Способ диагностики хронического вирусного простатита Российский патент 2024 года по МПК G01N33/487 G01N33/569 G01N30/72 C12Q1/686 

Изобретение относится к медицине, в частности к урологии, может быть использовано для дифференциальной диагностики между бактериальным, абактериальным простатитом и вирусным, а также при мониторинге и коррекции контроля лечения пациентов с хроническим вирусным простатитом.

В структуре урологических болезней хронический простатит/синдром хронической тазовой боли (ХП/СХТБ), доля которого среди всех урологических болезней составляет 9-11%, остается распространенное и трудно поддающееся лечению социально значимое заболевание у мужчин репродуктивного и трудоспособного возраста [В. П. Ковалык, В. В. Евдокимов, В. В. Малиновская и др. Анализ результатов комплексного лечения пациентов с хроническим простатитом/синдромом хронической тазовой боли при обнаружении герпесвирусов в урогени//Медицинский научно-практический портал. 2017.01.18.- 11-39]. По данным некоторых авторов, у 8-11 % европейцев и 3-16 % американцев простатит является рецидивирующим заболеванием [Smith C.P. Male chronic pelvic pain: An update. Indian J Urol 2016;32(1):34-9.]. В России у каждого 2-го мужчины, обратившегося к урологу, находят ХП [Аляев Ю.Г., Глыбочко П.В., 2015]. По данным В. А. Божедомова и соавт. (2015), воспалительный процесс в ПЖ выявлен у 19 % мужчин. По данным Е. В. Кульчавеня и соавт. (2015), ХП зафиксирован у 37-42,3 % пациентов, посещающих врача амбулаторно.

Известно, что бактериальные простатиты, которые ассоциируются с бактериальными инфекциями встречаются не более чем в 10% случаев ХП/СХТБ. Остальные 90% считаются абактериальным ХП/СХТБ, т. е. не связанным с определенными микроорганизмами, и относятся к заболеваниям неясной этиологии. Именно абактериальный ХП/СХТБ (категория III) находится в фокусе современных исследований ввиду того, что это наиболее распространенная разновидность заболевания с наименее удовлетворительными результатами лечения. По мнению некоторых авторов, существующие методы лабораторного исследования, не отвечают требованиям современности, так как спектр определяемых микроорганизмов ограничен [Локшин К.Л. Простатит: что нового и полезного в фундаментальных и клинических исследованиях? Вестник урологии. 2017;5(4):69-78. DOI: 10.21886/23086424-2017-5-4-69-78.; Черногубова Е.А. Маркёры воспаления при разных формах хронического абактериального простатита. Вестник урологии. 2018;6(2):44-53. DOI:10.21886/2308-6424-2018-6-2-44-43].

По данным А. А. Бреусова и соавт. (2017), под маркой хронического абактериального простатита нередко скрываются внутриклеточные возбудители и вирусы. Авторы молекулярно-генетическим методам у 58 больных с длительно существующим простатитом и отрицательным посевом секрета простаты (хронический простатит категории 3-а) у 7 пациентов наряду с уропатогенами был найден вирус в сочетании с другими внутриклеточными паразитами. У восьми пациентов урогенитальный герпес проявлялся характерными высыпаниями, а у одного была латентная форма инфекции. Авторы рекомендуют больных простатитом категории 3-а обследовать на внутриклеточные инфекции и вирусы, которые также могут поддерживать воспаление простаты.

Одной из сложных проблем остается роль вирусов в развитии хронического простатита, так как этиологическая роль вирусов в развитии простатита остается труднодоказуемой и недостаточно изученной. Это связано с трудностями диагностики вирусного простатита, так как достоверных методов обнаружения вируса в предстательной железе не существуют.

Одной из методик является биопсия предстательной железы, при которой возможно обнаружения вируса, однако метод является инвазивной и иногда с серьёзными осложнениями, в этой связи применяется крайне редко.

В этой связи в последние десятилетия в литературе значительное внимание уделяется роль вирусов в развитии воспалительных заболеваний половых органов. Основное внимание в качестве потенциальных патогенов в течение последних 20 лет уделяется двум представителям семейства Herpesviridae - вирусам простого герпеса типа 1-го и типа 2 (ВПГ-1 и ВПГ-2), широко распространенным в популяции и передающимся половым путем и о поражают многие органы и системы, а также научно обосновано доказано их роль в поражении половой системы, в частности у ВПГ-2 (около 80% случаев) и ВПГ-1 (20% случаев). Клиническая картина и репродуктивные нарушения у мужчин, вызванные ВПГ-1 и ВПГ-2, зависят от поражения вирусами уретры и внутренних половых органов (яичек с придатками, семявыносящих протоков, семенных пузырьков, предстательной железы) путем формирования воспалительных очагов, а также сенсорных ганглиев вегетативной нервной системы, ответственной за эрекцию и эякуляторную функцию. Все указанные выше поражения, вызываемые вирусами, нередко станут причинами бесплодия у мужчин [Перспективы использования интерферона в лечении бесплодия у мужчин/ С. В. Рищук, Е. И. Кахиани, В. Е. Мирский, М. С. Гогуа, Д. С. Россолько, Л. Ю. Нилова, Т. А. Дудниченко: Лечащий врач № 4/2018: 75-85. Исаков В. А., Архипова Е. И., Исаков Д. В. Герпесвирусные инфекции человека: руководство для врачей / Под ред. В. А. Исакова. СПб:СпецЛит, 2013 2-е изд., перераб. и доп. 670 с.; Дюдюн А. Д., Полион Н. Н., Нагорный А. Е. Герпесвирусная инфекция. Клинико-иммунологические особенности. Клиническая лекция // Дерматовенерология. Косметология. Сексопатология. 2015; 3-4; 119-142; Простой герпес у взрослых: клинические рекомендации национального научного общества инфекционистов. М., 2014 129 с.].

