Способ диагностики хронического уретрита, обусловленного условно-патогенными микроорганизмами Российский патент 2024 года по МПК G01N33/493 G01N30/02 

Изобретение относится к медицине, а именно к молекулярно-биологическим методам исследования, и может быть использовано для выявления хронического идиопатического уретрита у мужчин.

Среди инфекции мочевых путей особое место занимают уретриты, которые остаются распространенным заболеванием среди сексуально активных людей и имеет как инфекционный, так и неинфекционный генез.

Уретрит определяется как инфекционно-воспалительное заболевание мочеиспускательного канала, вызванного венерическим заболеванием (ЗППП), и обычно классифицируется как гонококковый уретрит (ГУ) или негонококковый уретрит (НГУ) [Федеральные клинические рекомендации. Дерматовенерология 2015: Болезни кожи. Инфекции, передаваемые половым путем. - 5-е изд., перераб. и доп. - М.: Деловой экспресс, 2016. - 768 с.; Terris M.K., Kemper M., Sajadi K.P. Urethritis. Medscape Dec 12, 2018].

Негонококковый уретрит является распространенной инфекцией передаваемой половым путем (ИППП) у мужчин. В дополнение к симптомам уретрита патогенные микроорганизмы могут вызывать такие осложнения, как простатит и эпидидимит, а также реактивный и гнойный артрит [The bacterial microbiota in first-void urine from men with and without idiopathic urethritis. Maria Frølund, Arne Wikström, Peter Lidbrink, Waleed Abu Al-Soud, Niels Larsen, Christoffer Bugge Harder, Søren Johannes Sørensen, Jørgen Skov Jensen, Peter Ahrens. Published: July 27, 2018 https://doi.org/10.1371/journal.pone.0201380]. При передаче партнерам-женщинам возбудители могут вызывать воспалительные заболевания органов малого таза и последующее бесплодие. Chlamydia trachomatis, Mycoplasma genitalium и Trichomonas vaginalis являются хорошо известными причинами возникновения НГУ. Кроме того, предполагается, что вирус простого герпеса типа 1 и 2 (HSV-1 и -2), аденовирус, вызывает уретрит вместе с U. urealyticum, когда эта бактерия присутствует в высоких нагрузках. Тем не менее, в 35% случаев НГУ ни один из этих известных организмов не обнаружен, что указывает на наличие идиопатической формы уретрита и, по мнению некоторых авторов это указывает на наличие дополнительных, но еще возможно не идентифицированных патогенов, что связанно с ограниченными возможностями существующих методов лабораторной диагностики [The bacterial microbiota in first-void urine from men with and without idiopathic urethritis. Maria Frølund, Arne Wikström, Peter Lidbrink, Waleed Abu Al-Soud, Niels Larsen, Christoffer Bugge Harder, Søren Johannes Sørensen, Jørgen Skov Jensen, Peter Ahrens. Published: July 27, 2018].

Клиническим догматом было то, что моча от здоровых молодых людей считалась стерильной пока не достигла уретры, которая, как известно, колонизируется различными бактериями. Традиционно образцы мочи исследовали различными культуральными методами, которые, хотя и хорошо подходят для обнаружения определенных патогенных микроорганизмов, могут не учитывать другие более привередливые виды бактерий. Усовершенствованные количественные методы с использованием дополнительных сред и условий инкубации показали, что многие бактерии могут культивироваться из мочевого пузыря даже у здоровых женщин [The bacterial microbiota in first-void urine from men with and without idiopathic urethritis. Maria Frølund, Arne Wikström, Peter Lidbrink, Waleed Abu Al-Soud, Niels Larsen, Christoffer Bugge Harder, Søren Johannes Sørensen, Jørgen Skov Jensen, Peter Ahrens. Published: July 27, 2018]. Можно предположить, что и у мужчин более усовершенствованные методы идентификации могут обнаружить до сих пор неопознанные патогены в моче.

Недавние анализы человеческого микробиома показали богатую и разнообразную микробиоту почти в каждой исследованной среде обитания, что может свидетельствовать о том, что уретра также может содержать более разнообразную микробиоту, чем считалось ранее. Было показано, что микробиота образцов мочи первого мочевого пузыря точно отражает микробиоту дистального отдела мочеиспускательного канала, взятого путем взятия мазков из мочеиспускательного канала [The bacterial microbiota in first-void urine from men with and without idiopathic urethritis. Maria Frølund, Arne Wikström, Peter Lidbrink, Waleed Abu Al-Soud, Niels Larsen, Christoffer Bugge Harder, Søren Johannes Sørensen, Jørgen Skov Jensen, Peter Ahrens. Published: July 27, 2018].

В этой связи, одной из актуальных проблем современной медицины являются исследования роли урогенитальных заболеваний у мужчин, обусловленные условно-патогенной микробиотой. По данным Н.А.Лопаткина и соавторов уретриты, обусловленные условно-патогенными микроорганизмами, занимают от 30 до 50% в структуре всех инфекционных уретритов (Аполихин О.И. Урология [Текст] / О.И.Аполихин, Н.А.Лопаткин, А.Г.Пугачев. // ГЭОТАР-Медиа. - 2007. - 520 с.).

Зарубежные исследователи (Hanno P.M., Malkowicz S.В., Wein A.J. (ed.) Clinical Manual of Urology, 3rd Edition. McGraw-Hill, N.Y. 2001; Aral S.O., Fenton K.A., Holmes K.K., Sexually transmitted diseases in the USA: temporal trends. Sex Transm. Infect. 2007; 83: 257-66) констатируют факт увеличения числа негонококковых нехламидийных уретритов (НГНХУ) в структуре ИППП развитых стран - Великобритании, США, что связано не только с ростом числа уретритов, обусловленных условно-патогенными микроорганизмами, но и высокой эффективностью современных методов лабораторной диагностики, позволяющих выявлять возбудителей инфекционно-воспалительных процессов даже при низких концентрациях последних в клиническом образце, что характерно для ассимптомных форм воспаления.

Противоречивые результаты исследований убедительно доказывают необходимость изучения состава нормобиоты уретры мужчин с применением более чувствительных и специфических методов амплификации нуклеиновых кислот, позволяющих идентифицировать также труднокультивируемые микроорганизмы, нередко вызывающие дисбиотические процессы в урогенитальном тракте (Мазо Е.Б. Хронический инфекционный простатит// Материалы пленума правления Российского Общества урологов. Саратов, 2004. С.267-289; Krieger J. N. et al. Epidemiology of prostatitis: new evidence for a world-wide problem. Wld J. Urol. 2003; 21 (2): 70-74. Krieger J.N., Ross S.O., Riley D.Е. Chronic prostatitis: epidemiology and role of infection. Urology 2002; 60 (6, suppl.): 8-12; discus.: 13). По данным исследователей А.П.Горбунова и Н.И.Скидан (Горбунов А.П., Скидан Н.И. Клиническое течение негонококковых уретритов ассоциированных с условно-патогенной микрофлорой у мужчин // Современные проблемы дерматовенерологии, иммунологии и врачебной косметологии. № 1, 2009. С. 32-38) при микробиологическом исследовании отделяемого уретры мужчин с (НГНХУ) в диагностически значимых титрах выявляли представителей семейства Micrococcaceae - Staphylococcus epidermidis, Staphylococcus aureus, Staphylococcus haemolyticus и Streptococcaceae, Enterococcus spp., Streptococcus agalacticae, негемолитический Streptococcus, гемолитический Streptococcus. Небольшую группу составили факультативные грамотрицательные палочки, бактерии семейства Enterobactehaceae, представленные Е.coli и Klebsiella spp. Из группы прочих возбудителей идентифицировали Gardnerella vaginalis, Corynebacterium spp., Mycoplasma hominis, Ureaplasma urealyticum и Candida albicans. В качестве возможных возбудителей инфекционно-воспалительного процесса в урогенитальном тракте в литературе описаны Bacteroides, Haemophilus influenza, Haemophilus parainfluenzae, Neisseria meningitides, Staphylococcus saprophyticus, Gardnerella vaginalis, Clostridium difficile, Corinebacterium genitalium. Однако, при проведении контрольных исследований нередко оказывается, что данные возбудители чаще выявляются у здоровых лиц, чем у больных (НГНХУ). Кроме перечисленных микроорганизмов при (НГНХУ) определялись Streptococcus (Str.) pneumoniae, Str. viridans, Str. mitis, Str. sanguis, Str. anginosus, Str. agalactiae, Enterococcus faecium, N. subflava, N. per.flava и N. flava, Staphylococcus (Staph.) aureus, Staph. epidermidis, Corynebacterium pseudodiphtheriae, бактерии, входящие в роды Enterobacter Spp., Proteus Spp., Branhamella Spp., Moraxella Spp., Pseudomonas Spp. и их ассоциации.

