Кормовая добавка для профилактики микотоксикозов сельскохозяйственной птицы Российский патент 2024 года по МПК A23K50/75 A23K20/142 A23K20/28 

Изобретение относится к ветеринарной фармакологии и токсикологии, а именно, к профилактическим средствам, препятствующим всасыванию микотоксинов в желудочно-кишечном тракте.

Микроскопические грибы являются естественным видом, распространенным повсеместно и населяющим все экологические ниши. Опасность для человека и животных представляют токсигенные изоляты микромицетов, продуцирующих микотоксины. Открытие афлатоксинов в начале 1960-х годов и последующие данные о широком присутствии различных микотоксинов в кормах заставили оценить последствия зараженного микотоксинами зерна для здоровья животных и человека. Микотоксины имеют большое разнообразие химических структур и характеров токсического действия (тератогенность, канцерогенность, гепатотоксичность, нефротоксичность, иммунотоксичность, генотоксичность и т.д.). Содержание микотоксинов в продуктах питания и кормах ограничено в соответствии с рекомендациями ФАО/ВОЗ и регулируется техническим регламентом таможенного союза.

В последние годы основной проблемой, связанной с загрязнением кормов, является контаминация их одновременно несколькими микотоксинами, что служит причиной комбинированных отравлений животных с развитием более выраженных патологических процессов.

Большая часть кормовых добавок, зарегистрированных в государственном реестре, производится зарубежными компаниями (Biomin, Австралия; "Kemin Industries Inc.", США; "EW Nutrition GmbH"; Германия; "Dansk Vilomix" A/S, Дания; "Framelco® B.V.", Нидерланды; "ALLTECH (U.K.) LIMITED", Великобритания; "Alltech Inc.", США; "MIAVIT GmbH", Германия; "BASF Corporation", США; "Optivite International", Великобритания; "Vinayak Ingredients India Private Limited", Индия; "Zeocem A.S.", Словакия; KESHET PRIMA FEED ADDITIVES LTD", Израиль; "Lipidos Toledo S.A.", Испания; "INNOV AD NV/SA", Бельгия; "Gordes Zeolit Madencilik Sanayi ve Ticaret Anonim Sirketi", Турция; "СинерджиКом", Республика Беларусь).

Арсенал отечественных препаратов комплексного действия, способных подавлять или уменьшать абсорбцию, стимулировать выведение микотоксинов или изменять механизм их действия, представлен в небольшом количестве. Необходимость импортозамещения, обуславливает разработку для производства в короткие сроки эффективных отечественных средств.

Отсутствие данных о патогенезе патологического воздействия при комбинированных микотоксикозах значительно сокращает арсенал эффективных способов профилактики отравлений и лечения животных.

Сложность проведения профилактических и лечебных мероприятий при микотоксикозах связана с высокой химической стабильностью микотоксинов, что затрудняет их инактивацию во время производства и переработки кормов.

Снижение отрицательного воздействия токсинов на организм возможно осуществлять за счет энтеросорбции. К адсорбирующим препаратам относятся природные минералы (бентонит, цеолит, диатомовая земля, шунгит, активированный уголь, сепиолит и др.), полисахариды. Сорбенты вносят в корма ежедневно, не более 1-1,5% к рациону в расчете на сухое вещество корма, или в качестве добавки к премиксу. Наиболее популярны сорбционные материалы, такие как:

- цеолиты (см. Патенты RU 2262863, МПК A23K 1/16, A23K 1/175, Опубл.: 27.10.2005 Бюл. №30; RU 2357739, МПК A61K 35/02, Опубл.: 10.06.2009 Бюл. №16; и др.);

- бентониты (см. патенты RU 2300204, МПК A23K 1/175, Опубл. 10.06.2007 Бюл. №16; RU 2663994, МПК A23K 20/28, Опубл.: 14.08.2018 Бюл. №23; и др.);

- шунгиты (см. Патенты RU 2569632, МПК A23K 1/175, Опубл.: 27.11.2015 Бюл. №33; RU 2430731, МПК A61K 35/02, А61Р 1/00, Опубл.: 10.10.2011 Бюл. №28; и др.);

- вермикулиты (Патенты RU 2444367, МПК A61K 35/02, A61K 31/00 Опубл.: 10.03.2012 Бюл. №7; RU 2552872, МПК A23K 1/16, Опубл.: 10.06.2015 Бюл. №16; и др.)

- смеси сорбентов алюмосиликатов (цеолиты или бентониты) и слоистых сорбентов (вермикулит или монтмориллонит) (Патенты RU 2420565, МПК C12N 1/00, A23K 1/165, A01N 63/00, Опубл.: 10.06.2011 Бюл. №16; RU 2502319, МПК A23K 1/00, A23K 1/16, Опубл.: 27.12.2013 Бюл. №36; и др.)

