В данном документе предусмотрены сульфонамиды общей формулы (A); конъюгат, содержащий сульфонамид формулы (I) и активный фармацевтический ингредиент или диагностическое соединение; способ получения конъюгата, содержащего сульфонамид формулы (I) и активный фармацевтический ингредиент; фармацевтическая композиция, содержащая конъюгат, содержащий сульфонамид формулы (I) и активный фармацевтический ингредиент или диагностическое соединение; а также применение конъюгата в качестве лекарственного препарата.

Высвобождение инсулина поджелудочной железой тесно связано с концентрацией глюкозы в крови. Повышенные уровни глюкозы в крови, как, например, появляющиеся после приема пищи, быстро компенсируются соответствующим увеличением секреции инсулина (гормона, снижающего уровень глюкозы в крови). В состоянии натощак уровень инсулина в плазме крови падает до базального значения, которое является достаточным для обеспечения непрерывного поступления глюкозы к чувствительным к инсулину органам и тканям и для поддержания продуцирования глюкозы в печени на низком уровне ночью. Сахарный диабет представляет собой нарушение метаболизма, при котором нарушается эта плотная регуляция уровня глюкозы в крови.

Сахарный диабет характеризуется сниженной/отсутствующей выработкой инсулина поджелудочной железой и/или неспособностью использовать инсулин. Вследствие этого уровни глюкозы в крови не контролируются надлежащим образом и, следовательно, являются повышенными. Уровни глюкозы в крови, увеличенные в течение нескольких лет без первых симптомов, представляют значительный риск для здоровья. Крупномасштабное исследование DCCT в США (The Diabetes Control and Complications Trial Research Group (1993) N. Engl. J. Med. 329, 977-986) четко продемонстрировало, что хронически повышенные уровни глюкозы в крови по сути отвечают за развитие поздних осложнений сахарного диабета, таких как микрососудистые и макрососудистые повреждения, которые проявляются в определенных обстоятельствах в виде ретинопатии, нефропатии или нейропатии и приводят к потере зрения, почечной недостаточности и потере конечностей. Кроме того, сахарный диабет сопровождается повышенным риском сердечно-сосудистых заболеваний.

В 2016 г. примерно 422 миллиона человек по всему миру страдали сахарным диабетом 1 типа и 2 типа. Сахарный диабет классифицируется как сахарный диабет 1 типа и 2 типа. У пациентов с сахарным диабетом 1 типа отсутствует доступный инсулин, вырабатываемый в самом организме. Таким образом, поскольку полное излечение является недоступным, для пациентов с сахарным диабетом 1 типа замещение отсутствующей эндокринной секреции инсулина является в настоящее время единственным возможным методом терапии. Пораженные лица в течение всей своей жизни зависят от инъекций инсулина, как правило, по несколько раз в день. В отличие от сахарного диабета 1 типа, при сахарном диабете 2 типа по сути нет дефицита инсулина, но в целом ряде случаев, особенно на поздних стадиях, лечение инсулином, необязательно в сочетании с пероральным противодиабетическим средством, рассматривается как наиболее благоприятная форма терапии.

Целью существующей терапии сахарного диабета в первую очередь является как можно более точное поддержание уровня глюкозы в крови в физиологическом диапазоне. Существующие терапевтические рекомендации включают лечение с помощью пероральных противодиабетических лекарственных средств, агонистов рецепторов GLP-1 и, наконец, лечение инсулином.

Человеческий инсулин представляет собой полипептид из 51 аминокислоты, который состоит из 2 аминокислотных цепей: А-цепи, имеющей 21 аминокислоту, и B-цепи, имеющей 30 аминокислот. Цепи соединены друг с другом с помощью 2 дисульфидных мостиков (межцепочечные дисульфидные мостики расположены между Cys(A7) и Cys(B7) и между Cys(A20) и Cys(B19)). Кроме того, между Cys(A6) и Cys(A11) присутствует внутрицепочечный дисульфидный мостик. Препараты инсулина использовались для терапии сахарного диабета в течение многих лет. При этом применяются не только виды человеческого инсулина, но, в последнее время, также производные и аналоги инсулина.

С учетом проблем и неудобств, связанных с ежедневными или повторными ежедневными инъекциями, предпринимаются постоянные попытки нахождения препаратов инсулина с пролонгированным профилем действия, целью которых является достижение режима введения доз один раз в неделю.

В данном документе предусмотрены сульфонамиды формулы (A):

. Используемые в данном документе термины "аналог инсулина" и "инсулиновый аналог" относятся к полипептиду, имеющему молекулярную структуру, которая формально может быть получена из структуры встречающегося в природе инсулина, например, человеческого инсулина, путем делеции и/или замены по меньшей мере одного аминокислотного остатка, содержащегося во встречающемся в природе инсулине, и/или путем добавления по меньшей мере одного аминокислотного остатка. Добавляемые и/или заменяющие аминокислотные остатки могут представлять собой кодируемые аминокислотные остатки либо другие встречающиеся в природе остатки или аминокислотные остатки, полученные исключительно синтетическим путем. Примеры аналогов инсулина включают без ограничения следующие.

(i) "Инсулин аспарт" представляет собой человеческий инсулин, в котором аминокислота B28 (т. е. аминокислота под номером 28 в B-цепи человеческого инсулина), которая представляет собой пролин, замещена аспарагиновой кислотой. Инсулин аспарт представляет собой инсулин короткого действия.

(ii) "Инсулин лизпро" представляет собой человеческий инсулин, в котором предпоследние остатки лизина и пролина в C-концевой области B-цепи поменяны местами (человеческий инсулин: ProB28LysB29; инсулин лизпро: LysB28ProB29). Инсулин лизпро представляет собой инсулин короткого действия.

(iii) "Инсулин глулизин" отличается от человеческого инсулина тем, что аминокислота аспарагин в положении B3 замещена лизином, а лизин в положении B29 замещен глутаминовой кислотой. Инсулин глулизин представляет собой инсулин короткого действия.

(iv) "Инсулин гларгин" отличается от человеческого инсулина тем, что аспарагин в положении A21 замещен глицином, а B-цепь удлинена на карбокси-конце на два аргинина. Инсулин гларгин представляет собой инсулин длительного действия.

Используемый в данном документе термин "конъюгат инсулина" является синонимом "производного инсулина" и "инсулинового производного", и данный термин относится к полипептиду, имеющему молекулярную структуру, которая формально может быть получена из структуры встречающегося в природе инсулина, например, человеческого инсулина, в котором один или несколько органических заместителей (например, жирная кислота) связаны с одной или несколькими аминокислотами. Один или несколько органических заместителей предназначены для взаимодействия с белками сыворотки крови, такими как альбумин, и называются в данном документе "связывающим(связывающими) веществом(веществами)" или "молекулой(молекулами) связывающего(связывающих) вещества(веществ)". Одна или несколько аминокислот, которые присутствуют во встречающемся в природе инсулине, необязательно могут быть удалены и/или замещены другими аминокислотами, в том числе некодируемыми аминокислотами, или аминокислоты, в том числе некодируемые, могут быть добавлены к встречающемуся в природе инсулину. Примеры конъюгатов инсулина включают без ограничения следующие.

(i) "Инсулин детемир", который отличается от человеческого инсулина тем, что аминокислота треонин в положении B30 удалена, а остаток жирной кислоты (миристиновой кислоты) присоединен к функциональной эпсилон-аминогруппе лизина в положении B29. Инсулин детемир представляет собой инсулин длительного действия.

(ii) "Инсулин деглудек", который отличается от человеческого инсулина тем, что аминокислота треонин в положении B30 удалена, и что гексадекандиовая кислота конъюгирована с аминокислотой лизином B29 посредством гамма-L-глутамилового линкера. Инсулин деглудек представляет собой инсулин длительного действия.

Используемый в данном документе термин "инсулин быстрого действия" относится к аналогам инсулина и/или производным инсулина, где эффект, опосредованный инсулином, начинает проявляться через 5-15 минут и продолжает действовать в течение 3-4 часов. Примеры видов инсулина быстрого действия включают без ограничения следующие: (i) инсулин аспарт; (ii) инсулин лизпро и (iii) инсулин глулизин.

Используемый в данном документе термин "инсулин длительного действия" относится к аналогам инсулина и/или производным инсулина, где эффект, опосредованный инсулином, начинает проявляться через 0,5-2 часа и продолжает действовать в течение приблизительно 24 часов или больше. Примеры видов инсулина быстрого действия включают без ограничения следующее: (i) инсулин гларгин; (ii) инсулин детемир и (iii) инсулин деглудек.

В данном документе предусмотрены фрагменты, связывающие сывороточный альбумин, которые при связывании с пептидом приводят к улучшению фармакодинамических и/или фармакокинетических свойств пептида, например, к удлиненному фармакокинетическому периоду полужизни в крови и/или плазме крови и/или пролонгированному профилю действия, т. е. пролонгированному снижению уровня глюкозы в крови.

Неожиданно было обнаружено, что такие конъюгаты пептидов могут быть получены с применением специфических сульфонамидов, которые могут применяться для получения конъюгатов пептидов. Полученные конъюгаты пептидов демонстрируют благоприятный период полужизни в крови и/или плазме крови и пролонгированный профиль действия. Можно показать, что полученные конъюгаты пептидов характеризуются увеличенным фармакокинетическим периодом полужизни (t_1/2) и также увеличенным средним временем удержания (MRT) по сравнению с неконъюгированными пептидами. Более того, конъюгаты пептидов характеризуются значительно пролонгированной продолжительностью действия in vivo по сравнению с неконъюгированными пептидами.

Таким образом, в данном документе предусмотрены сульфонамиды формулы (A):

, где:

A выбран из группы, состоящей из атома кислорода, группы -CH₂CH₂-, группы -OCH₂- и группы -CH₂O-;

E представляет собой группу -C₆H₃R-, при этом R представляет собой атом водорода или атом галогена, где атом галогена выбран из группы, состоящей из атомов фтора, хлора, брома и йода;

X представляет собой атом азота или группу -CH-;

m представляет собой целое число в диапазоне от 5 до 17;

n равняется нулю или представляет собой целое число в диапазоне от 1 до 3;

p равняется нулю или 1;

q равняется нулю или 1;

r представляет собой целое число в диапазоне от 1 до 6;

s равняется нулю или 1;

t равняется нулю или 1;

R¹ представляет собой по меньшей мере один остаток, выбранный из группы, состоящей из атома водорода, атома галогена, C1-C3-алкильной группы и галогенированной C1-C3-алкильной группы;

R² представляет собой по меньшей мере один остаток, выбранный из группы, состоящей из атома водорода, атома галогена, C1-C3-алкильной группы и галогенированной C1-C3-алкильной группы;

R^x представляет собой атом водорода или активирующую группу, необязательно активирующую группу, выбранную из группы, состоящей из 7-азабензотриазольной (необязательно полученной из HATU [гексафторфосфата 1-[бис(диметиламино)метилен]-1H-1,2,3-триазоло[4,5-b]пиридиний-3-оксида] или HBTU [гексафторфосфата 3-[бис(диметиламино)метилиил]-3H-бензотриазол-1-оксида]), 4-нитробензольной и N-сукцинимидильной группы, где Rx необязательно представляет собой N-сукцинимидильную группу.

В некоторых вариантах осуществления комбинация s, равняющегося 1, p, равняющегося нулю, n, равняющегося нулю, A, представляющего собой атом кислорода, и t, равняющегося 1, исключается. В некоторых вариантах осуществления s равняется нулю, при этом остальные остатки и индексы имеют значения, указанные выше для формулы (A).

Например, галогенированная C1-C3-алкильная группа R¹ и/или галогенированная C1-C3-алкильная группа R²являются частично галогенированными или пергалогенированными. В некоторых вариантах осуществления галогенированная C1-C3-алкильная группа R¹ и/или галогенированная C1-C3-алкильная группа R²являются пергалогенированными.

Используемый в данном документе термин "сульфонамиды формулы (A)" включает сульфонамиды формулы (A), их фармацевтически приемлемые соли и все фармацевтически приемлемые изотопно меченные сульфонамиды формулы (A), где один или несколько атомов замещены атомами, которые имеют то же атомное число, но атомная масса или массовое число которых отличаются от атомной массы или массового числа, которые преобладают в природе. То же самое относится ко всем подтипам сульфонамидов формулы (A), т. е. к сульфонамидам формул (A-1)-(A-5), подробно описанным ниже, и также соответственно к их подструктурам, например, сульфонамидам формулы (А-1-1). Иными словами, термин "сульфонамиды формулы (A-…)", где (A-…) представляет количество сульфонамидов формулы (A-1)-(A-5), подробно описанных ниже, и также их подструктуры, включает сами соединения, их фармацевтически приемлемые соли и все фармацевтически приемлемые изотопно меченные соединения.

Фармацевтически приемлемые соли сульфонамидов формулы (A) представляют собой основные соли. Подходящие основные соли образуются из оснований, которые образуют нетоксичные соли. Примеры включают соли алюминия, аргинина, бензатина, кальция, холина, диэтиламина, бис(2-гидроксиэтил)амина (диоламина), глицина, лизина, магния, меглумина, 2-аминоэтанола (оламина), калия, натрия, 2-амино-2-(гидроксиметил)пропан-1,3-диола (трис или трометамина) и цинка. Обзор подходящих солей см. в Handbook of Pharmaceutical Salts: Properties, Selection, and Use, Stahl and Wermuth (Wiley-VCH, 2002).

Сульфонамиды формулы (A) и их фармацевтически приемлемые соли могут существовать в несольватированной и сольватированной формах. Термин "сольват" используется в данном документе для описания молекулярного комплекса, содержащего сульфонамиды формулы (A) или их фармацевтически приемлемую соль и одну или несколько молекул фармацевтически приемлемого растворителя, например этанола. Термин "гидрат" используется в случае, когда указанный растворитель представляет собой воду.

Примеры изотопов, подходящих для включения в сульфонамиды формулы (A), включают изотопы водорода, такие как ²H и ³H, углерода, такие как ¹¹C, ¹³C и ¹⁴C, хлора, такие как ³⁶Cl, фтора, такие как ¹⁸F, йода, такие как ¹²³I и ¹²⁵I, азота, такие как ¹³N и ¹⁵N, кислорода, такие как ¹⁵O, ¹⁷O и ¹⁸O, и серы, такие как ³⁵S. Определенные изотопно меченные сульфонамиды формулы (A), например те, которые содержат в своем составе радиоактивный изотоп, являются применимыми в исследованиях распределения лекарственного средства и/или субстрата в тканях. Радиоактивные изотопы тритий, т. е. ³H, и углерод-14, т. е. ¹⁴C, особенно применимы для этой цели ввиду простоты их включения в состав и доступности способов выявления.

Замещение более тяжелыми изотопами, такими как дейтерий, т. е. ²H, может обеспечивать определенные терапевтические преимущества, обусловленные большей метаболической стабильностью, например, увеличение периода полужизни in vivo или снижение требуемой дозировки. Замещение изотопами, излучающими позитроны, такими как ¹¹C, ¹⁸F, ¹⁵O и ¹³N, может быть применимым в исследованиях методом позитронно-эмиссионной томографии (PET) для изучения занятости рецепторов субстратом. Изотопно меченные сульфонамиды формулы (A) обычно могут быть получены с помощью традиционных методик, известных специалистам в данной области. Фармацевтически приемлемые сольваты в соответствии с настоящим изобретением включают те, где растворитель для кристаллизации может быть изотопно замещенным, например, представляет собой D₂O, d₆-ацетон, d₆-DMSO.

Чтобы идентифицировать подходящие молекулы связывающих веществ, которые при связывании с пептидом, таким как инсулин, способны улучшать период полужизни в плазме крови и пролонгировать профиль действия, была создана система, основанная на аффинной хроматографии с колонками с сывороточным альбумином, т. е. колонками с иммобилизованным сывороточным альбумином.

Эффективное время удерживания связывающих веществ (образцов) рассчитывали в соответствии со следующей формулой:

эффективное время удерживания=время удерживания _{образец} - время удерживания _{маркер t0}

Сульфонамиды формулы (A) характеризуются эффективным удерживанием в диапазоне от 9 до 19, например в диапазоне от 9,5 до 18, и, следовательно, считались применимыми связывающими веществами для конъюгатов пептидов, таких как конъюгаты инсулина.

Согласно одному варианту осуществления сульфонамид имеет формулу (A-1):

,

где:

E представляет собой группу -C₆H₃R-, при этом R представляет собой атом водорода или атом галогена, где атом галогена выбран из группы, состоящей из атомов фтора, хлора, брома и йода, и представляет собой, например, атом фтора;

X представляет собой атом азота или группу -CH-;

p равняется нулю или 1;

q равняется нулю или 1;

r представляет собой целое число в диапазоне от 1 до 6;

R¹ представляет собой по меньшей мере один остаток, выбранный из группы, состоящей из атома водорода и атома галогена, где атом галогена представляет собой, например, атом фтора или хлора;

R² представляет собой по меньшей мере один остаток, выбранный из группы, состоящей из атома водорода, C1-C3-алкильной группы и галогенированной C1-C3-алкильной группы, где C1-C3-алкильная группа представляет собой, например, метильную группу, и галогенированная C1-C3-алкильная группа является, например, пергалогенированной, такой как трифторметильная группа;

R^x представляет собой атом водорода или активирующую группу, необязательно активирующую группу, выбранную из группы, состоящей из 7-азабензотриазольной (необязательно полученной из HATU или HBTU), 4-нитробензольной и N-сукцинимидильной группы, где R^x необязательно представляет собой N-сукцинимидильную группу;

при этом m представляет собой целое число в диапазоне от 5 до 15, если p равняется нулю, или m представляет собой целое число в диапазоне от 7 до 15, если p равняется 1.

В одном варианте осуществления сульфонамида R¹ и R² представляют собой атомы водорода.

В одном варианте осуществления сульфонамида X представляет собой атом азота.

Согласно другому варианту осуществления сульфонамида группа HOOC-(CH₂)_m-(O)_s-(E)_p-(CH₂)_n-(A)_t- в формуле (A) или группа HOOC-(CH₂)_m-(E)_p-O- в формуле (A-1) находится в мета- или пара-положении в фенильном кольце Ph по отношению к группе -S(O)₂-.

Согласно другому варианту осуществления сульфонамида в случае, если p равняется 1, группа HOOC-(CH₂)_m-(O)_s- и группа -(CH₂)_n-(A)_t- находятся в мета- или пара-положении в (E)_p в формуле (A) или группа HOOC-(CH₂)_m- и -O- находятся в мета- или пара-положении в (E)_p в формуле (A-1).

Согласно другому варианту осуществления сульфонамида q равняется нулю.

Согласно другому варианту осуществления сульфонамид имеет формулу (A-1-1):

,

где X представляет собой атом азота или группу -CH-, например атом азота; m представляет собой целое число в диапазоне от 7 до 15; r представляет собой целое число в диапазоне от 1 до 6; q равняется нулю или 1, например нулю; Hal представляет собой атом галогена, выбранный из группы, состоящей из атомов фтора, хлора, брома и йода, например атом фтора; R^x представляет собой атом водорода или активирующую группу, необязательно активирующую группу, выбранную из группы, состоящей из 7-азабензотриазольной (необязательно полученной из HATU или HBTU), 4-нитробензольной и N-сукцинимидильной группы, где R^x необязательно представляет собой N-сукцинимидильную группу; и группа HOOC-(CH₂)_m-C₆H₃Hal-O- находится в мета- или пара-положении в фенильном кольце Ph по отношению к группе -S(O)₂-.

Согласно одному варианту осуществления сульфонамид имеет формулу (A-1-1a):

.

Согласно другому варианту осуществления сульфонамид имеет формулу (A-1-2):

,

где X представляет собой атом азота или группу -CH-, например атом азота; m представляет собой целое число в диапазоне от 5 до 15; r представляет собой целое число в диапазоне от 1 до 6; q равняется нулю или 1, например нулю; R^x представляет собой атом водорода или активирующую группу, необязательно активирующую группу, выбранную из группы, состоящей из 7-азабензотриазольной (необязательно полученной из HATU или HBTU), 4-нитробензольной и N-сукцинимидильной группы, где R^x необязательно представляет собой N-сукцинимидильную группу; и группа HOOC-(CH₂)_m-O- находится в мета- или пара-положении в фенильном кольце Ph по отношению к группе -S(O)₂-.

Согласно одному варианту осуществления сульфонамид имеет формулу (A-1-2a):

,

или формулу (A-1-2b):

,

или формулу (A-1-2c):

.

Согласно другому варианту осуществления сульфонамид имеет формулу (A-2):

,

где

X представляет собой атом азота или группу -CH-;

R^x представляет собой атом водорода или активирующую группу, необязательно активирующую группу, выбранную из группы, состоящей из 7-азабензотриазольной (необязательно полученной из HATU или HBTU), 4-нитробензольной и N-сукцинимидильной группы, где R^x необязательно представляет собой N-сукцинимидильную группу; и

m представляет собой целое число в диапазоне от 5 до 17, например в диапазоне от 11 до 17.

Согласно одному варианту осуществления сульфонамида формулы (A-2) группа HOOC-(CH₂)_m- находится в мета- или пара-положении в фенильном кольце Ph по отношению к группе -S(O)₂-.

Согласно другому варианту осуществления сульфонамид имеет формулу (A-3):

,

где

E представляет собой группу -C₆H₃R-, при этом R представляет собой атом водорода или атом галогена, где атом галогена выбран из группы, состоящей из атомов фтора, хлора, брома и йода;

X представляет собой атом азота или группу -CH-;

R^x представляет собой атом водорода или активирующую группу, необязательно активирующую группу, выбранную из группы, состоящей из 7-азабензотриазольной (необязательно полученной из HATU или HBTU), 4-нитробензольной и N-сукцинимидильной группы, где R^x необязательно представляет собой N-сукцинимидильную группу; и

m представляет собой целое число в диапазоне от 5 до 17, например 11.

Согласно одному варианту осуществления сульфонамида формулы (A-3) группа HOOC-(CH₂)_m-O- и группа -(CH₂)₂- находятся в пара-положении в (E) в формуле (A-3), и группа HOOC-(CH₂)_m-O-(E)-(CH₂)₂- находится в пара-положении в фенильном кольце Ph по отношению к группе -S(O)₂-.

Согласно другому варианту осуществления сульфонамид имеет формулу (A-4):

,

где

A представляет собой группу -OCH₂- или группу -CH₂O-;

E представляет собой группу -C₆H₃R-, при этом R представляет собой атом водорода или атом галогена, где атом галогена выбран из группы, состоящей из атомов фтора, хлора, брома и йода;

X представляет собой атом азота или группу -CH-;

R^x представляет собой атом водорода или активирующую группу, необязательно активирующую группу, выбранную из группы, состоящей из 7-азабензотриазольной (необязательно полученной из HATU или HBTU), 4-нитробензольной и N-сукцинимидильной группы, где R^x необязательно представляет собой N-сукцинимидильную группу; и

m представляет собой целое число в диапазоне от 5 до 17, например в диапазоне от 9 до 13.

Согласно одному варианту осуществления сульфонамида формулы (A-4) группа HOOC-(CH₂)_m- и группа -А- находятся в пара-положении в (E) в формуле (A-4), и группа -А- находится в пара-положении в фенильном кольце Ph по отношению к группе -S(O)₂-.

Согласно другому варианту осуществления сульфонамид имеет формулу (A-5):

,

где

E представляет собой группу -C₆H₃R-, при этом R представляет собой атом водорода или атом галогена, где атом галогена выбран из группы, состоящей из атомов фтора, хлора, брома и йода;

X представляет собой атом азота или группу -CH-;

R^x представляет собой атом водорода или активирующую группу, необязательно активирующую группу, выбранную из группы, состоящей из 7-азабензотриазольной (необязательно полученной из HATU или HBTU), 4-нитробензольной и N-сукцинимидильной группы, где R^x необязательно представляет собой N-сукцинимидильную группу; и

m представляет собой целое число в диапазоне от 5 до 17, например в диапазоне от 7 до 9.

Согласно одному варианту осуществления сульфонамида формулы (A-5) группа HOOC-(CH₂)_m- и группа -(CH₂)₂- находятся в пара-положении в (E) в формуле (A-5), и группа HOOC-(CH₂)_m(E)-(CH₂)₂-О- находится в пара-положении в фенильном кольце Ph по отношению к группе -S(O)₂-.

Конъюгат

В данном документе предусмотрены конъюгаты, содержащие сульфонамид формулы (I) и активный фармацевтический ингредиент или диагностическое соединение:

,

где в сульфонамиде формулы (I):

A выбран из группы, состоящей из атома кислорода, группы -CH₂CH₂-, группы -OCH₂- и группы -CH₂O-;

E представляет собой группу -C₆H₃R-, при этом R представляет собой атом водорода или атом галогена, где атом галогена выбран из группы, состоящей из атомов фтора, хлора, брома и йода;

X представляет собой атом азота или группу -CH-;

m представляет собой целое число в диапазоне от 5 до 17;

n равняется нулю или представляет собой целое число в диапазоне от 1 до 3;

p равняется нулю или 1;

q равняется нулю или 1;

r представляет собой целое число в диапазоне от 1 до 6;

s равняется нулю или 1;

t равняется нулю или 1;

R¹ представляет собой по меньшей мере один остаток, выбранный из группы, состоящей из атома водорода, атома галогена, C1-C3-алкильной группы и галогенированной C1-C3-алкильной группы;

R² представляет собой по меньшей мере один остаток, выбранный из группы, состоящей из атома водорода, атома галогена, C1-C3-алкильной группы и галогенированной C1-C3-алкильной группы;

где сульфонамид формулы (I) ковалентно связан с активным фармацевтическим ингредиентом или диагностическим соединением таким образом, что концевая карбоксильная группа "а" сульфонамида формулы (I) ковалентно связана с подходящей функциональной группой активного фармацевтического ингредиента или диагностического соединения, например, с аминогруппой или гидроксильной группой активного фармацевтического ингредиента или диагностического соединения.

Например, активный фармацевтический ингредиент представляет собой пептид, где пептид и сульфонамид формулы (I), например, соединены амидной связью, например, образованной между концевой карбоксильной группой "а" сульфонамида формулы (I) и аминогруппой пептида. Само собой разумеется, что в случае с амидной связью карбоксильная группа "a" присутствует в конъюгате как карбонильная группа -C(=O)-, как показано ниже, где все из остатков E, A, R¹, R², X, а также индексов m, s, p, n, t, r и q имеют значение, указанное выше для формулы (I), и группа NH---- уже является частью, оставшейся от аминогруппы пептида:

.

В некоторых вариантах осуществления комбинация s, равняющегося 1, p, равняющегося нулю, n, равняющегося нулю, A, представляющего собой атом кислорода, и t, равняющегося 1, исключается для сульфонамида формулы (I). В некоторых вариантах осуществления s равняется нулю, при этом остальные остатки и индексы имеют значения, указанные выше для формулы (I).

В некоторых вариантах осуществления галогенированная C1-C3-алкильная группа R¹ и/или галогенированная C1-C3-алкильная группа R²сульфонамида формулы (I) являются частично галогенированными или пергалогенированными. В некоторых вариантах осуществления галогенированная C1-C3-алкильная группа R¹ и/или галогенированная C1-C3-алкильная группа R²сульфонамида формулы (I) являются пергалогенированными.

Как уже обсуждалось выше, неожиданно было обнаружено, что указанные конъюгаты демонстрируют благоприятный период полужизни в крови и/или плазме крови и пролонгированный профиль действия, что, например, было подтверждено в доклинических животных моделях.