Таким образом, недооценка внутриклеточных возбудителей, особенно вирусов как этиологического фактора хронического простатита и воспалительного процесс других половых органов может привести к хронизации заболевания, неудачам в лечении и развитию бесплодия.

Указанное выше способствует, соответственно, изменению методологии проведения таких исследований и поиску новых более усовершенствованных методик.

Известен способ дифференциальной диагностики заболеваний предстательной железы и уретры, включающий определение количества лейкоцитов в единице объема при исследовании 10 мл предмассажной и 10 мл постмассажной порций утренней мочи, и при увеличении количества лейкоцитов в постмассажной порции мочи на 2000-2500 в 1 мл диагностируют простатодинию, на 2500-6000 в 1 мл - застойный простатит, более чем на 6000 в 1 мл - инфекционный простатит, а увеличение количества лейкоцитов в предмассажной порции мочи свидетельствует о наличии уретрита [патент RU № 2263915, опубл.10.11.2005.].

Недостатком данного способа является возможность диагностировать сам факт наличия микроорганизма и оценить тяжесть, но не имеет возможность определить вирусов.

Известен способ диагностики дисбаланса микробиоты различных биотопов человека и степени его выраженности, характеризующийся тем, что с помощью метода полимеразной цепной реакции в «реальном времени» в исследуемой биопробе определяют общее число геномов микроорганизмов, характерных для конкретного биотопа, число геномов нормобиоты и условно-патогенной биоты, полученные величины сравнивают между собой, определяют соотношение между числом геномов нормобиоты и условно-патогенной биоты и при превышении числа геномов нормобиоты относительно числа геномов условно-патогенной биоты в 1000 раз констатируют отсутствие дисбаланса, оценивая данный показатель как вариант нормы, а при значении данного показателя менее чем 1000 раз диагностируют дисбаланс и устанавливают степень его выраженности путем определения соотношения между числом геномов нормобиоты и общим числом геномов микроорганизмов, присутствующих в исследуемой пробе, а также между числом геномов условно-патогенной биоты и нормобиоты и при снижении числа геномов нормобиоты относительно общего числа геномов микроорганизмов в 10-100 раз и снижении числа геномов условно-патогенной биоты относительно числа геномов нормобиоты в 100-1000 раз устанавливают легкую степень дисбаланса, а при превышении числа геномов нормобиоты относительно общего числа геномов микроорганизмов более чем в 100 раз, и превышении числа геномов условно-патогенной биоты относительно числа геномов нормобиоты в 10 раз и более или менее этой величины устанавливают выраженную степень дисбаланса [патент RU №2362808, опубл. 27.07.2009].

Данная технология - запатентованная компанией «ДНК-Технология» [патент RU №2362808, опубл. 27.07.2009.] и зарегистрированная в МЗ РФ в качестве медицинского диагностикума Андрофлор® (Регистрационное удостоверение № РЗН 2016/4490 от 25.07.2016 г.) - это способ количественного исследования микрофлоры урогенитального тракта мужчин методом ПЦР в реальном времени. В основе исследования - современные представления о сложном составе микробиома (набор микроорганизмов, живущих в организме человека) [https://www.uroweb.ru/partners_docs/ДНК_Технология/Андрофлор.pdf].

Недостатком указанного способа является исследование всего 24 микроорганизмов без определения вирусов, что ограничивает его возможности.

Известен способ дифференциальной диагностики хронического простатита, включающий лабораторные исследования, отличающийся тем, что для подтверждения диагноза пациентам выполняют микроскопию секрета предстательной железы и микробиологический анализ спермы, до и после трех сеансов низкоинтенсивной инфракрасной лазеротерапии, после чего окончательно устанавливают диагноз хронический простатит категории II, категории IIIA или категории IIIB [патент RU №2450270, опубл. 10.05.2012].

Недостатком указанного способа, так же, как и предыдущего является сложность и трудоемкость, так как предусматривается трехдневная лазеротерапия четырех зон, после которой проводились микробиологический анализ спермы и микроскопия секрета предстательной железы по общепринятой методике и бактериологический анализ.

