СПОСОБ ОЦЕНКИ КРИОУСТОЙЧИВОСТИ СПЕРМЫ ЖЕРЕБЦОВ ПО УРОВНЮ АКТИВНОСТИ ЛИПАЗЫ В СЫВОРОТКЕ КРОВИ Российский патент 2023 года по МПК G01N33/52 

ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ, К КОТОРОЙ ОТНОСИТСЯ ИЗОБРЕТЕНИЕ

Изобретение относится к области животноводства, в частности к коневодству и может быть использовано для отбора жеребцов с высокой криоустойчивостью спермы.

УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ

Известен способ экспресс-оценки криоустойчивости спермы жеребцов (Патент RU №2675947, МПК A01D 19/02 (2006.01) Способ экспресс-оценки криоустойчивости спермы жеребцов: №2017129283; заявл. 01.08.2017; опубл. 25.12.2018; Бюл. №36 / Науменкова В.А.; заявитель ФГБНУ "ВНИИ коневодства". - Текст: непосредственный.), который включает подготовку мини-дозы спермы к замораживанию и оценку подвижности спермиев после ее оттаивания.

Главный недостаток этого способа - использование спермы хотя и в мини-дозах.

Мы же хотим разработать способ оценки криоустойчивости спермы жеребцов, используя другие, более доступные, биоматериалы.

Аналогом заявляемого способа является способ отбора жеребцов арабской чистокровной породы с высокой криоустойчивостью спермы по концентрации кадмия в волосах с гривы (Патент RU №2723951, МПК A01K 67/00 (2006.01) Способ отбора жеребцов арабской чистокровной породы с высокой криоустойчивостью спермы по концентрации кадмия в волосах с гривы: №2019138182; заявл. 26.11.2019; опубл. 18.06.2020, Бюл. №17 / В.В. Калашников, A.M. Зайцев, М.М. Атрощенко, С.А. Мирошников, О.А. Завьялов, А.Н. Фролов, М.Я. Курилкина, Л.В. Калинкова, Т.В. Калашникова, Н.В. Блохина; заявитель ФГБНУ "ВНИИ коневодства". - Текст: непосредственный.), в котором в качестве критерия оценки криоустойчивости спермы жеребцов используют уровень концентрации кадмия в волосах с гривы. При концентрации кадмия ниже 0,0065 мкг/г жеребца относят к группе животных с высокой криоустойчивостью спермы, при концентрации выше 0,0065 мкг/г - соответственно, к группе с низкой.

Недостаток этого способа состоит в том, что его применение требует наличия дорогостоящего оборудования для определения элементного состава волос.

Ближайшим аналогом (прототипом) заявляемого способа является способ оценки качества спермы жеребцов по уровню активности α-амилазы в сыворотке крови (Патент RU №2751138, МПК G01N 33/49 (2006.01) Способ оценки качества спермы жеребцов по уровню активности α-амилазы в сыворотке крови: №2020140448; заявл. 09.12.2020; опубл. 08.07.2021; Бюл. №19 / Атрощенко М.М., Романова А.И., Зайцев A.M., Калашников В.В., Енгалычева М.Г., Шитикова A.M., Широкова О.В., Фролова Н.А.; заявитель ФГБНУ "ВНИИ коневодства". - Текст: непосредственный.), который позволяет оценить качество спермы жеребца по уровню активности одного из ферментов сыворотки крови - α-амилазы: при уровне активности α-амилазы в сыворотке крови ниже 24,5 МЕ/л жеребца следует относить к группе с высоким качеством спермы, а при уровне активности α-амилазы в сыворотке крови выше 24,5 МЕ/л, соответственно, к группе с низким. Изобретение позволяет оценить качество спермы жеребцов, не прибегая к отбору самой спермы.

Недостаток этого способа - невозможность оценить криоустойчивость спермы жеребца.

Мы решили оценить криоустойчивость спермы жеребцов, используя другой фермент, циркулирующий в крови - липазу. Как известно активность липазы в сыворотке крови может резко повышаться или снижаться в зависимости от состояния организма животного.

Мы поставили задачу количественно оценить значение предельно допустимого уровня (ПДУ) активности липазы в сыворотке крови жеребцов и выяснить его влияние на криоустойчивость спермы. Другими словами, не имея продукта (в данном случае спермы), мы надеемся оценить некоторые его качества.

РАСКРЫТИЕ СУЩНОСТИ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Образцы спермы, предназначенной для исследования (n равно 36), отбирают по ранее разработанной методике (Науменкова, В.А. Рекомендации по взятию, разбавлению и замораживании спермы жеребцов / В.А. Науменкова. - Дивово: «Изд-во «ВНИИ коневодства», 2006. - 23 с. Далее - Рекомендации). После получения спермы, каждый эякулят оценивают по следующим показателям: объем эякулята, концентрация и общее количество сперматозоидов в эякуляте, прогрессивная подвижность сперматозоидов в криоконсервированной сперме.

