Рекомбинантный штамм Mycobacterium bovis rBCG-1 на основе вакцинного штамма Mycobacterium bovis BCG strain Russia 368 Российский патент 2023 года по МПК C12N1/21 A61K39/04 C12N15/11 C12N15/31 

Изобретение относится к биотехнологии, генной инженерии и медицинской микробиологии и представляет штамм Mycobacterium bovis rBCG-1, содержащий искусственный оперон, кодирующий протективно значимые белки Mycobacterium tuberculosis ESAT-6, CFP-10, дрожжевой сигнал деградации Rpn4 и β-субъединицу холерного токсина (CtxB). Получен генно-инженерным методом из штамма Mycobacterium bovis BCG strain Russia 368 путем введения в геном генов протективных антигенов ESAT-6, CFP-10, гена дрожжевого сигнала деградации Rpn4 и гена CtxB. ESAT6 и CFP10 являются важными протективными антигенами Mycobacterium tuberculosis. Сигнал секреции Ag85a обеспечивает секрецию химерного белка Rpn4-CFP10-ESAT6- CtxB. Rpn4 является транскрипционным фактором, контролирующим синтез протеасом, первые 80 аминокислотных остатков которого обеспечивают связывание и протеосомную деградацию. Введение сигнала протеасомной деградации на N-конец химерного белка должно способствовать презентации антигенов в составе MHC-1-комплекса гистосовместимости после фагоцитирования клеток рекомбинантного штамма rBCG-1 макрофагами. Презентация в составе MHC-I является важной для формирования протективного иммунного ответа на внутриклеточные патогены.

Туберкулез остается одной самой частой причиной смерти от бактериальной инфекции. 9,0-11,1 миллионов человек ежегодно заболевают и около 1,5 миллиона в год умирают от этой инфекции. Ситуацию усугубляет распространение антибиотикоустойчивых штаммов, наибольшее количество которых обнаруживается в Индии, Китае и России. Очевидно, самым эффективным путем борьбы с туберкулезом является вакцинация. Единственная аттенуированная вакцина BCG хорошо защищает от туберкулеза детей, однако в отношении взрослых ее эффективность крайне низка. Общая эффективность вакцины BCG против туберкулеза, составляет около 50% с экстремальными колебаниями от 0% до 80% между различными полевыми испытаниями (Rocheetat, 1995).

Поэтому предпринимаются попытки создания новых вариантов вакцинных штаммов.

Повысить эффективность вакцины BCG поможет введение в геном вакцинного штамма генов, кодирующих протективно значимые антигены ESAT-6, CFP-10 Mycobacterium tuberculosis, отсутствующие у BCG, в виде химерных генов с дрожжевым сигналом деградации в протеасомах Rpn4 для улучшения презентации антигенов и β-субъединицей холерного токсина для усиления неспецифического иммунного ответа.

Рекомбинантные вакцинные штаммы для профилактики туберкулеза описаны в следующих патентах.

Патент (РФ) RU 2342400 C2

Леандер Гроде (DE), Стефан Г.Е. Кауфман (DE), Бэрбель Раупах (DE), Юрген Хесс (DE).

Описана дефицитная по уреазе клетка Mycobacterium, которая является продуцентом слитого полипептида - содержит рекомбинантную молекулу нуклеиновой кислоты, кодирующую слитый полипептид, включающий в себя как минимум один домен из полипептида, который способен вызывать иммунный ответ у млекопитающих, и домен выхода из фаголизосом.

Патент (РФ) RU 2186109 C2

Маргарет А. Лиу, Донна Монтгомери, Джеффри Улмер, Жан Контен, Крис Юижен.

В изобретении предлагается полипептид, кодирующийся в цистроне, связанном с промотором транскрипции CMV. Первый цистрон содержит промотор транскрипции CMV и представляет ген, кодирующий микобактериальный белок 85А или В, или С. Указанный ген связан контрольной последовательностью, причем последняя содержит терминатор и промотор транскрипции BGH или JRES. Контрольная последовательность может быть связана со вторым цистроном, представляющим ген, кодирующий GM-CSF, IL-12, интерферон или член семейства В7 Т-клеточных костно-стимулирующих белков.

