широко применяются живые жидкие и лиофилизированные вакцины, выпускаемые ФКП «Орловская биофабрика», ООО «Агровет» и ФГБНУ ФИЦВиМ. При подкожном введении козам указанные вакцины вызывают у части из них повышение температуры тела и формирование в месте инъекции припухлости, распространяющегося в области подгрудка, подчелюстного пространства и головы, увеличение регионарных лимфатических узлов и ухудшение общего состояния, вплоть до летального исхода [1].

При выявлении поствакцинальных реакций, животных подвергают лечению с использованием сибиреязвенного иммуноглобулина, антибиотиков и симптоматических средств, что исключает формирование у них поствакцинального иммунитета. В итоге, в хозяйствах остаются неиммунные животные, потенциально восприимчивые к заражению возбудителем сибирской язвы.

В предложенной нами вакцине в качестве иммуногена используются живые споры Bacillus anthracis штамма 55-ВНИИВВиМ, в сочетании с адъювантом в форме разбавителя. Известно, что dl-альфа-токоферол ацетат является эффективным иммуномодулятором и при введении животным в сочетании с антигеном обеспечивает формирование у них выраженного иммунного ответа. Препарат обладает антиоксидантной активностью, участвует в процессах тканевого метаболизма, предупреждает гемолиз эритроцитов, повышение проницаемости и ломкости капилляров, что снижает развитие отека в месте инъекции.

Задачей изобретения является получение вакцины, обеспечивающей низкий уровень проявления поствакцинальных осложнений у вакцинированных коз с сохранением иммуногенной активности.

Поставленная задача решается выбором оптимальной иммунизирующей дозы вакцинного штамма Bacillus anthracis 55-ВНИИВВиМ для коз с предварительной титрацией ИмД5о штамма на морских свинках в сочетании с адъювантом с целью снижения местных реакций после введения вакцины. Это обеспечит длительную персистенцию спор, поствакцинальных антител в организме животного и, таким образом, формирование выраженного иммунного ответа.

Вакцина существенно повышает степень иммунного ответа организма, что подтверждено при испытаниях на морских свинках методом «вакцинация-заражение» с использованием культуры контрольного слабовирулентного капсульного штамма Bacillus anthracis М-71 в дозе 5 млн живых спор, в сравнении с традиционно применяемой дозой 1 млн живых спор, которые вводили в область живота подкожно, в объеме 0,5 см³. Морских свинок заражали через три недели после введения вакцины с последующим учетом результатов в течение 10 суток [2].

Сравнительное испытание опытной серии вакцины по показателям местных, общих реакций организма и титра антител к Bacillus anthracis в РИГА проводили в отношении аналогичных показателей, зарегистрированных у коз разных пород, иммунизированных вакциной против сибирской язвы животных из штамма 55-ВНИИВВиМ живой сухой.

Изобретение позволяет:

1. Повысить иммуногенную активность вакцины с оптимизацией иммунизирующей дозы и с использования адъюванта для коз.

2. Минимизировать поствакцинальные осложнения у коз.

Сухой компонент сибиреязвенной вакцины состоит из лиофилизированной культуры штамма 55-ВНИИВВиМ с добавлением защитной среды (обезжиренного молока или 20%-ного раствора сахарозы).

Жидкий компонент или разбавитель для вакцины с содержанием адъюванта состоит из следующих компонентов: dl-альфа-токоферол ацетат, симетикон, натрия хлорид, калия дигидрофосфат, натрия дигидрофосфат, полисорбат 80 и вода для инъекции.

Одна иммунизирующая доза вакцины (в объеме 0,5 см³) содержит 5 млн живых спор штамма Bacillus anthracis 55-ВНИИВВиМ.

Возможность практического использования заявляемого изобретения подтверждается следующими примерами.