Используемый в данном документе термин "конъюгаты, содержащие сульфонамид формулы (I) и активный фармацевтический ингредиент или диагностическое соединение" включает сами конъюгаты, их фармацевтически приемлемые соли и все фармацевтически приемлемые изотопно меченные конъюгаты, где один или несколько атомов замещены атомами, которые имеют то же атомное число, но атомная масса или массовое число которых отличаются от атомной массы или массового числа, которые преобладают в природе. То же самое относится ко всем подтипам конъюгатов, т. е. к конъюгатам, содержащим сульфонамиды формул (I-1)-(I-5), подробно описанным ниже, и также к их подструктурам, например, конъюгатам, содержащим сульфонамиды формулы (I-1-1). То же самое относится ко всем подтипам сульфонамидов формулы (I), т. е. к сульфонамидам формул (I-1)-(I-5), подробно описанным ниже, и также соответственно к их подструктурам, например, сульфонамидам формулы (I-1-1). Таким образом, термин "конъюгат, содержащий сульфонамид формулы (I-…)", где (I-…) представляет количество сульфонамидов формулы (I-1)-(I-5), подробно описанных ниже, и также их подструктуры, включает сами конъюгаты, их фармацевтически приемлемые соли и все фармацевтически приемлемые изотопно меченные соединения.

Фармацевтически приемлемые соли конъюгатов включают соли присоединения кислоты и основные соли. Подходящие соли присоединения кислоты образуются из кислот, которые образуют нетоксичные соли. Примеры включают ацетатные, адипатные, аспартатные, бензоатные, безилатные, бикарбонатные/карбонатные, бисульфатные/сульфатные, боратные, камзилатные, цитратные, цикламатные, эдизилатные, эзилатные, формиатные, фумаратные, глюцептатные, глюконатные, глюкуронатные, гексафторфосфатные, гибензатные, гидрохлоридные/хлоридные, гидробромидные/бромидные, гидройодидные/йодидные, изетионатные, лактатные, малатные, малеатные, малонатные, мезилатные, метилсульфатные, нафтилатные, 2-напсилатные, никотинатные, нитратные, оротатные, оксалатные, пальмитатные, памоатные, фосфатные/гидрофосфатные/дигидрофосфатные, пироглутаматные, сахаратные, стеаратные, сукцинатные, таннатные, тартратные, тозилатные, трифторацетатные соли, соли 1,5-нафталиндисульфоновой кислоты и ксинафоатные соли. Подходящие основные соли образуются из оснований, которые образуют нетоксичные соли. Примеры включают соли алюминия, аргинина, бензатина, кальция, холина, диэтиламина, бис(2-гидроксиэтил)амина (диоламина), глицина, лизина, магния, меглумина, 2-аминоэтанола (оламина), калия, натрия, 2-амино-2-(гидроксиметил)пропан-1,3-диола (трис или трометамина) и цинка. Также могут быть образованы полусоли кислот и оснований, например, гемисульфатные и гемикальциевые соли. Обзор подходящих солей см. в Handbook of Pharmaceutical Salts: Properties, Selection, and Use, Stahl and Wermuth (Wiley-VCH, 2002).

Конъюгаты и их фармацевтически приемлемые соли могут существовать в несольватированной и сольватированной формах. Термин "сольват" используется в данном документе для описания молекулярного комплекса, содержащего соединение формулы I или его фармацевтически приемлемую соль и одну или несколько молекул фармацевтически приемлемого растворителя, например этанола. Термин "гидрат" используется в случае, когда указанный растворитель представляет собой воду.

Примеры изотопов, подходящих для включения в конъюгаты, включают изотопы водорода, такие как ²H и ³H, углерода, такие как ¹¹C, ¹³C и ¹⁴C, хлора, такие как ³⁶Cl, фтора, такие как ¹⁸F, йода, такие как ¹²³I и ¹²⁵I, азота, такие как ¹³N и ¹⁵N, кислорода, такие как ¹⁵O, ¹⁷O и ¹⁸O, и серы, такие как ³⁵S.

Определенные изотопно меченные конъюгаты, например те, которые содержат в своем составе радиоактивный изотоп, являются применимыми в исследованиях распределения лекарственного средства и/или субстрата в тканях. Радиоактивные изотопы тритий, т. е. ³H, и углерод-14, т. е. ¹⁴C, особенно применимы для этой цели ввиду простоты их включения в состав и доступности способов выявления.

Замещение более тяжелыми изотопами, такими как дейтерий, т. е. ²H, может обеспечивать определенные терапевтические преимущества, обусловленные большей метаболической стабильностью, например, увеличение периода полужизни in vivo или снижение требуемой дозировки.

Замещение изотопами, излучающими позитроны, такими как ¹¹C, ¹⁸F, ¹⁵O и ¹³N, может быть применимым в исследованиях методом позитронно-эмиссионной томографии (PET) для изучения занятости рецепторов субстратом.

Изотопно меченные конъюгаты обычно могут быть получены с помощью традиционных методик, известных специалистам в данной области.

Фармацевтически приемлемые сольваты в соответствии с настоящим изобретением включают те, где растворитель для кристаллизации может быть изотопно замещенным, например, представляет собой D₂O, d₆-ацетон, d₆-DMSO.

Используемый в данном документе термин "активный фармацевтический ингредиент" (API) включает любое фармацевтически активное химическое или биологическое соединение, и любую его фармацевтически приемлемую соль, и любую его смесь, которые обеспечивают некоторый фармакологический эффект и применяются для лечения или предупреждения состояния. Подразумевается, что используемые в данном документе термины "активный фармацевтический ингредиент", "активное средство", "активный ингредиент", "действующее вещество" и "лекарственное средство" являются синонимами, т. е. имеют одинаковое значение.

В одном варианте осуществления активный фармацевтический ингредиент выбран из группы, включающей противодиабетическое средство, средство против ожирения, средство, регулирующее аппетит, гипотензивное средство, средство для лечения и/или предупреждения осложнений, являющихся следствием сахарного диабета или ассоциированных с ним, и средства для лечения и/или предупреждения осложнений и нарушений, являющихся следствием ожирения или ассоциированных с ним. Примерами этих активных фармацевтических ингредиентов являются инсулин, сульфонилмочевины, бигуаниды, меглитиниды, ингибиторы глюкозидазы, антагонисты рецепторов глюкагона, ингибиторы DPP-IV (дипептидилпептидазы-IV), ингибиторы печеночных ферментов, участвующих в стимуляции глюконеогенеза и/или гликогенолиза, модуляторы поглощения глюкозы, соединения, модифицирующие метаболизм липидов, такие как гиполипидемические средства, например ингибиторы HMG-CoA (статины), желудочные ингибиторные полипептиды (аналоги GIP), соединения, снижающие потребление пищи, агонисты RXR и средства, воздействующие на ATP-зависимый калиевый канал клеток; холестирамин, колестипол, клофибрат, гемфиброзил, ловастатин, правастатин, симвастатин, пробукол, декстротироксин, натеглинид, репаглинид; блокаторы, такие как алпренолол, атенолол, тимолол, пиндолол, пропранолол и метопролол, ингибиторы ACE (ангиотензинпревращающего фермента), такие как беназеприл, каптоприл, эналаприл, фозиноприл, лизиноприл, алатриоприл, хинаприл и рамиприл, блокаторы кальциевых каналов, такие как нифедипин, фелодипин, никардипин, исрадипин, нимодипин, дилтиазем и верапамил, и альфа-блокаторы, такие как доксазозин, урапидил, празозин и теразозин; агонисты рецепторов CART (кокаин- и амфетамин-регулируемого транскрипта), антагонисты рецепторов NPY (нейропептида Y), агонисты рецепторов PYY, агонисты рецепторов PYY2, агонисты рецепторов PYY4, смешанные агонисты рецепторов PPY2/PYY4, агонисты рецепторов MC4 (меланокортина 4), антагонисты рецепторов орексина, агонисты рецепторов TNF (фактора некроза опухоли), агонисты рецепторов CRF (кортикотропин-высвобождающего фактора), антагонисты рецепторов CRF-BP (белка, связывающего кортикотропин-высвобождающий фактор), агонисты рецепторов урокортина, агонисты 3, агонисты рецепторов MSH (меланоцитстимулирующего гормона), антагонисты рецепторов MCH (меланин-концентрирующего гормона), агонисты рецепторов CCK (холецистокинина), ингибиторы обратного захвата серотонина, ингибиторы обратного захвата серотонина и норадреналина, смешанные серотонинергические и норадренергические соединения, агонисты рецепторов 5HT (серотонина), агонисты рецепторов бомбезина, антагонисты рецепторов галанина, гормон роста, соединения, высвобождающие гормон роста, агонисты рецепторов TRH (тиреотропин-высвобождающего гормона), модуляторы UCP 2 или 3 (разобщающего белка 2 или 3), агонисты рецепторов лептина, агонисты рецепторов DA (бромкриптин, допрексин), ингибиторы липазы/амилазы, модуляторы RXR (ретиноидного X-рецептора), агонисты TR; антагонисты рецепторов гистамина H3, агонисты или антагонисты рецепторов желудочного ингибиторного полипептида (аналоги GIP), гастрин и аналоги гастрина. В одном варианте осуществления активный фармацевтический ингредиент выбран из группы, состоящей из противодиабетического средства, средства против ожирения, средства, регулирующее аппетит, гипотензивного средства, средства для лечения и/или предупреждения осложнений, являющихся следствием сахарного диабета или ассоциированных с ним, и средств для лечения и/или предупреждения осложнений и нарушений, являющихся следствием ожирения или ассоциированных с ним. Примерами этих активных фармацевтических ингредиентов являются инсулин, сульфонилмочевины, бигуаниды, меглитиниды, ингибиторы глюкозидазы, антагонисты рецепторов глюкагона, ингибиторы DPP-IV (дипептидилпептидазы-IV), ингибиторы печеночных ферментов, участвующих в стимуляции глюконеогенеза и/или гликогенолиза, модуляторы поглощения глюкозы, соединения, модифицирующие метаболизм липидов, такие как гиполипидемические средства, например ингибиторы HMG-CoA (статины), желудочные ингибиторные полипептиды (аналоги GIP), соединения, снижающие потребление пищи, агонисты RXR и средства, воздействующие на ATP-зависимый калиевый канал клеток; холестирамин, колестипол, клофибрат, гемфиброзил, ловастатин, правастатин, симвастатин, пробукол, декстротироксин, натеглинид, репаглинид; блокаторы, такие как алпренолол, атенолол, тимолол, пиндолол, пропранолол и метопролол, ингибиторы ACE (ангиотензинпревращающего фермента), такие как беназеприл, каптоприл, эналаприл, фозиноприл, лизиноприл, алатриоприл, хинаприл и рамиприл, блокаторы кальциевых каналов, такие как нифедипин, фелодипин, никардипин, исрадипин, нимодипин, дилтиазем и верапамил, и альфа-блокаторы, такие как доксазозин, урапидил, празозин и теразозин; агонисты рецепторов CART (кокаин- и амфетамин-регулируемого транскрипта), антагонисты рецепторов NPY (нейропептида Y), агонисты рецепторов PYY, агонисты рецепторов PYY2, агонисты рецепторов PYY4, смешанные агонисты рецепторов PPY2/PYY4, агонисты рецепторов MC4 (меланокортина 4), антагонисты рецепторов орексина, агонисты рецепторов TNF (фактора некроза опухоли), агонисты рецепторов CRF (кортикотропин-высвобождающего фактора), антагонисты рецепторов CRF-BP (белка, связывающего кортикотропин-высвобождающий фактор), агонисты рецепторов урокортина, агонисты 3, агонисты рецепторов MSH (меланоцитстимулирующего гормона), антагонисты рецепторов MCH (меланин-концентрирующего гормона), агонисты рецепторов CCK (холецистокинина), ингибиторы обратного захвата серотонина, ингибиторы обратного захвата серотонина и норадреналина, смешанные серотонинергические и норадренергические соединения, агонисты рецепторов 5HT (серотонина), агонисты рецепторов бомбезина, антагонисты рецепторов галанина, гормон роста, соединения, высвобождающие гормон роста, агонисты рецепторов TRH (тиреотропин-высвобождающего гормона), модуляторы UCP 2 или 3 (разобщающего белка 2 или 3), агонисты рецепторов лептина, агонисты рецепторов DA (бромкриптин, допрексин), ингибиторы липазы/амилазы, модуляторы RXR (ретиноидного X-рецептора), агонисты TR; антагонисты рецепторов гистамина H3, агонисты или антагонисты рецепторов желудочного ингибиторного полипептида (аналоги GIP), гастрин и аналоги гастрина.

В одном варианте осуществления активный фармацевтический ингредиент представляет собой терапевтически активный пептид, где пептид содержит по меньшей мере 2 аминокислоты. В некоторых вариантах осуществления пептид содержит по меньшей мере 10 аминокислот или по меньшей мере 20 аминокислот. В некоторых вариантах осуществления пептид содержит не более 1000 аминокислот, как, например, не более 500 аминокислот, например, не более 100 аминокислот.

В одном варианте осуществления конъюгата активный фармацевтический ингредиент представляет собой противодиабетическое средство, такое как пептид. В некоторых вариантах осуществления пептид представляет собой GLP-1, аналог GLP-1, агонист рецепторов GLP-1; двойной агонист рецепторов GLP-1/рецепторов глюкагона; человеческий FGF21, аналог FGF21, производное FGF21; инсулин (например, человеческий инсулин), аналог инсулина или производное инсулина.

Согласно одному варианту осуществления конъюгата активный фармацевтический ингредиент выбран из группы, включающей инсулин, аналог инсулина, GLP-1 и аналог GLP-1 (например, агонист рецепторов GLP(-1)). В одном варианте осуществления конъюгата активный фармацевтический ингредиент выбран из группы, состоящей из инсулина, аналога инсулина, GLP-1 и аналога GLP-1 (например, агониста рецепторов GLP(-1)).

Используемый в данном документе термин "аналог GLP-1" относится к полипептиду, имеющему молекулярную структуру, которая формально может быть получена из структуры встречающегося в природе глюкагоноподобного пептида-1 (GLP-1), например, человеческого GLP-1, путем делеции и/или замены по меньшей мере одного аминокислотного остатка, содержащегося во встречающемся в природе GLP-1, и/или добавления по меньшей мере одного аминокислотного остатка. Добавляемые и/или заменяющие аминокислотные остатки могут представлять собой кодируемые аминокислотные остатки либо другие встречающиеся в природе остатки или аминокислотные остатки, полученные исключительно синтетическим путем.

Используемый в данном документе термин "агонист рецепторов GLP(-1)" относится к аналогам GLP(-1), которые активируют рецептор глюкагоноподобного пептида-1 (рецептор GLP-1). Примеры агонистов рецепторов GLP(-1) включают без ограничения следующие: ликсисенатид, эксенатид/эксендин-4, семаглутид, таспоглутид, албиглутид, дулаглутид.

Ликсисенатид имеет следующую аминокислотную последовательность (SEQ ID NO: 1): His-Gly-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Leu-Ser-Lys-Gln-Met-Glu-Glu-Glu-Ala-Val-Arg-Leu-Phe-Ile-Glu-Trp-Leu-Lys-Asn-Gly-Gly-Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Ser-Lys-Lys-Lys-Lys-Lys-Lys-NH₂.

Эксенатид имеет следующую аминокислотную последовательность (SEQ ID NO: 2):

H-His-Gly-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Leu-Ser-Lys-Gln-Met-Glu-Glu-Glu-Ala-Val-Arg-Leu-Phe-Ile-Glu-Trp-Leu-Lys-Asn-Gly-Gly-Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser-NH₂.

Семаглутид - вещество, связывающее альбумин, связанное с Lys(20) - имеет следующую аминокислотную последовательность (SEQ ID NO: 3):

H-His-Aib-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys(AEEAc-AEEAc-γ-Glu-17-карбоксигептадеканоил)-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Arg-Gly-Arg-Gly-OH.

Дулаглутид (GLP1 (7-37), связанный посредством пептидного линкера с Fc-фрагментом) имеет следующую аминокислотную последовательность (SEQ ID NO: 4):

H-His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Arg-Gly.

Используемый в данном документе термин "FGF-21" означает "фактор роста фибробластов 21". Соединения FGF-21 могут представлять собой человеческий FGF-21, аналог FGF-21 (называемый "аналогом FGF-21") или производное FGF-21 (называемое "производным FGF-21").

Согласно одному варианту осуществления конъюгата активный фармацевтический ингредиент представляет собой инсулин или аналог инсулина, например аналог человеческого инсулина, где аминогруппа пептида, с которой ковалентно связан сульфонамид формулы (I), представляет собой эпсилон-аминогруппу лизина, присутствующего в инсулине или аналоге инсулина, или представляет собой N-концевую аминогруппу B-цепи инсулина или аналога инсулина. Например, инсулин или аналог инсулина имеют один лизин в А-цепи и/или B-цепи. В некоторых вариантах осуществления инсулин или аналог инсулина имеют один лизин в А-цепи и B-цепи.

Согласно одному варианту осуществления конъюгата аминогруппа пептида, с которой ковалентно связан сульфонамид формулы (I), представляет собой эпсилон-аминогруппу лизина, присутствующего в положениях B26-B29, например B29, B-цепи человеческого инсулина или аналога человеческого инсулина, например аналога человеческого инсулина.

Согласно другому варианту осуществления конъюгата диагностическое соединение представляет собой контрастное средство, такое как рентгеноконтрастное средство. В некоторых вариантах осуществления контрастное средство представляет собой контрастное средство для магнитно-резонансной томографии (MRI) на основе гадолиния или йода. В некоторых вариантах осуществления контрастное средство представляет собой гадопентетат димеглумина, гадотерат меглумина, гадобенат димеглумина, гадотеридол, гадодиамид, гадоверсетамид, гадоксетат динатрия, амидотризоат или амидотризоатную соль, например, амидотризоатную соль меглумина, натрия и/или лизина, йогексол (5-[ацетил(2,3-дигидроксипропил)амино]-1-N,3-N-бис(2,3-дигидроксипропил)-2,4,6-трийодбензол-1,3-дикарбоксамид), йопамидол (1-N,3-N-бис(1,3-дигидроксипропан-2-ил)-5-[[(2S)-2-гидроксипропаноил]амино]-2,4,6-трийодбензол-1,3-дикарбоксамид), йопромид (1-N,3-N-бис(2,3-дигидроксипропил)-2,4,6-трийод-5-[(2-метоксиацетил)амино]-3-N-метилбензол-1,3-дикарбоксамид) или йодиксанол (5-[ацетил-[3-[ацетил-[3,5-бис(2,3-дигидроксипропилкарбамоил)-2,4,6-трийодфенил]амино]-2-гидроксипропил]амино]-N,N'-бис(2,3-дигидроксипропил)-2,4,6-трийодбензол-1,3-дикарбоксамид). В некоторых вариантах осуществления контрастное средство выбрано из группы, состоящей из гадопентетата димеглумина, гадотерата меглумина, гадобената димеглумина, гадотеридола, гадодиамида, гадоверсетамида, гадоксетата динатрия, амидотризоата или амидотризоатной соли, например, амидотризоатной соли меглумина, натрия и/или лизина, йогексола (5-[ацетил(2,3-дигидроксипропил)амино]-1-N,3-N-бис(2,3-дигидроксипропил)-2,4,6-трийодбензол-1,3-дикарбоксамида), йопамидола (1-N,3-N-бис(1,3-дигидроксипропан-2-ил)-5-[[(2S)-2-гидроксипропаноил]амино]-2,4,6-трийодбензол-1,3-дикарбоксамида), йопромида (1-N,3-N-бис(2,3-дигидроксипропил)-2,4,6-трийод-5-[(2-метоксиацетил)амино]-3-N-метилбензол-1,3-дикарбоксамида) или йодиксанола (5-[ацетил-[3-[ацетил-[3,5-бис(2,3-дигидроксипропилкарбамоил)-2,4,6-трийодфенил]амино]-2-гидроксипропил]амино]-N,N'-бис(2,3-дигидроксипропил)-2,4,6-трийодбензол-1,3-дикарбоксамид).

Как обсуждается выше, сульфонамид формулы (I) ковалентно связан с диагностическим соединением таким образом, что концевая карбоксильная группа "а" сульфонамида формулы (I) ковалентно связана с подходящей функциональной группой диагностического соединения. Подходящая функциональная группа может представлять собой, например, аминогруппу (первичную или вторичную) или гидроксильную группу диагностического соединения.

Согласно одному варианту осуществления конъюгата сульфонамид имеет формулу (I-1):

,

где:

E представляет собой группу -C₆H₃R-, при этом R представляет собой атом водорода или атом галогена, где атом галогена выбран из группы, состоящей из атомов фтора, хлора, брома и йода, и представляет собой, например, атом фтора;

X представляет собой атом азота или группу -CH-;

p равняется нулю или 1;

q равняется нулю или 1;

r представляет собой целое число в диапазоне от 1 до 6;

R¹ представляет собой по меньшей мере один остаток, выбранный из группы, состоящей из атома водорода и атома галогена, где атом галогена представляет собой, например, атом фтора или хлора;

R2 представляет собой по меньшей мере один остаток, выбранный из группы, состоящей из атома водорода, C1-C3-алкильной группы и галогенированной C1-C3-алкильной группы, где C1-C3-алкильная группа представляет собой, например, метильную группу, и галогенированная C1-C3-алкильная группа является, например, пергалогенированной, такой как трифторметильная группа;

при этом m представляет собой целое число в диапазоне от 5 до 15, если p равняется нулю, или m представляет собой целое число в диапазоне от 7 до 15, если p равняется 1.

В одном варианте осуществления конъюгата остатки R¹ и R² сульфонамида представляют собой атомы водорода.

В одном варианте осуществления конъюгата остаток X сульфонамида представляет собой атом азота.

Согласно другому варианту осуществления конъюгата группа HOOC-(CH₂)_m-(O)_s-(E)_p-(CH₂)_n-(A)_t- в формуле (I) или группа HOOC-(CH₂)_m-(E)_p-O- в формуле (I-1) сульфонамида находится в мета- или пара-положении в фенильном кольце Ph по отношению к группе -S(O)₂-.

Согласно другому варианту осуществления конъюгата в случае, если p равняется 1, группа HOOC-(CH₂)_m-(O)_s- и группа -(CH₂)_n-(A)_t- находятся в мета- или пара-положении в (E)_p в формуле (I) сульфонамида или группа HOOC-(CH₂)_m- и -O- находятся в мета- или пара-положении в (E)_p в формуле (I-1).

Согласно другому варианту осуществления конъюгата индекс q сульфонамида равняется нулю.

Согласно другому варианту осуществления конъюгата сульфонамид имеет формулу (I-1-1):

,

где X представляет собой атом азота или группу -CH-, например атом азота; m представляет собой целое число в диапазоне от 7 до 15; r представляет собой целое число в диапазоне от 1 до 6; q равняется нулю или 1, например нулю; Hal представляет собой атом галогена, выбранный из группы, состоящей из атомов фтора, хлора, брома и йода, например атом фтора; и группа HOOC-(CH₂)_m-C₆H₃Hal-O- находится в мета- или пара-положении в фенильном кольце Ph по отношению к группе -S(O)₂-.

Согласно одному варианту осуществления конъюгата сульфонамид имеет формулу (I-1-1a):

.

Согласно другому варианту осуществления конъюгата сульфонамид имеет формулу (I-1-2):

,

где X представляет собой атом азота или группу -CH-, например атом азота; m представляет собой целое число в диапазоне от 5 до 15; r представляет собой целое число в диапазоне от 1 до 6; q равняется нулю или 1, например нулю; и группа HOOC-(CH₂)_m-O- находится в мета- или пара-положении в фенильном кольце Ph по отношению к группе -S(O)₂-.

Согласно одному варианту осуществления конъюгата сульфонамид имеет формулу (I-1-2a):

,

или формулу (I-1-2b):

,

или формулу (I-1-2c):

.

Согласно другому варианту осуществления конъюгата сульфонамид имеет формулу (I-2):

,

где

X представляет собой атом азота или группу -CH-; и

m представляет собой целое число в диапазоне от 5 до 17, например в диапазоне от 11 до 17.

Согласно одному варианту осуществления конъюгата группа HOOC-(CH₂)_m- сульфонамида формулы (I-2) находится в мета- или пара-положении в фенильном кольце Ph по отношению к группе -S(O)₂-.

Согласно другому варианту осуществления конъюгата сульфонамид имеет формулу (I-3):

,

где

E представляет собой группу -C₆H₃R-, при этом R представляет собой атом водорода или атом галогена, где атом галогена выбран из группы, состоящей из атомов фтора, хлора, брома и йода;

X представляет собой атом азота или группу -CH-;

m представляет собой целое число в диапазоне от 5 до 17, например 11.

Согласно одному варианту осуществления конъюгата группа HOOC-(CH₂)_m-O- и группа -(CH₂)₂- сульфонамида формулы (I-3) находятся в пара-положении в (E) в формуле (I-3), и группа HOOC-(CH₂)_m-O-(E)-(CH₂)₂- находится в пара-положении в фенильном кольце Ph по отношению к группе -S(O)₂-.

Согласно другому варианту осуществления конъюгата сульфонамид имеет формулу (I-4):

,

где

A представляет собой группу OCH₂- или группу -CH₂O-;

E представляет собой группу -C₆H₃R-, при этом R представляет собой атом водорода или атом галогена, где атом галогена выбран из группы, состоящей из атомов фтора, хлора, брома и йода;

X представляет собой атом азота или группу -CH-;

m представляет собой целое число в диапазоне от 5 до 17, например в диапазоне от 9 до 13.

Согласно одному варианту осуществления конъюгата группа HOOC-(CH₂)_m- и группа -А- сульфонамида формулы (I-4) находятся в пара-положении в (E) в формуле (I-4), и группа -А- находится в пара-положении в фенильном кольце Ph по отношению к группе -S(O)₂-.

Согласно другому варианту осуществления конъюгата сульфонамид имеет формулу (I-5):

,

где

E представляет собой группу -C₆H₃R-, при этом R представляет собой атом водорода или атом галогена, где атом галогена выбран из группы, состоящей из атомов фтора, хлора, брома и йода;

X представляет собой атом азота или группу -CH-;

m представляет собой целое число в диапазоне от 5 до 17, например в диапазоне от 7 до 9.

Согласно одному варианту осуществления конъюгата группа HOOC-(CH₂)_m и группа -(CH₂)₂- сульфонамида формулы (I-5) находятся в пара-положении в (E) в формуле (I-5), и группа HOOC-(CH₂)_m(E)-(CH₂)₂-О- находится в пара-положении в фенильном кольце Ph по отношению к группе -S(O)₂-.

Способ получения конъюгата

В данном документе предусмотрены способы получения конъюгата, содержащего сульфонамид формулы (I) и активный фармацевтический ингредиент:

,

где в сульфонамиде формулы (I):

A выбран из группы, состоящей из атома кислорода, группы -CH₂CH₂-, группы -OCH₂- и группы -CH₂O-;

E представляет собой группу -C₆H₃R-, при этом R представляет собой атом водорода или атом галогена, где атом галогена выбран из группы, состоящей из атомов фтора, хлора, брома и йода;

X представляет собой атом азота или группу -CH-;

m представляет собой целое число в диапазоне от 5 до 17;

n равняется нулю или представляет собой целое число в диапазоне от 1 до 3;

p равняется нулю или 1;

q равняется нулю или 1;

r представляет собой целое число в диапазоне от 1 до 6;

s равняется нулю или 1;

t равняется нулю или 1;

R¹ представляет собой по меньшей мере один остаток, выбранный из группы, состоящей из атома водорода, атома галогена, C1-C3-алкильной группы и галогенированной C1-C3-алкильной группы;

R² представляет собой по меньшей мере один остаток, выбранный из группы, состоящей из атома водорода, атома галогена, C1-C3-алкильной группы и галогенированной C1-C3-алкильной группы;

где сульфонамид формулы (I) ковалентно связан с активным фармацевтическим ингредиентом таким образом, что концевая карбоксильная группа "а" сульфонамида формулы (I) ковалентно связана с аминогруппой активного фармацевтического ингредиента;

(а) получение сульфонамида формулы (Aa):

,

где X, Y, A, E, R¹, R² и индексы m, n, p, q, r, s, t имеют значения, указанные выше в отношении формулы (I), R^x представляет собой атом водорода или активирующую группу, необязательно активирующую группу, выбранную из группы, состоящей из 7-азабензотриазольной (необязательно полученной из HATU или HBTU), 4-нитробензольной и N-сукцинимидильной группы, где R^x необязательно представляет собой N-сукцинимидильную группу, и R³ представляет собой защитную группу или атом водорода, необязательно атом водорода;

и активного фармацевтического ингредиента, который имеет защитную группу или не имеет защитной группы на C-конце;

(b) осуществление реакции сульфонамида формулы (Aa) и активного фармацевтического ингредиента, который имеет защитную группу или не имеет защитной группы на C-конце, в условиях, подходящих для образования амидной связи между свободной или активированной, необязательно активированной, карбоксильной группой "a" сульфонамида формулы (Aa) и аминогруппой активного фармацевтического ингредиента, который имеет защитную группу или не имеет защитной группы на C-конце;

(c) необязательно удаление одной или обеих защитных групп, например удаление обеих защитных групп.