Также широко известны для лечения и профилактики микотоксикозов животных и птиц сорбционные материалы, такие как:

- пищевые волокна, такие как свекловичный жом (см. Патент RU 2734030, МПК A23K 10/30, Опубл.: 12.10.2020 Бюл. №29; RU 2499410, МПК A23K 1/12, Опубл.: 27.11.2013 Бюл. №33 и др.)

- олиго - и полисахариды (см. Патенты RU 2502319, МПК A23K 1/00, A23K 1/16, Опубл.: 27.12.2013 Бюл. №36; RU 2366268; МПК A23K 1/00, Опубл.: 10.09.2009 Бюл. №25 и др.);

- глюкоманнаны (см. Патенты RU 2731420, МПК A23K 50/75, Опубл.: 02.09.2020 Бюл. №25; RU 2691591, МПК A23K 10/30 Опубл: 14.06.2019 Бюл. №17; UA 23122 U, 10.05.2007.

и др.; Dawson K.J., Belkhir К.A Bayesian approach to the identification of panmictic populations and the assignment of individuals // Genetics Research. - 2001. - T. 78. - №. 1. - C. 59-77.; Ахмадышин, P.A. и др. Роль клеточной стенки в адсорбции Т-2 токсина дрожжами Saccharomyces cerevisiae // Ветеринарный врач. - 2008. - №. 1. - С. 11-12).

К общим недостаткам известных средств можно отнести: отсутствие селективной сорбции по отношению к витаминам и питательным веществам; при чем лечебный эффект адсорбентов микотоксинов в рекомендуемых дозах весьма незначителен.

Эффективность данных пробиотических препаратов основана на способности микроорганизмов, входящих в их состав, к витаминобразующей, кислотообразующей, антагонистической и иммуностимулирующей активности, при всех этих преимуществах, пробиотики практически малоэффективны при выраженной интоксикации организма микотоксинами.

Эффективность адсорбции микотоксинов и стабильность комплексов микотоксин-адсорбент в ЖКТ зависят от физико-химических свойств и адсорбента (полярность, размер пор, доступность сайтов адсорбции, площадь поверхности), и микотоксинов (полярность, рас творимость, размер и заряд) (Deng Y. et al., 2010). Афлатоксин B1 - относительно гидрофильный микотоксин с плоской молекулой. Он легко связывается большинством адсорбентов, особенно препаратами на основе глинистых минералов, путем образования координационных связей с β-карбонильной группой (Boudergue С. et al., 2009). Другие микотоксины - зеараленон, охратоксин А, фумонизин В1, Т-2 токсин и ДОН - варьируют от умеренно гидрофильных до высокогидрофобных соединений, а значит, их адсорбировать намного сложнее (Boudergue С.et al., 2009).

Наиболее близким по уровню техники к заявляемому решению можно отнести комплексное средство для профилактики микотоксикозов сельскохозяйственной птицы (см. Патент RU 2781387, Опубл.: 11.10.2022 Бюл. №29), состоящее из порошка пчелиного подмора и порошка цеолита, взятых в определенных соотношениях, которое добавляют в количестве 0,5% к массе рациона. К недостаткам известного комплексного средства можно отнести: отсутствие гепатопротективного и антиоксидантного эффектов, а также менее выраженные адсорбционные свойства и отсутствие комплексной защитой организма от микотоксинов.

Заявленная кормовая добавка для профилактики микотоксикозов у сельскохозяйственной птицы, отличается от прототипа комплексной защитой организма от микотоксинов. В составе кормовой добавки вещества, обладающие высокой сорбционной активностью (галлуазит и β-глюканы), а также оказывающие гепатопротективный (шрот расторопши), антиоксидантный (метионин) и иммуностимулирующий эффекты (β-глюканы, шрот расторопши).

При чем, известное комплексное средство для профилактики микотоксикозов сельскохозяйственной птицы предназначено только для профилактики Т-2 токсикоза, нет сведений об использовании его в качестве средства профилактики заболеваний, вызванных действием других микотоксинов или их комбинации. Как правило, сельскохозяйственные животные и птицы подвергаются воздействию двух или более типов микотоксинов одновременно, а не одного микотоксина.

Заявляемая кормовая добавка обладает высокой адсорбционной активностью, в отличие от прототипа (адсорбционная активность в отношении Т-2 токсина 70%, десорбция 5,7%, истинная сорбция 66%) (Обоснование компонентного состава комплексного средства «цеапитокс» в отношении Т-2 токсина в опытах in vitro / Перфилова К.В., Мишина Н.Н., Семенов Э.И. // Ученые записки Казанской государственной академии ветеринарной медицины им. Н.Э. Баумана. 2021. т. 247. №3. с. 208-212).

