СПОСОБ ОЦЕНКИ КРИОУСТОЙЧИВОСТИ СПЕРМЫ ЖЕРЕБЦОВ ПО КОНЦЕНТРАЦИИ ЭСТРАДИОЛА В СЫВОРОТКЕ КРОВИ Российский патент 2024 года по МПК A61D19/00 G01N33/49 G01N33/50 

ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ, К КОТОРОЙ ОТНОСИТСЯ ИЗОБРЕТЕНИЕ

Изобретение относится к области животноводства, в частности к коневодству и может быть использовано для отбора жеребцов с высоким качеством спермы.

УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ

Эстрогены у жеребцов явлются паракринно-аутокринными факторами в регуляции функции семенных желез и сперматогенеза (Широкова О.В., Фролова Н.А., Синякина А.И. Изучение влияния сезонного фактора на концентрацию стероидных гормонов в сыворотке крови жеребцов // Коневодство и конный спорт. 2021. №4. С. 8-11.).

Ближайшим аналогом (прототипом) заявляемого способа является способ оценки криоустойчивости спермы жеребцов по уровню активности липазы в сыворотке крови (Пат. 2788451 РФ, МПК G01N 33/52 (2006.01) / М.М. Атрощенко, А.И. Романова, A.M. Зайцев, В.В. Калашников, М.Г. Енгалычева, A.M. Шитикова, О.В. Широкова, Н.А. Фролова; заявитель и патентообладатель Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Всероссийский научно-исследовательский институт коневодства". - №2022110628; заявл. 19.04.2022; опубл. 19.01.2023, Бюл. №2.), включающий определение уровня активности липазы в сыворотке крови. При уровне активности липазы в сыворотке крови выше 17,8 МЕ/л жеребца следует относить к группе с высокой криоустойчивостью спермы, а при уровне активности липазы в сыворотке крови ниже 17,8 МЕ/л, соответственно, к группе с низкой криоустойчивостью спермы. Здесь 17,8 МЕ/л - предельно допустимый уровень активности липазы в сыворотке крови.

Недостатком этого способа является то, что он не дает возможности оценить криоустойчивость спермы жеребцов по концентрации эстрадиола в сыворотке крови, так как до сих пор неизвестна его предельно допустимая концентрация (далее - ПДК) в этой биологической жидкости.

Мы поставили задачу количественно оценить значение ПДК эстрадиола в сыворотке крови жеребцов, а затем изучить влияние концентрации эстрадиола на криоустойчивость спермы жеребцов, сравнив ее с ПДК.

Предлагаемый нами способ отбора жеребцов с высокой криоустойчивостью спермы по концентрации эстрадиола в сыворотке крови позволит оценить это качество, не прибегая к отбору самой спермы. Другими словами, не имея продукта (в данном случае спермы), мы сможем оценить некоторые его качества.

Следовательно, заявленный нами способ соответствует условию патентоспособности изобретения «новизна». Изобретение является применимым, так как оно может быть использовано в коневодстве для отбора жеребцов с высокой криоустойчивостью спермы по концентрации эстрадиола в сыворотке крови.

РАСКРЫТИЕ СУЩНОСТИ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Образцы спермы, предназначенной для исследования (n равно 47), отбирают по ранее разработанной методике (Науменкова В.А. Рекомендации по взятию, разбавлению и замораживанию спермы жеребцов / Дивово: «Изд-во «ВНИИ коневодства», 2006. 23 с. ) (далее - Рекомендации). После получения спермы, каждый эякулят оценивают по следующим показателям: объем эякулята и концентрация сперматозоидов в нативной сперме, выживаемость сперматозоидов после оттаивания при температуре (Т) 2-4°С.

Одновременно с получением спермы производят забор крови от каждого жеребца из яремной вены однократно до кормления животных. Образцы крови центрифугируют при 1500 об/мин в течение 20 мин и хранят сыворотку при -18°С до проведения анализа.

Концентрацию эстрадиола в сыворотке крови определяют при помощи хемилюминисцентного анализатора Immulite 2000 (Siemens Healthcare Diagnostics Inc., США).

ПДК эстрадиола в сыворотке крови жеребцов в границах 50 процентиля репрезентативной выборки рассчитывают, используя полученные результаты и известную методику (Широкова О.В., Фролова Н.А., Синякина А.И. Изучение влияния сезонного фактора на концентрацию стероидных гормонов в сыворотке крови жеребцов // Коневодство и конный спорт. 2021. №4. С. 8-11.).

