Способ лечения грибковой язвы роговицы Российский патент 2023 года по МПК A61F9/00 G09B23/28 A61K9/107 A61P27/02 A61P31/10 

Изобретение относится к медицине, а именно офтальмологии, и предназначено для лечения грибковой язвы в экспериментальных условиях.

Известны способы консервативного лечения герпетического кератита: Способ лечения герпетического кератита (Патент RU №2328252 С1, МПК A61F 9/00, A61K 31/522, A61K 36/00, А61Р 27/02 - 10.07.2008, Бюл. №19) сочетающегося со вторичным иммунодефицитом, путем местного введения ацикловира и внутривенного капельного введения раствора ацикловира по 250 мг 3 раза в сутки, отличающийся тем, что раствор ацикловира вводят под конъюнктиву нижнего свода в дозе 1,0 мл 1 раз в сутки в течение 10 дней, внутривенное введение осуществляют также на протяжении 10 дней, внутримышечно вводят иммуномакс по 1,0 мл 1 раз в сутки на 1, 2, 3, 8, 9, 10 дни лечения.

Способ лечения герпетического кератита с изъявлением (Патент RU №2192898 С1, МПК A61N 1/30, 2/00 - 20.11.2002, Бюл. №19), включающий местное введение глазных капель Офтальмоферона в концентрации 20000 МЕ/мл в виде магнитофореза с использованием низкочастотного переменного магнитного поля 1 раз в день до полной эпителизации роговицы.

Способ лечения герпетического кератита (Патент UA 46642 A 05.15.2002), заключается в закапывании глаз антибактериальными и аввирусными веществами вместе с субалином как индуктором эндогенного интерферона. Субалин перед применением разводят в физиологическом растворе.

Объединяющим недостатком вышеописанных способов в данном контексте является не предназначенность для грибковых кератитов.

Известен способ лечения глубоких стромальных кератитов (Патент RU №2440801 С1, МПК A61F 9/00, A61K 35/14, А61Р 27/00 - 27.01.2012, Бюл. №3) путем введения аутологичных мононуклеаров (AM) крови на фоне традиционной фармакотерапии, включающей специфические противовирусные и/или антибактериальные препараты, нестероидные противовоспалительные и антиаллергические средства, а также кератопротекторы, отличающийся тем, что после осуществления местной анестезии клеточную взвесь AM в объеме 0,5 мл вводят в толщу стромы роговицы больного глаза вокруг патологического очага непосредственно после ее приготовления, для чего AM выделяют из гепаринизированной крови пациента методом фракционирования в градиенте плотности на разделяющем растворе фиколл-верографин при соотношении объемов градиента и разделяемой суспензии 1:3-1:4, при 2000 об/мин, при комнатной температуре в течение 15 минут, добавляют 1,0 мл изотонического раствора хлорида натрия и полученную суспензию вновь центрифугируют в течение 7 минут при 1500 об/мин, далее полученную клеточную взвесь размещают в стерильном флаконе с добавлением 3,0 мл изотонического раствора хлорида натрия, причем в процессе лечения процедуру повторяют 1-2 раза с интервалом 4-6 дней в зависимости от степени тяжести заболевания и динамики клинической картины.

Недостатками данного способа лечения является техническая сложность применения в виде интрастромальных инъекций, лекарственная форма не является стабильной, нет сведений об эффективности при грибковом кератите.

Способов стандартизованного местного лечения грибковых кератитов в Российской Федерации в настоящее время нет по причине отсутствия лицензированных коммерческих противогрибковых офтальмологических растворов. Сегодня лечение грибковых поражений глаз производится нестандартными методами off-label, что включает инсталляции в пораженный глаз раствора флуконазола для внутривенного введения, разведенных лиофилизатов вориконазола, амфотерицина, инстиляции растворенных растертых таблеток нистатина, пероральное и парентеральное введение антифунгальных препаратов.

