СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ БАКТЕРИЙНОГО ПРЕПАРАТА "БИОСАН" Российский патент 1998 года по МПК A61K35/74 

Предлагаемое изобретение относится к области ветеринарии и предназначено, в частности, для лечения эндометрита у коров.

Известны способы лечения эндометрита у коров антибиотиками и комплексными препаратами, состоящими из различных антибиотиков, сульфаниламидных и других лекарственных веществ. Однако широкое и продолжительное использование таких препаратов в ветеринарии и медицине приводит к появлению устойчивости к ним у микробов, вызывающих воспалительные процессы. Эффективность применения препаратов при этом снижается, а продолжительность лечения увеличивается [5, 6] Антибиотики и сульфаниламиды, применяющиеся при лечении эндометрита у коров, ухудшают качество молока и молочной продукции. Поэтому разработка и использование в ветеринарии новых препаратов, не содержащих химиотерапевтических средств, является важной задачей.

Наиболее близкими по механизму действия к предлагаемому изобретению являются бактериальные препараты лактобактерин и бифидумбактерин. Лактобактерин представляет собой высушенную массу живых лактобактерий-антагонистов шигелл, энтеропатогенных кишечных палочек, гемолитического стрептококка и протея. Бифидумбактерин высушенная взвесь живых антагонистически активных бифидобактерий. Оба препарата применяются в медицине при лечении острых кишечных инфекций, дисфункций кишечника, хронических колитов, энтероколитов и для санации половых путей при воспалительных заболеваниях женских половых органов [1, 4] Технология приготовления лактобактерина и бифидумбактерина является сложной, продолжительной и требует дорогостоящего оборудования для выращивания, замораживания и высушивания используемых микробов. Эта технология не имеет никакого сходства с методикой получения жидкого биосана.

Цель предлагаемого изобретения заключается в разработке способа получения бактерийного препарата "Биосан", позволяющего повысить эффективность лечения эндометрита у коров, сократить сроки лечения и использование для этой цели химиотерапевтических средств.

Указанная цель достигается тем, что способ включает раздельное выращивание на МППБ двух штаммов вагинальных лактобацилл, ранее не применявшихся в ветеринарии, и их смешивание перед расфасовкой во флаконы. Биосан (от слов "биологическая санация") включает штаммы Lactobacillus plantarum (Киров-1) и Lactobacillus buchneri (Киров-4), выращенных на жидкой питательной среде. Применяемые лактобациллы получены из естественной среды обитания влагалища здоровой женщины с первой степенью чистоты [2, 3] Оба штамма проявляют высокие антогонистические свойства против условно-патогенных микробов, вызывающих эндометриты у коров.

Для приготовления биосана берут свежую печень крупного рогатого скота, разрезают ее на кусочки, заливают равным количеством воды и варят в течение часа. Полученный экстракт фильтруют через вату и смешивают с мясопептонным бульоном из расчета 1 часть печеночного экстракта на 3 части мясопептонного бульона. Затем в среду добавляют хлорид натрия (1,25 г на 1 л), 2% глюкозы и устанавливают pH 6-7.

Приготовленную среду кипятят 15 мин, фильтруют, наливают в колбы (0,5-2 л), добавляют кусочки вареной печени (1 г на 2 мл), автоклавируют среду при 0,5 атм. в течение 30-40 мин. После этого в колбы вносят маточную культуру лактобациллюс плантарум (Киров-1) и отдельно лактобациллюс бухнери (Киров-4), из расчета 1 мл культуры на 100 мл среды, культивируют лактобациллы в термостате в течение 48 ч при температуре 37^oC и определяют количество выросших микробов в 1 мл препарата путем последовательных разведений.

Для приготовления маточных расплодок в пробирки наливают по 8-9 мл среды, затем в одни из них добавляют по 1 мл смыва физраствора с агара со штаммом лактобациллюс плантарум, а в другие со штаммом лактобакциллюс бухнери и также выращивают микробов в термостате при 37^oC в течение 48 ч.

