Комбинированный биологический препарат для лечения эндометритов у сельскохозяйственных животных Российский патент 2023 года по МПК C12N1/20 A61K35/747 C12R1/225 C12R1/25 

Комбинированный биологический препарат для лечения эндометритов у сельскохозяйственных животных. Изобретение относится к области ветеринарии и биотехнологии и может быть использовано при профилактике и лечении эндометритов у сельскохозяйственных животных. Биопрепарат состоит из смеси штаммов лактобактерий и фермента - трипсина.

В животноводческом сельском хозяйстве послеродовой эндометрит у коров является одним из наиболее распространенных гнойно-воспалительных заболеваний. Это влечет за собой увеличение сроков оплодотворяемости, а также возможное бесплодие, и как следствие - снижение рождаемости телят.

На сегодняшний день при лечении эндометритов у коров в основном используют антибиотики, однако, их применение не всегда эффективно из-за широкого распространения антибиотикорезистентных штаммов возбудителей этого заболевания. Одним из направлений в решении данного вопроса является разработка новых экологически безопасных препаратов, обладающих не только выраженным антимикробным, но и противовоспалительным действием.

Известен биопрепарат, в котором предлагается использовать в качестве этиотропного средства пробиотический препарат «Ветомгин», а в качестве средства неспецифической общестимулирующей терапии - фитобиотик «Эраконд» (патент РФ №2652276 «Способ лечения послеродового эндометрита у коров»). При этом больным коровам внутриматочно в первые сутки после родов вводят две свечи препарата «Ветомгин» (которые содержат в 1 г не менее 10¹⁶ КОЕ живых спор бактерий Bacillus subtilis и Bacillus licheniformis) с интервалом 4 часа, через 24 часа процедуру лечения этим препаратом повторяют, одновременно на 1-й и 7-й дни с начала лечения коров препаратом «Ветомгин» вводят 4% раствор «Эраконда» (содержит растительный конденсированный экстракт люцерны посевной) на физиологическом растворе в дозе - 20 см³ внутримышечно.

Известен способ лечения эндометритов у высокопродуктивных коров (патент РФ №2012147670), включающий внутриматочное введение пробиотика «Моноспорин», содержащего штаммы Bacillus subtilis с концентрацией в 1 мл 10⁸ КОЕ. Препарат вводят в дозе 5 см³ разведенным физиологическим раствором в соотношении 1:3 1 раз в день на 9-й, 10-й, 11-й,12-й и 13-й дни лечения после курса общестимулирующей и этиотропной терапии, включающей введение ПДЭ, «Тривитамина», «Эндометронага-Т».

Известен биопрепарат для профилактики и лечения эндометритов у коров (патент РФ №2687041), содержащий бактерии Bacillus subtilis и бактерии Bacillus licheniformis с титром спор 10⁸-10¹¹ в соотношении 1:1, 0,5-1,5% раствор хитозана и вспомогательные вещества, такие как лактоза, СаСО₃, молочная сыворотка или свекольный сок в заданном соотношении компонентов.

Известен препарат под названием «Гипролам» (патент РФ №2538804) для профилактики послеродовых эндометритов у коров. Препарат содержит бактерии Lactobacillus fermentum 44/1 и Lactococcus lactis subsp. Lactis 57₄ в количестве не менее 1·10⁸ КОЕ/см³, а также вспомогательные вещества - воду, сыворотку молочную, глюкозу, экстракт дрожжевой. Препарат вводят в течение 5-7 дней до отела ежедневно в дозе 100 см³. Входящие в состав препарата штаммы молочнокислых бактерий способны приживляться в родополовых путях у коров на срок до 3-х недель и оказывать антагонистическое воздействие на проникающую в матку условно-патогенную микрофлору (Staphylococcus aureus, Escherichia coli, Proteus vulgaris, Klebsiella pneumonia и др.). «Гипролам» расфасовывают по 100 см³, что составляет одну дозу препарата.

Известен способ профилактики эндометрита у коров (патент РФ 2693 900), включающий введение в организм животного биогенного стимулятора, внутримышечно утеротона и внутриматочно пробиотических бактерий, отличающийся тем, что пробиотические бактерии вводят в виде суппозитория, содержащего в равных долях сухую биомассу культур клеток Bacillus Licheniformis, Bacillus Subtilis и Lactobacillus amylovorus, масло какао, парафин, жир молочный. В качестве биогенного стимулятора используют цитогумат, который вводят ежедневно, начиная за 20 дней до отела в расчете 50 мл на голову в смеси с кормом, утеротон - по одному разу в день в дозе 10 мл в течение трех дней подряд после отела, а суппозитории - один раз в день по 4 суппозитория в течение 3-х дней после отела.

Положительной стороной всех приведенных способов лечения является продукция микроорганизмами антибактериальных веществ, что позволяет отказаться от антибиотиков и химиопрепаратов. Однако при лечении эндометритов у коров данными препаратами недостаточно высокая терапевтическая эффективность.