Известен способ определения бактериологической обсеменённости мочи, секрета предстательной железы и эякулята факультативно-анаэробными и неклостридиально-анаэробными бактериями, включающий забор материала, его посев на селективные питательные среды, выделение и идентификацию культур микроорганизмов, отличающийся тем, что производят посев мочи, секрета предстательной железы и эякулята на среду Блаурокка, бульон Шадлера, агар Шадлера, кровяной агар (КА) на основе среды Мюллер-Хинтон, желчно-эскулиновый агар для бактероидов - для культивирования неклостридиально-анаэробных бактерий; среду Эндо, хромогенный селективный агар для энтерококков, хромогенный селективный агар для кандид, хромогенный селективный агар для клебсиелл, хромогенный селективный агар для стафилококков, КА на основе среды Мюллер-Хинтон - для культивирования факультативно-анаэробных бактерий в последовательных разведениях от 10-1 до 10-10 и выявляют факультативно-анаэробные и неклостридиально-анаэробные бактерии и их концентрацию с минимального уровня разведений 10-1 [Патент RU №2452774, опубл. 10.06.2012.].

Недостатком данного метода является то, что исследование констатирует наличие бактериального простатита и нет возможности определить наличие вирусов.

Известен способ определения ДНК герпесвирусов ВПГ 1-го, 2-го типа, вируса Эпштейна-Барр (ВЭБ), ЦМВ и ВГЧ 6-го типа методом ПЦР в реальном времени в эякулятах [В. П. Ковалык, В. В. Евдокимов, В. В. Малиновская и др. Анализ результатов комплексного лечения пациентов с хроническим простатитом/синдромом хронической тазовой боли при обнаружении герпесвирусов в урогени//Медицинский научно-практический портал.- 2017.01.18.- 11-39]. Авторы у 65 пациентов у 20 выявила ДНК ГВЧ и показали, что ГВЧ встречались в 31/65 изученных образцов как в эякулятах, так и в двух других урогенитальных материалах.

Недостатком указанного исследования явилось то, что наиболее распространенные герпесвирусы, ассоциированные с генитальным герпесом и простатитом, а именно ВПГ 1-го и 2-го типа, в эякуляте пациентов группы 1 не были обнаружены ни до, ни после лечения. Авторы это объясняют либо низкой концентрацией ВПГ 1-го и 2-го типа в эякуляте, либо недостаточно высокой чувствительностью наборов для детекции вирусной ДНК, либо состоянием латенции ВПГ 1-го и 2-го типа, при котором вирус находится в нервных клетках в эписомном состоянии и не реплицируется.

Наиболее близким к заявленному техническому решению является 1. Способ определения референтных значений показателей микроорганизмов в предстательной железе, исследуемых методом хромато-масс-спектрометрии, включающий в себя вычисление референтного диапазона норм, значение которых вычислено на основе выборки произвольной группы исследуемых объектов по каждому микроорганизму в конкретном биотопе конкретного обследуемого, для совокупности микроорганизмов, определяемой в исследуемом материале с помощью метода масс-спектрометрии микробных маркеров (МСММ), отличающийся тем, что в исследуемом биоматериале - секрете предстательной железы - методом МСММ одновременно определяют количественно содержание 57 микроорганизмов с одновременной оценкой общей микробной нагрузки и референтного значения норм по каждому микроорганизму внутри микробного сообщества для каждого конкретного обследуемого; проводят сравнение численности микроорганизмов в норме и патологии; анализируют структуры распределения численности микроорганизмов при разделении обследуемых пациентов на больных и здоровых - без патологии в анамнезе; анализируют непараметрическими методами гистограммы частотного распределения микроорганизмов, которые в правой части имеют высокий столб в нуле и ненулевые значения; по различию в частоте появления ненулевых значений тех или иных маркеров делают заключение об относительной распространенности того или иного микроорганизма у пациентов в секрете простаты.

2. Способ определения референтных значений показателей микроорганизмов в предстательной железе, исследуемых методом хромато-масс-спектрометрии по п. 1, отличающийся тем, что значения показателей микроорганизмов отображают в таблицах и диаграммах с указанием референтных значений.

3. Способ определения референтных значений показателей микроорганизмов в предстательной железе, исследуемых методом хромато-масс-спектрометрии по п. 1, отличающийся тем, что микроорганизмы, превышающие референтные значения, выделяют в диаграммах и таблицах цветом.

4. Способ определения референтных значений показателей микроорганизмов в предстательной железе, исследуемых методом хромато-масс-спектрометрии по п. 1, отличающийся тем, что осуществляют произвольную выборку обследуемых с учетом возраста, или анамнеза, или жалоб, или клинической симптоматики [патент RU2791489, опубл. 09.03.2023].

Недостатком данного изобретения является отсутствие конкретной информации об исследовании вирусов урогенитального тракта мужчин в секрете простаты у пациентов с простатитом, так как в нем речь идет об исследовании микробиоты предстательной железы и определения вирусов без выяснения типа.

Задачей, на решение которой направлено заявляемое изобретение является разработка достоверных диагностических критериев, позволяющих провести дифференциальную диагностику хронического бактериального/абактериального простатита и вирусного простатита, и определить адекватную тактику лечения.