Известное комплексное средство, взятое за прототип, включают в комбикорма из расчета 5 кг/т корма, а предлагаемую кормовую добавку в расчете 2,5 кг/т корма. Еще одним существенным недостатком является наличие пчелиного подмора, на который еще не установлены показатели качества.

Технический результат, на который направлено заявленное изобретение, состоит в адсорбционном, антиоксидантном, гепатопротективном, иммуномодулирующем действиях при одновременном антитоксическом эффекте на фоне микотоксикозов.

Для достижения технического результата разработана кормовая добавка для профилактики микотоксикозов сельскохозяйственной птицы, которая содержит сорбенты природного и органического происхождения, гепатопротектор и аминокислоту, при следующем содержании компонентов, мас. %:

D, L метионин 5 растительные β-глюканы, возможна замена на дрожжевые 10 шрот расторопши, возможна замена на другой гепатопротектор 3 нанотрубки галлуазита природного происхождения остальное

Галлуазит - глинистый материал, по своему составу близок к каолиниту. В природе встречаются различные микроструктуры, наиболее распространенные получающиеся в результате сворачивания листов галлуазита - нанотрубки. Благодаря развитой поверхности, несущей электрический заряд (положительный на внутренней поверхности и отрицательный на внешней), галлуазит обладает способностью связывать токсические вещества различного происхождения. Установлена, его высокая адсорбционная активность в отношении Т-2 токсина, афлатоксина В1, дезоксиниваленола, охратоксина А, фумонизина В1.

Глюканы - активные адсорбенты растительного происхождения, проявляют пребиотическое действие. В процесс связывания микотоксинов β-D-глюканами вовлечены силы Ван-дер-Ваальса (класс сил межмолекулярного и межатомного взаимодействия) и водородная связь. Ряд исследователей утверждает, что эти адсорбенты эффективны как иммунные активаторы. Это происходит за счет определения и стимулирования макрофагов, Т-киллеров, Т-хелперов и НК-клеток, также происходит увеличение скорости созревания иммунокомпетентных клеток. В том числе, хитинглюкановый комплекс выступает как хороший энтеросорбент, так как он биосовместим, биодеградируем, нетоксичен и бактерициден. (Гематдинова В.М. Моносахаридный состав концентратов β-глюкана / В.М. Гематдинова, З.А. Канарская, А.В. Канарский, И.В. Кручина-Богданов // Сборник материалов III Международной научно-практической конференции, посвященной 100-летию ФГБОУ ВО «Кубанский государственный технологический университет». - Краснодар: КубГТУ, 2018. - С 207. - ISBN 978-5-8333-0829-5. Хасиятуллин, А.Ф. Изучение острой токсичности и кумулятивных свойств бета-глюканов растительного и дрожжевого происхождения / А.Ф. Хасиятуллин // Ветеринарный врач. - 2021. - №3. - С. 71-76. - DOI 10.33632/1998-698X.2021-3-71-76.-EDNQCNBBP).

Метионин относится к группе серосодержащих аминокислот и является первой незаменимой аминокислотой для животных и птиц. Метионин играет важную роль в обмене веществ, принимает участие в синтезе тканевых белков, а также участвует во многих процессах при синтезе витаминов, гормонов и ферментов. Обеспечивает, как восполнение пула метальных групп, необходимого для одной из завершающих стадий детоксикации (метилирование), так и устранение симптомов токсического поражения печени и восстановление ее роли в общем метаболизме при микотоксикозе. (Сельскохозяйственная биология, 2011, №2, с. 21-31. Перспективные средства для профилактики хронических микотоксикозов С.Ю. Гулюшин, Р.А. Зернов).