В таких государствах, как Соединенные Штаты Америки, развитых странах Западной Европы, в Индии, доступен коммерческий препарат Natacyn (в форме глазных капель, 5% суспензия натамицина) и его аналоги (Fungal Keratitis - Europe. October, 2016. Accessed 10.08.21. https://www.aao.org/topic-detail/fungal-keratitis-europe#disqus_thread), (Guidelines for the management of Fungal keratitis. Accessed 01.08.21. https://kipdf.com/guidelines-for-the-manage-ment-of-fungal-keratitis_5acebde17f8b9a6b478b460c.html). Однако этот препарат не лицензирован и не сертифицирован для применения в РФ.

По данным официальной инструкции вещества натамицин, к нему чувствительны большинство патогенных дрожжевых грибов, особенно Candida albicans, некоторые простейшие (Т. Vaginalis) (Натамицин (Natamycin) описание. Дата обращения 10.10.21. https://www.vidal.ru/drugs/molecule/1466). Однако спектр противогрибкового действия глазных капель Natacyn 5%, судя по инструкции, значительно шире и включает грибы рода Candida, Aspergillus, Cephalosporium, Fusarium и Penicillium (NATACYN® (natamycin ophthalmic suspension) 5% Sterile. Accessed 10.10.21. https://www.novartis.us/sites/www.no-vartis.us/files/natacyn.pdf). Наиболее актуальными патогенами грибкового кератита являются Fusarium spp., Candida [Самойлов А.Н., Давлетшина Н.И. Анализ этиологии и антимикробной чувствительности возбудителей грибковых кератитов в серии клинических случаев. Офтальмохирургия. 2020; (1):71-76.], а изменения вирулентности грибковых агентов приводит к необходимости подбора антифунгальной терапии с учетом возможной резистентности.

Изучаются способы лечения грибкового кератита на основе вещества натамицин: «Гелевая лечебная пленка с натамицином на основе альгиновой кислоты и способ ее приготовления» (приоритет CN202110386922.0A - 2021-06-04, дочерняя больница Университета Циндао), «Натамицин глазные капли, модифицированные окисленным альгинатом натрия, и способ их приготовления» (приоритет CN202110386927.3А - 2021-07-09, дочерняя больница Университета Циндао), «Глазные капли натамицин, модифицированные оксидом хондроитинсульфата, и способ их приготовления» (приоритет CN202110239339.7А - 2021-06-15, дочерняя больница Университета Циндао), «Контактные линзы с наночастицами натамицина и способ их получения» (Приоритет CN202110093319.3 А - 2021-06-04, Вэйфанский медицинский университет).

Опубликованы заявки на патентные изобретения лечения грибкового кератита альтернативными способами: «Глазные капли диметилфумарата, способ их приготовления и применение глазных капель диметилфумарата для лечения грибкового кератита» (приоритет CN202110695312.9А - 23.07.2021), «Волокнистая мембрана кладиностата из окисленной альгиновой кислоты и способ ее получения» (приоритет CN202110386905.7А - 2021-07-06, дочерняя больница Университета Циндао), «Роговичные контактные линзы с каррагинаном, содержащие вориконазол, и способ их получения» (приоритет CN202110249461.2А - 2021 -06-22, дочерняя больница Университета Циндао), «Способ получения поликверцетина посредством ферментативного катализа и применения поликверцетина» (приоритет CN202110232800.6А - 2021-06-22 дочерняя больница Университета Циндао), «Противогрибковые глазные капли и способ их приготовления» (приоритет CN202110168153.7А - 2021-05-04 Народная больница провинции Хэнань), «Применение тимола при приготовлении лекарств для лечения грибкового кератита» (приоритет CN202011167133.ХА - 2021-01-26 дочерняя больница Университета Циндао), «Применение секреторного белка слезной железы мыши при приготовлении лекарств для лечения грибкового кератита» (приоритет CN202010929166.7A - 2020-12-11 дочерняя больница Университета Циндао).

