СПОСОБ ОЦЕНКИ КАЧЕСТВА СПЕРМЫ ЖЕРЕБЦОВ ПО КОНЦЕНТРАЦИИ ГЛУТАТИОНПЕРОКСИДАЗЫ В СПЕРМОПЛАЗМЕ Российский патент 2024 года по МПК G01N33/48 G01N33/50 

ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ, К КОТОРОЙ ОТНОСИТСЯ ИЗОБРЕТЕНИЕ

Изобретение относится к области животноводства, в частности к коневодству и может быть использовано для отбора жеребцов с высоким качеством спермы.

УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ

Известно, что глутатионпероксидаза (далее - ГТП) катализирует перекись водорода и органические гидропероксиды липидов с использованием глутатиона. Из основных функций этого фермента хотелось бы отметить защиту от окислительного стресса белков, липидов, никотинамидных коферментов и антиапоптозный эффект за счет предотвращения выхода цитохрома С (катализатор клеточного дыхания) из клеточных митохондрий (Козловский В.Ю., Козлов А.С., Леонтьев А.А. Селен и хозяйственно-полезные признаки молочного скота / Великие Луки, 2011. 75 с.).

Впервые, в настоящем исследовании, мы решили определить концентрацию фермента ГТП в спермоплазме жеребцов. В доступных нам источниках информации мы не нашли исследований на эту тему у других авторов и имеем право предположить, что концентрацию ГТП в спермоплазме можно использовать в качестве биохимического маркера при отборе жеребцов с лучшими показателями качества спермы.

Ближайшим аналогом (прототипом) заявляемого способа является способ оценки качества спермы жеребцов по активности супероксиддисмутазы в спермоплазме (Пат.2783975 Российская Федерация, МПК G01N 33/50 Способ оценки качества спермы жеребцов по активности супероксиддисмутазы в спермоплазме / А.И. Романова, М.М. Атрощенко, A.M. Шитикова, М.Г. Енгалычева, О.В. Широкова, Н.А. Фролова; заявитель и патентообладатель Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Всероссийский научно-исследовательский институт коневодства". - №2022121933; заявл. 10.08.2022; опубл. 22.11.2022, Бюл. №33.), который включает отбор образцов спермы, получение спермоплазмы, определение в ней уровня активности супероксиддисмутазы. При уровне активности супероксиддисмутазы в спермоплазме выше 47 ЕД/мл жеребца относят к группе животных с высоким качеством спермы, а при уровне активности супероксиддисмутазы в спермоплазме ниже 47 ЕД/мл, соответственно, к группе с низким качеством спермы. Изобретение позволяет оценить качество спермы, не затрачивая время на оценку семени по его показателям.

Недостатком этого способа является то, что он не дает возможности автоматически перенести полученные результаты на все ферменты спермоплазмы жеребцов, в том числе и на глутатионпероксидазу, так как до сих пор неизвестен предельно допустимый уровень (далее - ПДУ) концентрации глутатионпероксидазы в спермоплазме жеребцов.

Мы поставили задачу рассчитать значение ПДУ концентрации глутатионпероксидазы в спермоплазме жеребцов, что позволит, как мы предполагаем, оценить качество спермы.

Предлагаемый нами способ отбора жеребцов с высоким качеством спермы в зависимости от концентрации глутатионпероксидазы в спермоплазме позволит оценить это качество, не прибегая к оценке самой спермы. Другими словами, мы сможем оценить некоторые качества спермы, не затрачивая время на оценку семени по его показателям.

Следовательно, заявляемый нами способ соответствует условию патентоспособности изобретения «новизна». Изобретение является применимым, так как оно может быть использовано в коневодстве для отбора жеребцов с высоким качеством спермы по концентрации глутатионпероксидазы в спермоплазме.

РАСКРЫТИЕ СУЩНОСТИ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Используя ранее разработанную методику (Науменкова, В.А. Рекомендации по взятию, разбавлению и замораживании спермы жеребцов / В.А. Науменкова. - Издание ВНИИ коневодства, 2006. - 23 с.), отбирают образцы спермы, предназначенной для исследования (п равно 20). После получения спермы, каждый эякулят оценивают по следующим показателям: объем эякулята, концентрация сперматозоидов, их подвижность.