Шрот расторопши пятнистой получил широкое распространение благодаря своим гепатопротекторным свойствам. Основной активный компонент семян расторопши называется силимарин. Это комплекс, состоящий на 70-80% из различных флавонолигнанов (силибин, силидианин, силикристин, изосилибин, изосиликристин, дегидросилибин, силандрин) и флавоноидов (таксифолин, кверцетин) и смеси полифенолоподобных молекул (20-30%), которые точно не определены химически. Силибин, присутствующий в наибольшей концентрации в силимарине, используется в медицине и ветеринарии в первую очередь для профилактики и регенерации заболеваний печени благодаря его антиоксидантному и антифиброзному действию и отчасти благодаря его положительному влиянию на синтез белка. Вещества силимаринового комплекса хорошо известны своим иммуностимулирующим действием, но они также обладают отличной антибактериальной и противовирусной активностью в отношении некоторых микроорганизмов. Семена расторопши также содержат бетаин и триметилглицин. Некоторые эксперименты показывают, что шрот расторопши может успешно использоваться в качестве кормовой добавки, защищающей сельскохозяйственных животных от вредного действия различных микотоксинов. Повышая стабильность мембран, он оказывает регулирующее действие на проницаемость клеточных и митохондриальных мембран при ксенобиотическом повреждении. Активные ингредиенты расторопши защищают печень и почки от нескольких экзо- и эндотоксинов, что частично можно объяснить связыванием силимарина с различными токсинами. Кроме того, силимарин может предотвращать всасывание токсинов в гепатоциты, занимая сайты связывания, а также ингибируя многие транспортные белки на клеточной мембране. Активные ингредиенты расторопши участвуют в нейтрализации свободных радикалов благодаря своим антиоксидантным свойствам, а также поддерживают и восстанавливают печень, поврежденную окислительным стрессом и микотоксинами. Расторопша также способствует борьбе с токсикозами, усиливая выделение ядовитых веществ. Хотя часть токсинов выводится с желчью, другая часть токсинов реабсорбируется в организме, поскольку связь токсин-глюкуроновая кислота разрушается β-глюкуронидазой. Однако силимарин снижает активность этого фермента, тем самым способствуя процессам детоксикации.

Предыдущие исследования с видами домашней птицы показали положительный эффект силимарина против микотоксинов. Силимарин в виде комплекса активных ингредиентов, полученных из расторопши, оказался гепато- и нефропротекторным при интоксикации охратоксином А у цыплят-бройлеров и кур-несушек. Защитное действие силимаринового продукта наблюдалось на печени бройлеров, получавших рацион, загрязненный афлатоксином и фумонизином. Гепатопротекторный эффект шрота расторопши был продемонстрирован путем измерения активности аспартатаминотрансферазы (ACT), аланинаминотрансферазы (АЛТ) и щелочной фосфатазы (ЩФ) в сыворотке крови цыплят-бройлеров, получавших корм, загрязненный афлатоксином В1. У уток, более чувствительных видов к фузариотоксинам, чем у бройлеров и индеек, добавление семян расторопши оказывало цитопротекторное действие на печень животных, получавших рационы, загрязненные ДОН и ЗЕН.

Заявленное изобретение представляет собой кормовую добавку для профилактики микотоксикозов сельскохозяйственной птицы и включает в себя компоненты, способные проявлять сорбционное действие в отношении микотоксинов, а также антиоксидантное, гепатопротекторное и иммуностимулирующее действие. Каждый из компонентов добавки выполняет определенное, взаимно потенциирующее действие в организме.

Благодаря сравнительному анализу заявляемого изобретения с известными кормовыми добавками и способами профилактики микотоксикозов сельскохозяйственной птицы выявлено, что данная кормовая добавка для профилактики микотоксикозов сельскохозяйственной птицы соответствует критерию «научная новизна» по причине отсутствия совокупности существенных признаков изобретения среди результатов проведенного патентно-информационного поиска.

Заявляемое техническое решение может быть использовано при выращивании сельскохозяйственной птицы в промышленных условиях и соответствует критерию «промышленная применимость».

Применение заявленного кормовой добавки для профилактики микотоксикозов сельскохозяйственной птицы поясняется следующими примерами.

Пример 1. Способ приготовления кормовой добавки для профилактики микотоксикозов сельскохозяйственной птицы

Приготовление кормовой добавки для профилактики микотоксикозов сельскохозяйственной птицы осуществляется следующим образом: природный минерал галлуазит, в том числе в форме нанотрубок, смешивают в смесителях с β-глюканами, D, L метионином, шротом расторопши. Готовое комплексное профилактическое средство фасуют в бумажные мешки с полиэтиленовым вкладышем по 25 и 50 кг, маркируют и поставляют потребителю, где его смешивают с основным кормом для птицы.

Пример 2. Адсорбционная активность заявляемой кормовой добавки

Оценку адсорбции кормовой добавки к зеараленону, Т-2 токсину in vitro проводили по модифицированной нами методике.

В пробирки с содержанием 5 мл водно-солевого раствора добавляли растворы кристаллических микотоксинов (Sigma-Aldrich) и кормовую добавку. В контрольные пробирки сорбент не вносили. Затем проводили экспозицию при постоянном встряхивании в течение 30 минут, при температуре 37°С и рН среды 7,0 и 2,0 (моделирование рН в желудке), далее раствор центрифугировали (1500 оборотов, 5 минут), из супернатанта токсин переэкстрагировали в хлороформ трижды по 20 мл, хлороформенные экстракты объединяли и выпаривали досуха на ротационном испарителе. Для определения десорбции к осадкам, содержащим комплексы, добавляли 5 мл раствора, в котором создавали щелочную среду рН=8,0 (моделирование рН в кишечнике). Качественное и количественное определение остаточных количеств микотоксинов в сухих остатках осуществляли иммуноферментным методом. Результаты представлены в таблице 1.

