КОМПОЗИЦИЯ ТРАДИЦИОННОЙ КИТАЙСКОЙ МЕДИЦИНЫ ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ НОВОЙ КОРОНАВИРУСНОЙ ПНЕВМОНИИ, СПОСОБ ЕЕ ПОЛУЧЕНИЯ, СПОСОБ ЕЕ ОПРЕДЕЛЕНИЯ И ЕЕ ПРИМЕНЕНИЕ Российский патент 2024 года по МПК A61K36/9068 A61K36/28 A61K36/484 A61K36/53 A61K36/72 A61K36/752 A61K36/882 A61K47/36 A61K47/40 G01N30/02 G01N30/90 A61P11/00 A61P31/14 

Перекрестная ссылка на родственные заявки

Настоящее изобретение испрашивает приоритет на основании патентной заявки Китая № CN202010384148.5 под названием «Композиция традиционной китайской медицины для лечения новой коронавирусной пневмонии, способ получения, способ определения и ее применение», поданной 8 мая 2020 г. в патентное ведомство Китая, полное содержание которой включено в настоящий документ посредством ссылки.

ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ

Изобретение относится к технической области традиционной китайской медицины, в частности, к композиции традиционной китайской медицины для лечения синдрома, вызванного холодом и сыростью, и особенно к композиции традиционной китайской медицины для лечения коронавирусной инфекции 2019 года (COVID-19), способу ее получения, способу ее определения и ее применению.

УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ

Простуда подразделяется на «сезонную простуду» и «эпидемическую простуду» в зависимости от природы патогенных факторов. Эпидемическая простуда - это экзогенное заболевание с сильной эпидемической инфекцией, вызываемое холодным зараженным воздухом. Эпидемическая простуда подразделяется на четыре категории, а именно: холодная эпидемическая простуда, простуда со свойствами холода и сырости, простуда со свойствами холода, сухости и сырости, заражение инь-токсином и так далее. Простуда со свойствами холода и сырости является относительно распространенной и имеет следующие клинические проявления: познабливание с лихорадкой, отсутствие потоотделения и головная боль, болезненность и боль в суставах конечностей, горький вкус и легкая жажда во рту, тонкое, белое и слегка жирное покрытие языка, плавающий или плавающий и учащенный пульс; она в основном вызывается холодом в комбинации с грязью и сыростью; общий принцип лечения заключается в «рассеивании холода, удалении сырости, избегании грязи и устранении мутности».

Новый коронавирус - это новый штамм коронавируса, который никогда ранее не присутствовал в организме человека. Распространенные симптомы людей, инфицированных коронавирусом, включают респираторные симптомы, лихорадку, кашель, одышку и затрудненное дыхание, и тому подобное. В более серьезных случаях инфекция может привести к пневмонии, тяжелому острому респираторному синдрому, почечной недостаточности или даже смерти. В настоящее время не существует специфического лечения заболеваний, вызванных новым коронавирусом. Среди диагностированных пациентов с COVID-19 многие пациенты имеют увеличенный язык с отметинами от зубов, толстое и жирное покрытие языка, и еще больше людей имеют гнилое покрытие языка, и все они демонстрируют признаки «сырости», и COVID-19 в основном вызвана сыростью и холодом и жаром, в сочетании с другими клинические проявлениями COVID-19. Поэтому существует потребность в композиции традиционной китайской медицины для лечения синдрома, вызванного холодом и сыростью, особенно COVID-19.

В связи с этим предлагается настоящее изобретение.

КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Первая задача настоящего изобретения заключается в обеспечении композиции традиционной китайской медицины, которая может применяться для лечения синдрома, вызванного холодом и сыростью, особенно COVID-19, и обладает выдающимся лечебным эффектом.

Вторая задача настоящего изобретения заключается в обеспечении способа получения указанной композиции традиционной китайской медицины, который позволяет в достаточной степени экстрагировать активные ингредиенты композиции традиционной китайской медицины, обеспечивает высокую биодоступность, прост, не требует какого-либо специального оборудования и подходит для промышленного производства.

Третья задача настоящего изобретения заключается в обеспечении применения указанной композиции традиционной китайской медицины для получения лекарственных средств для лечения синдрома, вызванного холодом и сыростью, в частности, для лечения COVID-19.

Для решения вышеуказанных задач техническое решение, принятое в настоящей заявке, является следующим.

Композиция традиционной китайской медицины для лечения коронавирусной инфекции 2019 года (COVID-19), где композиция традиционной китайской медицины в основном получена из следующего сырья, в частях по массе: 250-400 частей Citri reticulatae pericarpium, 100-200 частей Atractylodis rhizoma, 100-200 частей Magnoliae officinalis cortex, 200-300 частей Glycyrrhizae radix et rhizoma, 200-300 частей Agastache rugosus, 200-300 частей Acori tatarinowii rhizoma, 250-330 частей Jujubae fructus и 100-200 частей Zingiberis rhizoma recens.

В предпочтительном варианте осуществления композиция традиционной китайской медицины в основном получена из следующего сырья, в частях по массе: 270-350 частей Citri reticulatae pericarpium, 130-175 частей Atractylodis rhizoma, 130-175 частей Magnoliae officinalis cortex, 200-260 частей Glycyrrhizae radix et rhizoma, 200-260 частей Agastache rugosus, 200-260 частей Acori tatarinowii rhizoma, 280-330 частей Jujubae fructus и 150-180 частей Zingiberis rhizoma recens.

Citri reticulatae pericarpium: высушенная зрелая кожура Citrus reticulata Blanco и его культурных сортов семейства Rutaceae. Она является ароматной, согревающей по своей природе, обладает тропизмом к меридиану легких и селезенки, обладает эффектами регуляции ци, оздоровления селезенки, устранения сырости и рассасывания мокроты. Основные ингредиенты Citri reticulatae pericarpium в основном включают флавоноиды, эфирные масла, лимоноиды, алкалоиды и микроэлементы (кальций, калий, магний, натрий, литий, железо, цинк или марганец, и т. д.).

Типичное, но не ограничивающее содержание Citri reticulatae pericarpium согласно настоящему изобретению составляет 250 частей по массе, 270 частей по массе, 290 частей по массе, 310 частей по массе, 330 частей по массе, 350 частей по массе, 370 частей по массе, 390 частей по массе или 400 частей по массе.

Atractylodis rhizoma: высушенное корневище Atractylodes lancea (Thunb.) DC. или Atractylodes chinensis (DC.) Koidz. семейства Compositae. Оно является острым, горьким и/или согревающим, обладает тропизмом к меридиану легких, желудка и/или печени и обладает эффектами устранения сырости, укрепления селезенки, рассеивания ветра, рассеивания холода и улучшения зрения. Клинически оно применяется для лечения среднего цзяо, заблокированного сыростью, ощущения переполнения желудка и вздутия живота, диареи, отека, авитаминоза, ревматической артралгии, простуды со свойствами ветра и холода, ночной слепоты, слабости зрения и шелушения вокруг глаз. Эксперименты доказывают, что Atractylodis rhizoma обладает противовоспалительным и бактериостатическим эффектом. Atractylodis rhizoma в основном содержит эфирные масла, которые состоят из ряда сесквитерпенов, поливиниловых алкинов и небольшого количества фенолов и/или органических кислот, а также содержит сесквитерпеновые лактоны, сесквитерпеновые гликозиды, полисахариды и небольшое количество флавоноидов, причем основными активными ингредиентами являются сесквитерпены и поливиниловые алкины.

Типичное, но не ограничивающее содержание Atractylodis rhizoma согласно настоящему изобретению составляет 100 частей по массе, 110 частей по массе, 120 частей по массе, 130 частей по массе, 140 частей по массе, 150 частей по массе, 160 частей по массе, 170 частей по массе, 180 частей по массе, 190 частей по массе или 200 частей по массе.

Magnoliae officinalis cortex: высушенная кора, кора корня и кора ветвей Magnolia officinalis Rehd. et Will. или M. biloba (Rehd. etwils) Cheng семейства Magnoliaceae. Она является горькой, острой и согревающей, обладает тропизмом к меридиану селезенки, желудка, легких и/или толстой кишки и обладает эффектами устранения сырости, устранения мокроты, снижения ци и устранения ощущения переполнения. Клинически она используется для лечения повреждения среднего цзяо, вызванного сыростью, рвоты и диареи, вызванных ощущением переполнения желудка, застоя ци, вызванного застоем пищи, запоров, вызванных вздутием живота, астмы и кашля, вызванного мокротой. Эксперименты доказывают, что Magnoliae officinalis cortex обладает противовирусным, антибактериальным, обезболивающим и противовоспалительным эффектом. Magnoliae officinalis cortex в основном содержит лигнаны, алкалоиды, фенэтанольные гликозиды, фенольные гликозиды и/или эфирные масла.

Типичное, но не ограничивающее содержание Magnoliae officinalis cortex согласно настоящему изобретению составляет 100 частей по массе, 110 частей по массе, 120 частей по массе, 130 частей по массе, 140 частей по массе, 150 частей по массе, 160 частей по массе, 170 частей по массе, 180 частей по массе, 190 частей по массе или 200 частей по массе.

Glycyrrhizae radix et rhizoma: высушенные корни и корневища Glycyrrhiza uralensis Fisch., Glycyrrhiza inflata Bat. или Glycyrrhiza glabra L семейства Leguminous. Они являются сладкими и нейтральными по своей природе, обладает тропизмом к меридиану сердца, легких, селезенки и желудка и выполняют функции оздоровления селезенки и восполнения ци, устранения жара и токсичных веществ, устранения мокроты и остановки кашля, снятия спазма и боли и гармонизации различных компонентов. Клинически они используются для лечения селезенки и слабости желудка, усталости и недостатка сил, пальпитации и одышки, кашля с чрезмерной мокротой, спазма брюшной полости и/или конечностей, боли, карбункула и отека и язв, а также снижения токсичности и интенсивности действия лекарственных средств. Эксперименты доказывают, что Glycyrrhizae radix et rhizoma обладает противовоспалительным эффектом, эффектами ингибирования бактерий и/или устранения мокроты и облегчения кашля. Химические компоненты Glycyrrhizae radix et rhizoma в основном включают тритерпены, флавоноиды и полисахариды солодки.

Типичное, но не ограничивающее содержание Glycyrrhizae radix et rhizoma согласно настоящему изобретению составляет 200 частей по массе, 210 частей по массе, 220 частей по массе, 230 частей по массе, 240 частей по массе, 250 частей по массе, 260 частей по массе, 270 частей по массе, 280 частей по массе, 290 частей по массе или 300 частей по массе.

Agastache rugosus: сухие надземные части Pogostemon cablin (Blanco) Benth. семейства Labiatae. Они являются горькими и слегка согревающими, обладают тропизмом к меридиану селезенки, желудка и/или легких и обладают эффектами устранения сырости за счет ароматических свойств, регуляции среднего цзяо для остановки рвоты, дозирования лекарственных средств изнутри для облегчения летнего зноя. Клинически они используются для лечения сырости и мутности, блокирующих средний цзяо, рвоты, вызванной ощущением переполнения желудка, поверхностного синдрома летнего зноя и сырости, ранней стадии синдрома сырости и жара, лихорадки и усталости, сдавленности и дискомфорта в груди, состояния, вызванного холодом и сыростью, и удержания летнего жара, боли в животе и рвоты и диареи, назосинусита и головной боли. Эксперименты доказывают, что Agastache rugosus обладает противовирусными, антибактериальными, обезболивающими и противовоспалительными функциями. Основными активными ингредиентами Agastache rugosus являются пачулевый спирт и пачулевый кетон.

