Лечение резистентного бактериального кератита с помощью мягкой контактной линзы на квантовых точках Российский патент 2024 года по МПК A61F9/00 A61K41/00 G02C7/04 

Группа изобретений относится медицине, а именно к офтальмологии и может быть использована в лечении резистентного бактериального кератита.

Инфекционные кератиты представляют собой гомогенную группу глазных заболеваний, сопровождающихся потерей роговичного эпителия, стромальной лейкоцитарной инфильтрацией и/или деструктивным распадом тканей, возникающих при нарушении защитных механизмов глазной поверхности.

Исходы инфекционного кератита, при отсутствии этиопатогенетического лечения, сопровождаются значительным снижением зрительных функций, вплоть до полной слепоты (25% случаев в популяции) или анатомической потери глазного яблока; частота энуклеаций при этом составляет до 23,7%.

Особенностью бактериального кератита является его быстрое прогрессирование. С наиболее вирулентными бактериями разрушение роговицы может произойти в течение 24-48 часов. Изъязвление роговицы, образование стромального абсцесса, окружающий отёк и воспаление переднего отрезка глаза – характерные особенности этого заболевания. Поэтому ранняя диагностика и лечение являются ключом к минимизации любых последствий, связанных с этим заболеванием.

Стандартом лечения бактериального кератита является эмпирически назначаемая местная антибактериальная терапия, которая должна быть начата незамедлительно. Большинство случаев бактериального кератита лечат с помощью эмпирически назначаемых антибиотиков широкого спектра действия и не требующих идентификации возбудителя. Известны различные варианты лечения: монотерапия фторхинолонами (Ципрофлоксацин 0,3%, офлоксацин 0,3% и левофлоксацин 1,5%) или комбинированная антибактериальная терапия (Цефазолин или Ванкомицин 25-50 мг/мл + Тобрамицин 0,3% или Гентамицин 0,3%).

В настоящее время одной из актуальнейших и дискутабельных тем в офтальмологии остается проблема резистентности инфекционных агентов к эффективным антиинфекционным средствам. Развитие антибиотикорезистентности в значительной степени обусловлено множеством факторов, в том числе чрезмерным использованием/злоупотреблением антибактериальных препаратов в сельскохозяйственном секторе, неуверенностью в правильной постановке диагноза (например, бактериальная инфекция или вирусная инфекция), что приводит к ненадлежащему использованию антибиотиков, финансовым стимулам фармкомпаний для назначения антибиотиков, а также безрецептурной покупки антибиотиков среди населения. С генетической точки зрения бактерии в первую очередь развивают антибиотикорезистентность посредством двух стратегий, а именно генетической мутационной устойчивости и горизонтальным переносом генов. Совокупность этих факторов обостряет необходимость поиска новых альтернатив в борьбе с глазными инфекционными заболеваниями.

На сегодняшний день, особый интерес представляют перспективы применения флуоресцентных полупроводниковых нанокристаллов, называемых квантовыми точками (КТ) в лечении резистентных инфекционных воспалительных заболеваний. Квантовые точки представляют собой полиморфные многослойные, размером от единиц до 100 нм, кристаллы сферической, эллиптической и других форм, которые обычно синтезируют из элементов групп II-VI или III-V периодической таблицы Менделеева Д.И. Для повышения активности квантовых точек обычно применяют структуру типа ядро/оболочка. Оболочка, выполняемая из другого полупроводника, значительно увеличивает активность и химическую устойчивость квантовых точек. Функционализация квантовых точек определяет их биосовместимость и проводится тиолированными молекулами полиэтиленгликоля, полиэтиленамином, и многими др. Квантовые точки под действием источников возбуждения (освещения) различной длины волны обладают повышенными реакционными свойствами. Способность квантовых точек к образованию активных форм кислорода (супероксидных радикалов), которые обладают высокоспецифичным действием на возбудителей инфекционных заболеваний, дают нам дальнейшую перспективу их применения.

Таким образом, проблема, на решение которой направлена заявляемая группа изобретений - разработка офтальмологического устройства, способа изготовления офтальмологического устройства и способа лечения, позволяющих достичь полного излечения резистентного бактериального кератита.

Техническим результатом заявляемой группы изобретений является расширение арсенала средств для борьбы с резистентным бактериальным кератитом, полное излечение резистентного бактериального кератита.