Таким образом, вопросы этиологии (НГНХУ) остаются окончательно нерешенными, что приводит к несвоевременной клинической диагностике, не всегда корректной интерпретации полученных результатов лабораторных исследований, нерациональной терапии, что в свою очередь увеличивает полипрагмазию и ятрогению на разных этапах диагностического и лечебного процесса, повышает риск развития осложнений с нарушениями репродуктивной функции.

Уретрит, обусловленный условно-патогенной микробиотой не имеет специфических, патогномоничных клинических симптомов.

Известно, что диагностика острых форм уретритов с выраженными клиническими симптомами не представляет особых трудностей. Проблемой остается хронические уретриты с мало и ассимптомным течением без выявления возбудителей при лабораторной диагностике, число которых в последние годы увеличивается. Данная форма уретрита характеризуется скудностью субъективных и объективных клинических симптомов, а в ряде случаев и их отсутствием, не позволяющим своевременно диагностировать патологический процесс. В этой связи, очень часто медики сталкиваются с поздним обращением пациентов и с развитием осложнений со стороны органов мошонки и предстательной железы вплоть до нарушения фертильности у мужчин. В большинстве случаев ассимптомные формы уретритов протекают длительно и диагностируются уже на стадии развития осложнений с нарушением репродуктивной функции (Е.Е.Брагина, Р.А.Абдумаликов. «Руководство по сперматологии». Москва, 2002 г.; Локшин К.Л. Негонококковые уретриты у мужчин. Трудный пациент № 3, том 7, 2009 г. Bradshaw С. et al. Etiologies of Nongonococcal Urethritis: Bacteria, Viruses, and the Association with Orogenital Exposure // J. Infect. Dis. 2006; 193: P. 336-45; Lanjouw E, Ossewaarde JM, Stary A, Boag F, van der Meijden WI European guideline for the management of Chlamydia trachomatis infections. Int J STD AIDS. 2010 Nov; 21(11): 729-37.2010.)

В клинической практике, нередко при наличии жалоб и клинических симптомов, по данным лабораторных методов диагностики не всегда удается выяснить причину уретрита и как отмечено выше в 35% случаев НГУ ни один из этих известных микроорганизмов не обнаруживается, что указывает на «идиопатическую» форму уретрита. По мнению некоторых авторов это указывает на наличие дополнительных, но еще не идентифицированных патогенов, обусловленное ограниченными возможностями лабораторных методов диагностики. В этой связи, проблема диагностики хронического уретрита, вызванного условно-патогенной микробиотой, усугубляется отсутствием стандартов лабораторной диагностики, объективными ограничениями стандартных методов обследования и отсутствием специфических патогномоничных клинических симптомов.

Так, распространенное микроскопическое исследование, наряду с многочисленными достоинствами, имеет ряд объективных ограничений, затрудняющих полноценную объективную диагностику и дифференциальную диагностику форм уретритов. Метод не позволяет объективно определять качественно-количественный состав биоты уретры (Анкирская А.С., Муравьева В.В. Опыт микробиологической диагностики оппортунистических инфекций влагалища. / Клин. микробиология и антимикробная химиотерапия. - 2001. - № 2. - Т.3 - с.101-105; Дмитриев Г.А. Лабораторная диагностика бактериальных урогенитальных инфекций.- М.: Мед. книга, Н. Новгород: Издательство НГМА, 2003.- 336 с.).

Микроскопия мазков, окрашенных метиленовым синим и по Граму, позволяет определять не более 10-ти морфотипов (лактобациллы, гарднереллы, бактероиды, мобилункус, фузобактерии, лептотрихии, вейлонеллы, дрожжеподобные грибы, грамположительные кокки, колиформные палочки) различных микроорганизмов, лейкоцитарную реакцию - ее наличие, степень выраженности, проявление фагоцитоза, его завершенность. По данным Г.А.Дмитриева (2003) чувствительность микроскопии составляет от 45% до 70%, специфичность до 70%, что в значительной степени определяется качеством преаналитического этапа исследования и профессиональной квалификацией врача клинической лабораторной диагностики.

Принципиальным недостатком метода является то, что при микроскопии можно выявить только те микроорганизмы, которые обладают достаточными размерами для визуализации при световой микроскопии, и их количество в биопробе должно превышать 10⁵ КОЕ/мл. Кроме того, факультативно-анаэробные бактерии, нередко являющиеся ассоциантами воспалительных процессов, могут проявлять свои патогенные свойства при сравнительно небольшом количестве (менее 10⁵ КОЕ/мл), которое не выявляется при микроскопии. Даже если факультативно-анаэробные бактерии обнаруживаются в препарате, то эти морфотипы схожи у многих видов и родов, тогда как их патогенные свойства и чувствительность к антибиотикам могут значительно отличаться. Ряд анаэробных бактерий, например Atopobium vaginae, Mycoplasma genitalium, Mycoplasma hominis и т.д., не визуализируются при микроскопии.

При отсутствии объективных лабораторных признаков воспаления в мазках, окрашенных метиленовым синим и по Граму, и отсутствии выраженных клинических симптомов невозможно исключить уретрит со «стертыми» клиническими симптомами или асимптомный. Способ не позволяет провести дифференциальную диагностику форм уретрита, обусловленного условно-патогенными микроорганизмами, и выявить этиологическую структуру инфекционно-воспалительного процесса.

Известен способ диагностики уретритов методом микробиологического (культурального) исследования, позволяющего установить видовой состав аэробных, факультативно-анаэробных и некоторых облигатно-анаэробных бактерий, в том числе обнаруженных при микроскопии дрожжевых грибов рода Candida. После количественной оценки роста микроорганизмов на питательных средах определяется их этиологическая значимость у конкретного пациента (Скала Л.З., Сидоренко С.В., Нехорошева А.Г., Лукин И.Н., Грудинина С.А. Практические аспекты современной клинической микробиологии. - Тверь: ООО Издательство «Триада», 2004.-312 с.).

Так, например, при использовании культуральной диагностики принято считать нормобиотой урогенитального тракта мужчины следующие показатели: 1) общая микробная обсемененность - не превышает 10³-10⁵ КОЕ/мл; 2) абсолютно преобладают аэробные и факультативно-анаэробные микроорганизмы - стрептококки и стафилококки; 3) другие условно-патогенные микроорганизмы определяются в низком титре (10³ КОЕ/мл) или отсутствуют.

До настоящего времени этот метод остается «золотым стандартом» лабораторной диагностики любого инфекционно-воспалительного процесса, в том числе и уретритов обусловленных условно-патогенной биотой.