Типичное, но не ограничивающее содержание Agastache rugosus согласно настоящему изобретению составляет 200 частей по массе, 210 частей по массе, 220 частей по массе, 230 частей по массе, 240 частей по массе, 250 частей по массе, 260 частей по массе, 270 частей по массе, 280 частей по массе, 290 частей по массе или 300 частей по массе.

Acori tatarinowii rhizoma: высушенное корневище Acorustatarinowii Schott семейства Araceae. Оно является острым, горьким и согревающим, обладает тропизмом к меридиану сердца и желудка и обладает эффектами индукции оживления организма, устранения мокроты, пробуждения ума, улучшения интеллекта, устранения сырости и стимулирования аппетита. Клинически оно используется для лечения спутанности сознания и эпилепсии, амнезии и бессонницы, тиннитуса и глухоты, ощущения эпигастрального переполнения, отсутствия голода, невозможности есть из-за дизентерии. Эксперименты доказывают, что Acori tatarinowii rhizoma содержит различные спазмолитические и антиастматические компоненты, а отвар может способствовать секреции желудочного сока и снимать спазм гладких мышц кишечника. Согласно современным фармакологическим исследованиям его химическими компонентами являются в основном летучие компоненты и нелетучие компоненты. В настоящее время летучие составляющие более изучены, а нелетучие составляющие менее изучены. Летучие компоненты являются относительно сложными и включают более 60 известных компонентов, и основными структурными типами являются фенилпропаноиды (простые фенилпропаноиды, лигнаны и кумарины) и терпеноиды (монотерпен, сесквитерпен, дитерпен и тритерпены). Нелетучие компоненты в основном включают алкалоиды, альдегиды и кислоты, хиноны и кетоны, стерины, аминокислоты и углеводы.

Типичное, но не ограничивающее содержание Acori tatarinowii rhizoma согласно настоящему изобретению составляет 200 частей по массе, 210 частей по массе, 220 частей по массе, 230 частей по массе, 240 частей по массе, 250 частей по массе, 260 частей по массе, 270 частей по массе, 280 частей по массе, 290 частей по массе или 300 частей по массе.

Jujubae fructus: высушенный зрелый плод Ziziphus jujuba Mill. из семейства Rhamnaceae, он является сладким и согревающим, обладает тропизмом к меридиану селезенки, желудка и/или сердца и обладает эффектами оздоровления селезенки, восполнения ци, питания крови и успокоения нервов. Клинически он используется для лечения недостаточности селезенки, анорексии, астении, жидкого стула, женских внутренних органов и раздражительности. Эксперименты доказывают, что Jujubae fructus обладает эффектами ингибирования нервов, защиты печени, повышения мышечной силы, сопротивления раку, сопротивления мутации, сопротивления перекисному окислению липидов. Эфирные масла Jujubae fructus в основном включают диметилфталат, этилтридеканоат, диизобутилфталат, 3-гидрокси-2-бутанон, фурфуриловый спирт, 2-циклопентен-1,4-дион, этилпальмитат и/или метиловый эфир линоленовой кислоты.

Типичное, но не ограничивающее содержание Jujubae fructus согласно настоящему изобретению составляет 250 частей по массе, 260 частей по массе, 270 частей по массе, 280 частей по массе, 290 частей по массе, 300 частей по массе, 310 частей по массе, 320 частей по массе или 330 частей по массе.

Zingiberis rhizoma recens: свежее корневище семейства Zingiberaceae, оно является горьким и согревающим, обладает тропизмом к меридиану легких, селезенки и/или желудка и обладает эффектами дозирования лекарств изнутри, чтобы рассеять холод, согревания среднего цзяо для остановки рвоты, устранения мокроты для облегчения кашля и устранения токсина рыбы и крабов. Его можно использовать для лечения типа простуды, вызванного ветром и холодом, рвоты из-за кишечного гриппа, кашля из-за холодной мокроты, а также отравления рыбой и крабами. Эксперименты доказывают, что Zingiberis rhizoma recens обладает эффектами ингибирования нервов, защиты печени, повышения мышечной силы, сопротивления раку, сопротивления мутации, сопротивления перекисному окислению липидов. Современные исследования показывают, что основными компонентами Zingiberis rhizoma recens являются эфирные масла, гингеролы и дифенилгептаны.

Типичное, но не ограничивающее содержание Zingiberis rhizoma recens согласно настоящему изобретению составляет 100 частей по массе, 110 частей по массе, 120 частей по массе, 130 частей по массе, 140 частей по массе, 150 частей по массе, 160 частей по массе, 170 частей по массе, 180 частей по массе, 190 частей по массе или 200 частей по массе.

В предпочтительном варианте осуществления композиция традиционной китайской медицины в основном получена из следующего сырья, в частях по массе: 340,9 частей Citri reticulatae pericarpium, 170,5 частей Atractylodis rhizoma, 170,5 частей Magnoliae officinalis cortex, 255,7 частей Glycyrrhizae radix et rhizoma, 255,7 частей Agastache rugosus, 255,7 частей Acori tatarinowii rhizoma, 318,2 частей Jujubae fructus и 163,6 частей Zingiberis rhizoma recens.

В одном варианте осуществления композиция традиционной китайской медицины согласно настоящему изобретению дополнительно содержит определенную массовую часть вспомогательного вещества, предпочтительно 500-700 массовых частей вспомогательного вещества, предпочтительно вспомогательное вещество представляет собой наполнитель.

Более предпочтительно наполнитель представляет собой декстрин, растворимый крахмал или лактозу.

Композиция традиционной китайской медицины согласно настоящему изобретению может быть получена в виде различных препаратов с помощью традиционных технологий в данной области техники, включая, не ограничиваясь перечисленным, жидкость для перорального введения, гранулу, порошок, пилюлю, получаемую капельным методом, капсулу, шипучий агент или таблетку.

В одном варианте осуществления способ получения композиции традиционной китайской медицины согласно настоящему изобретению включает следующие стадии:

замачивание сырья в частях по массе в воде, отваривание для экстрагирования, фильтрование для получения раствора экстракта, концентрирование при пониженном давлении и сушку распылением для получения высушенного распылением порошка; добавление связующего, смешивание и влажное гранулирование.

В конкретном варианте осуществления способ получения композиции традиционной китайской медицины согласно настоящему изобретению включает следующие стадии:

(1) взвешивание сырья в частях по массе;

(2) добавление 15-кратного количества воды, в частях по массе, замачивание на 0,5 часа, двукратное отваривание для экстрагирования, каждый раз по 0,5 часа, смешивание отваров и фильтрование для получения раствора экстракта;

(3) концентрирование раствора экстракта со стадии (2) при 70°C при пониженном давлении для получения концентрированного раствора с относительной плотностью 1,10-1,20 г/мл при измерении при 50°C;

(4) взятие концентрированного раствора со стадии (3) и сушку распылением для получения высушенного распылением порошка;

(5) смешивание высушенного распылением порошка со стадии (4) с декстрином и влажное гранулирование.

В предпочтительном варианте осуществления условия сушки распылением на стадии (4) являются следующими: температура на входе составляет 125°C, давление составляет 102,5 МПа, обдув составляет 80%, и расход составляет 20-30/с.

В другом варианте осуществления способ получения композиции традиционной китайской медицины согласно настоящему изобретению включает следующие стадии:

экстрагирование сырья в частях по массе методом паровой дистилляции и сбор эфирных масел;

фильтрование отвара для получения раствора экстракта; сушку распылением после концентрирования раствора экстракта при пониженном давлении для получения высушенного распылением порошка;

добавление безводного раствора этанола в эфирные масла и включение в водный раствор циклодекстрина для получения соединения включения циклодекстрина;

смешивание высушенного распылением порошка, соединения включения циклодекстрина и связующего и проведение влажного гранулирования.

В предпочтительном варианте осуществления в способе получения композиции традиционной китайской медицины согласно настоящему изобретению используют метод паровой дистилляции для экстракции 2-3 раза, и экстракты, полученные в каждом случае, объединяют для следующей стадии.

В предпочтительном варианте осуществления в способе получения композиции традиционной китайской медицины согласно настоящему изобретению в методе паровой дистилляции для экстракции эфирных масел используют 8-15-кратное количество воды.

В предпочтительном варианте осуществления в водном растворе β-циклодекстрина масса β-циклодекстрина в 8-12 раз превышает массу эфирных масел, а масса воды в 10-20 раз превышает массу β-циклодекстрина; предпочтительно масса β-циклодекстрина в 10 раз превышает массу эфирных масел, а масса воды в 15 раз превышает массу β-циклодекстрина.

В другом конкретном варианте осуществления способ получения композиции традиционной китайской медицины согласно настоящему изобретению включает следующие стадии:

(a) взвешивание сырья в частях по массе и измельчение в крупный порошок;

(b) добавление 8-15-кратного количества воды, в частях по массе, замачивание на 0,5 часа, экстрагирование методом паровой дистилляции и сбор эфирных масел; фильтрование отвара для получения раствора экстракта;

(c) взятие раствора экстракта, полученного на стадии (b), и концентрирование при пониженном давлении до концентрированного раствора с относительной плотностью 1,10-1,20 г/мл при измерении при 60°C;

(d) проведение сушки распылением концентрированного раствора со стадии (c) для получения высушенного распылением порошка;

(e) добавление безводного раствора этанола в эфирные масла, собранные на стадии (b), перемешивание в течение 3 часов с использованием водного раствора β-циклодекстрина для включения, охлаждение, фильтрацию и сушку для получения соединения включения эфирного масла;

(f) смешивание высушенного распылением порошка со стадии (d), соединения включения эфирного масла со стадии (e) и декстрина и проведение влажного гранулирования.

В предпочтительном варианте осуществления на стадии (b) к остатку добавляют 8-15-кратное количество воды для проведения экстракции в течение 1 часа методом паровой дистилляции, и отвар фильтруют для получения раствора экстракта; два полученных раствора экстракта объединяют для следующей стадии.

В предпочтительном варианте осуществления на стадии (b) раствор концентрируют при 70°C при пониженном давлении. На стадии (c) условия сушки распылением являются следующими: температура на входе составляет 160-180°C, температура на выходе составляет 80-90°C.

В предпочтительном варианте осуществления на стадии (e) в водном растворе β-циклодекстрина масса β-циклодекстрина в 8-12 раз превышает массу эфирного масла, а масса воды в 10-20 раз превышает массу β-циклодекстрина; предпочтительно масса β-циклодекстрина в 10 раз превышает массу эфирного масла, а масса воды в 15 раз превышает массу β-циклодекстрина.

В одном варианте осуществления настоящего изобретения предложен способ определения качества композиции традиционной китайской медицины, включающий качественную идентификацию гесперидина с помощью тонкослойной хроматографии и определение содержания гесперидина, предпочтительно дополнительно включающий качественную идентификацию 6-гингерола, Glycyrrhizae radix et rhizoma и/или магнолола с помощью тонкослойной хроматографии.