Поставленная задача решается тем, что в способе диагностики хронического вирусного простатита у пациента с клиническими симптомами хронического простатита в исследуемом биоматериале - секрете предстательной железы, методом газовой хроматографии - масс-спектрометрии (ГХ-МС) по стандартной медицинской технологии (МЗ РФ № НЮ-40006, 17.08.2009.) определяют количественно содержание 57 микроорганизмов с одновременной оценкой общей микробной нагрузки с целью исключения транзиторных микроорганизмов, которые могут явиться причиной простатита; анализируют непараметрическими методами таблицы частотного распределения вирусов; исходя из их распределения и выявления определяют количество вирусов простого герпеса типа 1, простого герпеса типа 2, и, если суммарный уровень вирусов составляет от 6,16х10⁵ до 294 х 10⁵ (клеток/грамм), делают заключение о наличии хронического простатита вирусной этиологии.

2. Способ диагностики хронического вирусного простатита по п. 1, отличающийся тем, что вирусный простатит устанавливают после исключения бактериального простатита методами Андрофлоры и ПЦР.

3. Способ диагностики хронического вирусного простатита по п. 1, отличающийся тем, что уровень вирусов в секрете простаты отображают в таблицах с указанием их значений у больных хроническим простатитом и здоровых.

4. Способ диагностики хронического вирусного простатита по п. 1, отличающийся тем, что осуществляют выборку обследуемых с учетом анамнеза, жалоб и характерной клинической симптоматики.

5. Способ диагностики хронического вирусного простатита по п. 1, отличающийся тем, что устанавливают конкретные типы вирусов, которые имеет важное значение при постановке диагноза вирусного простатита.

Техническим результатом предложенного изобретения является повышение точности дифференциальной диагностики хронического вирусного простатита за счет количественной оценки фонового присутствия и типа вирусов в секрете ПЖ, исследуемом методом ГХ-МС у больных хроническим абактериальном простатитом, что позволяет выбрать обоснованную тактику ведения пациента и снизить количество рецидивов.

Социальная значимость данной проблемы обусловлена влиянием хронического рецидивирующего простатита с болевым синдромом, расстройством мочеиспускания и нейровегетативных нарушений, а также развитием бесплодия на качество жизни пациентов с хроническим простатитом, которое существенно нарушается в результате длительного течения инфекционно-воспалительного процесса в ткани простаты [Крупин В. Н., Крупин А.В., Воробьева А.С. Болевой симптом в клинике хронического бактериального простатита // Урологические ведомости. - 2017. - Т. 7, спецвыпуск. - С. 60-61; С. В. Рищук, Е. И. Кахиани, В. Е. Мирский, М. С. Гогуа, Д. С. Россолько, Л. Ю. Нилова, Т. А. Дудниченко: Лечащий врач № 4/2018: 75-85].

Сложным разделом данной проблемы является дифференциальная диагностика различных форм простатита. С этой целью традиционно используется микроскопическое исследование и посева секрета простаты. При выявлении микроорганизмов диагноз бактериальный простатит не вызывает сомнения. При наличии уровня лейкоцитов > 10 - 12 в поле зрения, общепризнанным является наличие бактериального простатита, а при < 10 - 12 в поле зрения - абактериального простатита [Крупин В. Н., Крупин А.В. Морфологические изменения в предстательной железе при хроническом бактериальном простатите // Урологические ведомости. - 2017. - Т. 7, Спецвыпуск. - С. 61-62.].

Однако высокий процент рецидива заболевания и развитие новых методик диагностики диктует пересмотр общепринятых диагностических критериев. Культуральные методы определяют степень и наличия ограниченного количества микроорганизмов, без определения вирусов. Некультуральный подход к идентификации микроорганизмов методом ГХ-МС (МЗ РФ № НЮ-40006, 17.08.2009.) позволяет избежать многих ограничений традиционно применяемых методик. Метод ГХ-МС стандартизован, разрешен к применению (Разрешение ФС 2010/038 от 24.02.2010) и используется в клинической практике для выявления и уточнения этиологии инфекционно-воспалительных процессов как готовое техническое решение. Метод является высокочувствительным (10⁴-10⁵ клеток/мл), быстрым (2,5 ч на полный цикл исследования), универсальным (бактерии, грибы, вирусы, - все за один анализ образца без повторов), экономичным и имеет широкий диагностический спектр (одновременное количественное определение 57 микроорганизмов). Некультуральный подход дает возможность применения в тех случаях, когда традиционные методы диагностики неэффективны, что особенно актуально при терапии хронического абактериального рецидивирующего простатита.

На основании сопоставления клинико-анамнестических данных, результатов лабораторных исследований и результатов статистического анализа авторами разработаны количественные и качественные критерии, позволяющие диагностировать хронический простатит, обусловленном вирусами, у мужчин репродуктивного возраста, что позволяет проводить объективную дифференциальную диагностику вирусного простатита, обусловленным вирусами и выбрать объективную тактику ведения пациента.

