Способ подготовки донорского материала для кератопластики Российский патент 2023 года по МПК A61F9/01 A61F9/07 A61N5/06 A61K31/525 A61P3/02 

Изобретение относится к медицине, а именно, к офтальмологии, и может быть использовано подготовки донорского материала для кератопластики с целью замещения поврежденных слоев роговицы реципиента аналогичной тканью донора.

Трансплантация роговицы (кератопластика) относится к основным видам хирургического лечения, направленным на восстановление оптических и структурных свойств патологически измененной роговой оболочки глаза.

Роговицу отличает отсутствие кровеносных и лимфатических сосудов, содержание небольшого количества антиген презентирующих дендритных клеток и макрофагов, а также слабая экспрессия антигенов главного комплекса гистосовместимости. Именно эти факторы определяют высокую частоту прозрачного приживления трансплантата роговицы в неосложненных случаях [Осипян Г.А., Шелудченко В.М., Юсеф Ю.Н., Храйстин X., Джалили Р.А., Краснолуцкая Е.И. Комбинированная межстромальная имплантация полупроницаемой гидрогелевой мембраны при болезни трансплантата роговицы и неоднократной СКП (клиническое наблюдение). Офтальмология. 2021; 18(1): 165-170. https://doi.org/10.18008/1816-5095-2021-1-165-170].

Однако в ряде случаев исходом операции может быть полупрозрачное/непрозрачное приживление или лизис кератотрансплантата.

По данным литературы среди основных причин этих состояний выделяют реакцию отторжения трансплантата, вторичную глаукому, рецидив заболевания и другие состояния, приводящие к потере эндотелиальных клеток (хронические увеиты, офтальмологические проявления системных аутоиммунных заболеваний, синдром мелкой передней камеры, синдром дисперсии пигмента и др.).

Так, несмотря на большие успехи в трансплантологии, реакция тканевой несовместимости после кератопластики является одной из главных причин стойкого помутнения трансплантата роговицы и развивается в 5-70% случаев (в зависимости от факторов риска у реципиента, а также от исходной патологии и сроков послеоперационного наблюдения) [Sangwan V.S., Ramamurthy В., Shah U., Garg P., Sridhar M.S., Rao G.N.. Outcome of corneal transplant rejection: a 10-year study. Clin Experiment Ophthalmol. 2005;33:623-627. DOI: 10.1111/j. 1442-9071.2005.01107.x].

К «кератопластике высокого риска» относят операции у пациентов с такими поражениями роговицы, как язва или перфорация различной этиологии (бактерии, грибы, простейшие; травма), ожоговое помутнение, ранняя или поздняя несостоятельность кератотрансплантата («болезнь трансплантата») [Борзенок С.А., Тонаева Х.Д., Онищенко Н.А., Комах Ю.А. Индукция локальной иммунной толерантности с помощью лимбальной сотрансплантации при кератопластике высокого риска (обзор литературы). Офтальмохирургия. 2011;(2):85-88.]

Результат кератопластики зависит во многом от качества и способа подготовки донорского материала, техники и объема хирургического вмешательства, течения послеоперационного периода, частоты рецидивов при наличии хронической офтальмопатологии, количества кератопластик в анамнезе (Малюгин, Б. Э. Глубокая передняя послойная кератопластика с использованием фемтосекундного лазера Intralase 60 kHz: первый опыт // Практическая медицина. - 2012. -т.1. - No 4. - С. 100-103.)

С целью минимизации послеоперационных осложнений к донорскому материалу предъявляют особые требования: материал для кератопластики должен характеризоваться высокой биосовместимостью, а также такими оптическими параметрами, как прозрачность, сферичность, оптическая сила, зеркальность). Оптимальным материалом для кератопластики является неконсервированная донорская роговица человека, однако не всегда профильное офтальмологическое учреждение может обеспечить хирургу своевременное получение из танатологического отделения качественного донорского материала. Отмена ургентной кератопластики вследствие отсутствия донорского материала в большинстве случаев невозможна.

Известен способ лечения разных заболеваний роговицы с помощью кросслингинга, при котором при ультрафиолетовом облучении (УФО) роговицы посредством рибофлавин-УФ-индуцируемых фотохимических реакций происходит увеличение меж- и интрафибриллярных ковалентных связей, а также связей между кератоцитами и белками межклеточной адгезии, что стабилизирует биомеханические свойства роговицы, усиливая ее прочность [Бикбов М.М., Халимов А.Р., Усубов Э.Л. Ультрафиолетовый кросслинкинг роговицы. Вестник РАМН. 2016;71(3):224-232. doi:10.15690/vramn562].