В конкретном варианте осуществления качественная идентификация с помощью тонкослойной хроматографии включает:

(1) растворение 2 г гранулированного порошка композиции китайской медицины в 25 мл воды, двукратное экстрагирование этилацетатом (каждый раз по 20 мл), смешивание растворов экстракта, выпаривание и растворение остатка в 1 мл метанола для получения раствора образца; добавление метанола к контрольному образцу гесперидина для приготовления насыщенного раствора в качестве контрольного раствора; и проведение эксперимента с использованием тонкослойной хроматографии, отбирание 2-5 мкл тестируемого раствора и 5 мкл контрольного раствора, соответственно нанесение их капель на одну и ту же тонкослойную пластину силикагеля G и проявление с помощью смеси этилацетата-метанола-воды в объемном соотношении 20:3:2 в качестве проявляющего агента, вынимание, сушку на воздухе, распыление 5% раствора трихлорида алюминия в этаноле, нагревание при 105°C в течение 5-10 мин и осмотр под ультрафиолетовой лампой при 365 нм; на хроматограмме тестируемого раствора появляются пятна того же цвета в тех же местах, что и на хроматограмме контрольного раствора;

(2) взятие тестируемого раствора со стадии (1) в качестве тестируемого образца и добавление этилацетата к контрольному образцу 6-гингерола для приготовления раствора, содержащего 1 мг на 1 мл, в качестве контрольного раствора; проведение эксперимента с использованием тонкослойной хроматографии, отбирание 3-10 мкл тестируемого раствора, отбирание 1 мкл контрольного раствора, и соответственно нанесение капель на одну и ту же тонкослойную пластину силикагеля G; проявление с помощью смеси петролейного эфира-трихлорметана-этилацетата в объемном соотношении 2:1:1 в качестве проявляющего агента, вынимание, сушку на воздухе, распыление 2% раствора ванилина в серной кислоте и нагревание при 105°C до появления четких пятен; на хроматограмме тестируемого раствора появляются пятна того же цвета в тех же местах, что и на хроматограмме контрольного раствора;

(3) растворение 3 г гранул порошка композиции китайской медицины в 40 мл воды, трехкратное экстрагирование н-бутанолом (каждый раз по 20 мл) при встряхивании, объединение н-бутанольных растворов (каждый раз по 20 мл), выпаривание досуха и растворение остатка в 1 мл метанола для получения раствора образца; взятие еще 1 г контрольного образца Glycyrrhizae radix et rhizoma, добавление 40 мл воды для кипячения с обратным холодильником в течение 1 часа, охлаждение, фильтрование, трехкратное экстрагирование н-бутанолом, каждый раз по 20 мл, объединение н-бутанольных растворов, каждый раз по 20 мл, выпаривание досуха, растворения остатка в 1 мл метанола для получения контрольного раствора; и проведение эксперимента с использованием тонкослойной хроматографии, отбирание 2-5 мкл тестируемого раствора и 5 мкл контрольного раствора, соответственно нанесение капель на тонкослойную пластину силикагеля G и проявление с помощью смеси этилацетата-муравьиной кислоты-ледяной уксусной кислоты-воды в объемном соотношении 15:1:1:2 в качестве проявляющего агента, вынимание, сушку на воздухе, распыление 10% раствора серной кислоты в этаноле, нагревание при 105°C до появления четких пятен и осмотр под ультрафиолетовой лампой при 365 нм; на хроматограмме тестируемого раствора появляются пятна того же цвета в тех же местах, что и на хроматограмме контрольного раствора;

(4) взятие 6 г гранулированного порошка композиции китайской медицины, измельчение, добавление 40 мл этилацетата, проведение ультразвуковой обработки в течение 30 минут, фильтрование, выпаривание досуха и добавление 1 мл метанола в остаток для получения тестируемого раствора; добавление метанола в магнолол для получения смешанного раствора, содержащего 1 мг на 1 мл, в качестве контрольного раствора; проведение эксперимента с использованием тонкослойной хроматографии, отбирание 10-15 мкл тестируемого раствора и 5 мкл контрольного раствора, соответственно нанесение капель раствора на одну и ту же тонкослойную пластину силикагеля G, проявление с помощью смеси толуола-этилацетата-метанола в объемном соотношении 18:3:1 в качестве проявляющего агента, вынимание, сушку на воздухе, распыление 1% раствора ванилина в серной кислоте, нагревание при 105°C до появления четких пятен; на хроматограмме тестируемого раствора появляются пятна того же цвета в тех же местах, что и на хроматограмме контрольного раствора.

В конкретном варианте осуществления содержание гесперидина определяют с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии:

в качестве наполнителя используют октадецилсилан, химически привитый на силикагель, в качестве подвижной фазы используют смесь ацетонитрила и 0,1% раствора фосфорной кислоты в объемном соотношении 19:81;

длина волны детектирования составляет 283 нм, а скорость потока составляет 1,0 мл/мин;

количество теоретических тарелок составляет не менее 2000 при расчете по пику гесперидина;

приготовление контрольного раствора: берут надлежащее количество контрольного образца гесперидина, точно взвешивая, и добавляют метанол для приготовления раствора, содержащего 15 мкг гесперидина на 1 мл;

приготовление тестируемого раствора: берут композицию традиционной китайской медицины согласно настоящей заявке, измельчают, просеивают через сито №5, берут 0,3 г, точно взвешивая, помещают в коническую колбу с пробкой, добавляют точно 50 мл 10% метанола, взвешивают, проводят ультразвуковую обработку в течение 30 минут, охлаждают, повторно взвешивают, восполняют потерянную массу метанолом, встряхивают, фильтруют и берут полученный фильтрат;

метод определения: отбирают точно 10 мкл контрольного раствора и раствора образца, соответственно, вводят в жидкостной хроматограф для измерения.

Каждый 1 г гранул композиции согласно настоящей заявке содержит количество Citri reticulatae pericarpium, рассчитанное по гесперидину (C₂₈H₃₄O₁₅), которое должно составлять не менее 2,325 мг.

За счет измерения содержания гесперидина в гранулах композиции традиционной китайской медицины, с одной стороны, обеспечивается стабильность и контролируемость качества гранул; с другой стороны, обеспечивается содержание активных ингредиентов в композиции традиционной китайской медицины путем измерения содержания и степени переноса гесперидина благодаря стабильным физико-химическим свойствам гесперидина, так что качество продукта эффективно контролируется.

Настоящая заявка обеспечивает применение композиции традиционной китайской медицины, описанной выше, для получения лекарственных средств для лечения синдрома, вызванного холодом и сыростью, и, необязательно, для получения лекарственных средств для лечения коронавирусной инфекции 2019 года.

Полезные эффекты настоящего изобретения заключаются в следующем:

Препарат традиционной китайской медицины, предложенный в настоящем изобретении, получают из Citri reticulatae pericarpium, Atractylodis rhizoma, Magnoliae officinalis cortex, Glycyrrhizae radix et rhizoma, Agastache rugosus, Acori tatarinowii rhizoma, Jujubae fructus и Zingiberis rhizoma recens. Активные ингредиенты в этом сырье дополняют друг друга. Полученный препарат традиционной китайской медицины имеет мало побочных действий из-за совместимости сырья, может применяться для лечения синдрома, вызванного холодом и сыростью, в особенности может применяться для лечения коронавирусной инфекции 2019 года, и достигает выдающегося терапевтического эффекта.

Способ получения согласно настоящему изобретению обеспечивает полное экстрагирование эффективных компонентов препарата традиционной китайской медицины, обеспечивает высокую биодоступность, прост, не требует специального оборудования и пригоден для промышленного производства. Способ получения согласно настоящему изобретению улучшает содержание гесперидина в композиции традиционной китайской медицины и степень переноса гесперидина.

Способ определения согласно настоящему изобретению позволяет эффективно контролировать качество композиции традиционной китайской медицины, так что композиция традиционной китайской медицины обладает хорошей стабильностью и воспроизводимостью.

Композиция традиционной китайской медицины согласно настоящему изобретению в основном содержит эфирные масла. Комплексный метод экстракции паровой дистилляцией и получение соединений включения эфирных масел уменьшает потерю эфирных масел, сокращает продолжительность процесса, улучшает коэффициент использования эфирных масел в готовом препарате традиционной китайской медицины и позволяет повысить эффективность композиции традиционной китайской медицины.

КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ГРАФИЧЕСКИХ МАТЕРИАЛОВ

Варианты осуществления настоящего изобретения подробно описаны ниже в сочетании с прилагаемыми графическими материалами, где:

Фиг. 1 представляет собой тонкослойную хроматограмму для качественной идентификации гесперидина в примере 6 настоящего изобретения, где левая колонка представляет собой контрольный раствор, а правая колонка представляет собой тестируемый раствор гранул традиционной китайской медицины согласно настоящему изобретению;

Фиг. 2 представляет собой тонкослойную хроматограмму для качественной идентификации 6-гингерола в примере 6 настоящего изобретения, где левая колонка представляет собой контрольный раствор, а правая колонка представляет собой тестируемый раствор гранул традиционной китайской медицины согласно настоящему изобретению;

Фиг. 3 представляет собой тонкослойную хроматограмму для качественной идентификации Glycyrrhizae radix et rhizoma в примере 6 настоящего изобретения, где левая колонка представляет собой контрольный раствор, а правая колонка представляет собой тестируемый раствор гранул традиционной китайской медицины согласно настоящему изобретению;

Фиг. 4 представляет собой тонкослойную хроматограмму для качественной идентификации магнолола в примере 6 настоящего изобретения, где левая колонка представляет собой контрольный раствор, а правая колонка представляет собой тестируемый раствор гранул традиционной китайской медицины согласно настоящему изобретению;

Фиг. 5 представляет собой высокоэффективную жидкостную хроматограмму тестируемого образца гранул традиционной китайской медицины согласно настоящему изобретению при определении содержания гесперидина в примере 7 настоящего изобретения;

Фиг. 6 представляет собой высокоэффективную жидкостную хроматограмму контрольного образца при определении содержания гесперидина в примере 7 настоящего изобретения;

На фиг. 7 показан ингибирующий эффект экстракта традиционной китайской медицины согласно настоящему изобретению на клетку HEK293-ACE2, инфицированную псевдовирусом COVID-19, t-критерий Стьюдента, по сравнению с группой отрицательного контроля, ^***P < 0,001; ^**p < 0,01.

ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Настоящее изобретение будет подробно описано ниже в сочетании с примерами, но специалистам в данной области техники будет ясно, что следующие примеры используются только для пояснения настоящего изобретения и не должны рассматриваться как ограничивающие объем настоящего изобретения. Примеры, в которых конкретные условия не указаны, проводили в соответствии с обычными условиями или условиями, рекомендованными производителем. Используемые реагенты или инструменты, которые не указаны производителями, являются обычными продуктами, которые доступны на рынке.

Композиция традиционной китайской медицины согласно настоящему изобретению далее будет подробно описана со ссылкой на примеры 1-7 и сравнительные примеры 1-3.

