СПОСОБ ОЦЕНКИ КАЧЕСТВА СПЕРМЫ ЖЕРЕБЦОВ ПО КОНЦЕНТРАЦИИ ТЕСТОСТЕРОНА В СЫВОРОТКЕ КРОВИ Российский патент 2024 года по МПК A61D19/00 G01N33/487 G01N33/49 

ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ, К КОТОРОЙ ОТНОСИТСЯ ИЗОБРЕТЕНИЕ

Изобретение относится к области животноводства, в частности к коневодству и может быть использовано для отбора жеребцов с высоким качеством спермы.

УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ

Известно, что стероидные гормоны значительно влияют на качество и криоустойчивость спермы жеребцов (Атрощенко М.М., Кудлаева A.M., Бородкина Е.Ю., Енгалычева М.Г., Незаленова А.А., Широкова О.В. Изучение взаимосвязи между стероидными гормонами и биохимическими показателями крови жеребцов-производителей // Коневодство и конный спорт - 2020. - №3. - С. 7-11.) (далее - 2020. - №3). Сперма состоит из сперматозоидов и жидкой фракции - спермоплазмы (Милованов В.К. Биология воспроизведения и искусственного осеменения животных. М.: Госсельхиздат, 1962. 696 с.).

Тестостерон, в частности, отвечает за поддержание нормальной функции гематотестикулярного барьера, индуцирование мейоза и постмейотического развития герминативного эпителия, ингибирует апоптоз зародышевых клеток. Также тестостерон стимулирует секрецию эпидидимальным эпителием определенных белков, необходимых для процесса дозревания половых клеток. От наличия тестостерона в периферической крови зависит нормальная функция всех придаточных половых желез, секрет которых составляет основную часть спермы (Широкова О.В., Фролова Н.А., Синякина А.И. Изучение влияния сезонного фактора на концентрацию стероидных гормонов в сыворотке крови жеребцов // Коневодство и конный спорт. 2021. №4. С. 8-11.).

Ближайшим аналогом (прототипом) заявляемого способа является способ оценки качества спермы жеребцов по уровню активности α-амилазы в сыворотке крови (Пат. 2751138 Российская Федерация, МПК G01N 33/49 Способ оценки качества спермы жеребцов по уровню активности α-амилазы в сыворотке крови / М.М. Атрощенко, А.И. Синякина, A.M. Зайцев, В.В. Калашников, А.А. Незаленова, А.А. Дацышин, М.Г. Енгалычева, A.M. Шитикова, О.В. Широкова; заявитель и патентообладатель Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Всероссийский научно-исследовательский институт коневодства". - №2020140448; заявл. 09.12.2020; опубл. 08.07.2021, Бюл. №19.), включающий определение уровня активности α-амилазы в сыворотке крови, и при активности α-амилазы в сыворотке крови ниже 24,5 МЕ/л жеребца следует относить к группе с высоким качеством спермы, а при активности α-амилазы в сыворотке крови выше 24,5 МЕ/л, соответственно, к группе с низким. Изобретение позволяет оценить качество спермы жеребцов, не прибегая к отбору самой спермы.

Недостатком этого способа является то, что он не дает возможности автоматически перенести полученные результаты на все компоненты сыворотки крови жеребцов, в том числе и на тестостерон, так как до сих пор неизвестен предельно допустимый уровень концентрации тестостерона в сыворотке крови жеребцов.

Мы поставили задачу количественно оценить значение предельно допустимой концентрации (далее - ПДК) тестостерона в сыворотке крови жеребцов, а затем изучить влияние концентрации тестостерона в сыворотке крови на качество спермы в сравнении с ПДК.

Мы считаем, что предлагаемый нами способ отбора жеребцов с высоким качеством спермы по концентрации тестостерона в сыворотке крови позволит оценить это качество, не прибегая к отбору самой спермы. Другими словами, не имея продукта (в данном случае спермы), мы сможем оценить некоторые его качества.

Следовательно, заявленный нами способ соответствует условию патентоспособности изобретения «новизна». Изобретение является применимым, так как оно может быть использовано в коневодстве для отбора жеребцов с высоким качеством спермы по концентрации тестостерона в сыворотке крови.

