СПОСОБЫ ОЧИСТКИ БАКТЕРИАЛЬНЫХ ПОЛИСАХАРИДОВ Российский патент 2024 года по МПК A61K39/09 C12P19/04 B01D21/01 B01D61/14 

Область техники

Настоящее изобретение относится к способам очистки бактериальных полисахаридов, в частности, к способам удаления примесей из клеточных лизатов бактерий, продуцирующих полисахариды.

Уровень техники

Бактериальные полисахариды, в частности капсульные полисахариды, являются важными иммуногенами, обнаруженными на поверхности бактерий, вызывающих различные бактериальные заболевания. Этим обусловлено то, что они стали важным компонентом в разработке вакцин. Показано, что они пригодны для применения, поскольку способны вызывать иммунные ответы, в частности, будучи связанными с белками-носителями.

Бактериальные полисахариды обычно получают путем ферментации бактерий (например, Streptococci (например, S. pneumoniae, S. pyogenes, S. agalactiae или Streptococci групп С и G), Staphylococci (например, Staphylococcus aureus), Haemophilus (например, Haemophilus influenzae), Neisseria (например, Neisseria meningitidis) и Escherichia (например, Escherichia coli)).

Как правило, бактериальные полисахариды получают с применением периодического культивирования в сложной среде, периодического культивирования с подпиткой или непрерывного культивирования. Существует потребность в надежных и эффективных способах очистки, которые могут быть применены после ферментации при крупномасштабном получении бактериальных полисахаридов.

Большинство способов включают стадию осаждения капсульного полисахарида (например, спиртовое осаждение или обработку катионным детергентом). Последующее отделение осадка от супернатанта (например, путем центрифугирования) и повторная солюбилизация являются трудоемкими и могут привести к потере полисахарида, тем самым снижая выход. Помимо этого, для большинства способов очистки требуется несколько стадий, включающих многие дорогостоящие, трудоемкие и технологически сложные стадии, такие как хроматографирование и многократные мембранные разделения. Удаление примесей в этих способах охватывается множеством трудоемких и дорогостоящих стадий. Требование к содержанию белка является наиболее сложным для удовлетворения требованием вследствие физических и химических свойств растворимых белков.

Таким образом, существует потребность в упрощенном способе очистки, обеспечивающем снижение содержания растворимого белка в бактериальных лизатах и устранение неэффективности применяемого в настоящее время способа очистки с получением по существу очищенных бактериальных сахаридов, подходящих для включения в вакцины.

Описание чертежей

Фигура 1. Схема технологического процесса очистки полисахарида.

Фигура 2. Влияние рН при концентрации квасцов 2% масс/об. на удаление белка и прозрачность культуральной жидкости S. pneumoniae серотипа 8 в различные моменты времени. Через 1 час (левая панель), 4 часа (средняя панель), 24 часа (правая панель).

Фигура 3. Влияние концентрации квасцов в % при рН 3,5 на удаление белка и прозрачность культуральной жидкости S. pneumoniae серотипа 8 в различные моменты времени. 1,0% квасцов (левая панель), 2,0% квасцов (средняя панель), 3,0% квасцов (правая панель).

Фигура 4. Титрование кислотой культуральной жидкости S. pneumoniae серотипа 33F.

Фигура 5. Флокуляция с применением квасцов S. pneumoniae серотипа 33F при рН 3,5.

Фигура 6. Влияние нагревания на размер частиц в культуральной жидкости S. pneumoniae серотипа 22F после флокуляции. А Для эксперимента температуру флокуляции поддерживали равной комнатной температуре (КТ) (кривая распределения более мелких частиц по размерам (пик при 9,8 мкм)) и/или 45°С (кривая распределения более крупных частиц по размерам (пик при 65 мкм)).

1. Способ очистки бактериальных полисахаридов

1.1 Исходный материал

Способы согласно настоящему изобретению могут быть применены для очистки бактериальных полисахаридов из раствора, содержащего указанные полисахариды совместно с загрязняющими примесями.

1.1.1 Бактериальные клетки

Источниками бактериального полисахарида, подлежащего очистке согласно настоящему изобретению, являются бактериальные клетки, в частности, патогенные бактерии.

Неограничивающими примерами грамположительных бактерий для применения в соответствии с настоящим изобретением являются Streptococci (например, S. pneumoniae, S. pyogenes, S, agalactiae или Streptococci групп С и G), Staphylococci (например, Staphylococcus aureus), Enterococci, Bacillus, Corynebacterium, Listeria, Erysipelothrix и Clostridium. Неограничивающие примеры грамотрицательных бактерий для применения в соответствии с настоящим изобретением включают Haemophilus (например, Haemophilus influenzae), Neisseria (например, Neisseria meningitidis) и Escherichia (например, Escherichia coli).

В одном из вариантов реализации источник бактериальных полисахаридов для применения согласно настоящему изобретению выбран из группы, состоящей из Aeromonas hydrophila и других видов (spp.); Bacillus anthracis; Bacillus cereus; продуцирующих ботулинический нейротоксин видов Clostridium; Brucella abortus; Brucella melitensis; Brucella suis; Burkholdeha mallei (ранее Pseudomonas mallei); Burkholderia pseudomallei (ранее Pseudomonas pseudomallei); Campylobacter jejuni; Chlamydia psittaci; Chlamydia trachomatis, Clostridium botulinum; Clostridium dificile; Clostridium perfringens; Coccidioides immitis; Coccidioides posadasii; Cowdha ruminantium (возбудителя инфекционного гидроперикардита); Coxiella burnetii; Enterococcus faecalis; группы энтеровирулентных типов Escherichia coli (группы EEC), таких как Escherichia coli - энтеротоксигенные (ETEC), Escherichia coli - энтеропатогенные (EPEC), Escherichia coli - O157:H7 энтерогеморрагические (EHEC) и Escherichia coli - энтероинвазивные (EIEC); Ehrlichia spp., такие как Ehrlichia chajfeensis; Francisella tularensis; Legionella pneumophilia; Liberobacter africanus; Liberobacter asiaticus; Listeria monocytogenes; различных кишечных бактерий, таких как Klebsiella, Enterobacter, Proteus, Citrobacter, Aerobacter, Providencia и Serratia; Mycobacterium bovis; Mycobacterium tuberculosis; Mycoplasma capricolum; Mycoplasma mycoides ssp mycoides; Peronosclerospora philippinensis; Phakopsora pachyrhizi; Plesiomonas shigelloides; Ralstonia solanacearum расы 3, биовар 2; Rickettsia prowazekii; Rickettsia rickettsii; Salmonella spp,; Schlerophthora rayssiae, вариант zeae; Shigella spp.; Staphylococcus aureus; Streptococcus; Synchythum endobioticum; Vibrio cholerae не O1; Vibrio cholerae O1; Vibrio parahaemolyticus и других Vibrio; Vibrio vulnificus; Xanthomonas oryzae; Xylella fastidiosa (штамм пестрого хлороза цитрусовых); Yersinia enterocolitica и Yersinia pseudotuberculosis; а также Yersinia pestis.

Полисахарид, очистка которого является желаемой, может быть связан с клеточным компонентом, таким как клеточная стенка. Связь с клеточной стенкой означает, что полисахарид представляет собой компонент самой клеточной стенки и/или присоединен к клеточной стенке либо непосредственно, либо опосредованно через промежуточные молекулы, либо представляет собой временный покров клеточной стенки (например, некоторые бактериальные штаммы выделяют капсульные полисахариды, также известные в данной области техники как «экзополисахариды»).

В некоторых вариантах реализации полисахарид, выделенный из бактерий, представляет собой капсульный полисахарид, субкапсульный полисахарид или липополисахарид.

В предпочтительных вариантах реализации указанный полисахарид представляет собой капсульный полисахарид.

В одном из вариантов реализации источником бактериального капсульного полисахарида является Staphylococcus aureus. В одном из вариантов реализации источником бактериального капсульного полисахарида является Staphylococcus aureus типа 5 или Staphylococcus aureus типа 8.

В другом варианте реализации источником бактериального капсульного полисахарида является Enterococcus faecalis. В еще одном варианте реализации источником бактериального капсульного полисахарида является Haemophilus influenzae типа b.

В другом варианте реализации источником бактериальных капсульных полисахаридов является Neisseria meningitidis. В одном из вариантов реализации источником бактериальных капсульных полисахаридов является N. meningitidis серогруппы А (MenA), N. meningitidis серогруппы W135 (MenW135), N. meningitidis серогруппы Y (MenY), N. meningitidis серогруппы X (MenX) или N. meningitidis серогруппы С (MenC). В одном из вариантов реализации источником бактериальных капсульных полисахаридов является N. meningitidis серогруппы А (MenA). В одном из вариантов реализации источником бактериальных капсульных полисахаридов является N. meningitidis серогруппы W135 (MenW135). В одном из вариантов реализации источником бактериальных капсульных полисахаридов является N. meningitidis серо группы Y (MenY). В одном из вариантов реализации источником бактериальных капсульных полисахаридов является N. meningitidis серогруппы С (MenC). В одном из вариантов реализации источником бактериальных капсульных полисахаридов является N. meningitidis серогруппы X (MenX).

В другом варианте реализации источником бактериального капсульного полисахарида является Escherichia coli. В другом варианте реализации источником бактериального капсульного полисахарида является Enterococcus faecalis. В другом варианте реализации источником бактериального капсульного полисахарида является Streptococcus agalactiae (стрептококк группы В (СГБ)). В некоторых вариантах реализации источник бактериального капсульного полисахарида выбран из группы, состоящей из СГБ типов Ia, Ib, II, III, IV, V, VI, VII и VIII. В некоторых вариантах реализации источник бактериального капсульного полисахарида выбран из группы, состоящей из СГБ типов Ia, Ib, II, III и V.

В другом варианте реализации источником бактериального капсульного полисахарида является Escherichia coli. В одном из вариантов реализации источником бактериального капсульного полисахарида является часть Escherichia coli группы энтеровирулентных типов Escherichia coli (группы EEC), таких как Escherichia coli - энтеротоксигенные (ETEC), Escherichia coli - энтеропатогенные (ЕРЕС), Escherichia coli - 0157:Н7 энтерогеморрагические (ЕНЕС) или Escherichia coli - энтероинвазивные (EIEC). В одном из вариантов реализации источником бактериального капсульного полисахарида является уропатогенная Escherichia coli (UPEC).

В одном из вариантов реализации источником бактериального капсульного полисахарида является серотип Escherichia coli, выбранный из группы, состоящей из серотипов O157:Н7, O26:1411, O111:Н и О103:Н2. В одном из вариантов реализации источником бактериального капсульного полисахарида является серотип Escherichia coli, выбранный из группы, состоящей из серотипов O6:K2:Н1 и O18:K1:Н7. В одном из вариантов реализации источником бактериального капсульного полисахарида является серотип Escherichia coli, выбранный из группы, состоящей из серотипов O45:K1, O17:K52:Н18, O19:Н34 и O7:K1. В одном из вариантов реализации источником бактериального капсульного полисахарида является Escherichia coli серотипа О104:Н4. В одном из вариантов реализации источником бактериального капсульного полисахарида является Escherichia coli серотипа O1:K12:Н7. В одном из вариантов реализации источником бактериального капсульного полисахарида является Escherichia coli серотипа O127:Н6. В одном из вариантов реализации источником бактериального капсульного полисахарида является Escherichia coli серотипа O139:Н28. В одном из вариантов реализации источником бактериального капсульного полисахарида является Escherichia coli серотипа O128:Н2.

В предпочтительном варианте реализации источником бактериальных капсульных полисахаридов является Steptococcus pneumoniae. Предпочтительно источником бактериальных капсульных полисахаридов является серотип Streptococcus pneumoniae, выбранный из группы, состоящей из серотипов 1, 2, 3, 4, 5, 6А, 6В, 6С, 7F, 8, 9V, 9N, 10А, 11А, 12F, 14, 15А, 15В, 15С, 16F, 17F, 18С, 19А, 19F, 20, 22F, 23А, 23В, 23F, 24В, 24F, 29, 31, 33F, 34, 35В, 35F, 38, 72 и 73. В одном из вариантов реализации источником бактериальных капсульных полисахаридов является серотип Streptococcus pneumoniae, выбранный из группы, состоящей из серотипов 1, 2, 3, 4, 5, 6А, 6В, 7F, 8, 9V, 9N, 10А, 11А, 12F, 14, 15А, 15В, 15С, 16F, 17F, 18С, 19А, 19F, 20, 22F, 23А, 23В, 23F, 24F, 29, 31, 33F, 35В, 35F, 38, 72 и 73. В одном из вариантов реализации источником бактериальных капсульных полисахаридов является серотип Streptococcus pneumoniae, выбранный из группы, состоящей из серотипов 8, 10А, 11A, 12F, 15В, 22F и 33F. В одном из вариантов реализации источником бактериальных капсульных полисахаридов является Streptococcus pneumoniae серотипа 1. В одном из вариантов реализации источником бактериальных капсульных полисахаридов является Streptococcus pneumoniae серотипа 2. В одном из вариантов реализации источником бактериальных капсульных полисахаридов является Streptococcus pneumoniae серотипа 3. В одном из вариантов реализации источником бактериальных капсульных полисахаридов является Streptococcus pneumoniae серотипа 4. В одном из вариантов реализации источником бактериальных капсульных полисахаридов является Streptococcus pneumoniae серотипа 5. В одном из вариантов реализации источником бактериальных капсульных полисахаридов является Streptococcus pneumoniae серотипа 6А. В одном из вариантов реализации источником бактериальных капсульных полисахаридов является Streptococcus pneumoniae серотипа 6В. В одном из вариантов реализации источником бактериальных капсульных полисахаридов является Streptococcus pneumoniae серотипа 6С. В одном из вариантов реализации источником бактериальных капсульных полисахаридов является Streptococcus pneumoniae серотипа 7F. В одном из вариантов реализации источником бактериальных капсульных полисахаридов является Streptococcus pneumoniae серотипа 8. В одном из вариантов реализации источником бактериальных капсульных полисахаридов является Streptococcus pneumoniae серотипа 9V. В одном из вариантов реализации источником бактериальных капсульных полисахаридов является Streptococcus pneumoniae серотипа 9N. В одном из вариантов реализации источником бактериальных капсульных полисахаридов является Streptococcus pneumoniae серотипа 10А. В одном из вариантов реализации источником бактериальных капсульных полисахаридов является Streptococcus pneumoniae серотипа 11А. В одном из вариантов реализации источником бактериальных капсульных полисахаридов является Streptococcus pneumoniae серотипа 12F. В одном из вариантов реализации источником бактериальных капсульных полисахаридов является Streptococcus pneumoniae серотипа 14. В одном из вариантов реализации источником бактериальных капсульных полисахаридов является Streptococcus pneumoniae серотипа 15А. В одном из вариантов реализации источником бактериальных капсульных полисахаридов является Streptococcus pneumoniae серотипа 15В. В одном из вариантов реализации источником бактериальных капсульных полисахаридов является Streptococcus pneumoniae серотипа 15С. В одном из вариантов реализации источником бактериальных капсульных полисахаридов является Streptococcus pneumoniae серотипа 16F. В одном из вариантов реализации источником бактериальных капсульных полисахаридов является Streptococcus pneumoniae серотипа 17F. В одном из вариантов реализации источником бактериальных капсульных полисахаридов является Streptococcus pneumoniae серотипа 18С. В одном из вариантов реализации источником бактериальных капсульных полисахаридов является Streptococcus pneumoniae серотипа 19А. В одном из вариантов реализации источником бактериальных капсульных полисахаридов является Streptococcus pneumoniae серотипа 19F. В одном из вариантов реализации источником бактериальных капсульных полисахаридов является Streptococcus pneumoniae серотипа 20. В одном из вариантов реализации источником бактериальных капсульных полисахаридов является Streptococcus pneumoniae серотипа 20А. В одном из вариантов реализации источником бактериальных капсульных полисахаридов является Streptococcus pneumoniae серотипа 20В. В одном из вариантов реализации источником бактериальных капсульных полисахаридов является Streptococcus pneumoniae серотипа 22F. В одном из вариантов реализации источником бактериальных капсульных полисахаридов является Streptococcus pneumoniae серотипа 23А. В одном из вариантов реализации источником бактериальных капсульных полисахаридов является Streptococcus pneumoniae серотипа 23 В. В одном из вариантов реализации источником бактериальных капсульных полисахаридов является Streptococcus pneumoniae серотипа 23F. В одном из вариантов реализации источником бактериальных капсульных полисахаридов является Streptococcus pneumoniae серотипа 24В. В одном из вариантов реализации источником бактериальных капсульных полисахаридов является Streptococcus pneumoniae серотипа 24F. В одном из вариантов реализации источником бактериальных капсульных полисахаридов является Streptococcus pneumoniae серотипа 29. В одном из вариантов реализации источником бактериальных капсульных полисахаридов является Streptococcus pneumoniae серотипа 31. В одном из вариантов реализации источником бактериальных капсульных полисахаридов является Streptococcus pneumoniae серотипа 33F. В одном из вариантов реализации источником бактериальных капсульных полисахаридов является Streptococcus pneumoniae серотипа 34. В одном из вариантов реализации источником бактериальных капсульных полисахаридов является Streptococcus pneumoniae серотипа 35В. В одном из вариантов реализации источником бактериальных капсульных полисахаридов является Streptococcus pneumoniae серотипа 35F. В одном из вариантов реализации источником бактериальных капсульных полисахаридов является Streptococcus pneumoniae серотипа 38. В одном из вариантов реализации источником бактериальных капсульных полисахаридов является Streptococcus pneumoniae серотипа 72. В одном из вариантов реализации источником бактериальных капсульных полисахаридов является Streptococcus pneumoniae серотипа 73.

Бактериальные штаммы, применяемые для выделения соответствующих полисахаридов, которые применяют в настоящем изобретении, могут быть получены из известных коллекций культур или клинических образцов.

1.1.2 Рост бактериальных клеток

Как правило, полисахариды получают путем выращивания бактерий в среде (например, твердой или предпочтительно жидкой среде). Затем полисахариды получают путем обработки бактериальных клеток.

Следовательно, в одном из вариантов реализации исходным материалом в способах согласно настоящему изобретению является бактериальная культура, и предпочтительно жидкая бактериальная культура (например, культуральная жидкость).

Бактериальную культуру, как правило, получают с помощью периодического культивирования, периодического культивирования с подпиткой или непрерывного культивирования (см., например, WO 2007/052168 или WO 2009/081276). Во время непрерывного культивирования свежую среду добавляют к культуре с фиксированной скоростью, при этом клетки и среду удаляют со скоростью, обеспечивающей поддержание постоянного объема культуры.

Популяцию организма часто увеличивают в масштабе от пробирки для посева до флаконов для посева и осуществляют пассаж через один или более ферментеров для посева с увеличением объема до тех пор, пока не будут достигнуты производственные объемы культивирования.

1.1.3 Предварительная обработка бактериальных клеток для получения исходного материала

Как правило, небольшое количество полисахарида высвобождается в культуральную среду во время роста бактерий, и, таким образом, исходный материал может представлять собой супернатант от бактериальной культуры после центрифугирования.