Пример 1

Композицию традиционной китайской медицины согласно настоящему изобретению получали в соответствии со следующим лекарственным сырьем, в частях по массе: 7,5 г Citri reticulatae pericarpium, 3,75 г Atractylodis rhizoma, 3,75 г Magnoliae officinalis cortex, 5,625 г Glycyrrhizae radix et rhizoma, 5,625 г Agastache rugosus, 5,625 г Acori tatarinowii rhizoma, 3,5 г Jujubae fructus и 1,8 г Zingiberis rhizoma recens. Сырье взвешивали в частях по массе, добавляли в него соответствующее количество воды, а затем отваривали на медленном огне до 400 мл для получения отвара.

Пример 2

Композицию традиционной китайской медицины согласно настоящему изобретению получали в соответствии со следующим лекарственным сырьем, в частях по массе: 250 г Citri reticulatae pericarpium, 100 г Atractylodis rhizoma, 100 г Magnoliae officinalis cortex, 200 г Glycyrrhizae radix et rhizoma, 200 г Agastache rugosus, 200 г Acori tatarinowii rhizoma, 250 г Jujubae fructus и 100 г Zingiberis rhizoma recens. Сырье взвешивали в частях по массе, добавляли к нему 15-кратное количество воды, в частях по массе, замачивали на 0,5 часа, дважды отваривали для экстрагирования, каждый раз по 0,5 часа, полученные отвары объединяли и фильтровали для получения раствора экстракта; раствор экстракта концентрировали при 70°C при пониженном давлении для получения концентрированного раствора с относительной плотностью 1,10-1,20 г/мл при измерении при 50°C. Концентрированный раствор сушили распылением для получения высушенного распылением порошка. К высушенному распылением порошку добавляли надлежащее количество декстрина, перемешивали и проводили влажное гранулирование.

Пример 3

Композицию традиционной китайской медицины согласно настоящему изобретению получали в соответствии со следующим сырьем, в частях по массе: 400 г Citri reticulatae pericarpium, 200 г Atractylodis rhizoma, 200 г Magnoliae officinalis cortex, 300 г Glycyrrhizae radix et rhizoma, 300 г Agastache rugosus, 300 г Acori tatarinowii rhizoma, 330 г Jujubae fructus и 200 г Zingiberis rhizoma recens. Сырье взвешивали в частях по массе, добавляли к нему 15-кратное количество воды, в частях по массе, замачивали на 0,5 часа, дважды отваривали для экстрагирования, каждый раз по 0,5 часа, полученные отвары объединяли и фильтровали для получения раствора экстракта; раствор экстракта концентрировали при 70°C при пониженном давлении для получения концентрированного раствора с относительной плотностью 1,10-1,20 г/мл при измерении при 50°C. Концентрированный раствор сушили распылением для получения высушенного распылением порошка. К высушенному распылением порошку добавляли надлежащее количество декстрина, перемешивали и проводили влажное гранулирование.

Пример 4

Композицию традиционной китайской медицины согласно настоящему изобретению получали в соответствии со следующим сырьем, в частях по массе: 375 г Citri reticulatae pericarpium, 187,5 г Atractylodis rhizoma, 187,5 г Magnoliae officinalis cortex, 281,3 г Glycyrrhizae radix et rhizoma, 281,3 г Agastache rugosus, 281,3 г Acori tatarinowii rhizoma, 330 г Jujubae fructus и 180 г Zingiberis rhizoma recens. Сырье взвешивали в частях по массе, добавляли к нему 15-кратное количество воды, в частях по массе, замачивали на 0,5 часа, дважды отваривали для экстрагирования, каждый раз по 0,5 часа, полученные отвары объединяли и фильтровали для получения раствора экстракта; раствор экстракта концентрировали при 70°C при пониженном давлении для получения концентрированного раствора с относительной плотностью 1,10-1,20 г/мл при измерении при 50°C. Концентрированный раствор сушили распылением для получения высушенного распылением порошка. К высушенному распылением порошку добавляли надлежащее количество декстрина, перемешивали и проводили влажное гранулирование.

Пример 5

Композицию традиционной китайской медицины согласно настоящему изобретению получали в соответствии со следующим сырьем, в частях по массе: 340,9 г Citri reticulatae pericarpium, 170,5 г Atractylodis rhizoma, 170,5 г Magnoliae officinalis cortex, 255,7 г Glycyrrhizae radix et rhizoma, 255,7 г Agastache rugosus, 255,7 г Acori tatarinowii rhizoma, 318,2 г Jujubae fructus и 163,6 г Zingiberis rhizoma recens. Сырье взвешивали в частях по массе и измельчали в крупный порошок, добавляли к нему 15-кратное количество воды, в частях по массе, для замачивания на 0,5 часа, а затем экстрагировали в течение 4 часов методом паровой дистилляции и собирали эфирные масла. Остаток отвара фильтровали для получения раствора экстракта. Остаток экстрагировали методом паровой дистилляции с 15-кратным количеством воды, в частях по массе, в течение 1 часа. Отвар отбирали, и растворы экстракта объединяли и фильтровали; полученный раствор экстракта отбирали и концентрировали при пониженном давлении до концентрированного раствора с относительной плотностью 1,10-1,20 г/мл при измерении при 60°C; концентрированный раствор сушили распылением с получением сухого порошка; к собранному эфирному маслу добавляли безводный раствор этанола, а затем перемешивали с водным раствором β-циклодекстрина в течение 3 часов для включения, охлаждали, фильтровали и сушили для получения соединения включения эфирного масла; сухой порошок, соединение включения эфирного масла и декстрин смешивали и проводили влажное гранулирование.

Пример 6

Гранулы композиции традиционной китайской медицины, полученной в примере 4, идентифицировали с помощью тонкослойной хроматографии следующим образом:

(1) 2 г гранул композиции традиционной китайской медицины растворяли в 25 мл воды, дважды экстрагировали этилацетом (каждый раз по 20 мл), полученные растворы экстракта смешивали, выпаривали и растворяли остаток в 1 мл метанола для получения раствора образца; брали еще один контрольный образец гесперидина, добавляли метанол для получения насыщенного раствора в качестве контрольного раствора; и проводили эксперимент с использованием тонкослойной хроматографии, отбирали 2-5 мкл тестируемого раствора и 5 мкл контрольного раствора, соответственно наносили капли на одну и ту же тонкослойную пластину силикагеля G и проявляли с помощью смеси этилацетата-метанола-воды в объемном соотношении 20:3:2 в качестве проявляющего агента, вынимали, сушили на воздухе, распыляли 5% раствор трихлорида алюминия в этаноле, нагревали при 105°C в течение 5-10 мин и осматривали под ультрафиолетовой лампой при 365 нм; на хроматограмме тестируемого раствора появлялись пятна того же цвета в тех же местах, что и на хроматограмме контрольного раствора;

(2) тестируемый раствор со стадии (1) использовали в качестве тестируемого образца, а также брали контрольный образец 6-гингерола, добавляли этилацетат для приготовления раствора, содержащего 1 мг на 1 мл, в качестве контрольного раствора; проводили эксперимент с использованием тонкослойной хроматографии, отбирали 3-10 мкл раствора образца и 1 мкл контрольного раствора, и соответственно наносили капли на одну и ту же тонкослойную пластину силикагеля G; проявляли с помощью смеси петролейного эфира-трихлорметана-этилацетата в объемном соотношении 1:1, сушили на воздухе, распыляли 2% раствор ванилина в серной кислоте и нагревали при 105°C до появления четких пятен; на хроматограмме тестируемого раствора появлялись пятна того же цвета в тех же местах, что и на хроматограмме контрольного раствора;

(3) 3 г гранул композиции традиционной китайской медицины растворяли в 40 мл воды, трижды экстрагировали н-бутанолом (каждый раз по 20 мл), объединяли растворы экстракта (каждый раз по 20 мл), экстрагированные н-бутанолом, выпаривали досуха и растворяли остаток в 1 мл метанола для получения раствора образца; брали еще 1 г контрольного образца Citri reticulatae pericarpium, добавляли 40 мл воды для кипячения с обратным холодильником в течение 1 часа, охлаждали, фильтровали, трижды экстрагировали н-бутанолом (каждый раз по 20 мл), объединяли н-бутанольные экстракты (каждый раз по 20 мл), выпаривали досуха и растворяли остаток в 1 мл метанола для получения контрольного раствора; проводили эксперимент с использованием тонкослойной хроматографии, отбирали 2-5 мкл тестируемого раствора и 5 мкл контрольного раствора, соответственно наносили капли на тонкослойную пластину силикагеля G и проявляли с помощью смеси этилацетата-муравьиной кислоты-ледяной уксусной кислоты-воды в объемном соотношении 15:1:1:2 в качестве проявляющего агента, вынимали, сушили на воздухе, распыляли 10% раствора серной кислоты в этаноле, нагревали при 105°C до появления четких пятен и осматривали под ультрафиолетовой лампой при 365 нм; на хроматограмме тестируемого раствора появлялись пятна того же цвета в тех же местах, что и на хроматограмме контрольного раствора;

(4) 6 г гранул композиции традиционной китайской медицины измельчали, добавляли 40 мл этилацетата, проводили ультразвуковую обработку в течение 30 минут, фильтровали, выпаривали фильтрат досуха и добавляли к остатку 1 мл метанола для получения тестируемого раствора; брали дополнительное количества магнолола и добавляли метанол для получения смешанного раствора, содержащего 1 мг на 1 мл, в качестве контрольного раствора; проводили эксперимент с использованием тонкослойной хроматографии, отбирали 10-15 мкл тестируемого раствора и 5 мкл контрольного раствора, соответственно наносили капли на одну и ту же тонкослойную пластину силикагеля G и проявляли с помощью смеси толуола-этилацетата-метанола в объемном соотношении 18:3:1 в качестве проявляющего агента, вынимали, сушили на воздухе, распыляли 1% раствора ванилина в серной кислоте, нагревали при 105°C до появления четких пятен; на хроматограмме тестируемого раствора появлялись пятна того же цвета в тех же местах, что и на хроматограмме контрольного раствора.

Тонкослойные хроматограммы тестируемого образца и контрольного образца показаны на фиг. 1-4.

Пример 7

Содержание гранул композиции традиционной китайской медицины, полученной в примере 4, измеряли с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии следующим образом:

условия хроматографирования и тест применимости системы: в качестве наполнителя использовали октадецилсилан, химически привитый на силикагель; в качестве подвижной фазы использовали смесь ацетонитрила и 0,1% раствора фосфорной кислоты (19:81); длина волны детектирования составляла 283 нм. Количество теоретических тарелок должно было составлять не менее 2000 при расчете по пику гесперидина.

Приготовление контрольного раствора: точно взвешивали надлежащее количество контрольного образца гесперидина и добавляли метанол для получения раствора, содержащего 50 мкг на 1 мл.

Приготовление тестируемого раствора: брали гранулы, полученные в примере 4, смешивали до однородности, измельчали, брали точно взвешенное количество 0,3 г, помещали в коническую колбу с пробкой, добавляли точно 50 мл метанола, закрывали пробкой, взвешивали, подвергали ультразвуковой обработке (мощностью 500 Вт и частотой 40 кГц) в течение 30 минут, охлаждали, повторно взвешивали, восполняли потерянную массу метанолом, равномерно встряхивали, фильтровали и брали полученный фильтрат.