Пример 3. Оценка безвредности кормовой добавки в опытах на лабораторных животных

Опыты проводили на 24 белых крысы с живой массой 150-160 г обоего пола. Животные были разделены на 3 опытные и контрольную группы. Белые крысы первой группы (контроль) получали привычный рацион согласно зоогигиеническим нормам. Белым крысам опытных групп с кормом дополнительно скармливали в течение 21 суток кормовую добавку в дозе 0,25 (вторая группа); 0,5 (третья группа) и 1,0% (четвертая группа) от рациона. Продолжительность введения профилактического комплекса 21 суток. По завершению эксперимента часть животных подвергали эвтаназии посредством декапитации. За оставшимися экспериментальными животными вели наблюдение в течение следующих 30 суток, кормовую добавку из рациона исключали, оценивали клинический статус, потребление корма и воды, поведенческие реакции.

В течение всего периода наблюдения после включения в рацион кормовую добавку для профилактики микотоксикозов сельскохозяйственной птицы в дозах 0,25; 0,5 и 1,0% каких-либо признаков интоксикации у крыс не наблюдалось. Заявляемая кормовая добавка для профилактики микотоксикозов сельскохозяйственной птицы не оказывала отрицательного влияния на поведенческие реакции, пищевую возбудимость, общее состояние лабораторных животных. Животные всех групп были активны, имели гладкий и чистый шерстный покров, поведение опытных крыс не отличалось от крыс контрольной группы, физиологические отправления были нормальными. Стоит отметить, что визуально по состоянию шерстного покрова белые крысы, длительно потреблявшие кормовую добавку для профилактики микотоксикозов сельскохозяйственной птицы, имели сравнительно лучший результат. На протяжении эксперимента гибели животных, как в опытных так и в контрольной группах не наблюдалось.

Динамика живой массы белых крыс представлена в таблице 2.

Установлено, что кормовая добавка для профилактики микотоксикозов сельскохозяйственной птицы при скармливании с кормом белым крысам на протяжении 21 суток не оказывала отрицательного влияния на прирост живой массы. Индивидуальное взвешивание показало, что прирост массы тела за весь период наблюдения в группе биологического контроля составил 18,8%, во второй, третьей и четвертой группах - 27,9%; 27,4%; 24,7%, соответственно. Наилучшие показатели по приросту массы тела регистрировали при введении добавки в дозе 0,25%. У животных второй группы по сравнению с группой биологического контроля живая масса была выше на 7,7%. Причем, существенной разницы в показателях прироста массы при введении разных доз профилактического комплекса не регистрировали.

При исследовании морфологии крови установлено, что у белых крыс, длительно получавших, в рационе разные дозы кормовой добавки для профилактики микотоксикозов сельскохозяйственной птицы не отмечалось статистически достоверной разницы в количестве эритроцитов, лейкоцитов, тромбоцитов. Анализ гематологических показателей белых крыс опытных групп выявил повышение гемоглобина, гематокрита, по отношению к животным контрольной группы. Однако данные показатели у животных всех групп находились в пределах физиологической нормы. Количество эритроцитов колебалось в пределах 8,0-8,3×10¹²/л; лейкоцитов - 13,9-14,5×10⁹/л; тромбоцитов - 420-440×10⁹/л, гемоглобина - 174-185 г/л; гематокрита - 32,0-38,0%. У животных всех групп не регистрировали изменений в скорости и интенсивности склеивания эритроцитов. Показатель СОЭ находился в пределах 1,1-1,2 мм/ч.

У животных второй, третьей и четвертой групп количество гемоглобина было выше, чем в группе биологического контроля на 9,8; 10,1; 10,0% соответственно.

Введение в рацион белых крыс кормовой добавки для профилактики микотоксикозов сельскохозяйственной птицы не оказывало отрицательного влияния на исследуемые биохимические показатели, не выявлено токсической нагрузки на печень, изменений показателей белкового и липидного обмена. В сыворотке крови животных, получавших разные дозы кормовой добавки для профилактики микотоксикозов сельскохозяйственной птицы, не установлено изменений в содержании общего белка, глюкозы, альбуминов и глобулинов, билирубина, триглицеридов и холестерина, активности печеночных ферментов (аспартатаминотрансферазы, аланинаминотрансферазы, щелочной фосфатазы и гамма-глутамилтрансферазы) относительно животных группы биологического контроля.