Кроме определения уровня вирусов методом газовая хроматография-масс-спектрометрия (ГХ-МС) определяется более 50 микроорганизмов различной группы, как резидентные, так и транзиторные, что позволяет получить информацию о микробиоте предстательной железы, что также важно для проведения адекватного лечения.

По данным авторов в основу основных критерий хронического вирусного простатита предложен разработанный авторами показатель повышения уровня вирусов в секрете простаты, характерные клинические симптомы и длительное рецидивирующее течение хронического простатита, что в основном встречается у мужчин репродуктивного возраста.

Выявление типа вирусов в секрете ПЖ при отсутствии других микроорганизмов, позволяет диагностировать хронический простатит вирусной этиологии, что в корне меняет подход врача к лечению, так как только назначение противовирусной терапии даст положительный результат.

Объективное определение этиологического значения конкретного вируса в развитии простатита позволяет провести дифференциальный диагноз и стандартизировать лекарственную терапию согласно принципу показания. Своевременно назначенная терапия позволяет предупредить развитие осложнений, связанных с нарушением репродуктивной функции (простатит, орхит, эпидидимит), и, как их следствие, бесплодия.

Таким образом очевидна необходимость выявления вирусов в секрете ПЖ для целей диагностики и назначения этиотропной терапии. Разработанная нами методика диагностики ХВП может применяться как для диагностики, так и для контроля лечения. Метод доступен в применении и может быть использован в условиях любой практической лаборатории.

Заявляемое изобретение иллюстрируется следующими графическими изображениями:

Фиг.1. Бактериологический посев секрета простаты;

Фиг.2. Андрофлора. Нормоценоз

Фиг.3. ГХ-МС до противовирусного лечения

Фиг.4. Анализ ХМ-МС после противовирусного лечения;

Фиг.5. ГХ-МС до противовирусного лечения;

Фиг.6. Анализ ХМ-МС после противовирусного лечения;

Фиг.7. ГХ-МС здорового обследуемого.

Таблица 1. Описательные статистики количественных показателей уровня вирусов у больных хроническим вирусным простатитом Показатель N (%) M ± S V Me [LQ; UQ] (Min; Max) ГХ-МС -простаты ВПГ 1 72
(100%) 32,76 ±
5,77 654,00% 0,00 [0,00;0,00] (6,16;
294,00) ВПГ 2 72
(100%) 44,76 ±
6,12 654,00% 0,00 [0,00;0,00] (6,22;
265,00) Сумма (средняя) 72
(100%) 38,76 ±
6,86 606,00% 0,00 [0,00;0,00] (6,19;
279,05)

Таблица 2. Описательные статистики количественных показателей уровня вирусов у больных хроническим вирусным простатитом и здоровых Показатель Группы сравнения Уровень P Хронический вирусный простатит (N=72) Здоровые (N=57) ГХ-МС-простаты (105 клеток/грамм) Вирусы. 38,10 ± 6,86 1,17 ± 0,47 0,0001 1 Herpes spp.. 1 32,76 ± 5,77 1,12 ± 0,80 0,0001 2 Herpes spp.. 2 44,76 ± 6,12 1,22 ± 0,15 0,0001

Таблица 3. Описательные статистики для пациентов с хроническим вирусным простатитом до и после лечения Показатель Группы сравнения Уровень P До лечения (N=72) После лечения (N=57) ГХ-МС-простаты (105 клеток/грамм) Вирусы. 38,10 ± 6,86 0,24 ± 0,04 0,0001 1 Herpes spp.. 1 32,76 ± 5,77 0,32 ± 0,02 0,0001 2 Herpes spp.. 2 44,76 ± 6,12 0,16 ± 0,06 0,0001

Подробное описание способа и примеры его клинического выполнения

Способ осуществляется следующим образом.

Пациенту проводят общеклиническое исследование, включая жалобы, сбор анамнеза, проведение общего объективного осмотра и пальпаторное исследование органов мошонки и предстательной железы.

При выполнении клинического осмотра у пациента выясняют характер предъявляемых жалоб на момент осмотра или в анамнезе: зуд, боль, парестезии в аногенитальной области, болезненность во время половых контактов; зуд, жжение, болезненность при мочеиспускании (дизурию).

Особенное внимание обращают на гиперемию и отечность кожных покровов и слизистых оболочек наружного отверстия уретры, полового члена, мошонки, лобка, промежности, перианальной области; единичные или множественные везикулезные элементы с прозрачным содержимым локализующиеся в области поражения, указывающие на герпетические изменения наружного отверстия уретры. При сборе анамнеза, кроме даты начала заболевания выясняют длительность болезни, характер проводимого лечения. Обязательным условием является исключения пациента из исследования, если он принимал антибиотики или противовирусные препараты в ближайшие 3 мес.

После анализа полученных субъективных и объективных данных, устанавливают наличие или отсутствие клинических симптомов простатита - боли в промежности, над лоном, частота мочеиспускания, рези по ходу уретры, наличие выделения различного характера и степени выраженности, боль при мочеиспускании, возможные осложнения со стороны органов урогенитального тракта, степень их выраженности, наличие или отсутствие осложнений со стороны органов урогенитального тракта.