По данным литературы, при кросслинкинге в зоне активного воздействия рибофлавина и УФО отмечено увеличение диаметра коллагеновых волокон в большей степени в передней части стромы, по сравнению со средним и задним ее отделом. В работе S. Choi и его соавт., при проведении УФ-кросслинкинга на модели роговицы in vitro, было отмечено увеличение диаметра фибриллярного коллагена на 103% и его плотности на 112% [Wollensak G, Wilsch М, Spoerl Е, Seiler Т. Collagen fiber diam- eter in the rabbit cornea after collagen crosslinking by ribo- flavin/UVA. Cornea. 2004;23(5):503-507. doi: 10.1097/01. ico.0000105827.85025.7f. Choi S, Lee SC, Lee HJ, et al. Structural response of human corneal and scleral tissues to collagen cross-linking treatment with riboflavin and ultraviolet A light. Lasers Med Sci. 2013;28(5):1289-1296. doi: 10.1007/s10103-012-1237-6].

Кроме того, многие авторы отмечают выраженную связь между образованием коллагеновых фибрилл и содержанием основных протеогликанов (люмикан, кератокан, декорин), синтез которых после УФ-кросслинкинга соответствует норме. Так, после локального воздействия рибофлавином и УФО протеогликаны стромы становятся более устойчивыми к катаболизму, индуцируемому матриксными металлопротеиназами (ММП), а коллагены I и IV типа - к действию ММП-1, ММП-2, ММП-9 и ММП-13 [Zhang Y, Мао X, Schwend Т, et al. Resistance of corneal RFUVA- cross-linked collagens and small leucine-rich proteoglycans to degradation by matrix metalloproteinases. Invest Ophthalmol Vis Sci. 2013;54(2):1014-1025. doi: 10.1167/iovs. 12-11277].

Известен способ кератопластики с использованием кросслинкинг-модифицированного донорского материала у пациентов с язвами роговицы. Так, все донорские роговично-склеральные диски были деэпителизированы без дополнительной скарификации эпителия. Перед проведением эксперимента роговично-склеральные диски насыщали рибофлавином, после этого перекладывали в стерильную емкость эндотелием вниз, обрабатывали ультрафиолетом с длиной волны 370 нм мощностью 3 мВ/см² в течение времени, рекомендованного фирмой-производителем (30 минут). Для облучения использовали прибор UV-X s/n 1000-401-39 (производство Швейцария). В процессе обработки ультрафиолетом на донорскую роговицу каждые 5 минут капали по 1 капле препарата «Декстралинк». Интраоперационно проводили контроль пахиметрии. Кросслинкинг донорского материала проводили в операционной не позднее суток после консервации (RU 2381649, 20.02.2010).

К недостаткам данного способа относится проведение УФО роговицы по классическому типу (плотность мощности 3 мВ/см² в течение 30 минут с длиной волны 370 нм) только с эпителиальной стороны. При этом процесс сшивания коллагена рибофлавином происходит лишь в поверхностных слоях роговицы (на глубине около 300 мкм). С учетом того, что в случае отека роговицы толщина трансплантата может достигать 640 мкм и более, подобное воздействие не является эффективным для его более глубоких слоев. [Исхаков И.А., Дружинин И.Б., Щербакова Л.В Выбор параметров фемтотрепанации на основе интраоперационного контроля толщины донорской роговицы // Практическая медицина. - 2017. - №9(110). - С. 36-40]. Стоит также отметить, что в способах подготовки донорского материала, в которых УФО проводится только с эпителиальной стороны роговицы, при выборе трансплантата необходимо учитывать состояние эндотелиального слоя, что затруднительно при ургентной кератопластике. Авторы проводили кросслинкинг донорского материала в операционной в срок не позднее 24 часов после консервации. Однако даже небольшой срок консервации до проведения УФО также может привести к дополнительному отеку роговицы. Утолщение роговицы при консервации несомненно вызывает снижение эффективности кросслинкинга, из-за воздействия УФО только на поверхностные слои роговицы.