Однако, как правило, исходный материал получают путем обработки самих бактерий таким образом, чтобы полисахарид высвобождался.

Необязательно, после стадии роста клеток бактериальные клетки инактивируют. Это, в частности, относится к случаю применения патогенных бактерий. Подходящим способом инактивации является, например, обработка фенолом : этанолом, например, как описано в Fattom et al. (1990) Infect Immun. 58(7):2367-74. В приведенных ниже вариантах реализации бактериальные клетки могут быть предварительно инактивированы или не инактивированы.

Высвобождение полисахаридов из бактерий может быть достигнуто различными способами, включая химическую, физическую или ферментативную обработку (см., например, WO 2010151544, WO 2011/051917 или WO 2007084856).

В одном из вариантов реализации бактериальные клетки (инактивированные или неинактивированные) обрабатывают в суспензионном состоянии в их исходной культуральной среде. Таким образом, процесс может начинаться с клеток в суспензионном состоянии в их исходной культуральной среде.

В другом варианте реализации бактериальные клетки центрифугируют, после чего обеспечивают высвобождение капсульного полисахарида. Таким образом, процесс может начинаться с клеток в форме влажной клеточной пасты. В качестве альтернативы, клетки обрабатывают в высушенной форме. Однако, как правило, после центрифугирования бактериальные клетки ресуспендируют в водной среде, которая подходит для следующей стадии процесса, например, в буфере или в дистиллированной воде. Клетки могут быть промыты этой средой перед ресуспендированием.

В одном из вариантов реализации бактериальные клетки (например, в суспензионном состоянии в их исходной культуральной среде, в форме влажной клеточной пасты, в высушенной форме или ресуспендированные в водной среде после центрифугирования) обрабатывают литическим агентом.

«Литический агент» представляет собой любой агент, который способствует разрушению клеточной стенки.

В одном из вариантов реализации литический агент представляет собой детергент. В контексте настоящего описания термин «детергент» относится к любому анионному или катионному детергенту, способному индуцировать лизис бактериальных клеток. Типичные примеры таких детергентов для применения в способах согласно настоящему изобретению включают дезоксихолат натрия (DOC), N-лаурилсаркозин (NLS), натриевую соль хенодезоксихолевой кислоты и сапонины (см. WO 2008/118752, со стр. 13, строка 14 по стр. 14, строка 10). В одном из вариантов реализации настоящего изобретения литический агент, применяемый для лизиса бактериальных клеток, представляет собой DOC. В одном из вариантов реализации литический агент представляет собой литический агент неживотного происхождения. В одном из вариантов реализации литический агент неживотного происхождения выбран из группы, состоящей из декансульфоновой кислоты, трет-октилфенокси-5-поли(оксиэтилен)этанолов (например, Igepal® СА-630, CAS #: 9002-93-1, доступного от Sigma Aldrich, Сент-Луис, Миссури), конденсатов октилфенолэтиленоксида (например, Triton® Х-100, доступного от Sigma Aldrich, Сент-Луис, Миссури), натриевой соли N-лаурилсаркозина (NLS), лаурилиминодипропионата, додецилсульфата натрия, хенодезоксихолата, гиодезоксихолата, гликодезоксихолата, тауродезоксихолата, таурохенодезоксихолата и холата. В одном из вариантов реализации литический агент неживотного происхождения представляет собой NLS.

В одном из вариантов реализации бактериальные клетки (например, в суспензионном состоянии в их исходной культуральной среде, в форме влажной клеточной пасты, в высушенной форме или ресуспендированные в водной среде после центрифугирования) подвергают ферментативной обработке с высвобождением полисахарида. В одном из вариантов реализации бактериальные клетки обрабатывают ферментом, выбранным из группы, состоящей из лизостафина, мутанолизина, β-N-ацетилглюкозаминидазы и комбинации мутанолизина и β-N-ацетилглюкозаминидазы. Они действуют на бактериальный пептидогликан с высвобождением капсульного сахарида, применяемого в настоящем изобретении, однако также обеспечивают высвобождение группового специфического углеводного антигена. В одном из вариантов реализации бактериальные клетки обрабатывают фосфодиэстеразой типа II (ФДЭ2).

Необязательно, после высвобождения полисахарида фермент (ферменты) инактивируют. Подходящим способом инактивации является, например, термическая обработка или обработка кислотой.

В одном из вариантов реализации бактериальные клетки (например, в суспензионном состоянии в их исходной культуральной среде, в форме влажной клеточной пасты, в высушенной форме или ресуспендированные в водной среде после центрифугирования) автоклавируют таким образом, что полисахарид высвобождается.

В еще одном варианте реализации бактериальные клетки (например, в суспензионном состоянии в их исходной культуральной среде, в форме влажной клеточной пасты, в высушенной форме или ресуспендированные в водной среде после центрифугирования) химически обрабатывают таким образом, что полисахарид высвобождается. В таком варианте реализации химическая обработка может представлять собой, например, гидролиз с применением основания или кислоты (см., например, WO 2007084856).

В одном из вариантов реализации химическая обработка бактериальных клеток представляет собой экстракцию с применением оснований (например, с применением гидроксида натрия). Экстракция с применением оснований может обеспечивать расщепление фосфодиэфирной связи между капсульным сахаридом и пептидогликановым остовом. В одном из вариантов реализации основание выбрано из группы, состоящей из NaOH, КОН, LiOH, NaHCO3, Na2CO3, K2CO3, KCN, Et3N, NH3, H2N2H2, NaH, NaOMe, NaOEt и KOtBu. После обработки основанием реакционная смесь может быть нейтрализована. Это может быть достигнуто путем добавления кислоты. В одном из вариантов реализации после обработки основанием реакционную смесь нейтрализуют кислотой, выбранной из группы, состоящей из HCl, Н₃РО₄, лимонной кислоты, уксусной кислоты, азотистой кислоты и серной кислоты.

В одном из вариантов реализации химическая обработка бактериальных клеток представляет собой обработку кислотой (например, серной кислотой). В одном из вариантов реализации кислота выбрана из группы, состоящей из HCl, Н₃РО₄, лимонной кислоты, уксусной кислоты, азотистой кислоты и серной кислоты. После обработки кислотой реакционная смесь может быть нейтрализована. Это может быть достигнуто путем добавления основания. В одном из вариантов реализации после обработки кислотой реакционную смесь нейтрализуют основанием, выбранным из группы, состоящей из NaOH, KOH, LiOH, NaHCO3, Na2CO3, K2CO3, KCN, Et3N, NH3, H2N2H2, NaH, NaOMe, NaOEt и KOtBu.

1.2 Флокуляция

Способы согласно настоящему изобретению включают стадию флокуляции. Авторы изобретения обнаружили, что указанный способ приводит к получению очищенного полисахарида с низким уровнем загрязнения. Способы согласно настоящему изобретению может быть быстрым и простым.

Следовательно, в способе согласно настоящему изобретению раствор, полученный любым из способов согласно разделу 1.1 выше, обрабатывают путем флокуляции.

В настоящем изобретении термин «флокуляция» относится к процессу, при котором коллоидные частицы осаждаются из суспензии в форме хлопьев или чешуек вследствие добавления флокулирующего агента.

Стадия флокуляции включает добавление «флокулирующего агента» к раствору, содержащему бактериальные полисахариды совместно с загрязняющими примесями. В одном из вариантов реализации загрязняющие примеси включают дебрис клеток бактерий, белки и нуклеиновые кислоты клеток бактерий. В одном из вариантов реализации загрязняющие примеси включают белки и нуклеиновые кислоты клеток бактерий.

Как будет дополнительно описано ниже, стадия флокуляции может дополнительно включать регулирование рН до или после добавления флокулирующего агента. В частности, раствор может быть подкислен.

Помимо этого, добавление флокулирующего агента и/или регулирование рН может быть выполнено при температуре, доведенной до желаемого уровня.

Эти стадии могут быть выполнены в любом порядке:

- добавление флокулирующего агента с последующим регулированием рН и последующим регулированием температуры; или

- добавление флокулирующего агента с последующим регулированием температуры и последующим регулированием рН; или

- регулирование рН с последующим добавлением флокулирующего агента и последующим регулированием температуры; или

- регулирование рН с последующим регулированием температуры и последующим добавлением флокулирующего агента; или

- регулирование температуры с последующим добавлением флокулирующего агента и последующим регулированием рН; или

- регулирование температуры с последующим регулированием рН и последующим добавлением флокулирующего агента.

Помимо этого, после добавления флокулирующего агента и/или регулирования рН раствор могут выдерживать в течение некоторого времени для обеспечения осаждения хлопьев, после чего проводят дальнейшую обработку.

В настоящем изобретении термин «флокулирующий агент» относится к агенту, способному обеспечивать стимуляцию флокуляции в растворе, содержащем представляющий интерес полисахарид совместно с загрязняющими примесями, путем обеспечения агрегации коллоидных частиц и других взвешенных частиц в форме хлопьев или чешуек, тогда как представляющий интерес полисахарид в значительной степени остается в растворе.

В одном из вариантов реализации настоящего изобретения флокулирующий агент содержит поливалентный катион. В одном из вариантов реализации флокулирующий агент представляет собой поливалентный катион. В предпочтительном варианте реализации указанный поливалентный катион выбран из группы, состоящей из алюминия, железа, кальция и магния. В одном из вариантов реализации флокулирующий агент представляет собой смесь по меньшей мере двух поливалентных катионов, выбранных из группы, состоящей из алюминия, железа, кальция и магния. В одном из вариантов реализации флокулирующий агент представляет собой смесь по меньшей мере трех поливалентных катионов, выбранных из группы, состоящей из алюминия, железа, кальция и магния. В одном из вариантов реализации флокулирующий агент представляет собой смесь четырех поливалентных катионов, состоящих из алюминия, железа, кальция и магния.

В одном из вариантов реализации флокулирующий агент содержит агент, выбранный из группы, состоящей из квасцов (например, калиевых квасцов, натриевых квасцов или аммониевых квасцов), хлоргидрата алюминия, сульфата алюминия, оксида кальция, гидроксида кальция, сульфата железа (II) (сульфата закисного железа), хлорида железа (III) (хлорида окисного железа), полиакриламида, модифицированных полиакриламидов, polyDADMAC (полидиаллилдиметиламмония хлорида), полиэтиленимина (PEI), алюмината натрия и силиката натрия. В одном из вариантов реализации флокулирующий агент выбран из группы, состоящей из квасцов (например, калиевых квасцов, натриевых квасцов или аммониевых квасцов), хлоргидрата алюминия, сульфата алюминия, оксида кальция, гидроксида кальция, сульфата железа (II) (сульфата закисного железа), хлорида железа (III) (хлорида окисного железа), полиакриламида, модифицированных полиакриламидов, polyDADMAC, алюмината натрия и силиката натрия. В одном из вариантов реализации флокулирующий агент представляет собой полиэтиленимин (PEI). В одном из вариантов реализации флокулирующий агент содержит квасцы. В одном из вариантов реализации флокулирующий агент представляет собой квасцы. В одном из вариантов реализации флокулирующий агент содержит калиевые квасцы. В одном из вариантов реализации флокулирующий агент представляет собой калиевые квасцы. В одном из вариантов реализации флокулирующий агент содержит натриевые квасцы. В одном из вариантов реализации флокулирующий агент представляет собой натриевые квасцы. В одном из вариантов реализации флокулирующий агент содержит аммониевые квасцы. В одном из вариантов реализации флокулирующий агент представляет собой аммониевые квасцы.

В одном из вариантов реализации флокулирующий агент представляет собой смесь агентов (например, двух, трех или четырех агентов), выбранных из группы, состоящей из квасцов (например, калиевых квасцов, натриевых квасцов или аммониевых квасцов), хлоргидрата алюминия, сульфата алюминия, оксида кальция, гидроксида кальция, сульфата железа (II) (сульфата закисного железа), хлорида железа (III) (хлорида окисного железа), полиакриламида, модифицированных полиакриламидов, polyDADMAC, полиэтиленимина (PEI), алюмината натрия и силиката натрия. В одном из вариантов реализации флокулирующий агент выбран из группы, состоящей из квасцов (например, калиевых квасцов, натриевых квасцов или аммониевых квасцов), хлоргидрата алюминия, сульфата алюминия, оксида кальция, гидроксида кальция, сульфата железа (II) (сульфата закисного железа), хлорида железа (III) (хлорида окисного железа), полиакриламида, модифицированных полиакриламидов, polyDADMAC, алюмината натрия и силиката натрия.

В одном из вариантов реализации флокулирующий агент представляет собой смесь двух агентов, выбранных из группы, состоящей из квасцов (например, калиевых квасцов, натриевых квасцов или аммониевых квасцов), хлоргидрата алюминия, сульфата алюминия, оксида кальция, гидроксида кальция, сульфата железа (II) (сульфата закисного железа), хлорида железа (III) (хлорида окисного железа), полиакриламида, модифицированных полиакриламидов, polyDADMAC, алюмината натрия и силиката натрия. В одном из вариантов реализации флокулирующий агент представляет собой смесь по меньшей мере трех агентов, выбранных из группы, состоящей из квасцов (например, калиевых квасцов, натриевых квасцов или аммониевых квасцов), хлоргидрата алюминия, сульфата алюминия, оксида кальция, гидроксида кальция, сульфата железа (II) (сульфата закисного железа), хлорида железа (III) (хлорида окисного железа), полиакриламида, модифицированных полиакриламидов, polyDADMAC, алюмината натрия и силиката натрия.

В одном из вариантов реализации флокулирующий агент содержит агент, выбранный из группы, состоящей из хитозана, изингласса, семян Moringa oleifera (дерево хрена), желатина, семян Strychnos potatorum (ореховое дерево Nirmali), гуаровой камеди и альгинатов (например, экстрактов бурых водорослей). В одном из вариантов реализации флокулирующий агент выбран из группы, состоящей из хитозана, изингласса, семян Moringa oleifera (дерево хрена), желатина, семян Strychnos potatorum (ореховое дерево Nirmali), гуаровой камеди и альгинатов (например, экстрактов бурых водорослей).

Концентрация флокулирующего агента может зависеть от применяемого агента (агентов), представляющего интерес полисахарида и параметра стадии флокуляции (например, температуры и так далее).

В вариантах реализации, в которых флокулирующий агент содержит или представляет собой квасцы, может быть применена концентрация флокулирующего агента от примерно 0,1 до 20% (масс/об.). Предпочтительно применяют концентрацию флокулирующего агента от примерно 0,5 до 10% (масс/об.). Еще более предпочтительно применяют концентрацию флокулирующего агента от примерно 1 до 5% (масс/об.).

Любое число в любом из указанных выше диапазонов рассматривается в качестве варианта реализации настоящего раскрытия.

В одном из вариантов реализации применяют концентрацию флокулирующего агента, составляющую примерно 0,1, примерно 0,25, примерно 0,5, примерно 1,0, примерно 1,5, примерно 2,0, примерно 2,5, примерно 3,0, примерно 3,5, примерно 4,0, примерно 4,5, примерно 5,0, примерно 5,5, примерно 6,0, примерно 6,5, примерно 7,0, примерно 7,5, примерно 8,0, примерно 8,5, примерно 9,0, примерно 9,5 или примерно 10% (масс./об.). В одном из вариантов реализации применяют концентрацию флокулирующего агента, составляющую примерно 10,5, примерно 11,0, примерно 11,5, примерно 12,0, примерно 12,5, примерно 13,0, примерно 13,5, примерно 14,0, примерно 14,5, примерно 15,0, примерно 15,5, примерно 16,0, примерно 16,5, примерно 17,0, примерно 17,5, примерно 18,0, примерно 18,5, примерно 19,0, примерно 19,5 или примерно 20,0% (масс/об.). В одном из вариантов реализации применяют концентрацию флокулирующего агента, составляющую примерно 0,5, примерно 1,0, примерно 1,5, примерно 2,0, примерно 2,5, примерно 3,0, примерно 3,5, примерно 4,0, примерно 4,5 или примерно 5,0% (масс/об.). В одном из вариантов реализации применяют концентрацию флокулирующего агента, составляющую примерно 1,0, примерно 1,5, примерно 2,0, примерно 2,5, примерно 3,0, примерно 3,5 или примерно 4,0% (масс/об.).

В некоторых вариантах реализации настоящего изобретения флокулирующий агент добавляют в течение определенного периода времени. В некоторых вариантах реализации настоящего изобретения флокулирующий агент добавляют в течение периода, составляющего от нескольких секунд (например, от 1 до 10 секунд) до примерно одного месяца. В некоторых вариантах реализации флокулирующий агент добавляют в течение периода, составляющего от примерно 2 секунд до примерно двух недель. В некоторых вариантах реализации настоящего изобретения флокулирующий агент добавляют в течение периода, составляющего от примерно 1 минуты до примерно одной недели. В некоторых вариантах реализации флокулирующий агент добавляют в течение периода, составляющего от примерно 1 минуты, примерно 5 минут, примерно 10 минут, примерно 15 минут, примерно 20 минут, примерно 25 минут, примерно 30 минут, примерно 35 минут, примерно 40 минут, примерно 45 минут, примерно 50 минут, примерно 55 минут, примерно 60 минут, примерно 65 минут, примерно 70 минут, примерно 80 минут, примерно 85 минут, примерно 90 минут, примерно 95 минут, примерно 100 минут, примерно 110 минут, примерно 120 минут, примерно 130 минут, примерно 140 минут, примерно 150 минут, примерно 160 минут, примерно 170 минут, примерно 3 часов, примерно 4 часов, примерно 5 часов, примерно 6 часов, примерно 7 часов, примерно 8 часов, примерно 9 часов, примерно 10 часов, примерно 11 часов, примерно 12 часов, примерно 13 часов, примерно 14 часов, примерно 15 часов, примерно 16 часов, примерно 17 часов, примерно 18 часов, примерно 19 часов, примерно 20 часов, примерно 21 часа, примерно 22 часов, примерно 23 часов или примерно 24 часов до примерно двух дней.

Следовательно, в некоторых вариантах реализации флокулирующий агент добавляют в течение периода, составляющего от примерно 5 минут, примерно 10 минут, примерно 15 минут, примерно 20 минут, примерно 25 минут, примерно 30 минут, примерно 35 минут, примерно 40 минут, примерно 45 минут, примерно 50 минут, примерно 55 минут, примерно 60 минут, примерно 65 минут, примерно 70 минут, примерно 80 минут, примерно 85 минут, примерно 90 минут, примерно 95 минут, примерно 100 минут, примерно 110 минут, примерно 120 минут, примерно 130 минут, примерно 140 минут, примерно 150 минут, примерно 160 минут, примерно 170 минут, примерно 3 часов, примерно 4 часов, примерно 5 часов, примерно 6 часов, примерно 7 часов, примерно 8 часов, примерно 9 часов, примерно 10 часов, примерно 11 часов или примерно 12 часов до примерно одного дня.