Патент (РФ) RU 2337707 C2

Маркус А. Хорвиц (US), Гюнтер Харт (US), Майкл В. Туллиус (US).

Представлены иммуногенные композиции, включающие рекомбинантные аттенюированные внутриклеточные патогены, например бациллу Кальмета-Герена (BCG). Иммуногенная композиция включает, в частности, BCG, содержащую последовательность внехромосомной нуклеиновой кислоты, которая включает ген, кодирующий крупный внеклеточный белок микобактерий размером 23,5, 30 и/или 32 кДа, при этом крупный внеклеточный неслитый белок микобактерий сверхэкспрессируется и секретируется. Вариантом иммуногенной композиции является композиция, содержащая рекомбинантную BCG с регулируемым ростом.

Патент (CIIIA)US 6924118 В2

Marcus A. Horwitz, Gunter Harth, Michael V. Tullius.

Предложены иммуногенные композиции, содержащие рекомбинантные аттенуированные внутриклеточные патогены, которые были трансформированы для экспрессии рекомбинантных иммуногенных антигенов того же или других внутриклеточных патогенов. Типичные иммуногенные композиции включают, но не ограничиваются ими, аттенуированные рекомбинантные микобактерий, экспрессирующие основные внеклеточные негибридные белки микобактерий и/или других внутриклеточных патогенов. Предлагаются другие варианты реализации, в которых рекомбинантный аттенуированный внутриклеточный патоген является ауксотрофным.

Патент (США) US 8287886 B2

Carlos Martin, Montanes Brigitte, Gicquel Esther, Perez Herran, Jesus Gonzalo, Asensio Ainhoa, Arbues Arribas.

Изобретение относится к выделенному микроорганизму рода Mycobacterium, отличающемуся тем, что в нем инактивирован ген Rv0757, что дает фенотип PhoP-, и инактивирован второй ген, что предотвращает продукцию DIM (фенотип DIM-). Кроме того, настоящее изобретение относится к применению указанного микроорганизма для получения вакцины для иммунизации или профилактики туберкулеза.

Патент (ЕС) ЕР 0706571 В1

Ase Bengaard, Andersen Peter, Andersen Kare, Haslov Anne, Lund Sorensen

Изобретение относится к секретируемым антигенам микобактерий, способным вызывать ранние (в течение 4 дней) иммунологические ответы от клеток Т-хелперов в виде высвобождения гамма-интерферона у иммунных животных с памятью после заражения микобактериями туберкулезного комплекса.

Патент (США) US 5955077 A

Peter Andersen, Ase Bengaard, Andersen Kaare, Haslov Anne, Lund Sorensen.

Изобретение относится к новым секретируемым антигенам из микобактерий, способным вызывать ранние (в течение 4 дней) иммунологические ответы от клеток Т-хелперов в виде высвобождения гамма-интерферона у иммунных животных памяти после заражения микобактериями туберкулезного комплекса. Также раскрыты фрагменты нуклеиновой кислоты, кодирующие антигены, а также способы иммунизации животных / людей и способы диагностики туберкулеза.

Патент (Канада) СА 2301879 С

Stefan Н.Е. Kaufmann, Jurgen Hess.

Настоящее изобретение относится к новым рекомбинантным вакцинам, обеспечивающим защитный иммунитет против туберкулеза. Кроме того, настоящее изобретение относится к новым рекомбинантным молекулам нуклеиновой кислоты, векторам, содержащим указанные молекулы нуклеиновой кислоты, клеткам, трансформированным указанными молекулами нуклеиновой кислоты, и полипептидам, кодируемым указанными молекулами нуклеиновой кислоты.

Патент (Испания) ES 2447032 T3

Avigdor Shafferman, Anat Zvi, Naomi Ariel, John Fulkerson, Ronggai Sun, Rosemary Chang, Jerald C. Sadoff.