Однако и он имеет ряд серьезных недостатков. Условно-патогенная микробиота, являющаяся причиной разнообразных воспалительных процессов, главным образом, представлена анаэробными микроорганизмами. Для культивирования анаэробов требуются специальные лаборатории, оснащенные дорогостоящим лабораторным оборудованием для создания анаэробных условий, высококачественные селективные питательные среды и высококвалифицированные врачи микробиологи. Подавляющее большинство лечебных учреждений практического здравоохранения в настоящее время не имеют подобных высокотехнологичных лабораторий. Кроме того, в последние годы с помощью методов молекулярной диагностики были обнаружены этиологически значимые условно-патогенные микроорганизмы, такие как Atopobium vaginae, Ureaplasma urealiticum, Mycoplasma genitalium и др., относящиеся к группе трудно культивируемых.

Другим не маловажным недостатком метода являются также длительные сроки культивирования (в среднем 7 дней) микроорганизмов и необходимость сохранения жизнеспособности микроорганизмов до момента поступления биоматериала в лабораторию, а также отсутствие возможности контроля качества преаналитического этапа, определяющего эффективность любого лабораторного анализа в целом.

Известен способ диагностики дисбаланса микробиоты различных биотопов человека и степени его выраженности - Андрофлора, характеризующийся тем, что с помощью метода полимеразной цепной реакции в «реальном времени» в исследуемой биопробе определяют общее число геномов микроорганизмов, характерных для конкретного биотопа, число геномов нормобиоты и условно-патогенной биоты, полученные величины сравнивают между собой, определяют соотношение между числом геномов нормобиоты и условно-патогенной биоты и при превышении числа геномов нормобиоты относительно числа геномов условно-патогенной биоты в 1000 раз констатируют отсутствие дисбаланса, оценивая данный показатель как вариант нормы, а при значении данного показателя менее чем 1000 раз диагностируют дисбаланс и устанавливают степень его выраженности путем определения соотношения между числом геномов нормобиоты и общим числом геномов микроорганизмов, присутствующих в исследуемой пробе, а также между числом геномов условно-патогенной биоты и нормобиоты и при снижении числа геномов нормобиоты относительно общего числа геномов микроорганизмов в 10-100 раз и снижении числа геномов условно-патогенной биоты относительно числа геномов нормобиоты в 100-1000 раз устанавливают легкую степень дисбаланса, а при превышении числа геномов нормобиоты относительно общего числа геномов микроорганизмов более чем в 100 раз, и превышении числа геномов условно-патогенной биоты относительно числа геномов нормобиоты в 10 раз и более или менее этой величины устанавливают выраженную степень дисбаланса (патент РФ №2362808 опубликован 27.07.2009).

Недостатком указанного способа является исследование всего 24 микроорганизмов без определения вирусов, что ограничивает его возможности.

Известен способ определения референтных значений показателей микроорганизмов, исследуемых методом хромато-масс-спектрометрии, включающий определение референтного диапазона норм, значение которых вычислено с применением калибровочного шаблона на основе выборки произвольной группы исследуемых объектов, и выбор аутентичных поставленной задаче групп специфических (селективных) ионов в пробах после анализа всех маркеров стандартной базы данных, отличающийся тем, что определяют референтный диапазон норм по каждому микроорганизму в конкретном биотопе конкретного объекта (обследуемого), выведенный по формуле среднеквадратичного отклонения, для чего полученные показатели проб биологических материалов вычисляют по формуле: корень квадратный из числа, полученного делением квадратичного отклонения совокупности количеств каждого из микроорганизмов, внесенных в таблицу протокола произвольной выборки обследуемых, на количество обследуемых этой выборки без экстремальных значений, определяют встречаемость в конкретном биотопе относительно предварительно рассчитанной как процентное отношение частоты встречаемости при статистической обработке каждого микроорганизма произвольной выборки обследуемых, группируют микроорганизмы по группам «Резидентные» и «Транзиторные» в зависимости от частоты встречаемости микроорганизмов в конкретном биотопе, если встречаемость микроорганизма свыше 50% случаев, то его относят к резидентной группе микроорганизмов, если встречаемость микроорганизма ниже 50% случаев, то его относят к транзиторной группе микроорганизмов, разделяют микроорганизмы по группам, соответствующим группировке на резидентные и транзиторные, вычисляют суммарную нагрузку по каждому виду микроорганизмов: резидентным микроорганизмам, транзиторным микроорганизмам, анаэробным микроорганизмам, микроскопическим грибам, вирусам, вычисляют общую бактериальную или микробную нагрузку, вычисляют процентное соотношение резидентных и транзиторных микроорганизмов от общей бактериальной или микробной нагрузки, вычисляют процентное соотношение анаэробных микроорганизмов от общей бактериальной или микробной нагрузки, определяют допустимый интервал отклонений от нормы для конкретного биотопа конкретного обследуемого (объекта) после сравнения допустимого интервала отклонений, рассчитанного без экстремальных значений, и допустимого интервала отклонений, рассчитанного по всем значениям выборки допустимого интервала отклонений, рассчитанного с применением калибровочного шаблона по стандартной произвольной выборки обследуемых, и находят референтный диапазон для каждой группы микроорганизмов исходя из допустимого интервала отклонений от нормы для конкретного обследуемого.

2. Способ определения референтных значений показателей микроорганизмов по п. 1, отличающийся тем, что отображают после разделения микроорганизмов на группы резидентные и транзиторные в разных разделах таблицы протокола.

3. Способ определения референтных значений показателей микроорганизмов по п. 1, отличающийся тем, что выделяют микроорганизмы в таблице протоколов с помощью окраски резидентных микроорганизмов цветами красного спектра и транзиторных микроорганизмов цветами синего или голубого спектра.

4. Способ определения референтных значений показателей микроорганизмов по п. 1, отличающийся тем, что осуществляют произвольную выборку обследуемых с учетом возраста, или расовой группы, или региона проживания, или режима питания [патент РФ № 2715223, опубликован 02.26.2020].

Недостатком данного изобретения является отсутствие информации об исследовании биотопов урогенитального тракта мужчин для диагностики лечения пациентов с хроническим уретритом, так как в нем речь идет об исследовании микробиоты кишечника, которая несколько отличается от микробного состава уретры, имеющей собственные показатели и состав микрофлоры. Кроме того, в настоящее время в разных областях клинической медицины рассматривается различные варианты деления микроорганизмов: в частности некоторые их классифицируют на патогенные, условно-патогенные и сапрофитные, другие на резидентные и транзиторные (условно-патогенные). Кроме того, некоторые авторы анализ проводят по группам микроорганизмов: бациллы, анаэробы, аэробы, микроскопические грибы, вирусы и т.д. В этой связи всесторонний анализ полученных данных по групповым разновидностям, с учетом общей бактериальной и вирусной является важной целью оценки как качественного, так и реального количественного присутствия каждого компонента микробиоценоза для оценки его индивидуальной роли в патогенезе.