Главное преимущество вышеуказанных методов заключается в заявленной авторами микробной санации и клинической эффективности. Основной объединяющий недостаток заявляемых способов - отсутствие стабильных офтальмологических лекарственных форм, скудная информация о противогрибковой активности указанных веществ.

Задачей заявляемого способа является создание эффективного и безопасного противогрибкового лекарственного препарата для местного применения в офтальмологии.

Техническим результатом заявленного способа является санация инфекционного очага, подтверждаемая культуральным и цитоскопическими методами исследования, клиническое выздоровление при грибковом кератоувеите, вызванного Fusarium spp., который является основным эндемичным этиологическим фактором кератомикозов.

Технический результат заявленного способа достигается за счет того, что в результате инстиляций раствора тербинафина на роговицу, пораженную чувствительными грибковыми агентами, происходит санация инфекции, подтверждаемая культуральным и цитоскопическим исследованиями, ускоренная эпителизация с минимальным риском формирования помутнения и клиническое выздоровление.

Преимуществом, обеспечиваемым приведенной совокупностью признаков, является клиническое выздоровление, потенциальная доступность лекарственного вещества, широкая противогрибковая активность.

Детали, признаки, а также преимущества настоящего изобретения следует из нижеследующего описания реализации заявленного технического решения с использованием фигур, на которых показано:

Фиг. 1 - Кератоувеит с изъязвлением роговицы у кролика в результате экспериментального заражения роговицы кролика клинической суспензией грибковых изолятов Fusarium spp.

Фиг. 2 - Вид роговицы экспериментального животного на 3-ий день лечения.

Фиг. 3 - Динамика убывания колоний микроорганизмов в пик заражения (вверху слева), после первого дня лечения (вверху справа) и к концу третьего дня лечения (снизу).

Способ осуществляется следующим образом.

Сначала производится воспроизведение грибкового кератита.

Далее производится лечение грибкового кератоувеита, которое включает инстилляции 0,1% раствора тербинафина по 1 капле в конъюнктивальную полость пораженного глаза 4 раза в сутки под контролем микрофлоры от начала лечения до клинического выздоровления и лабораторной санации.

Контроль наличия микрофлоры производился культуральным и цитологическим способом. Забор мазка для культурального исследования с конъюнктивы исследуемого глаза производился непосредственно перед заражением, далее при достижении язвы роговицы (у разных кроликов 14-16 день от начала заражения), далее на 1-ые, 2-ые, 3-и сутки от начала лечения. Под местной инсталляционной анестезией 0,1% раствора оксибупрокаина забранный стерильным тампоном материал помещался в нейтральную транспортную среду и в тот же день производился посев на питательную среду Сабуро в микологической лаборатории. Соскобы с роговицы для цитологического исследования забирались также при достижении язвы роговицы, далее - на 1-ые, 2-ые, 3-и сутки от начала лечения. Непосредственно перед заражением производили забор мазка-отпечатка с роговицы во избежание дээпителизации, травмы роговицы и намеренного создания входных ворот для будущей инфекции. Динамика культивирования на питательной среде отражена на фиг. 3. (слева-направо): перед стартом лечения экспоненциальный рост воздушных хлопьевидно-войлочных колоний серовато-белого цвета; на третий день - резкая убыль числа колоний, на третий день питательная среда оказалась стерильной, что коррелировало с клинической картиной язвы.