В качестве прототипа выбран способ лечения эндометрита у коров (патент РФ №2067450) путем внутриматочного введения препарата, содержащего лактобациллы штаммов Lactobacillus plantarum «Киров-1» и Lactobacillus buchnery «Киров-4». Препарат вводят по 2-3 дозы с содержанием в одной дозе объемом 4 см³ 3,0-3,5 млрд лактобацилл 2-3 раза с интервалом 24-48 ч. Недостатком данного препарата является недостаточно высокая эффективность при лечении хронической формы эндометрита.

Техническим результатом изобретения является повышение терапевтической эффективности лечения послеродового эндометрита у коров. Для повышения эффективности препарата, особенно для лечения хронической формы, в его состав был введен протеолитический фермент - трипсин.

Технический результат достигается методом комплексного лечения послеродового эндометрита у коров, предусматривающим внутриматочное введение препарата, состоящего из композиции лактобактерий и ферментного препарата - трипсина.

Препарат содержит 2 штамма лактобацилл: Lactobacillus buchneri БХ-99 ВКПМ В-11839, Lactobacillus plantarum ПЛ-99 ВКПМ В-11747, выращенных на мясо-пептонном бульоне с содержанием глюкозы 2% и фермент - трипсин. Препарат представляет собой жидкость светло-коричневого цвета с сероватым осадком на дне флакона. Осадок при взбалтывании легко разбивается и вызывает помутнение препарата. Одна лечебно-профилактическая доза содержит 50 см³ препарата с концентрацией не менее 3,5·10⁹ КОЕ/см³. Препарат вводят в матку по одной дозе 2 раза в день на протяжении двух суток.

Причинно-следственная связь между совместным применением микробной и ферментной составляющей препарата и повышением терапевтической эффективности лечения хронического послеродового эндометрита у коров заключается в следующем: трипсин обладает противовоспалительным, некролитическим и регенерирующим действием, в очаге воспаления он расщепляет некротизированные ткани, фибринозные сгустки, разжижает гной, что позволяет усилить процесс ингибирования лактобактериями патогенных и условно-патогенных микроорганизмов, а также увеличивает адгезивную способность лактобактерий.

Проверка эффективности комбинированного биологического препарата при лечении эндометритов проводилась на коровах. Диагноз - эндометрит ставили в соответствии с «Методическими указаниями по диагностике, терапии и профилактике болезней органов размножения у коров и телок» [Методические указания по диагностике, терапии и профилактике болезней органов размножения у коров и телок. Утверждены Заместителем руководителя Департаментом ветеринарии Минсельхозпрода РФ 04.07.2000 г. №13-5-2/2057].

Сущность технического решения поясняется примером.

Оценка эффективности лечения эндометритов с использованием комбинированного биологического препарата осуществлялась путем учета количества выздоровевших животных. Клинические испытания проведены на 30 больных животных через 30 суток после отела, что свидетельствовало о хронизации процесса, разделенных по принципу аналогов на 3 группы (по 10 животных в каждой).

Коровам первой группы внутриматочно (вагинально) в первые сутки вводили смесь штаммов лактобацилл Lactobacillus buchneri БХ-99 ВКПМ В-11839, Lactobacillus plantarum ПЛ-99 ВКПМ В-11747 и фермента - трипсина по 50 см³ с интервалом 8 часов, лечение проводили двое суток.

Животным второй группы вводили только смесь лактобактерий по 50 см³ с интервалом 8 часов, лечение проводили двое суток.

Коровам третьей группы вводили только фермент - трипсин.

За животными вели наблюдение в течение 10 дней с начала лечения.

Результаты исследований представлены в таблице 1.

Таблица 1 - Терапевтическая эффективность лечения хронического послеродового эндометрита у коров

Показатели Группа 1
(лактобактерии + трипсин) Группа 2
(лактобактерии) Группа 3
(трипсин) Количество животных 10 10 10 Выздоровело 6 3 0 Терапевтическая эффективность, % 60 30 0

Полученные экспериментальные данные свидетельствовали о том, что наибольшей терапевтической эффективностью при хроническом послеродовом эндометрите у коров, обладал комбинированный биологический препарат, состоящий из композиции лактобактерий и трипсина (группа 1). При этом было установлено, что количество выздоровевших животных в группе 1 было больше, чем в группе 2 в 2 раза. Для животных группы 3 терапевтическая эффективность использования только ферментного препарата при лечении послеродового эндометрита отсутствовала.

Изобретение решает задачу повышения терапевтической эффективности лечения коров при хроническом послеродовом эндометрите, что выражается в увеличении количества выздоровевших животных.

Изобретение подтверждается примерами.

Пример 1. Для оценки адгезивной активности лактобацилл подсчитывали средний показатель адгезии (СПА) - среднее количество микробных клеток, прикрепившихся к одной эпителиальной клетке.