Наиболее близким к заявленному техническому решению является изобретение способ дифференциальной диагностики манифестной и асимптомной форм уретрита, обусловленного условно-патогенными микроорганизмами, у мужчин репродуктивного возраста, характеризующийся тем, что проводят клинический осмотр пациента, установления наличия или отсутствия клинических симптомов уретрита и степени их выраженности, после чего методом микроскопии проводят исследование взятых из уретры биопроб, в которых определяют не более 10 морфотипов микроорганизмов, наличие или отсутствие лабораторных признаков воспаления по количеству лейкоцитов в полях зрения и при наличии выраженных клинических симптомов и количестве ПМЯЛ более 5 предполагают наличие манифестной формы уретрита, а при отсутствии или слабой степени выраженности клинических симптомов, и количестве ПМЯЛ менее 5 судят о наличии стертых клинических симптомов уретрита неясной этиологии, затем методом ПЦР у пациента исследуют биоту на наличие облигатных микроорганизмов, при отсутствии которых методом ПЦР в «реальном времени» определяют этиологическую структуру инфекционно-воспалительного процесса, для чего в биопробе из уретры определяют общее число геномов микроорганизмов, число геномов нормобиоты и условно-патогенной биоты, полученное значение величины общего числа геномов микроорганизмов сравнивают с показателем нормы, установленной для мужчин репродуктивного возраста - 10^4,5-5,0 число геномов нормобиоты и условно-патогенной биоты сравнивают с общим числом геномов микроорганизмов и между собой, и при общем числе геномов микроорганизмов не более 10^4,5-5,0, числе геномов нормобиоты, равном общему числу геномов микроорганизмов или меньшем его не более чем в 10 раз, числе геномов условно-патогенных микроорганизмов меньшем общего числа геномов микроорганизмов более чем в 100 раз и превышении числа геномов нормобиоты относительно числа геномов условно-патогенной биоты более чем в 10 раз или при отсутствии геномов условно-патогенной биоты определяют состояние нормы биоты уретры, оценивая данный показатель как вариант нормы, при общем числе геномов микроорганизмов более 10^4,5-5,0, числе геномов нормобиоты меньшем его более чем в 10 раз, числе геномов условно-патогенной биоты, равном общему числу геномов или меньшем его менее чем в 10 раз и превышении числа геномов условно-патогенных микроорганизмов числа геномов нормобиоты более чем в 10 раз устанавливают дисбиоз биоты и диагностируют уретрит, обусловленный условно-патогенными микроорганизмами, при этом на фоне выраженных клинических симптомов и количестве ПМЯЛ более 5 в результатах микроскопии диагностируют его манифестную форму, на фоне отсутствия или недостаточной степени выраженности клинических симптомов и количестве ПМЯЛ более 5 в результатах микроскопии диагностируют его асимптомную форму, а при варианте нормы по данным ПЦР на фоне отсутствии каких либо клинических симптомов и количестве ПМЯЛ более 5 в результатах микроскопии биопробы диагностируют норму ( патент РФ №2458993, опубликован 20.08.2012).

К недостаткам данного метода можно отнести то, что ПЦР дает возможность только качественной характеристики (позволяет идентифицировать микроорганизмы до вида), без определения количественной характеристики исследуемого условно-патогенного микроорганизма и их ассоциаций, поэтому невозможно установить этиологию уретрита и дифференцировать формы, даже в совокупности с микроскопией мазков, окрашенных метиленовым синим и по Граму, наличии или отсутствии клинических симптомов. Полноценная и объективная дифференциальная диагностика форм уретритов, обусловленных условно-патогенными микроорганизмами, позволит избежать диагностических ошибок и назначения нерациональной, патогенетически необоснованной терапии, которая усугубляет течение уретрита. Кроме того, в процессе проведения ПЦР возможно получение как ложноположительных, так и ложноотрицательных результатов по разным причинам (Пособие для врачей. Полимеразная цепная реакция в диагностике урогенитальных инфекций. Москва. - 2000. - 16 с.).

Таким образом очевидна необходимость оценки значений показателей микробиоты по максимально широкому спектру показателей для целей диагностики и назначения этиотропной терапии.

Указанные недостатки устраняются в заявляемом изобретении.

Задачей заявляемого изобретения является создание доказательного способа диагностики хронического идиопатического уретрита у мужчин за счет количественной оценки фонового присутствия маркеров микроорганизмов в мазке уретры, исследуемом методом масс-спектрометрии микробных маркеров (МСММ) у здоровых мужчин без жалоб и больных хроническим идиопатическим уретритом с определенными жалобами и симптомами, сопоставление показателей здоровых и больных хроническим уретритом, и определение достоверных диагностических критериев, позволяющих выявить причину заболевания, не диагностированного другими известными способами хронического идиопатического уретрита. Выявить условно-патогенные микроорганизмы, которые могут свидетельствовать о наличии хронического идиопатического уретрита, обусловленного раннее не выявленной условно-патогенной флорой.

Поставленная задача решается тем, что в исследуемом биоматериале - мазок из уретры, методом МСММ по стандартной медицинской технологии (МЗ РФ № НЮ-40006, 17.08.2009) определяют количественно содержание 57 микроорганизмов с одновременной оценкой общей микробной нагрузки, уровня микроорганизмов по видовым принадлежностям и группам, уровня резидентных микроорганизмов, уровня транзиторных условно-патогенных микроорганизмов, уровня вирусов, уровня эндотоксина и сопоставление показателей между здоровым и больным; при анализе исключаются вирусы, патогенные микроорганизмы, идентифицированные и распространенные условно-патогенные микроорганизмы; исходя из распределения и вариабельности фоновых значений делают заключение о значениях по каждому из показателей микроорганизмов у пациентов в мазке из уретры, проводят сопоставление и анализ результатов МСММ с данными клинической картины и микроскопического исследования мазка из уретры и диагноз хронический идиопатический уретрит устанавливают на основании повышения уровня не менее 3-х условно-патогенных микроорганизмов (таблица 3), при повышении суммарного уровня этих показателей на 50% выше здоровой группы.

2. Способ диагностики хронического уретрита у мужчин по п. 1, отличающийся тем, что микроорганизмы отображают в таблицах с указанием их значений у больных хроническим уретритом и здоровых.

Техническим результатом предложенного изобретения является повышение точности диагностики хронического уретрита путем определения величин отклонений от нормы, которые могут свидетельствовать о наличие хронического идиопатического уретрита. Определение достоверных диагностических критериев по выявлению условно-патогенных микроорганизмов в мазке уретры, имеющих значение для развития хронического идеопатического уретрита, полученных с помощью методики МСММ как у здоровых мужчин без жалоб, так, и у пациентов с жалобами и симптомами.

До настоящего времени основной проблемой остаётся решение вопроса об окончательном количественно-качественном составе нормобиоты уретры мужчин, что не позволяет однозначно и достоверно интерпретировать результаты лабораторного обследования, затрудняет своевременную постановку диагноза, приводит к отсроченной и нерациональной терапии уже на стадии развития осложнений. Данные отечественной и зарубежной литературы, касающиеся количественно-качественного состава нормобиоты уретры здоровых мужчин, противоречивы. Так, по данным отечественных авторов в уретре здоровых мужчин выделяют от 10 до 26 видов микроорганизмов, а по данным зарубежных - более 50 (Овчинников Н.М. Гонококк и лабораторная диагностика гонореи. - М.: 1952; Bacteriology of the urethra in normal men and men with nongonococcal urethritis. W.R.Bowie, H.М.Pollock, P.S.Forsyth, J.F.Floyd, E.R.Alexander, S.P.Wang, and K.K.Holmes, J Clin Microbiol. 1977 November; 6(5): 482-488. H.F.Helmholtz. Determination of the bacterial content of the urethra: a new method, with results of a study of 82 men // J. Urol. 1950; 64: P.158.).

С другой стороны, существующие методы лабораторной диагностики, такие как микроскопии, культуральные методы, ПЦР методы имеют ограничения в плане определения количества микроорганизмов и максимально определяют не более 30 их видов.

Одни авторы считают, что нормобиотой уретры здоровых мужчин принято считать факультативно-анаэробные и аэробные микроорганизмы: Peptococcus, Peptostreptococcus, Bacteroides, Eubacterium, Clostridium, Staphylococcus epidermidis, Staphylococcus saprophyticus, Staphylococcus aureus, Streptococcus mitis, Enterococcus faecalis, Neisseria spp., Escherichia coli, Proteus spp., Corynebacteria, Pseudomonas aeruginosae (The Normal Flora of Humans (Ken Todar's Microbial World 2006), а другие идентифицируют E.coli, P.aeruginosae, Serratia, Klebsiella, Proteus spp. (Деревянко И.И. Бактериальный простатит: этиология, клиника, лечение // Consilium medicum. 2004; Т6. № 7. С.497-9.), часть исследователей предполагает роль грамположительных микроорганизмов Streptococcus faecalis, Staphylococcus saprophyticus и др.

