БИОПРЕПАРАТ ЛЕЧЕБНО-ПРОФИЛАКТИЧЕСКОГО ДЕЙСТВИЯ ПРИ ЭНДОМЕТРИТАХ ЖИВОТНЫХ Российский патент 2005 года по МПК C12N1/20 A61K35/74 C12N1/20 C12R1/01 C12R1/225 

Изобретение относится к биотехнологии, микробиологии, производству пробиотиков и может применяться в ветеринарии.

Решение проблемы эндометритов маточного поголовья крупного рогатого скота является перспективным в развитии животноводства. Имеются сведения о ведущей роли патогенной и условно-патогенной микрофлоры в развитии патологии, поэтому в терапии эндометритов применяются различные химиотерапевтические средства и антибиотики. Результаты лечения зависят от лекарственной устойчивости возбудителей [1].

Обозначено другое направление в профилактике и лечении эндометритов коров, которое предусматривает применение антагонистически активных микроорганизмов к возбудителям болезни. Известно применение сухого биосана, содержащего живые культуры микроорганизмов Lactobacillus plantarum, Lactobacillus buchneri. Однако данные молочнокислые бактерии и препарат, приготовленный на их основе, не содержат необходимого количества жизнеспособных клеток для эффективного лечебно-профилактического действия [2].

Наиболее близким аналогом по технической сущности к изобретению является препарат, включающий микроорганизмы видов: Bifidobacterium bifidum, Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus fermenti. Препарат применяется в виде сухой смеси [3].

Недостатком способа является применение штаммов В. bifidum, L.acidophilus, выделенных из кишечника человека. Штаммы проявляют слабые ферментативные и биохимические свойства, недостаточно устойчивы к ряду антибиотиков.

Задача изобретения является получение препарата пробиотического действия при профилактике и лечении эндометритов коров.

Технический результат изобретения заключается в повышении терапевтической эффективности препарата за счет включения в состав препарата микроорганизмов с высокой адгезивностью и активными биологическими свойствами.

Сущность изобретения состоит в том, что предлагаемый биопрепарат включает штаммы: Bifidobacterium pseudolonqum №533 и Lactobacillus salivarius №117, выделенные на кафедре эпизоотологии микробиологии Вологодской государственной молочнохозяйственной академии им. Н.В. Верещагина.

Штамм В. pseudolonqum №533 выделен из содержимого половых путей здоровых женщин.

Клетки штамма В. pseudolonqum №533 представляют грамположительные палочки, неподвижны, спор не образуют, при росте на печеночном агаре склонны к ветвлению. Штамм обладает высокой биохимической активностью и накапливает необходимую микробную массу на различных средах. Штамм ингибирует рост патогенных и условно-патогенных микроорганизмов.

Штамм L. salivarius №117 выделен из интравагинального содержимого здоровых коров с применением агаризованных сред МРС, стрептомицетного агара с глюкозой и стрептомицетного агара с глицерином при термостатировании при (37±1)°С в течение 72 часов. Клетки штамма L. salivarius №117 имеют палочковидную форму, спор не образуют, неподвижны, грамположительные, проявляют ферментативные свойства с образованием молочной, уксусной, янтарной кислот и активно размножаются на гидролизатно-молочной среде, козеиново-дрожжевой среде и молочной сыворотке [4]. При росте на питательных средах накапливает необходимую биомассу, что позволяет использовать его в технологическом процессе. Штамм L. salivarius №117 обладает выраженной антагонистической активностью по отношению к патогенной микрофлоре: зоны задержки роста тест-культур Staph. aureus составляет 28±1,7 мм; E.coli 25±1,3 мм; В. cereus 26±4.1 мм; S. dublin 27±2,4 мм. Штамм проявляет высокую устойчивость к антибиотикам тетрациклинового ряда и левомицетину.