Предпочтительно флокулирующий агент добавляют в течение периода, составляющего от примерно 15 минут, примерно 20 минут, примерно 25 минут, примерно 30 минут, примерно 35 минут, примерно 40 минут, примерно 45 минут, примерно 50 минут, примерно 55 минут, примерно 60 минут, примерно 65 минут, примерно 70 минут, примерно 80 минут, примерно 85 минут, примерно 90 минут, примерно 95 минут, примерно 100 минут, примерно 110 минут, примерно 120 минут, примерно 130 минут, примерно 140 минут, примерно 150 минут, примерно 160 минут, примерно 170 минут, примерно 3 часов, примерно 4 часов, примерно 5 часов, примерно 6 часов, примерно 7 часов, примерно 8 часов, примерно 9 часов, примерно 10 часов, примерно 11 часов или примерно 12 часов до примерно одного дня.

В некоторых вариантах реализации флокулирующий агент добавляют в течение периода, составляющего от примерно 15 минут до примерно 3 часов. В некоторых вариантах реализации флокулирующий агент добавляют в течение периода, составляющего от примерно 30 минут до примерно 120 минут. Любое число в любом из указанных выше диапазонов рассматривается в качестве варианта реализации настоящего раскрытия.

Флокулирующий агент может быть добавлен в течение периода, составляющего примерно 2 секунды, примерно 10 секунд, примерно 30 секунд, примерно 1 минуту, примерно 5 минут, примерно 10 минут, примерно 15 минут, примерно 20 минут, примерно 25 минут, примерно 30 минут, примерно 35 минут, примерно 40 минут, примерно 45 минут, примерно 50 минут, примерно 55 минут, примерно 60 минут, примерно 65 минут, примерно 70 минут, примерно 75 минут, примерно 80 минут, примерно 85 минут, примерно 90 минут, примерно 95 минут, примерно 100 минут, примерно 105 минут, примерно 110 минут, примерно 115 минут, примерно 120 минут, примерно 125 минут, примерно 130 минут, примерно 135 минут, примерно 140 минут, примерно 145 минут, примерно 150 минут, примерно 155 минут, примерно 160 минут, примерно 170 минут, примерно 3 часа, примерно 3,5 часа, примерно 4 часа, примерно 4,5 часа, примерно 5 часов, примерно 5,5 часа, примерно 6 часов, примерно 6,5 часа, примерно 7 часов, примерно 7,5 часа, примерно 8 часов, примерно 8,5 часа, примерно 9 часов, примерно 10 часов, примерно 11 часов, примерно 12 часов, примерно 13 часов, примерно 14 часов, примерно 15 часов, примерно 16 часов, примерно 17 часов, примерно 18 часов, примерно 19 часов, примерно 20 часов, примерно 21 час, примерно 22 часа, примерно 23 часа, примерно 24 часа, примерно 30 часов, примерно 36 часов, примерно 42 часа, примерно 48 часов, примерно 3 дня, примерно 4 дня, примерно 5 дней, примерно 6 дней, примерно 7 дней, примерно 8 дней, примерно 9 дней, примерно 10 дней, примерно 11 дней, примерно 12 дней, примерно 13 дней, примерно 14 дней или примерно 15 дней.

В одном из вариантов реализации флокулирующий агент добавляют без перемешивания. В другом варианте реализации флокулирующий агент добавляют при перемешивании. В другом варианте реализации флокулирующий агент добавляют при осторожном перемешивании. В другом варианте реализации флокулирующий агент добавляют при интенсивном перемешивании.

Также авторами изобретения неожиданно было замечено, что флокуляция улучшается в случае ее проведения при кислом значении рН.

Следовательно, в одном из вариантов реализации настоящего изобретения стадию флокуляции проводят при рН ниже 7,0, 6,0, 5,0 или 4,0. В конкретном варианте реализации настоящего изобретения стадию флокуляции проводят при рН от 7,0 до 1,0. В одном из вариантов реализации стадию флокуляции проводят при рН от 5,5 до 2,5, от 5,0 до 2,5, от 4,5 до 2,5, от 4,0 до 2,5, от 5,5 до 3,0, от 5,0 до 3,0, от 4,5 до 3,0, от 4,0 до 3,0, от 5,5 до 3,5, от 5,0 до 3,5, от 4,5 до 3,5 или от 4,0 до 3,5. В одном из вариантов реализации стадию флокуляции проводят при рН, составляющем примерно 5,5, примерно 5,0, примерно 4,5, примерно 4,0, примерно 3,5, примерно 3,0, примерно 2,5, примерно 2,0, примерно 1,5 или примерно 1,0. В одном из вариантов реализации стадию флокуляции проводят при рН, составляющем примерно 4,0, примерно 3,5, примерно 3,0 или примерно 2,5. В одном из вариантов реализации стадию флокуляции проводят при рН, составляющем примерно 3,5.

Любое число в любом из указанных выше диапазонов рассматривается в качестве варианта реализации настоящего раскрытия.

В одном из вариантов реализации указанное кислое значение рН получают путем подкисления раствора, полученного любым из способов, описанных в разделе 1.1 выше, или дополнительно осветленного, как описано в разделе 1.2, с помощью кислоты. В одном из вариантов реализации указанная кислота выбрана из группы, состоящей из HCl, H₃PO₄, лимонной кислоты, уксусной кислоты, азотистой кислоты и серной кислоты. В одном из вариантов реализации указанная кислота представляет собой аминокислоту. В одном из вариантов реализации указанная кислота представляет собой аминокислоту, выбранную из группы, состоящей из глицина, аланина и глутамата. В одном из вариантов реализации указанная кислота представляет собой HCl (соляную кислоту). В одном из вариантов реализации указанная кислота представляет собой серную кислоту.

В одном из вариантов реализации кислоту добавляют без перемешивания. Предпочтительно кислоту добавляют при перемешивании. В одном из вариантов реализации кислоту добавляют при осторожном перемешивании. В одном из вариантов реализации кислоту добавляют при интенсивном перемешивании.

В некоторых вариантах реализации настоящего изобретения после добавления флокулирующего агента (и необязательного подкисления) раствор выдерживают в течение некоторого времени, чтобы обеспечить осаждение хлопьев, после чего проводят последующую обработку.

В некоторых вариантах реализации настоящего изобретения стадию флокуляции проводят при времени отстаивания, составляющем от нескольких секунд (например, от 2 до 10 секунд) до примерно 1 минуты. Предпочтительно время отстаивания составляет по меньшей мере примерно 2, по меньшей мере примерно 3, по меньшей мере примерно 4, по меньшей мере примерно 5, по меньшей мере примерно 10, по меньшей мере примерно 15, по меньшей мере примерно 20, по меньшей мере примерно 25, по меньшей мере примерно 30, по меньшей мере примерно 35, по меньшей мере примерно 40, по меньшей мере примерно 45, по меньшей мере примерно 50, по меньшей мере примерно 55, по меньшей мере примерно 60, по меньшей мере примерно 65, по меньшей мере примерно 70, по меньшей мере примерно 75, по меньшей мере примерно 80, по меньшей мере примерно 85, по меньшей мере примерно 90, по меньшей мере примерно 95, по меньшей мере примерно 100, по меньшей мере примерно 105, по меньшей мере примерно 110, по меньшей мере примерно 115, по меньшей мере примерно 120, по меньшей мере примерно 125, по меньшей мере примерно 130, по меньшей мере примерно 135, по меньшей мере примерно 140, по меньшей мере примерно 145, по меньшей мере примерно 150, по меньшей мере примерно 155 или по меньшей мере примерно 160 минут. Предпочтительно время отстаивания составляет менее недели, однако период отстаивания может быть более длительным.

Следовательно, в некоторых вариантах реализации время отстаивания составляет от примерно 1, примерно 2, примерно 3, примерно 4, примерно 5, примерно 6, примерно 7, примерно 8, примерно 9, примерно 10, примерно 15, примерно 20, примерно 25, примерно 30, примерно 40, примерно 50, примерно 60, примерно 70, примерно 80, примерно 90, примерно 100, примерно 120, примерно 140, примерно 160, примерно 180, примерно 220, примерно 240, примерно 300, примерно 360, примерно 420, примерно 480, примерно 540, примерно 600, примерно 660, примерно 720, примерно 780, примерно 840, примерно 900, примерно 960, примерно 1020, примерно 1080, примерно 1140, примерно 1200, примерно 1260, примерно 1320, примерно 1380, примерно 1440 минут, примерно двух дней, примерно трех дней, примерно четырех дней, примерно пяти дней или примерно шести дней до 1 недели.

В некоторых вариантах реализации настоящего изобретения время отстаивания составляет от нескольких секунд (например, от 1 до 10 секунд) до примерно одного месяца. В некоторых вариантах реализации время отстаивания составляет от примерно 2 секунд до примерно двух недель. В некоторых вариантах реализации настоящего изобретения время отстаивания составляет от примерно 1 минуты до примерно одной недели. В некоторых вариантах реализации время отстаивания составляет от примерно 1 минуты, примерно 5 минут, примерно 10 минут, примерно 15 минут, примерно 20 минут, примерно 25 минут, примерно 30 минут, примерно 35 минут, примерно 40 минут, примерно 45 минут, примерно 50 минут, примерно 55 минут, примерно 60 минут, примерно 65 минут, примерно 70 минут, примерно 80 минут, примерно 85 минут, примерно 90 минут, примерно 95 минут, примерно 100 минут, примерно 110 минут, примерно 120 минут, примерно 130 минут, примерно 140 минут, примерно 150 минут, примерно 160 минут, примерно 170 минут, примерно 3 часов, примерно 4 часов, примерно 5 часов, примерно 6 часов, примерно 7 часов, примерно 8 часов, примерно 9 часов, примерно 10 часов, примерно 11 часов, примерно 12 часов, примерно 13 часов, примерно 14 часов, примерно 15 часов, примерно 16 часов, примерно 17 часов, примерно 18 часов, примерно 19 часов, примерно 20 часов, примерно 21 часа, примерно 22 часов, примерно 23 часов или примерно 24 часов до примерно двух дней.

Следовательно, в некоторых вариантах реализации время отстаивания составляет от примерно 5 минут, примерно 10 минут, примерно 15 минут, примерно 20 минут, примерно 25 минут, примерно 30 минут, примерно 35 минут, примерно 40 минут, примерно 45 минут, примерно 50 минут, примерно 55 минут, примерно 60 минут, примерно 65 минут, примерно 70 минут, примерно 80 минут, примерно 85 минут, примерно 90 минут, примерно 95 минут, примерно 100 минут, примерно 110 минут, примерно 120 минут, примерно 130 минут, примерно 140 минут, примерно 150 минут, примерно 160 минут, примерно 170 минут, примерно 3 часов, примерно 4 часов, примерно 5 часов, примерно 6 часов, примерно 7 часов, примерно 8 часов, примерно 9 часов, примерно 10 часов, примерно 11 часов или примерно 12 часов до примерно одного дня.

Предпочтительно время отстаивания составляет от примерно 15 минут, примерно 20 минут, примерно 25 минут, примерно 30 минут, примерно 35 минут, примерно 40 минут, примерно 45 минут, примерно 50 минут, примерно 55 минут, примерно 60 минут, примерно 65 минут, примерно 70 минут, примерно 80 минут, примерно 85 минут, примерно 90 минут, примерно 95 минут, примерно 100 минут, примерно 110 минут, примерно 120 минут, примерно 130 минут, примерно 140 минут, примерно 150 минут, примерно 160 минут, примерно 170 минут, примерно 3 часов, примерно 4 часов, примерно 5 часов, примерно 6 часов, примерно 7 часов, примерно 8 часов, примерно 9 часов, примерно 10 часов, примерно 11 часов или примерно 12 часов до примерно одного дня.

В некоторых вариантах реализации время отстаивания составляет от примерно 15 минут до примерно 3 часов. В некоторых вариантах реализации время отстаивания составляет от примерно 30 минут до примерно 120 минут.

Любое число в любом из указанных выше диапазонов рассматривается в качестве варианта реализации настоящего раскрытия.

В некоторых вариантах реализации время отстаивания составляет примерно 2 секунды, примерно 10 секунд, примерно 30 секунд, примерно 1 минуту, примерно 5 минут, примерно 10 минут, примерно 15 минут, примерно 20 минут, примерно 25 минут, примерно 30 минут, примерно 35 минут, примерно 40 минут, примерно 45 минут, примерно 50 минут, примерно 55 минут, примерно 60 минут, примерно 65 минут, примерно 70 минут, примерно 75 минут, примерно 80 минут, примерно 85 минут, примерно 90 минут, примерно 95 минут, примерно 100 минут, примерно 105 минут, примерно 110 минут, примерно 115 минут, примерно 120 минут, примерно 125 минут, примерно 130 минут, примерно 135 минут, примерно 140 минут, примерно 145 минут, примерно 150 минут, примерно 155 минут, примерно 160 минут, примерно 170 минут, примерно 3 часа, примерно 3,5 часа, примерно 4 часа, примерно 4,5 часа, примерно 5 часов, примерно 5,5 часа, примерно 6 часов, примерно 6,5 часа, примерно 7 часов, примерно 7,5 часа, примерно 8 часов, примерно 8,5 часа, примерно 9 часов, примерно 10 часов, примерно 11 часов, примерно 12 часов, примерно 13 часов, примерно 14 часов, примерно 15 часов, примерно 16 часов, примерно 17 часов, примерно 18 часов, примерно 19 часов, примерно 20 часов, примерно 21 час, примерно 22 часа, примерно 23 часа, примерно 24 часа, примерно 30 часов, примерно 36 часов, примерно 42 часа, примерно 48 часов, примерно 3 дня, примерно 4 дня, примерно 5 дней, примерно 6 дней, примерно 7 дней, примерно 8 дней, примерно 9 дней, примерно 10 дней, примерно 11 дней, примерно 12 дней, примерно 13 дней, примерно 14 дней или примерно 15 дней.

Предпочтительно время отстаивания составляет от примерно 5, примерно 10, примерно 15, примерно 20, примерно 25, примерно 30, примерно 60, примерно 90, примерно 120, примерно 180, примерно 220, примерно 240, примерно 300, примерно 360, примерно 420, примерно 480, примерно 540, примерно 600, примерно 660, примерно 720, примерно 780, примерно 840, примерно 900, примерно 960, примерно 1020, примерно 1080, примерно 1140, примерно 1200, примерно 1260, примерно 1320, примерно 1380 или примерно 1440 минут до двух дней. В некоторых вариантах реализации время отстаивания составляет от примерно 5 минут до примерно одного дня. В некоторых вариантах реализации время отстаивания составляет от примерно 5 минут до примерно 120 минут.

Время отстаивания может составлять примерно 5 минут, примерно 10 минут, примерно 15 минут, примерно 20 минут, примерно 25 минут, примерно 30 минут, примерно 35 минут, примерно 40 минут, примерно 45 минут, примерно 50 минут, примерно 55 минут, примерно 60 минут, примерно 65 минут, примерно 70 минут, примерно 75 минут, примерно 80 минут, примерно 85 минут, примерно 90 минут, примерно 95 минут, примерно 100 минут, примерно 105 минут, примерно 110 минут, примерно 115 минут, примерно 120 минут, примерно 125 минут, примерно 130 минут, примерно 135 минут, примерно 140 минут, примерно 145 минут, примерно 150 минут, примерно 155 минут или примерно 160 минут.

Любое число в любом из указанных выше диапазонов рассматривается в качестве варианта реализации настоящего раскрытия.

В одном из вариантов реализации необязательную стадию отстаивания проводят без перемешивания. В одном из вариантов реализации необязательную стадию отстаивания проводят при перемешивании. В другом варианте реализации необязательную стадию отстаивания проводят при осторожном перемешивании. В другом варианте реализации необязательную стадию отстаивания проводят при интенсивном перемешивании.

В одном из вариантов реализации настоящего изобретения добавление флокулирующего агента, отстаивание раствора и/или регулирование рН осуществляют при температуре от примерно 4°С до примерно 30°С. В одном из вариантов реализации добавление флокулирующего агента, отстаивание раствора и/или регулирование рН осуществляют при температуре, составляющей примерно 4°С, примерно 5°С, примерно 6°С, примерно 7°С, примерно 8°С, примерно 9°С, примерно 10°С, примерно 11°С, примерно 12°С, примерно 13°С, примерно 14°С, примерно 15°С, примерно 16°С, примерно 17°С, примерно 18°С, примерно 19°С, примерно 20°С, примерно 21°С, примерно 22°С, примерно 23°С, примерно 24°С, примерно 25°С, примерно 26°С, примерно 27°С, примерно 28°С, примерно 29°С или примерно 30°С. В одном из вариантов реализации добавление флокулирующего агента, отстаивание раствора и/или регулирование рН осуществляют при температуре, составляющей примерно 20°С. Авторами изобретения неожиданно было замечено, что флокуляция может быть дополнительно улучшена в случае ее выполнения при повышенной температуре. Следовательно, в конкретном варианте реализации настоящего изобретения добавление флокулирующего агента, отстаивание раствора и/или регулирование рН осуществляют при температуре от примерно 30°С до примерно 95°С. В одном из вариантов реализации добавление флокулирующего агента, отстаивание раствора и/или регулирование рН осуществляют при температуре от примерно 35°С до примерно 80°С, при температуре от примерно 40°С до примерно 70°С, при температуре от примерно 45°С до примерно 65°С, при температуре от примерно 50°С до примерно 60°С, при температуре от примерно 50°С до примерно 55°С, при температуре от примерно 45°С до примерно 55°С или при температуре от примерно 45°С до примерно 55°С. В одном из вариантов реализации добавление флокулирующего агента, отстаивание раствора и/или регулирование рН осуществляют при температуре, составляющей примерно 35°С, примерно 36°С, примерно 37°С, примерно 38°С, примерно 39°С, примерно 40°С, примерно 41°С, примерно 42°С, примерно 43°С, примерно 44°С, примерно 45°С, примерно 46°С, примерно 47°С, примерно 48°С, примерно 49°С, примерно 50°С, примерно 51°С, примерно 52°С, примерно 53°С, примерно 54°С, примерно 55°С, примерно 56°С, примерно 57°С, примерно 58°С, примерно 59°С, примерно 60°С, примерно 61°С, примерно 62°С, примерно 63°С, примерно 64°С, примерно 65°С, примерно 66°С, примерно 67°С, примерно 68°С, примерно 69°С, примерно 70°С, примерно 71°С, примерно 72°С, примерно 73°С, примерно 74°С, примерно 75°С, примерно 76°С, примерно 77°С, примерно 78°С, примерно 79°С или примерно 80°С. В одном из вариантов реализации добавление флокулирующего агента, отстаивание раствора и/или регулирование рН осуществляют при температуре, составляющей примерно 50°С.

Любое число в любом из указанных выше диапазонов рассматривается в качестве варианта реализации настоящего раскрытия.

В одном из вариантов реализации добавление флокулирующего агента осуществляют при любой из указанных выше температур.

В одном из вариантов реализации отстаивание раствора после добавления флокулирующего агента осуществляют при любой из указанных выше температур.

В одном из вариантов реализации регулирование рН осуществляют при любой из указанных выше температур.

В одном из вариантов реализации добавление флокулирующего агента и отстаивание раствора после добавления флокулирующего агента осуществляют при любой из указанных выше температур.

В одном из вариантов реализации добавление флокулирующего агента и регулирование рН осуществляют при любой из указанных выше температур.

В одном из вариантов реализации добавление флокулирующего агента, отстаивание раствора после добавления флокулирующего агента и регулирование рН осуществляют при любой из указанных выше температур.