Известен способ комплексного воздействия на роговицу (донорскую и реципиента) во время кератопластики с целью усиления приживления донорского материала для лечения заболеваний роговицы. Для этого из консервированного донорского материала выкраивают роговичный трансплантат (сквозной или послойный). Подготовленный материал укладывают в ложе роговицы реципиента и фиксируют четырьмя провизорными узловыми швами 10/0. По мере наложения остальных узловых или одного непрерывного шва и фиксации материала производят насыщение трансплантата и собственной роговицы инсталляцией препарата «Декстралинк» в течение 15-20 минут.После фиксации трансплантата и насыщения роговицы рибофлавином (оценивают наличием желтого свечения стромы роговицы) выполняют УФО роговицы аппаратом «УФалинк» с плотностью мощности 18 мВт/см² длиной волны 370 нм и суммарной энергией 5,4 Дж/см² в течение 5 минут (RU 2676434,12.12.2017).

Основным недостатком этого способа является проведение кросслинкинга роговицы только с ее эпителиальной стороны. Поскольку хранение роговицы в консервационной среде в течение нескольких суток часто способствует увеличению ее толщины за счет отека эффективность УФО снижается и нарушается равномерное сшивание коллагена глубоких слоев роговицы.

Ближайшим аналогом предлагаемого способа является способ обработки донорской роговицы с проведением ультрафиолетового кросслиникинга с двух сторон. С этой целью донорскую роговицу помещают на 1 час в среду для консервации, после чего перемещают в стерильную емкость и выполняют УФО с одной стороны роговицы (длина волны 365 нм, мощность 3 мВ/см²). При этом каждые 5 минут производят инстилляцию на роговицу 1 капли 0,1% раствора рибофлавина. Затем по этому алгоритму выполняют УФО роговицы с противоположной стороны. Среда для консервации содержит рибофлавина мононуклеотид, декстран, глутатион, натрия хлорид и воду дистиллированную очищенную [RU 2613442, 16.03.2017].

К недостаткам данного способа относят добавление фотосенсибилизатора в консервационную среду, что приводит к снижению насыщения донорского материала рибофлавином, а значит, к уменьшению эффекта фотополимеризации и образования меж- и интрафибрилярных ковалентных связей под действием УФО. Кроме того, подготовка донорского материала по данному способу проводится в условиях операционной и непосредственно перед хирургическим вмешательством, что увеличивает время операции. Как и в предыдущих способах, УФО выполняли с низкой плотностью мощности.

Задачей изобретения является создание оптимального способа подготовки донорской роговицы с проведением УФ-кросслинкинга.

Техническим результатом предлагаемого способа является повышение жизнеспособности донорского трансплантата с длительным сохранением его прозрачности.

Технический результат достигается за счет улучшения биохимических, биомеханических, прочностных и ослабления антигенных свойств донорского трансплантата с помощью двустороннего кросслинкинга донорского лоскута в определенных режимах.

В результате экспериментальной части работы для достижения таких результатов как повышенная прозрачность пересаженного донорского материала, биосовместимость с тканями реципиента, сниженная антигенность, а также возможность в кратчайшие сроки подготовить трансплантат при неотложных состояниях, нами были разработаны оптимальные параметры для проведения ультрафиолетового облучения: увеличенная плотность мощности, усиленный режим капельного воздействия рибофлавином, а таже последовательность облучения. Увеличение мощности с сохранением времени экспозиции, применяемом при классическом крослинкинге, позволяет добиться более эффективного сшивания коллагена в передних и задних слоях донорской роговицы. Способ обеспечивает приживление донорского материала за счет быстрой резорбции отека вследствие применения в процессе кросслинкинга раствора фотосенсибилизатора с гиперосмотическими свойствами, который также обеспечивает фотохимический и фотопротективный эффект.В результате быстро формируется качественный послеоперационный рубец, что, в итоге ведет к сокращению срока реабилитации.

Благодаря разработанным параметрам проведения УФО (мощность 6 мВт/см², длина волны 370 нм, длительность воздействия - 30 минут, режим капельного воздействия рибофлавином) процесс сшивания коллагена, затрагивает наиболее глубокие слои роговицы (с эпителиальной стороны на глубине около 450 мкм, а с эндотелиальной - около 300 мкм). То есть УФО при этом способе кросслинкинга воздействует практически на всю толщу роговицы. Проведение процедуры кросслинкинга, в том числе с эндотелиальной стороны, приводит к снижению антигенных свойств трансплантата (индукция апоптоза кератоцитов, снижение количества водорастворимых активных белковых и полисахаридных компонентов, материала ядер и цитоплазмы клеток). Таким образом, резко снижается риск отторжения трансплантата. Кроме того, при подготовке донорского материала по предложенному нами способу, не имеет значения состояние эндотелиального слоя, поскольку при двустороннем кросслинкинге донорской роговицы увеличивается эффект фотополимеризации рибофлавином и образования меж- и интрафибрилярных ковалентных связей не только в передней, но и в задней части стромы, что приводит к более компактному расположению коллагеновых волокон в слоях стромы и к дифференцировке структуры десцеметовой мембраны, а также к равномерному поступлению жидкости в строму роговицы, обеспечивая ее прозрачность, даже в условиях отсутствия эндотелиальных клеток.

