АССОЦИИРОВАННАЯ ВАКЦИНА ПРОТИВ СИБИРСКОЙ ЯЗВЫ И ЯЩУРА И СПОСОБ ПРОФИЛАКТИКИ СИБИРСКОЙ ЯЗВЫ И ЯЩУРА Российский патент 1996 года по МПК A61K39/135 

Изобретение относится к области ветеринарии, в частности, к производству и применению биологических препаратов для вакцинации сельскохозяйственных животных и предназначается для одновременной специфической профилактики сибирской язвы и ящура.

Известна инактивированная вакцина против ящура, содержащая суспензию культурального вируса ящура типов А₂₂ и О₁₉₄ с активностью 8-10 мкг очищенного вирусного белка 146S в 1 см³ по каждому типу вируса (ТУ 10-09-119-91. Вакцина против ящура бивалентная из культурального вируса типов А₂₂ и О₁₉₄ (из вируса, выращенного в культуре клеток ВНК-21, авторы Белик Е.В. Захаров В.А.).

Известна также вакцина против сибирской язвы, представляющая собой суспензию живых спор бескапсульного авирулентного штамма 55-ВНИИВВиМ (ТУ 10-09-2-87. Вакцина против сибирской язвы животных живая споровая лиофиолизированная из штамма 55-ВНИИВВиМ, авторы Бакулов И.А. Гаврилов В.А. Селиверстов В.В.).

Существующие моновакцины применяются независимо друг от друга и их применение не может создать иммунитет у животных одновременно против сибирской язвы и ящура. Кроме того, использование этих вакцин в отдельности требует удвоенного количества трудозатрат и оказывает более сильное стрессовое воздействие на организм животных.

Предлагаемая ассоциированная вакцина против сибирской язвы и ящура устраняет эти недостатки.

Цель изобретения изготовление ассоциированной вакцины против сибирской язвы и ящура, обладающей высокой иммуногенностью, ареактогенностью, безвредностью, и способ профилактики этих заболеваний.

Указанная цель достигается добавлением к коммерческой противоящурной вакцине эффективных количества 2М раствора тиосульфата натрия, инкубацией смеси при 20-25^оС в течение 50-60 мин с последующим добавлением необходимого количества спор вакцинного сибиреязвенного штамма 55-ВНИИВВиМ и введением полученной вакцины крупному рогатому скоту подкожно в области средней трети шеи в дозе 1,0-1,5 см³.

Применение тиосульфата натрия обусловлено тем, что при механическом смешивании двух моновакцин полностью теряется иммуногенность полученного препарата при заражении морских свинок сибирской язвой (процент защиты равен нулю).

В результате проведенных экспериментов установлено токсическое действие одного из химических компонентов ящурной вакцины (диэтилэтиленимина) на клетки вакцинного штамма 55-ВНИИВВиМ.

Токсическое действие диэтилэтиленимина на клетки вакционного штамма 55-ВНИИВВиМ нейтрализовали путем добавления к 95-97 см³ противоящурной вакцины, содержащей 0,5% диэтилэтиленимина, 1,5-1,7 см³ 2М раствора тиосульфата натрия. Смесь перемешивали и выдерживали 50-60 мин при 20-25^оС, периодически встряхивая. Затем добавляли 1,0-1,1 см³ спор сибироязвенного штамма 55-ВНИИВВиМ с исходной концентрацией 2-2,2 ^.10⁹ спор в 1 см³. Токсическое действие диэтилэтиленимина на клетки штамма 55 в этом случае не проявлялось. При добавлении к противоящурной вакцине меньших количеств 2М раствора тиосульфата натрия (1,4 см³ и меньше) инактивирующее действие диэтилэтиленимина на штамм 55-ВНИИВВиМ сохранилось и иммуногенность у ассоциированной вакцины при заражении морских свинок сибирской язвой отсутствовала. При добавлении большего объема тиосульфата натрия (1,8 см³ и более) повышения иммуногенности ассоциированной вакцины по отношению к сибирской язве не отмечали.

Для профилактики сибирской язвы и ящура у животных ассоциированную вакцину вводят крупному рогатому скоту подкожно в области средней трети шеи в дозе 1,0-1,5 см³.

Испытания ассоциированной вакцины против сибирской язвы и ящура на морских свинках в сравнении с моновакцинами против сибирской язвы и ящура показали, что все три вакцины создают иммунитет у привитых животных. Иммунитет против сибирской язвы как при вакцинации ассоциированной вакциной, так и противосибиреязвенной моковакциной составлял 100% Вакцинированные животные имели высокие показатели противосибиреязвенного иммунитета, (табл.1): титр антител в РНГА с эритроцитарным диагностикумом ВНИИВВиМ составлял (1:160)-(1: 320), величина кожно-аллергической реакции 11-13 мм. Невакцинированные животные (контроль) не содержали антител и давали отрицательную кожно-аллергическую реакцию на сибиреязвенный аллерген ВНИИВВиМ. Все вакцинированные морские свинки выжили после заражения капсульным штаммом 71-12 Bac.anthracis (процент защиты равен 100), все контрольные животные пали (процент защиты равен нулю).

Таким образом, ассоциированная вакцина не уступает по иммуногенности противосибиреязвенной моновакцине (см. таблицу).