Метод определения: отбирали точно 10 мкл контрольного раствора и раствора образца, соответственно, вводили в жидкостной хроматограф для измерения.

Для определения содержания гесперидина высокоэффективная жидкостная хроматограмма тестируемого образца композиции традиционной китайской медицины показана на фиг. 5; высокоэффективная жидкостная хроматограмма контрольного раствора показана на фиг. 6.

Сравнительный пример 1

Композицию традиционной китайской медицины получали в соответствии со следующим сырьем, в частях по массе: 375 г Citri reticulatae pericarpium, 187,5 г Atractylodis rhizoma, 187,5 г Magnoliae officinalis cortex, 281,3 г Glycyrrhizae radix et rhizoma, 281,3 г Agastache rugosus, 281,3 г Acori tatarinowii rhizoma. Сырье взвешивали в частях по массе, добавляли к нему 15-кратное количество воды, в частях по массе, замачивали на 0,5 часа, дважды отваривали для экстрагирования, каждый раз по 0,5 часа, полученные отвары объединяли и фильтровали для получения раствора экстракта; раствор экстракта концентрировали при 70°C при пониженном давлении для получения концентрированного раствора с относительной плотностью 1,10-1,20 г/мл при измерении при 50°C. Концентрированный раствор сушили распылением для получения высушенного распылением порошка. К высушенному распылением порошку добавляли надлежащее количество декстрина, перемешивали и проводили влажное гранулирование.

Сравнительный пример 2

Содержание гранул композиции традиционной китайской медицины, полученной в сравнительном примере 1, измеряли с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии следующим образом:

Условия хроматографирования и тест применимости системы: в качестве наполнителя использовали октадецилсилан, химически привитый на силикагель; в качестве подвижной фазы использовали смесь ацетонитрила и 0,1% раствора фосфорной кислоты (19:81); длина волны детектирования составляла 283 нм. Количество теоретических тарелок должно было составлять не менее 2000 при расчете по пику гесперидина.

Приготовление контрольного раствора: точно взвешивали надлежащее количество контрольного образца гесперидина и добавляли метанол для получения раствора, содержащего 50 мкг на 1 мл.

Приготовление тестируемого раствора: брали гранулы, полученные в сравнительном примере 1, смешивали до однородности, измельчали, брали точно взвешенное количество 0,3 г, помещали в коническую колбу с пробкой, добавляли точно 50 мл метанола, закрывали пробкой, взвешивали, подвергали ультразвуковой обработке (мощностью 500 Вт и частотой 40 кГц) в течение 30 минут, охлаждали, повторно взвешивали, восполняли потерянную массу метанолом, равномерно встряхивали, фильтровали и брали полученный фильтрат.

Метод определения: отбирали точно 10 мкл контрольного раствора и раствора образца, соответственно, вводили в жидкостной хроматограф для измерения.

Сравнительный пример 3

Взвешивали следующее сырье, в частях по массе: 7,5 г Citri reticulatae pericarpium, 3,75 г Atractylodis rhizoma, 3,75 г Magnoliae officinalis cortex, 5,625 г Glycyrrhizae radix et rhizoma, 5,625 г Agastache rugosus, 5,625 г Acori tatarinowii rhizome, 1 таблетку Jujubae fructus и три таблетки Zingiberis rhizoma recens, где таблетки Jujubae fructus и Zingiberis rhizoma recens отваривали с первыми 6 компонентами по отдельности для приготовления отвара.

Результаты в отношении содержания и степени переноса гесперидина были следующими:

Таблица 0001 Содержание гесперидина в сырье
по фактическим измерениям (мг/г) Степень переноса гесперидина
(%) Пример 7 46,95 48,77% Сравнительный пример 2 46,95 40,34%

Результаты теста показали, что содержание и степень переноса эффективного ингредиента гесперидина в примере 7 были, очевидно, выше, чем в сравнительном примере 2. Причиной может быть то, что стабильность гесперидина в воде может быть повышена посредством Jujubae fructus и Zingiberis rhizoma recens.

Испытание на токсичность

Содержание и процедуры, связанные с экспериментами на животных в данном эксперименте, полностью соответствуют соответствующим законам и правилам использования подопытных животных и их содержания и соответствующим положениям Комиссии по контролю содержания и использования лабораторных животных (IACUC).

Материалы и методы: в эксперименте 40 здоровых крыс SD были случайным образом разделены на 4 группы, а именно, контрольную группу, получавшую растворитель, и группы низкой, средней и высокой дозы композиции традиционной китайской медицины согласно настоящему изобретению, по 10 животных в каждой группе, половина самцов и половина самок. Крысам в каждой группе осуществляли введение 3 раза с интервалом более 4 часов с объемом введения 20 мл/кг/раз, и вводили контроль растворителем (чистая вода) или различные концентрации композиции традиционной китайской медицины через желудочный зонд. При этом вводимые дозы для групп низкой, средней и высокой дозы композиции традиционной китайской медицины согласно настоящему изобретению составляли соответственно 3, 9 и 37,5 г экстракта/кг. Наблюдение продолжали в течение 14 дней после введения, день первого введения определяли как первый день эксперимента. В течение периода испытания общее состояние крыс SD в каждой группе контролировали ежедневно, массу тела измеряли на 1-й, 4-й, 8-й и 14-й дни эксперимента, потребление пищи измеряли на 2-й, 5-й, 8-й и 12-й дни эксперимента, а на 15-й день эксперимента крыс в каждой группе умерщвляли, как планировалось, и проводили патологоанатомическое исследование.

Результаты: (1) общее состояние: в первый день испытания самки и самцы крыс в группе высокой дозы имели мягкий стул, а цвет мочи был аномально светло-зеленым; вышеуказанные симптомы исчезли со второго дня испытания, а общее функционирование, поведенческая активность, респираторный статус, пять органов чувств, поверхность тела, кал, моча и гениталии крыс в каждой группе не имели очевидных патологий, и животные не умирали в течение периода испытания. (2) Масса тела и потребление пищи: в течение периода испытания не наблюдалось явных патологических изменений массы тела и потребления пищи крысами в каждой группе. (3) Патологоанатомическое исследование: на 15-й день эксперимента цвет, форма, размер и структура основных органов или тканей, таких как сердце, печень, селезенка, легкие, почки, тимус крыс в каждой группе не демонстрировали очевидных патологических изменений.

Вывод: в условиях испытания крысам SD перорально вводили 3, 9 и 37,5 г экстракта/кг композиции традиционной китайской медицины согласно настоящему изобретению в однократной дозе с максимальной переносимой дозой (МПД) 37,5 г экстракта/кг, что эквивалентно 168,5 г чистого лекарственного средства/кг.

Клинические исследования

Композицию китайской медицины, полученную в примере 1, использовали для клинического исследования:

(1) Субъекты: пациенты, инфицированные коронавирусной инфекцией 2019 года (положительный тест на нуклеиновую кислоту) в больнице традиционной китайской медицины Даньцзянкоу в возрасте 13-54 лет. Эти пациенты имели лихорадку (температура тела составляла 38°C или более) и кашель. Обычный анализ крови показал, что общее количество лейкоцитов и лимфоцитов уменьшилось, а легкие демонстрировали разную степень тени «матового стекла» и другие симптомы.

(2) Лечение: два раза в сутки, один раз утром и один раз вечером, каждый раз по 200 мл, в течение 3 дней.

(3) Критерии диагностики излечения или ремиссии были следующими:

1. количество лейкоцитов и лимфоцитов вернулось к норме;

2. тень «матового стекла» в легком пациента рассосалась и рассеялась;

3. тест на нуклеиновую кислоту коронавирусной инфекции 2019 года методом ОТ-ПЦР в реальном времени с флуоресцентной детекцией стал отрицательным;

4. отсутствуют другие органические поражения.

Типичные клинические случаи

1. Г-жа Го, исходные данные: 29-летняя женщина, работавшая на территории, подверженной эпидемии. Симптомы: лихорадка, кашель, мокрота, астения и плохой аппетит. Визуализирующее обследование: инфицированы нижняя доля левого легкого, средняя доля правого легкого, язычковый сегмент верхней доли левого легкого и нижняя доля правого легкого. Этиологическое обследование: тест на нуклеиновую кислоту коронавирусной инфекции 2019 года был положительным. После применения для лечения композиции традиционной китайской медицины, раскрытой в настоящем изобретении, лихорадка исчезла, кашель и мокрота были облегчены, а астения и плохой аппетит были ослаблены; воспаление в легких рассосалось; тест на нуклеиновую кислоту коронавирусной инфекции 2019 года был отрицательным, и никакой другой нежелательной реакции не было обнаружено в течение периода наблюдения.

Г-н Шен, исходные данные: 25-летний мужчина. Симптомы: лихорадка, болезненность тела, плохой аппетит и астения. Визуализирующее обследование: инфицирована нижняя доля правого легкого. Этиологическое исследование: тест на нуклеиновую кислоту коронавирусной инфекции 2019 года был положительным; после применения для лечения композиции традиционной китайской медицины, раскрытой в настоящем изобретении, лихорадка исчезла, болезненность тела исчезла, астения и плохой аппетит были ослаблены; воспаление в легких рассосалось; тест на нуклеиновую кислоту коронавирусной инфекции 2019 года был отрицательным, и никакой другой нежелательной реакции не было обнаружено в течение периода наблюдения.

Эксперимент по оценке эффективности композиции традиционной китайской медицины in vitro:

Изучен ингибирующий эффект экстракта традиционной китайской медицины на линию клеток HEK293, стабильно экспрессирующую рецептор ACE2, инфицированную псевдовирусом COVID-19.

1. Приготовление тестируемого образца и лекарственного препарата:

Тестируемый образец: 16 г желтовато-коричневого порошка экстракта композиции традиционной китайской медицины согласно настоящему изобретению (экстракт согласно примеру 4); содержание гесперидина: 13,12 мг/г; источник: Beijing Han Dian pharmaceutical Co., Ltd.

Приготовление лекарственного препарата: 20 мг порошка экстракта традиционной китайской медицины взвешивали, добавляли 1 мл ДМСО и равномерно перемешивали для получения 20 мг/мл исходного раствора.

Отбирали 100 мкл исходного раствора и добавляли 3900 мкл среды DMEM для приготовления раствора с концентрацией 5 мг/мл. 400 мкл раствора концентрацией 0,5 мг/мл добавляли к 600 мкл среды DMEM для приготовления раствора с концентрацией 0,2 мг/мл. 500 мкл раствора концентрацией 0,2 мг/мл добавляли к 500 мкл среды DMEM для приготовления раствора концентрацией 0,1 мг/мл. Отбирали 500 мкл раствора концентрацией 0,1 мг/мл и добавляли 500 мкл среды DMEM для приготовления раствора с концентрацией 0,05 мг/мл. 500 мкл раствора концентрацией 0,05 мг/мл добавляли к 500 мкл среды DMEM для приготовления раствора с концентрацией 0,025 мг/мл.

2. Приготовление образца и лекарственного препарата положительного контроля:

Образец положительного контроля: хлорохина фосфат, порошок белого или светло-желтого цвета; 5 г; источник: Bide Pharmaceutical company; номер товара: BD263139-5 г; номер партии: BNA 684.

