Способ лечения дефектов роговицы различной этиологии Российский патент 2023 года по МПК A61F9/07 A61K35/16 A61P27/02 

Предлагаемое изобретение относится к офтальмологии и предназначено для лечения пациентов с дефектами роговицы различной этиологии.

Роговица постоянно подвержена влиянию различных агрессивных факторов внешней среды из-за своих топографических особенностей. Эрозии и язвы роговицы являются чаще всего хроническим процессом, пусковым механизмом развития которых являются: инфекционный процесс, ожоги, механическая травма роговицы, хирургическое вмешательство.

Традиционная консервативная терапия пациентов с повреждениями роговицы включает применение антибактериальных препаратов, препаратов нуклеинового ряда, декспантенола, солкосерила для ускорения репаративных процессов в роговице. Однако применение антибактериальных и противовирусных препаратов оказывает угнетающее действие на процессы репарации и регенерации, учитывая механизм их действия, заключающийся в нарушении процессов синтеза ДНК, что в конечном итоге нередко приводит к необходимости хирургического лечения, включая пересадку роговицы.

Хирургическое лечение дефектов роговицы включает поверхностную кератэктомию, с последующим укрытием дефекта амниотической мембраной (Макаров П.В. и др. Российский офтальмологический журнал, 2015, N2, С. 41-44). Однако такое лечение не всегда сопровождается восстановлением ткани роговицы, в связи с чем продолжается поиск наиболее эффективного способа лечения дефектов роговицы различной этиологии.

Альтернативным методом лечения является применение аутологичных препаратов крови, содержащих факторы роста для ускорения процессов репарации тканей глаза (цельная аутокровь, лейкотромбоцитарная масса, богатая тромбоцитами плазма). Наиболее перспективным является применение обогащенной тромбоцитами плазмы (plateletrichplasma - PRP). На протяжении многих лет она успешно используется для купирования воспаления и ускорения регенерации различных тканей (Foster Т.Е., et al. Platelet-rich plasma: from basic science to clinical applications. Am. J. Sports Med. 2009, vol. 37, №11, pp. 2259-2272).

При лечении повреждения роговицы главной задачей является купирование воспалительной реакции, усиление и ускорение репарации, чего можно добиться посредством применения биологически активных пептидов, содержащихся в гранулах тромбоцитов человека. Известно, что альфа-гранулы тромбоцитов содержат более 30 цитокинов и факторов роста, которые способствуют улучшению репаративных процессов в тканях. Факторы роста, высвобождаемые из активированных тромбоцитов, инициируют и модулируют заживление ран (Nurden А.Т., et al. Platelet sand wound healing. Front. Biosci., 2008, v. 13,pp. 3532-3548).

Известен способ лечения герпетических эрозий роговицы с помощью богатой тромбоцитами плазмы (PRP). Первый этап включает 3 недели, на протяжении которых проводят противовирусную, антибактериальную и репаративную терапию. На втором этапе лечения после курса противовирусной терапии, инсталлируют PRP 6 раз в день в сочетании с субконъюнктивальной инъекцией PRP 1 раз в неделю. Длительность лечения составляет от 3 до 5 недель. При такой форме применения PRP отсутствие клинического эффекта в ряде случаев может быть связано с недостаточной концентрацией цитокинов в месте повреждения роговицы за счет смывания или разбавления PRP слезной жидкостью (патент RU 2653260 С1, опубл. 05.07.2018).

Известен способ лечения эрозивных и других повреждений роговицы с помощью аутологичного тромбофибринового сгустка, который фиксируют амниотической мембраной. Для получения сгустка у пациента производят забор 40-60 мл венозной крови непосредственно перед операцией, после одноступенчатого центрифугирования отбирали плазму, ближайшую к эритроцитам, избегая слоя лимфоцитов. Концентрация тромбоцитов в PRP в 2-3 раза выше, чем в цельной крови. Один миллилитр полученной PRP помещали в каждую лунку 4-луночного планшета с плоским дном и добавляли 50 мкл 10% хлорида кальция для активации, затем инкубировали при температуре 37°С в течение 30 минут. Через 30 минут формировался сгусток PRP, готовый к наложению на дефект поверхности роговицы с фиксацией его под амниотической мембраной (Alio J.L., et al. The role of "eye platelet rich plasma" (E-PRP) for wound healing in ophthalmology. Curr. Pharm. Biotechnol. 2012, Jun; 13(7): 1257-65).

Недостатками известного способа является низкая клиническая эффективность, что, вероятно, связано с преждевременной элиминацией из сгустка короткоживущих рост-стимулирующих цитокинов, а также использование активатора свертывания (хлорид кальция), что приводит к необходимости вскрытия пробирки, а также к увеличению риска контаминации посторонней микрофлорой. Недостатком способа является также отсутствие стандартизации плазмы по количеству функционирующих тромбоцитов и в связи с этим неоднозначность получаемого эффекта у различных больных.