В некоторых вариантах осуществления способа комбинация s, равняющегося 1, p, равняющегося нулю, n, равняющегося нулю, A, представляющего собой атом кислорода, и t, равняющегося 1, исключается для сульфонамида формулы (I), а также для сульфонамида формулы (Aa). В некоторых вариантах осуществления s равняется нулю для сульфонамида формулы (I), а также для сульфонамида формулы (Aa), при этом остальные остатки и индексы имеют значения, указанные выше для формул (I) и (Aa) соответственно.

В данном документе предусмотрены способы получения конъюгата, содержащего сульфонамид формулы (I) и диагностическое соединение, где диагностическое соединение ковалентно связано с помощью подходящей функциональной группы со свободной или активированной, необязательно активированной, карбоксильной группой "а" сульфонамида формулы (Aa) в соответствии с описанным выше способом образования связи с активным фармацевтическим ингредиентом.

Также возможно получить конъюгат, описанный в данном документе выше, с помощью способа, включающего:

а) получение сульфонамида формулы (Aa), где R^x представляет собой активирующую группу (R^x=активирующая группа);

получение водного раствора активного фармацевтического ингредиента, где водный раствор необязательно содержит спирт;

приведение водного раствора из b) в контакт с сульфонамидом формулы (Aa) (R^x=активирующая группа) из а) и

осуществление реакции сульфонамида формулы (Aa) с активным фармацевтическим ингредиентом с получением раствора, содержащего конъюгат сульфонамида и активного фармацевтического ингредиента, где сульфонамид ковалентно связан с активным фармацевтическим ингредиентом.

В этом способе активный фармацевтический ингредиент необязательно представляет собой полипептид инсулин, имеющий свободную аминогруппу, необязательно аналог инсулина, описанный в данном документе выше, или его предшественник, каждый из которых имеет свободную аминогруппу, где предшественник аналога инсулина содержит дополнительный линкерный пептид, который имеет длину по меньшей мере две аминокислоты, или длину в диапазоне от 2 до 30 аминокислот, или длину в диапазоне от 4 до 9 аминокислот. В этом способе водный раствор, полученный в а), имеет значение pH в диапазоне от 9 до 12, или в диапазоне от 9,5 до 11,5, или в диапазоне от 10 до 11, где значение pH определяется pH-чувствительным стеклянным электродом согласно ASTM E 70:2007; где значение pH необязательно корректируется в соответствующем диапазоне путем добавления основания, необязательно основания, выбранного из группы, состоящей из гидроксидов щелочных металлов (гидроксида лития, гидроксида натрия, гидроксида калия), алкиламинов и смесей двух или более из них; необязательно выбранного из группы третичных алкиламинов N(C1-C5-алкил)₃, первичных алкиламинов H₂N-C(C1-C5-алкил)₃ и смесей двух или более из них, где каждая из C1-C5-алкильных групп третичных аминов и первичных аминов независимо выбрана из C1-C5-алкильных групп с разветвленной или прямой цепью, и где каждая C1-C5-алкильная группа имеет по меньшей мере один заместитель, выбранный из группы, состоящей из атома водорода, гидроксильной группы и карбоксильной группы; необязательно выбранного из группы третичных алкиламинов N(C1-C3-алкил)₃, первичных алкиламинов H₂N-C(C1-C3-алкил)₃ и смесей двух или более из них, где каждая из C1-C3-алкильных группы третичных аминов и первичных аминов независимо выбрана из C1-C3-алкильных групп с разветвленной или прямой цепью, и где каждая C1-C3-алкильная группа имеет по меньшей мере один заместитель, выбранный из группы, состоящей из атома водорода, гидроксильной группы и карбоксильной группы; необязательно выбранного из группы бицина, триметиламина, трис(гидроксиметил)аминометана и смесей двух или более из них; где основание необязательно включает по меньшей мере триэтиламин.

В одном варианте этого способа приведение водного раствора из b) в контакт с сульфонамидом формулы (Aa) (R^x=активирующая группа) из a) согласно стадии c) осуществляется таким образом, что сульфонамид формулы (Aa) (R^x=активирующая группа) из a) добавляется в виде раствора сульфонамида формулы (Aa) (R^x=активирующая группа) к водному раствору из b), где раствор сульфонамида формулы (Aa) (R^x=активирующая группа) необязательно представляет собой органический раствор, необязательно раствор, содержащий сульфонамид формулы (Aa) (R^x=активирующая группа) и полярный апротонный органический растворитель, необязательно полярный апротонный органический растворитель, имеющий коэффициент распределения октанол/вода (K_OW) в диапазоне от 1 до 5 или в диапазоне от 2 до 4 при стандартных условиях (T: 20-25°C, p: 1013 мбар); необязательно выбранный из группы, состоящей из тетрагидрофурана, ацетонитрила, диметилформамида и смесей двух или более из них; или выбранный из группы, состоящей из тетрагидрофурана, ацетонитрила и смесей тетрагидрофурана и ацетонитрила.

В одном варианте этого способа приведение водного раствора из b) в контакт с сульфонамидом формулы (Aa) (R^x=активирующая группа) из a) согласно стадии c) осуществляется таким образом, что сульфонамид формулы (Aa) (R^x=активирующая группа) из а) добавляется в твердой форме, или по меньшей мере частично в кристаллической форме, или в количестве по меньшей мере 90% по весу в кристаллической форме к водному раствору из b).

В этом способе стадия d) необязательно включает: d.1) осуществление реакции сульфонамида формулы (Aa) (R^x=активирующая группа) с предшественником аналога инсулина при pH в диапазоне от 9 до 12, или в диапазоне от 9,5 до 11,5, или в диапазоне от 10 до 11 с получением преконъюгата, содержащего сульфонамид формулы (I) и предшественник аналога инсулина, где сульфонамид формулы (I) ковалентно связан с предшественником аналога инсулина с помощью амидной связи C(=O)-NH-, образованной между -C(=O)-O(R) сульфонамида формулы (I) и аминогруппой предшественника аналога инсулина; d.2) ферментативное расщепление, необязательно при pH в диапазоне ниже 9 или при pH в диапазоне от 7 до 9, предшественника аналога инсулина в преконъюгате, полученном согласно d.1), с получением раствора, содержащего конъюгат сульфонамида формулы (I) и аналог инсулина. Способ необязательно включает: e) выделение конъюгата сульфонамида формулы (I) и аналога инсулина из раствора, полученного на d) или d.2).

В этом способе активирующая группа R^x сульфонамида формулы (Aa) необязательно выбрана из группы, состоящей из 7-азабензотриазольной (необязательно полученной из HATU или HBTU), 4-нитробензольной и N-сукцинимидильной группы, где R^x необязательно представляет собой N-сукцинимидильную группу.

В одном варианте этого способа водный раствор предшественника аналога инсулина согласно b) содержит спирт, который выбран из группы, состоящей из C1-C4-моноспиртов и смесей двух или более из них, или из группы, состоящей из метанола, этанола, пропан-2-ола, пропан-1-ола, бутан-1-ола и смесей двух или более из них, или из группы, состоящей из этанола, пропан-2-ола, пропан-1-ола и смесей двух или более из них. Спирт необязательно присутствует в водном растворе в количестве в диапазоне от 0,0001 до 35% по объему, или в диапазоне от 0,001 до 30% по объему, или в диапазоне от 0,01 до 25% по объему, или в диапазоне от 0,1 до 20% по объему, в каждом случае в расчете на общий объем воды и спирта. В этом способе ферментативное расщепление согласно d.2) включает применение по меньшей мере одного фермента, выбранного из группы, состоящей из трипсина, протеазы TEV (протеазы вируса гравировки табака) и смесей двух или более из них. В этом способе аналог инсулина представляет собой аналог инсулина, описанный в данном документе выше. В этом способе сульфонамид формулы (I) ковалентно связан с аналогом инсулина и его предшественником соответственно с помощью амидной связи C(=O)-NH-, образованной между -C(=O)-O(R³) сульфонамида формулы (I) и свободной аминогруппой аналога инсулина и его предшественника соответственно, где свободная аминогруппа аналога инсулина и его предшественника соответственно необязательно представляет собой аминогруппу лизина, содержащегося в аналоге инсулина и его предшественнике соответственно, или концевого лизина, или лизина, присутствующего на С-конце аналога инсулина и его предшественника соответственно, или лизина, присутствующего на С-конце B-цепи.

В данном документе предусмотрены конъюгаты, содержащие сульфонамид формулы (I) и активный фармацевтический ингредиент или диагностическое соединение, полученные или получаемые с помощью способов, описанных выше.

В данном документе предусмотрены фармацевтические композиции, содержащие конъюгат, содержащий сульфонамид формулы (I) и активный фармацевтический ингредиент или диагностическое соединение, описанные выше, в фармацевтически или диагностически эффективном количестве.

В данном документе предусмотрены конъюгаты, содержащие сульфонамид формулы (I) и активный фармацевтический ингредиент, описанный выше, для применения в качестве лекарственного препарата.

Один вариант осуществления относится к конъюгату, содержащему сульфонамид формулы (I) и активный фармацевтический ингредиент, описанные выше, для применения в качестве лекарственного препарата для лечения заболевания, выбранного из группы, состоящей из гестационного сахарного диабета, сахарного диабета 1 типа, сахарного диабета 2 типа и гипергликемии, и/или для снижения уровней глюкозы в крови.

В данном документе предусмотрены способы лечения пациента, страдающего заболеванием, выбранным из группы, состоящей из гестационного сахарного диабета, сахарного диабета 1 типа, сахарного диабета 2 типа и гипергликемии, и/или нуждающегося в снижении уровней глюкозы в крови; включающие введение терапевтически эффективного количества конъюгата, содержащего сульфонамид формулы (I) и активный фармацевтический ингредиент, описанные выше.

В данном документе предусмотрены пути применения конъюгата, содержащего сульфонамид формулы (I) и активный фармацевтический ингредиент, описанные выше, для производства лекарственного препарата для лечения заболевания, выбранного из группы, состоящей из гестационного сахарного диабета, сахарного диабета 1 типа, сахарного диабета 2 типа и гипергликемии, и/или для снижения уровней глюкозы в крови.

В данном документе предусмотрены конъюгаты, содержащие сульфонамид формулы (I) и диагностическое соединение, описанные выше, для применения в качестве диагностического средства.

В данном документе предусмотрены способы диагностики заболевания, например заболевания, выбранного из группы сердечно-сосудистых заболеваний и видов рака, у пациента или для определения риска развития у пациента заболевания, например заболевания, выбранного из группы сердечно-сосудистых заболеваний и видов рака, включающие введение диагностически эффективного количества конъюгата, содержащего сульфонамид формулы (I) и диагностическое соединение, описанные выше.

В данном документе предусмотрены пути применения конъюгата, содержащего сульфонамид формулы (I) и диагностическое соединение, описанные выше, для производства диагностического средства для диагностики заболевания, например заболевания, выбранного из группы сердечно-сосудистых заболеваний и видов рака.

Настоящее изобретение дополнительно проиллюстрировано следующими вариантами осуществления и комбинациями вариантов осуществления, указанными с помощью соответствующих зависимостей и обратных ссылок. В частности, следует отметить, что в каждом случае, когда упоминается диапазон вариантов осуществления, например, в контексте такого термина, как "... согласно любому из вариантов осуществления 1-4", подразумевается, что каждый вариант осуществления в этом диапазоне в явной форме раскрыт для специалиста, т. е. формулировка этого термина должна пониматься специалистом как синоним выражения "… согласно любому из вариантов осуществления 1, 2, 3 и 4".

1. Сульфонамид формулы (А):

, где:

A выбран из группы, состоящей из атома кислорода, группы -CH₂CH₂-, группы -OCH₂- и группы -CH₂O-;

E представляет собой группу -C₆H₃R-, при этом R представляет собой атом водорода или атом галогена, где атом галогена выбран из группы, состоящей из атомов фтора, хлора, брома и йода;

X представляет собой атом азота или группу -CH-;

m представляет собой целое число в диапазоне от 5 до 17;

n равняется нулю или представляет собой целое число в диапазоне от 1 до 3;

p равняется нулю или 1;

q равняется нулю или 1;

r представляет собой целое число в диапазоне от 1 до 6;

s равняется нулю или 1;

t равняется нулю или 1;

R¹ представляет собой по меньшей мере один остаток, выбранный из группы, состоящей из атома водорода, атома галогена, C1-C3-алкильной группы и галогенированной C1-C3-алкильной группы;

R² представляет собой по меньшей мере один остаток, выбранный из группы, состоящей из атома водорода, атома галогена, C1-C3-алкильной группы и галогенированной C1-C3-алкильной группы;

R^x представляет собой атом водорода или активирующую группу, необязательно активирующую группу, выбранную из группы, состоящей из 7-азабензотриазольной (необязательно полученной из HATU или HBTU), 4-нитробензольной и N-сукцинимидильной группы, где R^x необязательно представляет собой N-сукцинимидильную группу.

2. Сульфонамид согласно варианту осуществления 1, имеющий формулу (A-1):

, где:

E представляет собой группу -C₆H₃R-, при этом R представляет собой атом водорода или атом галогена, где атом галогена выбран из группы, состоящей из атомов фтора, хлора, брома и йода;

X представляет собой атом азота или группу -CH-;

p равняется нулю или 1;

q равняется нулю или 1;

r представляет собой целое число в диапазоне от 1 до 6;

R¹ представляет собой по меньшей мере один остаток, выбранный из группы, состоящей из атома водорода и атома галогена;

R² представляет собой по меньшей мере один остаток, выбранный из группы, состоящей из атома водорода, C1-C3-алкильной группы и галогенированной C1-C3-алкильной группы;

R^x представляет собой атом водорода или активирующую группу, необязательно активирующую группу, выбранную из группы, состоящей из 7-азабензотриазольной (необязательно полученной из HATU или HBTU), 4-нитробензольной и N-сукцинимидильной группы, где R^x необязательно представляет собой N-сукцинимидильную группу; и

при этом m представляет собой целое число в диапазоне от 5 до 15, если p равняется нулю, или m представляет собой целое число в диапазоне от 7 до 15, если p равняется 1.

3. Сульфонамид согласно вариантам осуществления 1 или 2, где R¹ и R² представляют собой атомы водорода.

4. Сульфонамид согласно любому из вариантов осуществления 1-3, где X представляет собой атом азота.

5. Сульфонамид согласно любому из вариантов осуществления 1-4, где группа HOOC-(CH₂)_m-(O)_s-(E)_p-(CH₂)_n-(A)_t- в формуле (A) или группа HOOC-(CH₂)_m-(E)_p-O- в формуле (A-1) находятся в мета- или пара-положении в фенильном кольце Ph по отношению к группе -S(O)₂-.

6. Сульфонамид согласно любому из вариантов осуществления 1-5, где в случае, если p равняется 1, группа HOOC-(CH₂)_m-(O)_s- и группа -(CH₂)_n-(A)_t- находятся в мета- или пара-положении в (E)_p в формуле (A) или группа HOOC-(CH₂)_m- и -O- находятся в мета- или пара-положении в (E)_p в формуле (A-1).

7. Сульфонамид согласно любому из вариантов осуществления 1-6, где q равняется нулю.

8. Сульфонамид согласно любому из вариантов осуществления 1-7, где сульфонамид имеет формулу (A-1-1):

,

где X представляет собой атом азота или группу -CH-; m представляет собой целое число в диапазоне от 7 до 15; r представляет собой целое число в диапазоне от 1 до 6; q равняется нулю или 1; Hal представляет собой атом галогена, выбранный из группы, состоящей из атомов фтора, хлора, брома и йода; R^x представляет собой атом водорода или активирующую группу, необязательно активирующую группу, выбранную из группы, состоящей из 7-азабензотриазольной (необязательно полученной из HATU или HBTU), 4-нитробензольной и N-сукцинимидильной группы, где R^x необязательно представляет собой N-сукцинимидильную группу; и группа HOOC-(CH₂)_m-C₆H₃Hal-O- находится в мета- или пара-положении в фенильном кольце Ph по отношению к группе -S(O)₂-.

9. Сульфонамид согласно любому из вариантов осуществления 1-8, где сульфонамид имеет формулу (A-1-1a):

.

10. Сульфонамид согласно любому из вариантов осуществления 1-7, где сульфонамид имеет формулу (A-1-2):

где X представляет собой атом азота или группу -CH-; m представляет собой целое число в диапазоне от 5 до 15; r представляет собой целое число в диапазоне от 1 до 6; q равняется нулю или 1; и группа HOOC-(CH₂)_m-O- находится в мета- или пара-положении в фенильном кольце Ph по отношению к группе -S(O)₂-.

11. Сульфонамид согласно любому из вариантов осуществления 1-7 или 10, где сульфонамид имеет формулу (A-1-2a):

, или

формулу (A-1-2b):

, или

формулу (A-1-2c):

.

12. Конъюгат, содержащий сульфонамид формулы (I) и активный фармацевтический ингредиент или диагностическое соединение:

, где в сульфонамиде формулы (I):

A выбран из группы, состоящей из атома кислорода, группы -CH₂CH₂-, группы -OCH₂- и группы -CH₂O-;

E представляет собой группу -C₆H₃R-, при этом R представляет собой атом водорода или атом галогена, где атом галогена выбран из группы, состоящей из атомов фтора, хлора, брома и йода, предпочтительно представляет собой атом фтора;

X представляет собой атом азота или группу -CH-;

m представляет собой целое число в диапазоне от 5 до 17;

n равняется нулю или представляет собой целое число в диапазоне от 1 до 3;

p равняется нулю или 1;

q равняется нулю или 1;

r представляет собой целое число в диапазоне от 1 до 6;

s равняется нулю или 1;

t равняется нулю или 1;

R¹ представляет собой по меньшей мере один остаток, выбранный из группы, состоящей из атома водорода, атома галогена, C1-C3-алкильной группы и галогенированной C1-C3-алкильной группы;

R² представляет собой по меньшей мере один остаток, выбранный из группы, состоящей из атома водорода, атома галогена, C1-C3-алкильной группы и галогенированной C1-C3-алкильной группы;

где сульфонамид формулы (I) ковалентно связан с активным фармацевтическим ингредиентом или диагностическим соединением таким образом, что концевая карбоксильная группа "а" сульфонамида формулы (I) ковалентно связана с подходящей функциональной группой фармацевтически активного средства или диагностического соединения.

13. Конъюгат согласно варианту осуществления 12, где активный фармацевтический ингредиент выбран из группы, состоящей из инсулина, аналога инсулина, GLP-1 и аналога GLP-1.

14. Конъюгат согласно вариантам осуществления 12 или 13, где активный фармацевтический ингредиент представляет собой инсулин или аналог инсулина, где аминогруппа пептида, с которой ковалентно связан сульфонамид формулы (I), представляет собой эпсилон-аминогруппу лизина, присутствующего в инсулине или аналоге инсулина, или представляет собой N-концевую аминогруппу B-цепи инсулина или аналога инсулина.

15. Конъюгат согласно варианту осуществления 14, где аминогруппа пептида, с которой ковалентно связан сульфонамид формулы (I), представляет собой эпсилон-аминогруппу лизина, присутствующего в положениях B26-B29 B-цепи человеческого инсулина или аналога человеческого инсулина.

16. Способ получения конъюгата, содержащего сульфонамид формулы (I) и активный фармацевтический ингредиент:

, где в сульфонамиде формулы (I):

A выбран из группы, состоящей из атома кислорода, группы -CH₂CH₂-, группы -OCH₂- и группы -CH₂O-;

E представляет собой группу -C₆H₃R-, при этом R представляет собой атом водорода или атом галогена, где атом галогена выбран из группы, состоящей из атомов фтора, хлора, брома и йода, предпочтительно представляет собой атом фтора;

X представляет собой атом азота или группу -CH-;

m представляет собой целое число в диапазоне от 5 до 17;

n равняется нулю или представляет собой целое число в диапазоне от 1 до 3;

p равняется нулю или 1;

q равняется нулю или 1;

r представляет собой целое число в диапазоне от 1 до 6;

s равняется нулю или 1;

t равняется нулю или 1;

R¹ представляет собой по меньшей мере один остаток, выбранный из группы, состоящей из атома водорода, атома галогена, C1-C3-алкильной группы и галогенированной C1-C3-алкильной группы;

R² представляет собой по меньшей мере один остаток, выбранный из группы, состоящей из атома водорода, атома галогена, C1-C3-алкильной группы и галогенированной C1-C3-алкильной группы;

где сульфонамид формулы (I) ковалентно связан с активным фармацевтическим ингредиентом таким образом, что концевая карбоксильная группа "а" сульфонамида формулы (I) ковалентно связана с аминогруппой активного фармацевтического ингредиента;

включающий:

(а) получение сульфонамида формулы (Aa):

,

где X, Y, A, E, R¹, R² и индексы m, n, p, q, r, s, t имеют значения, указанные в варианте осуществления 1, R^x представляет собой атом водорода или активирующую группу, предпочтительно активирующую группу, выбранную из группы, состоящей из 7-азабензотриазольной (предпочтительно полученной из HATU или HBTU), 4-нитробензольной и N-сукцинимидильной группы, где R^x предпочтительно представляет собой N-сукцинимидильную группу; и R³ представляет собой защитную группу или атом водорода, предпочтительно атом водорода; и активного фармацевтического ингредиента, который имеет защитную группу или не имеет защитной группы на C-конце;

(b) осуществление реакции сульфонамида формулы (Aa) и активного фармацевтического ингредиента, который имеет защитную группу или не имеет защитной группы на C-конце, в условиях, подходящих для образования амидной связи между свободной или активированной, предпочтительно активированной, карбоксильной группой "a" сульфонамида формулы (Aa) и аминогруппой активного фармацевтического ингредиента, который имеет защитную группу или не имеет защитной группы на C-конце;

(c) необязательно удаление одной или обеих защитных групп.

17. Конъюгат, содержащий сульфонамид формулы (I) и активный фармацевтический ингредиент, полученный или получаемый с помощью способа согласно варианту осуществления 16.

18. Фармацевтическая композиция, содержащая конъюгат, содержащий сульфонамид формулы (I) и активный фармацевтический ингредиент или диагностическое соединение, согласно любому из вариантов осуществления 12-15 или согласно варианту осуществления 17 в фармацевтически или диагностически эффективном количестве.

19. Конъюгат, содержащий сульфонамид формулы (I) и активный фармацевтический ингредиент, согласно любому из вариантов осуществления 12-15 или согласно варианту осуществления 17 для применения в качестве лекарственного препарата.

20. Конъюгат, содержащий сульфонамид формулы (I) и активный фармацевтический ингредиент, согласно любому из вариантов осуществления 12-15 или согласно варианту осуществления 17 для применения в качестве лекарственного препарата для лечения заболевания, выбранного из группы, состоящей из гестационного сахарного диабета, сахарного диабета 1 типа, сахарного диабета 2 типа и гипергликемии, и/или для снижения уровней глюкозы в крови.

21. Конъюгат, содержащий сульфонамид формулы (I) и диагностическое соединение, согласно любому из вариантов осуществления 12-15 для применения в качестве диагностического средства.

Настоящее изобретение дополнительно проиллюстрировано следующими примерами.

Примеры

1. Список используемых сокращений

Ac Ацетил Boc Трет-бутилоксикарбонил DCM Дихлорметан DIAD Диизопропилазодикарбоксилат DIPEA N, N-диизопропилэтиламин DMAP 4-диметиламинопиридин DMF Диметилформамид DMSO Диметилсульфоксид EA Этилацетат HMPA Гексаметилфосфорамид HPLC Высокоэффективная жидкостная хроматография LC Жидкостная хроматография LCMS Жидкостная хроматография с масс-спектрометрией MeCN MeCN NMM N-метилморфолин NMP N-метил-2-пирролидон PE Петролейный эфир RP Обращенная фаза RT Комнатная температура (25°C) TEA Триэтиламин TEMPO 2,2,6,6-Тетраметилпиперидин-N-оксид TFA Трифторуксусная кислота TFAA Трифторуксусный ангидрид TMS Триметилсилил Ts Тозил TSTU Тетрафторборат O-(N-сукцинимидил)-N, N,N, N-тетраметилурония

Общие способы, подходящие для получения соединений формулы (A), описаны ниже. Соединения формулы I были получены с помощью различных химических способов. Группы и индексы, упомянутые в следующих способах, особенно на схемах, имеют вышеупомянутые значения, указанные для формулы (I), если они в явной форме не определены иначе.

2. Общий синтез соединений формулы (A)

Соединения формулы (A) синтезировали, начиная с соответствующего промежуточного соединения I (схема 1). После активации с помощью TSTU промежуточное соединение I подвергали реакции сочетания с аминокислотой (4) (стадия 3) либо с соединением (2) (стадия 2) с получением (3) и (6) соответственно. В случае использования на стадии 3 алкилового сложного эфира (R=алкил) осуществляли омыление с помощью LiOH. Обе карбоновые кислоты (6) и (7) активировали с помощью TSTU и подвергали реакции сочетания с (2) с получением (3). Для завершения синтеза соединений формулы (I) группу трет-бутилового сложного эфира (3) отщепляли на заключительной стадии 7 посредством обработки с помощью CF₃CO₂H. Синтез промежуточного соединения I показан на схеме 2.

2.1 Общий синтез промежуточного соединения I

Промежуточное соединение I синтезировали, как показано на схеме 2. Начиная с бромида I или тозилата I, осуществляли алкилирование промежуточного соединения III в присутствии K₂CO₃ (стадия 8). В качестве альтернативы (8) выделяли после последовательности реакций, начиная с реакции Соногаширы между алкином I и промежуточным соединением II (стадия 11) с последующей гидрогенизацией полученного (11) в атмосфере водорода, катализируемой палладием и платиной соответственно (стадия 12). Затем (8) конденсировали с 2-хлорпиридином (9) (стадия 9) в реакции, катализируемой палладием, либо подвергали термической конденсации с 2-хлорпиримидином (10) (стадия 10). В обоих случаях алкиловый сложный эфир затем гидролизовали с помощью LiOH с получением требуемого промежуточного соединения I.

2.2 Общий синтез промежуточного соединения II

Как показано на схеме 3, промежуточное соединение II выделяли после реакции Мицунобу между фенолом (13) и спиртом (12) (стадия 13). В качестве альтернативы промежуточное соединение II синтезировали посредством алкилирования фенола (13) (стадия 14) либо фенола (15) (стадия 15) в присутствии K₂CO₃. Подходящие алкилирующие средства представляли собой (14) и (16) соответственно. Нуклеофильное замещение фторида (18) фенолом (17) в ароматическом ядре также приводило к получению промежуточного соединения II (стадия 16).

Схема 3

2.3 Общий синтез промежуточного соединения III

Промежуточное соединение III получали после линейной последовательности реакций, описанной на схеме 4. Начиная с алкилирования алкина (20) бромидом (19), выделяли алкин с защитной группой TMS (21). Защитную группу в (21) удаляли в основных условиях с использованием NaOH. Последующая реакция Соногаширы между выделенным алкином (22) и соответствующим ароматическим галогенидом (23) (стадия 19) приводила к получению (24). Подходящая защитная группа для (24) представляла собой, например, ацетил (PG=Ac), который отщеплялся при обработке с помощью NaOH (стадия 20). Заключительная стадия 21 гидрогенизации катализировалась палладием или платиной в атмосфере H₂ с получением требуемого промежуточного соединения III.