Рекомбинантная бактерия M. bovis Calmette-Guerin (BCG), в которой по меньшей мере один ген DosR-регулона. Указанная BCG содержит по меньшей мере две последовательности нуклеиновой кислоты, отличающиеся друг от друга, каждая из которых кодирует один или несколько генов, которые сверхэкспрессируются, включая указанные две последовательности нуклеиновых кислот: i) первая последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая по меньшей мере один антиген Mycobacterium tuberculosis (Mtb); и ii) вторую последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую по меньшей мере один антиген Mtb для реактивации или дереактивации Mtb, который не является антигеном DosR.

Патент (Япония) ЕР 1535627 В1

Mitsuo Honda, Kazuhiro Matsuo, Masaru Kanekiyo, Duanthanorm Promkhatkaew.

Рекомбинантная вакцина BCG, полученная путем трансформации экспрессирующим вектором, несущим полинуклеотид, кодирующий антигенный белок, причем эта рекомбинантная вакцина BCG состоит из полинуклеотида модифицированного типа, содержащего полинуклеотид, имеющий третье основание каждого из его кодонов, замещенного G или С, без изменения типа аминокислоты.

Созданный нами рекомбинантный штамм Mycobacterium bovis rBCG-1 отличается тем, что он создан на основе Mycobacterium bovis BCG strain Russia 368 и в его состав входит уникальная композиция Rpn4, ESAT-6, CFP-10, CtxB под сигналом секреции sigAg85a.

Назначение изобретения- вакцинный штамм. Техническим результатом при использовании штамма rBCG-1 для иммунизации является формирование иммунитета к протективным антигенам туберкулеза, отсутствующим в BCG.

Получение плазмиды pMV-ProChimer

Кодонный состав нуклеотидной последовательности sigAg85a-Rpn4-ESAT6-CFP10-CtxB полипептида был оптимизирован для экспрессии в BCG. Последовательность гена химерного белка sigAg85a-Rpn4-ESAT6-CFP10-CtxB синтезирована и клонирована в вектор pMV306hsp по сайтам рестрикции EcoRI и HindIII в результате чего была получена плазмида pMV-ProChimer.

Получение рекомбинантного штамма Mycobacterium bovis rBCG-1

Штамм получен путем введения в хромосому BCG плазмиды pMV-ProChimer, содержащей гены протективных антигенов ESAT-6, CFP-10 и гена β-субъединицы холерного токсина в виде моноцистрона в комбинации с фактором деградации в протеасомах Rpn4 на N-конце под сигналом секреции Ag85a. Плазмида pMV-ProChimer введена в штамм методом электропорации согласно протоколу Parish Т. Mycobacterial protocols, Third Edition.

Выросшие в присутствии гигромицина колонии содержали в хромосоме интегрированный вектор pMVProChimer.

Для оценки эффективности трансляции целевого белка был проведен иммуноблоттинг в формате Dot blot со специфическими антителами. Были взяты образцы биомассы исходного штамма BCG, клеток rBCG-1 и супернатанта rBCG-1. Из них получили грубые клеточные экстракты, которые затем нанесли на нитроцеллюлозную мембрану. В качестве первичных антител использовали моноклональные антитела anti-ESAT-6. Результаты иммуноблоттинга показали присутствие рекомбинантного химерного белка в белковом экстракте рекомбинантного штамма rBCG-1.

--->

<?xml version="1.0" encoding="UTF-8"?>

<!DOCTYPE ST26SequenceListing PUBLIC "-//WIPO//DTD Sequence Listing

1.3//EN" "ST26SequenceListing_V1_3.dtd">

<ST26SequenceListing nonEnglishFreeTextLanguageCode="ru"