РАСКРЫТИЕ СУЩНОСТИ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Образцы спермы, предназначенной для исследования (n равно 68), отобирают с использованием ранее разработанной методики (Науменкова, В.А. Рекомендации по взятию, разбавлению и замораживании спермы жеребцов / В.А. Науменкова. - Издание ВНИИ коневодства, 2006. - 23 с.) (далее - Рекомендации). После получения спермы, каждый эякулят оценивают по следующим показателям: объем эякулята, концентрация и подвижность сперматозоидов в нативной сперме.

Одновременно с получением спермы производят забор крови от каждого жеребца из яремной вены однократно до кормления животных. Образцы крови центрифугируют при 1500 об/мин в течение 20 мин и хранят сыворотку при -18°С до проведения анализа.

Определение концентрации тестостерона проводят на хемилюминисцентном анализаторе Immulite 2000 (Siemens Healthcare Diagnostics Inc., США).

На основании полученных нами результатов, согласно ранее проведенным исследованиям (2020. - №3), была рассчитана ПДК тестостерона в сыворотке крови жеребцов, установленная в границах 50 процентиля репрезентативной выборки. ПДК тестостерона в сыворотке крови жеребцов оказалась равной 1,77 нмоль/л.

Как видно из полученных данных, жеребцы со значением концентрации тестостерона в сыворотке крови меньше 1,77 нмоль/л превосходят по подвижности сперматозоидов в нативной сперме на 81,96% аналогов из группы с повышенным значением данного показателя (Р не больше 0,01).

Сам собой напрашивается вывод: на основании результатов эксперимента можно сделать следующее заключение - при значениях концентрации тестостерона в сыворотке крови меньше 1,77 нмоль/л, отмечается высокий уровень подвижности сперматозоидов в нативной сперме. В связи с этим, предложенный способ является достоверным.

ОСУЩЕСТВЛЕНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Применимость предлагаемого способа была проверена в условиях Терского племенного конного завода №169 (Ставропольский край), Починковского конного завода (Нижегородская область) и ВНИИ коневодства (Рязанская область) на жеребцах (n равно 10).

Забор крови от каждого жеребца производили из яремной вены однократно до кормления животных, эти образцы оценивали по концентрации тестостерона в сыворотке крови на хемилюминисцентном анализаторе Immulite 2000 (Siemens Healthcare Diagnostics Inc., США).

Одновременно получали образцы спермы жеребцов, которые оценивали по следующим показателям: объем эякулята, концентрация и подвижность сперматозоидов в нативной сперме.

Затем мы распределили животных по группам. В первой группе находились жеребцы со значением ПДК тестостерона меньше 1,77 нмоль/л, во второй группе, соответственно, больше 1,77 нмоль/л.

При этом мы учли требования к качеству нативной спермы жеребцов (Рекомендации). Согласно Рекомендациям подвижность сперматозоидов должна быть не менее 5,0 баллов (50-ти %). Следовательно, жеребцов, у которых показатель подвижности сперматозоидов в нативной сперме равен этому значению или выше его, можно смело относить к группе животных с высоким качеством спермы.

Вывод: при концентрации тестостерона в сыворотке крови ниже 1,77 нмоль/л жеребца следует относить к группе с высоким качеством спермы, а при концентрации тестостерона в сыворотке крови выше 1,77 нмоль/л, соответственно, к группе с низкой.

Таким образом, при практическом использовании предлагаемого способа, для определения качества спермы жеребцов, не нужно знать подвижность сперматозоидов в нативной сперме.

Изобретение относится к ветеринарной медицине, а именно к лабораторной диагностике и может быть использовано для отбора жеребцов с высоким качеством спермы. Отбирают образцы крови. Получают сыворотку крови. Определяют концентрации тестостерона. При концентрациях тестостерона в сыворотке крови ниже 1,77 нмоль/л жеребца следует относить к группе с высоким качеством спермы. Если концентрации тестостерона в сыворотке крови выше 1,77 нмоль/л, соответственно, к группе с низким качеством спермы. Способ позволяет определить качество спермы жеребца, без необходимости знать подвижность сперматозоидов, что в свою очередь дает возможность не прибегать к отбору самой спермы. 2 табл., 1 пр.

Способ оценки качества спермы жеребцов по концентрации тестостерона в сыворотке крови, включающий определение концентрации тестостерона в сыворотке крови, отличающийся тем, что при концентрации тестостерона в сыворотке крови ниже 1,77 нмоль/л жеребца следует относить к группе с высоким качеством спермы, при концентрации тестостерона в сыворотке крови выше 1,77 нмоль/л, соответственно, к группе с низким качеством спермы.