В одном из вариантов реализации стадия флокуляции включает добавление флокулирующего агента (как описано выше) без регулирования рН.

В одном из вариантов реализации стадия флокуляции включает добавление флокулирующего агента и отстаивание раствора (как описано выше) без регулирования рН.

В одном из вариантов реализации стадия флокуляции включает добавление флокулирующего агента, регулирование рН и отстаивание раствора (как описано выше). В одном из вариантов реализации флокулирующий агент добавляют до регулирования рН. В другом варианте реализации рН регулируют до добавления флокулирующего агента.

В одном из вариантов реализации стадия флокуляции включает добавление флокулирующего агента, отстаивание раствора и регулирование рН (как описано выше). В одном из вариантов реализации добавление флокулирующего агента и отстаивание раствора проводят до регулирования рН. В другом варианте реализации рН регулируют до добавления флокулирующего агента и отстаивания раствора. В одном из вариантов реализации добавление флокулирующего агента и регулирование рН проводят до отстаивания раствора. В другом варианте реализации рН регулируют до добавления флокулирующего агента и отстаивания раствора.

В одном из вариантов реализации стадия флокуляции включает добавление флокулирующего агента, регулирование рН и регулирование температуры (как описано выше).

Эти стадии могут быть выполнены в любом порядке:

- добавление флокулирующего агента с последующим регулированием рН и последующим регулированием температуры; или

- добавление флокулирующего агента с последующим регулированием температуры и последующим регулированием рН; или

- регулирование рН с последующим добавлением флокулирующего агента и последующим регулированием температуры; или

- регулирование рН с последующим регулированием температуры и последующим добавлением флокулирующего агента; или

- регулирование температуры с последующим добавлением флокулирующего агента и последующим регулированием рН; или

- регулирование температуры с последующим регулированием рН и последующим добавлением флокулирующего агента.

Помимо этого, после добавления флокулирующего агента и/или регулирования рН раствор могут выдерживать в течение некоторого времени для обеспечения осаждения хлопьев, после чего проводят дальнейшую обработку.

1.3 Разделение твердой и жидкой фаз

Флокулированный материал может быть отделен от представляющего интерес полисахарида любым подходящим способом разделения твердой и жидкой фаз. Следовательно, в одном из вариантов реализации настоящего изобретения после флокуляции суспензию (полученную согласно разделу 1.2 выше) осветляют путем декантирования, осаждения, фильтрования или центрифугирования. В одном из вариантов реализации содержащий полисахарид раствор затем собирают для хранения и/или дополнительной обработки.

В одном из вариантов реализации настоящего изобретения после флокуляции суспензию (полученную согласно разделу 1.2 выше) осветляют путем декантации. Для разделения жидкостей используют декантеры, если имеется достаточная для осаждения хлопьев разница в плотности жидкостей. В работающем декантере присутствуют три отдельные зоны: не содержащая твердых частиц тяжелая жидкость, разделяемая дисперсионная система (зона разделения) и не содержащая твердых частиц легкая жидкость. Чтобы получить чистый раствор, небольшое количество раствора, как правило, должно быть оставлено в контейнере. Декантеры могут быть выполнены с возможностью непрерывной работы.

В одном из вариантов реализации настоящего изобретения после флокуляции суспензию (полученную согласно разделу 1.2 выше) осветляют путем осаждения (отстаивания). Седиментация представляет собой отделение взвешенных твердых частиц от жидкой смеси путем гравитационного осаждения с получением не содержащей твердых частиц жидкости и суспензии с более высоким содержанием твердых веществ. Осаждение может быть проведено в концентраторе, в аппарате для сгущения или в сортировочном аппарате. Поскольку сгущение и осветление являются относительно дешевыми процессами при использовании для обработки больших объемов жидкости, они могут быть использованы для предварительного концентрирования подаваемого сырья для фильтрования.

В одном из вариантов реализации настоящего изобретения после флокуляции суспензию (полученную согласно разделу 1.2 выше) осветляют путем центрифугирования. В одном из вариантов реализации указанное центрифугирование представляет собой непрерывное центрифугирование. В одном из вариантов реализации указанное центрифугирование представляет собой центрифугирование в бакет-роторе. В одном из вариантов реализации содержащий полисахарид супернатант затем собирают для хранения и/или дополнительной обработки.

В некоторых вариантах реализации суспензию центрифугируют при ускорении, составляющем примерно 1000 g, примерно 2000 g, примерно 3000 g, примерно 4000 g, примерно 5000 g, примерно 6000 g, примерно 8000 g, примерно 9000 g, примерно 10000 g, примерно 11000 g, примерно 12000 g, примерно 13000 g, примерно 14000 g, примерно 15000 g, примерно 16000 g, примерно 17000 g, примерно 18000 g, примерно 19000 g, примерно 20000 g, примерно 25000 g, примерно 30000 g, примерно 35000 g, примерно 40000 g, примерно 50000 g, примерно 60000 g, примерно 70000 g, примерно 80000 g, примерно 90000 g, примерно 100000 g, примерно 120000 g, примерно 140000 g, примерно 160000 g или примерно 180000 g. В некоторых вариантах реализации суспензию центрифугируют при ускорении, составляющем примерно 8000 g, примерно 9000 g, примерно 10000 g, примерно 11000 g, примерно 12000 g, примерно 13000 g, примерно 14000 g, примерно 15000 g, примерно 16000 g, примерно 17000 g, примерно 18000 g, примерно 19000 g, примерно 20000 д или примерно 25000 g. В некоторых вариантах реализации суспензию центрифугируют при ускорении от примерно 5000 g до примерно 25000 g. В некоторых вариантах реализации суспензию центрифугируют при ускорении от примерно 8000 g до примерно 20000 g. В некоторых вариантах реализации суспензию центрифугируют при ускорении от примерно 10000 g до примерно 15000 g. В некоторых вариантах реализации суспензию центрифугируют при ускорении от примерно 10000 g до примерно 12000 g.

Любое число в любом из указанных выше диапазонов рассматривается в качестве варианта реализации настоящего раскрытия.

В некоторых вариантах реализации суспензию центрифугируют в течение по меньшей мере 2, по меньшей мере 3, по меньшей мере 4, по меньшей мере 5, по меньшей мере 10, по меньшей мере 15, по меньшей мере 20, по меньшей мере 25, по меньшей мере 30, по меньшей мере 35, по меньшей мере 40, по меньшей мере 45, по меньшей мере 50, по меньшей мере 55, по меньшей мере 60, по меньшей мере 65, по меньшей мере 70, по меньшей мере 75, по меньшей мере 80, по меньшей мере 85, по меньшей мере 90, по меньшей мере 95, по меньшей мере 100, по меньшей мере 105, по меньшей мере 110, по меньшей мере 115, по меньшей мере 120, по меньшей мере 125, по меньшей мере 130, по меньшей мере 135, по меньшей мере 140, по меньшей мере 145, по меньшей мере 150, по меньшей мере 155 или по меньшей мере 160 минут. Предпочтительно время центрифугирования составляет менее 24 часов.

Следовательно, в некоторых вариантах реализации время центрифугирования суспензии составляет от примерно 5, примерно 10, примерно 15, примерно 20, примерно 30, примерно 40, примерно 50, примерно 60, примерно 70, примерно 80, примерно 90, примерно 100, примерно 120, примерно 140, примерно 160, примерно 180, примерно 220, примерно 240, примерно 300, примерно 360, примерно 420, примерно 480, примерно 540, примерно 600, примерно 660, примерно 720, примерно 780, примерно 840, примерно 900, примерно 960, примерно 1020, примерно 1080, примерно 1140, примерно 1200, примерно 1260, примерно 1320 или примерно 1380 минут до 1440 минут.

Предпочтительно время центрифугирования суспензии составляет от примерно 5, примерно 10, примерно 15, примерно 20, примерно 25, примерно 30, примерно 60, примерно 90, примерно 120, примерно 180, примерно 240, примерно 300, примерно 360, примерно 420, примерно 480 или примерно 540 минут до примерно 600 минут. В некоторых вариантах реализации время центрифугирования суспензии составляет от примерно 5 минут до примерно 3 часов. В некоторых случаях время центрифугирования суспензии составляет от примерно 5 минут до примерно 120 минут.

Время центрифугирования суспензии может составлять от примерно 5 минут, примерно 10 минут, примерно 15 минут, примерно 20 минут, примерно 25 минут, примерно 30 минут, примерно 35 минут, примерно 40 минут, примерно 45 минут, примерно 50 минут, примерно 55 минут, примерно 60 минут, примерно 65 минут, примерно 70 минут, примерно 75 минут, примерно 80 минут, примерно 85 минут, примерно 90 минут, примерно 95 минут, примерно 100 минут, примерно 105 минут, примерно 110 минут, примерно 115 минут, примерно 120 минут, примерно 125 минут, примерно 130 минут, примерно 135 минут, примерно 140 минут, примерно 145 минут, примерно 150 минут или примерно 155 минут до примерно 160 минут. Время центрифугирования суспензии может составлять от примерно 10 минут, примерно 15 минут, примерно 20 минут, примерно 25 минут, примерно 30 минут, примерно 35 минут, примерно 40 минут, примерно 45 минут, примерно 50 минут или примерно 55 минут до примерно 60 минут.

Время центрифугирования суспензии может составлять примерно 5, примерно 10, примерно 15, примерно 20, примерно 30, примерно 40, примерно 50, примерно 60, примерно 70, примерно 80, примерно 90, примерно 100, примерно 120, примерно 140, примерно 160, примерно 180, примерно 220, примерно 240, примерно 300, примерно 360, примерно 420, примерно 480, примерно 540, примерно 600, примерно 660, примерно 720, примерно 780, примерно 840, примерно 900, примерно 960, примерно 1020, примерно 1080, примерно 1140, примерно 1200, примерно 1260, примерно 1320, примерно 1380 минут или примерно 1440 минут. Время центрифугирования суспензии может составлять примерно 5 минут, примерно 10 минут, примерно 15 минут, примерно 20 минут, примерно 25 минут, примерно 30 минут, примерно 35 минут, примерно 40 минут, примерно 45 минут, примерно 50 минут, примерно 55 минут, примерно 60 минут, примерно 65 минут, примерно 70 минут, примерно 75 минут, примерно 80 минут, примерно 85 минут, примерно 90 минут, примерно 95 минут, примерно 100 минут, примерно 105 минут, примерно 110 минут, примерно 115 минут, примерно 120 минут, примерно 125 минут, примерно 130 минут, примерно 135 минут, примерно 140 минут, примерно 145 минут, примерно 150 минут, примерно 155 минут или примерно 160 минут. Время центрифугирования суспензии может составлять примерно 10 минут, примерно 15 минут, примерно 20 минут, примерно 25 минут, примерно 30 минут, примерно 35 минут, примерно 40 минут, примерно 45 минут, примерно 50 минут, примерно 55 минут или примерно 60 минут.

Любое число в любом из указанных выше диапазонов рассматривается в качестве варианта реализации настоящего раскрытия.

В одном из вариантов реализации настоящего изобретения центрифугирование представляет собой непрерывное центрифугирование. В указанном варианте реализации скорость подачи может находиться в диапазоне 50-5000 мл/мин, 100-4000 мл/мин, 150-3000 мл/мин, 200-2500 мл/мин, 250-2000 мл/мин, 300-1500 мл/мин, 300-1000 мл/мин, 200-1000 мл/мин, 200-1500 мл/мин, 400-1500 мл/мин, 500-1500 мл/мин, 500-1000 мл/мин, 500-2000 мл/мин, 500-2500 мл/мин или 1000-2500 мл/мин.

В одном из вариантов реализации скорость подачи может составлять примерно 10, примерно 25, примерно 50, примерно 75, примерно 100, примерно 150, примерно 200, примерно 250, примерно 300, примерно 350, примерно 400, примерно 450, примерно 500, примерно 550, примерно 600, примерно 650, примерно 700, примерно 750, примерно 800, примерно 850, примерно 900, примерно 950, примерно 1000, примерно 1050, примерно 1100, примерно 1150, примерно 1200, примерно 1250, примерно 1300, примерно 1350, примерно 1400, примерно 1450, примерно 1500, примерно 1650, примерно 1700, примерно 1800, примерно 1900, примерно 2000, примерно 2100, примерно 2200, примерно 2300, примерно 2400, примерно 2500, примерно 2600, примерно 2700, примерно 2800, примерно 2900, примерно 3000, примерно 3250, примерно 3500, примерно 3750, примерно 4000, примерно 4250, примерно 4500 или примерно 5000 мл/мин.

В одном из вариантов реализации настоящего изобретения после флокуляции суспензию (полученную согласно разделу 1.2 выше) осветляют путем фильтрования. При фильтрации взвешенные в жидкости твердые частицы удаляют путем пропускания смеси через пористую среду, которая удерживает частицы и пропускает прозрачный фильтрат. Фильтрацию проводят с помощью сит под действием силы тяжести или с помощью фильтров с применением вакуума, давления или центрифугирования. Твердое вещество может удерживаться на поверхности фильтрующей среды, что представляет собой фильтрацию с образованием осадка, или захватываться внутри фильтрующей среды, что представляет собой глубинную фильтрацию. В одном из вариантов реализации после флокуляции суспензию (полученную согласно разделу 1.2 выше) осветляют с помощью микрофильтрации. В одном из вариантов реализации микрофильтрация представляет собой тангенциальную микрофильтрацию. В другом варианте реализации микрофильтрация представляет собой тупиковую фильтрацию (перпендикулярную фильтрацию). В одном из вариантов реализации микрофильтрация представляет собой тупиковую фильтрацию, при которой в качестве вспомогательного фильтрующего материала применяют диатомовую землю (DE), также известную как диатомит DE, для облегчения и повышения эффективности разделения твердой и жидкой фаз. Следовательно, в одном из вариантов реализации после флокуляции суспензию (полученную согласно разделу 1.2 выше) осветляют с помощью тупиковой микрофильтрации, включающей применение диатомовой земли (DE). DE может быть импрегнирована (или включена) в тупиковый фильтр в качестве составной части глубинного фильтра.

В другом формате DE может быть добавлена к раствору после флокуляции (полученному согласно разделу 1.2) в виде порошка. В последнем случае обработанный DE после флокуляции раствор может быть дополнительно осветлен с помощью глубинной фильтрации.

В одном из вариантов реализации раствор обрабатывают с применением стадии микрофильтрации, на которой фильтр имеет номинальный диапазон удерживания, составляющий примерно 0,01-2 мкм, примерно 0,05-2 мкм, примерно 0,1-2 мкм, примерно 0,2-2 мкм, примерно 0,3-2 мкм, примерно 0,4-2 мкм, примерно 0,45-2 мкм, примерно 0,5-2 мкм, примерно 0,6-2 мкм, примерно 0,7-2 мкм, примерно 0,8-2 мкм, примерно 0,9-2 мкм, примерно 1-2 мкм, примерно 1,25-2 мкм, примерно 1,5-2 мкм или примерно 1,75-2 мкм.

В одном из вариантов реализации раствор обрабатывают с применением стадии микрофильтрации, на которой фильтр имеет номинальный диапазон удерживания, составляющий примерно 0,01-1 мкм, примерно 0,05-1 мкм, примерно 0,1-1 мкм, примерно 0,2-1 мкм, примерно 0,3-1 мкм, примерно 0,4-1 мкм, примерно 0,45-1 мкм, примерно 0,5-1 мкм, примерно 0,6-1 мкм, примерно 0,7-1 мкм, примерно 0,8-1 мкм или примерно 0,9-1 мкм.

Любое число в любом из указанных выше диапазонов рассматривается в качестве варианта реализации настоящего раскрытия.

В одном из вариантов реализации раствор обрабатывают с применением стадии микрофильтрации, на которой фильтр имеет номинальный рейтинг фильтрации, составляющий примерно 0,01, примерно 0,05, примерно 0,1, примерно 0,2, примерно 0,3, примерно 0,4, примерно 0,45, примерно 0,5, примерно 0,6, примерно 0,7, примерно 0,8, примерно 0,9, примерно 1, примерно 1,1, примерно 1,2, примерно 1,3, примерно 1,4, примерно 1,5, примерно 1,6, примерно 1,7, примерно 1,8, примерно 1,9 или примерно 2 мкм.

В одном из вариантов реализации раствор обрабатывают с применением стадии микрофильтрации, на которой фильтр имеет номинальный рейтинг фильтрации, составляющий примерно 0,45 мкм.

В одном из вариантов реализации раствор обрабатывают с применением стадии микрофильтрации, на которой фильтр имеет производительность в диапазоне 100-5000 л/м², 200-5000 л/м², 300-5000 л/м², 400-5000 л/м², 500-5000 л/м², 750-5000 л/м², 1000-5000 л/м², 1500-5000 л/м², 2000-5000 л/м², 3000-5000 л/м² или 4000-5000 л/м2. В одном из вариантов реализации раствор обрабатывают с применением стадии микрофильтрации, на которой фильтр имеет производительность в диапазоне 100-2500 л/м², 200-2500 л/м², 300-2500 л/м², 400-2500 л/м², 500-2500 л/м², 750-2500 л/м², 1000-2500 л/м², 1500-2500 л/м² или 2000-2500 л/м².

В одном из вариантов реализации раствор обрабатывают с применением стадии микрофильтрации, на которой фильтр имеет производительность в диапазоне 100-1500 л/м², 200-1500 л/м², 300-1500 л/м², 400-1500 л/м², 500-1500 л/м², 750-1500 л/м² или 1000-1500 л/м².

В одном из вариантов реализации раствор обрабатывают с применением стадии микрофильтрации, на которой фильтр имеет производительность в диапазоне 100-1250 л/м², 200-1250 л/м², 300-1250 л/м², 400-1250 л/м², 500-1250 л/м², 750-1250 л/м² или 1000-1250 л/м².

В одном из вариантов реализации раствор обрабатывают с применением стадии микрофильтрации, на которой фильтр имеет производительность в диапазоне 100-1000 л/м², 200-1000 л/м², 300-1000 л/м², 400-1000 л/м², 500-1000 л/м² или 750-1000 л/м².

В одном из вариантов реализации раствор обрабатывают с применением стадии микрофильтрации, на которой фильтр имеет производительность в диапазоне 100-750 л/м², 200-750 л/м², 300-750 л/м², 400-750 л/м² или 500-750 л/м².

В одном из вариантов реализации раствор обрабатывают с применением стадии микрофильтрации, на которой фильтр имеет производительность в диапазоне 100-600 л/м², 200-600 л/м², 300-600 л/м², 400-600 л/м² или 400-600 л/м².

В одном из вариантов реализации раствор обрабатывают с применением стадии микрофильтрации, на которой фильтр имеет производительность в диапазоне 100-500 л/м², 200-500 л/м², 300-500 л/м² или 400-500 л/м².

Любое число в любом из указанных выше диапазонов рассматривается в качестве варианта реализации настоящего раскрытия.