Для реализации заявленного технического результата в первом варианте заявляемой группы изобретений заявлено офтальмологическое устройство для лечения резистентного бактериального кератита, включающее контактную линзу, содержащую квантовые точки, выбранные из группы CdTe/Cd с длиной волны флуоресценции 710 нм, InP/ZnSe/ZnS с длиной волны флуоресценции 650 нм.

В качестве контактной линзы используют мягкую контактную линзу.

Квантовые точки CdTe/Cd, InP/ZnSe/ZnS используют в виде 10% коллоидного раствора.

В другом варианте заявляемой группы изобретений заявлен способ изготовления офтальмологического устройства для лечения резистентного бактериального кератита, включающего контактную линзу, содержащую квантовые точки, выбранные из группы CdTe/Cd с длиной волны флуоресценции 710 нм, InP/ZnSe/ZnS с длиной волны флуоресценции 650 нм, в котором контактную линзу обрабатывают путем погружения на 30 минут в 10% коллоидный раствор квантовых точек, выбранных из группы CdTe/Cd с длиной волны флуоресценции 710 нм, InP/ZnSe/ZnS с длиной волны флуоресценции 650 нм, после чего контактную линзу промывают в течение 30 секунд в сбалансированном солевом растворе BSS.

В качестве контактной линзы используют мягкую контактную линзу.

Далее в заявляемой группе изобретений заявлен способ лечения резистентного бактериального кератита, включающий помещение на глаз по крайней мере на 5 дней офтальмологического устройства для лечения резистентного бактериального кератита, включающего контактную линзу, содержащую квантовые точки, выбранные из группы CdTe/Cd с длиной волны флуоресценции 710 нм, InP/ZnSe/ZnS с длиной волны флуоресценции 650 нм, при этом в течение всего периода ношения контактной линзы осуществляют инстилляции антиинфекционного агента по 0,05 мл по крайней мере 4 раза в день.

Антиинфекционный агент выбран из группы: левофлоксацин, тобрамицин.

Левофлоксацин используют в виде нативного раствора в концентрации 0,5 %.

Тобрамицин используют в виде нативного раствора в концентрации 0,3%.

Изобретение поясняется чертежами.

На фиг.1 показаны технические характеристики квантовых точек CdTe/Cd 710.

На фиг.2 показан спектр поглощения квантовых точек CdTe/Cd 710.

На фиг.3 показан спектр флуоресценции CdTe/Cd 710.

На фиг.4 показаны технические характеристики квантовых точек InP/ZnSe/ZnS 650.

На фиг.5 показан спектр поглощения квантовых точек InP/ZnSe/ZnS 650.

На фиг.6 показан спектр флуоресценции InP/ZnSe/ZnS 650.

Пример 1 (синтез квантовых точек)

Спектральные и физико-химические требования, предъявляемые к квантовым точкам, для последующего использования в офтальмологии были следующими:

- широкий спектр поглощения световых волн от 350 до 750 нм, для возможности их активации любым источником освещения, в том числе в видимой области спектра;

- узкий спектр флуоресценции, в диапазоне от 550 до 650 нм, для минимизации токсического повреждения интраокулярных структур после активации;

- полная растворимость в воде, для минимизации не запланированных физических взаимодействий, после интраокулярной имплантации;

- квантовый выход не более 15%, как отношение количества испускаемых и поглощаемых фотонов, для минимизации нежелательных оптических эффектов – разрушение фоторецепторов;

- cвойства поверхности: меркаптопропионовая кислота, бифункциональная молекула, содержащая как карбоновую кислоту, так и тиоловые группы. Позволяет минимизировать самоадгезию квантовых точек;

- функионализация: карбоксильная группа -СООН, позволяющая формировать химически активные соединения при взаимодействии с активными молекулами;

- ионные взаимодействия: противоион тетраметиламмоний, используется как поверхностно-активное вещество при синтезе ферромагнитных жидкостей, чтобы препятствовать слипанию её частиц.

Используемые реактивы: октадецен (Fluka, 90%), селен (Merck, 99%), теллур (Aldrich, 99,8%), олеиламин (90 %, Sigma), метанол (HPLC), триоктилфосфин (Sigma, 90%), ацетат цинка (Sigma, 99%), трис-(диэтиламино)фосфин (Aldrich, 97%), 3-меркаптопропионовая кислота (Enamine, 95%). Остальные реагенты были химически чистые. 