dtdVersion="V1_3" fileName="rBCG-1-seqList.xml" softwareName="WIPO

Sequence" softwareVersion="2.2.0" productionDate="2023-02-20">

<ApplicationIdentification>

<IPOfficeCode>RU</IPOfficeCode>

<ApplicationNumberText>2022115096</ApplicationNumberText>

<FilingDate>2022-06-03</FilingDate>

</ApplicationIdentification>

<ApplicantFileReference>https://www.fips.ru/registers-doc-view/fips_s

ervlet?DB=RUPAT&amp;DocNumber=2022115096&amp;TypeFile=html</ApplicantF

ileReference>

<EarliestPriorityApplicationIdentification>

<IPOfficeCode>RU</IPOfficeCode>

<ApplicationNumberText>2022115096/10(0311679)</ApplicationNumberText

>

<FilingDate>2022-06-03</FilingDate>

</EarliestPriorityApplicationIdentification>

<ApplicantName languageCode="ru">Федеральное государственное

бюджетное учреждение «Центр стратегического планирования и управления

медико-биологическими рисками здоровью» Федерального

медико-биологического агентства</ApplicantName>

<ApplicantNameLatin>Federal State Budgetary Institution &quot;Centre

for Strategic Planning and Management of Biomedical Health

Risks&quot; of the Federal Medical Biological

Agency</ApplicantNameLatin>

<InventionTitle languageCode="ru">Рекомбинантный штамм Мycobacterium

bovis rBCG-1 на основе вакцинного штамма Мycobacterium bovis BCG

strain Russia 368</InventionTitle>

<SequenceTotalQuantity>1</SequenceTotalQuantity>

<SequenceData sequenceIDNumber="1">

<INSDSeq>

<INSDSeq_length>10535</INSDSeq_length>

<INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype>

<INSDSeq_division>PAT</INSDSeq_division>

<INSDSeq_feature-table>

<INSDFeature>

<INSDFeature_key>source</INSDFeature_key>

<INSDFeature_location>1..10535</INSDFeature_location>

<INSDFeature_quals>

<INSDQualifier>

<INSDQualifier_name>mol_type</INSDQualifier_name>

<INSDQualifier_value>other DNA</INSDQualifier_value>

</INSDQualifier>

<INSDQualifier id="q5">

<INSDQualifier_name>organism</INSDQualifier_name>

<INSDQualifier_value>synthetic construct</INSDQualifier_value>

</INSDQualifier>

</INSDFeature_quals>

</INSDFeature>

</INSDSeq_feature-table>

<INSDSeq_sequence>tagttattaatagtaatcaattacggggtcattagttcatagcccatat

atggagttccgagatctaaacagaactcagtctttaaaagaactagggctcaaaaccggatccgagcaca

aggagggtgattgaactgattaggctggatcattctcaaactccgggtaacgttgttattatgttaattt

attgtaaaacttagcatggagagcgtatttcatcgaacctttttgcataagagaagtgtaaaactttacg

atttgttgacgagatcaaacaagactctgaatctaatcagtggattacttaccttaagcggttcaatttt

gtcgatgctcgtgattgggaggatgcactcagtgagtgattccctcgtccttgggatcttgttccgggaa

acgggcaacaatctctttaagctcttcttgattctcacgcagggcattcacacaatgacgatctaacttg

ccatcgctgaccattttttccagttccaatagggcatgaggaatggattgcgcttgtttataagggcgat

gtgcggtcagggcatcaaagatgttcgcgaccgctataatgcgtgctgggataggaatttggtcactgac