Следует отметить, что способ позволяет хранить трансплантат в среде Борзенка-Мороз для использования в течение ближайших нескольких дней или в среде Борзенка-Мороз в условиях глубокой заморозки (-70°С) для более длительного хранения. Это обеспечивает доступность донорского материала, особенно, при ургентной кератопластике.

Способ осуществляют следующим образом

Из донорского глаза выкраивают корнеосклеральный лоскут.Помещают его в искусственную переднюю камеру, удаляют эпителиальный слой роговицы. Капельно воздействуют 0.1% раствором рибофлавина каждые 2 минуты в течение 30 минут поочередно на эндотелиальную и эпителиальную поверхность роговицы. Затем проводят ультрафиолетовое облучение мощностью 6 мВт/см² с длиной волны 370 нм в течение 30 минут с каждой стороны, начиная с эпителиальной. При этом во время облучения капельно воздействуют раствором 0.1% рибофлавина каждые 5 минут. При необходимости консервации, лоскут, подвергнутый кросслинкингу, помещают в среду Борзенка-Мороз или подвергают глубокому замораживанию в той же среде.

Пример 1.

Пациентка Б. 1965 года рождения обратилась в ФГБНУ «НИИ ГБ им. М.М. Краснова» с жалобами на постепенное снижение зрения на левом глазу, сопровождающееся выраженным роговичным синдромом, а именно светобоязнь, слезотечение, блефароспазм, ощущение инородного тела, а также покраснение и болевые ощущения глаза. Из анамнеза выявлено, что впервые чувство инородного тела, постепенно усиливающееся и сопровождающееся снижением зрения на левом глазу, появилось 4 месяца назад. Также известно, что пациентка проходила курс консервативного лечения по месту жительства, однако добиться положительной динамики не удалось, вследствие чего была направлена в ФГБНУ «НИИ ГБ им. М.М. Краснова».

Данные при поступлении в стационар: острота зрения левого глаза -неправильная светопроекция, внутриглазное давление не удалось измерить с помощью пневмотонометра и других бесконтактных методов исследования вследствие выраженного блефароспазма, однако пальпаторно давление определялось в пределах нормы. При биомикроскопии левого глаза отмечалась смешанная инъекция, гнойное отделяемое, умеренный отек роговицы, в оптической зоне которой определялся полупрозрачный инфильтрат с глубокой язвой в центре диаметром 3-4 мм, передняя камера глубокая, влага передней камеры опалесцирует, зрачок округлой формы, реакция зрачка на свет слабая, хрусталик - начальные ядерно-кортикальные помутнения. Глазное дно детально не офтальмоскопируется.

Учитывая вышеизложенные данные, был выставлен диагноз левого глаза: ОС - глубокая язва роговицы с угрозой перфорации с помутнением, иридоциклит. Незрелая осложненная катаракта.

Рекомендовано выполнение на левом глазу лечебно-оптической сквозной кератопластики с использованием донорского материала, подготовленного по предложенному нами способу.

Пациентке была выполнена операция на левом глазу - лечебно-оптическая сквозная кератопластика в сочетании с кросслинкингом трансплантата.

Ход операции: акинезия, ретробульбарная анестезия была выполнена 2% раствором лидокаина 5,0, после чего верхняя и нижняя прямые мышцы взяты на уздечный шов.

Параллельно проводилась подготовка донорского материала, который ранее, за 4 недели до проводимой операции, был изготовлен по нами предложенному способу: из донорского глаза выкраили корнеосклеральный лоскут. Поместили его в искусственную переднюю камеру, удалили эпителиальный слой роговицы. Капельно воздействовали 0.1% раствором рибофлавина каждые 2 минуты в течение 30 минут поочередно на эндотелиальную и эпителиальную поверхность роговицы. Затем провели ультрафиолетовое облучение мощностью 6 мВт/см² с длиной волны 370 нм в течение 30 минут с каждой стороны, начиная с эпителиальной. При этом во время облучения капельно воздействовали раствором 0.1% рибофлавина каждые 5 минут.