2.4 Общий синтез алкина I и бромида I

Исходные вещества бромид I и алкин I синтезировали, как показано на схеме 5. Для алкина I использовали два разных пути синтеза. Карбоновую кислоту (28) выделяли после окисления спирта (29), при этом указанное окисление осуществляли с помощью смеси NaOCl и NaClO₂ в присутствии каталитического количества TEMPO (стадия 24), либо посредством последовательности реакций алкилирования/удаления защитной группы бромида (26). Для алкилирования использовали реагент (20). Затем выделенный продукт (27) обрабатывали с помощью NaOH для отщепления защитной группы TMS. Необходимое добавление к карбоновой кислоте (28) защитной группы, представляющей собой группу трет-бутилового сложного эфира, с получением требуемого алкина I осуществляли после активации с помощью (CF₃CO)₂O и реакции с трет-бутил-OH.

Для синтеза бромида I использовалась аналогичная последовательность, описанная для превращения (29) в алкин I (стадии 24 и 25). Окисление спирта (30) и последующее добавление защитной группы к полученной карбоновой кислоте (31) приводили к получению требуемого бромида I.

Тозилат I можно синтезировать посредством тозилирования спирта (33) (стадия 29). (33) выделяли после восстановления карбоновой кислоты (32), которую переносили в смешанный ангидрид in situ и затем восстанавливали с помощью NaBH₄ (стадия 28).

Схема 5

2.5 Примеры для синтеза алкинов I и бромидов I согласно схеме 5

2.5.1 Синтез 12-бромдодекановой кислоты

К раствору 12-бромдодекан-1-ола (20 г, 75,4 ммоль) и TEMPO (5,9 г, 37,7 ммоль) в CH₃CN (400 мл) и буферном растворе с pH 4 (60 мл) одновременно добавляли раствор NaClO₂ (37,5 г, 414,8 ммоль) в H₂O (60 мл) и 10% раствор NaOCl (28 г, 37,7 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при к. т. в течение ночи. Смесь разбавляли с помощью EA (1200 мл), промывали водой (1000 мл) и солевым раствором, высушивали над Na₂SO₄ и концентрировали под вакуумом с получением требуемого продукта 12-бромдодекановой кислоты (20 г, 71,6 ммоль, выход 95%) в виде желтого твердого вещества.

¹H-ЯМР (400 MГц, DMSO) δ 11,96 (s, 1H), 3,52 (t, J=6,6 Гц, 2H), 2,18 (t, J=7,2 Гц, 2H), 1,85-1,72 (m, 2H), 1,55-1,43 (m, 2H), 1,37 (s, 2H), 1,21 (d, J=32,6 Гц, 12H).

Следующие соединения синтезировали соответственно:

14-бромтетрадекановая кислота

2.5.2 Синтез 14-(триметилсилил)тетрадец-13-иновой кислоты

К смеси этинилтриметилсилана (63,3 г, 644,7 ммоль) в THF (300 мл) добавляли n-BuLi (2,5 M в гексане) (258 мл, 644,7 ммоль) при -78^oC в атмосфере N₂, через 10 мин. добавляли HMPA (115,5 г, 644,7 ммоль), и смесь нагревали до 0^oC в течение 30 мин. Затем добавляли 12-бромдодекановую кислоту (30 г, 107,45 ммоль) в THF (300 мл). Затем смесь перемешивали при к. т. в течение ночи. В смесь медленно добавляли воду (1200 мл) при 0°C, затем значение pH доводили до 3 водным раствором HCl, экстрагировали с помощью EA (800 мл). Органическую фазу промывали солевым раствором, высушивали над Na₂SO₄, концентрировали под вакуумом с получением неочищенного продукта 14-(триметилсилил)тетрадец-13-иновой кислоты (35 г) в виде коричневого масла и использовали на следующей стадии.

Следующие соединения синтезировали соответственно:

18-триметилсилилокта-дец-17-иновая кислота 12-триметилсилил-додец-11-иновая кислота 8-триметилсилилокт-7-иновая кислота

2.5.3 Синтез тетрадец-13-иновой кислоты

К смеси 14-(триметилсилил)тетрадец-13-иновой кислоты (35 г, 107,45 ммоль) в H₂O (150 мл) и THF (150 мл) добавляли NaOH (8,6 г, 214,9 ммоль). Затем смесь перемешивали при к. т. в течение 3 ч. Затем значение pH доводили до 4 водным раствором HCl, экстрагировали с помощью ЕА (300 мл*2). Органические фазы промывали солевым раствором, высушивали над Na₂SO₄, концентрировали под вакуумом. Неочищенный продукт очищали посредством хроматографии на силикагеле (PE:EA=4:1) с получением требуемого продукта тетрадец-13-иновой кислоты (23 г, 102,5 ммоль, выход после 2 стадий: 95%) в виде желтого твердого вещества.

¹H-ЯМР (400 MГц, DMSO) δ 11,96 (s, 1H), 2,73 (s, 1H), 2,17 (dd, J=16,3, 8,9 Гц, 4H), 1,51-1,21 (m, 18H).

Следующие соединения синтезировали соответственно:

октадец-17-иновая кислота додец-11-иновая кислота окт-7-иновая кислота

2.5.4 Синтез дец-9-иновой кислоты

К раствору дец-9-ин-1-ола (15 г, 97,4 ммоль) и TEMPO (7,6 г, 48,7 ммоль) в CH₃CN (300 мл) и буферном растворе с pH 4 (75 мл) одновременно добавляли раствор NaClO₂ (48,2 г, 536 ммоль) и NaOCl (36,0 г, 48,7 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при к. т. в течение ночи, разбавляли с помощью ЕА (900 мл), промывали водой (900 мл) и солевым раствором, высушивали над Na₂SO₄, концентрировали под вакуумом. Неочищенный продукт очищали посредством хроматографии на силикагеле (PE/EA=1/1) с получением требуемой дец-9-иновой кислоты (20 г, неочищенный продукт) в виде бесцветного масла.

¹H-ЯМР (400 MГц, CDCl₃) δ 2,36 (t, J=7,3 Гц, 2H), 2,18 (td, J=6,9, 2,3 Гц, 2H), 1,93 (t, J=2,3 Гц, 1H), 1,72-1,59 (m, 2H), 1,54 (td, J=14,1, 7,2 Гц, 2H), 1,48-1,30 (m, 6H) ppm.

Следующие соединения синтезировали соответственно:

гексадец-15-иновая кислота

2.5.5 Синтез трет-бутилтетрадец-13-иноата

К смеси тетрадец-13-иновой кислоты (23 г, 102,5 ммоль) в t-BuOH (200 мл) добавляли (Boc)₂O (33,6 г, 153,8 ммоль) и DMAP (3,7 г, 30,7 ммоль). Затем смесь перемешивали при к. т. в течение ночи. Растворитель удаляли под вакуумом. В смесь добавляли воду (400 мл), и экстрагировали с помощью ЕА (400 мл). Органическую фазу промывали солевым раствором, высушивали над Na₂SO₄, фильтровали и концентрировали. Остаток очищали посредством хроматографии на силикагеле (PE:EA=30:1) с получением требуемого продукта трет-бутилтетрадец-13-иноата (23,5 г, 83,8 ммоль, выход 82%) в виде желтой жидкости.

¹H-ЯМР (400 MГц, DMSO) δ 2,72 (s, 1H), 2,15 (d, J=8,4 Гц, 4H), 1,49-1,21 (m, 27H).

Следующие соединения синтезировали соответственно:

трет-бутилоктадец-17-иноат трет-бутилдодец-11-иноат трет-бутилгексадец-15-иноат трет-бутилокт-7-иноат трет-бутилдец-9-иноат

2.5.6 Синтез трет-бутил-6-бромгексаноата

6-Бромгексановую кислоту (6,0 г, 31 ммоль), TFAA (26,0 г, 124 ммоль) добавляли к THF (60 мл), смесь подвергали реакции при к. т. в течение 1 ч. Затем к смеси добавляли трет-бутил-OH (30 мл) и перемешивали в течение 16 ч. при к. т. Затем pH реакционной смеси доводили до pH=8 с помощью раствора NaHCO₃, смесь экстрагировали с помощью EA (150 мл*3), высушивали над Na₂SO₄, концентрировали с получением целевого соединения трет-бутил-6-бромгексаноата (7,6 г, 30,4 ммоль, выход 98%).

¹H-ЯМР (400 MГц, DMSO) δ 3,52 (t, J=6,6 Гц, 2H), 2,20 (dd, J=15,0, 7,8 Гц, 2H), 1,85-1,74 (m, 2H), 1,52 (ddd, J=19,3, 10,9, 5,7 Гц, 2H), 1,44-1,32 (m, 9H).

2.5.6 Синтез тозилатов I

2.5.7 Синтез трет-бутил-18-гидроксиоктадеканоата

К раствору 18-трет-бутокси-18-оксооктадекановой кислоты (5 г, 13,5 ммоль) в THF (150 мл) добавляли N-метилморфолин (1638 мг, 16,5 ммоль). Смесь охлаждали до -25°C перед добавлением по каплям этилхлорформиата (1277 мг, 13,5 ммоль). Смесь перемешивали при -25°C в течение 20 минут, и твердое вещество удаляли посредством фильтрации. Раствор осторожно добавляли к раствору NaBH₄ (770 мг, 20,25 ммоль) в воде (15 мл) при 0°C. Смесь перемешивали в течение 1 часа при комнатной температуре. THF удаляли под вакуумом, и водную фазу экстрагировали с помощью ЕА (3 × 50 мл). Объединенные органические фазы высушивали над MgSO₄ и концентрировали под вакуумом с получением трет-бутил-18-гидроксиоктадеканоата в виде белого твердого вещества (4,7 г, выход 99,8%).

¹H-ЯМР (400 MГц, CDCl₃) δ 3,63 (t, J=6,6 Гц, 2H), 2,19 (t, J=7,5 Гц, 2H), 1,57 (dd, J=13,0, 6,5 Гц, 4H), 1,43 (d, J=3,9 Гц, 9H), 1,38-1,20 (m, 27H).

Следующие соединения синтезировали соответственно:

трет-бутил-20-гидроксиэйкозаноат

2.5.8 Синтез трет-бутил-18-(п-толилсульфонилокси)октадеканоата

К раствору трет-бутил-18-гидроксиоктадеканоата (4700 мг, 13,2 ммоль) и TsCl (2508 мг, 13,2 ммоль) в DCM (100 мл) добавляли TEA (400 мг, 39,6 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Добавляли воду (50 мл), и экстрагировали с помощью DCM (50 мл*2). Объединенную органическую фазу промывали солевым раствором (100 мл), высушивали над Na₂SO₄, фильтровали и концентрировали. Неочищенный продукт очищали на колонке с силикагелем (EA/н-гексан=1:20) с получением трет-бутил-18-(п-толилсульфонилокси)октадеканоата (4,5 г, выход 67%).

¹H-ЯМР (400 MГц, CDCl₃) δ 7,79 (d, J=8,2 Гц, 2H), 7,34 (d, J=8,1 Гц, 2H), 4,02 (t, J=6,5 Гц, 2H), 2,45 (s, 3H), 2,20 (t, J=7,5 Гц, 2H), 1,69-1,57 (m, 4H), 1,44 (s, 9H), 1,25 (t, J=12,1 Гц, 24H).

трет-бутил-12-бромдодеканоат трет-бутил-14-бромтетрадеканоат трет-бутил-16-бромгексадеканоат

Следующие соединения синтезировали соответственно:

трет-бутил-20-(п-толилсульфонилокси)эйкозаноат

2.6 Примеры для синтеза промежуточных соединений III согласно схеме 4

2.6.1 Синтез 4-((триметилсилил)этинил)бензолсульфонамида

Смесь 4-бромбензолсульфонамида (61 г, 260 ммоль), триметилсилилацетилена (38,2 г, 0,09 моль), тетракис(трифенилфосфин)палладия (7,5 г, 6,5 ммоль) и йодида меди (2,5 г, 13 ммоль) в триэтиламине (500 мл) нагревали до 80^oC в атмосфере азота в течение 8 ч. Смесь концентрировали in vacuo и экстрагировали с помощью ЕА (300 мл). Объединенные органические слои высушивали (Na₂SO₄) и концентрировали при пониженном давлении. Неочищенный продукт очищали посредством хроматографии на силикагеле (элюирование с помощью 70% DCM в PE) с получением 4-((триметилсилил)этинил)бензолсульфонамида (50 г, 75%).

Способ LC с масс-спектрометрией: подвижная фаза: A=10 мМ TFA/H₂O, B=MeCN; градиент: B=5% - 95% за 1,5 мин.; скорость потока: 2,0 мл/мин.; колонка: Xbridge-C₁₈, 50 × 4,6 мм, 3,5 мкм. Чистота по LC: 90% (214 нм); масс-спектрометрия: обнаружен пик 254,0 (M+H)⁺ в момент 1,98 мин.

2.6.2 Синтез 4-этинилбензолсульфонамида

4-((Триметилсилил)этинил)бензолсульфонамид (40 г, 158 ммоль), K₂CO₃ (2,2 г, 15,8 ммоль) и метанол (400 мл) перемешивали при к. т. в течение 12 ч. После завершения реакции (контролируемой посредством LCMS) реакционную смесь разбавляли водой (200 мл) и экстрагировали с помощью ЕА (2 × 200 мл). Объединенные органические слои высушивали (Na₂SO₄) и концентрировали при пониженном давлении. Неочищенный продукт очищали посредством хроматографии на силикагеле (элюирование с помощью 100% DCM в PE) с получением 4-этинилбензолсульфонамида (22 г, 77%).

Способ LC с масс-спектрометрией: подвижная фаза: A=10 мМ TFA/H₂O, B=MeCN; градиент: B=5% - 95% за 1,5 мин.; скорость потока: 2,0 мл/мин.; колонка: Xbridge-C₁₈, 50 × 4,6 мм, 3,5 мкм. Чистота по LC: 90% (214 нм); масс-спектрометрия: обнаружен пик 182,1 (M+H) ⁺ в момент 1,65 мин.

2.6.3 Синтез 4-((4-сульфамоилфенил)этинил)фенилацетата

К смеси 4-этинилбензолсульфонамида (15 г, 83 ммоль) в DMF (150 мл) добавляли Pd(PPh₃)₂Cl₂ (5,8 г, 8,3 ммоль), CuI (1,6 г, 8,3 ммоль), Et₃N (25 г, 249 ммоль) и (4-йодфенил)ацетат (27 г, 103 ммоль). Колбу опорожняли и заполняли N₂. Затем смесь перемешивали при к. т. в течение ночи. В смесь добавляли воду (200 мл), посредством фильтрования с отсасыванием и высушивания на воздухе получали 4-((4-сульфамоилфенил)этинил)фенилацетат в виде коричневого твердого вещества (18 г, 70%).

Способ LC с масс-спектрометрией: подвижная фаза: A=10 мМ TFA/H₂O, B=MeCN; градиент: B=5% - 95% за 1,5 мин.; скорость потока: 2,0 мл/мин.; колонка: Xbridge-C₁₈, 50 × 4,6 мм, 3,5 мкм. Чистота по LC: 90% (214 нм); масс-спектрометрия: обнаружен пик 338 (M+Na)⁺ в момент 1,88 мин.

2.6.4 Синтез 4-((4-гидроксифенил)этинил)бензолсульфонамида

К раствору 4-((4-сульфамоилфенил)этинил)фенилацетата (18 г, 57 ммоль) в THF (60 мл), MeOH (60 мл) и H₂O (30 мл) добавляли NaOH (4,5 г, 114 ммоль) при 0^oC. Смесь перемешивали при к. т. в течение 2 ч. После завершения реакции (контролируемой посредством LCMS) раствор разбавляли с помощью EA (50 мл) и промывали водой (20 мл) и насыщенным водным NaCl, высушивали над MgSO₄. Фильтрат концентрировали in vacuo с получением неочищенного продукта. Неочищенный продукт суспендировали с помощью DCM. Посредством фильтрования с отсасыванием и высушивания на воздухе получали 4-((4-гидроксифенил)этинил)бензолсульфонамид в виде коричневого твердого вещества (10,9 г, 70%).

Способ LC с масс-спектрометрией: подвижная фаза: A=10 мМ TFA/H₂O, B=MeCN; градиент: B=5% - 95% за 1,5 мин.; скорость потока: 2,0 мл/мин.; колонка: Xbridge-C₁₈, 50 × 4,6 мм, 3,5 мкм. Чистота по LC: 95% (214 нм); масс-спектрометрия: обнаружен пик 296,1 (M+Na)⁺ в момент 1,75 мин.

2.6.5 Синтез 4-(4-гидроксифенэтил)бензолсульфонамида

К раствору 4-((4-гидроксифенил)этинил)бензолсульфонамида (10,9 г, 40 ммоль) в 40 мл THF и 40 мл MeOH добавляли PtO₂ (1 г). Реакционную смесь перемешивали при к. т. в атмосфере H₂ в течение 24 ч. После завершения реакции (контролируемой посредством LCMS) смесь затем фильтровали. Фильтрат концентрировали in vacuo с получением 4-(4-гидроксифенэтил)бензолсульфонамида (9,5 г, 86%).

Способ LC с масс-спектрометрией: подвижная фаза: A=10 мМ TFA/H₂O, B=MeCN; градиент: B=5% - 95% за 1,5 мин.; скорость потока: 2,0 мл/мин.; колонка: Xbridge-C₁₈, 50 × 4,6 мм, 3,5 мкм. Чистота по LC: 100% (214 нм); масс-спектрометрия: обнаружен пик 278,1 (M+H) ⁺ в момент 1,67 мин.

¹H-ЯМР (400 MГц, DMSO) δ 9,14 (s, 1H), 7,71 (d, J=8,3 Гц, 2H), 7,38 (d, J=8,3 Гц, 2H), 7,26 (s, 2H), 7,00 (d, J=8,4 Гц, 2H), 6,72-6,60 (m, 2H), 2,96-2,84 (dd, J=9,2, 6,2 Гц, 2H), 2,77 (dd, J=9,2, 6,3 Гц, 2H).

2.7 Примеры для синтеза промежуточных соединений II согласно схеме 3

2.7.1 Синтез 4-(3-бром-4-фторфенокси)бензолсульфонамида

Смесь 3-бром-4-фторфенола (12,8 г, 66,8 ммоль), 4-фторбензолсульфонамида (9,00 г, 51,4 ммоль) и K₂CO₃ (14,2 г, 103 ммоль) в NMP (50 мл) перемешивали при 190^oC в течение 5 ч. Реакционную смесь разбавляли с помощью ЕА (500 мл), промывали водой (50 мл), солевым раствором (50 мл*3), высушивали над Na₂SO₄, фильтровали и концентрировали. Остаток очищали посредством флэш-хроматографии на силикагеле (элюирование с помощью PE/EA=3/1) с получением 4-(3-бром-4-фторфенокси)бензолсульфонамида в виде белого твердого вещества (10,8 г, 31,3 ммоль, выход 61%).

Способ LC с масс-спектрометрией: подвижная фаза: A=2,5 мМ TFA/H₂O, B=2,5 мМ TFA/MeCN; градиент: B=10% - 95% за 1,0 мин.; скорость потока: 1,5 мл/мин.; колонка: Xbridge-C₁₈, 30 × 4,6 мм, 2,5 мкм. Чистота по LC (требуемый продукт): 88% (214 нм); масс-спектрометрия: обнаружен пик 368,0 (M+Na)⁺ в момент 1,74 мин.

Следующие соединения синтезировали соответственно:

4-(4-бромфенокси)бензолсульфонамид

2.7.2 Синтез 4-(4-бромфенэтокси)бензолсульфонамида

К раствору 2-(4-бромфенил)этанола (10 г, 49,8 ммоль), 4-гидроксибензолсульфонамида (8,6 г, 49,8 ммоль) и PPh₃ (14,3 г, 54,795 ммоль) в сухом THF (200 мл) по каплям добавляли DIAD (11,1 г, 54,7 ммоль) при 0^oC. Обеспечивали нагревание реакционной смеси до к. т. с перемешиванием в течение 20 ч. Растворитель удаляли при пониженном давлении, и остаток растворяли в EA (200 мл) и затем промывали водой (50 мл) и солевым раствором (50 мл). Органическую фазу высушивали над Na₂SO₄. После фильтрациирастворитель удаляли при пониженном давлении, и остаток очищали посредством колоночной хроматографии (силикагель, элюирование с помощью EA в РЕ от 0 до 40%) с получением 4-(4-бромфенэтокси)бензолсульфонамида (6,8 г в виде белого твердого вещества) с выходом 39%.

Способ LC с масс-спектрометрией: подвижная фаза: H₂O (0,01% TFA) (A)/MeCN (0,01% TFA) (B); градиент: 5% B в течение 0,2 мин., увеличение до 95% B в течение 1,3 мин.; скорость потока: 1,8 мл/мин.; колонка: SunFire, 50 × 4,6 мм, 3,5 мкм. Чистота по LC: 95% (214 нм); масс-спектрометрия: обнаружен пик 356 (M+H) ⁺ в момент 2,08 мин.

2.7.3 Схема синтеза 4-((4-йодфенокси)метил)бензолсульфонамида

2.7.4 Синтез 4-(бромметил)бензолсульфонамида

Раствор 4-(бромметил)бензолсульфонилхлорида (7 г, 26 ммоль) в THF (80 мл) охлаждали до 0°C, к нему добавляли 28% водный раствор аммиака (6,5 мл), и смесь перемешивали при к. т. в течение 2 ч. Реакционный раствор концентрировали, и добавляли этилацетат (200 мл). Органический слой отделяли, высушивали и концентрировали. Неочищенный 4-(бромметил)бензолсульфонамид использовали непосредственно без дополнительной очистки. (5,5 г, 86%)

Способ LC с масс-спектрометрией: подвижная фаза: A=10 мМ TFA/H₂O, B=MeCN; градиент: B=5% - 95% за 1,5 мин.; скорость потока: 2,0 мл/мин.; колонка: Xbridge-C₁₈, 50 × 4,6 мм, 3,5 мкм. Чистота по LC: 90% (214 нм); масс-спектрометрия: обнаружен пик 250,1 (M+H) ⁺ в момент 1,64 мин.

2.7.5 Синтез 4-((4-йодфенокси)метил)бензолсульфонамида

К смеси 4-(бромметил)бензолсульфонамида (5,5 г, 22 ммоль) в DMF (50 мл) добавляли Cs₂CO₃ (10,7 г, 33 ммоль) и 4-йодфенол (6 г, 27,5 ммоль). Затем смесь перемешивали при к. т. в течение 12 ч. В смесь добавляли воду (200 мл), полученное твердое вещество фильтровали и затем суспендировали с помощью Et₂O (50 мл); посредством фильтрования с отсасыванием и высушивания на воздухе получали требуемый продукт в виде белого твердого вещества (5,5 г, 65%).

Способ LC с масс-спектрометрией: способ: подвижная фаза: A=10 мМ TFA/H₂O, B=MeCN; градиент: B=5% - 95% за 1,5 мин.; скорость потока: 1,8 мл/мин.; колонка: Xbridge-C₁₈, 50×4,6 мм, 3,5 мкм. Чистота по LC: 80% (214 нм); масс-спектрометрия: обнаружен пик 389,7 (M+H)⁺ в момент 1,98 мин.

2.7.6 Синтез 4-(4-бромбензилокси)бензолсульфонамида

К смеси 1-бром-4-(бромметил)бензола (6,5 г, 26 ммоль) в DMF (50 мл) добавляли K₂CO₃ (5,5 г, 40 ммоль) и 4-гидроксибензолсульфонамид (4,5 г, 26 ммоль). Затем смесь перемешивали при 50^oC в течение 2 ч. В смесь добавляли воду (200 мл), твердое вещество фильтровали. Затем твердое вещество суспендировали с помощью PE:EA=1:2 (50 мл), посредством фильтрования с отсасыванием и высушивания на воздухе получали требуемый продукт в виде белого твердого вещества (5,3 г, 60%).

Способ LC с масс-спектрометрией: способ: подвижная фаза: A=10 мМ TFA/H₂O, B=MeCN; градиент: B=5% - 95% за 1,5 мин.; скорость потока: 1,8 мл/мин.; колонка: Xbridge-C₁₈, 50 × 4,6 мм, 3,5 мкм. Чистота по LC: 80% (214 нм); масс-спектрометрия: обнаружен пик 364 (M+Na)⁺ в момент 1,81 мин.

2.8 Примеры для синтеза промежуточных соединений I согласно схеме 2

2.8.1 Синтез трет-бутил-12-(4-сульфамоилфенокси)додеканоата

Смесь трет-бутил-12-бромдодеканоата (6 г, 18 ммоль), 4-гидроксибензолсульфонамида (3 г, 18 ммоль) и K₂CO₃ (5 г, 36 ммоль) в DMF (50 мл) нагревали до 50°C и перемешивали в течение 4 ч. Затем добавляли воду (300 мл). Полученный осадок собирали и высушивали с получением неочищенного трет-бутил-12-(4-сульфамоилфенокси)додеканоата, который суспендировали с помощью EA/PE (1/5, 100 мл) с получением 7 г (93%) 12-(4-сульфамоилфенокси)додеканоата.

Способ LC с масс-спектрометрией: подвижная фаза: A: вода (0,01% TFA), B: MeCN (0,01% TFA). Градиент: 5% B в течение 0,2 мин., увеличение до 95% B в течение 1,3 мин., 95% B в течение 1,5 мин., возврат к 5% B в течение 0,01 мин.; скорость потока: 1,8 мл/мин.; колонка: SunFire, 50*4,6 мм, 3,5 мкм, температура колонки: 50°C. Чистота по LC-MS: 100% (214 нм); масс-спектрометрия: обнаружен пик 450,2 (M+Na)⁺ в момент 2,23 мин.

¹H-ЯМР (400 MГц, CDCl₃) δ 7,83 (t, J=14,8 Гц, 2H), 6,96 (d, J=8,8 Гц, 2H), 4,89 (s, 2H), 4,03 (dt, J=13,0, 6,6 Гц, 2H), 2,20 (t, J=7,5 Гц, 2H), 1,73-1,80 (m, 2H), 1,50-1,57 (m, 2H), 1,40-1,48 (m, 11H), 1,37-1,19 (m, 12H).

Следующие соединения синтезировали соответственно:

трет-бутил-14-(4-сульфамоилфенокси)тетрадеканоат трет-бутил-16-(4-сульфамоилфенокси)гексадеканоат трет-бутил-16-(2-фтор-4-сульфамоилфенокси)гексадеканоат трет-бутил-16-(2,3-дихлор-4-сульфамоилфенокси)гексадеканоат трет-бутил-12-[4-[2-(4-сульфамоилфенил)этил]фенокси]-додеканоат трет-бутил-16-(2-хлор-4-сульфамоилфенокси)гексадеканоат трет-бутил-20-(4-сульфамоилфенокси)эйкозаноат трет-бутил-18-(4-сульфамоилфенокси)октадеканоат трет-бутил-16-(3-сульфамоилфенокси)гексадеканоат трет-бутил-16-(2,5-дихлор-4-сульфамоилфенокси)гексадеканоат

Схема синтеза: синтез 14-(4-сульфамоилфенил)тетрадеканоата

2.8.2 Синтез трет-бутил-14-(4-сульфамоилфенил)тетрадец-13-иноата

К смеси 4-бромбензолсульфонамида (1,6 г, 6,8 ммоль) в DMF (20 мл) добавляли Pd(PPh₃)₂Cl₂ (0,47 г, 0,68 ммоль), CuI (0,13 г, 0,68 ммоль), Et₃N (2 г, 20,33 ммоль) и трет-бутилтетрадец-13-иноат (2,2 г, 7,8 ммоль). Колбу опорожняли и заполняли N₂. Затем смесь перемешивали при 70°C в течение 4 ч. В смесь добавляли воду (80 мл), экстрагировали с помощью EA (80 мл*2). Объединенную органическую фазу промывали солевым раствором, высушивали над Na₂SO₄, концентрировали под вакуумом. Неочищенный продукт очищали посредством хроматографии на силикагеле (PE:EA=4:1) с получением трет-бутил-14-(4-сульфамоилфенил)тетрадец-13-иноата (2,2 г, 5,05 ммоль, выход: 76%) в виде желтого твердого вещества.