Однако, по мнению некоторых авторов причинами развития НГУ у мужчин могут быть факультативные и облигатные анаэробные микроорганизмы, обнаруживаемые в урогенитальном биотопе женщин, при одном из самых частых нарушений вагинальной микрофлоры у женщин - бактериальном вагинозе [Тактика ведения пациентов с анаэробным уретритом. Методические рекомендации N2132. Москва 2021; Manhart, L.E. Bacterial vaginosis-associated bacteria in men: association of Leptotrichia/Sneathia spp. with nongonococcal urethritis / L.E. Manhart, Khosropour, С. Liu et al. // Sex Transm Dis. - 2013 - N240(12). - Р.:944-9. doi 24220356].

Некультуральный подход к идентификации микроорганизмов методом МСММ позволяет избежать многих ограничений традиционно применяемых методик. Для диагностики уретрита важны его способность достоверно обнаружить присутствие микроорганизма вне зависимости от его способности расти на искусственных питательных средах. Микробные маркеры - это либо структурные компоненты бактериальных стенок, либо микробные метаболиты, их извлекают непосредственно из клинического материала (мазка уретры) посредством простой и универсальной химической процедуры, что устраняет необходимости в сохранении жизнеспособности микроорганизмов в пробе, тем самым расширяя диагностический диапазон. Извлеченная смесь маркерных веществ микробного происхождения вместе с естественными компонентами биоматериала анализируют с помощью газовой хроматографии масс-спектрометрии (ГХ-МС). Специальная программа разделения многокомпонентной смеси и регистрации специфических ионов, являющая неотъемлемой частью медицинской технологии МСММ, позволяет целевым образом измерить содержание минорных молекул микробного происхождения на фоне подавляющих сигналов матрицы биологического материала. Ядром метода МСММ является математический алгоритм реконструкции микробного сообщества по набору зарегистрированных маркеров.

Метод МСММ стандартизован, разрешен к применению (Разрешение ФС 2010/038 от 24.02.2010) и используется в клинической практике для выявления у уточнения этиологии инфекционно-воспалительных процессов как готовое техническое решение. Метод является высокочувствительным (10⁴-10⁵ клеток/мл), быстрым (2,5 ч на полный цикл исследования), универсальным (бактерии, грибы, вирусы, - все за один анализ образца без повторов), экономичным и имеет широкий диагностический спектр (одновременное количественное определение 57 микроорганизмов). Некультуральный подход дает возможность применения в тех случаях, когда традиционные методы диагностики неэффективны, что особенно актуально при терапии хронического идиопатического уретрита. Метод МСММ в отличие от бактериологических исследований - экспрессный метод: отсутствуют стадии повторных пересевов и биохимических тестов, которые особенно сложны, трудоемки и длительны. Нет необходимости в получении чистой культуры; возможна идентификация некультивируемых форм микроорганизмов. В отличие от иммуносерологических исследований МСММ - прямой метод: отсутствуют ошибочные определения, связанные с индивидуальными вариациями иммунного ответа; он также более чувствительный. В отличие от молекулярно-биологических методов дается адекватная количественная оценка; метод менее дорогой, для его реализации используются доступные любым лабораториям химические реактивы и методики пробоподготовки.

Заявляемое изобретение иллюстрируется следующими таблицами и графическими изображениями:

Таблица 1. Описательные статистики для здоровых мужчин и пациентов с хроническим уретритом по группам микроорганизмов

Таблица 2. Описательные статистики для пациентов с хроническим уретритом и здоровых мужчин по резидентным микроорганизмам

Таблица 3. Описательные статистики для пациентов с хроническим уретритом и здоровых мужчин по транзиторным микроорганизмам

Фиг. 1. Исследование (микроскопия) мазка из уретры пациента Я., 26 лет.

Фиг. 2. Посев на флору мазка из уретры пациента Я., 26 лет.

Фиг. 3. Андрофлора пациента Я., 26 лет. Нормоценоз.

Фиг. 4. Анализ микробиоты пациента Я., 26 лет методом МСММ до лечения.

Фиг. 5. Посев на флору мазка из уретры пациента Я., 26 л. после лечения.

Фиг. 6. Анализ микробиоты пациента Я., 26 л. методом МСММ после лечения.

Фиг. 7. Исследование (микроскопия) мазка из уретры пациента Ф., 42 г.

Фиг. 8. Андрофлора пациента Ф., 42 лет.

Фиг. 9. Анализ микробиоты пациента Ф., 42 г. методом МСММ до лечения.

Фиг. 10. Анализ микробиоты пациента Ф., 42 г. методом МСММ после лечения.

Фиг. 11. Исследование (микроскопия) мазка из уретры исследуемого Н., 44 г.

Фиг. 12. Посев мазка из уретры исследуемого Н., 44 г.

Фиг. 13. Андрофлора исследуемого Н., 44 г.

Фиг. 14. МСММ, исследуемого Н., 44 г.

Подробное описание способа и примеры его клинического выполнения

Способ осуществляется следующим образом.

Пациенту с хроническим идиопатическим уретритом (ХИУ) проводят общеклиническое исследование, включая жалобы, сбор анамнеза, проведение общего объективного осмотра и пальпаторное исследование органов мошонки, при необходимости предстательной железы.

При выполнении клинического осмотра у пациента выясняют характер предъявляемых жалоб: на зуд/жжение в уретре, выделения различного характера и степени выраженности, боль при мочеиспускании, состояние наружного отверстия уретры и головки полового члена, и/или крайней плоти, возможные осложнения со стороны органов урогенитального тракта. При сборе анамнеза, кроме даты начала заболевания выясняют длительность болезни, характер проводимого лечения. Обязательным условием является исключения пациента из исследования, если он принимал антибиотики в ближайшие 3 мес.

После анализа полученных субъективных и объективных данных, устанавливают наличие или отсутствие клинических симптомов уретрита, степень их выраженности, наличие или отсутствие осложнений со стороны органов урогенитального тракта, включая здоровых, обративших без жалоб с целью обследования. Если у исследуемых мужчин без жалоб, выявляли характерные жалобы на уретрит в анамнезе и местные симптомы уретрита их переводили в группу пациентов с уретритом.

Пациентам с хроническим идиопатическим уретритом осуществляют забор содержимого уретры с предварительной обработкой головки полового члена и наружного отверстия уретры водным раствором хлоргексидина. Накануне исследования пациент за сутки воздерживается от половых отношений и на 3 часа от мочеиспускания. Необходимые манипуляции осуществляет врач-уролог и обученный средний медперсонал. Материал брали для микроскопии, посева содержимого уретры, исследование ПЦР (андрофлора) и МСММ.

Всем больным и здоровым методом микроскопии проводят исследование взятых из уретры мазков, окрашенных метиленовым синим и по Грамму. В мазках определяют количества лейкоцитов. У здоровых нормой считали количество лейкоцитов до 5 в полях зрения. При наличии жалоб и местных признаков уретрита, патологией считали количество лейкоцитов более 2 в полях зрения. Независимо от степени выраженности субъективных и/или объективных клинических симптомов и лабораторных признаков воспаления, а также количества лейкоцитов в полях зрения по результатам микроскопии к группе идиопатического уретрита относили больных при отсутствии патогенных и условно-патогенных микроорганизмов в бакпосеве мазка уретры и андрофлоре.

Кроме того, всем выполняют посев мазка уретры на наличие культивируемых условно-патогенных микроорганизмов, а также сравнительного анализа с методом МСММ. Методом ПЦР - Андрофлора исследуют биоматериал из уретры пациента на наличие инфекционно-воспалительного процесса, обусловленного облигатными патогенами (Neisseria gonorrhoeae, Trichomonas vaginalis, Chlamydia trachomatis, Mycoplasma genitalium, Herpes simplex virus, Human papillomavirus). Эти пациенты были исключены из исследования или (при отсутствии облигатных патогенов) им определяют этиологическую структуру инфекционно-воспалительного процесса для выявления наличия уретрита, обусловленного условно-патогенными микроорганизмами.