Наиболее близким к заявляемому способу - прототипом, является способ лечения глубоких дефектов роговицы, заключающийся в следующем. На первом этапе у пациента из кубитальной вены забирают кровь в объеме 2 мл в пробирку с антикоагулянтом ЭДТА для подсчета количества и морфофункционального статуса тромбоцитов. На основании полученных данных рассчитывают требуемое количество крови, необходимое для получения плазмы, обогащенной тромбоцитами. Затем у пациента из вены повторно забирают кровь в стерильную «сухую» пробирку без гемоконсерванта, охлаждают и транспортируют в течение 30-60 минут в лабораторию. Плазму получают путем одноэтапного центрифугирования из охлажденной нестабилизированной крови. Затем с сохранением стерильности из пробирки отбирают надосадочную плазму с тромбоцитами. Плазму с тромбоцитами помещают в стерильную емкость выдерживают при комнатной температуре (18-25°С) до образования геля. После констрикции сгусток, характеризующийся содержанием функционально полноценных тромбоцитов в концентрации не менее 240×10⁹кл/л, размещают на роговице, покрывают его амниотической мембраной и фиксируют швами. Затем субконъюнктивально в 4-х квадрантах по лимбу вводят аутологичную сыворотку в общем объеме 0,5 мл и проводят тарзорафию. Процедуру повторяют 1 раз в неделю до полной эпителизации (патент RU 2699206 С1, опубл. 03.09.2019).

Недостатками известного способа являются трудоемкость и длительность лечения.

Задачей изобретения является дальнейшее совершенствование способа лечения дефектов роговицы с использованием тромбоцито-фибриновой пленки, сформированной из аутоплазмы.

Техническим результатом предлагаемого изобретения является упрощение известного способа и сокращение его длительности.

Технический результат достигается за счет использования тромбоцито-фибриновой пленки, сформированной из аутоплазмы, характеризующейся содержанием функционально полноценных тромбоцитов в концентрации не менее 1,0-1,1×10⁹кл/л, которую помещают на роговицу и фиксируют мягкой контактной линзой

Предлагаемый способ заключается в следующем. У пациента перед лечением производят забор венозной крови без добавления гемоконсерванта, которую помещают в пробирку АРМ, предназначенную для PRP- терапии. Затем пробирку центрифугируют при 3400-3500 оборотов в минуту в течение 4-5 минут и получают плазму, обогащенную тромбоцитами. Далее полученную плазму, обогащенную тромбоцитами, помещают в стерильную емкость и инкубируют в течение 15-30 минут при комнатной температуре до образования фибринового сгустка, из которого с помощью пресс-формы формируют тромбоцито-фибриновой пленку толщиной 0,2-0,3 мм, диаметром 10-11 мм, с содержанием тромбоцитов в концентрации не менее 1,0-1,1×10⁹кл/л, которую укладывают на роговицу и накрывают мягкой контактной линзой.

В качестве пресс-формы может быть использована любая коммерчески доступная пресс-форма для получения офтальмологических изделий.

Важным аспектом предлагаемого способа является форма препарата в виде тромбоцито-фибриновой пленки, которая позволяет обеспечить целевую концентрацию цитокинов в течение длительного времени. Использование препарата в виде тромбоцито-фибриновой пленки обеспечивает медленный выход из клеток рост-стимулирующих и противовоспалительных цитокинов. Таким образом, можно получить более длительное, постепенное терапевтическое воздействие непосредственно в зоне повреждения роговицы пациента.

Важным аспектом является также использование пробирки АРМ для обработки цельной крови с целью получения плазмы, с содержанием тромбоцитов в концентрации не менее 1,0-1,1×10⁹кл/л. Использование терапевтически значимого уровня биологически активных факторов в зоне повреждения в виде тромбоцито-фибриновой пленки, содержащей функционально полноценные тромбоциты в определенной концентрации, гарантированной использованием пробирки АРМ для обработки крови, обеспечивает наиболее полноценный эффект эпителизации в зоне повреждения роговицы.

Пример 1.

Пациент М., 86 лет, поступил в Новосибирский филиал ФГАУ «НМИЦ «МНТК» Микрохирургия глаза» с диагнозом: нейротрофический кератит OD. Обследование до лечения:

VIS OD 0,04 н/к

OS 0,5cyl-0,75ax 78=0,75

Выраженный болевой синдром, перикорнеальная инъекция, отек роговицы, обширный эпителиальный дефект роговицы, изъявления роговицы. На фиг. 1 представлена фотография роговицы пациента до лечения.

Пациенту проведено лечение, включающее антибактериальную терапию, кератопластическую терапию, слезозаменители, контактную линзу.

Обследование после лечения: слабо положительная динамика.

Пациенту проведено лечение заявляемым способом с использованием тромбоцито-фибриновой пленки.