Способ LC с масс-спектрометрией: способ: подвижная фаза: A=10 мМ TFA/H₂O, B=MeCN; градиент: B=5% - 95% за 1,5 мин.; скорость потока: 1,8 мл/мин.; колонка: Xbridge-C₁₈, 50×4,6 мм, 3,5 мкм. Чистота по LC: 98% (214 нм); масс-спектрометрия: обнаружен пик 458 (M+H)⁺ в момент 2,37 мин.

Следующие соединения синтезировали соответственно:

трет-бутил-18-(4-сульфамоилфенил)октадец-17-иноат трет-бутил-14-(3-сульфамоилфенил)тетрадец-13-иноат трет-бутил-12-[4-(4-сульфамоилфенокси)фенил]додец-11-иноат трет-бутил-10-[4-[2-(4-сульфамоилфенокси)этил]фенил]дец-9-иноат трет-бутил-8-[4-[(4-сульфамоилфенокси)метил]фенил]окт-7-иноат трет-бутил-14-[4-(4-сульфамоилфенокси)фенил]тетрадец-13-иноат трет-бутил-10-[4-[(4-сульфамоилфенил)метокси]фенил]-дец-9-иноат трет-бутил-16-(4-сульфамоилфенил)гексадец-15-иноат трет-бутил-12-(3-сульфамоилфенил)додец-11-иноат трет-бутил-10-[2-фтор-5-(4-сульфамоилфенокси)фенил]дец-9-иноат трет-бутил-8-[4-[2-(4-сульфамоилфенокси)этил]фенил]окт-7-иноат трет-бутил-14-[4-[(4-сульфамоилфенил)метокси]фенил]-тетрадец-13-иноат трет-бутил-12-[2-фтор-5-(4-сульфамоилфенокси)фенил]додец-11-иноат трет-бутил-12-(4-сульфамоилфенил)додец-11-иноат трет-бутил-14-[2-фтор-5-(4-сульфамоилфенокси)фенил]тетра-дец-13-иноат трет-бутил-18-(3-сульфамоилфенил)октадец-17-иноат трет-бутил-16-[2-фтор-5-(4-сульфамоилфенокси)фенил]гекса-дец-15-иноат трет-бутил-8-[2-фтор-5-(4-сульфамоилфенокси)фенил]окт-7-иноат трет-бутил-10-(4-сульфамоилфенил)дец-9-иноат

2.8.3 Синтез трет-бутил-14-(4-сульфамоилфенил)тетрадеканоата

К смеси трет-бутил-14-(4-сульфамоилфенил)тетрадец-13-иноата (2,2 г, 5,05 ммоль) в THF (30 мл) добавляли PtO₂ (0,23 г, 1,01 ммоль). Колбу опорожняли и заполняли H₂. Затем смесь перемешивали при к. т. в течение ночи. Фильтровали, концентрировали под вакуумом с получением 14-(4-сульфамоилфенил)тетрадеканоата (2 г, 4,55 ммоль, выход: 90%) в виде серого твердого вещества.

Способ LC с масс-спектрометрией: подвижная фаза: A=10 мМ TFA/H₂O, B=MeCN; градиент: B=5% - 95% за 1,5 мин.; скорость потока: 1,8 мл/мин.; колонка: Xbridge-C₁₈, 50 × 4,6 мм, 3,5 мкм. Чистота по LC: 93% (214 нм); масс-спектрометрия: обнаружен пик 462 (M+H)⁺ в момент 2,44 мин.

¹H-ЯМР (400 MГц, DMSO) δ 7,72 (d, J=8,1 Гц, 2H), 7,37 (d, J=8,1 Гц, 2H), 7,26 (s, 2H), 2,63 (t, J=7,6 Гц, 2H), 2,16 (t, J=7,3 Гц, 2H), 1,57 (s, 2H), 1,51-1,43 (m, 2H), 1,38 (s, 9H), 1,25 (d, J=14,5 Гц, 18H).

Следующие соединения синтезировали соответственно:

трет-бутил-18-(4-сульфамоилфенил)октадеканоат трет-бутил-14-(3-сульфамоилфенил)тетрадеканоат трет-бутил-12-[4-(4-сульфамоилфенокси)фенил]-додеканоат трет-бутил-10-[4-[2-(4-сульфамоилфенокси)этил]фенил]-деканоат трет-бутил-8-[4-[(4-сульфамоилфенокси)метил]фенил]-октаноат трет-бутил-14-[4-(4-сульфамоилфенокси)фенил]-тетрадеканоат трет-бутил-10-[4-[(4-сульфамоилфенил)метокси]фенил]-деканоат трет-бутил-16-(4-сульфамоилфенил)гексадеканоат трет-бутил-12-(4-сульфамоилфенил)додеканоат трет-бутил-10-[2-фтор-5-(4-сульфамоилфенокси)фенил]деканоат трет-бутил-12-(3-сульфамоилфенил)додеканоат трет-бутил-14-[4-[(4-сульфамоилфенил)метокси]фенил]-тетрадеканоат трет-бутил-8-[4-[2-(4-сульфамоилфенокси)этил]фенил]-октаноат трет-бутил-18-(3-сульфамоилфенил)октадеканоат трет-бутил-12-[2-фтор-5-(4-сульфамоилфенокси)фенил]-додеканоат трет-бутил-8-[2-фтор-5-(4-сульфамоилфенокси)фенил]октаноат трет-бутил-14-[2-фтор-5-(4-сульфамоилфенокси)фенил]-тетрадеканоат трет-бутил-10-(4-сульфамоилфенил)деканоат трет-бутил-16-[2-фтор-5-(4-сульфамоилфенокси)фенил]-гексадеканоат

2.8.4 Синтез 2-[[4-[3-(12-трет-бутокси-12-оксододецил)-4-фторфенокси]фенил]сульфониламино]пиримидин-5-карбоновой кислоты

Смесь трет-бутил-12-[2-фтор-5-(4-сульфамоилфенокси)фенил]додеканоата (300 мг, 575 мкмоль), этил-2-хлорпиримидин-5-карбоксилата (112 мг, 603 мкмоль) и Cs₂CO₃ (656 мг, 2,01 ммоль) вMeCN (6 мл) нагревали до 60°C и перемешивали в течение 3 ч. (контроль с помощью TLC). Реакционную смесь использовали на следующей стадии омыления без дополнительной очистки.

Суспензию разбавляли диоксаном (6 мл), и добавляли раствор LiOH (37 мг, 1,56 ммоль) в воде (6 мл). Смесь перемешивали при к. т. в течение 16 ч., и добавляли дополнительное количество LiOH (37 мг, 1,56 ммоль). В целом смесь перемешивали при к. т. в течение 36 ч. Суспензию выливали в водный раствор лимонной кислоты (10-процентный, 50 мл). Суспензию фильтровали, и осадок на фильтре промывали водой и высушивали в вакууме. Указанное в заголовке соединение 2-[[4-[3-(12-трет-бутокси-12-оксододецил)-4-фторфенокси]фенил]сульфониламино]пиримидин-5-карбоновую кислоту получали в виде белого твердого вещества (350 мг, количественный выход).

¹H-ЯМР (400,23 MГц, DMSO-d₆) δ ppm 12,2 (bs, 2 H), 8,89 (s, 2 H), 7,99 (d, J=8,93 Гц, 2 H), 7,21 (t, J=9,17 Гц, 1 H), 7,05 (m, 4 H), 2,58 (br t, J=7,46 Гц, 2 H), 2,15 (t, J=7,27 Гц, 2 H), 1,53 (m, 2 H), 1,47 (m, 2 H), 1,38 (s, 9 H), 1,26-1,22 (m, 14 H).

Если требуемый продукт не выпадал в осадок при выливании в водную лимонную кислоту, водный слой экстрагировали этилацетатом, объединенные органические слои высушивали с помощью Na₂SO₄, фильтровали и концентрировали in vacuo. Неочищенные продукты подвергали колоночной хроматографии, используя MeOH/CH₂Cl₂ в качестве элюента.

Следующие соединения синтезировали соответственно:

5-[[4-(12-трет-бутокси-12-оксододекокси)фенил]сульфонил-амино]пиримидин-2-карбоновая кислота 5-[[4-[[4-(10-трет-бутокси-10-оксодецил)фенокси]метил]фенил]-сульфониламино]пиримидин-2-карбоновая кислота 5-[[4-(14-трет-бутокси-14-оксотетрадецил)фенил]сульфонил-амино]пиримидин-2-карбоновая кислота 5-[[4-[4-(14-трет-бутокси-14-оксотетрадецил)фенокси]сульфонил-амино]пиримидин-2-карбоновая кислота 5-[[4-[3-(16-трет-бутокси-16-оксогексадецил)-4-фторфенокси]фенил]сульфонил-амино]пиримидин-2-карбоновая кислота 5-[[3-(14-трет-бутокси-14-оксотетрадецил)фенил]сульфонил-амино]пиримидин-2-карбоновая кислота 5-[[4-[2-[4-(12-трет-бутокси-12-оксододекокси)фенил]этил]фенил]-сульфониламино]пиримидин-2-карбоновая кислота 5-[[4-(18-трет-бутокси-18-оксооктадецил)фенил]сульфонил-амино]пиримидин-2-карбоновая кислота 2-[[4-(16-трет-бутокси-16-оксогексадекокси)фенил]-сульфониламино]-4-метилпиримидин-5-карбоновая кислота 5-[[4-(14-трет-бутокси-14-оксотетрадекокси)фенил]сульфонил-амино]пиримидин-2-карбоновая кислота 2-[[4-(16-трет-бутокси-16-оксогексадекокси)-3-фторфенил]сульфониламино]-пиримидин-5-карбоновая кислота 2-[[4-(16-трет-бутокси-16-оксогексадекокси)-3-хлорфенил]сульфониламино]-пиримидин-5-карбоновая кислота 2-[[4-(16-трет-бутокси-16-оксогексадецил)фенил]сульфонил-амино]пиримидин-5-карбоновая кислота 2-[[4-(12-трет-бутокси-12-оксододецил)фенил]сульфониламино]пиримидин-5-карбоновая кислота 2-[[3-(12-трет-бутокси-12-оксододецил)фенил]сульфонил-амино]пиримидин-5-карбоновая кислота 2-[[3-(18-трет-бутокси-18-оксооктадецил)фенил]сульфонил-амино]пиримидин-5-карбоновая кислота 5-[[4-[2-[4-(10-трет-бутокси-10-оксодецил)фенил]этокси]фенил]-сульфониламино]пиримидин-2-карбоновая кислота 2-[[4-[3-(8-трет-бутокси-8-оксооктил)-4-фторфенокси]фенил]сульфониламино]пиримидин-5-карбоновая кислота 5-[[4-[3-(14-трет-бутокси-14-оксотетрадецил)-4-фторфенокси]фенил]сульфонил-амино]пиримидин-2-карбоновая кислота 2-[[4-[[4-(14-трет-бутокси-14-оксотетрадецил)фенокси]метил]фенил]сульфониламино]пиримидин-5-карбоновая кислота 5-[[4-(16-трет-бутокси-16-оксогексадекокси)фенил]-сульфониламино]пиримидин-2-карбоновая кислота 2-[[4-[3-(10-трет-бутокси-10-оксодецил)-4-фторфенокси]фенил]сульфониламино]пиримидин-5-карбоновая кислота 5-[[4-[[4-(8-трет-бутокси-8-оксооктил)фенил]метокси]фенил]-сульфониламино]пиримидин-2-карбоновая кислота 2-[[4-[2-[4-(8-трет-бутокси-8-оксооктил)фенил]этокси]фенил]-сульфониламино]пиримидин-5-карбоновая кислота 2-[[4-(16-трет-бутокси-16-оксогексадекокси)фенил]-сульфониламино]-4-(трифторметил)пиримидин-5-карбоновая кислота 2-[[4-(18-трет-бутокси-18-оксооктадекокси)фенил]сульфонил-амино]пиримидин-5-карбоновая кислота 2-[[4-(16-трет-бутокси-16-оксогексадекокси)-2,5-дихлорфенил]сульфониламино]-пиримидин-5-карбоновая кислота 2-[[4-(10-трет-бутокси-10-оксодецил)фенил]сульфониламино]-пиримидин-5-карбоновая кислота 2-[[3-(16-трет-бутокси-16-оксогексадекокси)фенил]-сульфониламино]пиримидин-5-карбоновая кислота

2.8.5 Синтез 6-[[4-[3-(12-трет-бутокси-12-оксододецил)-4-фторфенокси]фенил]сульфониламино]пиридин-3-карбоновой кислоты

Смесь трет-бутил-12-[2-фтор-5-(4-сульфамоилфенокси)фенил]додеканоата (300 мг, 575 мкмоль), метил-6-хлорникотиноата (102 мг, 603 мкмоль), Cs₂CO₃ (468 мг, 1,44 ммоль), трис(дибензилиденацетон)дипалладия (26 мг, 29 мкмоль) и 4,5-бис(дифенилфосфино)-9,9-диметилксантена ("Xantphos", 17 мг, 29 мкмоль) в диоксане (6 мл) нагревали до 80°C в атмосфере аргона в течение 3 ч. (контроль с помощью TLC). Реакционную смесь использовали на следующей стадии омыления без дополнительной очистки.

Суспензию разбавляли диоксаном (6 мл), и добавляли раствор LiOH (37 мг, 1,56 ммоль) в воде (6 мл). Смесь перемешивали при к. т. в течение 16 ч., и добавляли дополнительное количество LiOH (37 мг, 1,56 ммоль). В целом смесь перемешивали при к. т. в течение 36 ч. Суспензию выливали в водный раствор лимонной кислоты (10-процентный, 50 мл). Суспензию фильтровали, и осадок на фильтре промывали водой и высушивали в вакууме. Указанное в заголовке соединение 6-[[4-[3-(12-трет-бутокси-12-оксододецил)-4-фторфенокси]фенил]сульфониламино]пиридин-3-карбоновую кислоту получали в виде белого твердого вещества (350 мг, количественный выход).

¹H-ЯМР (400,23 MГц, DMSO-d₆) δ ppm 12,5 (br s, 1H), 8,54 (br s, 1 H), 8,11 (dd, J=8,93, 2,20 Гц, 1 H), 7,91 (br d, J=8,68 Гц, 2 H), 7,80 (m, 1 H), 7,19 (m, 2 H), 7,04 (m, 4 H), 2,58 (br t, J=7,46 Гц, 2 H), 2,15 (t, J=7,27 Гц, 2 H), 1,48 (m, 4 H), 1,38 (s, 9 H), 1,26-1,22 (m, 14 H).

Если требуемый продукт не выпадал в осадок при выливании в водную лимонную кислоту, водный слой экстрагировали этилацетатом, объединенные органические слои высушивали с помощью Na₂SO₄, фильтровали и концентрировали in vacuo. Неочищенные продукты подвергали колоночной хроматографии, используя MeOH/CH₂Cl₂ в качестве элюента.

Следующие соединения синтезировали соответственно:

6-[[4-[4-(12-трет-бутокси-12-оксододецил)фенокси]фенил]-сульфониламино]пиридин-3-карбоновая кислота 6-[[4-(12-трет-бутокси-12-оксододекокси)фенил]сульфонил-амино]пиридин-3-карбоновая кислота 6-[[4-[[4-(10-трет-бутокси-10-оксодецил)фенокси]метил]фенил]-сульфониламино]пиридин-3-карбоновая кислота 6-[[4-[2-[4-(10-трет-бутокси-10-оксодецил)фенил]этокси]фенил]-сульфониламино]пиридин-3-карбоновая кислота 6-[[4-(14-трет-бутокси-14-оксотетрадецил)фенил]сульфонил-амино]пиридин-3-карбоновая кислота 6-[[4-[3-(14-трет-бутокси-14-оксотетрадецил)-4-фторфенокси]фенил]сульфонил-амино]пиридин-3-карбоновая кислота 6-[[4-[3-(16-трет-бутокси-16-оксогексадецил)-4-фторфенокси]фенил]сульфониламино]пиридин-3-карбоновая кислота 6-[[4-(18-трет-бутокси-18-оксооктадецил)фенил]сульфониламино]пиридин-3-карбоновая кислота 6-[[4-(14-трет-бутокси-14-оксотетрадекокси)фенил]сульфонил-амино]пиридин-3-карбоновая кислота 6-[[4-(16-трет-бутокси-16-оксогексадекокси)-2,3-дихлорфенил]сульфониламино]-пиридин-3-карбоновая кислота 6-[[4-(16-трет-бутокси-16-оксогексадекокси)-3-фторфенил]сульфониламино]пиридин-3-карбоновая кислота 6-[[4-[[4-(14-трет-бутокси-14-оксотетрадецил)фенокси]метил]фенил]-сульфониламино]пиридин-3-карбоновая кислота 6-[[4-(16-трет-бутокси-16-оксогексадецил)фенил]сульфонил-амино]пиридин-3-карбоновая кислота 6-[[4-[2-[4-(8-трет-бутокси-8-оксооктил)фенил]этокси]фенил]сульфо-ниламино]пиридин-3-карбоновая кислота 6-[[3-(18-трет-бутокси-18-оксооктадецил)фенил]сульфонил-амино]пиридин-3-карбоновая кислота 6-[[4-(16-трет-бутокси-16-оксогексадекокси)-3-хлорфенил]сульфониламино]пиридин-3-карбоновая кислота 6-[[4-[4-(14-трет-бутокси-14-оксотетрадецил)фенокси]фенил]-сульфониламино]пиридин-3-карбоновая кислота 6-[[4-(16-трет-бутокси-16-оксогексадекокси)фенил]сульфонил-амино]пиридин-3-карбоновая кислота 6-[[4-(10-трет-бутокси-10-оксодекокси)фенил]сульфониламино]-пиридин-3-карбоновая кислота 6-[[4-(18-трет-бутокси-18-оксооктадекокси)фенил]сульфониламино]пиридин-3-карбоновая кислота 6-[[3-(14-трет-бутокси-14-оксотетрадецил)фенил]сульфонил-амино]пиридин-3-карбоновая кислота 6-[[4-[2-[4-(8-трет-бутокси-8-оксооктил)фенил]этокси]фенил]-сульфониламино]пиридин-3-карбоновая кислота 6-[[4-(10-трет-бутокси-10-оксодекокси)фенил]сульфониламино]-пиридин-3-карбоновая кислота 6-[[4-(10-трет-бутокси-10-оксодецил)фенил]сульфониламино]-пиридин-3-карбоновая кислота 6-[[3-(14-трет-бутокси-14-оксотетрадецил)фенил]сульфонил-амино]пиридин-3-карбоновая кислота 6-[[4-(20-трет-бутокси-20-оксоэйкозокси)фенил]сульфониламино]-пиридин-3-карбоновая кислота 6-[[4-(16-трет-бутокси-16-оксогексадекокси)фенил]сульфонил-амино]пиридин-3-карбоновая кислота 6-[[3-(12-трет-бутокси-12-оксододецил)фенил]сульфониламино]-пиридин-3-карбоновая кислота 6-[[4-[2-[4-(12-трет-бутокси-12-оксододекокси)фенил]этил]фенил]-сульфониламино]пиридин-3-карбоновая кислота

2.9 Примеры для синтеза соединений формулы I согласно схеме 1

2.9.1 Синтез 2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[6-[[4-[3-(14-трет-бутокси-14-оксотетрадецил)-4-фторфенокси]фенил]сульфониламино]пиридин-3-карбонил]амино]этокси]этокси]ацетил]амино]этокси]этокси]уксусной кислоты

Смесь 6-[[4-[3-(14-трет-бутокси-14-оксотетрадецил)-4-фторфенокси]фенил]сульфониламино]пиридин-3-карбоновой кислоты (169 мг, 251 мкмоль), TSTU (80 мг, 264 мкмоль) и DIPEA (132 мкл, 97 мг, 1,25 ммоль) в 6 мл THF перемешивали при к. т. в течение 16 ч. Через 16 ч. растворитель удаляли при пониженном давлении, и добавляли раствор [2-(2-{2-[2-(2-аминоэтокси)этокси]ацетиламино}этокси)этокси]уксусной кислоты (85 мг, 277 мкмоль) в 6 мл абсолютного EtOH, и смесь перемешивали при к. т. в течение 16 ч. Летучие компоненты удаляли при пониженном давлении, полученный остаток растворяли в CH₂Cl₂ и промывали водным 10% раствором KHSO₄. Органический слой промывали с помощью воды и солевого раствора, высушивали над безводным Na₂SO₄, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Неочищенный продукт очищали посредством RP-HPLC с получением 2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[6-[[4-[3-(14-трет-бутокси-14-оксотетрадецил)-4-фторфенокси]фенил]сульфониламино]пиридин-3-карбонил]амино]этокси]этокси]ацетил]амино]этокси]этокси]уксусной кислоты (106 мг, 44%).

¹H-ЯМР (400,23 MГц, DMSO-d₆) δ ppm 12,29 (br s, 1 H), 8,52 (m, 2 H), 8,09 (dd, J=8,93, 2,32 Гц, 1 H), 7,89 (d, J=8,80 Гц, 2 H), 7,61 (br t, J=5,69 Гц, 1 H), 7,18 (m, 2 H), 7,03 (m, 4 H), 4,01 (s, 2 H), 3,86 (s, 2 H), 3,20-3,68 (m, 16 H), 2,58 (br t, J=7,52 Гц, 2 H), 2,15 (t, J=7,27 Гц, 2 H), 1,49 (m, 4 H), 1,38 (s, 9 H), 1,25 (m, 18 H).

Следующие соединения синтезировали соответственно:

2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[6-[[4-(14-трет-бутокси-14-оксотетрадецил)фенил]сульфонил-амино]пиридин-3-карбонил]амино]этокси]этокси]-ацетил]амино]этокси]этокси]-уксусная кислота 2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[6-[[4-[3-(16-трет-бутокси-16-оксогексадецил)-4-фторфенокси]фенил]сульфонил-амино]пиридин-3-карбонил]амино]этокси]этокси]ацетил]амино]этокси]этокси]уксусная кислота 2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[6-[[4-(18-трет-бутокси-18-оксооктадецил)фенил]сульфониламино]-пиридин-3-карбонил]амино]этокси]этокси]ацетил]-амино]этокси]этокси]уксусная кислота 2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[6-[[4-[2-[4-(12-трет-бутокси-12-оксододекокси)фенил]этил]фенил]-сульфониламино]пиридин-3-карбонил]амино]этокси]этокси]-ацетил]амино]этокси]этокси]-уксусная кислота 2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[6-[[4-(12-трет-бутокси-12-оксододекокси)фенил]сульфонил-амино]пиридин-3-карбонил]амино]этокси]этокси]ацетил]амино]этокси]этокси]уксусная кислота 2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[6-[[4-(16-трет-бутокси-16-оксогексадекокси)фенил]сульфонил- амино]пиридин-3-карбонил]амино]этокси]этокси]ацетил]-амино]этокси]этокси]уксусная кислота 2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[6-[[3-(14-трет-бутокси-14-оксотетрадецил)фенил]сульфонил-амино]пиридин-3-карбонил]амино]этокси]этокси]-ацетил]амино]этокси]этокси]-уксусная кислота 2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[6-[[4-[4-(12-трет-бутокси-12-оксододецил)фенокси]фенил]-сульфониламино]пиридин-3-карбонил]амино]этокси]этокси]ацетил]амино]этокси]этокси]уксусная кислота 2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[6-[[4-(10-трет-бутокси-10-оксодекокси)фенил]сульфониламино]-пиридин-3-карбонил]амино]этокси]этокси]ацетил]-амино]этокси]этокси]уксусная кислота 2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[6-[[4-[2-[4-(10-трет-бутокси-10-оксодецил)фенил]этокси]фенил]-сульфониламино]пиридин-3-карбонил]амино]этокси]этокси]-ацетил]амино]этокси]этокси]-уксусная кислота 2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[6-[[4-[[4-(10-трет-бутокси-10-оксодецил)фенокси]метил]фенил]-сульфониламино]пиридин-3-карбонил]амино]этокси]этокси]ацетил]амино]этокси]этокси]уксусная кислота 2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[6-[[4-[3-(12-трет-бутокси-12-оксододецил)-4-фторфенокси]фенил]сульфониламино]-пиридин-3-карбонил]амино]этокси]этокси]ацетил]-амино]этокси]этокси]уксусная кислота 2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[5-[[4-(16-трет-бутокси-16-оксогексадекокси)фенил]-сульфониламино]пиримидин-2-карбонил]амино]этокси]этокси]-ацетил]амино]этокси]этокси]-уксусная кислота 2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[5-[[4-[3-(16-трет-бутокси-16-оксогексадецил)-4-фторфенокси]фенил]-сульфониламино]пиримидин-2-карбонил]амино]этокси]этокси]ацетил]амино]этокси]этокси]уксусная кислота 2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[5-[[4-(18-трет-бутокси-18- оксооктадецил)фенил]сульфониламино]-пиримидин-2-карбонил]амино]этокси]этокси]ацетил]-амино]этокси]этокси]уксусная кислота 2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[5-[[4-[3-(14-трет-бутокси-14-оксотетрадецил)-4-фторфенокси]фенил]сульфонил-амино]пиримидин-2-карбонил]амино]этокси]этокси]-ацетил]амино]этокси]этокси]-уксусная кислота 2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[5-[[4-(14-трет-бутокси-14-оксотетрадецил)фенил]сульфонил-амино]пиримидин-2-карбонил]амино]этокси]этокси]ацетил]амино]этокси]этокси]уксусная кислота 2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[5-[[4-[[4-(10-трет-бутокси-10-оксодецил)фенокси]метил]фенил]-сульфониламино]пиримидин-2-карбонил]амино]этокси]этокси]ацетил]-амино]этокси]этокси]уксусная кислота 2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[5-[[4-[2-[4-(10-трет-бутокси-10-оксодецил)фенил]этокси]фенил]-сульфониламино]пиримидин-2-карбонил]амино]этокси]этокси]-ацетил]амино]этокси]этокси]-уксусная кислота 2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[5-[[4-(12-трет-бутокси-12-оксододекокси)фенил]сульфонил-амино]пиримидин-2-карбонил]амино]этокси]этокси]ацетил]амино]этокси]этокси]уксусная кислота 2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[5-[[4-[[4-(8-трет-бутокси-8-оксооктил)фенил]метокси]фенил]-сульфониламино]пиримидин-2-карбонил]амино]этокси]этокси]ацетил]-амино]этокси]этокси]уксусная кислота 2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[5-[[3-(14-трет-бутокси-14-оксотетрадецил)фенил]сульфонил-амино]пиримидин-2-карбонил]амино]этокси]этокси]-ацетил]амино]этокси]этокси]-уксусная кислота 2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[5-[[4-[3-(12-трет-бутокси-12-оксододецил)-4-фторфенокси]фенил]сульфонил-амино]пиримидин-2-карбонил]амино]этокси]этокси]ацетил]амино]этокси]этокси]уксусная кислота 2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[5-[[4-[4-(14-трет-бутокси-14-оксотетрадецил)фенокси]фенил]- сульфониламино]пиримидин-2-карбонил]амино]этокси]этокси]ацетил]-амино]этокси]этокси]уксусная кислота 2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[5-[[4-[2-[4-(12-трет-бутокси-12-оксододекокси)фенил]этил]фенил]-сульфониламино]пиримидин-2-карбонил]амино]этокси]этокси]-ацетил]амино]этокси]этокси]-уксусная кислота 2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[6-[[4-(16-трет-бутокси-16-оксогексадекокси)-2,3-дихлорфенил] сульфониламино]-пиридин-3-карбонил]амино]этокси]этокси]ацетил]амино]этокси]этокси]уксусная кислота 2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[5-[[4-(14-трет-бутокси-14-оксотетрадекокси)фенил]сульфонил-амино]пиримидин-2-карбонил]амино]этокси]этокси]ацетил]-амино]этокси]этокси]уксусная кислота 2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[6-[[4-(14-трет-бутокси-14-оксотетрадекокси)фенил]-сульфониламино]пиридин-3-карбонил]амино]этокси]этокси]-ацетил]амино]этокси]этокси]-уксусная кислота 2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[2-[[4-(16-трет-бутокси-16-оксогексадекокси)-3-фторфенил]сульфониламино-]пиримидин-5-карбонил]амино]этокси]этокси]ацетил]амино]этокси]этокси]уксусная кислота 2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[6-[[4-(16-трет-бутокси-16-оксогексадекокси)-3-фторфенил]сульфониламино]пиридин-3-карбонил]амино]этокси]этокси]ацетил]-амино]этокси]этокси] уксусная кислота 2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[6-[[4-(16-трет-бутокси-16-оксогексадекокси)-3-хлорфенил]сульфониламино]-пиридин-3-карбонил]амино]этокси]этокси]-ацетил]амино]этокси]этокси]-уксусная кислота 2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[2-[[4-(16-трет-бутокси-16-оксогексадекокси)фенил]-сульфониламино]-4-метилпиримидин-5-карбонил]амино]этокси]этокси]ацетил]амино]этокси]этокси]уксусная кислота 2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[2-[[4-(16-трет-бутокси-16-оксогексадекокси)фенил]сульфонил-амино]-4-(трифторметил)пиримидин-5-карбонил]амино]этокси]этокси]ацетил]-амино]этокси]этокси]уксусная кислота 2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[2-[[4-(16-трет-бутокси-16-оксогексадекокси)-3-хлорфенил]сульфониламино]-пиримидин-5-карбонил]амино]этокси]этокси]-ацетил]амино]этокси]этокси]-уксусная кислота 2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[6-[[4-(16-трет-бутокси-16-оксогексадецил)фенил]сульфонил-амино]пиридин-3-карбонил]амино]этокси]этокси]ацетил]амино]этокси]этокси]уксусная кислота 2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[6-[[4-[[4-(14-трет-бутокси-14-оксотетрадецил)фенокси]метил]фенил]-сульфониламино]пиридин-3-карбонил]амино]этокси]этокси]ацетил]-амино]этокси]этокси]уксусная кислота 2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[6-[[4-[2-[4-(8-трет-бутокси-8-оксооктил)фенил]этокси]фенил]-сульфониламино]пиридин-3-карбонил]амино]этокси]этокси]-ацетил]амино]этокси]этокси]-уксусная кислота 2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[6-[[3-(18-трет-бутокси-18-оксооктадецил)фенил]сульфонил-амино]пиридин-3-карбонил]амино]этокси]этокси]ацетил]амино]этокси]этокси]уксусная кислота 2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[2-[[4-[3-(10-трет-бутокси-10-оксодецил)-4-фторфенокси]фенил]сульфониламино]-пиримидин-5-карбонил]амино]этокси]этокси]ацетил]-амино]этокси]этокси]уксусная кислота 2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[2-[[4-(16-трет-бутокси-16-оксогексадецил)фенил]сульфониламино]пиримидин-5-карбонил]амино]этокси]этокси]-ацетил]амино]этокси]этокси]-уксусная кислота 2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[6-[[4-[4-(14-трет-бутокси-14-оксотетрадецил)фенокси]фенил]-сульфониламино]пиридин-3-карбонил]амино]этокси]этокси]ацетил]амино]этокси]этокси]уксусная кислота 2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[2-[[4-(16-трет-бутокси-16- оксогексадекокси)-2,5-дихлорфенил]сульфониламино]-пиримидин-5-карбонил]амино]этокси]этокси]ацетил]-амино]этокси]этокси]уксусная кислота 2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[2-[[4-[2-[4-(8-трет-бутокси-8-оксооктил)фенил]этокси]фенил]-сульфониламино]пиримидин-5-карбонил]амино]этокси]этокси]-ацетил]амино]этокси]этокси]-уксусная кислота 2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[2-[[4-(12-трет-бутокси-12-оксододецил)фенил]сульфонил-амино]пиримидин-5-карбонил]амино]этокси]этокси]ацетил]амино]этокси]этокси]уксусная кислота 2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[6-[[4-(18-трет-бутокси-18-оксооктадекокси)фенил]сульфониламино]пиридин-3-карбонил]амино]этокси]этокси]ацетил]- амино]этокси]этокси]уксусная кислота 2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[2-[[4-[3-(8-трет-бутокси-8-оксооктил)-4-фторфенокси]фенил]сульфонил-амино]пиримидин-5-карбонил]амино]этокси]этокси]-ацетил]амино]этокси]этокси]-уксусная кислота 2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[2-[[3-(18-трет-бутокси-18-оксооктадецил)фенил]сульфонил-амино]пиримидин-5-карбонил]амино]этокси]этокси]ацетил]амино]этокси]этокси]уксусная кислота 2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[6-[[3-(12-трет-бутокси-12-оксододецил)фенил]сульфониламино]-пиридин-3-карбонил]амино]этокси]этокси]ацетил]-амино]этокси]этокси]уксусная кислота 2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[2-[[4-(18-трет-бутокси-18-оксооктадекокси)фенил]сульфонил-амино]пиримидин-5-карбонил]амино]этокси]этокси]-ацетил]амино]этокси]этокси]-уксусная кислота 2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[2-[[3-(12-трет-бутокси-12-оксододецил)фенил]сульфонил-амино]пиримидин-5-карбонил]амино]этокси]этокси]ацетил]амино]этокси]этокси]уксусная кислота 2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[6-[[4-[2-[4-(8-трет-бутокси-8-оксооктил)фенил]этокси]фенил]- сульфониламино]пиридин-3-карбонил]амино]этокси]этокси]ацетил]-амино]этокси]этокси]уксусная кислота 2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[6-[[4-(20-трет-бутокси-20-оксоэйкозокси)фенил]сульфониламино]пиридин-3-карбонил]амино]этокси]этокси]-ацетил]амино]этокси]этокси]-уксусная кислота 2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[2-[[4-[[4-(14-трет-бутокси-14-оксотетрадецил)фенокси]метил]-фенил]сульфониламино]пиримидин-5-карбонил]амино]этокси]этокси]ацетил]амино]этокси]этокси]уксусная кислота 2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[6-[[4-(10-трет-бутокси-10-оксодецил)фенил]сульфониламино]-пиридин-3-карбонил]амино]этокси]этокси]ацетил]-амино]этокси]этокси]уксусная кислота 2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[2-[[4-(10-трет-бутокси-10-оксодецил)фенил]сульфониламино]пиримидин-5-карбонил]амино]этокси]этокси]-ацетил]амино]этокси]этокси]-уксусная кислота 2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[2-[[3-(16-трет-бутокси-16-оксогексадекокси)фенил]сульфонил-амино]пиримидин-5-карбонил]амино]этокси]этокси]ацетил]амино]этокси]этокси]уксусная кислота

2.9.2 Синтез 2-[2-[2-[[2-[2-[2-[6-[[5-[[4-(16-трет-бутокси-16-оксогексадекокси)фенил]сульфониламино]пиримидин-2-карбонил]амино]гексаноиламино]этокси]этокси]ацетил]амино]этокси]этокси]уксусной кислоты

Смесь 5-[[4-(16-трет-бутокси-16-оксогексадекокси)фенил]сульфониламино]пиримидин-2-карбоновой кислоты (500 мг, 825 мкмоль), TSTU (310 мг, 1,0 ммоль) и DIPEA (360 мкл, 266 мг, 2,06 ммоль) в 6 мл THF перемешивали при к. т. в течение 16 ч. Через 16 ч. растворитель удаляли при пониженном давлении, и добавляли раствор 6-аминогексановой кислоты (130 мг, 990 мкмоль) и DIPEA (360 мкл, 266 мг, 2,06 ммоль) в 6 мл абсолютного EtOH, и смесь перемешивали при к. т. в течение 16 ч. Летучие компоненты удаляли при пониженном давлении, полученный остаток растворяли в CH₂Cl₂ и промывали водным 10% раствором KHSO₄. Органический слой промывали с помощью воды и солевого раствора, высушивали над безводным Na₂SO₄, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. 900 мг полученного неочищенного 6-[[5-[[4-(16-трет-бутокси-16-оксогексадекокси)фенил]сульфониламино]пиримидин-2-карбонил]амино]гексановой кислоты использовали на следующем этапе без дополнительной очистки.

Смесь 6-[[5-[[4-(16-трет-бутокси-16-оксогексадекокси)фенил]сульфониламино]пиримидин-2-карбонил]амино]гексановой кислоты (900 мг неочищенного продукта, чистота 65%, 814 мкмоль), TSTU (306 мг, 1,02 ммоль) и DIPEA (355 мкл, 262 мг, 2,03 ммоль) в 6 мл THF перемешивали при к. т. в течение 16 ч. Через 16 ч. растворитель удаляли при пониженном давлении, и добавляли раствор 2-[2-[2-[[2-[2-(2-аминоэтокси)этокси]ацетил]амино]этокси]этокси]уксусной кислоты (301 мг, 976 мкмоль) и DIPEA (355 мкл, 262 мг, 2,03 ммоль) в 6 мл абсолютного EtOH, и смесь перемешивали при к. т. в течение 16 ч. Летучие компоненты удаляли при пониженном давлении, полученный остаток растворяли в CH₂Cl₂ и промывали водным 10% раствором KHSO₄. Органический слой промывали с помощью воды и солевого раствора, высушивали над безводным Na₂SO₄, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Неочищенный продукт очищали посредством RP-HPLC с получением 2-[2-[2-[[2-[2-[2-[6-[[5-[[4-(16-трет-бутокси-16-оксогексадекокси)фенил]сульфониламино]пиримидин-2-карбонил]амино]гексаноиламино]этокси]этокси]ацетил]амино]этокси]этокси]уксусной кислоты (78 мг, 10%).

¹H-ЯМР (400,23 MГц, DMSO-d₆) δ ppm 12,29 (br s, 1 H), 8,82 (s, 2 H), 8,47 (br s, 1 H), 7,90 (d, J=8,93 Гц, 2 H), 7,79 (t, J=5,50 Гц, 1 H), 7,63 (t, J=5,75 Гц, 1 H), 7,07 (d, J=8,93 Гц, 2 H), 4,01 (m, 4 H), 3,87 (s, 2 H), 3,20-3,68 (m, 18 H), 2,15 (t, J=7,27 Гц, 2 H), 2,05 (t, J=7,34 Гц, 2 H), 1,70 (m, 2 H), 1,48 (m, 6 H), 1,38 (s, 9 H), 1,25 (m, 24 H).

Следующее соединение синтезировали соответственно:

2-[2-[2-[[2-[2-[2-[6-[[6-[[4-(16-трет-бутокси-16-оксогексадекокси)фенил]-сульфониламино]пиридин-3-карбонил]амино]гексаноиламино]этокси]-этокси]ацетил]амино]этокси]этокси]уксусная кислота

2.10 Включение (2) в состав

2.10.1 Синтез 2-[2-[2-[[2-[2-[2-[3-[[5-[[4-[4-(14-трет-бутокси-14-оксотетрадецил)фенокси]фенил]сульфониламино]пиримидин-2-карбонил]амино]пропаноиламино]этокси]этокси]ацетил]амино]этокси]этокси]уксусной кислоты

2.10.2 Синтез трет-бутил-14-[4-[4-[[5-[(3-метокси-3-оксопропил)карбамоил]пиримидин-2-ил]сульфамоил]фенокси]фенил]тетрадеканоата

Смесь 5-[[4-[4-(14-трет-бутокси-14-оксотетрадецил)фенокси]фенил]сульфониламино]пиримидин-2-карбоновой кислоты (1,0 г, 764 мкмоль), TSTU (241 мг, 803 мкмоль) и DIPEA (494 мг, 3,82 ммоль) в 10 мл THF перемешивали при к. т. в течение 16 ч. Добавляли дополнительное количество TSTU (80 мг, 267 мкмоль), и перемешивание при к. т. продолжали в течение 2 ч. Добавляли гидрохлорид метил-3-аминопропаноата (117 мг, 841 мкмоль), и перемешивание при к. т. продолжали в течение 16 ч. Летучие компоненты удаляли при пониженном давлении, полученный остаток растворяли в CH₂Cl₂ и промывали водным 10% раствором KHSO₄. Органический слой промывали с помощью воды и солевого раствора, высушивали над безводным Na₂SO₄, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Неочищенный продукт очищали посредством препаративной RP-HPLC с получением 14-[4-[4-[[5-[(3-метокси-3-оксопропил)карбамоил]пиримидин-2-ил]сульфамоил]фенокси]фенил]тетрадеканоата (235 мг, 42%).

¹H-ЯМР (400,23 MГц, DMSO-d₆) δ ppm 12,11 (br s, 1 H), 8,84 (s, 2 H), 8,66 (t, J=5,44 Гц, 1 H), 7,98 (d, J=8,93 Гц, 2 H), 7,26 (d, J=8,44 Гц, 2 H), 7,04 (m, 4 H), 3,60 (s, 3 H), 3,46 (m, 2H), 2,57 (m, 4 H), 2,15 (t, J=7,27 Гц, 2 H), 1,56 (m, 2 H), 1,46 (m, 2 H), 1,38 (s, 9 H), 1,29 (m, 18 H).

2.10.3 Синтез 2-[2-[2-[[2-[2-[2-[3-[[5-[[4-[4-(14-трет-бутокси-14-оксотетрадецил)фенокси]фенил]сульфониламино]пиримидин-2-карбонил]амино]пропаноиламино]этокси]этокси]ацетил]амино]этокси]этокси]уксусной кислоты

Смесь 14-[4-[4-[[5-[(3-метокси-3-оксопропил)карбамоил]пиримидин-2-ил]сульфамоил]фенокси]фенил]тетрадеканоата (235 мг, 318 мкмоль), LiOH (38 мг, 1,59 ммоль), THF (5 мл) и H₂O (5 мл) перемешивали при к. т. в течение 2 ч. Реакционную смесь подкисляли до примерно pH=1,0 с помощью HCl (2,0 M) и экстрагировали с помощью CH₂Cl₂. Органический слой промывали солевым раствором, высушивали с помощью Na₂SO₄, фильтровали и концентрировали с получением 3-[[5-[[4-[4-(14-трет-бутокси-14-оксотетрадецил)фенокси]фенил]сульфониламино]пиримидин-2-карбонил]амино]пропановой кислоты (207 мг, выход 89%) в виде белого твердого вещества, которое использовали в следующей реакции без дополнительной очистки.

Смесь 3-[[5-[[4-[4-(14-трет-бутокси-14-оксотетрадецил)фенокси]фенил]сульфониламино]пиримидин-2-карбонил]амино]пропановой кислоты (207 мг, 285 мкмоль), TSTU (90 мг, 300 мкмоль) и DIPEA (150 мкл, 110 мг, 850 мкмоль) в 6 мл THF перемешивали при к. т. в течение 1 ч. Через 1 ч. растворитель удаляли при пониженном давлении, и добавляли раствор 2-[2-[2-[[2-[2-(2-аминоэтокси)этокси]ацетил]амино]этокси]этокси]уксусной кислоты (97 мг, 314 мкмоль) и DIPEA (150 мкл, 110 мг, 850 мкмоль) в 6 мл абсолютного EtOH, и смесь перемешивали при к. т. в течение 16 ч. Летучие компоненты удаляли при пониженном давлении, полученный остаток растворяли в CH₂Cl₂ и промывали водным 10% раствором KHSO₄. Органический слой промывали с помощью воды и солевого раствора, высушивали над безводным Na₂SO₄, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Неочищенный продукт очищали посредством RP-HPLC с получением 2-[2-[2-[[2-[2-[2-[3-[[5-[[4-[4-(14-трет-бутокси-14-оксотетрадецил)фенокси]фенил]сульфониламино]пиримидин-2-карбонил]амино]пропаноиламино]этокси]этокси]ацетил]амино]этокси]этокси]уксусной кислоты (163 мг, 56%).

¹H-ЯМР (400,23 MГц, DMSO-d₆) δ ppm 12,11 (br s, 2 H), 8,84 (s, 2 H), 8,61 (t, J=5,62 Гц, 1 H), 7,97 (m, 3 H), 7,62 (t, J=5,56 Гц, 1 H), 7,26 (d, J=8,44 Гц, 2 H), 7,04 (m, 4 H), 4,01 (s, 2 H), 3,86 (s, 2 H), 3,20-3,60 (m, 18 H), 2,58 (m, 2 H), 2,34 (t, J=7,03 Гц, 2 H), 2,15 (t, J=7,27 Гц, 2 H), 1,56 (m, 2 H), 1,46 (m, 2 H), 1,38 (s, 9 H), 1,29 (m, 18 H).

2.11 Удаление защитных групп

Синтез 14-[5-[4-[[5-[2-[2-[2-[2-[2-(карбоксиметилокси)этокси]этиламино]-2-оксоэтокси]этокси]этилкарбамоил]-2-пиридил]сульфамоил]фенокси]-2-фторфенил]тетрадекановой кислоты

2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[6-[[4-[3-(14-трет-бутокси-14-оксотетрадецил)-4-фторфенокси]фенил]сульфониламино]пиридин-3-карбонил]амино]этокси]этокси]ацетил]амино]этокси]этокси]уксусную кислоту (20 мг, 21 мкмоль) растворяли в DCM (3,0 мл), и добавляли TFA (0,5 мл) при к. т. Перемешивание продолжали при к. т. в течение 16 ч. Летучие компоненты удаляли при пониженном давлении, и полученный остаток растворяли в DCM и повторно выпаривали дважды. Неочищенный продукт очищали с помощью препаративной RP-HPLC. Указанное в заголовке соединение 1914-[5-[4-[[5-[2-[2-[2-[2-[2-(карбоксиметилокси)этокси]этиламино]-2-оксоэтокси]этокси]этилкарбамоил]-2-пиридил]сульфамоил]фенокси]-2-фторфенил]тетрадекановую кислоту получали в виде бесцветного твердого вещества (19 мг, 21 мкмоль, количественный выход).

¹H-ЯМР (400,23 MГц, DMSO-d₆) δ ppm 12,19 (br s, 1 H), 8,51 (m, 2 H), 8,09 (dd, J=8,93, 2,32 Гц, 1 H), 7,89 (d, J=8,93 Гц, 2 H), 7,61 (br t, J=5,56 Гц, 1 H), 7,20 (t, J=8,93 Гц, 1 H), 7,15 (d, J=8,19 Гц, 1 H), 7,03 (m, 4 H), 4,01 (s, 2 H), 3,86 (s, 2 H), 3,20-3,68 (m, 16 H), 2,58 (br t, J=7,52 Гц, 2 H), 2,17 (t, J=7,34 Гц, 2 H), 1,49 (m, 4 H), 1,25 (m, 18 H).

Следующие соединения синтезировали соответственно:

14-[4-[[5-[2-[2-[2-[2-[2-(карбоксиметилокси)этокси]этиламино]-2-оксоэтокси]этокси]этилкарбамоил]-2-пиридил]сульфамоил]фенил]-тетрадекановая кислота 16-[5-[4-[[5-[2-[2-[2-[2-[2-(карбоксиметилокси)этокси]этиламино]-2-оксоэтокси]этокси]этилкарбамоил]-2-пиридил]сульфамоил]фенокси]-2-фторфенил]гексадекановая кислота 18-[4-[[5-[2-[2-[2-[2-[2-(карбоксиметилокси)этокси]этиламино]-2-оксоэтокси]этокси]этилкарбамоил]-2-пиридил]сульфамоил]фенил]-октадекановая кислота 12-[4-[2-[4-[[5-[2-[2-[2-[2-[2-(карбоксиметилокси)этокси]этиламино]-2-оксоэтокси]этокси]этилкарбамоил]-2-пиридил]сульфамоил]фенил]этил]-фенокси]додекановая кислота 12-[4-[[5-[2-[2-[2-[2-[2-(карбоксиметилокси)этокси]этиламино]-2-оксоэтокси]этокси]этилкарбамоил]-2-пиридил]сульфамоил]фенокси]-додекановая кислота 16-[4-[[5-[2-[2-[2-[2-[2-(карбоксиметилокси)этокси]этиламино]-2-оксоэтокси]этокси]этилкарбамоил]-2-пиридил]сульфамоил]фенокси]-гексадекановая кислота 14-[3-[[5-[2-[2-[2-[2-[2-(карбоксиметилокси)этокси]этиламино]-2-оксоэтокси]этокси]этилкарбамоил]-2-пиридил]сульфамоил]фенил]-тетрадекановая кислота 12-[4-[4-[[5-[2-[2-[2-[2-[2-(карбоксиметилокси)этокси]этиламино]-2-оксоэтокси]этокси]этилкарбамоил]-2-пиридил]сульфамоил]фенокси]фенил]-додекановая кислота 10-[4-[[5-[2-[2-[2-[2-[2-(карбоксиметилокси)этокси]этиламино]-2-оксоэтокси]этокси]этилкарбамоил]-2-пиридил]сульфамоил]фенокси]-декановая кислота 10-[4-[2-[4-[[5-[2-[2-[2-[2-[2-(карбоксиметилокси)этокси]этиламино]-2-оксоэтокси]этокси]этилкарбамоил]-2-пиридил]сульфамоил]фенокси]этил]-фенил]декановая кислота 10-[4-[[4-[[5-[2-[2-[2-[2-[2-(карбоксиметилокси)этокси]этиламино]-2-оксоэтокси]этокси]этилкарбамоил]-2-пиридил]сульфамоил]фенил]метокси]-фенил]декановая кислота 12-[5-[4-[[5-[2-[2-[2-[2-[2-(карбоксиметилокси)этокси]этиламино]-2-оксоэтокси]этокси]этилкарбамоил]-2-пиридил]сульфамоил]фенокси]-2-фторфенил]додекановая кислота 16-[4-[[5-[2-[2-[2-[2-[2-(карбоксиметилокси)этокси]этиламино]-2-оксоэтокси]этокси]этилкарбамоил]-пиримидин-2-ил]сульфамоил]фенокси]-гексадекановая кислота 16-[5-[4-[[5-[2-[2-[2-[2-[2-(карбоксиметилокси)этокси]этиламино]-2-оксоэтокси]этокси]этилкарбамоил]-пиримидин-2-ил]сульфамоил]фенокси]-2-фторфенил]гексадекановая кислота 18-[4-[[5-[2-[2-[2-[2-[2-(карбоксиметилокси)этокси]этиламино]-2-оксоэтокси]этокси]этилкарбамоил]-пиримидин-2-ил]сульфамоил]фенил]октадекановая кислота 14-[5-[4-[[5-[2-[2-[2-[2-[2-(карбоксиметилокси)этокси]этиламино]-2-оксоэтокси]этокси]этилкарбамоил]-пиримидин-2-ил]сульфамоил]фенокси]-2-фторфенил]тетрадекановая кислота 14-[4-[[5-[2-[2-[2-[2-[2-(карбоксиметилокси)этокси]этиламино]-2-оксоэтокси]этокси]этилкарбамоил]-пиримидин-2-ил]сульфамоил]-фенил]тетрадекановая кислота 10-[4-[[4-[[5-[2-[2-[2-[2-[2-(карбоксиметилокси)этокси]этиламино]-2-оксоэтокси]этокси]этилкарбамоил]-пиримидин-2-ил]сульфамоил]фенил]-метокси]фенил]декановая кислота 10-[4-[2-[4-[[5-[2-[2-[2-[2-[2-(карбоксиметилокси)этокси]этиламино]-2-оксоэтокси]этокси]этилкарбамоил]-пиримидин-2-ил]сульфамоил]фенокси]-этил]фенил]-декановая кислота 12-[4-[[5-[2-[2-[2-[2-[2-(карбоксиметилокси)этокси]этиламино]-2-оксоэтокси]этокси]этилкарбамоил]-пиримидин-2-ил]сульфамоил]-фенокси]додекановая кислота 8-[4-[[4-[[5-[2-[2-[2-[2-[2-(карбоксиметилокси)этокси]этиламино]-2-оксоэтокси]этокси]этилкарбамоил]-пиримидин-2-ил]сульфамоил]-фенокси]метил]фенил]октановая кислота 14-[3-[[5-[2-[2-[2-[2-[2-(карбоксиметилокси)этокси]этиламино]-2-оксоэтокси]этокси]этилкарбамоил]-пиримидин-2-ил]сульфамоил]фенил]тетрадекановая кислота 12-[5-[4-[[5-[2-[2-[2-[2-[2-(карбоксиметилокси)этокси]этиламино]-2-оксоэтокси]этокси]этилкарбамоил]-пиримидин-2-ил]сульфамоил]фенокси]-2-фторфенил]додекановая кислота 14-[4-[4-[[5-[2-[2-[2-[2-[2-(карбоксиметилокси)этокси]этиламино]-2-оксоэтокси]этокси]этилкарбамоил]-пиримидин-2-ил]сульфамоил]фенокси]фенил]-тетрадекановая кислота 12-[4-[2-[4-[[5-[2-[2-[2-[2-[2-(карбоксиметилокси)этокси]этиламино]-2-оксоэтокси]этокси]этилкарбамоил]-пиримидин-2-ил]сульфамоил]фенил]этил]фенокси]-додекановая кислота 14-[4-[4-[[5-[[3-[2-[2-[2-[2-[2-(карбоксиметилокси)этокси]этиламино]-2-оксоэтокси]этокси]этиламино]-3-оксопропил]карбамоил]пиримидин-2-ил]сульфамоил]фенокси]фенил]-тетрадекановая кислота 16-[4-[[5-[[6-[2-[2-[2-[2-[2-(карбоксиметилокси)этокси]этиламино]-2-оксоэтокси]этокси]этиламино]-6-оксо-гексил]карбамоил]пиримидин-2-ил]сульфамоил]фенокси]гексадекановая кислота 16-[4-[[5-[[6-[2-[2-[2-[2-[2-(карбоксиметилокси)этокси]этиламино]-2-оксоэтокси]этокси]этиламино]-6-оксогексил]-карбамоил]-2-пиридил]-сульфамоил]-фенокси]гексадекановая кислота 16-[4-[[5-[2-[2-[2-[2-[2-(карбоксиметилокси)этокси]этиламино]-2-оксоэтокси]этокси]этилкарбамоил]-2-пиридил]сульфамоил]-2,3-дихлор-фенокси]гексадекановая кислота 14-[4-[[5-[2-[2-[2-[2-[2-(карбоксиметилокси)этокси]этиламино]-2-оксоэтокси]этокси]этилкарбамоил]-2-пиридил]сульфамоил]фенокси]-тетрадекановая кислота 14-[4-[[5-[2-[2-[2-[2-[2-(карбоксиметилокси)этокси]этиламино]-2-оксоэтокси]этокси]этилкарбамоил]пиримидин-2-ил]сульфамоил]фенокси]тетрадекановая кислота 14-[4-[[4-[[5-[2-[2-[2-[2-[2-(карбоксиметилокси)этокси]этиламино]-2-оксоэтокси]этокси]этилкарбамоил]-2-пиридил]сульфамоил]фенил]метокси]-фенил]тетрадекановая кислота 16-[4-[[5-[2-[2-[2-[2-[2-(карбоксиметилокси)этокси]этиламино]-2-оксоэтокси]этокси]этилкарбамоил]-2-пиридил]сульфамоил]-2-фторфенокси]гексадекановая кислота 16-[4-[[5-[2-[2-[2-[2-[2-(карбоксиметилокси)этокси]этиламино]-2-оксоэтокси]этокси]этилкарбамоил]-2-пиридил]сульфамоил]-2-хлорфенокси]гексадекановая кислота 16-[4-[[5-[2-[2-[2-[2-[2-(карбоксиметилокси)этокси]этиламино]-2-оксоэтокси]этокси]этилкарбамоил]-4-(трифторметил)пиримидин-2-ил]сульфамоил]фенокси]-гексадекановая кислота 8-[4-[2-[4-[[5-[2-[2-[2-[2-[2-(карбоксиметилокси)этокси]этиламино]-2-оксоэтокси]этокси]этилкарбамоил]-2-пиридил]сульфамоил]фенокси]этил]-фенил]октановая кислота 16-[4-[[5-[2-[2-[2-[2-[2-(карбоксиметилокси)этокси]этиламино]-2-оксоэтокси]этокси]этилкарбамоил]-2-пиридил]сульфамоил]фенил]гексадекановая кислота 12-[4-[[5-[2-[2-[2-[2-[2-(карбоксиметилокси)этокси]этиламино]-2-оксоэтокси]этокси]этилкарбамоил]-пиримидин-2-ил]сульфамоил]фенил]додекановая кислота 16-[4-[[5-[2-[2-[2-[2-[2-(карбоксиметилокси)этокси]этиламино]-2-оксоэтокси]этокси]этилкарбамоил]-пиримидин-2-ил]сульфамоил]-2-хлорфенокси]гексадекановая кислота 18-[3-[[5-[2-[2-[2-[2-[2-(карбоксиметилокси)этокси]этиламино]-2-оксоэтокси]этокси]этилкарбамоил]-2-пиридил]сульфамоил]фенил]октадекановая кислота 18-[3-[[5-[2-[2-[2-[2-[2-(карбоксиметилокси)этокси]этиламино]-2-оксоэтокси]этокси]этилкарбамоил]-пиримидин-2-ил]сульфамоил]фенил]октадекановая кислота 10-[5-[4-[[5-[2-[2-[2-[2-[2-(карбоксиметилокси)этокси]этиламино]-2- оксоэтокси]этокси]этилкарбамоил]-пиримидин-2-ил]сульфамоил]фенокси]-2-фторфенил]декановая кислота 14-[4-[4-[[5-[2-[2-[2-[2-[2-(карбоксиметилокси)этокси]этиламино]-2-оксоэтокси]этокси]этилкарбамоил]-2-пиридил]сульфамоил]фенокси]фенил]-тетрадекановая кислота 12-[3-[[5-[2-[2-[2-[2-[2-(карбоксиметилокси)этокси]этиламино]-2-оксоэтокси]этокси]этилкарбамоил]-пиримидин-2-ил]сульфамоил]фенил]додекановая кислота 16-[4-[[5-[2-[2-[2-[2-[2-(карбоксиметилокси)этокси]этиламино]-2-оксоэтокси]этокси]этилкарбамоил]-пиримидин-2-ил]сульфамоил]-2,5-дихлорфенокси]гексадекановая кислота 16-[4-[[5-[2-[2-[2-[2-[2-(карбоксиметилокси)этокси]этиламино]-2-оксоэтокси]этокси]этилкарбамоил]-пиримидин-2-ил]сульфамоил]-2-фторфенокси]гексадекановая кислота 14-[4-[[4-[[5-[2-[2-[2-[2-[2-(карбоксиметилокси)этокси]этиламино]-2-оксоэтокси]этокси]этилкарбамоил]-пиримидин-2-ил]сульфамоил]фенил]метокси]фенил]тетрадекановая кислота 18-[4-[[5-[2-[2-[2-[2-[2-(карбоксиметилокси)этокси]этиламино]-2-оксоэтокси]этокси]этилкарбамоил]-2-пиридил]сульфамоил]фенокси]-октадекановая кислота 16-[4-[[5-[2-[2-[2-[2-[2-(карбоксиметилокси)этокси]этиламино]-2-оксоэтокси]этокси]этилкарбамоил]-4-метилпиримидин-2-ил]сульфамоил]фенокси]гексадекановая кислота 16-[3-[[5-[2-[2-[2-[2-[2-(карбоксиметилокси)этокси]этиламино]-2-оксоэтокси]этокси]этилкарбамоил]-пиримидин-2-ил]сульфамоил]фенокси]-гексадекановая кислота 12-[3-[[5-[2-[2-[2-[2-[2-(карбоксиметилокси)этокси]этиламино]-2-оксоэтокси]этокси]этилкарбамоил]-2-пиридил]сульфамоил]фенил]додекановая кислота 16-[4-[[5-[2-[2-[2-[2-[2-(карбоксиметилокси)этокси]этиламино]-2-оксоэтокси]этокси]этилкарбамоил]-пиримидин-2-ил]сульфамоил]фенил]-гексадекановая кислота 8-[4-[2-[4-[[5-[2-[2-[2-[2-[2-(карбоксиметилокси)этокси]этиламино]-2-оксоэтокси]этокси]этилкарбамоил]-2-пиридил]сульфамоил]фенокси]этил]-фенил]октановая кислота 20-[4-[[5-[2-[2-[2-[2-[2-(карбоксиметилокси)этокси]этиламино]-2-оксоэтокси]этокси]этилкарбамоил]-2-пиридил]сульфамоил]фенокси]-эйкозановая кислота 8-[4-[2-[4-[[5-[2-[2-[2-[2-[2-(карбоксиметилокси)этокси]этиламино]-2-оксоэтокси]этокси]этилкарбамоил]-пиримидин-2-ил]сульфамоил]фенокси]этил]фенил]-октановая кислота 10-[4-[[5-[2-[2-[2-[2-[2-(карбоксиметилокси)этокси]этиламино]-2-оксоэтокси]этокси]этилкарбамоил]-2-пиридил]сульфамоил]фенил]декановая кислота 10-[4-[[5-[2-[2-[2-[2-[2-(карбоксиметилокси)этокси]этиламино]-2-оксоэтокси]этокси]этилкарбамоил]-пиримидин-2-ил]сульфамоил]-фенил]декановая кислота 8-[5-[4-[[5-[2-[2-[2-[2-[2-(карбоксиметилокси)этокси]этиламино]-2-оксоэтокси]этокси]этилкарбамоил]-пиримидин-2-ил]сульфамоил]фенокси]-2-фторфенил]октановая кислота 18-[4-[[5-[2-[2-[2-[2-[2- (карбоксиметилокси)этокси]этиламино]-2-оксоэтокси]этокси]этилкарбамоил]-пиримидин-2-ил]сульфамоил]фенокси]-октадекановая кислота