Биоматериал из уретры для МСММ получают врачом урологом или другим специалистом, при помощи стерильных, одноразовых уретральных зондов, помещают в пробирку типа Эппендорф с транспортной средой.

Методом МСММ в биопробе из уретры определяют общее число геномов микроорганизмов, число геномов нормобиоты и условно-патогенной биоты, всего 57 микробиоты и 3 показателя общего значения.

Полученное значение величины общего числа геномов микроорганизмов сравнивают с показателем, полученной для мужчин из группы «здоровых», число геномов нормобиоты и условно-патогенной биоты сравнивают с общим числом геномов микроорганизмов и между собой.

Затем для постановки диагноза хронического идиопатического уретрита, обусловленного условно-патогенными микроорганизмами, проводят сопоставление и анализ результатов МСММ с данными клинической картины и микроскопического исследования биопробы из уретры.

Хронический идиопатический уретрит устанавливается на основании повышения уровня не менее 3 условно-патогенных микроорганизмом с наличием жалоб и клинических симптомов в момент исследования или в анамнезе.

Назначают этиологически направленную терапию на основании идентифицированных условно-патогенных микроорганизмов в результатах ПЦР в «реальном времени» согласно разработанным критериям.

Все образцы содержимого уретры обрабатывали на «Микробиологическом анализаторе МАЭСТРО» (ООО «Интерлаб», Россия), который представляет ГХ-МС, оснащенный системой автоматического ввода проб и полным пакетом программного обеспечения необходимого для анализа МСММ, возможно применение зарубежного ГХ-МС (Agilent Technologies, США), вручную настраиваемого под требования медицинской технологии. В результате исследования МСММ каждый отобранный образец характеризуется измеренным численным содержанием 57 микроорганизмов, включая анаэробы, актинобактериии, вирусы и грибы, а также тремя дополнительными показателями: суммарной микробной нагрузкой, резидентные и условно-патогенные микроорганизмы, содержанием эндотоксина и плазмалогена, итого - 60 показателей.

Статистическое исследование проводили при помощи специальных статистических критериев. При проведении статистического исследования у пациентов с ХИУ оценивалась диагностическая значимость каждого микроба с помощью метода МСММ. Сравнение проводилось по группам здоровых и пациентов с признаками ХУ. Распределения показателей отличались от нормального, в связи с этим был использован U-критерий Манна-Уитни (сравнивались медианы выборок, нижний и верхний квартиль) с уровнем значимости 0,05. Для статистической обработки данных и работы с графикой использовалась среда R.

На 1 этапе проанализировали жалобы, анамнез, данные объективного исследования, микроскопии мазка уретры, посев мазка на флору из уретры, андрофлору.

На 2 этапе проводили анализ МСММ мазков из уретры, при этом ми исключали такие распространенные условно-патогенные микроорганизмы, таких как уреаплазмы, микоплазмы, кандида, вирусы и др., роль которой в развитии уретрита давно доказана, т.е. фактически за счет расширения микробного состава методом МСММ, исследовали более расширенный состав условно-патогенной флоры. Анализ проводился по группам микроорганизмов, между резидентными и транзиторными микроорганизмами, а также определяли суммарную нагрузку. С учетом клинической картины причинами ХИУ мы считали повышение уровня как минимум 3 условно-патогенной флоры и при повышении суммарного уровня этих показателей на 50% выше здоровый группы.

Анализ распределение численности микроорганизмов, определяемых методом МСММ по видовым принадлежностям (Таблица 1) показал, что в группе кокки, бациллы суммарная нагрузка между здоровыми и больным с хроническим уретритом составила 10024,70 ±7906,84 и 11169,21 ±21902,27 соответственно и разница была не достоверной, а среди них из условно-патогенных микроорганизмов уровень Bacillus cereus значительно превышал по сравнению с контрольной группой. В группе анаэробов суммарная нагрузка между здоровыми и больным с хроническим уретритом составила 10024,70 ±7906,84 и 11169,21 ±21902,27 и разница была не достоверной и из условно-патогенных уровень Cl. hystolyticum/Str. Pneumonia достоверно был повышенным по сравнению с контрольной группой, а также выявлено высокие уровни условно-патогенных Peptostreptococcus anaerobius18623 и Peptostreptococcus anaerobius17642 по сравнению с здоровыми.

Следующую группу составили Актинобактерии суммарная нагрузка которой составила 957,42 ± 1321,48 и 746,01 ± 772,60 соответственно по группа без достоверной разницы.

В группе Граммотрицательные палочки суммарная нагрузка между здоровыми и больным с хроническим уретритом составила 166,89 ± 354,14 и 290,56 ± 212,35 и разница была не достоверной и среди условно-патогенных уровень Kingella spp. достоверно был повышенным по сравнению с контрольной группой. Микроскопические грибы в обеих группах достоверной разницы между показателями не выявила.

Суммарная нагрузка микроорганизмов между здоровых и больных составила 14027,94±9455,89 и 12459,10±8172,93 соответственно и разница была не достоверной.

Таким образом, анализ таблицы 1 показывает, что суммарная нагрузка по группам микроорганизмов между здоровыми и больными достоверную разницу не выявила, а среди условно-патогенных выявлена достоверная разница, что указывает на роль этих микроорганизмов в развитии хронического уретрита.

Следующим этапов нами произведена анализ определения уровня микроорганизмов между группами среди резидентных микроорганизмов (Таблица 2.). Суммарная нагрузка между здоровыми и больными составила 11616,06±8643,8 и 12701,97±22342,8 (р=0,0975), т.е. достоверной разницы между показателями не выявлено, хотя показатели некоторых микроорганизмов отличались. В этой группе мы обращали внимание на значительное повышения уровня микроорганизмов, если таковы имеются.

С другой стороны анализ показал, что уровень транзиторных (условно-патогенных) микроорганизмов (Таблица 3.) достоверно отличается между здоровыми и больными идиопатическим уретритом и составил 612,02± 428,49 и 1051,24 ±576,33 (р= 0,0029) соответственно, что имеет важное значение для практического врача. Выявлено, что уровень большинство условно-патогенных микроорганизмов достоверно выше по сравнению с нормой. В процессе анализа выявлено, что у больных ХИУ уровень 2-7 условно-патогенных микроорганизмов был значительно выше пороговых значений у 104 (88%) пациента из 118, а здоровых только у 12 (11%) из 109 отмечалось повышение уровня показателей не более 2 микроорганизма при МСММ исследовании (Таблица 2). Кроме того, у больных ХИУ также отмечалось достоверное повышение уровня в норме не встречаемых микроорганизмов.

Таким образом, с учетом проведенного анализа, выявлено увеличение суммарного содержания условно-патогенных микроорганизмов у больных ХИУ. Эти данные указывают на необходимость проведения антибактериальной терапии. Полученные результаты показали резкое уменьшение или исчезновение клинических симптомов и достоверное снижения уровня условно-патогенных микроорганизмов, что наглядно иллюстрированы в ниже приведенных клинических примерах (Примеры №1,2).

В клинической практике результат анализа МСММ мазка уретры пациента, обратившегося с жалобами, сопоставляется с вычисленными здоровыми, зарегистрированные значения, превышающие референтные, автоматически выделяются цветом в отчете и отражаются в диаграмме для удобства работы врача.

Таким образом, с учетом построенных диаграмм и таблиц с описательными статистиками были определены значения микробиоты уретры. Данные результаты имеют существенную клиническую значимость, так как облегчают врачу задачу постановки диагноза, правильного наблюдения за пациентом, выработки тактики лечения, подбора этиотропных препаратов. Также полученные данные позволяют врачу на первоначальном этапе оценить степень тяжести заболевания и выработать прогноз течения болезни.

Предлагаемый способ определения значений показателей микроорганизмов в уретре позволяет провести высокоточную диагностику хронического идиопатического уретрита, путем сопоставления с данными здоровых мужчин с учетом показателей транзиторных организмов.