В одном из вариантов реализации раствор обрабатывают с применением стадии микрофильтрации, на которой фильтр имеет производительность, составляющую примерно 100, примерно 150, примерно 200, примерно 250, примерно 300, примерно 350, примерно 400, примерно 450, примерно 500, примерно 550, примерно 600, примерно 650, примерно 700, примерно 750, примерно 800, примерно 850, примерно 900, примерно 950, примерно 1000, примерно 1050, примерно 1100, примерно 1150, примерно 1200, примерно 1250, примерно 1300, примерно 1350, примерно 1400, примерно 1450, примерно 1500, примерно 1550, примерно 1600, примерно 1650, примерно 1700, примерно 1750, примерно 1800, примерно 1850, примерно 1900, примерно 1950, примерно 2000, примерно 2050, примерно 2100, примерно 2150, примерно 2200, примерно 2250, примерно 2300, примерно 2350, примерно 2400, примерно 2450 или примерно 2500 л/м².

Описанные выше способы разделения твердой и жидкой фаз могут быть применены в отдельно, или в виде комбинации двух способов в любом порядке, или в виде комбинации трех способов в любом порядке.

1.4 Фильтрация (например, глубинная фильтрация)

После обработки раствора на стадии флокуляции, описанной в разделе 1.2 выше, и/или с применением стадии разделения твердой и жидкой фаз, описанной в разделе 1.3 выше, полученный содержащий полисахарид раствор (например, супернатант) может быть необязательно дополнительно осветлен.

В одном из вариантов реализации раствор фильтруют, в результате чего получают дополнительно осветленный раствор. В одном из вариантов реализации фильтрацию применяют непосредственно к раствору, полученному любым из способов, описанных в разделе 1.2 выше. В одном из вариантов реализации фильтрацию применяют к раствору, дополнительно осветленному на стадии разделения твердой и жидкой фаз, описанной в разделе 1.3 выше.

В одном из вариантов реализации раствор обрабатывают с применением стадии фильтрации, выбранной из группы, состоящей из глубинной фильтрации, фильтрации с помощью активированного угля, гель-фильтрации, диафильтрации и ультрафильтрации. В одном из вариантов реализации раствор обрабатывают с применением стадии диафильтрации, в частности, тангенциальной поточной фильтрации. В одном из вариантов реализации раствор обрабатывают с применением стадии глубинной фильтрации.

В глубинных фильтрах применяют пористую фильтрующую среду для удержания частиц во всем объеме среды, а не только на поверхности среды. Вследствие извилистой и пористой структуры фильтрующей среды частицы удерживаются во всем объеме среды в пределах ее структуры, а не на поверхности.

В одном из вариантов реализации раствор обрабатывают с применением стадии глубинной фильтрации, на которой конструкция глубинного фильтра выбрана из группы, состоящей из кассет, картриджей, глубинных фильтров (например, песчаного фильтра) и линзовидных фильтров.

В одном из вариантов реализации раствор обрабатывают с применением стадии глубинной фильтрации, на которой глубинный фильтр имеет номинальный диапазон удерживания, составляющий примерно 0,01-100 мкм, примерно 0,05-100 мкм, примерно 0,1-100 мкм, примерно 0,2-100 мкм, примерно 0,3-100 мкм, примерно 0,4-100 мкм, примерно 0,5-100 мкм, примерно 0,6-100 мкм, примерно 0,7-100 мкм, примерно 0,8-100 мкм, примерно 0,9-100 мкм, примерно 1-100 мкм, примерно 1,25-100 мкм, примерно 1,5-100 мкм, примерно 1,75-100 мкм, примерно 2-100 мкм, примерно 3-100 мкм, примерно 4-100 мкм, примерно 5-100 мкм, примерно 6-100 мкм, примерно 7-100 мкм, примерно 8-100 мкм, примерно 9-100 мкм, примерно 10-100 мкм, примерно 15-100 мкм, примерно 20-100 мкм, примерно 25-100 мкм, примерно 30-100 мкм, примерно 40-100 мкм, примерно 50-100 мкм или примерно 75-100 мкм.

В одном из вариантов реализации раствор обрабатывают с применением стадии глубинной фильтрации, на которой глубинный фильтр имеет номинальный диапазон удерживания, составляющий примерно 0,01-75 мкм, примерно 0,05-75 мкм, примерно 0,1-75 мкм, примерно 0,2-75 мкм, примерно 0,3-75 мкм, примерно 0,4-75 мкм, примерно 0,5-75 мкм, примерно 0,6-75 мкм, примерно 0,7-75 мкм, примерно 0,8-75 мкм, примерно 0,9-75 мкм, примерно 1-75 мкм, примерно 1,25-75 мкм, примерно 1,5-75 мкм, примерно 1,75-75 мкм, примерно 2-75 мкм, примерно 3-75 мкм, примерно 4-75 мкм, примерно 5-75 мкм, примерно 6-75 мкм, примерно 7-75 мкм, примерно 8-75 мкм, примерно 9-75 мкм, примерно 10-75 мкм, примерно 15-75 мкм, примерно 20-75 мкм, примерно 25-75 мкм, примерно 30-75 мкм, примерно 40-75 мкм или примерно 50-75 мкм.

В одном из вариантов реализации раствор обрабатывают с применением стадии глубинной фильтрации, на которой глубинный фильтр имеет номинальный диапазон удерживания, составляющий примерно 0,01-50 мкм, примерно 0,05-50 мкм, примерно 0,1-50 мкм, примерно 0,2-50 мкм, примерно 0,3-50 мкм, примерно 0,4-50 мкм, примерно 0,5-50 мкм, примерно 0,6-50 мкм, примерно 0,7-50 мкм, примерно 0,8-50 мкм, примерно 0,9-50 мкм, примерно 1-50 мкм, примерно 1,25-50 мкм, примерно 1,5-50 мкм, примерно 1,75-50 мкм, примерно 2-50 мкм, примерно 3-50 мкм, примерно 4-50 мкм, примерно 5-50 мкм, примерно 6-50 мкм, примерно 7-50 мкм, примерно 8-50 мкм, примерно 9-50 мкм, примерно 10-50 мкм, примерно 15-50 мкм, примерно 20-50 мкм, примерно 25-50 мкм, примерно 30-50 мкм, примерно 40-50 мкм или примерно 50-50 мкм.

В одном из вариантов реализации раствор обрабатывают с применением стадии глубинной фильтрации, на которой глубинный фильтр имеет номинальный диапазон удерживания, составляющий примерно 0,01-25 мкм, примерно 0,05-25 мкм, примерно 0,1-25 мкм, примерно 0,2-25 мкм, примерно 0,3-25 мкм, примерно 0,4-25 мкм, примерно 0,5-25 мкм, примерно 0,6-25 мкм, примерно 0,7-25 мкм, примерно 0,8-25 мкм, примерно 0,9-25 мкм, примерно 1-25 мкм, примерно 1,25-25 мкм, примерно 1,5-25 мкм, примерно 1,75-25 мкм, примерно 2-25 мкм, примерно 3-25 мкм, примерно 4-25 мкм, примерно 5-25 мкм, примерно 6-25 мкм, примерно 7-25 мкм, примерно 8-25 мкм, примерно 9-25 мкм, примерно 10-25 мкм, примерно 15-25 мкм или примерно 20-25 мкм.

В одном из вариантов реализации раствор обрабатывают с применением стадии глубинной фильтрации, на которой глубинный фильтр имеет номинальный диапазон удерживания, составляющий примерно 0,01-10 мкм, примерно 0,05-10 мкм, примерно 0,1-10 мкм, примерно 0,2-10 мкм, примерно 0,3-10 мкм, примерно 0,4-10 мкм, примерно 0,5-10 мкм, примерно 0,6-10 мкм, примерно 0,7-10 мкм, примерно 0,8-10 мкм, примерно 0,9-10 мкм, примерно 1-10 мкм, примерно 1,25-10 мкм, примерно 1,5-10 мкм, примерно 1,75-10 мкм, примерно 2-10 мкм, примерно 3-10 мкм, примерно 4-10 мкм, примерно 5-10 мкм, примерно 6-10 мкм, примерно 7-10 мкм, примерно 8-10 мкм или примерно 9-10 мкм.

В одном из вариантов реализации раствор обрабатывают с применением стадии глубинной фильтрации, на которой глубинный фильтр имеет номинальный диапазон удерживания, составляющий примерно 0,01-8 мкм, примерно 0,05-8 мкм, примерно 0,1-8 мкм, примерно 0,2-8 мкм, примерно 0,3-8 мкм, примерно 0,4-8 мкм, примерно 0,5-8 мкм, примерно 0,6-8 мкм, примерно 0,7-8 мкм, примерно 0,8-8 мкм, примерно 0,9-8 мкм, примерно 1-8 мкм, примерно 1,25-8 мкм, примерно 1,5-8 мкм, примерно 1,75-8 мкм, примерно 2-8 мкм, примерно 3-8 мкм, примерно 4-8 мкм, примерно 5-8 мкм, примерно 6-8 мкм или примерно 7-8 мкм. В одном из вариантов реализации раствор обрабатывают с применением стадии глубинной фильтрации, на которой глубинный фильтр имеет номинальный диапазон удерживания, составляющий примерно 0,01-5 мкм, примерно 0,05-5 мкм, примерно 0,1-5 мкм, примерно 0,2-5 мкм, примерно 0,3-5 мкм, примерно 0,4-5 мкм, примерно 0,5-5 мкм, примерно 0,6-5 мкм, примерно 0,7-5 мкм, примерно 0,8-5 мкм, примерно 0,9-5 мкм, примерно 1-5 мкм, примерно 1,25-5 мкм, примерно 1,5-5 мкм, примерно 1,75-5 мкм, примерно 2-5 мкм, примерно 3-5 мкм или примерно 4-5 мкм. В одном из вариантов реализации раствор обрабатывают с применением стадии глубинной фильтрации, на которой глубинный фильтр имеет номинальный диапазон удерживания, составляющий примерно 0,01-2 мкм, примерно 0,05-2 мкм, примерно 0,1-2 мкм, примерно 0,2-2 мкм, примерно 0,3-2 мкм, примерно 0,4-2 мкм, примерно 0,5-2 мкм, примерно 0,6-2 мкм, примерно 0,7-2 мкм, примерно 0,8-2 мкм, примерно 0,9-2 мкм, примерно 1-2 мкм, примерно 1,25-2 мкм, примерно 1,5-2 мкм, примерно 1,75-2 мкм, примерно 2-2 мкм, примерно 3-2 мкм или примерно 4-2 мкм. В одном из вариантов реализации раствор обрабатывают с применением стадии глубинной фильтрации, на которой глубинный фильтр имеет номинальный диапазон удерживания, составляющий примерно 0,01-1 мкм, примерно 0,05-1 мкм, примерно 0,1-1 мкм, примерно 0,2-1 мкм, примерно 0,3-1 мкм, примерно 0,4-1 мкм, примерно 0,5-1 мкм, примерно 0,6-1 мкм, примерно 0,7-1 мкм, примерно 0,8-1 мкм или примерно 0,9-1 мкм.

В одном из вариантов реализации раствор обрабатывают с применением стадии глубинной фильтрации, на которой глубинный фильтр имеет номинальный диапазон удерживания, составляющий примерно 0,05-50 мкм, 0,1-25 мкм, 0,2-10 мкм, 0,1-10 мкм, 0,2-5 мкм или 0,25-1 мкм.

Любое число в любом из указанных выше диапазонов рассматривается в качестве варианта реализации настоящего раскрытия.

В одном из вариантов реализации раствор обрабатывают с применением стадии глубинной фильтрации, на которой глубинный фильтр имеет производительность, составляющую 1-2500 л/м², 5-2500 л/м², 10-2500 л/м², 25-2500 л/м², 50-2500 л/м², 75-2500 л/м², 100-2500 л/м², 150-2500 л/м², 200-2500 л/м², 300-2500 л/м², 400-2500 л/м², 500-2500 л/м², 750-2500 л/м², 1000-2500 л/м², 1500-2500 л/м² или 2000-2500 л/м².

В одном из вариантов реализации раствор обрабатывают с применением стадии глубинной фильтрации, на которой глубинный фильтр имеет производительность, составляющую 1-1000 л/м², 5-1000 л/м², 10-1000 л/м², 25-1000 л/м², 50-1000 л/м², 75-1000 л/м², 100-1000 л/м², 150-1000 л/м², 200-1000 л/м², 300-1000 л/м², 400-1000 л/м², 500-1000 л/м² или 750-1000 л/м².

В одном из вариантов реализации раствор обрабатывают с применением стадии глубинной фильтрации, на которой глубинный фильтр имеет производительность, составляющую 1-750 л/м², 5-750 л/м², 10-750 л/м², 25-750 л/м², 50-750 л/м², 75-750 л/м², 100-750 л/м², 150-750 л/м², 200-750 л/м², 300-750 л/м², 400-750 л/м² или 500-750 л/м².

В одном из вариантов реализации раствор обрабатывают с применением стадии глубинной фильтрации, на которой глубинный фильтр имеет производительность, составляющую 1-500 л/м², 5-500 л/м², 10-500 л/м², 25-500 л/м², 50-500 л/м², 75-500 л/м², 100-500 л/м², 150-500 л/м², 200-500 л/м², 300-500 л/м² или 400-500 л/м². В одном из вариантов реализации раствор обрабатывают с применением стадии глубинной фильтрации, на которой глубинный фильтр имеет производительность, составляющую 1-400 л/м², 5-400 л/м², 10-400 л/м², 25-400 л/м², 50-400 л/м², 75-400 л/м², 100-400 л/м², 150-400 л/м², 200-400 л/м² или 300-400 л/м². В одном из вариантов реализации раствор обрабатывают с применением стадии глубинной фильтрации, на которой глубинный фильтр имеет производительность, составляющую 1-300 л/м², 5-300 л/м², 10-300 л/м², 25-300 л/м², 50-300 л/м², 75-300 л/м², 100-300 л/м², 150-300 л/м² или 200-300 л/м².

В одном из вариантов реализации, раствор обрабатывают с применением стадии глубинной фильтрации, на которой глубинный фильтр имеет производительность, составляющую 1-200 л/м², 5-200 л/м², 10-200 л/м², 25-200 л/м², 50-200 л/м², 75-200 л/м², 100-200 л/м² или 150-200 л/м².

В одном из вариантов реализации раствор обрабатывают с применением стадии глубинной фильтрации, на которой глубинный фильтр имеет производительность, составляющую 1-100 л/м², 5-100 л/м², 10-100 л/м², 25-100 л/м², 50-100 л/м² или 75-100 л/м².

В одном из вариантов реализации раствор обрабатывают с применением стадии глубинной фильтрации, на которой глубинный фильтр имеет производительность, составляющую 1-50 л/м², 5-50 л/м², 10-50 л/м² или 25-50 л/м². Любое целое число в любом из указанных выше диапазонов рассматривается в качестве варианта реализации настоящего раскрытия.

В одном из вариантов реализации раствор обрабатывают с применением стадии глубинной фильтрации, на которой скорость подачи составляет 1-1000 LMH (л/м²/час, liters/m²/hour), 10-1000 LMH, 25-1000 LMH, 50-1000 LMH, 100-1000 LMH, 125-1000 LMH, 150-1000 LMH, 200-1000 LMH, 250-1000 LMH, 300-1000 LMH, 400-1000 LMH, 500-1000 LMH, 600-1000 LMH, 700-1000 LMH, 800-1000 LMH или 900-1000 LMH.

В одном из вариантов реализации раствор обрабатывают с применением стадии глубинной фильтрации, на которой скорость подачи составляет 1-500 LMH, 10-500 LMH, 25-500 LMH, 50-500 LMH, 100-500 LMH, 125-500 LMH, 150-500 LMH, 200-500 LMH, 250-500 LMH, 300-500 LMH или 400-500 LMH.

В одном из вариантов реализации раствор обрабатывают с применением стадии глубинной фильтрации, на которой скорость подачи составляет 1-400 LMH, 10-400 LMH, 25-400 LMH, 50-400 LMH, 100-400 LMH, 125-400 LMH, 150-400 LMH, 200-400 LMH, 250-400 LMH или 300-400 LMH.

В одном из вариантов реализации раствор обрабатывают с применением стадии глубинной фильтрации, на которой скорость подачи составляет 1-250 LMH, 10-250 LMH, 25-250 LMH, 50-250 LMH, 100-250 LMH, 125-250 LMH, 150-250 LMH или 200-250 LMH.

Любое число в любом из указанных выше диапазонов рассматривается в качестве варианта реализации настоящего раскрытия.

В одном из вариантов реализации раствор обрабатывают с применением стадии глубинной фильтрации, на которой скорость подачи составляет примерно 1, примерно 2, примерно 5, примерно 10, примерно 25, примерно 50, примерно 60, примерно 70, примерно 80, примерно 90, примерно 100, примерно 110, примерно 120, примерно 130, примерно 140, примерно 150, примерно 160, примерно 170, примерно 180, примерно 190, примерно 200, примерно 210, примерно 220, примерно 230, примерно 240, примерно 250, примерно 260, примерно 270, примерно 280, примерно 290, примерно 300, примерно 310, примерно 320, примерно 330, примерно 340, примерно 350, примерно 360, примерно 370, примерно 380, примерно 390, примерно 400, примерно 425, примерно 450, примерно 475, примерно 500, примерно 525, примерно 550, примерно 575, примерно 600, примерно 650, примерно 700, примерно 750, примерно 800, примерно 850, примерно 900, примерно 950 или примерно 1000 LMH.

1.5 Необязательная дополнительная фильтрация

После обработки раствора на стадии фильтрации, описанной в разделе 1.4 выше, полученный раствор (то есть фильтрат) может быть дополнительно осветлен. В одном из вариантов реализации раствор подвергают микрофильтрации. В одном из вариантов реализации микрофильтрация представляет собой тупиковую фильтрацию (перпендикулярную фильтрацию). В одном из вариантов реализации микрофильтрация представляет собой тангенциальную микрофильтрацию.

В одном из вариантов реализации раствор обрабатывают с применением стадии микрофильтрации, на которой фильтр имеет номинальный диапазон удерживания, составляющий примерно 0,01-2 мкм, примерно 0,05-2 мкм, примерно 0,1-2 мкм, примерно 0,2-2 мкм, примерно 0,3-2 мкм, примерно 0,4-2 мкм, примерно 0,45-2 мкм, примерно 0,5-2 мкм, примерно 0,6-2 мкм, примерно 0,7-2 мкм, примерно 0,8-2 мкм, примерно 0,9-2 мкм, примерно 1-2 мкм, примерно 1,25-2 мкм, примерно 1,5-2 мкм или примерно 1,75-2 мкм.

В одном из вариантов реализации раствор обрабатывают с применением стадии глубинной фильтрации, на которой фильтр имеет номинальный диапазон удерживания, составляющий примерно 0,01-1 мкм, примерно 0,05-1 мкм, примерно 0,1-1 мкм, примерно 0,2-1 мкм, примерно 0,3-1 мкм, примерно 0,4-1 мкм, примерно 0,45-1 мкм, примерно 0,5-1 мкм, примерно 0,6-1 мкм, примерно 0,7-1 мкм, примерно 0,8-1 мкм или примерно 0,9-1 мкм.

Любое число в любом из указанных выше диапазонов рассматривается в качестве варианта реализации настоящего раскрытия.