3. Виды инсулина и синтез конъюгатов

3.1 Человеческий инсулин

Аминокислотные последовательности A- и B-цепей человеческого инсулина являются следующими.

A-цепь: GIVEQCCTSICSLYQLENYCN (SEQ ID NO: 5)

B-цепь: FVNQHLCGSHLVEALYLVCGERGFFYTPKT (SEQ ID NO: 6)

Внутрицепочечный дисульфидный мостик присутствует между Cys(A6) и Cys(A11), два межцепочечных дисульфидных мостика присутствуют между Cys(A7) и Cys(B7) и между Cys(A20) и Cys(B19).

3.2 Аналог инсулина 1

В основе аналога инсулина 1 лежит человеческий инсулин с мутациями в положениях A14, B16, B25 и удалением аминокислоты в положении B30.

Glu(A14): аминокислота в положении 14 А-цепи человеческого инсулина (Y, тирозин, Tyr) заменена глутаминовой кислотой (E, Glu),

His(B16): аминокислота в положении 16 B-цепи человеческого инсулина (Y, тирозин, Tyr) заменена гистидином (H, His),

His(B25): аминокислота в положении 25 B-цепи человеческого инсулина (F, фенилаланин, Phe) заменена гистидином (H, His),

Des(B30): аминокислота в положении 30 B-цепи человеческого инсулина удалена.

Полная аминокислотная последовательность аналога инсулина 1 с учетом A- и B-цепей является следующей.

A-цепь: GIVEQCCTSICSLEQLENYCN (SEQ ID NO: 7)

B-цепь: FVNQHLCGSHLVEALHLVCGERGFHYTPK- (SEQ ID NO: 8)

Один внутрицепочечный и два межцепочечных дисульфидных мостика соответствуют человеческому инсулину.

3.3 Конъюгат с человеческим инсулином/Синтез конъюгата [16-[4-[[5-[2-[2-[2-[2-[2-(карбоксиметилокси)этокси]этиламино]-2-оксоэтокси]этокси]этилкарбамоил]пиримидин-2-ил]сульфамоил]фенокси]гексадекановая кислота]-Lys(B29)-инсулин

Конъюгат получали из человеческого инсулина согласно 3.1 и 2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[2-[[4-(16-трет-бутокси-16-оксогексадекокси)фенил]сульфониламино]пиримидин-5-карбонил]амино]этокси]этокси]ацетил]амино]этокси]этокси]уксусной кислоты из примера 2.9.

Синтез 16-[4-[[5-[2-[2-[2-[2-[2-[2-(2,5-диоксопирролидин-1-ил)окси-2-оксоэтокси]этокси]этиламино]-2-оксоэтокси]этокси]этилкарбамоил]пиримидин-2-ил]сульфамоил]фенокси]гексадеканоата.

К раствору 296 мг 2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[2-[[4-(16-трет-бутокси-16-оксогексадекокси)фенил]сульфониламино]пиримидин-5-карбонил]амино]этокси]этокси]ацетил]амино]этокси]этокси]уксусной кислоты в 9 мл DMF добавляли 92,7 мкл триэтиламина, 106 мг TSTU и следовое количество DMAP. Раствор перемешивали в течение одного часа.

Добавляли 100 мл метиленхлорида, и полученный раствор трижды промывали с помощью 50 мл солевого раствора. Органический слой отделяли, высушивали с помощью сульфата натрия, фильтровали и концентрировали in vacuo. Неочищенный продукт поглощали в 11 мл метиленхлорида и 5,5 мл трифторуксусной кислоты и хранили в течение ночи при 5°C.

Раствор концентрировали. Затем неочищенный продукт трижды растворяли в 30 мл метиленхлорида и выпаривали. Твердый материал суспендировали в 5 мл метил-трет-бутилового эфира, эфир декантировали. Остаток высушивали in vacuo и использовали без дополнительной очистки.

Раствор 480 мг инсулина суспендировали в 25 мл воды, и затем добавляли 0,45 мл триэтиламина. К прозрачному раствору добавляли 25 мл MeCN и затем 0,9 мл (45,89 мМ в DMF) 16-[4-[[5-[2-[2-[2-[2-[2-[2-(2,5-диоксопирролидин-1-ил)окси-2-оксоэтокси]этокси]этиламино]-2-оксоэтокси]этокси]этилкарбамоил]пиримидин-2-ил]сульфамоил]фенокси]гексадеканоата. Раствор перемешивали в течение 3 часов при комнатной температуре. Реакцию анализировали с помощью Waters UPLC H-класса при 214 нм в фосфатном буфере с хлоридом натрия. Waters BEH300, 10 см. Время удерживания инсулина: 3,85 мин. Время удерживания конъюгата инсулина - 6,46 мин. Продукт очищали посредством HPLC с помощью KTA avant 25. Kinetex 5 мкм C18 100 A, 250×21,2 мм. Объем колонки (CV) - 88 мл.

Объем колонки (CV) - 88 мл.

Растворитель A: 0,5% уксусной кислоты в воде

Растворитель B: 0,5 уксусной кислоты в смеси вода/MeCN 2:8

Градиент: от 95% A, 5% B до 40% A, 60% B в 14 CV

Реакцию анализировали с помощью Waters UPLC H-класса при 214 нм в фосфатном буфере с хлоридом натрия. Waters BEH300, 10 см. Время удерживания конъюгата инсулина: 6,419 мин. Раствор лиофилизировали и получали требуемый продукт. 93 мг, выход 34%. Масс-спектрометрия: 6629,6 г/моль.

3.4 Конъюгаты с аналогом инсулина 1

Конъюгаты аналога инсулина 1 согласно 3.2 получали с молекулами связывающих веществ из примера 2.9.

Связывающее вещество 5: 16-[4-[[5-[2-[2-[2-[2-[2-(карбоксиметилокси)этокси]этиламино]-2-оксоэтокси]этокси]этилкарбамоил]пиримидин-2-ил]сульфамоил]фенокси]гексадекановая кислота;

трет-бутиловый сложный эфир:

2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[2-[[4-(16-трет-бутокси-16-оксогексадекокси)фенил]сульфониламино]пиримидин-5-карбонил]амино]этокси]этокси]ацетил]амино]этокси]этокси]уксусная кислота

Связывающее вещество 8: 14-[5-[4-[[5-[2-[2-[2-[2-[2-(карбоксиметилокси)этокси]этиламино]-2-оксоэтокси]этокси]этилкарбамоил]пиримидин-2-ил]сульфамоил]фенокси]-2-фторфенил]тетрадекановая кислота; трет-бутиловый сложный эфир:

2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[5-[[4-[3-(14-трет-бутокси-14-оксотетрадецил)-4-фторфенокси]фенил]сульфониламино]пиримидин-2-карбонил]амино]этокси]этокси]ацетил]амино]этокси]этокси]уксусная кислота

Связывающее вещество 50: 16-[4-[[5-[2-[2-[2-[2-[2-(карбоксиметилокси)этокси]этиламино]-2-оксоэтокси]этокси]этилкарбамоил]пиримидин-2-ил]сульфамоил]-2-хлорфенокси]гексадекановая кислота; трет-бутиловый сложный эфир:

2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[2-[[4-(16-трет-бутокси-16-оксогексадекокси)-3-хлорфенил]сульфониламино]пиримидин-5-карбонил]амино]этокси]этокси]ацетил]амино]этокси]этокси]уксусная кислота

Связывающее вещество 54: 16-[4-[[5-[2-[2-[2-[2-[2-(карбоксиметилокси)этокси]этиламино]-2-оксоэтокси]этокси]этилкарбамоил]пиримидин-2-ил]сульфамоил]-фенил]гексадекановая кислота; и трет-бутиловый сложный эфир:

2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[2-[[4-(16-трет-бутокси-16-оксогексадецил)фенил]сульфониламино]пиримидин-5-карбонил]амино]этокси]этокси]ацетил]амино]этокси]этокси]уксусная кислота

3.4.1 Синтез конъюгата Glu(A14)His(B16)His(B25)-[16-[4-[[5-[2-[2-[2-[2-[2-(карбоксиметилокси)этокси]этиламино]2-оксоэтокси]этокси]этилкарбамоил]пиримидин-2-ил]сульфамоил]фенокси]гексадекановая кислота]-Lys(B29)Des(B30)-инсулин

Амидная связь образовывалась между ε-аминогруппой лизина B29 и активированным остатком уксусной кислоты связывающего вещества в форме его трет-бутилового сложного эфира 2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[2-[[4-(16-трет-бутокси-16-оксогексадекокси)фенил]сульфониламино]пиримидин-5-карбонил]амино]этокси]этокси]ацетил]амино]этокси]этокси]уксусной кислоты, как указано ниже.

Раствор 400 мг аналога инсулина 1 (Glu(A14)His(B16)His(B25)Des(B30)-инсулина согласно примеру 3.2) суспендировали в 20 мл воды, и затем добавляли 0,4 мл триэтиламина. К прозрачному раствору добавляли 20 мл DMF и затем 5 мл (17,04 мМ в DMF) трет-бутил-16-[4-[[5-[2-[2-[2-[2-[2-[2-(2,5-диоксопирролидин-1-ил)окси-2-оксоэтокси]этокси]этиламино]-2-оксоэтокси]этокси]этилкарбамоил]пиримидин-2-ил]сульфамоил]фенокси]гексадеканоата. Раствор перемешивали в течение 2 часов при комнатной температуре. Реакцию анализировали с помощью Waters UPLC H-класса при 214 нм в фосфатном буфере с хлоридом натрия.

Waters BEH300, 10 см.

Время удерживания инсулина: 2,643 мин.

Время удерживания конъюгата инсулина - 6,224 мин.

Продукт очищали посредством HPLC с помощью KTA avant 25.

Kinetex 5 мкм C18 100 A, 250×21,2 мм. Объем колонки (CV) - 88 мл.

Растворитель A: 0,5% уксусной кислоты в воде

Растворитель B: 0,5% уксусной кислоты в смеси вода/MeCN 4:6

Градиент: от 80% A, 20% B до 20% A, 80% B в 10 CV

После лиофилизации продукта порошок растворяли в 2 мл трифторуксусной кислоты. Через час раствор нейтрализовали разбавленным бикарбонатом натрия. Продукт очищали посредством HPLC с помощью KTA avant 25. Kinetex 5 мкм C18 100 A, 250×21,2 мм. Объем колонки (CV) - 88 мл.

Растворитель A: 0,5% уксусной кислоты в воде

Растворитель B: 0,5% уксусной кислоты в смеси вода/MeCN 4:6

Градиент: от 70% A, 30% B до 30% A, 70% B в 8 CV

Реакцию анализировали с помощью Waters UPLC H-класса при 214 нм в фосфатном буфере с хлоридом натрия.

Waters BEH300, 10 см.

Время удерживания конъюгата инсулина: 5,121 мин.

Раствор лиофилизировали и получали требуемый продукт.

63 мг, выход 14%.

Масс-спектрометрия: 6453,9 г/моль.

Получали конъюгаты связывающих веществ 8, 50 и 54 и аналога инсулина 1 соответственно.

4. Аналитические данные

4.1 Анализ методом жидкостной хроматографии с масс-спектрометрией (LCMS)

Способ масс-спектрометрии Описание способа Тип масс-спектрометрии a Waters SQD, одноквадрупольный, время сканирования 0,13 с для значений массы 100-1400 UPLC-ESI b Waters SQD, одноквадрупольный, время сканирования 0,5 с для значений массы 100-1400 UPLC-ESI

Способ жидкостной хроматографии Описание способа A Набор для MV Waters ACQUITY UPLC BEH C18, 1,7 мкм, 2,1×50 мм; H2O+0,05% TFA:MeCN+0,035% TFA от 98:2 (0 мин.) до 98:2 (0,2 мин.), до 2:98 (3,8 мин.), до 2:98 (4,3 мин.), до 98:2 (4,5 мин.), 1 мл/мин., 55°C B Waters ACQUITY UPLC BEH C18, 1,7 мкм, 2,1×50 мм; H2O+0,05% TFA:MeCN+0,035% TFA от 95:5 (0 мин.) до 5:95 (2 мин.), до 5:95 (2,6 мин.), до 95:5 (2,7 мин.), до 95:5 (3 мин.), 0,9 мл/мин., 55°C C Waters ACQUITY UPLC BEH C18, 1,7 мкм, 2,1×50 мм; H2O+0,05% TFA:MeCN+0,035% TFA от 98:2 (0 мин.) до 98:2 (0,2 мин.), до 2:98 (3,8 мин.), до 2:98 (4,3 мин.), до 98:2 (4,5 мин.), 1 мл/мин., 55°C

В таблице 1 в разделе 4.2 показаны результаты анализа методом LCMS для выделенных связывающих веществ.

4.2 Анализ связывания альбумина

Прибор: Waters Alliance 2795/Waters PDA 2996 или Waters UPLC H-класса, оснащенный детектором с фотодиодной матрицей Waters Acquity Программное обеспечение:
Колонка: Waters Empower 3
CHIRALPAK® HSA, 50×4 мм; размер частиц 5 мкм Номера для заказа в Chiraltech: HSA: 34712 Элюент A: Фосфатно-солевой буферный раствор (PBS) при pH=7,4
Gibco PBS pH 7,4 (10x) - фосфатно-солевой буферный раствор, 500 мл; номер для заказа: 70011-036 (500 мл) Элюент B: изопропанол
Номер для заказа в Fisher: A461-1 (1 л)

Градиент:

Время [мин.] % A % B 0 98 2 2 98 2 17 60 40 22 60 40 22,2 98 2 30 98 2 31 95 5 Температура колонки: 25°C Скорость потока: 1,0 мл/мин. Обнаружение: λ=220 нм Объем вводимой пробы: 20 мкл Концентрация образца: Раствор инсулина 1 мг/мл в PBS для образцов инсулина
5 мкл 10 мМ исходного раствора DMSO (DMSO выпаривали и повторно растворяли в 200 мкл смеси изопропанол/вода 1:1 об./об.) для выделенных образцов связывающего вещества (250 мкМ, 0,2 мг/мл при молекулярной массе 800 Да) Маркер t0 Раствор нитрата натрия (NaNO₃) в воде, 0,05 мг/мл
Разбавлен из исходного водного раствора 1 мг/мл (номер для заказа в Fluka: 74246-100ML) Сообщаемое значение Эффективное время удерживания образца: время удерживания образца - время удерживания маркера t0

Аффинную хроматографию проводили i) для конъюгатов инсулина согласно примерам 3.3 и 3.4 в сепарационном модуле Waters Alliance 2695, оснащенном детектором с фотодиодной матрицей Waters 2996, или Waters UPLC H-класса, оснащенном детектором с фотодиодной матрицей Waters Acquity, и ii) для выделенных связывающих веществ согласно примеру 2.11 в сепарационном модуле Waters Alliance 2795, оснащенном детектором с фотодиодной матрицей Waters 2996, или Waters UPLC H-класса, оснащенном детектором с фотодиодной матрицей Waters Acquity.

Waters Empower 3 использовали для всех измерений в качестве программного обеспечения для обработки данных.

Колонки с иммобилизованным человеческим сывороточным альбумином (50 х 4 мм; размер частиц 5 мкм) приобретали у Chiralpak и использовали для разделений.

Фосфатно-солевой буферный раствор (PBS) приобретали у Gibco и использовали в качестве элюента А, изопропанол приобретали у Fisher и использовали в качестве элюента B.

Применяемый градиент со скоростью потока 1,0 мл/мин. показан ниже:

Время [мин.] % элюента А % элюента В 0 98 2 2 98 2 17 60 40 22 60 40 22,2 98 2 30 98 2 31 95 5

Колонки с иммобилизованным сывороточным альбумином поддерживали при 25°C во время прогона LC, UV-детектирование проводили при 220 нм, и объем вводимой пробы составлял 20 мкл.

Эффективное время удерживания образцов сообщалось согласно формуле:

эффективное время удерживания=время удерживания образца - время удерживания маркера t0

В таблице 1 показаны результаты анализа связывания с альбумином выделенных связывающих веществ вместе с данными LCMS из раздела 4.1.

Сокращения, используемые в таблице 1, определены следующим образом.

NRT: эффективное время удерживания на колонках с иммобилизованным человеческим сывороточным альбумином

LCMS: жидкостная хроматография с масс-спектрометрией

MSM: способ масс-спектрометрии

OIM: наблюдаемая масса иона

OIT: наблюдаемый тип иона

IM: способ ионизации

LCRT: эффективное время удерживания в жидкостной хроматографии

LCM: способ жидкостной хроматографии

Таблица 1
Результаты из колонок с иммобилизованным сывороточным альбумином и данные LCMS LCMS №. Структура NRT [мин.] MSM OIM OIT IM LCRT [мин.] LCM 1 16,76 b 846,37 [M+H]+ ES+ 1,78 B 2 17,88 b 845,37 [M+H]+ ES+ 2,28 C 3 17,51 b 888,35 [M+H]+ ES+ 2,52 C 4 15,75 b 852,7 [M+H]+ ES+ 2,88 A 5 14,32 b 840,35 [M+H]+ ES+ 2,59 C 6 14,31 b 953,46 [M+H]+ ES+ 2,58 C 7 14,65 b 839,4 [M+H]+ ES+ 2,58 C 8 15,29 a 906,52 [M+H]+ ES+ 2,77 C 9 14,01 b 952,4 [M+H]+ ES+ 2,57 C 10 15,65 b 860,32 [M+H]+ ES+ 2,38 C 11 14,52 b 888,7 [M+H]+ ES+ 2,78 A 12 14,95 b 957,7 [M-H]- ES- 2,73 A 13 15,29 b 934,78 [M+H]+ ES+ 2,99 A 16 11,88 a 784,28 [M+H]+ ES+ 2,14 C 18 12,37 a 783,34 [M+H]+ ES+ 2,13 C 19 10,82 a 755,28 [M+H]+ ES+ 1,87 C 20 14,8 a 795,37 [M+H]+ ES+ 2,4 C 21 16,26 a 795,37 [M+H]+ ES+ 2,38 C 22 15,55 a 905,47 [M+H]+ ES+ 2,77 C 23 15,61 a 933,54 [M+H]+ ES+ 2,99 C 24 15,76 a 877,44 [M+H]+ ES+ 2,55 C 25 17,48 a 887,49 [M+H]+ ES+ 2,54 C 26 14,98 a 859,44 [M+H]+ ES+ 2,41 C 27 15,01 a 859,45 [M+H]+ ES+ 2,55 C 28 15,39 a 878,4 [M+H]+ ES+ 2,57 C 29 15,66 a 796,4 [M+H]+ ES+ 2,39 C 30 14,36 a 796,44 [M+H]+ ES+ 2,41 C 31 15,77 a 851,51 [M+H]+ ES+ 2,88 C 32 13,9 a 811,29 [M+H]+ ES+ 2,36 C 33 13,57 a 812,23 [M+H]+ ES+ 2,37 C 36 13,89 a 907,59 [M+H]+ ES+ 2,74 C 38 13,53 a 858,6 [M+H]+ ES+ 2,62 C 39 13,68 a 857,62 [M+H]+ ES+ 2,6 C 40 11,44 a 768,6 [M+H]+ ES+ 2,14 C 41 14,98 a 851,7 [M+H]+ ES+ 2,82 C 42 14,35 a 887,65 [M+H]+ ES+ 2,76 C 43 11,36 a 832,6 [M+H]+ ES+ 2,18 C 44 15,04 a 901,72 [M+H]+ ES+ 2,76 C 45 13,8 a 908,66 [M+H]+ ES+ 2,77 C 46 14,48 a 831,6 [M+H]+ ES+ 2,16 C 47 13,73 a 854,7 [M+H]+ ES+ 2,63 C 50 13,74 a 874,6 [M+H]+ ES+ 2,7 C 51 13,59 a 871,6 [M-H]- ES- 2,68 C 52 14,56 a 850,54 [M+H]+ ES+ 2,33 C 53 12,29 a 768,5 [M+H]+ ES+ 2,16 C 54 15,19 a 824,61 [M+H]+ ES+ 2,64 C 55 15,01 a 852,58 [M+H]+ ES+ 2,84 C 59 15,47 a 821,62 [M-H]- ES- 2,62 C 63 13,42 a 822,52 [M+H]+ ES+ 2,11 C 64 14,78 a 902,65 [M+H]+ ES+ 2,78 C 65 12,21 a 767,61 [M+H]+ ES+ 2,13 C 66 9,87 a 740,57 [M+H]+ ES+ 1,92 C 67 10,99 a 739,57 [M+H]+ ES+ 1,91 C 68 14,74 a 840,57 [M+H]+ ES+ 2,60 C 69 14,24 a 868,82 [M+H]+ ES+ 2,84 C 70 14,26 a 867,83 [M+H]+ ES+ 2,83 C 71 14,42 a 895,81 [M+H]+ ES+ 3,06 C 72 13,96 a 908,79 [M+H]+ ES+ 2,77 C

5 Аффинность связывания с рецепторами инсулина

Аффинность связывания с рецепторами инсулина для инсулина, аналога инсулина 1 и соответствующих конъюгатов, перечисленных в таблице 2, определяли согласно описанному в Hartmann et al. (Effect of the long-acting insulin analogues glargine and degludec on cardiomyocyte cell signaling and function. Cardiovasc Diabetol. 2016;15:96). Выделение рецепторов инсулина, встроенных в плазматические мембраны (M-IR), и эксперименты по конкурентному связыванию выполняли, как описано ранее (Sommerfeld et al., PLoS One. 2010; 5(3): e9540). Вкратце, клетки СНО, сверхэкспрессирующие IR, собирали и ресуспендировали в охлажденном на льду буфере 2,25 STM (2,25 М сахароза, 5 мМ Tris-HCl, pH 7,4, 5 мМ MgCl₂, ингибитор протеаз cOmplete) и разрушали с помощью гомогенизатора Даунса с последующей обработкой ультразвуком. Гомогенат покрывали буфером 0,8 STM (0,8 М сахароза, 5 мМ Tris-HCl, pH 7,4, 5 мМ MgCl₂, ингибитор протеаз cOmplete) и подвергали ультрацентрифугированию в течение 90 мин. при 100000g. Плазматические мембраны на границе раздела фаз собирали и дважды промывали фосфатно-солевым буферным раствором (PBS). Конечный осадок ресуспендировали в буфере для разведения (50 мМ Tris-HCl, pH 7,4, 5 мМ MgCl₂, ингибитор протеаз cOmplete) и снова гомогенизировали с помощью гомогенизатора Даунса. Эксперименты по конкурентному связыванию выполняли в буфере для связывания (50 мМ Tris-HCl, 150 мМ NaCl, 0,1% BSA, ингибитор протеаз cOmplete, доведенный до pH 7,8) в 96-луночных микропланшетах. В каждой лунке 2 мкг выделенных мембран инкубировали с 0,25 мг поливинилтолуоловых и полиэтилениминовых гранул для сцинтилляционного анализа сближения (SPA), покрытых агглютинином из зародышей пшеницы. Человеческий Ins, меченный [125I], в постоянных концентрациях (100 пМ) и соответствующие немеченые Ins в различных концентрациях (0,001-1000 нМ) добавляли в течение 12 ч. при комнатной температуре (23°C). Радиоактивность измеряли в равновесном состоянии на сцинтилляционном счетчике для микропланшетов (Wallac MicroBeta, Фрайбург, Германия).