Показано, что абсолютная масса печени, селезенки, почек, легких, сердца, желудка, кишечника, семенников животных, получавших длительное время заявляемой кормовой добавки, достоверно не отличалась от аналогичных показателей животных контрольной группы.

При макроскопическом исследовании сердца, печени, почек, селезенки, легких, желудочно-кишечного тракта вынужденно убитых животных не выявлено патологических изменений, что свидетельствует об отсутствии токсического эффекта у исследуемой кормовой добавки для профилактики микотоксикозов сельскохозяйственной птицы.

На протяжении 30 суток наблюдений после прекращения введения в рацион разных доз кормовой добавки для профилактики микотоксикозов сельскохозяйственной птицы каких-либо изменений в общем состоянии подопытных животных не установлено.

Пример 4. Оценка эффективности кормовой добавки при Т-2, афла-зеараленонтоксикозе кур-несушек

Для оценки эффективности кормовой добавки были сформированы 4 группы кур-несушек, по 10 птиц в каждой.

Птицы первой группы (биологический контроль) получали корм свободный от микотоксинов.

Вторая группа кур служила токсическим контролем (корм контаминировали смесью микотоксинов: афлатоксин В₁ - 3,3 мг/кг, Т-2 токсин - 2,5 мг/кг и зеараленон - 1,7 мг/кг корма).

Третья группа кур получала основной рацион, контаминированный смесью микотоксинов (Т-2 токсин, афлатоксин В₁, зеараленон) с добавлением кормовой добавки в дозе 0,25% от рациона.

Четвертая группа - основной рацион в смеси с кормовой добавки в дозе 0,25% от рациона.

Выживаемость кур-несушек представлена в таблице 3.

Первые клинические признаки (угнетение общего состояния, оживление только при кормлении, малоподвижность, нарушение координации движения, взъерошенность, потеря блеска перьевого покрова, увеличение потребления воды) в группе токсического контроля кур-несушек наблюдались на пятые сутки внесения микотоксинов, на десятые сутки развилось расстройство пищеварения (диарея).

К концу эксперимента отмечали покраснение области клоаки у шести кур-несушек, как следствие присутствия зеараленона, бледность гребня и видимых слизистых оболочек, снижались показатели яйценоскости и товарные качества яйца (тонкая бугристая скорлупа, малый вес).

За время проведения опыта в группе токсического контроля отмечалось плохое потребление корма, у трех кур на 10 сут - отказ от него, а на 16 и 18 сут погибло по одной курице. При внешнем осмотре погибших птиц установлена синюшность слизистых оболочек ротовой и синусовой полостей, гиперемия конъюнктивы, загрязнение перьевого покрова.

Использованные в опыте кормовой добавки для профилактики микотоксикозов сельскохозяйственной птицы оказала положительное действие на общее состояние птиц, при этом сохранность, соответственно в третьей, четвертой составила 100%, у отдельных птиц наблюдалась диарея.

После трехнедельного периода добавления в рацион смеси токсинов абсолютный вес печени, почек и селезенки увеличивался на 21,42% (р<0,001), 18,50% (р<0,001), 22,30% (р<0,001), а тимуса уменьшался на 11,89% (р<0,01).

Изменения в массе органов при добавлении в токсичный рацион кормовой добавки для профилактики микотоксикозов сельскохозяйственной птицы были менее выражены и превышали показатели массы органов кур-несушек биологического контроля по печени на 17,0% (р<0,01), 18,3% (р<0,01), 8,0%, почкам - 12,51% (р<0,05), 7,28%, 2,57%, селезенке - 14,56% (р<0,01), 10,67% (р<0,05), 8,73%, соответственно, в третьей, четвертой, пятой группах. Вес тимуса снижался на 9,34% (р<0,05), 8,07% (р<0,05), 5,09%.

Масса органов в группе с включением в рацион кормовой добавки достоверно не отличалась от массы органов в группе биологического контроля (таблица 4).

В таблице 5 представлены изменения гематологических показателей при смешанном микотоксикозе на фоне применения кормовой добавки

Во второй группе кур-несушек количество лейкоцитов к 21 сут опыта по сравнению с группой биологического контроля снижалось на 31,82% (р<0,01), что свидетельствует о снижении устойчивости организма к внешним факторам. Это может быть результатом иммуносупрессивного действия микотоксинов.

Также во второй группе наблюдалось достоверное увеличение количества тромбоцитов на 37,34% (р<0,001) по сравнению с группой биологического контроля. Зарегистрированные нами гематологические изменения при экспериментальном смешанном микотоксикозе указывают на сильное нарушение гомеостаза системы крови. В профилактируемой группе гематологические изменения были менее выражены.