В одном из вариантов реализации раствор обрабатывают с применением стадии микрофильтрации, на которой фильтр имеет номинальный рейтинг фильтрации, составляющий примерно 0,01, примерно 0,05, примерно 0,1, примерно 0,2, примерно 0,3, примерно 0,4, примерно 0,45, примерно 0,5, примерно 0,6, примерно 0,7, примерно 0,8, примерно 0,9, примерно 1, примерно 1,1, примерно 1,2, примерно 1,3, примерно 1,4, примерно 1,5, примерно 1,6, примерно 1,7, примерно 1,8, примерно 1,9 или примерно 2 мкм.

В одном из вариантов реализации раствор обрабатывают с применением стадии микрофильтрации, на которой фильтр имеет номинальный рейтинг фильтрации, составляющий примерно 0,45 мкм.

В одном из вариантов реализации раствор обрабатывают с применением стадии микрофильтрации, на которой фильтр имеет производительность в диапазоне 100-5000 л/м², 200-5000 л/м², 300-5000 л/м², 400-5000 л/м², 500-5000 л/м², 750-5000 л/м², 1000-5000 л/м², 1500-5000 л/м², 2000-5000 л/м², 3000-5000 л/м² или 4000-5000 л/м². В одном из вариантов реализации раствор обрабатывают с применением стадии микрофильтрации, на которой фильтр имеет производительность в диапазоне 100-2500 л/м², 200-2500 л/м², 300-2500 л/м², 400-2500 л/м², 500-2500 л/м², 750-2500 л/м², 1000-2500 л/м², 1500-2500 л/м² или 2000-2500 л/м².

В одном из вариантов реализации раствор обрабатывают с применением стадии микрофильтрации, на которой фильтр имеет производительность в диапазоне 100-1500 л/м², 200-1500 л/м², 300-1500 л/м², 400-1500 л/м², 500-1500 л/м², 750-1500 л/м² или 1000-1500 л/м².

В одном из вариантов реализации раствор обрабатывают с применением стадии микрофильтрации, на которой фильтр имеет производительность в диапазоне 100-1250 л/м², 200-1250 л/м², 300-1250 л/м², 400-1250 л/м², 500-1250 л/м², 750-1250 л/м² или 1000-1250 л/м².

В одном из вариантов реализации раствор обрабатывают с применением стадии микрофильтрации, на которой фильтр имеет производительность в диапазоне 100-1000 л/м², 200-1000 л/м², 300-1000 л/м², 400-1000 л/м², 500-1000 л/м² или 750-1000 л/м².

В одном из вариантов реализации раствор обрабатывают с применением стадии микрофильтрации, на которой фильтр имеет производительность в диапазоне 100-750 л/м², 200-750 л/м², 300-750 л/м², 400-750 л/м² или 500-750 л/м².

В одном из вариантов реализации раствор обрабатывают с применением стадии микрофильтрации, на которой фильтр имеет производительность в диапазоне 100-600 л/м², 200-600 л/м², 300-600 л/м², 400-600 л/м² или 400-600 л/м².

В одном из вариантов реализации раствор обрабатывают с применением стадии микрофильтрации, на которой фильтр имеет производительность в диапазоне 100-500 л/м², 200-500 л/м², 300-500 л/м² или 400-500 л/м².

Любое число в любом из указанных выше диапазонов рассматривается в качестве варианта реализации настоящего раскрытия.

В одном из вариантов реализации раствор обрабатывают с применением стадии микрофильтрации, на которой фильтр имеет производительность, составляющую примерно 100, примерно 150, примерно 200, примерно 250, примерно 300, примерно 350, примерно 400, примерно 450, примерно 500, примерно 550, примерно 600, примерно 650, примерно 700, примерно 750, примерно 800, примерно 850, примерно 900, примерно 950, примерно 1000, примерно 1050, примерно 1100, примерно 1150, примерно 1200, примерно 1250, примерно 1300, примерно 1350, примерно 1400, примерно 1450, примерно 1500, примерно 1550, примерно 1600, примерно 1650, примерно 1700, примерно 1750, примерно 1800, примерно 1850, примерно 1900, примерно 1950, примерно 2000, примерно 2050, примерно 2100, примерно 2150, примерно 2200, примерно 2250, примерно 2300, примерно 2350, примерно 2400, примерно 2450 или примерно 2500 л/м².

1.6 Ультрафильтрация и/или диафильтрация

После фильтрации раствора любым способом, описанным в разделе 1.4 выше, и/или с применением стадии фильтрации, описанной в разделе 1.5 выше, полученный раствор (то есть фильтрат) необязательно может быть дополнительно осветлен с помощью ультрафильтрации и/или диафильтрации.

Ультрафильтрация (УФ) представляет собой процесс концентрирования потока разбавленного продукта. УФ позволяет разделить молекулы в растворе в соответствии с размером пор мембраны или порогом отсечения по молекулярной массе (molecular weight cutoff, MWCO).

В одном из вариантов реализации настоящего изобретения раствор (например, фильтрат, полученный согласно разделу 1.5 или 1.6 выше) обрабатывают с помощью ультрафильтрации.

В одном из вариантов реализации раствор обрабатывают с помощью ультрафильтрации, и мембрана имеет порог отсечения по молекулярной массе в диапазоне от примерно 5 кДа до 1000 кДа. В одном из вариантов реализации мембрана имеет порог отсечения по молекулярной массе в диапазоне от примерно 10 кДа до 750 кДа. В одном из вариантов реализации мембрана имеет порог отсечения по молекулярной массе в диапазоне от примерно 10 кДа до 500 кДа. В одном из вариантов реализации мембрана имеет порог отсечения по молекулярной массе в диапазоне от примерно 10 кДа до 300 кДа. В одном из вариантов реализации мембрана имеет порог отсечения по молекулярной массе в диапазоне от примерно 10 кДа до 100 кДа. В одном из вариантов реализации мембрана имеет порог отсечения по молекулярной массе в диапазоне от примерно 10 кДа до 50 кДа. В одном из вариантов реализации мембрана имеет порог отсечения по молекулярной массе в диапазоне от примерно 10 кДа до 30 кДа. В одном из вариантов реализации мембрана имеет порог отсечения по молекулярной массе в диапазоне от примерно 5 кДа до 1000 кДа, от примерно 10 кДа до 1000 кДа, от примерно 20 кДа до 1000 кДа, от примерно 30 кДа до 1000 кДа, от примерно 40 кДа до 1000 кДа, от примерно 50 кДа до 1000 кДа, от примерно 75 кДа до 1000 кДа, от примерно 100 кДа до 1000 кДа, от примерно 150 кДа до 1000 кДа, от примерно 200 кДа до 1000 кДа, от примерно 300 кДа до 1000 кДа, от примерно 400 кДа до 1000 кДа, от примерно 500 кДа до 1000 кДа или от примерно 750 кДа до 1000 кДа. В одном из вариантов реализации мембрана имеет порог отсечения по молекулярной массе в диапазоне от примерно 5 кДа до 500 кДа, от примерно 10 кДа до 500 кДа, от примерно 20 кДа до 500 кДа, от примерно 30 кДа до 500 кДа, от примерно 40 кДа до 500 кДа, от примерно 50 кДа до 500 кДа, от примерно 75 кДа до 500 кДа, от примерно 100 кДа до 500 кДа, от примерно 150 кДа до 500 кДа, от примерно 200 кДа до 500 кДа, от примерно 300 кДа до 500 кДа или от примерно 400 кДа до 500 кДа.

В одном из вариантов реализации мембрана имеет порог отсечения по молекулярной массе в диапазоне от примерно 5 кДа до 300 кДа, от примерно 10 кДа до 300 кДа, от примерно 20 кДа до 300 кДа, от примерно 30 кДа до 300 кДа, от примерно 40 кДа до 300 кДа, от примерно 50 кДа до 300 кДа, от примерно 75 кДа до 300 кДа, от примерно 100 кДа до 300 кДа, от примерно 150 кДа до 300 кДа или от примерно 200 кДа до 300 кДа.

В одном из вариантов реализации мембрана имеет порог отсечения по молекулярной массе в диапазоне от примерно 5 кДа до 100 кДа, от примерно 10 кДа до 100 кДа, от примерно 20 кДа до 100 кДа, от примерно 30 кДа до 100 кДа, от примерно 40 кДа до 100 кДа, от примерно 50 кДа до 100 кДа или от примерно 75 кДа до 100 кДа.

В одном из вариантов реализации мембрана имеет порог отсечения по молекулярной массе, составляющий примерно 5 кДа, примерно 10 кДа, примерно 20 кДа, примерно 30 кДа, примерно 40 кДа, примерно 50 кДа, примерно 60 кДа, примерно 70 кДа, примерно 80 кДа, примерно 90 кДа, примерно 100 кДа, примерно 110 кДа, примерно 120 кДа, примерно 130 кДа, примерно 140 кДа, примерно 150 кДа, примерно 200 кДа, примерно 250 кДа, примерно 300 кДа, примерно 400 кДа, примерно 500 кДа, примерно 750 кДа или примерно 1000 кДа.

В одном из вариантов реализации коэффициент концентрирования на стадии ультрафильтрации составляет от примерно 1,5 до 10. В одном из вариантов реализации коэффициент концентрирования составляет от примерно 2 до 8. В одном из вариантов реализации коэффициент концентрирования составляет от примерно 2 до 5.

В одном из вариантов реализации коэффициент концентрирования составляет примерно 1,5, примерно 2,0, примерно 2,5, примерно 3,0, примерно 3,5, примерно 4,0, примерно 4,5, примерно 5,0, примерно 5,5, примерно 6,0, примерно 6,5, примерно 7,0, примерно 7,5, примерно 8,0, примерно 8,5, примерно 9,0, примерно 9,5 или примерно 10,0. В одном из вариантов реализации коэффициент концентрирования составляет примерно 2, примерно 3, примерно 4, примерно 5 или примерно 6.

В одном из вариантов реализации настоящего изобретения раствор (например, фильтрат, полученный согласно разделу 1.4 или 1.5 выше) обрабатывают с помощью диафильтрации.

В одном из вариантов реализации настоящего изобретения раствор, полученный после ультрафильтрации (УФ), как раскрыто в настоящем разделе выше, дополнительно обрабатывают с помощью диафильтрации (обработка УФ/ДФ).

Диафильтрацию (ДФ) применяют для перевода продукта в желаемый буферный раствор (или только воду). В одном из вариантов реализации диафильтрацию применяют для изменения химических свойств удерживаемого раствора при постоянном объеме. Нежелательные частицы проходят через мембрану, в то время как состав подаваемого потока изменяется до более желательного состояния путем добавления замещающего раствора (буферного раствора, солевого раствора, буферного солевого раствора или воды).

В одном из вариантов реализации замещающий раствор представляет собой воду.

В одном из вариантов реализации замещающий раствор представляет собой раствор соли в воде. В некоторых вариантах реализации соль выбрана из группы, состоящей из хлорида магния, хлорида калия, хлорида натрия и их комбинации. В одном конкретном варианте реализации соль представляет собой хлорид натрия. В одном из вариантов реализации замещающий раствор представляет собой хлорид натрия в концентрации примерно 1 мМ, примерно 5 мМ, примерно 10 мМ, примерно 15 мМ, примерно 20 мМ, примерно 25 мМ, примерно 30 мМ, примерно 35 мМ, примерно 40 мМ, примерно 45 мМ, примерно 50 мМ, примерно 55 мМ, примерно 60 мМ, примерно 65 мМ, примерно 70 мМ, примерно 80 мМ, примерно 90 мМ, примерно 100 мМ, примерно 110 мМ, примерно 120 мМ, примерно 130 мМ, примерно 140 мМ, примерно 150 мМ, примерно 160 мМ, примерно 170 мМ, примерно 180 мМ, примерно 190 мМ, примерно 200 мМ, примерно 250 мМ, примерно 300 мМ, примерно 350 мМ, примерно 400 мМ, примерно 450 мМ или примерно 500 мМ. В одном конкретном варианте реализации замещающий раствор представляет собой хлорид натрия в концентрации примерно 1 мМ, примерно 5 мМ, примерно 10 мМ, примерно 15 мМ, примерно 20 мМ, примерно 25 мМ, примерно 30 мМ, примерно 35 мМ, примерно 40 мМ, примерно 45 мМ, примерно 50 мМ, примерно 55 мМ, примерно 60 мМ, примерно 65 мМ, примерно 70 мМ, примерно 80 мМ, примерно 90 мМ, примерно 100 мМ, примерно 110 мМ, примерно 120 мМ, примерно 130 мМ, примерно 140 мМ, примерно 150 мМ, примерно 160 мМ, примерно 170 мМ, примерно 180 мМ, примерно 190 мМ, примерно 200 мМ, примерно 250 мМ или примерно 300 мМ.

В одном из вариантов реализации замещающий раствор представляет собой буферный раствор. В одном из вариантов реализации замещающий раствор представляет собой буферный раствор, где буфер выбран из группы, состоящей из N-(2-ацетамидо)-аминоэтансульфоновой кислоты (ACES), соли уксусной кислоты (ацетата), N-(2-ацетамидо)-иминодиуксусной кислоты (ADA), 2-аминоэтансульфоновой кислоты (AES, таурина), аммиака, 2-амино-2-метил-1-пропанола (AMP), 2-амино-2-метил-1,3-пропандиола AMPD, аммедиола, N-(1,1-диметил-2-гидроксиэтил)-3-амино-2-гидроксипропансульфоновой кислоты (AMPSO), N,N-бис-(2-гидроксиэтил)-2-аминоэтансульфоновой кислоты (BES), гидрокарбоната натрия (бикарбоната), N,N'-бис(2-гидроксиэтил)-глицина (бицина), [бис-(2-гидроксиэтил)-имино]-трис-(гидроксиметилметана) (BIS-Tris), 1,3-бис[трис(гидроксиметил)-метиламино]пропана (BIS-Tris-пропана), борной кислоты, диметиларсиновой кислоты (какодилата), 3-(циклогексиламино)-пропансульфоновой кислоты (CAPS), 3-(циклогексиламино)-2-гидрокси-1-пропансульфоновой кислоты (CAPSO), карбоната натрия (карбоната), циклогексиламиноэтансульфоновой кислоты (CHES), соли лимонной кислоты (цитрата), 3-[N-бис(гидроксиэтил)амино]-2-гидроксипропансульфоновой кислоты (DIPSO), соли муравьиной кислоты (формиата), глицина, глицилглицина, N-(2-гидроксиэтил)-пиперазин-N'-этансульфоновой кислоты (HEPES), N-(2-гидроксиэтил)-пиперазин-N'-3-пропансульфоновой кислоты (HEPPS, EPPS), N-(2-гидроксиэтил)-пиперазин-N'-2-гидроксипропансульфоновой кислоты (HEPPSO), имидазола, соли яблочной кислоты (малата), соли малеиновой кислоты (малеата), 2-(N-морфолино)-этансульфоновой кислоты (MES), 3-(N-морфолино)-пропансульфоновой кислоты (MOPS), 3-(N-морфолино)-2-гидроксипропансульфоновой кислоты (MOPSO), соли фосфорной кислоты (фосфата), пиперазин-N,N'-бис(2-этансульфоновой кислоты) (PIPES), пиперазин-N,N'-бис(2-гидроксипропансульфоновой кислоты) (POPSO), пиридина, соли янтарной кислоты (сукцината), 3-{[трис(гидроксиметил)-метил]-амино}-пропансульфоновой кислоты (TAPS), 3-[N-трис(гидроксиметил)-метиламино]-2-гидроксипропансульфоновой кислоты (TAPSO), триэтаноламина (TEA), 2-[трис(гидроксиметил)-метиламино]-этансульфоновой кислоты (TES), N-[трис(гидроксиметил)-метил]-глицина (трицина) и трис(гидроксиметил)-аминометана (Tris).

В одном из вариантов реализации буфер для диафильтрации выбран из группы, состоящей из соли уксусной кислоты (ацетата), соли лимонной кислоты (цитрата), соли муравьиной кислоты (формиата), соли яблочной кислоты (малата), соли малеиновой кислоты (малеата), соли фосфорной кислоты (фосфата) и соли янтарной кислоты (сукцината). В одном из вариантов реализации буфер для диафильтрации представляет собой соль лимонной кислоты (цитрат). В одном из вариантов реализации буфер для диафильтрации представляет собой соль янтарной кислоты (сукцинат). В одном из вариантов реализации указанная соль представляет собой натриевую соль. В одном из вариантов реализации указанная соль представляет собой калиевую соль.

В одном из вариантов реализации рН буфера для диафильтрации составляет от примерно 4,0 до 11,0, от примерно 5,0 до 10,0, от примерно 5,5 до 9,0, от примерно 6,0 до 8,0, от примерно 6,0 до 7,0, от примерно 6,5 до 7,5, от примерно 6,5 до 7,0 или от примерно 6,0 до 7,5. Любое число в любом из указанных выше диапазонов рассматривается в качестве варианта реализации настоящего раскрытия. В одном из вариантов реализации рН буфера для диафильтрации составляет примерно 4,0, примерно 4,5, примерно 5,0, примерно 5,5, примерно 6,0, примерно 6,5, примерно 7,0, примерно 7,5, примерно 8,0, примерно 8,5, примерно 9,0, примерно 9,5, примерно 10,0, примерно 10,5 или примерно 11,0. В одном из вариантов реализации рН буфера для диафильтрации составляет примерно 6,0, примерно 6,5, примерно 7,0, примерно 7,5, примерно 8,0, примерно 8,5 или примерно 9,0. В одном из вариантов реализации рН буфера для диафильтрации составляет примерно 6,5, примерно 7,0 или примерно 7,5. В одном из вариантов реализации рН буфера для диафильтрации составляет примерно 7,0.

В одном из вариантов реализации концентрация буфера для диафильтрации составляет от примерно 0,01 мМ до 100 мМ, от примерно 0,1 мМ до 100 мМ, от примерно 0,5 мМ до 100 мМ, от примерно 1 мМ до 100 мМ, от примерно 2 мМ до 100 мМ, от примерно 3 мМ до 100 мМ, от примерно 4 мМ до 100 мМ, от примерно 5 мМ до 100 мМ, от примерно 6 мМ до 100 мМ, от примерно 7 мМ до 100 мМ, от примерно 8 мМ до 100 мМ, от примерно 9 мМ до 100 мМ, от примерно 10 мМ до 100 мМ, от примерно 11 мМ до 100 мМ, от примерно 12 мМ до 100 мМ, от примерно 13 мМ до 100 мМ, от примерно 14 мМ до 100 мМ, от примерно 15 мМ до 100 мМ, от примерно 16 мМ до 100 мМ, от примерно 17 мМ до 100 мМ, от примерно 18 мМ до 100 мМ, от примерно 19 мМ до 100 мМ, от примерно 20 мМ до 100 мМ, от примерно 25 мМ до 100 мМ, от примерно 30 мМ до 100 мМ, от примерно 35 мМ до 100 мМ, от примерно 40 мМ до 100 мМ, от примерно 45 мМ до 100 мМ, от примерно 50 мМ до 100 мМ, от примерно 55 мМ до 100 мМ, от примерно 60 мМ до 100 мМ, от примерно 65 мМ до 100 мМ, от примерно 70 мМ до 100 мМ, от примерно 75 мМ до 100 мМ, от примерно 80 мМ до 100 мМ, от примерно 85 мМ до 100 мМ, от примерно 90 мМ до 100 мМ или от примерно 95 мМ до 100 мМ.