Перед лечением у пациента произведен забор 15 мл крови из вены с использованием стерильной пробирки АРМ для обработки крови (регистрационное удостоверение №РЗН 2020/12091 от 30.09.2020), которую центрифугировали при 3400 оборотов в минуту в течение 5 минут .Затем из пробирки отобрана надосадочная плазма, обогащенная тромбоцитами, с помощью шприца объемом 10 мл и выдержана при комнатной температуре (18-25°С) в течение 15-30 минут до образования фибринового сгустка. Из полученного сгустка с помощью пресс-формы сформирована тромбоцито-фибриновая пленка толщиной 0,2 мм, диаметром 10 мм, с содержанием тромбоцитов не менее 1,0-1,1×10⁹кл/л., которая уложена на роговицу и фиксирована мягкой контактной линзой на 5 дней.

Обследование после лечения:

VIS OD 0,5 cyl- 1,25ах0=0,4

OS 0,5 cyl-0,75ax 78=0,75

Жалобы на болевой симптом отсутствовали, тромбоцито-фибриновая пленка лизировалась на третий день после фиксирования на роговице. На фиг. 2 представлена фотография роговицы пациента после лечения. Глаз спокойный, роговица прозрачная, эпителизация полная.

Пример 2.

Пациент С., 64 года, поступил в Новосибирский филиал ФГАУ «НМИЦ «МНТК» Микрохирургия глаза» с диагнозом: посттравматический кератоконъюнктивит OS, проводимое лечение было неэффективно.

VIS OD 0.8 при поступлении

OS 0,01

При поступлении диффузный отек и инфильтрация со снижением прозрачности роговицы, обширная эрозия и дисцеминтит в парацентральной части роговицы. На фиг. 3 представлена фотография роговицы пациента до лечения.

Проведен курс лечения, включающий кератопластическую терапию, слезозаменители, контактную линзу. Динамика слабо положительная, эрозия уменьшилась, эпителизация рыхлая.

Пациенту проведено лечение заявляемым способом с использованием тромбоцито-фибриновой пленки.

Перед лечением у пациента произвели забор 15 мл крови из вены с использованием стерильной пробирки АРМ для обработки крови (регистрационное удостоверение №РЗН 2020/12091 от 30.09.2020), которую центрифугировали при 3500 оборотов в минуту в течение 4 минут. Затем полученную плазму, обогащенную тромбоцитами, забирали с помощью шприца объемом 10 мл, переносили в стерильную пробирку и инкубировали при комнатной температуре (18-25°С) в течение 15-30 минут до образования фибринового сгустка. Из полученного сгустка с помощью пресс-формы формировали тромбоцито-фибриновую пленку толщиной 0,3 мм, диаметром 11 мм, с содержанием тромбоцитов в концентрации не менее 1,0-1,1×10⁹кл/л, которую укладывали на роговицу и фиксировали мягкой контактной линзой на 7 дней.

На фиг. 4 представлена фотография роговицы пациента после лечения. Повышение прозрачности роговицы, полная эпителизация.

Использование предлагаемого способа позволяет обеспечить полноценную эпителизацию дефектов роговицы с сокращением сроков лечения и сохранением прозрачности роговицы.

Изобретение относится к офтальмологии, а именно к лечению дефектов роговицы различной этиологии. Для этого у пациента производят забор крови из вены с использованием стерильной пробирки АРМ для обработки крови, предназначенной для получения плазмы, обогащенной тромбоцитами. Полученную плазму, обогащенную тромбоцитами, помещают в стерильную емкость и инкубируют при комнатной температуре в течение 15-30 мин до образования сгустка, из которого с помощью пресс-формы формируют тромбоцито-фибриновую пленку толщиной 0,2-0,3 мм, диаметром 10-11 мм, с содержанием тромбоцитов в концентрации не менее 1,0-1,1×10⁹ кл/л, которую укладывают на роговицу и фиксируют мягкой контактной линзой. Изобретение обеспечивает сокращение длительности лечения. 2 з.п. ф-лы, 4 ил., 2 пр.

1. Способ лечения дефектов роговицы различной этиологии, включающий получение аутоплазмы, обогащенной тромбоцитами, путем одноэтапного центрифугирования из нестабилизированной крови, инкубацию ее при комнатной температуре до образования сгустка, размещение на роговице и фиксирование, отличающийся тем, что для получения плазмы, обогащенной тромбоцитами, используют пробирку АРМ для обработки крови, далее полученную плазму, обогащенную тромбоцитами, помещают в стерильную емкость и инкубируют при комнатной температуре в течение 15-30 мин до образования сгустка, из которого с помощью пресс-формы формируют тромбоцито-фибриновую пленку толщиной 0,2-0,3 мм, диаметром 10-11 мм, с содержанием тромбоцитов в концентрации не менее 1,0-1,1×10⁹ кл/л, которую укладывают на роговицу и фиксируют мягкой контактной линзой на 5-7 дней.

2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что пробирку АРМ, содержащую нестабилизированную кровь, центрифугируют при 3400-3500 об/мин в течение 4-5 мин.

3. Способ по п. 1, отличающийся тем, что в качестве стерильной емкости для инкубации аутоплазмы используют стерильную пробирку или шприц объемом 10 мл.