В таблице 6 показаны биохимические показатели кур-несушек при смешанном микотоксикозе на фоне применения профилактического комплекса.

Важным параметром для диагностики заболеваний, связанных с нарушением метаболизма является содержание общего белка в сыворотке крови. По результатам исследования отмечено, что его количество во второй группе кур-несушек достоверно снижалось на 23,46% (р<0,001), в третьей группе снижение не было достоверным и составило 8,41%. Пониженное содержание белка может быть обусловлено его повышенной потерей, а также нарушением его образования при недостаточности функции печени.

Куры-несушки, получавшие микотоксины с кормом, показали значительное снижение уровней альбумина и глобулинов по сравнению с фоновыми значениями. Так, содержание альбуминов и глобулинов достоверно снизилось на 25,67% (р<0,05) и 22,04% (р<0,05), соответственно. В третьей группе снижение этих показателей составило 10,03% и 7,45%. Снижение содержания в крови альбуминов происходит в результате их утилизации ретикуло-эндотелиальной системой при модификации их микотоксинами, так как большинство попавших в кровь веществ, в том числе и микотоксины, фиксируются на альбуминах независимо от того, являются они нейтральными, кислыми или основными соединениями. Снижение также может быть обусловлено переходом этих белков из кровеносного русла в ткани, ухудшением белоксинтезирующей функции печени, повышенным выведением альбуминов с мочой через почки. Глобулины, обеспечивающие иммунный ответ, участвуют в свертывании крови, выполняют транспортную функцию.

Уровень углеводного обмена определяли по содержанию глюкозы в сыворотке крови. Это самый распространенный углевод в животном организме. Играет роль связующего звена между энергетической и пластической функциями организма. На 21 сутки уровень глюкозы у кур-несушек второй группы был достоверно снижен на 27,08% (р<0,001), тогда как в третьей группе снижение было менее выраженным и составило 9,36% относительно фоновых значений. Таким образом, добавление профилактического комплекса стабилизировало уровень глюкозы.

Наибольшее клиническое значение в оценке липидного обмена имеет определение холестерина и триглицеридов. В наших исследованиях уровни холестерина и триглицеридов у кур-несушек токсической группы достоверно повышались на 22,08% (р<0,001) и 25,84% (р<0,001) соответственно, в профилактируемой группе повышение указанных показателей не было достоверным и составило 8,37 и 11,39%.

Результаты нашего эксперимента демонстрируют, что микотоксины индуцировали повреждение печени с сопутствующей дислипидемией. Плазменная дислипидемия характеризовалась повышенными концентрациями холестерина и триглицеридов.

Мочевая кислота является основным конечным продуктом обмена белков у птицы. Патология обмена мочевой кислоты возникает при поражении почек, так как доказано, что у здоровой птицы они легко выводят из организма избыточное количество этого продукта. Показано, что уровень мочевой кислоты в группе токсического контроля повышался на 37,94% (р<0,01), в профилактируемой группе повышение не было достоверным и составило 12,71%. В сыворотке крови сельскохозяйственной птицы вместе с мочевой кислотой определяют уровень креатинина, играющего важную роль в энергетическом обмене мышечной ткани организма. Во второй группе кур-несушек отмечалось повышение на 21,65% (р<0,01), в третьей группе - 8,67%.

Таким образом, исследованиями биохимических показателей крови установлено, что при Т-2, афла- и зеараленонтоксикозе, развивается синдром цитолиза, приводящий к снижению протеин синтетической функции печени, нарушению в системе связывания и транспорта токсичных веществ, работающей за счет транспортных сывороточных белков - альбумина и липопротеидных структур.

При нарушении липидного обмена в организме происходит дисбаланс липопротеинов высокой, низкой плотности, а также триглицеридов. Для восстановления баланса липопротеинов организм вырабатывает макрофаги, закрепляющиеся на внутреннем слое сосудов. Таким образом, откладываются холестериновые бляшки, представляющие собой накопления холестерина. Это приводит к ухудшению кровообращения и возникновению атеросклероза.

Холестерин - это вещество, которое является структурным сочетанием жиров и стероидов. Для нормальной работы организма требуется небольшое количество холестерина. Около 80% холестерина образуется в печени.

Наблюдали повышение уровня холестерина в крови во второй группе на 28,5% (р<0,001), указывающее на поражение печени.