Затем корнеосклеральный лоскут был помещен в консервационную среду Борзенка-Мороз и подвергнут глубокому замораживанию (-70°С) в морозильной камере. Перед сквозной кератопластикой донорский материал был доставлен в операционную. Через 20 минут размораживания при комнатной температуре корнеосклеральный лоскут, как это принято, размещен в ложе вакуумного высекателя пластического материала Barron эндотелиальной стороной кверху. Далее с помощью высекателя диаметром 9,0 мм из корнеосклерального лоскута был выкроен «роговичный диск» для трансплантации.

Трепанация роговицы реципиента выполнена при помощи вакуумного роговичного трепана Barron диаметром 8.75 мм. После введения в переднюю камеру когезивного вискоэластика разрез роговицы продолжили до полной трепанации при помощи микрохирургических ножниц. Подготовленный донорский материал перемещен в ложе роговицы реципиента эндотелиальной стороной книзу и фиксирован четырьмя предварительными узловыми швами (нейлон 10/0) и непрерывным швом (нейлон 10/0). Предварительные узловые швы удалены. Выполнена субъконюнктивальная инъекция 0,1 г Цефуроксима и промывание конъюнктивальной полости раствором антибиотика Моксифлоксацин. В послеоперационном периоде проведеа стандартная антибактериальная и противовоспалительная терапия.

При осмотре в 1-й день после операции отмечен незначительный отек трансплантата, непрерывный роговичный шов чистый, края раны адаптированы, передняя камера средней глубины, влага передней камеры прозрачная, начальные ядерно-кортикальные помутнения хрусталика. Полная резорбция отека была достигнута на 7-й день после операции, а полная эпителизация роговицы - на 5-7-й день. Кроме того, в отдаленном периоде (до 6 месяцев после операции) не отмечено признаков болезни трансплантата.

Пример 2.

Пациент К. 1974 года рождения обратился в ФГБНУ «НИИ ГБ им. М.М. Краснова» с жалобами на постепенное снижение зрения на правом глазу, сопровождающееся болевыми ощущениями глаза, блефароспазмом, светобоязнью, слезотечением, а также ощущением инородного тела и покраснением. Из анамнеза установлено, что месяц назад пациент впервые ощутил чувство инородного тела в глазу на фоне неправильного ношения мягких контактных линз. Пациент обращался в частную клинику к офтальмологу и проходил курс консервативного лечения, на фоне которого не была отмечена положительная динамика, в результате чего пациент самостоятельно обратился в ФГБНУ «НИИ ГБ им. М.М. Краснова».

Данные при поступлении в стационар: острота зрения правого глаза -неправильная светопроекция, внутриглазное давление не удалось измерить с помощью пневмотонометра и других бесконтактных методов исследования вследствие выраженного блефароспазма, однако пальпаторно давление определялась гипотония. При биомикроскопии правого глаза отмечалась смешанная инъекция, гнойное отделяемое, выраженный отек роговицы, в оптической зоне определялась зона перфорации диаметром 3-4 мм, где радужка спаяна с задней частью роговицы, передняя камера щелевидная, зрачок деформирован, реакция зрачка на свет отсутствует, хрусталик -факосклероз. Глазное дно детально не офтальмоскопируется.

Учитывая вышеизложенные данные, был выставлен диагноз правого глаза: ОД - глубокая язва роговицы с перфорацией, исход герпетического кератита. Факосклероз.

Рекомендовано выполнение на правом глазу сквозной кератопластики с использованием донорского материала, подготовленный по предложенной нами методике, с лечебной и оптической целью.

Пациентке была выполнена операция на правом глазу - сквозная кератопластика в сочетании с кросслинкингом трансплантата.

Ход операции: акинезия, ретробульбарная анестезия была выполнена 2% раствором лидокаина 5,0, после чего верхняя и нижняя прямые мышцы взяты на уздечный шов.