tagaccaaatggatagccgctgccatccaaaaattcatggtgataagccatgatttctcgcaaaacggcc

aaacaaggatggtgaggtgtacctagctttgcaatcacttcattgagtaaatcaatgccgtattcaatat

ggttatgaacttgctctttttcatggttggccagtgaagcgcgtttttgcagaaggtcggctggcaaggc

caatttcccaagatcatggcaagtggcaaactggctgatgttttctatgagctcatcatcgagcgcatac

tgatctgcgacatcgagtgcgatgatccgcgcgtaacggctgatccgctctttatgttgcttgatgtgaa

gccagtgttcgggagattgagtttcaatttggtgcacatggtcaaccaactgatggatcaaggcgtattc

accacagatggattgttggatgagcgataaataggtttctagccgttcaacgactgacgcagaaaaataa

tggctcattgaagcgttaaaaaataggaaaccgacgaaggtgtgttgatcaaaaacgggtttcactaacg

aagagcaatattgctgttccagcaaccagcggttatgaggtgtatggcttttggcttgattcgcgagatc

gtgaataatgcgcagtgcaccggactctttgctctgttgtaaagagggtaagttcgcgagtggtaactca

taatgcacaaagtcatgactgaccggagagctgtcggcacaggttttaatcgagtctttcttctcatcgt

acagagcgaatgaaatcctttggacatcaggcagctctaccctaattttctcgagcatattggttaaata

ggtatttagcgaacccaccgatgggtaatagcgaaactgaccgactttgggttgcatctgcatatcaccg

cccttccttgctagctactcattaagtttagacaaggttttgtggattgccgcattagggcggtgctttt

ctatgtctgttttactactcgaggtctgttttactactcgatcacatcccgttgctttttagattaagcc

gctgagcacacccaataacaaggcgctccccaccatgccaattaaaggaagtcgcaagactttaaacaag

aagaagccgactaatagggctgcccaatcgagtggggcatgtactgtgctactccaaacgggttgatata

aggcggcgagcagtaaaccgaccacacaggcgtttactccttgcatggctcctgcaactttcgggcgctg

agccaatgccgaccaatttttgagtacgccgagtagcaataaaaaaccggggagaaacacggctaaggtt

gcgattaaagcgccaaccacgggcatctctggtgtcagcacatagccaaggtaagtggctaaggtaaaca

ttgggcccggcaccgcttgggctgccgcgtaacccgtcagaaattgatcggtcgataggctgtcacctaa

ggcattttgtagcaagggaagaaccacatgaccgccaccaaacactaagcttcctgcttggaagaaatgg

ccaaacaactcaaccagcggtgagcttgcagccaatagcggcagcccgagtaataaacttgcaaagagca

gcagtgaaagccaagaggggtgaaaaacctcgagcgcagaagacggtttcggcgctaagcgggcttggcc

gaccaatgcggcaagcagtaacaccgcaaattgggtgagtaaactgggtgccagcgtaatcgcaaccgca

gtaagaacacataaccctgcagtaaggcgttgctgacaaaaattgcgatacatggttaaacaagcatcgg

ccaccactatgatcgcgagtagcttcaagccatgaatcacttgttcaaacagtggggtatcaaggagatg

actactcagccccgcaagcagcagcatgatgagcacggagggaagggtaaaaccgagaaacgctgcccaa

gcgccagccagaccaccacgatgataaccaatcgcaaaaccaacttggctagaaccggggccaggaagga

actggctcagtgccacaaattgtgcatattcttgctcgctaacccagcgtaatttctcaacaaaggtgtg

gcgaaagtaacctatatgtgcggctggcccaccaaaactcacccatccgagagcaaaaaaagttctaaaa

atcgttagcataatgatctgaagtcatccgtaatcaatggaaggtcaacatccgtaggagcataggttat

ggagagtcaaagcgcagaacaactccgaatgtgtaaaaaattacaccattatgatggcaatcgtatgaat

tgattcagaaatagaaaaattgggtcaatatcgacctctatttaaattgtggaaacgtttacacaattgg

tgagtggttcacagaatcggtgtttgaaagtttgttagacttttttgcatctgcagcatgtcatcattcc

tattcaaagctgcgaatcttattgaatgacttctttactcctcggcttgagggtagtaattaaagaggag

aaatactagatgagtattcaacatttccgtgtcgcccttattcccttttttgcggcattttgccttcctg

tttttgctcacccagaaacgctggtgaaagtaaaagatgctgaagatcagttgggtgcacgagtgggtta