В нашем случае ПДК эстрадиола в сыворотке крови жеребцов оказалась равной 153,5 пмоль/л.

Подопытных животных (n равно 8) разбивают на две группы в зависимости от концентрации эстрадиола в сыворотке крови. Таким образом, в первой группе оказались жеребцы со значением концентрации эстрадиола в сыворотке крови ниже 153,5 пмоль/л, во второй группе, соответственно, выше 153,5 пмоль/л.

Таблица 1. Показатели репродуктивной функции у жеребцов (М±m)

Как видно из полученных данных, жеребцы с концентрацией эстрадиола в сыворотке крови выше 153,5 пмоль/л превосходили по выживаемости сперматозоидов в криоконсервированной сперме на 44,06% животных из группы с меньшим значением данного показателя (Р не больше 0,01).

Сам собой напрашивается вывод: на основании результатов эксперимента можно сделать следующее заключение - при значениях концентрации эстрадиола в сыворотке крови выше 153,5 пмоль/л, отмечается высокий уровень выживаемости сперматозоидов в криоконсервированной сперме. В связи с этим, предложенный способ является достоверным.

ОСУЩЕСТВЛЕНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Применимость предлагаемого способа была проверена на жеребцах Терского племенного конного завода №169 (Ставропольский край), Починковского конного завода (Нижегородская область) и кумысной фермы Федерального государственного бюджетного научного учреждения "Всероссийский научно-исследовательский институт коневодства" (Рязанская область) (n равно 8).

Забор крови от каждого жеребца производят из яремной вены однократно до кормления животных, эти образцы оценивают по концентрации эстрадиола в сыворотке крови на хемилюминесцентном анализаторе Immulite 2000 (Siemens Healthcare Diagnostics Inc., США).

Одновременно получают образцы спермы жеребцов, которые оценивают по следующим показателям: объем эякулята и концентрация сперматозоидов в нативной сперме, выживаемость сперматозоидов после оттаивания при температуре (Т) 2-4°С.

При этом мы учли данные Науменковой В.А. (Науменкова В.А. Рекомендации по взятию, разбавлению и замораживании спермы жеребцов. - Дивово: Изд-во ВНИИ коневодства, 2006. 23 с.) (далее - Рекомендации), где указаны требования к качеству спермы жеребцов после оттаивания. Согласно этим Рекомендациям выживаемость сперматозоидов должна быть не менее 96 часов. Следовательно, сперму, в которой показатель выживаемости после оттаивания при Т 2-4°С равен этому значению или выше его, можно смело относить к группе с высокой криоустойчивостью.

Вывод: при концентрации эстрадиола в сыворотке крови выше 153,5 пмоль/л жеребца следует относить к группе с высокой криоустойчивостью спермы, а при концентрации эстрадиола в сыворотке крови ниже 153,5 пмоль/л, соответственно, к группе с низкой.

Таким образом, при практическом использовании предлагаемого способа, для определения криоустойчивости спермы жеребцов, не нужно знать выживаемость сперматозоидов при температуре (Т) 2-4°С, а достаточно знать концентрацию эстрадиола в сыворотке крови животного.

Изобретение относится к ветеринарной медицине, а именно к лабораторной диагностике, и может быть использовано для отбора жеребцов с высокой криоустойчивостью спермы. Определяют концентрацию эстрадиола в сыворотке крови. При концентрации эстрадиола в сыворотке крови выше 153,5 пмоль/л жеребца относят к группе с высокой криоустойчивостью спермы. Если концентрация эстрадиола в сыворотке крови ниже 153,5 пмоль/л, - к группе с низкой криоустойчивостью спермы. Способ позволяет определить криоустойчивость спермы жеребца, без необходимости знать выживаемость сперматозоидов при температуре 2-4°С, что, в свою очередь, дает возможность не прибегать к отбору самой спермы. 2 табл., 1 пр.

Способ оценки криоустойчивости спермы жеребцов по концентрации эстрадиола в сыворотке крови, включающий определение концентрации эстрадиола в сыворотке крови, отличающийся тем, что при концентрации эстрадиола в сыворотке крови выше 153,5 пмоль/л жеребца относят к группе с высокой криоустойчивостью спермы, а при концентрации эстрадиола в сыворотке крови ниже 153,5 пмоль/л, соответственно, к группе с низкой криоустойчивостью спермы.