Пример 1. Биопрепарат, содержащий штаммы: B.pseudolonqum №533 и L. salivarius №117, производят на основе бактериальной массы путем раздельного культивирования штаммов на жидких питательных средах, принятых для выращивания бифидобактерий и лактобацилл. В течение 12-16 часов культивирования при температуре (37±1)°С выход биомассы достигает не менее 10 млрд живых клеток в 1 мл культуральной среды. Выращенные культуры охлаждают до 6-10°С и подвергают центрифугированию. Полученную биомассу смешивают с защитной средой: сахароза - 10%, глюконат кальция - 1,5-2%, аскорбиновая кислота - 1%, причем соотношение биомассы и защитной среды составляет 1:1-1:2. Приготовленные суспензии разливают во флаконы по 2 мл или 4 мл и высушивают при температуре (58±2)°С в течение 2-4 час. Содержание жизнеспособных клеток бифидобактерий и молочнокислых бацилл составляет до 200 млрд. клеток в 1 г препарата.

В одном флаконе содержится не менее 20 млрд. клеток в равном количестве каждого штамма.

Пример 2. В качестве биологической модели для испытания биопрепарата используют коров после отела в хозяйстве, неблагополучном по эндометритам.

Контролем служат животные, которым препарат не назначают, профилактику и лечение проводят традиционным методом.

Препарат вводят в полость матки, предварительно растворяют кипяченой и охлажденной до 37°С воде по одной дозе, находящейся в одном флаконе, двукратно, через 24-48 час. С лечебной целью препарат вводят в удвоенной дозе два раза в день до выздоровления.

Учитывают количество животных без нарушения функции после отела при введении биопрепарата, из них количество заболевших, количество оплодотворенных после первой случки, продолжительность болезни в сравнении с контрольными группами.

Данные представлены в таблице.

Из таблицы следует, что препарат, включающий штаммы B.pseudolonqum №533 и L.salivarius №117, обладает профилактическим и лечебным эффектом при испытании на животных и снижает заболеваемость эндометритами.

ИСТОЧНИКИ ИНФОРМАЦИИ, ПРИНЯТЫЕ ВО ВНИМАНИЕ

1. Тришкина Е.Т., Галушко Л.Х. Микробный фактор в этиологии послеродового эндометрита коров. / Ветеринария. – 1985. - №11. – с.52-53.

2. Опекунов К.А., Ивановский А.А., Вепрева Н.С. Сухой биосан при эндометритах у коров. / Ветеринария. – 1994. – №2 – с.39-40.

3. Патент RU 2182008, 2000 г.

4. Патент РФ 1712401 А1, 1992 г.

Таблица Группы животныхУчитываемыеОпытные с применением биопрепаратаКонтрольные с применением традиционных методовпоказателиПрофилактическое действие I группаЛечебное действие II группаПрофилактическое действие III группаЛечебное действие IV группа123451. Общее количество в группе: гол.29855120482. Из них без нарушения функций после отела: гол.264-74-%88,6-61,7-3. Возникло заболевание: гол.34-46-%11,4-38,3-4. Количество оплодотворенных после первой случки: гол.287518231%96,392,768,364,65. Продолжительность болезни: сут.-8-13

Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано в медицине и ветеринарии для лечения и профилактики эндометритов у коров. Биопрепарат содержит сухую биомассу штаммов Bifidobacterium pseudolongum №533 и Lactobacillus salivarius №117. Штаммы культивируют раздельно на питательных средах, обеспечивающих накопление необходимой биомассы. Концентрируют биомассу центрифугированием и смешивают с защитной средой в соотношении 1:1-1:2 соответственно. Полученные суспензии биомасс В. pseudolongum №533 и L. salivarius №117 смешивают в равных количествах, разливают во флаконы по 2-4 мл и высушивают. Полученный биопрепарат содержит до 200 млрд. живых клеток в 1 г. Изобретение позволяет получить биопрепарат с высокой адгезивностью, антагонистической активностью к условно-патогенной, патогенной микрофлоре, повысить терапевтическую эффективность при лечении и профилактике эндометрита у коров. 1 табл.

Биопрепарат лечебно-профилактического действия при эндометритах животных, содержащий сухую биомассу штаммов Bifidobacterium pseudolongum № 533 и Lactobacillus salivarius № 117, хранящихся в коллекции музея чистых культур микроорганизмов Вологодской государственной молочнохозяйственной академии им. Н.В. Верещагина, в равных количествах.