СПОСОБ ОЦЕНКИ КАЧЕСТВА СПЕРМЫ ЖЕРЕБЦОВ ПО КОНЦЕНТРАЦИИ ДИГИДРОТЕСТОСТЕРОНА В СЫВОРОТКЕ КРОВИ Российский патент 2024 года по МПК A61D19/00 G01N33/49 G01N33/50 

ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ, К КОТОРОЙ ОТНОСИТСЯ ИЗОБРЕТЕНИЕ

Изобретение относится к области животноводства, в частности к коневодству и может быть использовано для отбора жеребцов с высокой криоустойчивостью спермы.

УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ

Дигидротестостерон - это один из наиболее активных андрогенов, который образуется из тестостерона непосредственно в "органах-мишенях" с участием специального фермента (5-альфа-редуктазы) (Широкова О.В., Фролова Н.А., Синякина А.И. Изучение влияния сезонного фактора на концентрацию стероидных гормонов в сыворотке крови жеребцов // Коневодство и конный спорт.2021. №4. С. 8-11.).

Ближайшим аналогом (прототипом) заявляемого способа является способ оценки качества спермы жеребцов по уровню активности α-амилазы в сыворотке крови (Пат.2751138 Российская Федерация, МПК G01N 33/49 Способ оценки качества спермы жеребцов по уровню активности α-амилазы в сыворотке крови / М.М. Атрощенко, А.И. Синякина, A.M. Зайцев, В.В. Калашников, А.А. Незаленова, А.А. Дацышин, М.Г. Енгалы-чева, A.M. Шитикова, О.В. Широкова; заявитель и патентообладатель Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Всероссийский научно-исследовательский институт коневодства". - №2020140448; заявл. 09.12.2020; опубл. 08.07.2021, Бюл. №19.), включающий определение предельно допустимого уровня активности α-амилазы в сыворотке крови. Мы установили, что предельно допустимый уровень активности α-амилазы в сыворотке крови равен 24,5 МЕ/л. При активности α-амилазы в сыворотке крови ниже 24,5 МЕ/л жеребца следует относить к группе с высоким качеством спермы, а при активности α-амилазы в сыворотке крови выше 24,5 МЕ/л, соответственно, к группе с низким.

Недостатком этого способа является то, что он не дает возможности автоматически оценить качество спермы жеребцов по концентрации дигидротестостерона в сыворотке крови, используя принцип действия α-амилазы, так как это разные ферменты. Кроме того, до сих пор неизвестна предельно допустимая концентрация (далее - ПДК) дигидротестостерона в этой биологической жидкости.

Мы поставили задачу количественно оценить значение ПДК дигидротестостерона в сыворотке крови жеребцов, а затем изучить влияние его концентрации в сыворотке крови каждого животного на качество спермы в сравнении с ПДК.

Предлагаемый нами способ отбора жеребцов с высоким качеством спермы по концентрации дигидротестостерона в сыворотке крови позволит оценить это качество, не прибегая к отбору самой спермы. Другими словами, не имея продукта (в данном случае спермы), мы сможем оценить некоторые его качества.

Следовательно, заявленный нами способ соответствует условию патентоспособности изобретения «новизна». Изобретение является применимым, так как оно может быть использовано в коневодстве для отбора жеребцов с высоким качеством спермы по концентрации дигидротестостерона в сыворотке крови.

РАСКРЫТИЕ СУЩНОСТИ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Образцы спермы, предназначенной для исследования (n равно 54), отбирают с использованием ранее разработанной методики (Науменкова В.А. Рекомендации по взятию, разбавлению и замораживанию спермы жеребцов / Дивово: «Изд-во «ВНИИ коневодства», 2006. 23 с.) (далее - Рекомендации). После получения спермы, каждый эякулят оценивают по следующим показателям: объем эякулята, концентрация сперматозоидов, общее количество сперматозоидов с прогрессивной подвижностью в эякуляте, выживаемость сперматозоидов при температуре (Т) 2-4°С.

Одновременно с получением спермы производят забор крови от каждого жеребца из яремной вены однократно до кормления животных. Образцы крови центрифугируют при 1500 об/мин в течение 20 минут и хранят сыворотку при -18°С до проведения анализа.

Концентрацию дигидротестостерона определяют с помощью коммерческого набора ELISA (DRG Instruments, Марбург, Германия) на анализаторе Multiskan ELISA ("Thermo Labsystems OU", Вантаа, Финляндия).

ПДК дигидротестостерона в сыворотке крови жеребцов в границах 50 процентиля репрезентативной выборки рассчитывают на основании полученных нами результатов и согласно ранее проведенным исследованиям (Изучение взаимосвязи между стероидными гормонами и биохимическими показателями крови жеребцов-производителей / М.М. Атрощенко, A.M. Кудлаева, Е.Ю. Бородкина, М.Г. Енгалычева, А.А. Незаленова, О.В. Широкова // Коневодство и конный спорт. 2020. №3. С. 7-11.).