В одном из вариантов реализации концентрация буфера для диафильтрации составляет от примерно 0,01 мМ до 50 мМ, от примерно 0,1 мМ до 50 мМ, от примерно 0,5 мМ до 50 мМ, от примерно 1 мМ до 50 мМ, от примерно 2 мМ до 50 мМ, от примерно 3 мМ до 50 мМ, от примерно 4 мМ до 50 мМ, от примерно 5 мМ до 50 мМ, от примерно 6 мМ до 50 мМ, от примерно 7 мМ до 50 мМ, от примерно 8 мМ до 50 мМ, от примерно 9 мМ до 50 мМ, от примерно 10 мМ до 50 мМ, от примерно 11 мМ до 50 мМ, от примерно 12 мМ до 50 мМ, от примерно 13 мМ до 50 мМ, от примерно 14 мМ до 50 мМ, от примерно 15 мМ до 50 мМ, от примерно 16 мМ до 50 мМ, от примерно 17 мМ до 50 мМ, от примерно 18 мМ до 50 мМ, от примерно 19 мМ до 50 мМ, от примерно 20 мМ до 50 мМ, от примерно 25 мМ до 50 мМ, от примерно 30 мМ до 50 мМ, от примерно 35 мМ до 50 мМ, от примерно 40 мМ до 50 мМ или от примерно 45 мМ до 50 мМ.

В одном из вариантов реализации концентрация буфера для диафильтрации составляет от примерно 0,01 мМ до 25 мМ, от примерно 0,1 мМ до 25 мМ, от примерно 0,5 мМ до 25 мМ, от примерно 1 мМ до 25 мМ, от примерно 2 мМ до 25 мМ, от примерно 3 мМ до 25 мМ, от примерно 4 мМ до 25 мМ, от примерно 5 мМ до 25 мМ, от примерно 6 мМ до 25 мМ, от примерно 7 мМ до 25 мМ, от примерно 8 мМ до 25 мМ, от примерно 9 мМ до 25 мМ, от примерно 10 мМ до 25 мМ, от примерно 11 мМ до 25 мМ, от примерно 12 мМ до 25 мМ, от примерно 13 мМ до 25 мМ, от примерно 14 мМ до 25 мМ, от примерно 15 мМ до 25 мМ, от примерно 16 мМ до 25 мМ, от примерно 17 мМ до 25 мМ, от примерно 18 мМ до 25 мМ, от примерно 19 мМ до 25 мМ или от примерно 20 мМ до 25 мМ.

В одном из вариантов реализации концентрация буфера для диафильтрации составляет от примерно 0,01 мМ до 15 мМ, от примерно 0,1 мМ до 15 мМ, от примерно 0,5 мМ до 15 мМ, от примерно 1 мМ до 15 мМ, от примерно 2 мМ до 15 мМ, от примерно 3 мМ до 15 мМ, от примерно 4 мМ до 15 мМ, от примерно 5 мМ до 15 мМ, от примерно 6 мМ до 15 мМ, от примерно 7 мМ до 15 мМ, от примерно 8 мМ до 15 мМ, от примерно 9 мМ до 15 мМ, от примерно 10 мМ до 15 мМ, от примерно 11 мМ до 15 мМ, от примерно 12 мМ до 15 мМ, от примерно 13 мМ до 15 мМ или от примерно 14 мМ до 15 мМ.

В одном из вариантов реализации концентрация буфера для диафильтрации составляет от примерно 0,01 мМ до 10 мМ, от примерно 0,1 мМ до 10 мМ, от примерно 0,5 мМ до 10 мМ, от примерно 1 мМ до 10 мМ, от примерно 2 мМ до 10 мМ, от примерно 3 мМ до 10 мМ, от примерно 4 мМ до 10 мМ, от примерно 5 мМ до 10 мМ, от примерно 6 мМ до 10 мМ, от примерно 7 мМ до 10 мМ, от примерно 8 мМ до 10 мМ или от примерно 9 мМ до 10 мМ.

Любое число в любом из указанных выше диапазонов рассматривается в качестве варианта реализации настоящего раскрытия.

В одном из вариантов реализации концентрация буфера для диафильтрации составляет примерно 0,01 мМ, примерно 0,05 мМ, примерно 0,1 мМ, примерно 0,2 мМ, примерно 0,3 мМ, примерно 0,4 мМ, примерно 0,5 мМ, примерно 0,6 мМ, примерно 0,7 мМ, примерно 0,8 мМ, примерно 0,9 мМ, примерно 1 мМ, примерно 2 мМ, примерно 3 мМ, примерно 4 мМ, примерно 5 мМ, примерно 6 мМ, примерно 7 мМ, примерно 8 мМ, примерно 9 мМ, примерно 10 мМ, примерно 11 мМ, примерно 12 мМ, примерно 13 мМ, примерно 14 мМ, примерно 15 мМ, примерно 16 мМ, примерно 17 мМ, примерно 18 мМ, примерно 19 мМ, примерно 20 мМ, примерно 25 мМ, примерно 30 мМ, примерно 35 мМ, примерно 40 мМ, примерно 45 мМ, примерно 50 мМ, примерно 55 мМ, примерно 60 мМ, примерно 65 мМ, примерно 70 мМ, примерно 75 М, примерно 80 мМ, примерно 85 мМ, примерно 90 мМ, примерно 95 мМ или примерно 100 мМ.

В одном из вариантов реализации концентрация буфера для диафильтрации составляет примерно 0,1 мМ, примерно 0,2 мМ, примерно 1 мМ, примерно 5 мМ, примерно 10 мМ, примерно 15 мМ, примерно 20 мМ, примерно 30 мМ, примерно 40 мМ или примерно 50 мМ.

В одном из вариантов реализации концентрация буфера для диафильтрации составляет примерно 10 мМ.

В одном из вариантов реализации замещающий раствор содержит хелатирующий агент. В одном из вариантов реализации замещающий раствор содержит хелатирующий агент на основе квасцов. В некоторых вариантах реализации хелатирующий агент выбран из групп, состоящих из этилендиаминтетраацетата (ЭДТА), N-(2-гидроксиэтил)этилендиамин-N,N',N'-триуксусной кислоты (ЭДТА-ОН), гидроксиэтилендиаминтриуксусной кислоты (HEDTA), этиленгликоль-бис(2-аминоэтиловый эфир)-N,N,N',N'-тетрауксусной кислоты (EGTA), 1,2-циклогександиамин-N,N,N',N'-тетрауксусной кислоты (CyDTA), диэтилентриамин-N,N,N',N'',N''-пентауксусной кислоты (DTPA), 1,3-диаминопропан-2-ол-N,N,N',N'-тетрауксусной кислоты (DPTA-OH), этилендиамин-N,N'-бис(2-гидроксифенилуксусной кислоты) (EDDHA), этилендиамин-N,N'-дипропионовой кислоты дигидрохлорида (EDDP), этилендиамин-тетракис(метиленсульфоновой кислоты) (EDTPO), нитрилотри-(метиленфосфоновой кислоты) (NTPO), иминодиуксусной кислоты (IDA), гидроксииминодиуксусной кислоты (HIDA), нитрилотриуксусной кислоты (NTP), триэтилентетрамингексауксусной кислоты (ТТНА), димеркаптоянтарной кислоты (DMSA), 2,3-димеркапто-1-пропансульфоновой кислоты (DMPS), альфа-липоевой кислоты (ALA), нитрилотриуксусной кислоты (NTA), тиаминтетрагидрофурфурилдисульфида (TTFD), димеркапрола, пеницилламина, дефероксамина (DFOA), деферазирокса, фосфонатов, соли лимонной кислоты (цитрата) и их комбинаций.

В некоторых вариантах реализации хелатирующий агент выбран из групп, состоящих из этилендиаминтетраацетата (ЭДТА), N-(2-гидроксиэтил)этилендиамин-N,N',N'-триуксусной кислоты (ЭДТА-ОН), гидроксиэтилендиаминтриуксусной кислоты (HEDTA), этиленгликоль-бис(2-аминоэтиловый эфир)-N,N,N',N'-тетрауксусной кислоты (EGTA), 1,2-циклогександиамин- N,N,N',N'-тетрауксусной кислоты (CyDTA), диэтилентриамин-N,N,N',N'',N''-пентауксусной кислоты (DTPA), 1,3-диаминопропан-2-ол-N,N,N',N'-тетрауксусной кислоты (DPTA-OH), этилендиамин-N,N'-бис(2-гидроксифенилуксусной кислоты) (EDDHA), соли лимонной кислоты (цитрата) и их комбинаций.

В некоторых вариантах реализации хелатирующий агент представляет собой этилендиаминтетраацетат (ЭДТА).

В некоторых вариантах реализации хелатирующий агент представляет собой соль лимонной кислоты (цитрат). В некоторых вариантах реализации хелатирующий агент представляет собой цитрат натрия.

Как правило, хелатирующий агент применяют в концентрации от 1 до 500 мМ. В одном из вариантов реализации концентрация хелатирующего агента в замещающем растворе составляет от 2 до 400 мМ. В одном из вариантов реализации концентрация хелатирующего агента в замещающем растворе составляет от 10 до 400 мМ. В одном из вариантов реализации концентрация хелатирующего агента в замещающем растворе составляет от 10 до 200 мМ. В одном из вариантов реализации концентрация хелатирующего агента в замещающем растворе составляет от 10 до 100 мМ. В одном из вариантов реализации концентрация хелатирующего агента в замещающем растворе составляет от 10 до 50 мМ. В одном из вариантов реализации концентрация хелатирующего агента в замещающем растворе составляет от 10 до 30 мМ.

В одном из вариантов реализации концентрация хелатирующего агента в замещающем растворе составляет примерно 0,01 мМ, примерно 0,05 мМ, примерно 0,1 мМ, примерно 0,2 мМ, примерно 0,3 мМ, примерно 0,4 мМ, примерно 0,5 мМ, примерно 0,6 мМ, примерно 0,7 мМ, примерно 0,8 мМ, примерно 0,9 мМ, примерно 1 мМ, примерно 2 мМ, примерно 3 мМ, примерно 4 мМ, примерно 5 мМ, примерно 6 мМ, примерно 7 мМ, примерно 8 мМ, примерно 9 мМ, примерно 10 мМ, примерно 11 мМ, примерно 12 мМ, примерно 13 мМ, примерно 14 мМ, примерно 15 мМ, примерно 16 мМ, примерно 17 мМ, примерно 18 мМ, примерно 19 мМ, примерно 20 мМ, примерно 21 мМ, примерно 22 мМ, примерно 23 мМ, примерно 24 мМ, примерно 25 мМ, примерно 26 мМ, примерно 27 мМ, примерно 28 мМ, примерно 29 мМ, примерно 30 мМ, примерно 31 мМ, примерно 32 мМ, примерно 33 мМ, примерно 34 мМ, примерно 35 мМ, примерно 36 мМ, примерно 37 мМ, примерно 38 мМ, примерно 39 мМ, примерно 40 мМ, примерно 45 мМ, примерно 50 мМ, примерно 55 мМ, примерно 60 мМ, примерно 65 мМ, примерно 70 мМ, примерно 75 мМ, примерно 80 мМ, примерно 85 мМ, примерно 90 мМ, примерно 95 или примерно 100 мМ. В одном из вариантов реализации концентрация хелатирующего агента в замещающем растворе составляет примерно 5 мМ, примерно 10 мМ, примерно 15 мМ, примерно 20 мМ, примерно 25 мМ, примерно 30 мМ, примерно 35 мМ, примерно 40 мМ, примерно 45 мМ, примерно 50 мМ, примерно 55 мМ, примерно 60 мМ, примерно 65 мМ, примерно 70 мМ, примерно 75 мМ, примерно 80 мМ, примерно 85 мМ, примерно 90 мМ, примерно 95 мМ или примерно 100 мМ.

В одном из вариантов реализации концентрация хелатирующего агента в замещающем растворе составляет примерно 15 мМ, примерно 20 мМ, примерно 25 мМ, примерно 30 мМ, примерно 35 мМ, примерно 40 мМ, примерно 45 мМ или примерно 50 мМ.

В одном из вариантов реализации буферный раствор для диафильтрации содержит соль. В некоторых вариантах реализации соль выбрана из групп, состоящих из хлорида магния, хлорида калия, хлорида натрия и их комбинации. В одном конкретном варианте реализации соль представляет собой хлорид натрия. В одном из вариантов реализации буферный раствор для диафильтрации содержит хлорид натрия в концентрации примерно 1, примерно 5, примерно 10, примерно 15, примерно 20, примерно 25, примерно 30, примерно 35, примерно 40, примерно 45, примерно 50, примерно 55, примерно 60, примерно 65, примерно 70, примерно 80, примерно 90, примерно 100, примерно 110, примерно 120, примерно 130, примерно 140, примерно 150, примерно 160, примерно 170, примерно 180, примерно 190, примерно 200, примерно 250, примерно 300, примерно 350, примерно 400, примерно 450 или примерно 500 мМ. В одном конкретном варианте реализации буферный раствор для диафильтрации содержит хлорид натрия в концентрации примерно 1, примерно 5, примерно 10, примерно 15, примерно 20, примерно 25, примерно 30, примерно 35, примерно 40, примерно 45, примерно 50, примерно 55, примерно 60, примерно 65, примерно 70, примерно 80, примерно 90, примерно 100, примерно 110, примерно 120, примерно 130, примерно 140, примерно 150, примерно 160, примерно 170, примерно 180, примерно 190, примерно 200, примерно 250 или примерно 300 мМ.

В одном из вариантов реализации настоящего изобретения количество объемов диафильтрации составляет по меньшей мере 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45 или 50. В одном из вариантов реализации настоящего изобретения количество объемов диафильтрации составляет примерно 1, примерно 2, примерно 3, примерно 4, примерно 5, примерно 6, примерно 7, примерно 8, примерно 9, примерно 10, примерно 11, примерно 12, примерно 13, примерно 14, примерно 15, примерно 16, примерно 17, примерно 18, примерно 19, примерно 20, примерно 21, примерно 22, примерно 23, примерно 24, примерно 25, примерно 26, примерно 27, примерно 28, примерно 29, примерно 30, примерно 31, примерно 32, примерно 33, примерно 34, примерно 35, примерно 36, примерно 37, примерно 38, примерно 39, примерно 40, примерно 41, примерно 42, примерно 43, примерно 44, примерно 45, примерно 46, примерно 47, примерно 48, примерно 49, примерно 50, примерно 55, примерно 60, примерно 65, примерно 70, примерно 75, примерно 80, примерно 85, примерно 90, примерно 95 или примерно 100. В одном из вариантов реализации настоящего изобретения количество объемов диафильтрации составляет примерно 5, примерно 6, примерно 7, примерно 8, примерно 9, примерно 10, примерно 11, примерно 12, примерно 13, примерно 14 или примерно 15.

В одном из вариантов реализации настоящего изобретения стадии ультрафильтрации и диафильтрации проводят при температуре от примерно 20°С до примерно 90°С. В одном из вариантов реализации стадии ультрафильтрации и диафильтрации проводят при температуре от примерно 35°С до примерно 80°С, при температуре от примерно 40°С до примерно 70°С, при температуре от примерно 45°С до примерно 65°С, при температуре от примерно 50°С до примерно 60°С, при температуре от примерно 50°С до примерно 55°С, при температуре от примерно 45°С до примерно 55°С или при температуре от примерно 45°С до примерно 55°С.

Любое число в любом из указанных выше диапазонов рассматривается в качестве варианта реализации настоящего раскрытия.

В одном из вариантов реализации стадии ультрафильтрации и диафильтрации проводят при температуре примерно 20°С, примерно 21°С, примерно 22°С, примерно 23°С, примерно 24°С, примерно 25°С, примерно 26°С, примерно 27°С, примерно 28°С, примерно 29°С, примерно 30°С, примерно 31°С, примерно 32°С, примерно 33°С, примерно 34°С, примерно 35°С, примерно 36°С, примерно 37°С, примерно 38°С, примерно 39°С, примерно 40°С, примерно 41°С, примерно 42°С, примерно 43°С, примерно 44°С, примерно 45°С, примерно 46°С, примерно 47°С, примерно 48°С, примерно 49°С, примерно 50°С, примерно 51°С, примерно 52°С, примерно 53°С, примерно 54°С, примерно 55°С, примерно 56°С, примерно 57°С, примерно 58°С, примерно 59°С, примерно 60°С, примерно 61°С, примерно 62°С, примерно 63°С, примерно 64°С, примерно 65°С, примерно 66°С, примерно 67°С, примерно 68°С, примерно 69°С, примерно 70°С, примерно 71°С, примерно 72°С, примерно 73°С, примерно 74°С, примерно 75°С, примерно 76°С, примерно 77°С, примерно 78°С или примерно 80°С. В одном из вариантов реализации стадию ультрафильтрации и диафильтрации проводят при температуре примерно 50°С.

В одном из вариантов реализации настоящего изобретения стадию диафильтрации проводят при температуре от примерно 20°С до примерно 90°С. В одном из вариантов реализации стадию диафильтрации проводят при температуре от примерно 35°С до примерно 80°С, при температуре от примерно 40°С до примерно 70°С, при температуре от примерно 45°С до примерно 65°С, при температуре от примерно 50°С до примерно 60°С, при температуре от примерно 50°С до примерно 55°С, при температуре от примерно 45°С до примерно 55°С или при температуре от примерно 45°С до примерно 55°С.

Любое число в любом из указанных выше диапазонов рассматривается в качестве варианта реализации настоящего раскрытия.

В одном из вариантов реализации стадию диафильтрации проводят при температуре примерно 20°С, примерно 21°С, примерно 22°С, примерно 23°С, примерно 24°С, примерно 25°С, примерно 26°С, примерно 27°С, примерно 28°С, примерно 29°С, примерно 30°С, примерно 31°С, примерно 32°С, примерно 33°С, примерно 34°С, примерно 35°С, примерно 36°С, примерно 37°С, примерно 38°С, примерно 39°С, примерно 40°С, примерно 41°С, примерно 42°С, примерно 43°С, примерно 44°С, примерно 45°С, примерно 46°С, примерно 47°С, примерно 48°С, примерно 49°С, примерно 50°С, примерно 51°С, примерно 52°С, примерно 53°С, примерно 54°С, примерно 55°С, примерно 56°С, примерно 57°С, примерно 58°С, примерно 59°С, примерно 60°С, примерно 61°С, примерно 62°С, примерно 63°С, примерно 64°С, примерно 65°С, примерно 66°С, примерно 67°С, примерно 68°С, примерно 69°С, примерно 70°С, примерно 71°С, примерно 72°С, примерно 73°С, примерно 74°С, примерно 75°С, примерно 76°С, примерно 77°С, примерно 78°С, примерно 79°С или примерно 80°С. В одном из вариантов реализации стадию диафильтрации проводят при температуре примерно 50°С.