Спектры поглощения образцов измеряли на спектрофотометре UV-Vis-NIR Cary 5000 (с шагом 1 нм). Спектры фотолюминесценции измеряли на спектрофлуориметре HORIBA Fluorolog-3. 

Синтез ядер CdTe проводили в соответствии с методикой [1].  Формирование насыщенной кадмием поверхности (CdTe/Cd) проводили прогреванием 5% масс. дисперсии CdTe в 0.2М олеате кадмия в октадецене при 180°С в среде аргона. За прохождением реакции следили по спектрам флуоресценции до достижения стабильного положения (710 нм) основного пика. Время реакции составило 20 мин.  

Синтез InP/ZnSe/ZnS проводили в соответствии с методикой [2].   

Солюбилизацию в водную фазу проводили с использованием 3- меркаптопропионовой кислоты. Модификацию и очистку образцов проводили по методике [3]. 

Полученные растворы экспортировались как бактериологически чистые. 

По техническим характеристикам были синтезированы:

1. Квантовые точки CdTe/Cd 710, которые поставлялись в форме 10% коллоидного раствора в объеме 100 мл. На наружной поверхности покрыты меркаптопропионовой кислотой, функционализированы карбоксильной группой. В качестве противоиона – тетраметиламмоний. Квантовый выход составляет 7%. Длина волны флуоресценции – 710 нм.

2. Квантовые точки InP/ZnSe/ZnS 650, которые поставлялись в форме 10% коллоидного раствора в объеме 100 мл. На наружной поверхности покрыты меркаптопропионовой кислотой, функционализированы карбоксильной группой. В качестве противоиона – тетраметиламмоний. Квантовый выход составляет 13%. Длина волны флуоресценции – 650 нм.

Пример 2 (Оценка токсичности синтезированных квантовых точек)

Для оценки токсичности синтезированных квантовых точек производилось их интравитреальное введение лабораторным кроликам породы Шиншилла, мужского пола, весом 3,5 килограмма. Кролики получали интравитреальное введение в объеме 0,05 мл 10%, 0,1%, 0,01%, 0,001% CdTe/Cd 710 или InP/ZnSe/ZnS 650 растворов квантовых точек. Оценка токсического повреждения зрительного анализатора осуществлялась с помощью клинического наблюдения на 1, 7 и 14 сутки после интравитреального введения, а также проведения электрофизиологического исследования. Растворы квантовых точек CdTe/Cd 710 и InP/ZnSe/ZnS 650 в десяти кратном (0,1%) и более разведении не вызывали клинических и электрофизиологических изменений со стороны зрительного анализатора и проводящих структур.

Пример 3 (Обработка контактной линзы, используемой в лечении резистентного бактериального кератита).

Мягкую контактную линзу пролонгированного ношения, например Air Optix (Focus) Night & Day, погружают в 10% коллоидный раствор квантовых точек InP/ZnSe/ZnS или CdTe/Cd на 30 минут. Далее контактную линзу промывают в сбалансированном солевом растворе BSS в течение 30 секунд.

Пример 4 (Спектрофотометрия мягкой контактной линзы при промывании в сбалансированном солевом растворе BSS (доказательство наличия квантовых точек в структуре)

Особенности фотолюминесценции мягкой контактной линзы, погруженной в 10% коллоидный раствор квантовых точек CdTe/Cd 710 или InP/ZnSe/ZnS 650 и в дальнейшем промытую в сбалансированном солевом растворе BSS, исследовались в НОЦ «Наноматериалы и нанотехнологии» Уральского федерального университета (г. Екатеринбург) на флуоресцентном спектрометре Perkin Elmer LS55. Спектры возбуждения и свечения измерялись со скоростью сканирования 60 нм/мин при ширине щелей возбуждающего и регистрирующего монохроматоров 5 нм. Изменений спектральных характеристик мягкой контактной линзы, как при однократном, так и при последующих промываниях раствора BSS (спектра поглощения и спектра флуоресценции) выявлено не было, что говорит о наличии квантовых точек в структуре мягкой контактной линзы. Спектральная оценка пересчета концентрации КТ в контактной линзе после промывания соответствует 0,1% раствору КТ.

Пример 5 (Моделирование резистентного бактериального кератита)

В клиническую модель резистентных к Левофлоксацину возбудителей острого кератита вошел внутрибольничный штамм S. Aureus.