У пациента с хроническим простатитом осуществляют забор секрета предстательной железы (ПЖ) после предварительной обработкой головки полового члена и наружного отверстия уретры водным раствором хлоргексидина. Накануне исследования пациент за сутки воздерживается от половых отношений и за 2 часа от мочеиспускания. Необходимые манипуляции осуществляет врач-уролог или обученный средний медперсонал. Поскольку в естественных условиях секрет ПЖ, проходя по уретре в составе семенной жидкости, смешивается с секретом других желез, для получения «чистого» материала требуется принятие в работу 2 или 3 порции секрета, что позволяет получить секрет ПЖ, в количестве 1-2 мл. Такого количества секрета предстательной железы достаточно для микробиологического исследования и анализ методом газовой хроматографии-масс-спектрометрии (ГХ-МС). Материал брали для микроскопии, посева секрета ПЖ, исследования ПЦР, Андрофлоры и ГХ-МС. На основании исследования микроскопии и посева секрета простаты, Андрофлоры и ПЦР исключают наличие бактериального простатита и вирусного методом ПЦР в режиме реального времени.

По результатам микроскопии, при наличии жалоб и местных признаков простатита, патологией считали количество лейкоцитов 5 и более в полях зрения. По результатам посева секрета простаты, ПЦР, Андрофлоры и ГХ-МС нами исключены из исследования пациенты с наличием бактериального простатита, в частности при наличии культивируемых патогенных и условно-патогенных микроорганизмов в высоких титрах, а также инфекционно- воспалительного процесса, обусловленного облигатными патогенами (Neisseria gonorrhoeae, Trichomonas vaginalis, Chlamydia trachomatis, Mycoplasma genitalium).

Все образцы секрета простаты обрабатывали на «Микробиологическом анализаторе МАЭСТРО» (ООО «Интерлаб», Россия), который представляет ГХ-МС, оснащенный системой автоматического ввода проб и полным пакетом программного обеспечения необходимого для анализа ГХ-МС, возможно применение зарубежного ГХ-МС (Agilent Technologies, США), вручную настраиваемого под требования медицинской технологии. В результате исследования ГХ-МС каждый отобранный образец характеризуется измеренным численным содержанием 57 микроорганизмов, включая анаэробы, актинобактериии, вирусы и грибы, а также тремя дополнительными показателями: суммарной микробной нагрузкой, содержанием эндотоксина и плазмалогена, итого - 60 показателей. Основное внимание обращали на количество вирусов в секрете простаты.

Статистическое исследование проводили при помощи специальных статистических критериев. При проведении статистического исследования у пациентов с хроническим простатитом оценивалась диагностическая значимость каждого микроба и вируса. Сравнение проводилось по группам до и после проведения противовирусной терапии. Распределения показателей отличались от нормального, в связи с этим был использован U-критерий Манна-Уитни (сравнивались медианы выборок, нижний и верхний квартиль) с уровнем значимости 0,05. Для статистической обработки данных и работы с графикой использовалась среда R.

Анализ полученных результатов проводили в три этапа.

На 1 этапе проанализировали жалобы, анамнез, данные объективного исследования, микроскопии секрета простаты, посев секрета простаты на флору, ПЦР в режиме реального времени и андрофлору. На основании полученных данных нами исключен бактериальный простатит. Кроме того, методом ПЦР в режиме реального времени данных за наличие вирусов герпеса 1 и 2 не выявлено.

На 2 этапе проводили анализ ГХ-МС секрета простаты, при этом мы исключали такие распространенные условно-патогенные микроорганизмы, как уреаплазмы, микоплазмы, кандида и др., роль которой в развитии простатита давно доказана. Кроме того, из исследования были исключены пациенты, у которых по данным ГХ-МС выявлены резидентные микроорганизмы в высоких титрах.

На 3-м этапе отдельно рассматривали здоровых, обративших без жалоб с целью обследования, и больных простатитом с наличием вирусов в анализе ГХ-МС. Основное внимание было уделено вирусам простого герпеса типа 1 и типа 2. При этом проведено вычисление референтного диапазона норм, значение которых вычислено на основе выборки произвольной группы исследуемых объектов по каждому микроорганизму в конкретном биотопе конкретного обследуемого, для совокупности микроорганизмов, определяемой в исследуемом материале.

С учетом клинической картины причинами вирусного простатита мы считали повышение уровня от 6,16х10⁵ до 294 х10⁵ (клеток/грамм) в совокупности любых из вирусов, который в норме в секрете ПЖ содержится в единичных количествах или совсем отсутствует.

Анализ распределение численности вирусов, определяемых методом ГХ-МС по видовым принадлежностям (Таблица 1) показал повышение суммарного уровня вирусов у больных простатитом от 6,16х10⁵ до 294х 10⁵ (клеток/грамм), что указывает на значительное превышение уровня вирусов в секрете простаты.