Выявление у мужчин с жалобами, но с отсутствием микроорганизмов по данным микроскопии, культуральных и ПЦР методов, фоновых микроорганизмов позволили определить достоверные диагностические критерии, позволяющие врачу заподозрить наличие идиопатического уретрита. Таким образом, врач получает данные указывающие на диагнозе идиопатического уретрита у пациентов и для определения адекватной тактики лечения.

Таким образом, в заключение можно констатировать, что заявляемый новый способ диагностики хронического уретрита у мужчин обладает высокой точностью, информативностью, объективностью и доказательностью, опираясь на количественные и качественные критерии. Использование методики СММ отличается высокой чувствительностью (1×10³-1×10⁴ клеток в пробе) и достоверностью, возможностью использования в клинической диагностике. Способность выявлять возбудителей инфекций, которые другими методами не выявляются, а также находящихся в «спящем» состоянии (микроколонии окутаны защитной полисахаридной капсулой) делает метод универсальным в отношении разных групп микроорганизмов: бактерий, грибов, вирусов с возможностью идентификации микроорганизмов до вида. Он позволяет в короткие сроки (полное время анализа составляет 2 ч), провести диагностику идиопатических уретритов, выявить этиологическую структуру на основании объективных и точных результатов исследования пациента, назначить своевременное этиотропное лечение, а также осуществлять динамическое наблюдение за эффективностью проводимой терапии.

Способ может применяться как для диагностики, так и для контроля лечения. Способ доступен в применении и может быть использован в условиях любой практической лаборатории.

Работоспособность заявляемого способа подтверждается следующими клиническими примерами.

Пример 1.

Пациент Ш-ев, 27 лет. Диагноз: хронический уретрит. Поступил с жалобами на дискомфорт в области промежности, на периодические рези в области мочеиспускательного канала. Считает себя больным в течении нескольких месяцев. 3 мес назад обследовался по поводу ИППП патология не выявлено. В связи с усилением симптомов заболевания обратился с целью обследования и лечения. С целью верификации диагноза была выполнена микроскопия мазка из уретры, где обнаружено повышение количества лейкоцитов 12-15 (Фиг. 1). Бактериологический посев выявил рост Streptococcus agalactiae в пограничной зоне (Фиг. 2). Андрофлора - нормоценоз (Фиг. 3).

Проведено обследование по заявляемому способу (Фиг. 4). В анализе методом МСММ выявлено повышение уровня 5 условно-патогенных микроорганизмов: Staphylococcus aureus более чем в 8 раз, Peptostreptococcus anaerobius18623 более чем в 2 раза, Candida spp., а также повышение уровня Clostridium difficile и Enterococcus spp. Суммарное содержание транзиторных (условно-патогенных) микроорганизмов увеличено почти в более чем 5 раз по сравнению с здоровой группой. Кроме того, выявлено повышение уровня плазмологен (Фиг. 4).

По результатам обследования были назначены этиотропные препараты. Контроль за ходом лечения осуществлялся проведением повторных анализов. В контрольных анализах в культуральном посеве роста флоры не выявлено (Фиг. 5). На контрольной МСММ выявлено исчезновение или значительное снижение показателей условно-патогенных микроорганизмов, а также снижение уровня повышенных до лечения резидентных микроорганизмов до пороговых значений (Фиг. 6).

Пример 2.

Пациент Ф-ев, 42 г. Диагноз: хронический уретрит. Поступил с жалобами на периодические рези в области мочеиспускательного канала, покраснение наружного отверстия уретры. Считает себя больным в течении более 2 лет. Со слов неоднократно обследовался у уролога, где данных за ИППП и других лабораторных признаков уретрита не выявлено, принимал периодически противогрибковые препарата без улучшения. В связи с усилением симптомов заболевания обратился с целью обследования лечения. С целью верификации диагноза была выполнена микроскопия мазка из уретры, где обнаружено повышение количества лейкоцитов 1-2 (Фиг. 7). Бактериологический посев роста флоры не выявил. Андрофлора - дисбиоз (Фиг. 8).

Проведено исследование МСММ по заявляемому способу (Фиг. 9). В анализе методом МСММ выявлено значительное повышение уровня 4 условно-патогенных микроорганизмов: Staphylococcus aureus более чем в 6 раз, Peptostreptococcus anaerobius18623 более чем в 3 раза, Энтеробактерии 2 вида. Суммарное содержание транзиторных (условно-патогенных) микроорганизмов увеличено почти в более чем 4 раза по сравнению с здоровой группой (Фиг. 9).

По результатам обследования были назначены этиотропные препараты. Контроль за ходом лечения осуществлялся проведением повторных анализов. В контрольных анализах в культуральном посеве роста флоры не выявлено. На контрольной МСММ выявлено исчезновение или значительное снижение показателей условно-патогенных микроорганизмов, а также снижение уровня повышенных до лечения резидентных микроорганизмов до пороговых значений (Фиг. 10).

Пример 3.

Обследуемый Н., 44 года. Диагноз: обследование. Обратился для обследования через мес после случайного полового контакта без предъявления жалоб. С целью обследования выполнена микроскопии мазка из уретры, где обнаружено лейкоциты до 6 в п/з (Фиг. 11). Бактериологический посев мазке уретры роста флоры не выявил (Фиг. 12). Андрофлора - нормоценоз (Фиг. 13).

Проведено исследование МСММ по заявляемому способу (Фиг. 14). В анализе методом МСММ выявлено незначительное повышение уровня только 1 условно-патогенного микроорганизма Staphylococcus aureus в пределах ниже порогового значения (Фиг. 14).

По результатам обследования рекомендовано динамическое наблюдение.

В ходе разработки заявляемого способа диагностики хронического уретрита у мужчин, нами проведено исследование мазка уретры у 118 мужчин, возраст от 20 до 45 лет, средний возраст 30,22 года с различными жалобами или объективными признаками уретрита. Кроме того, обследовано 109 здоровых, обратившихся для обследования. У всех было выполнено исследование мазка из уретры: микроскопия, посев на микрофлору и чувствительность к антибиотикам - рост не выявлен. По данным Андрофлор у 6 пациентов - умереный дисбиоз и у остальных нормоценоз. И только в анализах МСММ выявлено значительное повышение уровня условно-патогенных микроорганизмов. У здоровых мужчин все показатели были в норме.

На основании сопоставления клинико-анамнестических данных, результатов лабораторных исследований и результатов статистического анализа авторами разработаны количественные и качественные критерии, позволяющие диагностировать нормобиоту и состояния дисбаланса биоты при уретрите, обусловленном условно-патогенными микроорганизмами, у мужчин репродуктивного возраста, что позволяет проводить объективную дифференциальную диагностику идиопатического уретрита, обусловленных условно-патогенными микроорганизмами.

В качестве количественного критерия предложен разработанный авторами показатель соотношения между общим числом геномов бактерий, характерных для мужчин репродуктивного возраста, числом геномов нормобиоты и отдельных условно-патогенных микроорганизмов у исследуемого пациента, позволяющий диагностировать нормобиоту или ХИУ. Объективное определение этиологического значения конкретного условно-патогенного микроорганизма или их ассоциации в развитии уретрита позволяет стандартизировать лекарственную терапию согласно принципу показания. Своевременно назначенная терапия позволяет предупредить развитие осложнений, связанных с нарушением репродуктивной функции (простатит, орхит, эпидидимит), и, как их следствие, бесплодия.

Таким образом, впервые разработан способ диагностики хронического уретрита идиопатической формы, обусловленной условно-патогенными микроорганизмами, за исключением известных условно-патогенных у мужчин репродуктивного возраста, который является высокоэффективным и доказательным. Он дает возможность провести достоверную диагностику идиопатического уретрита, обусловленного условно-патогенной биотой, и выявить этиологическую структуру ХИУ.