catcgaactggatctcaacagcggtaagatccttgagagttttcgccccgaagaacgttttccaatgatg

agcacttttaaagttctgctatgtggcgcggtattatcccgtgttgacgccgggcaagagcaactcggtc

gccgcatacactattctcagaatgacttggttgagtactcaccagtcacagaaaagcatcttacggatgg

catgacagtaagagaattatgcagtgctgccataaccatgagtgataacactgcggccaacttacttctg

acaacgatcggaggaccgaaggagctaaccgcttttttgcacaacatgggggatcatgtaactcgccttg

atcgttgggaaccggagctgaatgaagccataccaaacgacgagcgtgacaccacgatgcctgcagcaat

ggcaacaacgttgcgcaaactattaactggcgaactacttactctagcttcccggcaacaattaatagac

tggatggaggcggataaagttgcaggaccacttctgcgctcggcccttccggctggctggtttattgctg

ataaatctggagccggtgagcgtgggtctcgcggtatcattgcagcactggggccagatggtaagccctc

ccgtatcgtagttatctacacgacggggagtcaggcaactatggatgaacgaaatagacagatcgctgag

ataggtgcctcactgattaagcattggtaacgtctaggagtaagtagcggccgcgggagattagaagaat

gagtgtgatcgctaaacaaatgacctacaaggtttatatgtcaggcacggtcaatggacactactttgag

gtcgaaggcgatggaaaaggtaagccctacgagggggagcagacggtaaagctcactgtcaccaagggcg

gacctctgccatttgcttgggatattttatcaccacagtgtcagtacggaagcataccattcaccaagta

ccctgaagacatccctgactatgtaaagcagtcattcccggagggctatacatgggagaggatcatgaac

tttgaagatggtgcagtgtgtactgtcagcaatgattccagcatccaaggcaactgtttcatctaccatg

tcaagttctctggtttgaactttcctcccaatggacctgtcatgcagaagaagacacagggctgggaacc

caacactgagcgtctctttgcacgagatggaatgctgctaggaaacaactttatggctctgaagttagaa

ggaggcggtcactatttgtgtgaatttaaaactacttacaaggcaaagaagcctgtgaagatgccagggt

atcactatgttgaccgcaaactggatgtaaccaatcacaacaaggattacacttcggttgagcagtgtga

aatttccattgcacgcaaacctgtggtcgcctaacaggagtagttgaaaaatgtacgccgtagagcaaag

gcgttattggcttgttgcttcgcgtattcaagaggatcttatgcgcaacttctccgatattcttcttagc

caagattggcaaaacccgcacatcgttaaatggcactgccgtacaccccatgttcctttgcacagttatc

gcactgagcaggaggctcgtttggatgttggggggaatcgccaatctctaaatggtcagtggcggtttgc

tctgtttgagaagccagaagcggttgagcctgcggtgatagacccggatttcgatgatagcgcttgggcg

cacattcctgtaccgagtaactggcagatgcaaggctttgataagccgatttacaccaatatccaatatc

catttgcggatcggccgccttacgtgccgcaagataatccaaccggctgttatcgccaccgttttacact

ggaaaaacaagcgctaaccgagtccattcgcattgtatttgatggggtcaattcggcatttcatctgtgg

tgcaatggtcattgggtcggttattcgcaagatagccgcttgcctgccgagtttgagttaaccccttatc

tacaagagggtgaaaacctgttggtggccatggtgctgcgctggtctgatggctcttatttggaagacca

agatatgtggtggctgagtggcatctttcgcgatgtgtatctctaccgcaagccgatactcgcgattgaa

gatttttttatccgcactgaattagatgcgctttatcaacacgctgaattgcgagtagaaacacgcttaa

gccaagtgactcgccatcatcaagtgcaagtggctttattcgatgcacaaggtgaatgcgtggcgcgttc

acaagccttacatacaggccagcgtgtagtggatgaaaaaggagcatggcacgataaaaccgaacacagt

ttagcgatttgctctccgacactgtggagtgatgaagcgccttatctttaccgctgcgtgatctgtttgc

ttgatgaagatggcgcgccgattgagtttgaaagtgcagcagtgggttttcgcaaagtagaaatcactca

gggactactgaagctcaatggtcagcccttgttgatccgcggggtgaaccgtcatgaacatcatcccgaa

ttggggcatgtgatggatgaagcaagcatgcgccgcgatattgaattgatgaaacagcataatttcaatg