Аффинность связывания с рецепторами инсулина относительно человеческого инсулина для аналога, представленного в таблице 2, включает следующие диапазоны: A (≥ 40%); B (< 20%). Конъюгат человеческий инсулин+связывающее вещество № 5 относится к категории A, тогда как все другие конъюгаты и аналог инсулина 1 были классифицированы как относящиеся к категории B.

Таблица 2
Аффинность связывания с рецептором инсулина B относительно человеческого инсулина 5 Человеческий инсулин A 5 Аналог инсулина 1 B 8 Аналог инсулина 1 B 50 Аналог инсулина 1 B 54 Аналог инсулина 1 B --- Аналог инсулина 1 B

6. Тестирование in vivo - оценка фармакокинетических эффектов

Здоровых геттингенских карликовых свиней с нормогликемией (в возрасте от 8 до 11 месяцев, массой тела ~ от 12 до 18 кг) использовали для оценки фармакодинамических и фармакокинетических эффектов аналогов инсулина очень длительного действия у животных. Свиней содержали в стандартных условиях помещения для животных и кормили один раз в день с доступом к водопроводной воде ad libitum. После голодания в течение ночи свиней обрабатывали путем однократной подкожной инъекции раствора, который содержал плацебо-состав, инсулин или аналог инсулина либо соответствующий конъюгат. Тестировали чистый человеческий инсулин и чистый аналог инсулина 1, а также конъюгат связывающего вещества №. 5 с человеческим инсулином и конъюгаты связывающих веществ 5, 50 и 54 с аналогом инсулина 1.

Сбор крови выполняли через предварительно имплантированные центральные венозные катетеры для определения уровня глюкозы в крови, фармакокинетических параметров и дополнительных биомаркеров из плазмы крови, обработанной K-EDTA. Забор крови начинали перед введением тестируемого препарата (исходный уровень) и повторяли 1-4 раза в день до конца исследования. Во время исследования животных кормили после последнего за день забора крови. За всеми животными регулярно ухаживали, и клинические признаки регистрировались по меньшей мере дважды в день обработки и один раз в день в течение оставшейся продолжительности исследования. За животными тщательно наблюдали в отношении любых клинических признаков гипогликемии, в том числе в отношении поведения, шерстного покрова, выведения с мочой и фекалиями, состояния отверстий тела и любых признаков болезни. В случае тяжелой гипогликемии исследователю разрешалось предоставлять пищу или проводить внутривенную (i.v.) инфузию раствора глюкозы, если прием пищи был невозможен. После последнего забора крови животных транспортировали обратно в не соответствующее требованиям GLP помещение для содержания животных.

Для определения фармакокинетических параметров использовались следующие экспериментальные условия.

6.1 Материалы и химические вещества

MeCN (HiPerSolv Chromanorm), диметилсульфоксид (Uvasol), 2-пропанол, метанол (HiPerSolv Chromanorm), воду (HiPerSolv Chromanorm), муравьиную кислоту (98-100%) приобретали у Merck (Дармштадт, Германия). Аналит и подходящий внутренний стандарт получали от Sanofi. Контрольную плазму крови (обработанную K2-EDTA в качестве антикоагулянта) получали от Seralab (Западный Суссекс, Великобритания).

6.2 Исходный и рабочий растворы тестируемого соединения и внутреннего стандарта

Исходные растворы тестируемого соединения и его внутреннего стандарта получали в смеси MeCN/вода/муравьиная кислота (50:50:1, об./об./об.) в концентрации 1 мг/мл. Рабочие растворы тестируемого соединения и соответствующего внутреннего стандарта получали в одном и том же растворителе в концентрации 100 мкг/мл и 1250 нг/мл соответственно.

6.3 Получение образцов плазмы крови

К части плазмы крови объемом 25 мкл добавляли 10 мкл рабочего раствора внутреннего стандарта (1250 нг/мл) в пробирку Eppendorf на 1,5 мл. После закупоривания и перемешивания добавляли 75 мкл смеси MeCN/метанол (80:20, об./об.), и образцы перемешивали вихревым способом в течение 5 с и перемешивали вихревым способом в течение 10 мин. при примерно 5°C и 3000g. Затем 75 мкл надосадочной жидкости переносили во флакон автоматического пробоотборника, содержащий 75 мкл воды. Флаконы закупоривали, их содержимое перемешивали и анализировали.

6.4 Анализ методом LC-MS/MS

Анализ интактного инсулина методом LC-MS/MS выполняли на Agilent HPLC серии 1290 (Вальдбронн, Германия), соединенном с масс-спектрометром AB Sciex QqQ API 4000 (Дармштадт, Германия). Система LC была оснащена аналитической колонкой Aeris PEPTIDE XB-C18 (100×2,1 мм, размер частиц 3,6 мкм, Phenomenex), работающей при 40°C. Подвижная фаза А состояла из смеси вода/муравьиная кислота/DMSO (100:0,1:1, об./об./об.), и подвижная фаза В состояла из смеси MeCN/муравьиная кислота/DMSO (100:0,1:1, об./об./об.). Программа HPLC начиналась с выдерживания в начальных условиях 2% B в течение 0,5 мин., затем применяли градиент от 2% B до 90% B в течение 7,5 минут, и колонку повторно уравновешивали в течение 2 минут. Скорость потока составляла 600 мкл/мин., и объем 40 мкл вводили в систему. Масс-спектрометр работал в режиме положительной ионизации при напряжении ионораспыления 5500 В, и потенциал декластеризации был оптимизирован для эффективного выделения 5-кратно протонированных молекул. Масс-спектрометр работал в режиме положительной ионизации, и параметры MS, специфичные для соединения, оптимизировали для достижения наилучшей чувствительности. В качестве газа для соударений использовали азот.

Фармакокинетические (PK) параметры период полужизни (t_1/2)и среднее время удержания (MRT) показаны в таблице 3.

Для человеческого инсулина в литературе приведено значение MRT, полученное у юкатанских карликовых свиней с хроническим сахарным диабетом (Lin, S.; Chen, L.-L. H.; Chien, Y.W. The journal of pharmacology and experimental therapeutics, 1998, 286, 959-966). Указанное t_1/2 было рассчитано в виде примерного значения с использованием формулы t_1/2 * 1,44 в соответствии с учебником Clinical Pharmacokinetics: Concepts and applications, Tozer and Rowland, 3rd edition (Publisher Lippincott Williams & Wilkins), 1995, Section II-6.

Как можно видеть, конъюгирование производных инсулина, в данном случае человеческого инсулина или аналога инсулина 1, со связывающими веществами согласно настоящему изобретению оказывало значительное влияние на PK- (фармакокинетические) свойства полученных конъюгатов, что во всех случаях приводило к увеличению t_1/2 и MRT.

Таблица 3
Результаты фармакокинетического исследования чистых видов инсулина по сравнению с конъюгатами № связывающего вещества Структура связывающего вещества Остов PK t_1/2 MRT --- Связывающее вещество отсутствует Человеческий инсулин ~ 2 ч.** 2,8 ч.* 5 Человеческий инсулин 30 ч. 47,2 ч. 5 Аналог инсулина 1 37 ч. 57,7 ч. 8 Аналог инсулина 1 38 ч. 63,3 ч. 50 Аналог инсулина 1 52 ч. 83 ч. 54 Аналог инсулина 1 33 ч. 56,5 ч.

* Из: Lin, S.; Chen, L.-L. H.; Chien, Y.W. The journal of pharmacology and experimental therapeutics, 1998, 286, 959-966.

** Рассчитано по формуле t_1/2=MRT/1,44 в соответствии с Clinical Pharmacokinetics: Concepts and applications, Tozer and Rowland, 3rd edition (Publisher Lippincott Williams & Wilkins), 1995, Section II-6.

Фармакодинамические эффекты некоторых видов инсулина и конъюгатов показаны на фигурах 1 и 2, т. е. представлен эффект в отношении уровня глюкозы в крови после s.c. введения. Данные демонстрировали значительно пролонгированную продолжительность действия для всех тестируемых конъюгатов инсулин-связывающее вещество (> 48 ч.) по сравнению с аналогом инсулина 1 и с человеческим инсулином соответственно, для которых наблюдалась продолжительность действия при тестируемых дозах, составляющая менее 24 ч. Для тестируемых конъюгатов инсулина со сниженной аффинностью связывания с рецепторами инсулина выбранная доза in vivo была выше, чем для соответствующих исходных видов инсулина, которые не тестировались в более высоких дозах во избежание гипогликемических эффектов.

Краткое описание фигур

На фиг. 1 показан эффект снижения уровня глюкозы в крови после s.c. применения конъюгатов аналога инсулина 1 со связывающим веществом № 50 и связывающим веществом № 54 соответственно у (геттингенских) карликовых свиней (12-18 кг, n=3). Оба соединения тестировали в дозе (18 нмоль/кг).

На фиг. 2 показан эффект снижения уровня глюкозы в крови после s.c. применения видов инсулина и конъюгатов инсулина соответственно у (геттингенских) карликовых свиней (19-20 кг, n=3): человеческий инсулин+связывающее вещество № 5 (18 нмоль/кг), человеческий инсулин (3 нмоль/кг), аналог инсулина 1+связывающее вещество № 5 (18 нмоль/кг), аналог инсулина 1 (3 нмоль/кг).

Цитируемая литература

S.; Chen, L.-L. H.; Chien, Y.W. The journal of pharmacology and experimental therapeutics, 1998, 286, 959-966.

Clinical Pharmacokinetics: Concepts and applications, Tozer and Rowland, 3rd edition (Publisher Lippincott Williams & Wilkins), 1995, Section II-6.

Hartmann et al., Effect of the long-acting insulin analogues glargine and degludec on cardiomyocyte cell signaling and function, Cardiovasc Diabetol. 2016;15:96.

Sommerfeld et al., PLoS One. 2010; 5(3): e9540.

Handbook of Pharmaceutical Salts: Properties, Selection, and Use, Stahl and Wermuth (Wiley-VCH, 2002).

ПЕРЕЧЕНЬ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ

<110> Sanofi

<120> Связывающее вещество для пептидов

<130> DE2018/058

<150> EP 18 306 657.0

<151> 2018-12-11

<150> EP 18 306 658.8

<151> 2018-12-11

<150> EP 18 306 659.6

<151> 2018-12-11

<160> 8

<170> BiSSAP 1.3.6

<210> 1

<211> 44

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Ликсисенатид

<400> 1

His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu

1. 5 10 15

Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly Pro Ser

20 25 30

Ser Gly Ala Pro Pro Ser Lys Lys Lys Lys Lys Lys

35 40

<210> 2

<211> 39

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Эксенатид

<400> 2

His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu

1. 5 10 15

Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly Pro Ser

20 25 30

Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser

35

<210> 3

<211> 31

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Семаглутид

<220>

<221> MOD_RES

<222> 2

<223> Aib

<400> 3

His Ala Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Gly

1. 5 10 15

Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Arg Gly Arg Gly

20 25 30

<210> 4

<211> 31

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Дулаглутид

<400> 4

His Ala Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Gly

1. 5 10 15

Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Gly Arg Gly

20 25 30

<210> 5

<211> 21

<212> БЕЛОК

<213> Homo sapiens

<220>

<223> Человеческий инсулин, A-цепь

<400> 5

Gly Ile Val Glu Gln Cys Cys Thr Ser Ile Cys Ser Leu Tyr Gln Leu

1. 5 10 15

Glu Asn Tyr Cys Asn

20

<210> 6

<211> 30

<212> БЕЛОК

<213> Homo sapiens

<220>

<223> Человеческий инсулин, B-цепь

<400> 6

Phe Val Asn Gln His Leu Cys Gly Ser His Leu Val Glu Ala Leu Tyr

1. 5 10 15

Leu Val Cys Gly Glu Arg Gly Phe Phe Tyr Thr Pro Lys Thr

20 25 30

<210> 7

<211> 21

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Аналог инсулина 1, A-цепь

<400> 7

Gly Ile Val Glu Gln Cys Cys Thr Ser Ile Cys Ser Leu Glu Gln Leu

1. 5 10 15

Glu Asn Tyr Cys Asn

20

<210> 8

<211> 29

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Аналог инсулина 1, B-цепь

<400> 8

Phe Val Asn Gln His Leu Cys Gly Ser His Leu Val Glu Ala Leu His

1. 5 10 15

Leu Val Cys Gly Glu Arg Gly Phe His Tyr Thr Pro Lys

20 25

Изобретение относится к сульфонамиду формулы (A), конъюгату, содержащему сульфонамид формулы (I) и активный фармацевтический ингредиент; способу получения конъюгата; фармацевтической композиции, содержащей конъюгат, для применения в качестве лекарственного препарата для лечения заболевания, выбранного из группы, состоящей из гестационного сахарного диабета, сахарного диабета 1 типа, сахарного диабета 2 типа и гипергликемии, и/или для снижения уровней глюкозы в крови. 4 н. и 9 з.п. ф-лы, 2 ил., 3 табл., 6 пр.

1. Сульфонамид формулы (А)

где A выбран из группы, состоящей из атома кислорода, группы -CH₂CH₂-, группы -OCH₂- и группы -CH₂O-;

E представляет собой группу -C₆H₃R-, при этом R представляет собой атом водорода или атом галогена, где атом галогена представляет собой атом фтора или атом хлора;

X представляет собой атом азота или группу -CH-;

m представляет собой целое число в диапазоне от 5 до 17;

n равняется нулю или представляет собой целое число в диапазоне от 1 до 3;

p равняется нулю или 1;

q равняется нулю или 1;

r представляет собой целое число в диапазоне от 1 до 6;

s равняется нулю или 1;

t равняется нулю или 1;

R¹ представляет собой по меньшей мере один остаток, выбранный из группы, состоящей из атома водорода и атома галогена;

R² представляет собой по меньшей мере один остаток, выбранный из группы, состоящей из атома водорода, атома галогена, C1-C3-алкильной группы и галогенированной C1-C3-алкильной группы;

R^x представляет собой атом водорода или активирующую группу.

2. Сульфонамид по п. 1, имеющий формулу (A-1)

где E представляет собой группу -C₆H₃R-, при этом R представляет собой атом водорода или атом галогена, где атом галогена представляет собой атом фтора или атом хлора;

X представляет собой атом азота или группу -CH-;

p равняется нулю или 1;

q равняется нулю или 1;

r представляет собой целое число в диапазоне от 1 до 6;

R¹ представляет собой по меньшей мере один остаток, выбранный из группы, состоящей из атома водорода и атома галогена;

R² представляет собой по меньшей мере один остаток, выбранный из группы, состоящей из атома водорода, C1-C3-алкильной группы и галогенированной C1-C3-алкильной группы;

R^x представляет собой атом водорода или активирующую группу; и

при этом m представляет собой целое число в диапазоне от 5 до 15, если p равняется нулю, или m представляет собой целое число в диапазоне от 7 до 15, если p равняется 1.

3. Сульфонамид по п. 1 или 2, где сульфонамид имеет формулу (A-1-1)

где X представляет собой атом азота или группу -CH-; m представляет собой целое число в диапазоне от 7 до 15; r представляет собой целое число в диапазоне от 1 до 6; q равняется нулю или 1; Hal представляет собой атом галогена, где атом галогена представляет собой атом фтора или атом хлора; и группа HOOC-(CH₂)_m-C₆H₃Hal-O- находится в мета- или пара-положении в фенильном кольце Ph по отношению к группе -S(O)₂-.

4. Сульфонамид по любому из пп. 1-3, где сульфонамид имеет формулу (A-1-1a)

5. Сульфонамид по п. 1 или 2, где сульфонамид имеет формулу (A-1-2)

где X представляет собой атом азота или группу -CH-; m представляет собой целое число в диапазоне от 5 до 15; r представляет собой целое число в диапазоне от 1 до 6; q равняется нулю или 1; и группа HOOC-(CH₂)_m-O- находится в мета- или пара-положении в фенильном кольце Ph по отношению к группе -S(O)₂-.

6. Сульфонамид по любому из пп. 1, 2 или 5, где сульфонамид имеет формулу (A-1-2a)

или формулу (A-1-2b)

или формулу (A-1-2c)

7. Конъюгат, содержащий сульфонамид формулы (I) и активный фармацевтический ингредиент:

где в сульфонамиде формулы (I):

A выбран из группы, состоящей из атома кислорода, группы -CH₂CH₂-, группы -OCH₂- и группы -CH₂O-;

E представляет собой группу -C₆H₃R-, при этом R представляет собой атом водорода или атом галогена, где атом галогена представляет собой атом фтора или атом хлора;

X представляет собой атом азота или группу -CH-;

m представляет собой целое число в диапазоне от 5 до 17;

n равняется нулю или представляет собой целое число в диапазоне от 1 до 3;

p равняется нулю или 1;

q равняется нулю или 1;

r представляет собой целое число в диапазоне от 1 до 6;

s равняется нулю или 1;

t равняется нулю или 1;

R¹ представляет собой по меньшей мере один остаток, выбранный из группы, состоящей из атома водорода и атома галогена;

R² представляет собой по меньшей мере один остаток, выбранный из группы, состоящей из атома водорода, атома галогена, C1-C3-алкильной группы и галогенированной C1-C3-алкильной группы;

где сульфонамид формулы (I) ковалентно связан с активным фармацевтическим ингредиентом таким образом, что концевая карбоксильная группа "а" сульфонамида формулы (I) ковалентно связана с аминогруппой фармацевтически активного средства.

8. Конъюгат по п. 7, где активный фармацевтический ингредиент выбран из группы, состоящей из инсулина, аналога инсулина, GLP-1 и аналога GLP-1.

9. Конъюгат по п. 7 или 8, где активный фармацевтический ингредиент представляет собой инсулин или аналог инсулина, где аминогруппа пептида, с которой ковалентно связан сульфонамид формулы (I), представляет собой эпсилон-аминогруппу лизина, присутствующего в инсулине или аналоге инсулина, или представляет собой N-концевую аминогруппу B-цепи инсулина или аналога инсулина.

10. Способ получения конъюгата, содержащего сульфонамид формулы (I) и активный фармацевтический ингредиент:

где в сульфонамиде формулы (I):

A выбран из группы, состоящей из атома кислорода, группы -CH₂CH₂-, группы -OCH₂- и группы -CH₂O-;

E представляет собой группу -C₆H₃R-, при этом R представляет собой атом водорода или атом галогена, где атом галогена представляет собой атом фтора или атом хлора;

X представляет собой атом азота или группу -CH-;

m представляет собой целое число в диапазоне от 5 до 17;

n равняется нулю или представляет собой целое число в диапазоне от 1 до 3;

p равняется нулю или 1;

q равняется нулю или 1;

r представляет собой целое число в диапазоне от 1 до 6;

s равняется нулю или 1;

t равняется нулю или 1;

R¹ представляет собой по меньшей мере один остаток, выбранный из группы, состоящей из атома водорода и атома галогена;

R² представляет собой по меньшей мере один остаток, выбранный из группы, состоящей из атома водорода, атома галогена, C1-C3-алкильной группы и галогенированной C1-C3-алкильной группы;

где сульфонамид формулы (I) ковалентно связан с активным фармацевтическим ингредиентом таким образом, что концевая карбоксильная группа "а" сульфонамида формулы (I) ковалентно связана с аминогруппой активного фармацевтического ингредиента;

включающий:

(а) получение сульфонамида формулы (Aa)

где X, Y, A, E, R¹, R² и индексы m, n, p, q, r, s, t имеют значения, указанные в п. 1, R^x представляет собой атом водорода или активирующую группу и R³ представляет собой защитную группу или атом водорода; и активного фармацевтического ингредиента, который имеет защитную группу или не имеет защитной группы на C-конце;

(b) осуществление реакции сульфонамида формулы (Aa) и активного фармацевтического ингредиента, который имеет защитную группу или не имеет защитной группы на C-конце, в условиях, подходящих для образования амидной связи между свободной или активированной карбоксильной группой "a" сульфонамида формулы (Aa) и аминогруппой активного фармацевтического ингредиента, который имеет защитную группу или не имеет защитной группы на C-конце;

(c) необязательно удаление одной или обеих защитных групп.

11. Фармацевтическая композиция для применения в качестве лекарственного препарата для лечения заболевания, выбранного из группы, состоящей из гестационного сахарного диабета, сахарного диабета 1 типа, сахарного диабета 2 типа и гипергликемии, и/или для снижения уровней глюкозы в крови, где указанная композиция содержит конъюгат, содержащий сульфонамид формулы (I) и активный фармацевтический ингредиент, по любому из пп. 7-9 в фармацевтически эффективном количестве.

12. Конъюгат, содержащий сульфонамид формулы (I) и активный фармацевтический ингредиент, по любому из пп. 7-9 для применения в качестве лекарственного препарата.

13. Конъюгат, содержащий сульфонамид формулы (I) и активный фармацевтический ингредиент, по любому из пп. 7-9 для применения в качестве лекарственного препарата для лечения заболевания, выбранного из группы, состоящей из гестационного сахарного диабета, сахарного диабета 1 типа, сахарного диабета 2 типа и гипергликемии, и/или для снижения уровней глюкозы в крови.

название	год	авторы	номер документа
КОНЪЮГАТЫ ИНСУЛИНА	2019	Мендес Перес, Мария Ракельманн, Нильс Бьяли, Лоран Гюссреген, Штефан Вилль, Мартин Беме, Томас Филлар Гареа, Ана Корн, Маркус Херманн Бесениус, Мелисса Ридель, Йенс Вернер, Ульрих	RU2809189C2
ПРОИЗВОДНОЕ СУЛЬФОНАМИДА И ЕГО ПРИМЕНЕНИЕ В МЕДИЦИНЕ	2014	Уено Хирокадзу Ямамото Такаси Миядзава Томоко Синкаи Кендзи Арисака Харуми Таканохаси Тосиюки	RU2667520C9
ОРТОЗАМЕЩЕННЫЕ ПРОИЗВОДНЫЕ БЕНЗОЙНОЙ КИСЛОТЫ, СПОСОБ И ПРОМЕЖУТОЧНЫЕ СОЕДИНЕНИЯ ДЛЯ ИХ ПОЛУЧЕНИЯ, ФАРМАЦЕВТИЧЕСКАЯ КОМПОЗИЦИЯ НА ИХ ОСНОВЕ И ПРИМЕНЕНИЕ	2003	Ли Ланна	RU2288912C2
АМИНОТЕТРАЛИНОВЫЕ ПРОИЗВОДНЫЕ, СОДЕРЖАЩИЕ ИХ ФАРМАЦЕВТИЧЕСКИЕ КОМПОЗИЦИИ И ИХ ПРИМЕНЕНИЕ В ТЕРАПИИ	2010	Амберг Вильхельм Оксе Михаэль Ланге Удо Клинг Андреас Бель Бертхольд Хорнбергер Вильфрид Мецлер Марио Хатчинс Чарльз	RU2546649C2
PPAR-ПОДДЕРЖИВАЮЩИЕ СОЕДИНЕНИЯ ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ МЕТАБОЛИЧЕСКИХ ЗАБОЛЕВАНИЙ	2014	Танис Стивен П. Ларсен Скотт Д. Артман Джеральд Д. Iii Паркер Тимоти	RU2687490C2
ЗАМЕЩЕННЫЕ ИМИДАЗОПИРИДИНИЛ-АМИНОПИРИДИНОВЫЕ СОЕДИНЕНИЯ, ПОЛЕЗНЫЕ ПРИ ЛЕЧЕНИИ РАКА	2010	Эшвелл Марк А. Брассард Крис Файликов Антон Хилл Джейсон Кернер Штеффи Лапьерр Жан-Марк Лю Яньбинь Намдев Ниведита Найсвонджер Роберт Палма Росио Тандон Маниш Венсел Дэвид Мацуда Акихиса Иимура Син Ямамото Юко	RU2619463C2
СОЛИ ТИАЗОЛИДИНДИОНА СО СНИЖЕННЫМ СРОДСТВОМ К PPAR ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ НАРУШЕНИЙ ОБМЕНА ВЕЩЕСТВ	2010	Колка Джерард Р. Танис Стивен П. Ларсен Скотт Д.	RU2564661C2
НОВЫЙ СПОСОБ СИНТЕЗА СОЕДИНЕНИЙ ТИАЗОЛИДИНДИОНА	2011	Танис Стивен П. Паркер Тимоти Гэдвуд Роберт К. Артман Джеральд Д. Iii Зеллер Джеймс Р.	RU2593370C2
ГЕТЕРОЦИКЛИЧЕСКОЕ СОЕДИНЕНИЕ	2017	Фудзимото, Дзун Лю, Синь Курасава, Осаму Такаги, Теруфуми Кэри, Дуглас Роберт Банно, Хироси Асано, Ясутоми Кодзима, Такуто	RU2748693C2
ПРОИЗВОДНЫЕ ПИРАЗОЛО[1,5-a]ПИРИМИДИНА И ТИЕНО[3,2-b]ПИРИМИДИНА В КАЧЕСТВЕ МОДУЛЯТОРОВ IRAK-4	2011	Арора Нидхи Чэнь Шаоцин Германн Йоханнес Корнелиус Кугльстаттер Андреас Лабади Шарада Шенви Лин Клара Йеу Йен Лукас Мэтью К. Мор Эми Джеральдин Папп Ева Таламас Франсиско Ксавьер Ваннер Ютта Чжай Цзаньшэн	RU2604062C2

EP 3156066 A1, 19.04.2017
WO 2014158900 A1, 02.10.2014
US 20170281709 A1, 05.10.2017
WO 2010130638 A1, 18.11.2010
RU 2016130933 A, 01.02.2018.

СВЯЗЫВАЮЩЕЕ ВЕЩЕСТВО ДЛЯ ПЕПТИДОВ Российский патент 2023 года по МПК C07D213/82 C07D239/22 C07K14/62 A61K47/54 A61P3/10

Описание патента на изобретение RU2808687C2

Похожие патенты RU2808687C2

Иллюстрации к изобретению RU 2 808 687 C2

Реферат патента 2023 года СВЯЗЫВАЮЩЕЕ ВЕЩЕСТВО ДЛЯ ПЕПТИДОВ

Формула изобретения RU 2 808 687 C2

Документы, цитированные в отчете о поиске Патент 2023 года RU2808687C2

RU 2 808 687 C2