В клиническую модель резистентных к Тобрамицину возбудителей острого кератита вошел внутрибольничный штамм Pseudomonas aeruginosa.

В качестве объекта исследования изучались лабораторные Новозеландские кролики, которые были поделены на две группы.

Ход оперативного вмешательства:

на правых глазах животных в условиях операционной ветеринарной клиники с офтальмологическим профилем OOO «Здоровье животных» под операционным микроскопом с соблюдением всех правил асептики инициировался бактериальный кератит, путем центральной скарификации эпителия роговицы с нанесением радиальных разрезов до десцеметовой оболочки после тугого пеленания и предварительной эпибульбарной анестезии проксиметакаином гидрохлоридом 0,5 %. Для дополнительной индукции иммунного ответа также выполнялось вскрытие лимбальной конъюнктивы на протяжении трех часовых меридианов в височном секторе.

В качестве индуктора воспаления были взяты: для первой группы - культура внутрибольничного штамма Золотистого стафилококка (S. Aureus), для второй группы - культура внутрибольничного штамма синегнойной палочки (Pseudomonas aeruginosa), выделенные из клинического материала ГАУЗ СО «Клинико-диагноcтический центр», г. Екатеринбург. Предварительное исследование антибиотикочувствительности исследуемого штамма микроорганизма диско-диффузионным методом к антибактериальным препаратам показало отсутствие чувствительности к фторхинолонам, зона задержки роста (ЗЗР) не превышала 6 и 8 мм соответственно. Для приготовления суспензии исследуемых микроорганизмов (инокулюма) использовали стандартный инокулюм, соответствующий по плотности 0,5 по стандарту МакФарланда и содержащий 1,5·108 КОЕ/мл S. Aureus для первой группы, и 1,5·108 КОЕ/мл Ps. Aeruginosa – для второй. Контроль оптической плотности суспензии осуществляли спектрофотометрически (денситометрически). Инокулюм использовали в течение 1-3 мин после приготовления. Нож для основного разреза погружался в инокулюм с последующим введением в структуры роговицы.

На 2 сутки динамического наблюдения у всех лабораторных животных были выявлены клинические признаки бактериального кератита, которые сопровождались гиперемией и инфильтрацией роговицы в месте ее индуцированного повреждения. Этот период явился стартовым для начала проведения антиинфекционной терапии по вышеописанной схеме.

Пример 6

(Лечение резистентного бактериального кератита с использованием мягкой контактной линзы, содержащей квантовые точки CdTe/Cd МРА 710, и инстилляций эпибульбарно Левофлоксацина 0,5 %).

В качестве объекта исследования изучались лабораторные Новозеландские кролики (№7) – 4 женские особи, 3 мужские, которым производилась индукция бактериального кератита, путем введения штамма S.Aureus в структуры роговицы. Лабораторных животных разделили на 2 группы. Кролики 1 группы после манифестации клинической картины бактериального кератита получали инстилляции капель левофлоксацина 0,5% в конъюнктивальный мешок каждые 2 часа на протяжении 7 дней. (С целью анатомической сохранности глазного яблока с 4 дня на всех кроликов 1 группы была надета мягкая контактная линза, содержащая квантовые точки CdTe/Cd MPA 710 с продолжением инстилляций капель левофлоксацина 0,5% в прежнем режиме). На кроликов 2 группы была надета мягкая контактная линза, содержащая квантовые точки CdTe/Cd MPA 710, и производились инстилляции капель левофлоксацина 0,5% в аналогичном режиме. В качестве методов динамического наблюдения использовалась фоторегистрация переднего отрезка с окрашиванием флуоресцеином и оптическая когерентная томография переднего отрезка. В данном клиническом эксперименте мягкая контактная линза, содержащая квантовые точки CdTe/Cd MPA 710, в комплексе с антиинфекционным агентом в виде раствора капель левофлоксацин 0,5% продемонстрировал более выраженную клиническую эффективность в отношении штамма S.Aureus, в сравнении с монотерапией левофлоксацином 0,5%.

Пример 7

(Лечение резистентного бактериального кератита с использованием мягкой контактной линзы, содержащей квантовые точки InP/ZnSe/ZnS 650, и инстилляций эпибульбарно Тобрамицина 0,3%).