Приготовление лекарственного препарата: взвешивали 2,24 мг хлорохина фосфата, добавляли 1,085 мл DMEM и равномерно перемешивали для получения исходного раствора с концентрацией 4 мМ; брали 400 мкл исходного раствора и добавляли 3900 мкл клеточной среды DMEM для приготовления раствора с концентрацией 100 мкМ.

3. Клетки для теста

Название или код: линия клеток HEK293, стабильно экспрессирующая рецептор ACE2;

Источник вида: клетки эмбриональных почек человека; источник ткани: нормальные клетки почек; характеристики роста: адгезивный рост;

Культуральная среда: среда DMEM, 90%; FBS, 10%;

4. Рекомбинантный коронавирус для теста

Название: псевдовирус COVID-19

Источник: Guangzhou Paizhen Biotechnology Co. Ltd

Номер партии: LV-nCov1-2

Приготовление: линии клеток млекопитающих, совместно трансфицированные несколькими плазмидами, использовали для получения псевдовируса с использованием вектора на основе лентивирусной системы, и генерировали инфекционные псевдовирусные частицы, обернутые капсидными белками или оболочечными белками псевдовируса. Функция: рекомбинантный коронавирус может быть использован для обнаружения способности тестируемого образца устранять инвазию псевдовируса, и должен эксплуатироваться в лаборатории с уровнем биологической безопасности II.

5. Метод тестирования:

D1, брали клетки HEK293-ACE2 в логарифмической фазе роста, доводили концентрацию клеток до 6,25×10⁴ клеток/мл, добавляли клетки в колонки 2-7, 9, ряды B-D 96-луночных планшетов в количестве 5000/лунка/80 мкл и добавляли в колонку 8, ряды B-D 96-луночных планшетов с 80 мкл свежеприготовленной среды DMEM, культивировали в течение ночи при 37°C, 5% CO₂.

D2, в колонки 2-6 ряды B-D последовательно добавляли 10 мкл тестируемого образца с концентрациями 50 мкг/мл, 20 мкг/мл, 10 мкг/мл, 5 мкг/мл и 2,5 мкг/мл, и одновременно добавляли 10 мкл жидкости псевдовируса в качестве группы тестируемого образца; в колонку 7, ряды B-D добавляли 10 мкл хлорохина фосфата и одновременно добавляли 10 мкл жидкости псевдовируса в качестве группы положительного контроля; в группу холостого контроля (колонка 8, ряды B-D) добавляли 20 мкл среды; в группу отрицательного контроля (колонка 9, ряды B-D) добавляли 10 мкл раствора псевдовируса и 10 мкл контроля растворителем, содержащего 0,25% ДМСО. Клетки инкубировали при 37°C, 5% CO₂ в течение 48 часов, добавляли 40 мкл 1×репортерного буфера для лизиса, помещали при -80°C на 2 часа, центрифугировали при 4000 об/мин после повторного размораживания в течение 5 минут, отбирали 20 мкл супернатанта в 96-луночный белый стандартный планшет с ферментом, добавляли 100 мкл реагента для анализа люциферазы для обнаружения активности люциферазы (RLU, где высокое RLU означает, что клетки были инфицировны бóльшим количеством псевдовируса). Схема планшета была следующей:

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 A 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 B 0 HEK293+ лекарственный препарат-1+ вирус HEK293+ лекарственный препарат-2+ вирус HEK293+ лекарственный препарат-3+ вирус HEK293+ лекарственный препарат-4+ вирус HEK293+ лекарственный препарат-5+ вирус HEK293+ хлорохина фосфат+ вирус Среда HEK293+ вирус+ ДМСО 0 0 0 C 0 0 0 0 D 0 0 0 0 E 0 0 0 0 F 0 0 0 0 G 0 0 0 0 H 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0

Результаты показали, что значение RLU/RLUc в группе положительного контроля (отношение значения флуоресценции в экспериментальной группе к средней интенсивности флуоресценции в группе отрицательного контроля) составило 0,05±0,01, а отношение RLU/RLUc в тестируемом образце составило 0,14±0,04, 0,09 ± 0,03, 0,14 ± 0,04, 0,11 ± 0,01 и 0,17±0,14, что соответствует концентрации от высокой до низкой (50 мкг/мл, 20 мкг/мл, 10 мкг/мл, 5 мкг/мл и 2,5 мкг/мл), через 48 ч после введения; по сравнению с группой отрицательного контроля отношение RLU/RLUc в группе тестируемого образца с различными дозами значимо отличалось от такового в группе положительного контроля (***P<0,001; **P<0,01). На фиг. 7 показан ингибирующий эффект традиционных китайских растительных экстрактов на клетки HEK293-ACE2, инфицированные псевдовирусом COVID-19.

Тест показал, следующее: как следует из вышеприведенных результатов, в условиях тестирования степень ингибирования экстрактом традиционной китайской медицины псевдовируса COVID-19 может достигать более 50% при концентрации экстракта традиционной китайской медицины 2,5 мкг/мл-50 мкг/мл, что показало, что экстракт традиционной китайской медицины H157 оказывал хороший ингибирующий эффект на линию клеток HEK293, стабильно экспрессирующую рецептор ACE2, инфицированную псевдовирусом COVID-19.

Клинический терапевтический эффект композиции традиционной китайской медицины, раскрытой в настоящем изобретении, на состояние, вызванное холодом и сыростью (а именно, вирусную пневмонию), был следующим:

Композицию традиционной китайской медицины согласно настоящему изобретению использовали для клинических исследований:

Субъекты были следующими: пациенты из больницы традиционной китайской медицины Даньцзянкоу.

Случай 1: Чен, 13 лет, отчет о диагностической визуализации до лечения показал следующее: верхняя, средняя и нижняя доли правого легкого имели множественные пятнистые слои с тенями с увеличенной плотностью, а некоторые демонстрировали изменения в виде «матового стекла»; тест на COVID-19 был отрицательным. Диагноз: правое легкое инфицировано вирусом, рассмотрена вирусная пневмония. После применения для лечения композиции традиционной китайской медицины, раскрытой в настоящем изобретении, диагностическая визуализация показала следующее: инфекционное поражение правого легкого рассосалось до состояния лучше, чем до введения.

Случай 2: Ван, 32 года, отчет о диагностической визуализации до лечения показал следующее: верхняя доля правого легкого и нижняя доля левого легкого имели множественные пятнистые слои и демонстрировали пятна «матового стекла» с тенями с увеличенной плотностью, некоторые очаги характеризовались консолидацией, и в области консолидации наблюдались признаки бронхиол, содержащих газ, особенно в верхней доле правого легкого; тест на COVID-19 был отрицательным. Диагноз: инфекционные поражения наблюдались в верхней доле правого легкого и нижней доле левого легкого, сначала рассматривалась вирусная пневмония. После применения для лечения композиции традиционной китайской медицины, раскрытой в настоящем изобретении, диагностическая визуализация показала следующее: инфекционные поражения в верхней доле правого легкого и нижней доле левого легкого рассосались до состояния лучше, чем до введения.

Случай 3: Се, 54 года, отчет о диагностической визуализации до лечения показал следующее: верхняя доля правого легкого имела пятнистые слои с тенями с увеличенной плотностью, край был размыт, в нем можно было наблюдать признаки бронхиол, содержащих газ; тест на COVID-19 был отрицательным. Диагноз: инфекционные поражения наблюдались в нижней доле правого легкого. После применения для лечения композиции традиционной китайской медицины, раскрытой в настоящем изобретении, диагностическая визуализация показала следующее: инфекционные поражения в нижней доле правого легкого рассосались до состояния лучше, чем до введения. Был рекомендован повторный осмотр.

Случай 4: 17-летний мужчина был госпитализирован после 3 дней лихорадки, симптомы: лихорадка, озноб, сухой кашель, боль в горле, болезненность всего тела и потливость. Визуализирующее обследование: инфицирована нижняя доля правого легкого, возможна вирусная пневмония. Обследование на патогены: тест на COVID-19 был отрицательным. После применения для лечения композиции традиционной китайской медицины лихорадка исчезла, озноб исчез, кашель был облегчен, и воспаление легких рассосалось.

Случай 5: 41-летний мужчина, был госпитализирован после кашля и отхаркивания в течение полумесяца, симптомы: кашель и отхаркивание. Визуализирующее обследование: инфицирована верхняя доля правого легкого, возможна вирусная пневмония. Обследование на патогены: тест на COVID-19 был отрицательным. После применения для лечения в течение 14 дней композиции традиционной китайской медицины кашель и отхаркивание исчезли, а воспаление легких рассосалось. Эффект лечения был выдающимся.

Случай 6: 19-летний мужчина был госпитализирован после лихорадки с одышкой и головокружением в течение 2 дней. Симптомы: лихорадка, утомление, головокружение, боль в горле и кашель. Визуализирующее обследование: наблюдались инфекционные заболевания в обоих легких, высокая вероятность вирусной пневмонии. Обследование на патогены: тест на COVID-19 был отрицательным. После применения для лечения в течение 3 дней композиции традиционной китайской медицины лихорадка исчезла, кашель и отхаркивание были облегчены, утомление и плохой аппетит были ослаблены, воспаление легких рассосалось, и эффект лечения был выдающимся.

Случай 7: 30-летняя женщина была госпитализирована после 3 дней кашля с отхаркиванием, симптомы: кашель, отхаркивание и сухость в горле. Визуализирующее обследование: инфицирована нижняя доля правого легкого, возможна вирусная пневмония. Обследование на патогены: тест на COVID-19 был отрицательным. После применения для лечения в течение 4 дней композиции традиционной китайской медицины кашель и отхаркивание уменьшились, сухость в горле была ослаблена, воспаление легких рассосалось, и эффект лечения был выдающимся.

Случай 8: 23-летний мужчина был госпитализирован с перемежающейся лихорадкой в течение 5 дней, симптомы: лихорадка, озноб, кашель, плохой аппетит и плохой сон. Визуализирующее обследование: инфицирована нижняя доля левого легкого, возможна вирусная пневмония. Обследование на патогены: тест на COVID-19 был отрицательным. После применения для лечения в течение 7 дней композиции традиционной китайской медицины лихорадка и озноб исчезли, кашель был ослаблен, воспаление легких рассосалось, и эффект лечения был выдающимся.

Случай 9: 31-летний мужчина был госпитализирован после лихорадки в течение 15 дней, сдавленности и боли в груди в течение 7 дней, симптомы: головная боль, плохой аппетит и утомление. Визуализирующее обследование: в обоих легких имела место множественная инфекция, возможна вирусная пневмония. Обследование на патогены: тест на COVID-19 был отрицательным. После применения для лечения в течение 6 дней композиции традиционной китайской медицины головная боль исчезла, усталость и плохой аппетит были ослаблены, воспаление легких рассосалось, и эффект лечения был очевиден.

Композиция традиционной китайской медицины согласно изобретению может эффективно облегчать или лечить вирусную пневмонию, и после лечения результаты визуализации грудной клетки пациента показали рассасывание воспаления, так что функция легких была восстановлена.