Таблица 2 - Адгезивная активность лактобацилл

Штамм микроорганизма Средний показатель адгезии (СПА) Степень адгезивности Lactobacillus plantarum ПЛ-99 37,2±4,2 высокая Lactobacillus buchneri БХ-99 30,4±5 высокая

Штаммы лактобацилл, входящие в состав комплексного биопрепарата, обладают высокой адгезивной активностью, что говорит о перспективности их использования для лечения гнойно-воспалительных заболеваний.

Пример 2. Оценку антагонистической активности исследуемых культур лактобацилл проводили по двухслойной методике Фредерика в условиях in vitro.

Таблица 3 - Антагонистическая активность штаммов лактобацилл в отношении клинических культур возбудителей госпитальных инфекций, в том числе антибиотико-резистентных

Вид индикаторных
культур Кол-во
штаммов Диаметр зон подавления роста индикаторной культуры штаммом … , мм L. buchneri
БХ-99 L. plantarum ПЛ-99 Смесь двух штаммов 1 2 3 5 6 Staphylococcus aureus, в т.ч. MRS 10 15-40 17-45 18-45 Staphylococcus aureus, NO 89, ЛУ 1 46 60 50 Staphylococcus aureus, NO 101, ЛУ 1 50 54 50 Staphylococcus sciuri NO 95, ЛУ 1 >60 >60 >60 Enterococcus faecium, в т.ч. ЛУ 7 25-60 25-60 25-60 Enterococcus faecalis, в т.ч. ЛУ 4 22-28 25-30 26-30 Enterococcus gallinarum, в т.ч. ЛУ 2 25-27 30-32 30-32 Enterococcus casseliflavus, ЛУ 1 30 28 30 Listeria monocytogenes, в т.ч. ЛУ 10* >60 >60 >60 Klebsiella pneumonia
NO 77, ЛУ 1* >60 50 54 Klebsiella pneumonia
NO 94/1, ЛУ 1* >60 >60 >60 Acinetobacter baumannii NO 91, ЛУ 1* >60 >60 >60 Pseudomonas aeruginosa NO 128, ЛУ 1* >60 >60 >60 Enterobacter cloacae
NO 110, ЛУ 1* 60 60 40 Enterobacter kobei
NO 105, ЛУ 1* >60 >60 >60 Raoultella ornithinolytica NO 109, ЛУ 1* >60 >60 >60 Raoultella planticola
NO 108, ЛУ 1 27 31 31 Aeromonas hidrophila
NO 10, ЛУ 1 28 32 32 Leclercia adecarboxylata NO 112, ЛУ 1 27 30 30 Pluralibacter pyrinus
NO 11, ЛУ 1 27 30 30 Stenothrophomonas maltophilia NO 3420, ЛУ 1 34 35 36 Shigella flexneri B 8116, ЛУ 1 26 30 30 Shigella sonney S form, ЛУ 1 25 30 30 Shigella dysenteriae Tuck 1362, ЛУ 1 40 30 40 Escherichia coli, в т.ч. ЛУ 14 20-27 22-32 25-32 Salmonella typhimurium 490/60 1 25 29 27 Salmonella choleraesuis 1 26 30 30 Salmonella infantis Новгород 1 1 28 30 30 Salmonella enteritidis 237 1 20 23 25 Salmonella gallinarum 95 1 25 24 25 Примечания:
1 - «*» - штаммы лактобацилл для определения антагонизма на этих индикаторных культурах выращивали на среде MRS-4 в течение 48 часов, остальные в течение 24 часов;
2 - «ЛУ» - лекарственно-устойчивые;
3 - погрешность измерений ±0,5 мм

Штаммы лактобацилл, входящие в состав комбинированного биологического препарата, обладают высокой антагонистической активностью в отношении 71 культуры индикаторных штаммов, что позволяет сделать вывод о том, что данные штаммы смогут обеспечить подавление источников развития гнойно-воспалительного процесса.

Изобретение относится к биотехнологии и ветеринарии. Предложен комбинированный биологический препарат для лечения эндометритов у сельскохозяйственных животных, включающий смесь штаммов Lactobacillus buchneri БХ-99 ВКПМ В-11839 и Lactobacillus plantarum ПЛ-99 ВКПМ В-11747 и патогенетический компонент - трипсин. Изобретение обеспечивает расширение арсенала способов лечения гнойно-воспалительных заболеваний и повышения эффективности проводимых лечебно-профилактических мероприятий при эндометритах у животных. 2 табл., 2 пр.

Комбинированный биологический препарат для лечения эндометритов у сельскохозяйственных животных, состоящий из штаммов лактобактерий Lactobacillus buchneri, Lactobacillus plantarum, отличающийся тем, что он включает этиотропный компонент - смесь штаммов Lactobacillus buchneri БХ-99 ВКПМ В-11839 и Lactobacillus plantarum ПЛ-99 ВКПМ В-11747 и патогенетический компонент - трипсин.