Пример 1. Сравнительная оценка иммуногенной активности вакцины с действующей вакциной против сибирской язвы животных из штамма 55-ВНИИВВиМ живой сухой на морских свинках

Аттенуированный высокоиммуногенный бескапсульный штамм Bacillus anthracis 55-ВНИИВВиМ (РХО1+/ РХО2-) был получен из отдела «Всероссийской коллекции штаммов микроорганизмов» ФГБУ «ВГНКИ». Были изготовлены мини серии вакцин из этого штамма, которые вводили животным в сочетании с адъювантом. В качестве контроля использовали «Вакцину против сибирской язвы животных из штамма 55-ВНИИВВиМ живую сухую» производства ФКП «Орловская биофабрика» без адъюванта.

С этой целю, подопытных морских свинок в количестве 24 голов методом случайного отбора разделили на 2 группы. Для контроля качества заражающей культуры штамма Bacillus anthracis М-71 слабовирулентного капсульного использовали 10 голов морских свинок. Первую группу морских свинок весом 400-500 г. иммунизировали вакциной «GOATVAC» в дозе 5 млн. живых спор с адъювантом, а вторую группу - «Вакциной против сибирской язвы животных из штамма 55-ВНИИВВиМ живой сухой» в дозе 10 млн. живых спор (согласно инструкции по применению вакцины) без адъюванта. Контрольную группу морских свинок не вакцинировали. Через 4 суток после вакцинации был зарегистрирован падеж 2 морских свинок из второй группы. По истечении 21 сутки после вакцинации, морских свинок заразили культурой контрольного штамма Bacillus anthracis М-71 в дозе, превышающей установленную заражающую дозу культуры в 5 раз. Согласно результатам исследования, предложенная нами вакцина с адъювантом предохранила от гибели 100% морских свинок, при том, что во второй группе морских свинок, иммунизированных вакциной без адъюванта, пало 50% животных, а в контрольной группе, представленной невакцинированными морскими свинками, погибло 100% животных.

Пример 2. Сравнительная оценка иммуногенной активности испитыуемой вакцины с действующей вакциной против сибирской язвы животных из штамма 55-ВНИИВВиМ живой сухой на козах

Сравнительное испытание опытной и контрольной вакцин проводили с использованием 18 коз зааненской, альпийской и русской белой породы, соответственно по 6 голов животных каждой породы. С этой целью, коз методом случайного выборки разделили на 2 группы по 9 голов в каждой и, соответственно по 3 козы каждой породы в обеих группах.

Животных 1-ой группы вакцинировали согласно инструкции по применению иммунобиологического лекарственного средства «Вакцина против сибирской язвы животных из штамма 55-ВНИИВВиМ живая сухая» производства ФКП «Орловская биофабрика». Вакцину вводили животным подкожно, в дозе 10 млн. живых спор в объеме 0,5 мл.

Животных 2-ой группы вакцинировали опытной адъювант-вакциной. Вакцину вводили животным подкожно в дозе 5 млн. спор в объеме 0,5 мл. Результаты сравнительной оценки реактогенности вакцин представлены в графике 1 и в таблице 1.

Как видно из материалов графика 1 максимальное повышение температуры тела у животных, иммунизированных опытной адъювант-вакциной - варьировалось в пределах от 0,3°С до 0,8°С. У коз, иммунизированных «Вакциной против сибирской язвы животных из штамма 55-ВНИИВВиМ живой сухой» этот показатель был несколько выше и варьировался в пределах от 0,9°С до 2,0°С.

Что касается поствакцинальной реакции у животных в месте введения вакцины, то она практически не была выявлена у коз, иммунизированных адъювант-вакциной, но проявились в форме припухлости у всех коз в месте введения «Вакцины против сибирской язвы животных из штамма 55-ВНИИВВиМ живой сухой», при этом размеры припухлостей в месте введения препарата были в пределах от 2×1 см до 12×7 см (Таблица №1). Состояние животных, с вышеуказанными изменениями в месте введения препарата, характеризовалось выраженным общим угнетением.