Анализ распределения численности вирусов, определяемых методом ГХ-МС между больным вирусным простатитом и здоровым (Таблица 2) показал достоверное повышение уровня вирусов у больных простатитом 38,10 ± 6,86 (10⁵ клеток/грамм), по сравнению со здоровыми - 1,53 ± 0,17 (10⁵ клеток/грамм), что указывает на значительное превышение уровня вирусов в секрете простаты. Превышение показателей отмечено почти более чем в 25 раз, а среди здоровых из 57 человек только у 11 диагностировано наличие вируса в небольших концентрациях.

С учетом проведенного анализа выявлено увеличение суммарного содержания микроорганизмов, вирусов у всех больных простатитом и только незначительное повышение у 16% здоровых. Эти данные указывают на необходимость проведения противовирусной терапии.

В таблице 3 приведены фактические данные суммарного содержания вирусов после проведенного противовирусного лечения. Видно, что уровень суммарного содержания вирусов всех типов достоверно снизился - до 38,10 ± 6,86 (10⁵ клеток/грамм) и 0,53 ± 0,07 (10⁵ клеток/грамм), после лечения. При этом среди 72 пациентов после лечения у 66 пациентов в анализах наличие вируса не выявлено, у остальных уровень был значительно низкий по сравнению до лечения. Кроме того, у больных исчезли все симптомы простатита.

Работоспособность заявляемого способа подтверждается следующими клиническими примерами.

Пример 1.

Пациент В-ер, 26 лет. Диагноз: хронический абактериальный простатит. Поступил с жалобами на дискомфорт в области промежности, учащенное мочеиспускание, гиперемия наружного отверстия уретры. Считает себя больным в течении более 6 лет, ежегодно получает лечение по поводу хронического простатита с временным улучшением. В связи с усилением симптомов заболевания обратился с целью обследования и лечения.

С целью верификации диагноза была выполнена микроскопия секрета предстательной железы, где обнаружено повышение количества лейкоцитов 15-18 в п/з. Бактериологический посев секрета ПЖ не выявил рост микроорганизмов (Фиг. 1). Андрофлора - нормоценоз (Фиг. 2).

В анализе ПЦР в режиме реального времени данных за вирусов не выявлено. Проведено обследование по заявляемому способу (Фиг. 3). В анализе методом ГХ-МС повышение уровня условно-патогенных микроорганизмов не выявлено. Суммарное содержание вирусов простого герпеса типа 1 и типа 2 составило 253х10⁵ клеток/грамм.

Диагноз: Хронический вирусный простатит.

По результатам обследования были назначены противовирусные препараты (Валтрекс в течение 1 мес). Контроль за ходом лечения осуществлялся проведением повторных анализов. На контрольной ГХ-МС выявлено полное исчезновение вирусов (Фиг. 4). Кроме того, у пациенты полностью исчезли местные симптомы.

Пример 2.

Пациент Л-н, 49 лет. Диагноз: хронический абактериальный простатит. Поступил с жалобами на учащенное мочеиспускание и рези, гиперемия наружного отверстия уретры. Со слов в течение более 15 лет ежегодно по 2-3 раза проходил курс лечения по поводу простатита с временным улучшением. В связи с усилением симптомов заболевания обратился с целью обследования и лечения. С целью верификации диагноза была выполнена микроскопия секрета простаты, где обнаружено повышение количества лейкоцитов 10-12 в п/з. Бактериологический посев секрета простаты не выявил рост микроорганизмов. Андрофлора - нормоценоз.

В анализе ПЦР в режиме реального времени данных за вирусов не выявлено. Проведено обследование по заявляемому способу (Фиг. 5). В анализе методом ГХ-МС повышение уровня условно-патогенных микроорганизмов не выявлено. Суммарное содержание вирусов простого герпеса типа 1 и типа 2 составила 25х10⁵ клеток/грамм.

Диагноз: Хронический вирусный простатит

По результатам обследования были назначены противовирусные препараты (Валтрекс в течение 1 мес). Контроль за ходом лечения осуществлялся проведением повторных анализов. На контрольной ГХ-МС выявлено полное исчезновение вирусов (Фиг. 6). Кроме того, у пациенты полностью исчезли местные симптомы. Пример 3.

Пациент В-ев, 31 г. Диагноз: хронический абактериальный простатит. Поступил с жалобами на слабость, периодические рези при мочеиспускании, гиперемия наружного отверстия уретры, иногда появление везикул в наружном отверстия уретры. Со слов в течение более 8 лет ежегодно по 2-3 раза проходил курс лечения по поводу простатита с временным улучшением. В связи с усилением симптомов заболевания обратился с целью обследования и лечения. С целью верификации диагноза была выполнена микроскопия секрета простаты, где обнаружено повышение количества лейкоцитов 6-8 в п/з. Бактериологический посев секрета простаты не выявил рост микроорганизмов. Андрофлора - нормоценоз.

В анализе ПЦР в режиме реального времени данных за вирусов не выявлено.