Одновременно с получением спермы производят забор крови от каждого жеребца из яремной вены однократно до кормления животных.

Уровень активность липазы в сыворотке крови определяют колориметрическим методом.

ПДУ активности липазы в сыворотке крови жеребцов в границах 50 процентиля репрезентативной выборки рассчитывают, используя полученные результаты и известную методику (Назаренко, Г.И. Клиническая оценка результатов лабораторных исследований / Г.И. Назаренко, А.А. Кишкун. - М.: Медицина, 2002. - 544 с.).

В нашем случае ПДУ активности липазы оказался равным 17,8 МЕ/л.

Подопытных животных (n равно 36) разбивают на две группы в зависимости от уровня активности липазы. Таким образом, в первой группе оказались жеребцы со значением уровня активности липазы больше 17,8 МЕ/л, во второй группе, соответственно, меньше 17,8 МЕ/л.

Из полученных данных видно, что жеребцы с уровнем активности липазы в сыворотке крови больше 17,8 МЕ/л превосходят по прогрессивной подвижности сперматозоидов в криоконсервированной сперме на 161,44% аналогов из группы с меньшим значением данного показателя (Р не больше 0,01).

Согласно Рекомендациям жеребцов, в сперме которых после оттаивания прогрессивная подвижность сперматозоидов составляет не менее 2,5 баллов, что в переводе на проценты соответсвует 25%, относят к группе с высокой криоустойчивостью.

Следовательно, сперму жеребцов, в которой показатель прогрессивной подвижности сперматозоидов после оттаивания равен 25% или выше его, тоже можно смело отнести к группе с высоким уровнем криоустойчивости.

По результатам нашего эксперимента можно сделать следующее заключение - при уровне активности липазы в сыворотке крови больше 17,8 МЕ/л средние значения прогрессивной подвижности сперматозоидов в криоконсервированной сперме находятся в интервале 37-46%, что значительно больше 25%.

Сам собой напрашивается вывод: при значениях ПДУ активности липазы в сыворотке крови больше 17,8 МЕ/л сперма жеребцов имеет высокую криоустойчивость.

ОСУЩЕСТВЛЕНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Применимость предлагаемого способа была проверена в условиях Терского племенного конного завода №169 Ставропольского края.

Для оценки криоустойчивости спермы производят отбор ее образцов у жеребцов и оценивают по следующим показателям: объем эякулята, концентрация и общее количество сперматозоидов в эякуляте, прогрессивная подвижность сперматозоидов в криоконсервированной сперме. Одновременно с получением спермы производят забор крови от каждого жеребца из яремной вены однократно до кормления животных.

Полученные образцы крови оценивают по уровню активности липазы в ней (колориметрический метод). Кроме того, определяют прогрессивную подвижность (ПП) сперматозоидов в криоконсервированной сперме.

Вывод: при уровне активности липазы в сыворотке крови выше 17,8 МЕ/л жеребца следует относить к группе с высокой криоустойчивостью спермы, а при уровне активности липазы в сыворотке крови ниже 17,8 МЕ/л, соответственно, к группе с низкой.

Таким образом, при практическом использовании предлагаемого способа, для определения криоустойчивости спермы жеребцов, не нужно знать прогрессивную подвижность сперматозоидов в криоконсервированной сперме, а достаточно знать уровень активности липазы в сыворотке крови.

Изобретение относится к области животноводства, в частности к коневодству, и может быть использовано для отбора жеребцов с высокой криоустойчивостью спермы. Способ включает отбор образцов крови. Далее в сыворотке крови определяют уровень активности липазы. При уровне активности липазы в сыворотке крови выше 17,8 МЕ/л жеребца следует относить к группе с высокой криоустойчивостью спермы, а при уровне активности липазы в сыворотке крови ниже 17,8 МЕ/л, соответственно, к группе с низкой криоустойчивостью спермы. Изобретение позволяет оценить криоустойчивость спермы жеребцов, не прибегая к отбору самой спермы. 2 табл.

Способ оценки криоустойчивости спермы жеребцов по уровню активности липазы в сыворотке крови, включающий определение уровня активности липазы в сыворотке крови, отличающийся тем, что при уровне активности липазы в сыворотке крови выше 17,8 МЕ/л жеребца относят к группе с высокой криоустойчивостью спермы, а при уровне активности липазы в сыворотке крови ниже 17,8 МЕ/л, соответственно, к группе с низкой криоустойчивостью спермы.