В качестве объекта исследования изучались лабораторные Новозеландские кролики (№6) – 2 женские особи, 4 мужские, которым производилась индукция бактериального кератита, путем введения штамма Ps. Aeruginosa в структуры роговицы. Лабораторных животных разделили на 2 группы. Кролики 1 группы после манифестации клинической картины бактериального кератита получали инстилляции капель тобрамицин в конъюнктивальный мешок каждые 2 часа на протяжение 3 дней с полным отсутствием положительной клинической динамики. (С целью анатомической сохранности глазного яблока с 4 дня на всех кроликов 1 группы была надета контактная линза, содержащая квантовые точки InP/ZnSe/ZnS 650 с продолжением инстилляций капель Тобрамицина 0,3% в прежнем режиме). Кролики второй группы, на глаза которых изначально была надета мягкая контактная линза, содержащая квантовые точки InP/ZnSe/ZnS 650, и получавшие инстилляции капель Тобрамицина 0,3% демонстрировали положительную динамику в отношении обратного развития симптомов с 3 дня терапии.

В качестве методов динамического наблюдения использовалась фоторегистрация переднего отрезка с окрашиванием флуоресценом и оптическая когерентная томография переднего отрезка.

Клинический эксперимент продемонстрировал высочайшую эффективность работы мягкой контактной линзы, содержащей квантовые точки InP/ZnSe/ZnS 650, в комплексе с инстилляциями раствора капель Тобрамицин 0,3% в отношении резистентного к монотерапии тобрамицином штамма синегнойной палочки.

Пример 8

(Лечение резистентного бактериального кератита с использованием мягкой контактной линзы, содержащей квантовые точки CdTe/Cd MPA 710, и инстилляций эпибульбарно Тобрамицина 0,3%).

В качестве объекта исследования изучались лабораторные Новозеландские кролики (№8) – 4 женские особи, 4 мужские, которым производилась индукция бактериального кератита, путем введения штамма Ps. Aeruginosa в структуры роговицы. Лабораторных животных разделили на 2 группы. Кролики 1 группы после манифестации клинической картины бактериального кератита получали инстилляции капель тобрамицина 0,3% в конъюнктивальный мешок каждые 2 часа на протяжении 7 дней. (С целью анатомической сохранности глазного яблока с 4 дня на всех кроликов 1 группы была надета мягкая контактная линза, содержащая квантовые точки CdTe/Cd MPA 710, с продолжением инстилляций капель тобрамицина 0,3% в прежнем режиме). На кроликов 2 группы была надета мягкая контактная линза, содержащая квантовые точки CdTe/Cd MPA 710 и производились инстилляции капель тобрамицина 0,3% в аналогичном режиме. В качестве методов динамического наблюдения использовалась фоторегистрация переднего отрезка с окрашиванием флуоресцеином и оптическая когерентная томография переднего отрезка. В данном клиническом эксперименте, мягкая контактная линза, содержащая квантовые точки CdTe/Cd MPA 710, в комплексе с антиинфекционным агентом в виде раствора капель тобрамицина 0,3% продемонстрировал выраженную клиническую эффективность отношении госпитального штамма Ps. Aeruginosa, в сравнении с монотерапией тобрамицина 0,3%.

Пример 9

(Лечение резистентного бактериального кератита с использованием мягкой контактной линзы, содержащей квантовые точки InP/ZnSe/ZnS 650, и инстилляций эпибульбарно левофлоксацина 0,5%).

В качестве объекта исследования изучались лабораторные Новозеландские кролики (№7) – 4 женские особи, 3 мужские, которым производилась индукция бактериального кератита, путем введения штамма S. Aureus в структуры роговицы. Лабораторных животных разделили на 2 группы. Кролики 1 группы после манифестации клинической картины бактериального кератита получали инстилляции капель левофлоксацина 0,5% в конъюнктивальный мешок каждые 2 часа на протяжение 3 дней с полным отсутствием положительной клинической динамики. (С целью анатомической сохранности глазного яблока с 4 дня на всех кроликов 1 группы была надета мягкая контактная линза, содержащая квантовые точки InP/ZnSe/ZnS 650, с продолжением инстилляций капель Левофлоксацина 0,5% в прежнем режиме). Кролики второй группы, на глаза которых изначально была надета мягкая контактная линза, содержащая квантовые точки InP/ZnSe/ZnS 650, и получавшие инстилляции капель Левофлоксацина 0,5% демонстрировали положительную динамику в отношении обратного развития симптомов с 3 дня терапии.