Приготовленные культуры разливают поровну в стерильных условиях во флаконы емкостью 12, 50 или 100 мл и закрывают их резиновыми пробками и металлическими колпачками при помощи закатывающего устройства. В 1 мл биосана содержится 3-3,5 млрд. лактобацилл. Оба штамма хранят по отдельности в пробирках в холодильнике при температуре плюс 2-4^oC и ежемесячно пересевают на косяк из МПА с 1% глюкозы.

Полученный препарат представляет собой прозрачную жидкость светло-коричневого цвета с сероватым осадком на дне флакона. Осадок легко разбивается при встряхивании и вызывает помутнение препарата [3]
Аналогов на разработанный способ приготовления жидкого бактерийного препарата "Биосан" в ветеринарии и медицине нет. Проведенные исследования показали, что лактобациллы биосана способны приживаться на слизистых оболочках половых органов у коров на 15 и более дней и подавлять развитие находящихся во влагалище и матке условно-патогенных микробов (кишечной и синегнойной палочек, стафилококков, стрептококков, протея) и некоторых патогенных микробов (возбудителей дизентерии). Хранят препарат в холодильнике при температуре плюс 2-4^oC. Срок годности приготовленного препарата 20 дней.

При лечении биосаном 84 коров, больных острым гнойно-катаральным эндометритом, после 1-3-кратного внутриматочного введения препарата по 4 мл с содержанием в 1 мл 3-3,5 млрд. лактобацилл (12-15 млрд. в дозе) выздоровело 82 головы (97,6%), из них оплодотворилось 72 гол (83,3%). Хроническую форму эндометрита лечили у 168 коров. При этом были вылечены все коровы (100%), оплодотворились 139 коров (82,7%) [2]
Приведенные данные свидетельствуют о высокой терапевтической эффективности применения биосана при лечении эндометрита у коров. Курс лечения при этом состоит из 1-3-х внутриматочных введений препарата, что в 2-3 раза меньше, чем при лечении эндометрита химиотерапевтическими средствами. Препарат экологически чистый и не приводит к ухудшению качества молока.

Источники информации
1. Бакулева Л. П. Желнина Р.К. Нестерова А.А. Способ лечения воспалительных заболеваний женской половой сферы. Описание изобретения к авторскому свидетельству N 1156693. Опубликовано 23.05.85 г. Бюллетень N 19.

2. Варганов А. И. Опекунов К.А. Лечение эндометрита коров вагинальной палочкой. Доклады ВАСХНИЛ, 1983, N 8, с. 38-39.

3. Варганов А.И. Технические условия на биосан N 10.07.200-91. Утверждены Главным управлением ветеринарии МСХ СССР 30.10.91 г.

4. Вельтищев Е. В. Комаров Ф.И. Навашин С.М. Справочник практического врача. М. Медицина, 1992 г. том 2, с. 324-328.

5. Заварзин Г.А. Микробиология двадцать первому веку. М. Знание, 1981, с.58-59.

6. Лебедев А.А. Современное состояние вопроса о воспалительных заболеваниях женских гениталий. Сб. "Вопросы патогенеза и терапии воспалительных заболеваний женских гениталий", Москва, 1970, т. 5, с.13.

Использование: в ветеринарии. Сущность изобретения: способ получения бактериального препарата путем культивирования двух штаммов лактобацилл на мясопептонном печеночном бульоне с добавлением 1-2% глюкозы, 0,12% хлористого натрия при температуре 37^oC и pH 6-7 в течение 48 ч.

Способ получения бактериального препарата из культур лактобацилл, включающий культивирование лактобацилл на искуственной питательной среде, отличающийся тем, что в качестве лактобацилл используют штаммы лактобацилл Lactobaccillus plantarum (Киров-1), Lactobacillus buchneri (Киров-4), а в качестве питательной среды используют мясопептонный печеночный бульон с добавлением 1 2% глюкозы, 0,12% хлористого натрия, причем культивирование штаммов осуществляют при температуре 37^oС и pH 6 7 в течение 48 ч, после чего получаемые культуры смешивают в равных частях.