Способ обладает высокой точностью, информативностью, объективностью и доказательностью, опираясь на количественные и качественные критерии. Он позволяет в короткие сроки, в течение 2-х часов, провести диагностику идиопатического уретрита, выявить этиологическую структуру на основании объективных и точных результатов исследования пациента, назначить своевременное этиотропное лечение, а также осуществлять динамическое наблюдение за эффективностью проводимой терапии.

Заявляемый способ апробирован в клинике на достаточно большом количестве пациентов, показал свою применимость и эффективность и может быть рекомендован к применению в урологической практике.

Таблица 2. Описательные статистики для пациентов с хроническим уретритом и здоровых мужчин по резидентным микроорганизмам № Показатель 1 Actinomyces spp. 74,76 ± 247,66 26,79 ± 50,84 0,0344 2 Actinomyces viscosus 358,42 ± 539,20 347,69 ± 464,78 0,6041 3 Alcaligenes spp. 27,69 ± 191,59 11,31 ± 46,21 0,7761 4 Bifidobacterium spp. 241,96 ± 515,56 162,55 ± 357,25 0,5535 5 Blautia coccoides 129,53 ± 412,59 402,08±1198,23 0,9152 6 Clostridium perfringens 21,43 ± 96,53 46,94 ± 236,05 0,1935 7 Clostridium spp. 1430,54±2340,77 939,62± 1996,07 <0,0001 8 Clostridium propionicum 83,98 ± 277,86 160,13 ± 450,89 0,7109 9 Clostridium ramosum 656,55± 1404,15 1252,66±3894,39 0,1321 10 Corynebacterium spp. 25,65 ± 64,43 23,76 ± 60,94 0,5387 11 Eggerthella lenta 4873,20±19 596,47 2837,96±2800,24 0,2041 12 Eubacterium spp. 246,78 ± 558,24 213,75 ± 351,14 0,8587 13 Fusobacterium spp. 2,27 ± 11,90 381,7 ± 1155,91 0,0007 14 Lactobacillus spp. 1915,47±2698,57 2012,42±2387,15 0,9852 15 Nocardia spp. 32,99 ± 121,08 63,73 ± 266,93 0,4272 16 Prevotella spp. 30,48 ± 47,11 116,97 ± 508,81 0,0208 17 Propionibacterium spp 11,22 ± 27,52 23,04 ± 109,41 0,7622 18 Propionibacterium acnes 54,83 ± 181,92 208,93 ± 654,07 0,7300 19 Propionibacterium freudenreichii 851,62± 1195,01 822,23± 1086,89 0,9900 20 Propionibacterium jensenii 185,74 ± 541,48 126,87 ± 278,54 0,3408 21 Pseudonocardia spp. 33,21 ± 82,50 33,21 ± 93,11 0,3047 22 Rhodococcus spp. 141,59 ± 178,46 249,27± 1125,18 0,6800 23 Staphylococcus spp. 281,14 ± 485,88 305,97 ± 769,23 0,4594 24 Staphylococcus epidermidis 31,02 ± 114,32 32,82 ± 107,06 0,9738 25 Streptococcus mutans 465,25 ± 524,62 474,03 ± 422,41 0,3021 26 Streptococcus spp. 372,3±1302,1 122,4 ± 534,27 0,0005 27 Streptomyces spp. 33,15 ± 60,94 29,44 ± 49,76 0,4768 28 Streptomyces farmamarensis. 1,66 ± 11,14 0,34 ± 2,85 0,5068 Сумма 12701,97±22342,8 11616,06±8643,8 0,0975

Таблица 3. Описательные статистики для пациентов с хроническим уретритом и здоровых мужчин по транзиторным микроорганизмам № Показатель 1 Bacillus cereus. 19,68 ± 63,95 0,92 ± 7,78 0,0028 2 Bacterioidis fragilis. 0,10 ± 0,62 53,49 ± 406,05 0,2820 3 Staphylococcus aureus. 281,14 ± 485,88 305,97 ± 769,23 0,4594 4 Clostridium difficile. 27,55 ± 71,12 30,18 ± 70,06 0,2207 5 Cl. hystolyticum/Str. pneumonia. 104,60±264,78 20,93 ± 70,27 0,0048 6 Enterococcus spp.. 96,86 ± 134,40 75,65 ± 123,96 0,0638 7 Flavobacterium spp.. 1,75 ± 16,94 2,54 ± 19,25 0,3781 8 Helicobacter pylori. 43,28 ± 351,55 5,12 ± 21,62 0,4141 9 Kingella spp.. 22,50 ± 90,83 1,87 ± 9,39 0,0150 10 Actinomyces spp.. 74,76 ± 247,66 26,79 ± 50,84 0,0344 11 Peptostreptococcus anaerobius18623. 208,61 ± 527,33 134,83 ± 340,47 0,0392 12 Peptostreptococcus anaerobius17642. 38,06 ± 229,41 23,17 ± 153,27 0,6360 13 Propionibacterium spp. 11,22 ± 27,52 23,04 ± 109,41 0,7622 14 Acinonetobacter spp. 3,75 ± 21,10 1,85 ± 9,04 0,3618 15 Pseudomonas aeruginosa. 1,07 ± 6,31 0,01 ± 0,12 0,3227 16 Энтеробактерии. 116,31±517,08 46,07 ± 351,31 0,02466 17 Сумма 1051,24 ±576,33 612,02± 428,49 0,0029

Изобретение относится к медицине, а именно к урологии, и может быть для выявления хронического уретрита у мужчин. В клиническом материале – мазке из уретры - с помощью газовой хроматографии масс-спектрометрии идентифицируют и количественно оценивают молекулярные компоненты микробного происхождения. И при повышении уровня не менее 3 условно-патогенных микроорганизмов, в соответствии с таблицей 3, представленной в описании, при повышении суммарного уровня этих показателей как минимум на 50% выше здоровой группы, диагностирую хронический уретрит, обусловленный условно-патогенными микроорганизмами. Способ позволяет повысить точность диагностики хронического уретрита за счет оценки совокупности наиболее значимых показателей. 3 з.п. ф-лы, 14 ил., 3 пр.

1. Способ диагностики хронического уретрита, обусловленного условно-патогенными микроорганизмами, включающий в себя клинический осмотр пациента, установление наличия или отсутствия клинических симптомов уретрита и степени их выраженности, исследование взятых из уретры биопроб, отличающийся тем, что в исследуемом материале – мазке из уретры - методом масс-спектрометрии микробных маркеров (МСММ), одновременно определяют количественно содержание 57 микроорганизмов с одновременной оценкой общей микробной нагрузки, уровня микроорганизмов по видовым принадлежностям и группам, уровня резидентных микроорганизмов, уровня транзиторных условно-патогенных микроорганизмов, уровня вирусов, уровня эндотоксина и диагноз хронический идиопатический уретрит устанавливают на основании повышения уровня не менее 3-х условно-патогенных микроорганизмов в соответствии с таблицей 3, представленной в описании, при повышении суммарного уровня этих показателей как минимум на 50% выше здоровой группы.

2. Способ диагностики хронического уретрита, обусловленного условно-патогенными микроорганизмами по п. 1, отличающийся тем, что диагноз устанавливают после выявления микроорганизмов в случаях, когда посев и ПЦР не дают результатов.

3. Способ диагностики хронического уретрита, обусловленного условно-патогенными микроорганизмами по п. 1, отличающийся тем, что диагноз устанавливают на основании повышения уровня не менее 3 условно-патогенных микроорганизмом с наличием жалоб и клинических симптомов в момент исследования или в анамнезе.

4. Способ диагностики хронического уретрита, обусловленного условно-патогенными микроорганизмами по п. 1, отличающийся тем, что диагноз устанавливают на основании повышения уровня не менее 3-х условно-патогенных микроорганизмом в уретре у пациентов с жалобами и клиническими симптомами в момент осмотра или в анамнезе, путем сопоставления данных здоровых мужчин с учетом показателей транзиторных организмов.