Наконец, следует отметить, что вышеприведенные примеры использованы только для иллюстрации технических решений согласно настоящему изобретению, а не для их ограничения; хотя настоящее изобретение было подробно описано со ссылкой на вышеприведенные примеры, специалистам в данной области техники будет ясно, что технические решения, описанные в вышеприведенных примерах, тем не менее, могут быть модифицированы, или некоторые или все технические признаки могут быть заменены эквивалентами; такие модификации или замены не выходят за рамки вариантов осуществления настоящего изобретения в рамках сущности соответствующих технических решений.

Группа изобретений относится к фармацевтической промышленности, а именно к средствам для лечения коронавирусной инфекции 2019 года (COVID-19). Предложена композиция традиционной китайской медицины для лечения коронавирусной инфекции 2019 года (COVID-19), где композиция традиционной китайской медицины в основном получена из следующего сырья, в частях по массе: 250-400 частей Citri reticulatae pericarpium, 100-200 частей Atractylodis rhizoma, 100-200 частей Magnoliae officinalis cortex, 200-300 частей Glycyrrhizae radix et rhizoma, 200-300 частей Agastache rugosus, 200-300 частей Acori tatarinowii rhizoma, 250-330 частей Jujubae fructus и 100-200 частей Zingiberis rhizoma recens; причем способ получения указанной композиции традиционной китайской медицины включает следующие стадии: взвешивание сырья в частях по массе, добавление воды и затем отваривание на медленном огне с получением отвара. Предложена композиция традиционной китайской медицины для лечения коронавирусной инфекции 2019 года (COVID-19), где композиция традиционной китайской медицины в основном получена из следующего сырья, в частях по массе: 250-400 частей Citri reticulatae pericarpium, 100-200 частей Atractylodis rhizoma, 100-200 частей Magnoliae officinalis cortex, 200-300 частей Glycyrrhizae radix et rhizoma, 200-300 частей Agastache rugosus, 200-300 частей Acori tatarinowii rhizoma, 250-330 частей Jujubae fructus и 100-200 частей Zingiberis rhizoma recens, причем способ получения указанной композиции традиционной китайской медицины включает следующие стадии: (1) взвешивание сырья в соответствии с частями по массе; (2) добавление 15-кратной массы воды, замачивание на 0,5 часа, двукратное отваривание для экстрагирования, каждый раз по 0,5 часа, смешивание отваров, полученных с помощью отваривания, и фильтрование для получения раствора экстракта для последующего использования; (3) концентрирование раствора экстракта со стадии (2) при 70°С при пониженном давлении до концентрированного раствора с относительной плотностью 1,10-1,20 г/мл при измерении при 50°С; (4) взятие концентрированного раствора, полученного на стадии (3), и сушку распылением для получения высушенного распылением порошка; и (5) смешивание высушенного распылением порошка, полученного на стадии (4), с декстрином и влажное гранулирование. Предложена композиция традиционной китайской медицины для лечения коронавирусной инфекции 2019 года (COVID-19), где композиция традиционной китайской медицины в основном получена из следующего сырья, в частях по массе: 250-400 частей Citri reticulatae pericarpium, 100-200 частей Atractylodis rhizoma, 100-200 частей Magnoliae officinalis cortex, 200-300 частей Glycyrrhizae radix et rhizoma, 200-300 частей Agastache rugosus, 200-300 частей Acori tatarinowii rhizoma, 250-330 частей Jujubae fructus и 100-200 частей Zingiberis rhizoma recens, причем способ получения композиции традиционной китайской медицины включает следующие стадии: экстрагирование сырья в частях по массе методом паровой дистилляции и сбор эфирных масел; фильтрование отвара для получения раствора экстракта; концентрирование раствора экстракта при пониженном давлении и сушку распылением для получения высушенного распылением порошка; добавление безводного раствора этанола в эфирные масла и включение в водный раствор β-циклодекстрина для получения соединения включения циклодекстрина; смешивание высушенного распылением порошка, соединения включения циклодекстрина и связующего и проведение влажного гранулирования; методом паровой дистилляции экстрагирование эфирного масла путем добавления 8-15-кратного количества воды 2-3 раза и смешивание полученных в каждом случае растворов экстракта для следующей стадии; в водном растворе β-циклодекстрина масса β-циклодекстрина в 8-12 раз превышает массу эфирного масла, а масса воды в 10-20 раз превышает массу β-циклодекстрина. Способ получения вышеописанной композиции традиционной китайской медицины включает следующие стадии: (1) взвешивание сырья в соответствии с частями по массе; (2) добавление 15-кратной массы воды, замачивание на 0,5 часа, двукратное отваривание для экстрагирования, каждый раз по 0,5 часа, смешивание отваров, полученных с помощью отваривания, и фильтрование для получения раствора экстракта для последующего использования; (3) концентрирование раствора экстракта со стадии (2) при 70°С при пониженном давлении до концентрированного раствора с относительной плотностью 1,10-1,20 г/мл при измерении при 50°С; (4) взятие концентрированного раствора, полученного на стадии (3), и сушку распылением для получения высушенного распылением порошка; и (5) смешивание высушенного распылением порошка, полученного на стадии (4), с декстрином и влажное гранулирование. Способ получения вышеописанной композиции традиционной китайской медицины включает следующие стадии: экстрагирование сырья в частях по массе методом паровой дистилляции и сбор эфирного масла; фильтрование отвара для получения раствора экстракта; концентрирование раствора экстракта при пониженном давлении и сушку распылением для получения высушенного распылением порошка; добавление безводного раствора этанола в эфирное масло и включение в водный раствор β-циклодекстрина для получения соединения включения циклодекстрина; смешивание высушенного распылением порошка и соединения включения циклодекстрина со связующим и влажное гранулирование; где методом паровой дистилляции эфирное масло экстрагируют путем добавления 8-15-кратного количества воды 2-3 раза и смешивают полученные в каждом случае растворы экстракта для следующей стадии; и в водном растворе β-циклодекстрина масса β-циклодекстрина в 8-12 раз превышает массу эфирного масла, а масса воды в 10-20 раз превышает массу β-циклодекстрина. Способ определения вышеописанной композиции традиционной китайской медицины включает качественную идентификацию гесперидина, 6-гингерола, Glycyrrhizae radix et rhizoma и хонокиола с помощью тонкослойной хроматографии. Предложено также применение композиции традиционной китайской медицины по любому из пп. 1-13 для получения лекарственного средства для лечения коронавирусной инфекции 2019 года (COVID-19). Вышеописанные композиции и способы являются эффективными для лечения коронавирусной инфекции 2019 года (COVID-19). 7 н. и 11 з.п. ф-лы, 7 ил., 1 табл., 7 пр.

1. Композиция традиционной китайской медицины для лечения коронавирусной инфекции 2019 года (COVID-19), где композиция традиционной китайской медицины в основном получена из следующего сырья, в частях по массе: 250-400 частей Citri reticulatae pericarpium, 100-200 частей Atractylodis rhizoma, 100-200 частей Magnoliae officinalis cortex, 200-300 частей Glycyrrhizae radix et rhizoma, 200-300 частей Agastache rugosus, 200-300 частей Acori tatarinowii rhizoma, 250-330 частей Jujubae fructus и 100-200 частей Zingiberis rhizoma recens;

причем способ получения указанной композиции традиционной китайской медицины включает следующие стадии: взвешивание сырья в частях по массе, добавление воды и затем отваривание на медленном огне с получением отвара.

2. Композиция традиционной китайской медицины по п. 1, которая в основном получена из следующего сырья, в частях по массе: 270-350 частей Citri reticulatae pericarpium, 130-175 частей Atractylodis rhizoma, 130-175 частей Magnoliae officinalis cortex, 200-260 частей Glycyrrhizae radix et rhizoma, 200-260 частей Agastache rugosus, 200-260 частей Acori tatarinowii rhizoma, 280-330 частей Jujubae fructus и 150-180 частей Zingiberis rhizoma recens.

3. Композиция традиционной китайской медицины по п. 1, которая в основном получена из следующего сырья, в частях по массе: 340,9 частей Citri reticulatae pericarpium, 170,5 частей Atractylodis rhizoma, 170,5 частей Magnoliae officinalis cortex, 255,7 частей Glycyrrhizae radix et rhizoma, 255,7 частей Agastache rugosus, 255,7 частей Acori tatarinowii rhizoma, 318,2 частей Jujubae fructus и 163,6 частей Zingiberis rhizoma recens.

4. Композиция традиционной китайской медицины по п. 1, которая дополнительно содержит 500-700 частей по массе вспомогательных веществ; где вспомогательное вещество представляет собой наполнитель; и указанный наполнитель представляет собой декстрин, растворимый крахмал или лактозу.

5. Композиция традиционной китайской медицины для лечения коронавирусной инфекции 2019 года (COVID-19), где композиция традиционной китайской медицины в основном получена из следующего сырья, в частях по массе: 250-400 частей Citri reticulatae pericarpium, 100-200 частей Atractylodis rhizoma, 100-200 частей Magnoliae officinalis cortex, 200-300 частей Glycyrrhizae radix et rhizoma, 200-300 частей Agastache rugosus, 200-300 частей Acori tatarinowii rhizoma, 250-330 частей Jujubae fructus и 100-200 частей Zingiberis rhizoma recens,

причем способ получения указанной композиции традиционной китайской медицины включает следующие стадии:

(1) взвешивание сырья в соответствии с частями по массе;

(2) добавление 15-кратной массы воды, замачивание на 0,5 часа, двукратное отваривание для экстрагирования, каждый раз по 0,5 часа, смешивание отваров, полученных с помощью отваривания, и фильтрование для получения раствора экстракта для последующего использования;

(3) концентрирование раствора экстракта со стадии (2) при 70°С при пониженном давлении до концентрированного раствора с относительной плотностью 1,10-1,20 г/мл при измерении при 50°С;

(4) взятие концентрированного раствора, полученного на стадии (3), и сушку распылением для получения высушенного распылением порошка; и

(5) смешивание высушенного распылением порошка, полученного на стадии (4), с декстрином и влажное гранулирование.

6. Композиция традиционной китайской медицины по п. 5, которая в основном получена из следующего сырья, в частях по массе: 270-350 частей Citri reticulatae pericarpium, 130-175 частей Atractylodis rhizoma, 130-175 частей Magnoliae officinalis cortex, 200-260 частей Glycyrrhizae radix et rhizoma, 200-260 частей Agastache rugosus, 200-260 частей Acori tatarinowii rhizoma, 280-330 частей Jujubae fructus и 150-180 частей Zingiberis rhizoma recens.

7. Композиция традиционной китайской медицины по п. 5, которая в основном получена из следующего сырья, в частях по массе: 340,9 частей Citri reticulatae pericarpium, 170,5 частей Atractylodis rhizoma, 170,5 частей Magnoliae officinalis cortex, 255,7 частей Glycyrrhizae radix et rhizoma, 255,7 частей Agastache rugosus, 255,7 частей Acori tatarinowii rhizoma, 318,2 частей Jujubae fructus и 163,6 частей Zingiberis rhizoma recens.

8. Композиция традиционной китайской медицины по п. 5, которая дополнительно содержит 500-700 частей по массе вспомогательных веществ; где вспомогательное вещество представляет собой наполнитель; и наполнитель представляет собой декстрин, растворимый крахмал или лактозу.