cggtgcgtaccgcccattaccccaatcatccgcgttggtacgaactgtgtgatgagtacggtttgtatgt

ggtggatgaggccaatctcgaaacccacggccaatttccgatgagccgactttccaatgatccacaatgg

gtgaatgcctatttgcagcgcatgattggcatggtggagcgcgataaaaaccacccttgtgtgatcattt

ggtcgctcggcaatgaatcggggattggtaccaatcatcacgccatgtatcagtggacgaaacagcgcga

cccatcgcgtcctgtgcaatacgaagggggcggcgctaatacggcggcgaccgatattgtttgcccgatg

tatgcgcgggtcgatcagcatcagccacatcctgcggttccaaaatatgcgctgaaaaattggatcagtt

tgccgcaggaaaaccgccccctcatcttgtgtgaatatgctcatgcgatgggcaacagcttgggcgcgtt

ttataaatactggcaggcgtttcgtgagtttcctcgtctgcaaggtggctttatttgggattgggtcgat

cagggcatttccaaatgggatagcgaggggcgccactattggggctatggcggtgattttggcgatacga

ttaacgatcgccaattctgcataaacggtttgctgttcccagatcgcacgccgcatccggcattacatga

agtcaaaaaagtccagcagccgtaccagttttcgttgagctatcccaagctcaccattcacaatgagcgc

ttgtttgcagcgctgccgctggagctggtagttagtgtgctatgcgatgggcaagagattaagcaagaac

gtctgccgcttgatattgcgccgcgcggcacaatcacgctggatttagcgtcgctgccaatgttgccaga

gcatgaataccacctcaatgcagtcttattgtgtcgtgaggatcagccatggtctaacgcggggcactgc

atcgctagtgagcagtggtgtttgcagccacgaagaagcatgttacctaaaatcacacacgctccgctgc

ctcaatggcagcaagatggagataaggtgcgcatcgaggcggccaatcagcaatggcagtttaaccgcca

aactgggctattggagcagtggtggcaaaatggtcagcccgtattgagtgaaccgctgcgcgataacttt

taccgcgcggtgctggataacgatattggtactagcgaagcgcagcatcttgacccgaacagctggatcg

cacgttggcatgcggcgggcttagataagctgcgtgtggaatgtgacgatcttcgcgtcaccaccttgaa

cgagagtgtcgaagtggtgatcgatgtcgcccattaccatcagcaagcgttagcgcttcgtacccgttgg

cgttaccaaatcttcggtgatgcgcgggtagaactgaatgttgaggtgatgctgtgttctgatttaccgc

cgctgccaagagtggggttaacgctcgcattaccagtggcagaaaacccagtgtcttggtttggtcgcgg

gccgcatgagaattatccggatcgtttgcaatcggcgcatgtggggcgatacaccgccacggtggatgag

ctgcatacaccgtacattttcccgagcgaaaatggtttgcgttgtgatactcgccagctacaagtgggcg

ctttggtggtggaagggcattttcacttctcgctcagtcgctactcacaaacgatgttggataaagccaa

acacagcaacgagttggtggcgggcgataagtggtatctcaatctggatgcgcagcatatgggcgtgggc

ggcgatgattcgtggagccaaagtgtgcaccctgaatttttgctcactcagccgcactatcagtatcagc

tcaccttacgtgtgaaagcgtcatccccacaataagtcgaccgatgcccttgagagccttcaacccagtc

agctccttccgagatctcaggtggcacttttcggggaaatgtgcgcggaacccctatttgtttatttttc

taaatacattcaaatatgtatccgctcatgagacaataaccctgataaatgcttcaataatattgaaaaa

ggaagagtcctgaggcggaaagaaccagctgtggaatgtgtgtcagttagggtgtggaaagtccccaggc

tccccagcaggcagaagtatgcaaagcatgcatctcaattagtcagcaaccaggtgtggaaagtccccag

gctccccagcaggcagaagtatgcaaagcatgcatctcaattagtcagcaaccatagtcccgcccctaac

tccgcccatcccgcccctaactccgcccagttccgcccattctccgccccatggctgactaatttttttt

atttatgcagaggccgaggccgcctcggcctctgagctattccagaagtagtgaggaggcttttttggag

gcctaggcttttgcaaagatcgatcaagagacaggatgaggatcgtttcgcatgattgaacaagatggat

tgcacgcaggttctccggccgcttgggtggagaggctattcggctatgactgggcacaacagacaatcgg

ctgctctgatgccgccgtgttccggctgtcagcgcaggggcgcccggttctttttgtcaagaccgacctg