При заражении морских свинок вирусом ящура установлено, что все непривитые животные заболели генерализованной формой ящура, тогда как вакцинированные морские свинки обладали иммунитетом к этому вирусу. Как при иммунизации ассоциированной вакциной, так и противоящурной иммунитет к ящуру типа А и О составлял 90%
Результаты, полученные на морских свинках, были подтверждены в опытах на крупном рогатом скоте. Препарат ассоциированной вакцины вводили животным подкожно в области средней трети шеи в дозе 1,0-1,5 см³. Через 14 дней животных заражали вирулентным штаммом N 76 Bac.anthracis. В результате испытаний вакцины на крупном рогатом скоте установлено, что у вакцинированных животных создается иммунитет как против сибирской язвы, так и против ящура. Вакцинированные животные выжили после заражения вирулентным штаммом Bac.anthracis, контрольные пали от сибирской язвы. Устойчивость к вирусу ящура определяли по величине титра антител в РСК. Титр антител к вирусу ящура у вакцинированных животных составлял (1: 32)-(1:64), что свидетельствует о наличии иммунитета к ящуру у крупного рогатого скота. В сыворотках крови непривитых животных антитела не обнаружены. Следовательно, ассоциированная вакцина против сибирской язвы и ящура является иммуногенным препаратом, способным защищать животных одновременно от сибирской язвы и ящура, и по иммуногенности не уступает составляющим ее моновакцинам.

Ассоциированная вакцина безвредна и аректогенна для лабораторных и сельскохозяйственных животных.

Использование ассоциированной вакцины в ветеринарной практике дает возможность сократить число профилактических прививок и тем самым уменьшить уровень стрессового воздействия на организм животных, а также вдвое снизить себестоимость и трудоемкость вакцинации сельскохозяйственных животных.

П р и м е р 1. Ассоциированную вакцину против сибирской язвы и ящура готовили следующим образом.

К 96 см³ бивалентной вакцины против ящура типов А₂₂ и О₁₉₄ добавляли 1,6 см³ 2М раствора тиосульфата натрия, перемешивали и выдерживали 50 мин при 20-25^оС, периодически встряхивая. Затем добавляли 1 см³ спор сибиреязвенного вакционного штамма 55-ВНИИВВиМ с исходной концентрацией 2,1^. 10⁹ спор в 1 см³. Смесь перемешивали.

Вакцина представляет собой однородную жидкость серовато-зеленого цвета, при хранении на дне флакона образуется рыхлый осадок, который при встряхивании легко разбивается и вновь превращается в однородную взвесь.

П р и м е р 2. Ассоциированную вакцину против сибирской язвы и ящура применяют для профилактических и вынужденных прививок клинически здоровых животных однократно. Молодняк, не достигший 3-месячного возраста, прививать ассоциированной вакциной не рекомендуется. Крупному рогатому скоту вакцину вводят в области средней трети шеи в дозе 1 см³.

Использование: ветеринария, в частности производство и применение биологических препаратов для вакцинации сельскохозяйственных животных с целью профилактики сибирской язвы и ящура. Сущность: предложены ассоциированная вакцина против сибирской язвы и ящура, а также способ профилактики этих заболеваний, предусматривающий введение вакцины крупному рогатому скоту подкожно в области средней трети шеи в объеме 1,0 - 1,5 см³. Ассоциированная вакцина против сибирской язвы и ящура создает иммунитет у привитых животных одновременно против двух заболеваний, при этом по иммуногенности она не уступает моновакцинам против сибирской язвы и ящура. 2 с. п. ф-лы, 1 табл.

1. Ассоциированная вакцина против сибирской язвы и ящура, заключающаяся в том, что она содержит инактивированную диэтилэтиленимином суспензию культурального вируса ящура типов А_2 2 и О_1 9 4 с активностью 8 - 10 мкг очищенного вирусного белка 146S в 1 см³ по каждому типу вируса, суспензию жизнеспособных спор сибиреязвенного вакцинного штамма 55-ВНИИВВиМ с исходной концентрацией (2,0 - 2,2) • 10⁹ спор/см³, 2 М раствор тиосульфата натрия и физиологический раствор при следующем соотношении компонентов, мас.%:
Инактивированная диэтилэтиленимином суспензия культурального вируса ящура типов А_2 2 и О_1 9 4 с активностью 8 - 10 мкг очищенного вирусного белка 146S в 1 см³ по каждому типу вируса - 95 - 97
Суспензия жизнеспособных спор сибиреязвенного вакцинного штамма 55-ВНИИВВиМ с исходной концентрацией (2,0 - 2,2) • 10⁹ спор/см³ - 1,0 - 1,1
2 М раствор тиосульфата натрия - 1,5 - 1,7
Физиологический раствор - Остальное
2. Способ профилактики сибирской язвы и ящура, отличающийся тем, что крупному рогатому скоту старше 3 месяцев подкожно в области средней трети шеи вводят в дозе 1,0 - 1,5 см³ ассоциированную вакцину, содержащую, мас.%:
Инактивированная диэтилэтиленимином суспензия культурального вируса ящура типов А_2 2 и О_1 9 4 с активностью 8 - 10 мкг очищенного вирусного белка 146S в 1 см³ по каждому типу вируса - 95 - 97
Суспензия жизнеспособных спор сибиреязвенного вакцинного штамма 55-ВНИИВВиМ с исходной концентрацией (2,0 - 2,2) • 10⁹ спор/см³ - 1,0 - 1,1
2 М раствор тиосульфата натрия - 1,5 - 1,7
Физиологический раствор - Остальное