Проведено обследование по заявляемому способу. В анализе методом ГХ-МС повышение уровня условно-патогенных микроорганизмов не выявлено. Суммарное содержание вирусов простого герпеса типа 1 и типа 2 составила 6,16х10⁵ клеток/грамм.

Диагноз: Хронический вирусный простатит

По результатам обследования были назначены противовирусные препараты (Валтрекс в течение 1 мес). Контроль за ходом лечения осуществлялся проведением повторных анализов. При контрольном исследовании выявлено полное исчезновение вирусов и клинических проявлений.

Пример 4.

Пациент Б-в, 29 лет. Обратился на обследование после случайного полового акта с отсутствием жалоб. Была выполнена микроскопия мазка уретры и секрета простаты, где обнаружено лейкоциты 0-1 и 2-3 в в п/з соответственно. Бактериологический посев секрета простаты не выявил рост микроорганизмов. Андрофлора - нормоценоз.

В анализе ПЦР в режиме реального времени данных за вирусов не выявлено.

Проведено обследование по заявляемому способу (Фиг. 7). В анализе методом ГХ-МС повышение уровня условно-патогенных микроорганизмов не выявлено. Суммарное содержание вирусов простого герпеса типа 1 и типа 2 составила 0,4х10⁵ клеток/грамм.

Диагноз: Здоров. Рекомендовано динамическое наблюдение.

В ходе разработки заявляемого способа диагностики хронического вирусного простатита, нами проведено исследование секрета простаты у 72 мужчин, возраст от 22 до 49 лет, средний возраст 32,22 года с различными жалобами или объективными признаками простатита. Кроме того, обследован 57 здоровых, обратившихся для обследования. У всех было выполнено исследование мазка из уретры: микроскопия, посев на микрофлору и чувствительность к антибиотикам - рост не выявлен. По данным Андрофлор у 2 пациентов- умереный дисбиоз и у остальных нормоценоз. В анализах ГХ-МС только у 11 здоровых выявлено незначительное повышение уровня вирусов.

Таким образом, впервые разработан способ диагностики хронического вирусного простатита, обусловленного вирусами, который является высокоэффективным и доказательным. Он дает возможность провести достоверную диагностику вирусного простатита и выявить этиологическую структуру хронического простатита. Это позволит объективно выбрать адекватную тактику лечения за счет использования индивидуально подобранных противовирусных препаратов, резко снизить или полностью ликвидировать вирусы в тканях предстательной и избавить пациента от клинических симптомов, что доказанно на контрольных осмотрах и анализах секрета простаты методом ГХ-МС.

Заявляемый способ диагностики хронического вирусного простатита обладает высокой точностью, информативностью, объективностью и доказательностью, опираясь на количественные и качественные критерии. Он позволяет в короткие сроки, в течение 2-х часов, провести диагностику вирусного простатита, выявить этиологическую структуру на основании объективных и точных результатов исследования пациента, назначить своевременное этиотропное лечение, а также осуществлять динамическое наблюдение за эффективностью проводимой терапии.

Заявляемый способ апробирован в клинике на достаточно большом количестве пациентов, показал свою применимость и эффективность и может быть рекомендован к применению в урологической практике.

Изобретение относится к медицине, а именно к урологии, и может быть использовано для диагностики хронического вирусного простатита. Осуществляют получение биоматериала - секрета предстательной железы. Методом газовой хроматографии - масс-спектрометрии (ГХ-МС) определяют в биоматериале количество вирусов простого герпеса типа 1 и простого герпеса типа 2. При определении суммарного количества вирусов простого герпеса типа 1 и типа 2 от 6,16х10⁵ до 294х10⁵ клеток/грамм диагностируют наличие хронического простатита вирусной этиологии. Вирусный простатит могут устанавливать после исключения бактериального простатита методами посева секрета простаты на флору, Андрофлоры и ПЦР. Выборку обследуемых могут осуществлять с учетом анамнеза, жалоб и клинической симптоматики простатита. Способ обеспечивает возможность повышения точности дифференциальной диагностики хронического вирусного простатита за счет количественной оценки вирусов простого герпеса типа 1 и типа 2 в секрете предстательной железы, исследуемом методом ГХ-МС у больных хроническим абактериальным простатитом, что позволяет выбрать обоснованную тактику ведения пациента и снизить количество рецидивов. 2 з.п. ф-лы, 7 ил., 3 табл., 4 пр.

1. Способ диагностики хронического вирусного простатита, включающий получение биоматериала - секрета предстательной железы, далее методом газовой хроматографии - масс-спектрометрии определяют в биоматериале количество вирусов простого герпеса типа 1 и простого герпеса типа 2; и при определении суммарного количества вирусов простого герпеса типа 1 и типа 2 от 6,16х10⁵ до 294х10⁵ клеток/грамм диагностируют наличие хронического простатита вирусной этиологии.

2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что вирусный простатит устанавливают после исключения бактериального простатита методами посева секрета простаты на флору, Андрофлоры и ПЦР.

3. Способ по п. 1, отличающийся тем, что осуществляют выборку обследуемых с учетом анамнеза, жалоб и клинической симптоматики простатита.