ПДК дигидротестостерона в сыворотке крови жеребцов в границах 50 процентиля репрезентативной выборки оказалась равной 362,5 пг/мл.

Подопытных животных (n равно 12) разбивают на две группы в зависимости от концентрации дигидротестостерона в сыворотке крови. Таким образом, в первой группе оказались жеребцы со значением концентрации дигидротестостерона в сыворотке крови ниже 362,5 пг/мл, во второй группе, соответственно, выше 362,5 пг/мл.

Из полученных данных видно, что общее количество сперматозоидов с прогрессивной подвижностью в эякулятах у жеребцов, концентрация дигидротестостерона в сыворотке крови которых выше 362,5 пг/мл, на 191,76% больше, чем у жеребцов, концентрация дигидротестостерона в сыворотке крови которых ниже 362,5 пг/мл (Р не больше 0,01).

Сам собой напрашивается вывод: при концентрации дигидротестостерона в сыворотке крови жеребца выше 362,5 пг/мл, отмечается высокий уровень общего количества сперматозоидов с прогрессивной подвижностью в эякуляте, т.е. сперма жеребца имеет высокое качество. В связи с этим, предложенный способ является достоверным.

ОСУЩЕСТВЛЕНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Применимость предлагаемого способа оценки качества спермы по концентрации дигидротестостерона в сыворотке крови была проверена на жеребцах Терского племенного конного завода №169 (Ставропольский край), Починковского конного завода (Нижегородская область) и кумысной фермы Федерального государственного бюджетного научного учреждения "Всероссийский научно-исследовательский институт коневодства" (Рязанская область) (n равно 12).

Забор крови от каждого жеребца производят из яремной вены однократно до кормления животных, эти образцы оценивают по концентрации дигидротестостерона с помощью коммерческого набора ELISA (DRG Instruments, Марбург, Германия) на анализаторе Multiskan ELISA ("Thermo Labsystems OU", Вантаа, Финляндия).

Одновременно получают образцы спермы жеребцов, которые оценивают по следующим показателям: объем эякулята, концентрация сперматозоидов, общее количество сперматозоидов с прогрессивной подвижностью в эякуляте, выживаемость сперматозоидов при температуре (Т) 2-4°С.

При этом мы учли данные исследования (Изучение взаимосвязи белкового спектра спермоплазмы и показателей качества спермы жеребцов / М.М. Атрощенко, A.M. Шитикова, М.Г. Енгалычева, О.В. Денисова, Д.Г. Навасардянц, О.С.Белоновская, А.А. Пасько // Коневодство и конный спорт. 2020. №6. С.12-15.), в котором количество сперматозоидов с прогрессивной подвижностью в эякуляте в выборке жеребцов с наилучшими показателями качества спермы в среднем составляет 5,6 млрд.

Вывод: при концентрации дигидротестостерона в сыворотке крови выше 362,5 пг/мл жеребца следует относить к группе с высоким качеством спермы, а при концентрации дигидротестостерона в сыворотке крови ниже 362,5 пг/мл, соответственно, к группе с низким.

Таким образом, при практическом использовании предлагаемого способа, для установления уровня качества спермы жеребцов, не нужно знать общее количество сперматозоидов с прогрессивной подвижностью в эякуляте, а достаточно знать концентрацию дигидротестостерона в сыворотке крови.

Изобретение относится к ветеринарной медицине, а именно к лабораторной диагностике, и может быть использовано для отбора жеребцов с высоким качеством спермы. Определяют концентрацию дигидротестостерона в сыворотке крови. При концентрациях дигидротестостерона в сыворотке крови выше 362,5 пг/мл жеребца относят к группе с высоким качеством спермы. Если концентрации дигидротестостерона в сыворотке крови ниже 362,5 пг/мл, - к группе с низким качеством спермы. Способ позволяет определить качество спермы жеребца, без необходимости знать общее количество сперматозоидов с прогрессивной подвижностью в эякуляте, что в свою очередь дает возможность не прибегать к отбору самой спермы. 2 табл., 1 пр.

Способ оценки качества спермы жеребцов по концентрации дигидротестостерона в сыворотке крови, включающий определение концентрации дигидротестостерона в сыворотке крови животного, отличающийся тем, что при концентрации дигидротестостерона в сыворотке крови выше 362,5 пг/мл жеребца следует относить к группе с высоким качеством спермы, при концентрации дигидротестостерона в сыворотке крови ниже 362,5 пг/мл, соответственно, к группе с низким качеством спермы.