Тербинафин выбран по показателю специфической чувствительности грибов в случаях грибкового кератита у пациентов [Самойлов А.Н., Давлетшина Н.И. Анализ этиологии и антимикробной чувствительности возбудителей грибковых кератитов в серии клинических случаев. Офтальмохирургия. 2020; (1):71-76.]. Тербинафин эффективен в отношении грибов, вызывающих заболевания кожи, волос и ногтей, в т.ч. дерматофитов, таких как Trichophyton (например, Т. rubrum, Т. mentagrophytes, Т. verrucosum, Т. tonsurans, Т. violaceum), Microsporum (например М. canis), Epidermophyton floccosum, а также дрожжевых грибов рода Candida (например С. albicans) и Pityrosporum. В низких концентрациях тербинафин оказывает фунгицидное действие в отношении дерматофитов, плесневых и некоторых диморфных грибов. Активность в отношении дрожжевых грибов, в зависимости от их вида, может быть фунгицидной или фунгистатической. [Тербинафин (Terbinafinum). Дата обращения - 10.10.2021. https://www.rlsnet.ru/mnn_index_id_1475.htm].

В ходе эксперимента выяснилось, что максимальная возможная растворимая концентрация вещества - 100 мкг/мл (0,1%), что и было взято за основу в исследовании. В офтальмологической практике тербинафин не имеет широкого распространения ввиду отсутствия глазной формы лекарственного вещества, а также, возможно, раствора для внутривенного введения. Однако ряд исследователей отмечают высокую чувствительность патогенных грибков, вызывающих кератиты и язвы роговицы, к тербинафину.

Изобретение направлено на устранение следующих недостатков: отсутствие лицензированных коммерческих противогрибковых офтальмологических растворов, достоверно эффективное и безопасное лечение грибкового кератита, язвы и/или кератоувеита грибковой этиологии, широкий противогрибковый спектр активности.

Всего провели эксперимент на 6 кроликах, 12 глазах.

Способ поясняется следующим экспериментальным примером.

Пример 1.

Роговица кролика (Фиг. 1), у которого смоделирован грибковый гипопион-кератоувеит.

Бактериологический и микологический посев мазка отделяемого конъюнктивальной полости, забранного в день окончания заражения, выявил рост Fusarium spp. По данным цистоскопии соскоба роговицы, обнаружены активные элементы Fusarium spp.

На 3-ий день от начала инстиляций 0,1% раствора тербинафина гипопион купирован, инфильтрат резорбирован, язва эпителизирована, сформировано легкое помутнение стромы роговицы (Фиг. 2). Бактериологический и микологический посев мазка отделяемого конъюнктивальной полости, забранного в этот день, роста не выявил. Цитоскопия соскоба с роговицы также живых грибковых элементов не обнаружила.

Культуральное исследование проводилось непосредственно перед началом инстиляций, в первый и третий день лечения (Фиг. 3).

Применение тербинафина позволяет полностью санировать конъюнктивальную полость экспериментальных животных при грибковом кератите, что подтверждено культуральными данными.

Таким образом, заявленный способ позволяет санировать грибок из инфильтрата роговицы, купировать воспаление слоев роговицы, предотвратить глубокое изъязвление и перфорацию роговицы, достичь клинического выздоровления.

Изобретение относится к медицине, а именно к офтальмологии. Осуществляют инстиляцию глазных капель, при этом производят инстиляции раствора тербинафина, разведенного до 100 мкг/мл (0,1%), по 1 капле в конъюнктивальную полость пораженного глаза 4 раза в сутки под контролем микрофлоры на 1, 2 и 3 сутки от начала лечения до клинического выздоровления и лабораторной санации. Способ позволяет достичь купирования инфекции, что подтверждается культуральным и цитологическим методом исследования, ускорить эпителизацию, низким риском формирования помутнения стромы за счет быстрой санации и эпителизации и клинического выздоровления. 1 пр., 3 ил.

Способ лечения грибковой язвы роговицы, включающий инстиляции глазных капель, отличающийся тем, что производят инстиляции раствора тербинафина, разведенного до 100 мкг/мл (0,1%), по 1 капле в конъюнктивальную полость пораженного глаза 4 раза в сутки под контролем микрофлоры на 1-ые, 2-ые и 3-и сутки от начала лечения до клинического выздоровления и лабораторной санации.