[1]. Wang J., Long Y., Zhang Y. et. al. Preparation of Highly Luminescent CdTe/CdS Core/Shell Quantum Dots. Chem. Phys. Chem. 2009; 10: 680 – 685. DOI: https://doi.org/10.1002/cphc.200800672 .  

[2]. Jo J.H., Jo D.Y., Lee S.H. et al.  InP-Based Quantum Dots Having an InP Core, Composition-Gradient ZnSeS Inner Shell, and ZnS Outer Shell with Sharp, Bright Emissivity, and Blue Absorptivity for Display Devices. ACS Applied Nano Materials. 2020; 3 (2): 1972-1980. DOI: https://doi.org/10.1021/acsanm.0c00008  

[3]. Pong B.K., Trout B.L., LeeLangmuir J. Y. Modified Ligand-Exchange for Efficient Solubilization of CdSe/ZnS Quantum Dots in Water: A Procedure Guided by Computational Studies. 2008; 24(10): 5270–5276. DOI: 10.1021/la703431j

Группа изобретений относится к медицине. Офтальмологическое устройство для лечения резистентного бактериального кератита, включающее контактную линзу, содержащую квантовые точки, выбранные из группы CdTe/Cd с длиной волны флуоресценции 710 нм, InP/ZnSe/ZnS с длиной волны флуоресценции 650 нм. Способ изготовления офтальмологического устройства, согласно которому контактную линзу обрабатывают путем погружения на 30 минут в 10% коллоидный раствор квантовых точек, выбранных из группы CdTe/Cd с длиной волны флуоресценции 710 нм, InP/ZnSe/ZnS с длиной волны флуоресценции 650 нм, после чего контактную линзу промывают в течение 30 секунд в сбалансированном солевом растворе BSS. Способ лечения резистентного бактериального кератита, включающий помещение на глаз, по крайней мере, на 5 дней офтальмологического устройства, при этом в течение всего периода ношения контактной линзы осуществляют инстилляции антиинфекционного агента по 0,05 мл по крайней мере 4 раза в день. Техническим результатом заявляемой группы изобретений является расширение арсенала средств для борьбы с резистентным бактериальным кератитом, полное излечение резистентного бактериального кератита. 3 н. и 6 з.п. ф-лы, 6 ил., 9 пр.

1. Офтальмологическое устройство для лечения резистентного бактериального кератита, отличающееся тем, что включает контактную линзу, содержащую квантовые точки, выбранные из группы CdTe/Cd с длиной волны флуоресценции 710 нм, InP/ZnSe/ZnS с длиной волны флуоресценции 650 нм.

2. Офтальмологическое устройство по п. 1, отличающееся тем, что в качестве контактной линзы используют мягкую контактную линзу.

3. Офтальмологическое устройство по п. 1, отличающееся тем, что квантовые точки CdTe/Cd, InP/ZnSe/ZnS используют в виде 10% коллоидного раствора.

4. Способ изготовления офтальмологического устройства по п. 1, характеризующийся тем, что контактную линзу обрабатывают путем погружения на 30 минут в 10% коллоидный раствор квантовых точек, выбранных из группы CdTe/Cd с длиной волны флуоресценции 710 нм, InP/ZnSe/ZnS с длиной волны флуоресценции 650 нм, после чего контактную линзу промывают в течение 30 секунд в сбалансированном солевом растворе BSS.

5. Способ по п. 4, отличающийся тем, что в качестве контактной линзы используют мягкую контактную линзу.

6. Способ лечения резистентного бактериального кератита, включающий помещение на глаз по крайней мере на 5 дней офтальмологического устройства по п. 1, при этом в течение всего периода ношения контактной линзы осуществляют инстилляции антиинфекционного агента по 0,05 мл по крайней мере 4 раза в день.

7. Способ по п. 6, отличающийся тем, что антиинфекционный агент выбран из группы: левофлоксацин, тобрамицин.

8. Способ по п. 6, отличающийся тем, что левофлоксацин используют в виде нативного раствора в концентрации 0,5 %.

9. Способ по п. 6, отличающийся тем, что тобрамицин используют в виде нативного раствора в концентрации 0,3%.