С учетом вышеизложенного, можно утверждать, что испытуемая вакцина в сравнении с «Вакциной против сибирской язвы животных из штамма 55-ВНИИВВиМ живой сухой», является менее реактогенной и не вызывает серьезных нежелательных местных реакций с клинически выраженными изменениями в состоянии, иммунизированных ею коз разных пород.

Титр антител к Bacillus anthracis у коз разных пород определяли в реакции непрямой гемагглютинации (РИГА) до и после введения им опытного и контрольного образцов вакцин. Результаты реакции учитывали при ее оценке не менее чем 3 креста (график 2).

Согласно данным графика 2 испытуемая вакцина по показателю антигенной активности, установленному при проведении испытания соответственно через 2, 4, 6 месяцев после вакцинации по каждой из групп коз породы русская белая, зааненская и альпийская и через 6 месяцам по всем группам животных независимо от породы были практически одинаковыми, несмотря на то, что опытную вакцину вводили животным в дозе в 2 раза меньшей, чем доза контрольной вакцины.

В заключение следует отметить, что рекомендованная на сегодняшний день доза сибиреязвенных вакцин разных производителей из штамма 55-ВНИИВВиМ для иммунизации мелкого рогатого скота, составляет 7-15 млн. живых спор. Как правило, эта доза вызывает нежелательные местные и общие реакции у значительной части вакцинированных коз, особенно у коз зааненской породы. В настоящем опыте испытуемая адъювант-вакцина за весь период срока наблюдения не вызывала нежелательных реакций при введении всем опытным козам разных пород.

Определяющим в испытании являются результаты контроля иммуногенной активности сравниваемых вариантов вакцин в тесте на морских свинках, которые коррелируют с результатами контроля на целевых животных и повсеместно применяются в мировой практике для оценки защитных свойств сибиреязвенных вакцин. Согласно результатам испытания, предложенная вакцины «GOATVAC» существенно повышает степень иммунного ответа организма морских свинок, что подтверждено при испытаниях методом «вакцинация-заражение» с использованием культуры контрольного слабовирулентного капсульного штамма Bacillus anthracis М-71 в дозе 5 млн. живых спор, в сравнении с традиционно применяемой дозой 1 млн. живых спор. Согласно результатам испытания вакцина с адъювантом «GOATVAC» предохранила от гибели 100% морских свинок, при том, что в группе морских свинок, иммунизированных вакциной без адъюванта («Вакцина из штамма 55-ВНИИВВиМ живая сухая»), пало 50% животных, а в контрольной группе, представленной не вакцинированными морскими свинками, погибло 100% животных.

Изобретение относится к ветеринарным иммунобиологическим препаратам, а именно сибиреязвенным вакцинам, и может быть использовано для профилактики сибирской язвы для коз. Представлена вакцина для иммунизации коз, содержащая вакцинный штамм Bacillus anthracis 55-ВНИИВВиМ в дозе 5 млн живых спор в разбавителе с содержанием адъюванта составом: dl-альфа-токоферола ацетат, симетикон, натрия хлорид, калия дигидрофосфат, натрия дигидрофосфат, полисорбат 80 и вода для инъекции. Технический результат заключается в получении вакцины, обеспечивающей низкий уровень проявления поствакцинальных осложнений у вакцинированных коз с сохранением иммуногенной активности. 2 ил., 1 табл., 2 пр.

Применение вакцины для иммунизации коз, содержащей вакцинный штамм Bacillus anthracis 55-ВНИИВВиМ в дозе 5 млн живых спор в разбавителе с содержанием адъюванта, составом: dl-альфа-токоферола ацетат, симетикон, натрия хлорид, калия дигидрофосфат, натрия дигидрофосфат, полисорбат 80 и вода для инъекции, увеличивает иммуногенную активность вакцины в тесте на морских свинках и по сравнению с вакциной против сибирской язвы животных из штамма 55-ВНИИВВиМ живой сухой обладает умеренно выраженными реактогенными свойствами у испытуемых коз.