Для получения спермоплазмы часть эякулята сразу же после получения спермы центрифугируют при 3000 об/мин в течение 20 мин с помощью центрифуги ELMI СМ-6М (SIA ELMI, Латвия). Определяют концентрация ГТП в спермоплазме на иммунохимическом анализаторе Tecan Austria Sunrise (Bender Medsystems, Австрия). На основании полученных результатов, согласно ранее разработанной методике (Галимова Э.Ф. Молекулярные и клеточные механизмы функционирования мужской репродуктивной системы в условиях экстремальных и фоновых воздействий различной природы и интенсивности: дис…. д-ра мед. наук: 14.03.03 / Э.Ф. Галимова; Башкир, гос.мед. ун-т.Москва, 2016. - 247 л.), рассчитывают ПДУ концентрации ГТП в спермоплазме жеребцов в границах 50 процентиля репрезентативной выборки: ПДУ глутатионпероксидазы оказался равным 1,01 нг/мл.

Как видно из полученных данных, жеребцы с концентрацией глутатионпероксидазы в спермоплазме больше 1,01 нг/мл превосходят по подвижности сперматозоидов в нативной сперме на 117,86% аналогов из группы с меньшим значением данного показателя (Р не больше 0,01).

При этом мы учли требования к качеству спермы жеребцов (Науменкова, В.А. Рекомендации по взятию, разбавлению и замораживании спермы жеребцов / В.А. Науменкова. - Издание ВНИИ коневодства, 2006. - 23 с.), (далее - Рекомендации). В Рекомендациях подвижность сперматозоидов в нативной сперме высокого качества должна быть не менее 5,0 баллов, что в переводе на проценты означает 50%. Следовательно, жеребцов, у которых показатель подвижности сперматозоидов равен этому значению или выше его, можно смело относить к группе животных с высоким качеством спермы.

Сам собой напрашивается вывод: на основании результатов эксперимента можно сделать следующее заключение - при значениях концентрации глутатионпероксидазы в спермоплазме больше 1,01 нг/мл, отмечается высокий уровень подвижности сперматозоидов в нативной сперме. В связи с этим, предложенный способ является достоверным.

ОСУЩЕСТВЛЕНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Применимость предлагаемого способа была проверена в условиях Терского племенного конного завода №169 Ставропольского края.

Производится отбор образцов спермы жеребцов и каждый из них оценивается по следующим показателям: объем эякулята, концентрация сперматозоидов, их подвижность. Для получения спермоплазмы часть каждого эякулята сразу же после получения спермы центрифугировали при 3000 об/мин в течение 20 мин с помощью центрифуги ELMI СМ-6М (SIA ELMI, Латвия). Затем была определена концентрация глутатионпероксидазы в каждом образце спермоплазмы на иммунохимическом анализаторе Tecan Austria Sunrise (Bender Medsystems, Австрия).

При этом мы распределили животных по группам. В первой группе были собраны жеребцы со значением ПДУ глутатионпероксидазы меньше 1,01 нг/мл, во второй группе, соответственно, больше 1,01 нг/мл.

Вывод: при концентрации глутатионпероксидазы в спермоплазме выше 1,01 нг/мл жеребца следует относить к группе с высоким качеством спермы, а при активности глутатионпероксидазы в спермоплазме ниже 1,01 нг/мл, соответственно, к группе с низкой.

Таким образом, при практическом использовании предлагаемого способа, для определения качества спермы жеребцов, не нужно определять подвижность сперматозоидов в нативной сперме, а достаточно знать концентрацию глутатионпероксидазы в спермоплазме.

Изобретение относится к области животноводства, в частности к коневодству, и может быть использовано для отбора жеребцов с высоким качеством спермы. Способ оценки качества спермы жеребцов по концентрации глутатионпероксидазы в спермоплазме включает отбор образцов спермы, получение спермоплазмы, определение в ней концентрации глутатионпероксидазы, сравнение ее значения с предельно допустимым уровнем концентрации глутатионпероксидазы в спермоплазме жеребцов, рассчитанным нами и оказавшимся равным 1,01 нг/мл. При концентрации глутатионпероксидазы в спермоплазме выше 1,01 нг/мл жеребца следует относить к группе с высоким качеством спермы, а при концентрации глутатионпероксидазы в спермоплазме ниже 1,01 нг/мл, соответственно, к группе с низким качеством спермы. Изобретение обеспечивает оценку качества спермы жеребцов в зависимости от концентрации глутатионпероксидазы, не прибегая к оценке самой спермы. 2 табл.

Способ оценки качества спермы жеребцов по концентрации глутатионпероксидазы в спермоплазме, включающий определение концентрации глутатионпероксидазы в спермоплазме, отличащийся тем, что при концентрации глутатионпероксидазы в спермоплазме выше 1,01 нг/мл жеребца относят к группе с высоким качеством спермы, а при концентрации глутатионпероксидазы в спермоплазме ниже 1,01 нг/мл, соответственно, к группе с низким качеством спермы.