tccggtgccctgaatgaactgcaagacgaggcagcgcggctatcgtggctggccacgacgggcgttcctt

gcgcagctgtgctcgacgttgtcactgaagcgggaagggactggctgctattgggcgaagtgccggggca

ggatctcctgtcatctcaccttgctcctgccgagaaagtatccatcatggctgatgcaatgcggcggctg

catacgcttgatccggctacctgcccattcgaccaccaagcgaaacatcgcatcgagcgagcacgtactc

ggatggaagccggtcttgtcgatcaggatgatctggacgaagagcatcaggggctcgcgccagccgaact

gttcgccaggctcaaggcgagcatgcccgacggcgaggatctcgtcgtgacccatggcgatgcctgcttg

ccgaatatcatggtggaaaatggccgcttttctggattcatcgactgtggccggctgggtgtggcggacc

gctatcaggacatagcgttggctacccgtgatattgctgaagagcttggcggcgaatgggctgaccgctt

cctcgtgctttacggtatcgccgctcccgattcgcagcgcatcgccttctatcgccttcttgacgagttc

ttctgagcgggactctggggttcgaaatgaccgaccaagcgacgcccaacctgccatcacgagatttcga

ttccaccgccgccttctatgaaaggttgggcttcggaatcgttttccgggacgccggctggatgatcctc

cagcgcggggatctcatgctggagttcttcgcccaccctagggggaggctaactgaaacacggaaggaga

caataccggaaggaacccgcgctatgacggcaataaaaagacagaataaaacgcacggtgttgggtcgtt

tgttcataaacgcggggttcggtcccagggctggcactctgtcgataccccaccgagaccccattggggc

caatacgcccgcgtttcttccttttccccaccccaccccccaagttcgggtgaaggcccagggctcgcag

ccaacgtcggggcggcaggccctgccatagcctcaggttactcatatatactttagattgatttaaaact

tcatttttaatttaaaaggatctaggtgaagatcctttttgataatctcatgaccaaaatcccttaacgt

gagttttcgttccactgagcgtcagaccccgtagaaaagatcaaaggatcttcttgagatcctttttttc

tgcgcgtaatctgctgcttgcaaacaaaaaaaccaccgctaccagcggtggtttgtttgccggatcaaga

gctaccaactctttttccgaaggtaactggcttcagcagagcgcagataccaaatactgtccttctagtg

tagccgtagttaggccaccacttcaagaactctgtagcaccgcctacatacctcgctctgctaatcctgt

taccagtggctgctgccagtggcgataagtcgtgtcttaccgggttggactcaagacgatagttaccgga

taaggcgcagcggtcgggctgaacggggggttcgtgcacacagcccagcttggagcgaacgacctacacc

gaactgagatacctacagcgtgagctatgagaaagcgccacgcttcccgaagggagaaaggcggacaggt

atccggtaagcggcagggtcggaacaggagagcgcacgagggagcttccagggggaaacgcctggtatct

ttatagtcctgtcgggtttcgccacctctgacttgagcgtcgatttttgtgatgctcgtcaggggggcgg

agcctatggaaaaacgccagcaacgcggcctttttacggttcctggccttttgctggccttttgctcaca

tgttctttcctgcgttatcccctgattctgtggataaccgtattaccgccatgcat</INSDSeq_sequ

ence>

</INSDSeq>

</SequenceData>

</ST26SequenceListing>

<---

Изобретение относится к биотехнологии. Предложен вакцинный штамм Mycobacterium bovis rBCG-1, содержащий искусственный оперон, кодирующий протективно значимые белки Mycobacterium tuberculosis ESAT-6, CFP-10, дрожжевой сигнал деградации Rpn4 под сигналом секреции Ag85a и β-субъединицу холерного токсина CtxB. Изобретение обеспечивает формирование иммунитета к протективным антигенам туберкулеза, отсутствующим в BCG.

Вакцинный штамм Mycobacterium bovis rBCG-1, содержащий искусственный оперон, кодирующий протективно значимые белки Mycobacterium tuberculosis ESAT-6, CFP-10, дрожжевой сигнал деградации Rpn4 под сигналом секреции Ag85a и β-субъединицу холерного токсина CtxB.