Параллельно проводилась подготовка донорского материала, который до операции за несколько часов, был изготовлен по нами предложенному способу: корнеосклеральный лоскут помещен в искусственную переднюю камеру эпителиальной стороной кверху, после чего с помощью скребца счищен эпителиальный слой роговицы и был закапан 0.1% рибофлавин каждые 2 минуты в течение 30 минут. Далее роговично-склеральный диск поворачивали эндотелиальной стороной кверху и также закапывали 0.1% рибофлавин каждые 2 минуты в течение 30 минут. Затем проводили ультрафиолетовое облучение (УФО) мощностью 6 мВт/см² с длиной волны 370 нм в течение 30 минут с каждой стороны, начиная с эпителиальной, при этом во время УФО закапывали 0.1% рибофлавином каждые 5 минут в течение 30 минут, после чего корнеосклеральный лоскут был помещен в консервационную среду Борзенка-Мороз. В день операции донорский материал заранее был доставлен в операционную, где корнеосклеральный лоскут укладывали в ложе вакуумного высекателя пластического материала Barron эндотелиальной стороной кверху. Далее с помощью высекателя диаметром 9,0 мм из корнеосклерального лоскута был выкроен «роговичный диск» для трансплантации.

Трепанация роговицы реципиента выполнена при помощи вакуумного роговичного трепана Barron диаметром 8.75 мм. После введения в переднюю камеру когезивного вискоэластика разрез роговицы продолжили до полной трепанации при помощи микрохирургических ножниц. Подготовленный донорский материал уложили в ложе роговицы реципиента эндотелиальной стороной книзу и зафиксировали четырьмя предварительными узловыми швами 10/0 и непрерывным швом. Затем предварительные узловые швы были сняты.

Операция завершалась субъконюнктивальной инъекцией 0,1 г Цефуроксима и промыванием конъюнктивальной полости раствором антибиотика Моксифлоксацин. В послеоперационном периоде назначалась стандартная противовоспалительная терапия.

При осмотре в 1-й день после операции наблюдался отек трансплантата, швы состоятельны, края раны адаптированы, передняя камера мельче средней глубины, влага передней камеры прозрачная, сохранялось частичное помутнение хрусталика. Полная резорбция отека была достигнута на 9-й день после операции, а полная эпителизация роговицы на 7-й день. Кроме того, в отдаленном периоде (до 6 месяцев после операции) не наблюдались признаки болезни трансплантата.

Таким образом, предложенный способ обеспечивает изготовление донорского материала для замещения роговицы, отличающийся прозрачностью, слабыми антигенными свойствами, обеспечивающими ее высокую биосовместимость и прозрачность. Кроме того, кератотрансплантат может быть подготовлен в кратчайшие сроки, что особенно важно при офтальмопатологии различной этиологии, требующей проведения неотложного хирургического вмешательства.

Изобретение относится к области медицины, а именно к офтальмологии, и предназначено для подготовки донорского материала для кератопластики. Проводят кросслинкинг роговичного коллагена с эндотелиальной и эпителиальной стороны трансплантата. Выкраивают корнеосклеральный лоскут, помещают в искусственную переднюю камеру, удаляют эпителиальный слой роговицы, капельно воздействуют 0.1% раствором рибофлавина каждые 2 минуты в течение 30 минут поочередно на эндотелиальную и эпителиальную поверхность роговицы. Затем проводят ультрафиолетовое облучение при плотности мощности 6 мВт/см² с длиной волны 370 нм в течение 30 минут с каждой стороны, начиная с эпителиальной, при этом во время облучения капельно воздействуют раствором 0.1% рибофлавина каждые 5 минут. Способ позволяет повысить жизнеспособность донорского трансплантата, увеличить длительность его прозрачности за счет улучшения биохимических, биомеханических, прочностных характеристик и ослабления антигенных свойств донорского трансплантата с помощью двустороннего кросслинкинга донорского лоскута в определенных режимах. 2 з.п. ф-лы, 2 пр.

1. Способ подготовки донорского трансплантата роговицы для кератопластики, включающий проведение кросслинкинга роговичного коллагена с эндотелиальной и эпителиальной стороны трансплантата, отличающийся тем, что выкраивают корнеосклеральный лоскут, помещают в искусственную переднюю камеру, удаляют эпителиальный слой роговицы, капельно воздействуют 0.1% раствором рибофлавина каждые 2 минуты в течение 30 минут поочередно на эндотелиальную и эпителиальную поверхность роговицы, затем проводят ультрафиолетовое облучение при плотности мощности 6 мВт/см² с длиной волны 370 нм в течение 30 минут с каждой стороны, начиная с эпителиальной, при этом во время облучения капельно воздействуют раствором 0.1% рибофлавина каждые 5 минут.

2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что лоскут, подвергнутый кросслинкингу, помещают в среду Борзенка - Мороз.

3. Способ по п. 1, отличающийся тем, что лоскут, подвергнутый кросслинкингу, помещают в среду Борзенка - Мороз и подвергают глубокому замораживанию.