9. Композиция традиционной китайской медицины для лечения коронавирусной инфекции 2019 года (COVID-19), где композиция традиционной китайской медицины в основном получена из следующего сырья, в частях по массе: 250-400 частей Citri reticulatae pericarpium, 100-200 частей Atractylodis rhizoma, 100-200 частей Magnoliae officinalis cortex, 200-300 частей Glycyrrhizae radix et rhizoma, 200-300 частей Agastache rugosus, 200-300 частей Acori tatarinowii rhizoma, 250-330 частей Jujubae fructus и 100-200 частей Zingiberis rhizoma recens,

причем способ получения композиции традиционной китайской медицины включает следующие стадии:

экстрагирование сырья в частях по массе методом паровой дистилляции и сбор эфирных масел;

фильтрование отвара для получения раствора экстракта; концентрирование раствора экстракта при пониженном давлении и сушка распылением для получения высушенного распылением порошка;

добавление безводного раствора этанола в эфирные масла и включение в водный раствор β-циклодекстрина для получения соединения включения циклодекстрина;

смешивание высушенного распылением порошка, соединения включения циклодекстрина и связующего и проведение влажного гранулирования;

где методом паровой дистилляции эфирное масло экстрагируют путем добавления 8-15-кратного количества воды 2-3 раза и смешивают полученные в каждом случае растворы экстракта для следующей стадии;

в водном растворе β-циклодекстрина масса β-циклодекстрина в 8-12 раз превышает массу эфирного масла, а масса воды в 10-20 раз превышает массу β-циклодекстрина.

10. Композиция традиционной китайской медицины по п. 9, которая в основном получена из следующего сырья, в частях по массе: 270-350 частей Citri reticulatae pericarpium, 130-175 частей Atractylodis rhizoma, 130-175 частей Magnoliae officinalis cortex, 200-260 частей Glycyrrhizae radix et rhizoma, 200-260 частей Agastache rugosus, 200-260 частей Acori tatarinowii rhizoma, 280-330 частей Jujubae fructus и 150-180 частей Zingiberis rhizoma recens.

11. Композиция традиционной китайской медицины по п. 9, которая в основном получена из следующего сырья, в частях по массе: 340,9 частей Citri reticulatae pericarpium, 170,5 частей Atractylodis rhizoma, 170,5 частей Magnoliae officinalis cortex, 255,7 частей Glycyrrhizae radix et rhizoma, 255,7 частей Agastache rugosus, 255,7 частей Acori tatarinowii rhizoma, 318,2 частей Jujubae fructus и 163,6 частей Zingiberis rhizoma recens.

12. Композиция традиционной китайской медицины по п. 9, которая дополнительно содержит 500-700 частей по массе вспомогательных веществ; где вспомогательное вещество представляет собой наполнитель; и наполнитель представляет собой декстрин, растворимый крахмал или лактозу.

13. Композиция традиционной китайской медицины по п. 9, где масса β-циклодекстрина в 10 раз превышает массу эфирного масла, а масса воды в 15 раз превышает массу β-циклодекстрина.

14. Способ получения композиции традиционной китайской медицины по любому из пп. 5-8, который включает следующие стадии:

(1) взвешивание сырья в соответствии с частями по массе;

(2) добавление 15-кратной массы воды, замачивание на 0,5 часа, двукратное отваривание для экстрагирования, каждый раз по 0,5 часа, смешивание отваров, полученных с помощью отваривания, и фильтрование для получения раствора экстракта для последующего использования;

(3) концентрирование раствора экстракта со стадии (2) при 70°С при пониженном давлении до концентрированного раствора с относительной плотностью 1,10-1,20 г/мл при измерении при 50°С;

(4) взятие концентрированного раствора, полученного на стадии (3), и сушка распылением для получения высушенного распылением порошка; и

(5) смешивание высушенного распылением порошка, полученного на стадии (4), с декстрином и влажное гранулирование.

15. Способ получения композиции традиционной китайской медицины по любому из пп. 9-12, который включает следующие стадии:

экстрагирование сырья в частях по массе методом паровой дистилляции и сбор эфирного масла;

фильтрование отвара для получения раствора экстракта; концентрирование раствора экстракта при пониженном давлении и сушка распылением для получения высушенного распылением порошка;

добавление безводного раствора этанола в эфирное масло и включение в водный раствор β-циклодекстрина для получения соединения включения циклодекстрина;

смешивание высушенного распылением порошка и соединения включения циклодекстрина со связующим и влажное гранулирование;

где методом паровой дистилляции эфирное масло экстрагируют путем добавления 8-15-кратного количества воды 2-3 раза и смешивают полученные в каждом случае растворы экстракта для следующей стадии;

и в водном растворе β-циклодекстрина масса β-циклодекстрина в 8-12 раз превышает массу эфирного масла, а масса воды в 10-20 раз превышает массу β-циклодекстрина.

16. Способ по п. 15, где масса β-циклодекстрина в 10 раз превышает массу эфирного масла, а масса воды в 15 раз превышает массу β-циклодекстрина.

17. Способ определения композиции традиционной китайской медицины по любому из пп. 1-13, который включает качественную идентификацию гесперидина, 6-гингерола, Glycyrrhizae radix et rhizoma и хонокиола с помощью тонкослойной хроматографии и определение содержания гесперидина, где качественная идентификация с помощью тонкослойной хроматографии включает следующие стадии:

(1) взятие 2 г гранулированного порошка, полученного из указанной композиции традиционной китайской медицины, добавление 25 мл воды для растворения, встряхивание и двукратное экстрагирование этилацетатом, каждый раз по 20 мл, объединение растворов экстракта, выпаривание и добавление 1 мл метанола в остатки для растворения в качестве тестируемого раствора; взятие еще одного контрольного образца гесперидина, добавление метанола для приготовления насыщенного раствора в качестве контрольного раствора; и проведение эксперимента с использованием тонкослойной хроматографии, отбирание 2-5 мкл тестируемого раствора и 5 мкл контрольного раствора, соответственно нанесение капель на одну и ту же тонкослойную пластину силикагеля G и проявление с помощью смеси этилацетата-метанола-воды в объемном соотношении 20:3:2 в качестве проявляющего агента, вынимание, сушку, распыление 5% раствора трихлорида алюминия в этаноле, нагревание при 105°С в течение 5-10 мин и осмотр под ультрафиолетовой лампой при 365 нм; на хроматограмме тестируемого раствора появляются пятна того же цвета в тех же местах, что и на хроматограмме контрольного раствора;

(2) взятие тестируемого раствора со стадии (1) в качестве тестируемого образца, а также взятие контрольного образца 6-гингерола, добавление к нему этилацетата для приготовления раствора, содержащего 1 мг контрольного образца в каждом 1 мл раствора; проведение эксперимента с использованием тонкослойной хроматографии, отбирание 3-10 мкл тестируемого раствора, отбирание 1 мкл контрольного раствора и соответственно нанесение капель на одну и ту же тонкослойную пластину силикагеля G; проявление с помощью смеси петролейного эфира (60-90°С)-трихлорметана-этилацетата в объемном соотношении 1:1 в качестве проявляющего агента, вынимание, сушка, распыление 2% раствора ванилина в серной кислоте и нагревание при 105°С до появления четких пятен; на хроматограмме тестируемого раствора появляются пятна того же цвета в тех же местах, что и на хроматограмме контрольного раствора;

(3) растворение 3 г гранул, полученных из указанной композиции традиционной китайской медицины, в 40 мл воды, встряхивание и трехкратное экстрагирование н-бутанолом, каждый раз по 20 мл, смешивание н-бутанольных растворов, каждый раз по 20 мл, выпаривание н-бутанольного раствора досуха и растворение остатков в 1 мл метанола в качестве тестируемого раствора; проведение эксперимента с использованием тонкослойной хроматографии, отбирание 2-5 мкл тестируемого раствора, отбирание 5 мкл контрольного раствора и соответственно нанесение капель на одну и ту же тонкослойную пластину силикагеля G; проявление с помощью смеси этилацетата-муравьиной кислоты-ледяной уксусной кислоты-воды в объемном соотношении 15:1:1:2 в качестве проявляющего агента, вынимание, сушка, распыление 10% раствора серной кислоты в этаноле и нагревание при 105°С до появления четких пятен; помещение под ультрафиолетовую лампу при 365 нм для осмотра; на хроматограмме тестируемого раствора появляются основные флуоресцентные пятна того же цвета в тех же местах, что и на хроматограмме контрольного раствора; и

(4) взятие 6 г частиц, полученных из указанной композиции традиционной китайской медицины, измельчение, добавление 40 мл этилацетата, проведение ультразвуковой обработки в течение 30 минут, фильтрование, выпаривание досуха и добавление 1 мл метанола в остатки для растворения остатков в качестве тестируемого раствора; добавление метанола в магнолол для получения смешанного раствора, содержащего 1 мг на 1 мл, в качестве контрольного раствора; проведение эксперимента с использованием тонкослойной хроматографии, отбирание 10-15 мкл тестируемого раствора и 5 мкл контрольного раствора, соответственно нанесение капель на одну и ту же тонкослойную пластину силикагеля G и проявление с помощью смеси толуола-этилацетата-метанола в объемном соотношении 18:3:1 в качестве проявляющего агента, вынимание, сушка, распыление 1% раствора ванилина в серной кислоте и нагревание при 105°С до появления четких пятен; на хроматограмме тестируемого раствора появляются пятна того же цвета в тех же местах, что и на хроматограмме контрольного раствора;

где содержание гесперидина определяют с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии:

в качестве наполнителя используют октадецилсилан, химически привитый на силикагель, в качестве подвижной фазы используют смесь ацетонитрила и 0,1% раствора фосфорной кислоты в объемном соотношении 19:81;

длина волны детектирования составляет 283 нм, а скорость потока составляет 1,0 мл/мин;

количество теоретических тарелок составляет не менее 2000 при расчете по пику гесперидина;

приготовление контрольного раствора: точно взвешивают надлежащее количество контрольного образца гесперидина и добавляют метанол для приготовления раствора, содержащего 15 мкг гесперидина на 1 мл;

приготовление тестируемого раствора: измельчают указанную композицию традиционной китайской медицины, просеивают через сито с размером ячеек 5 меш, взвешивают точно 0,3 г, помещают композицию в коническую колбу с пробкой, добавляют точно 50 мл 10% метанола, взвешивают, проводят ультразвуковую обработку в течение 30 минут, охлаждают, повторно взвешивают, восполняют потерянную массу метанолом, хорошо встряхивают, фильтруют и берут полученный фильтрат для получения тестируемого раствора;

метод определения: отбирают точно 10 мкл контрольного раствора и тестируемого раствора, соответственно, вводят в жидкостной хроматограф и измеряют;

каждый 1 г гранул настоящей композиции содержит не менее 2,325 мг Citri reticulatae pericarpium, рассчитанного по гесперидину (С₂₈Н₃₄О₁₅).

18. Применение композиции традиционной китайской медицины по любому из пп. 1-13 для получения лекарственного средства для лечения коронавирусной инфекции 2019 года (COVID-19).