Триглицериды - это важный запасной источник энергии в организме. Как видно из таблицы, в группе токсического контроля этот показатель достоверно увеличен на 30,8% (р<0,001) по сравнению с биологическим контролем. Повышение их уровня увеличивает риск заболевания сердца и сосудов. Вместе с холестерином триглицериды обеспечивают клетки энергией и участвуют в синтезе биологически активных веществ. Они находятся в кровотоке не сами по себе, а в комплексе с белками липопротеинами.

Печень представляет собой основной орган-мишень при микотоксикозах, которые вызывают резкие биохимических изменения, при этом нарушается метаболизм липидов, аминокислот, витаминов, нуклеиновых кислот и ферментов печени.

Ферменты печени (АЛТ и ACT) связаны с клетками паренхимы печени. АЛТ обнаруживается преимущественно в печени, a ACT, как в печени, так и сердечной, скелетных мышцах и других тканях.

Так АЛТ И ACT во второй группе увеличивались в 8,5 раза (р<0,001) и 2,3 раза (р<0,001) соответственно. Использование в третьей группе профилактического комплекса способствовало повышению аспартат- и аланинаминотрансфераз в меньших пределах - 1,32 (р<0,05) и 1,16 (р<0,05) раза соответственно. Коэффициет Ритиса в профилактируемой группе не имел достоверных отклонений от фоновых значений, что связано с гепатопротекторным свойством профилактического комплекса.

Добавление к токсическому корму кормовой добавки для профилактики микотоксикозов сельскохозяйственной птицы также снижало активность щелочной фосфатазы в 1,44 раза относительно группы токсического контроля, что свидетельствует о протективном действии профилактического комплекса при цитотоксической активности микотоксинов.

В качестве маркера оксидативного стресса изучали содержание малонового диальдегида (МДА) в крови кур-несушек.

Показано статистически достоверное повышение уровня МДА у кур-несушек группы токсического контроля на 69,78% (р<0,001), в профилактируемой группе повышение было не таким значительным и составило 8,6%.

При изучении показателей неспецифической резистентности кур-несушек при смешанном микотоксикозе на фоне применения профилактического комплекса показано, что во второй группе на 21 сутки исследования фагоцитарная активность нейтрофилов, лизоцимная и бактерицидная активности достоверно снижались относительно фоновых значений на 19,56, 18,45 и 29,84% (р<0,01), тогда как в профилактируемой группе на 8,35, 5,29 и 6,14%, что свидетельствует о повышении резистентности организма кур-несушек на фоне иммуномодулирующего эффекта профилактического комплекса при микотоксикозе.

Было показано, что предлагаемая нами кормовая добавка для профилактики микотоксикозов сельскохозяйственной птицы смягчает неблагоприятное воздействие Т-2 токсина, афлатоксина B₁ и зеараленона, ослабляя их токсическое влияние. Полученные результаты доказывают эффективность разработанной кормовой добавки для профилактики микотоксикозов сельскохозяйственной птицы, что продемонстрировано на примере клинического статуса, выживаемости, массы органов, гематологических и биохимических показателей. Использование предложенной кормовой добавки для профилактики микотоксикозов сельскохозяйственной птицы является эффективной и экологически чистой стратегией защиты при смешанном микотоксикозе.

Изобретение относится к ветеринарной фармакологии и токсикологии, а именно к профилактическим средствам, препятствующим всасыванию микотоксинов в желудочно-кишечном тракте у сельскохозяйственной птицы. Кормовая добавка содержит сорбенты природного и органического происхождения, гепатопротектор и аминокислоту при следующем содержании компонентов, мас.%: D, L метионин - 5, растительные β-глюканы - 10, шрот расторопши - 3, нанотрубки галлуазита природного происхождения - остальное. Кормовую добавку добавляют к массе основного рациона сельскохозяйственной птицы в количестве 0,25%. Использование изобретения позволит повысить сохранность и сопротивляемость организма у сельскохозяйственной птицы. 2 з.п. ф-лы, 6 табл., 4 пр.

1. Кормовая добавка для профилактики микотоксикозов у сельскохозяйственной птицы, содержащая сорбент, отличающаяся тем, что она дополнительно содержит аминокислоту D, L метионин и гепатопротектор в виде шрота расторопши, а в качестве сорбента - растительные β-глюканы и нанотрубки галлуазита природного происхождения, причем компоненты кормовой добавки используются при следующем соотношении компонентов, мас.%:

D, L метионин 5,0 шрот расторопши 3,0 растительные β-глюканы 10,0 нанотрубки галлуазита природного происхождения остальное

2. Кормовая добавка по п. 1, отличающаяся тем, что она вводится в массу основного рациона сельскохозяйственной птицы в количестве 0,25%.

3. Кормовая добавка по п. 1, отличающаяся тем, что сорбенты используются природного и органического происхождения.