В одном из вариантов реализации настоящего изобретения стадию ультрафильтрации проводят при температуре от примерно 20°С до примерно 90°С. В одном из вариантов реализации стадию ультрафильтрации проводят при температуре от примерно 35°С до примерно 80°С, при температуре от примерно 40°С до примерно 70°С, при температуре от примерно 45°С до примерно 65°С, при температуре от примерно 50°С до примерно 60°С, при температуре от примерно 50°С до примерно 55°С, при температуре от примерно 45°С до примерно 55°С или при температуре от примерно 45°С до примерно 55°С.Любое число в любом из указанных выше диапазонов рассматривается в качестве варианта реализации настоящего раскрытия.

В одном из вариантов реализации стадию ультрафильтрации проводят при температуре примерно 20°С, примерно 21°С, примерно 22°С, примерно 23°С, примерно 24°С, примерно 25°С, примерно 26°С, примерно 27°С, примерно 28°С, примерно 29°С, примерно 30°С, примерно 31°С, примерно 32°С, примерно 33°С, примерно 34°С, примерно 35°С, примерно 36°С, примерно 37°С, примерно 38°С, примерно 39°С, примерно 40°С, примерно 41°С, примерно 42°С, примерно 43°С, примерно 44°С, примерно 45°С, примерно 46°С, примерно 47°С, примерно 48°С, примерно 49°С, примерно 50°С, примерно 51°С, примерно 52°С, примерно 53°С, примерно 54°С, примерно 55°С, примерно 56°С, примерно 57°С, примерно 58°С, примерно 59°С, примерно 60°С, примерно 61°С, примерно 62°С, примерно 63°С, примерно 64°С, примерно 65°С, примерно 66°С, примерно 67°С, примерно 68°С, примерно 69°С, примерно 70°С, примерно 71°С, примерно 72°С, примерно 73°С, примерно 74°С, примерно 75°С, примерно 76°С, примерно 77°С, примерно 78°С, примерно 79°С или примерно 80°С. В одном из вариантов реализации стадию ультрафильтрации проводят при температуре примерно 50°С.

1.7 Фильтрация через слой активированного угля

После обработки раствора на стадии флокуляции, описанной в разделе 1.2 выше, содержащий полисахарид раствор необязательно может быть дополнительно осветлен с применением стадии фильтрации с помощью активированного угля.

В одном из вариантов реализации раствор, полученный согласно разделу 1.3, дополнительно обработанный путем разделения твердой и жидкой фаз на стадии, описанной в разделе 1.3 (например, супернатант), дополнительно осветляют с применением стадии фильтрации с помощью активированного угля. В одном из вариантов реализации раствор, дополнительно отфильтрованный любым из способов, описанных в разделе 1.4 выше, и/или отфильтрованный на стадии фильтрации, описанной в разделе 1.5 выше, дополнительно осветляют с применением стадии фильтрации с помощью активированного угля. В одном из вариантов реализации раствор, дополнительно осветленный на стадии ультрафильтрации и/или диафильтрации согласно разделу 1.6 выше, дополнительно осветляют с применением стадии фильтрации с помощью активированного угля.

Стадия фильтрации с помощью активированного угля обеспечивает возможность дополнительного удаления примесей, имеющих происхождение от клеток-хозяев, таких как белки и нуклеиновые кислоты, а также окрашенных примесей (см. WO 2008/118752).

В одном из вариантов реализации активированный уголь (также называемый активным углем) добавляют к раствору в количестве, достаточном для поглощения большей части загрязняющих примесей белков и нуклеиновых кислот, и затем удаляют после адсорбции загрязняющих примесей на активированном угле. В одном из вариантов реализации активированный уголь добавляют в форме порошка, в виде слоя гранулированного угля, в виде блока прессованного угля или блока экструдированного угля (см., например, активированный уголь Norit). В одном из вариантов реализации активированный уголь добавляют в количестве от примерно 0,1 до 20% (масса/объем), от 1 до 15% (масса/объем), от 1 до 10% (масса/объем), от 2 до 10% (масса/объем), от 3 до 10% (масса/объем), от 4 до 10% (масса/объем), от 5 до 10% (масса/объем), от 1 до 5% (масса/объем) или от 2 до 5% (масса/объем). Затем смесь перемешивают и отстаивают. В одном из вариантов реализации смесь отстаивают в течение примерно 5, 10, 15, 20, 30, 45, 60, 90, 120, 180, 240 минут или более. Затем активированный уголь удаляют. Активированный уголь может быть удален, например, путем центрифугирования или фильтрования.

В предпочтительном варианте реализации раствор фильтруют через активированный уголь, иммобилизованный в матрице. Матрица может представлять собой любую пористую фильтрующую среду, проницаемую для раствора. Матрица может содержать материал подложки и/или связующий материал. Материал подложки может представлять собой синтетический полимер или полимер природного происхождения. Подходящие синтетические полимеры могут включать полистирол, полиакриламид и полиметилметакрилат, тогда как полимеры природного происхождения могут включать целлюлозу, полисахарид и декстран, агарозу. Как правило, полимерный материал подложки выполнен в форме волокнистой сетки для обеспечения механической жесткости. Связующий материал может представлять собой смолу. Матрица может иметь форму плоской мембраны. В одном из вариантов реализации активированный уголь, иммобилизованный в матрице, имеет форму проточного углеродного картриджа. Картридж представляет собой автономный объект, содержащий порошкообразный активированный уголь, иммобилизованный в матрице и изготовленный в виде плоской мембраны. Плоская мембрана может быть зафиксирована в пластиковом проницаемом креплении с получением диска.

В качестве альтернативы, плоская мембрана может быть скручена в спираль. Для увеличения площади поверхности фильтра несколько дисков могут быть наложены один на другой. В частности, наложенные один на другой диски имеют центральную трубу сердечника для сбора и удаления обработанного с помощью угля образца из фильтра. Конфигурация наложенных один на другой дисков может быть линзовидной.

Активированный уголь в угольном фильтре может быть получен из различного сырья, например, торфа, лигнита, древесины или скорлупы кокосового ореха. Для активации угля может быть применен любой способ, известный в данной области техники, такой как паровая или химическая обработка (например, получение активированного фосфорной кислотой древесного угля). В настоящем изобретении активированный уголь, иммобилизованный в матрице, может быть помещен в корпус с получением независимого фильтрующего элемента. Каждый фильтрующий элемент имеет собственные входной и выходной участки для раствора, подлежащего очистке. Примерами фильтрующих элементов, которые могут быть применены согласно настоящему изобретению, являются угольные картриджи от Cuno Inc. (Мериден, США) или Pall Corporation (Ист-Хилл, США). В частности, фильтры CUNO zetacarbon подходят для применения согласно настоящему изобретению. Эти угольные фильтры содержат целлюлозную матрицу, в которую включен порошок активированного угля, иммобилизованный смолой.

В одном из вариантов реализации фильтр с активированным углем, описанный выше, имеет номинальный размер пор в диапазоне примерно 0,01-100 мкм, примерно 0,05-100 мкм, примерно 0,1-100 мкм, примерно 0,2-100 мкм, примерно 0,3-100 мкм, примерно 0,4-100 мкм, примерно 0,5-100 мкм, примерно 0,6-100 мкм, примерно 0,7-100 мкм, примерно 0,8-100 мкм, примерно 0,9-100 мкм, примерно 1-100 мкм, примерно 1,25-100 мкм, примерно 1,5-100 мкм, примерно 1,75-100 мкм, примерно 2-100 мкм, примерно 3-100 мкм, примерно 4-100 мкм, примерно 5-100 мкм, примерно 6-100 мкм, примерно 7-100 мкм, примерно 8-100 мкм, примерно 9-100 мкм, примерно 10-100 мкм, примерно 15-100 мкм, примерно 20-100 мкм, примерно 25-100 мкм, примерно 30-100 мкм, примерно 40-100 мкм, примерно 50-100 мкм или примерно 75-100 мкм.

В одном из вариантов реализации фильтр с активированным углем, описанный выше, имеет номинальный размер пор в диапазоне примерно 0,01-50 мкм, примерно 0,05-50 мкм, примерно 0,1-50 мкм, примерно 0,2-50 мкм, примерно 0,3-50 мкм, примерно 0,4-50 мкм, примерно 0,5-50 мкм, примерно 0,6-50 мкм, примерно 0,7-50 мкм, примерно 0,8-50 мкм, примерно 0,9-50 мкм, примерно 1-50 мкм, примерно 1,25-50 мкм, примерно 1,5-50 мкм, примерно 1,75-50 мкм, примерно 2-50 мкм, примерно 3-50 мкм, примерно 4-50 мкм, примерно 5-50 мкм, примерно 6-50 мкм, примерно 7-50 мкм, примерно 8-50 мкм, примерно 9-50 мкм, примерно 10-50 мкм, примерно 15-50 мкм, примерно 20-50 мкм, примерно 25-50 мкм, примерно 30-50 мкм, примерно 40-50 мкм или примерно 50-50 мкм.

В одном из вариантов реализации фильтр с активированным углем, описанный выше, имеет номинальный размер пор в диапазоне примерно 0,01-25 мкм, примерно 0,05-25 мкм, примерно 0,1-25 мкм, примерно 0,2-25 мкм, примерно 0,3-25 мкм, примерно 0,4-25 мкм, примерно 0,5-25 мкм, примерно 0,6-25 мкм, примерно 0,7-25 мкм, примерно 0,8-25 мкм, примерно 0,9-25 мкм, примерно 1-25 мкм, примерно 1,25-25 мкм, примерно 1,5-25 мкм, примерно 1,75-25 мкм, примерно 2-25 мкм, примерно 3-25 мкм, примерно 4-25 мкм, примерно 5-25 мкм, примерно 6-25 мкм, примерно 7-25 мкм, примерно 8-25 мкм, примерно 9-25 мкм, примерно 10-25 мкм, примерно 15-25 мкм или примерно 20-25 мкм.

В одном из вариантов реализации фильтр с активированным углем, описанный выше, имеет номинальный размер пор в диапазоне примерно 0,01-10 мкм, примерно 0,05-10 мкм, примерно 0,1-10 мкм, примерно 0,2-10 мкм, примерно 0,3-10 мкм, примерно 0,4-10 мкм, примерно 0,5-10 мкм, примерно 0,6-10 мкм, примерно 0,7-10 мкм, примерно 0,8-10 мкм, примерно 0,9-10 мкм, примерно 1-10 мкм, примерно 1,25-10 мкм, примерно 1,5-10 мкм, примерно 1,75-10 мкм, примерно 2-10 мкм, примерно 3-10 мкм, примерно 4-10 мкм, примерно 5-10 мкм, примерно 6-10 мкм, примерно 7-10 мкм, примерно 8-10 мкм или примерно 9-10 мкм.

В одном из вариантов реализации фильтр с активированным углем, описанный выше, имеет номинальный размер пор в диапазоне примерно 0,01-8 мкм, примерно 0,05-8 мкм, примерно 0,1-8 мкм, примерно 0,2-8 мкм, примерно 0,3-8 мкм, примерно 0,4-8 мкм, примерно 0,5-8 мкм, примерно 0,6-8 мкм, примерно 0,7-8 мкм, примерно 0,8-8 мкм, примерно 0,9-8 мкм, примерно 1-8 мкм, примерно 1,25-8 мкм, примерно 1,5-8 мкм, примерно 1,75-8 мкм, примерно 2-8 мкм, примерно 3-8 мкм, примерно 4-8 мкм, примерно 5-8 мкм, примерно 6-8 мкм или примерно 7-8 мкм. В одном из вариантов реализации фильтр с активированным углем, описанный выше, имеет номинальный размер пор в диапазоне примерно 0,01 -5 мкм, примерно 0,05-5 мкм, примерно 0,1-5 мкм, примерно 0,2-5 мкм, примерно 0,3-5 мкм, примерно 0,4-5 мкм, примерно 0,5-5 мкм, примерно 0,6-5 мкм, примерно 0,7-5 мкм, примерно 0,8-5 мкм, примерно 0,9-5 мкм, примерно 1-5 мкм, примерно 1,25-5 мкм, примерно 1,5-5 мкм, примерно 1,75-5 мкм, примерно 2-5 мкм, примерно 3-5 мкм или примерно 4-5 мкм.

В одном из вариантов реализации фильтр с активированным углем, описанный выше, имеет номинальный размер пор в диапазоне примерно 0,01 -2 мкм, примерно 0,05-2 мкм, примерно 0,1-2 мкм, примерно 0,2-2 мкм, примерно 0,3-2 мкм, примерно 0,4-2 мкм, примерно 0,5-2 мкм, примерно 0,6-2 мкм, примерно 0,7-2 мкм, примерно 0,8-2 мкм, примерно 0,9-2 мкм, примерно 1-2 мкм, примерно 1,25-2 мкм, примерно 1,5-2 мкм, примерно 1,75-2 мкм, примерно 2-2 мкм, примерно 3-2 мкм или примерно 4-2 мкм.

В одном из вариантов реализации фильтр с активированным углем, описанный выше, имеет номинальный размер пор в диапазоне примерно 0,01 -1 мкм, примерно 0,05-1 мкм, примерно 0,1-1 мкм, примерно 0,2-1 мкм, примерно 0,3-1 мкм, примерно 0,4-1 мкм, примерно 0,5-1 мкм, примерно 0,6-1 мкм, примерно 0,7-1 мкм, примерно 0,8-1 мкм или примерно 0,9-1 мкм.

В одном из вариантов реализации, фильтр с активированным углем, описанный выше, имеет номинальный размер пор в диапазоне примерно 0,05-50 мкм, 0,1-25 мкм, 0,2-10 мкм, 0,1-10 мкм, 0,2-5 мкм или 0,25-1 мкм.

Любое число в любом из указанных выше диапазонов рассматривается в качестве варианта реализации настоящего раскрытия.

В одном из вариантов реализации стадию фильтрации с помощью активированного угля проводят со скоростью подачи 1-500 LMH, 10-500 LMH, 15-500 LMH, 20-500 LMH, 25-500 LMH, 30-500 LMH, 40-500 LMH, 50-500 LMH, 100-500 LMH, 125-500 LMH, 150-500 LMH, 200-500 LMH, 250-500 LMH, 300-500 LMH или 400-500 LMH. В одном из вариантов реализации стадию фильтрации с помощью активированного угля проводят со скоростью подачи 1-200 LMH, 10-200 LMH, 15-200 LMH, 20-200 LMH, 25-200 LMH, 30-200 LMH, 40-200 LMH, 50-200 LMH, 100-200 LMH, 125-200 LMH или 150-200 LMH.

В одном из вариантов реализации стадию фильтрации с помощью активированного угля проводят со скоростью подачи 1-150 LMH, 10-150 LMH, 15-150 LMH, 20-150 LMH, 25-150 LMH, 30-150 LMH, 40-150 LMH, 50-150 LMH, 100-150 LMH или 125-150 LMH.

В одном из вариантов реализации стадию фильтрации с помощью активированного угля проводят со скоростью подачи 1-100 LMH, 10-100 LMH, 15-100 LMH, 20-100 LMH, 25-100 LMH, 30-100 LMH, 40-100 LMH или 50-100 LMH. В одном из вариантов реализации стадию фильтрации с помощью активированного угля проводят со скоростью подачи 1-75 LMH, 5-75 LMH, 10-75 LMH, 15-75 LMH, 20-75 LMH, 25-75 LMH, 30-75 LMH, 35-75 LMH, 40-75 LMH, 45-75 LMH, 50-75 LMH, 55-75 LMH, 60-75 LMH, 65-75 LMH или 70-75 LMH.

В одном из вариантов реализации стадию фильтрации с помощью активированного угля проводят со скоростью подачи 1-50 LMH, 5-50 LMH, 7-50 LMH, 10-50 LMH, 15-50 LMH, 20-50 LMH, 25-50 LMH, 30-50 LMH, 35-50 LMH, 40-50 LMH или 45-50 LMH. Любое целое число в любом из указанных выше диапазонов рассматривается в качестве варианта реализации настоящего раскрытия.

В одном из вариантов реализации стадию фильтрации с помощью активированного угля проводят со скоростью подачи примерно 1, примерно 2, примерно 5, примерно 10, примерно 15, примерно 20, примерно 25, примерно 30, примерно 35, примерно 40, примерно 45, примерно 50, примерно 55, примерно 60, примерно 65, примерно 70, примерно 75, примерно 80, примерно 85, примерно 90, примерно 95, примерно 100, примерно 110, примерно 120, примерно 130, примерно 140, примерно 150, примерно 160, примерно 170, примерно 180, примерно 190, примерно 200, примерно 225, примерно 250, примерно 300, примерно 350, примерно 400, примерно 450, примерно 500, примерно 550, примерно 600, примерно 700, примерно 800, примерно 900, примерно 950 или примерно 1000 LMH.

В одном из вариантов реализации раствор обрабатывают с применением фильтра с активированным углем, причем указанный фильтр имеет производительность в диапазоне 5-1000 л/м², 10-750 л/м², 15-500 л/м², 20-400 л/м², 25-300 л/м², 30-250 л/м², 40-200 л/м² или 30-100 л/м².

Любое число в любом из указанных выше диапазонов рассматривается в качестве варианта реализации настоящего раскрытия.

В одном из вариантов реализации раствор обрабатывают с применением фильтра с активированным углем, причем указанный фильтр имеет производительность примерно 5, примерно 10, примерно 15, примерно 20, примерно 25, примерно 30, примерно 35, примерно 40, примерно 45, примерно 50, примерно 55, примерно 60, примерно 65, примерно 70, примерно 75, примерно 80, примерно 85, примерно 90, примерно 100, примерно 125, примерно 150, примерно 175, примерно 200, примерно 225, примерно 250, примерно 275, примерно 300, примерно 400, примерно 500, примерно 600, примерно 700, примерно 800, примерно 900 или примерно 1000 л/м².

Если содержание загрязняющих примесей после первой стадии фильтрации с помощью активированного угля превышает фиксированное пороговое значение, указанную стадию может быть повторена. В одном из вариантов реализации настоящего изобретения выполняют 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 стадий фильтрации с помощью активированного угля. В одном из вариантов реализации настоящего изобретения выполняют 1, 2 или 3 стадии фильтрации с помощью активированного угля. В одном из вариантов реализации настоящего изобретения выполняют 1 или 2 стадии фильтрации с помощью активированного угля.

В одном из вариантов реализации раствор последовательно обрабатывают с применением фильтров с активированным углем. В одном из вариантов реализации раствор последовательно обрабатывают с применением 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 фильтров с активированным углем. В одном из вариантов реализации раствор последовательно обрабатывают с применением 2, 3, 4 или 5 фильтров с активированным углем. В одном из вариантов реализации раствор последовательно обрабатывают с применением 2 фильтров с активированным углем. В одном из вариантов реализации раствор последовательно обрабатывают с применением 3 фильтров с активированным углем. В одном из вариантов реализации раствор последовательно обрабатывают с применением 4 фильтров с активированным углем. В одном из вариантов реализации раствор последовательно обрабатывают с применением 5 фильтров с активированным углем.

В одном из вариантов реализации стадию фильтрации с помощью активированного угля выполняют в однопроходном режиме.

В другом варианте реализации стадию фильтрации с помощью активированного угля выполняют в режиме рециркуляции. В указанном варианте реализации (режим рециркуляции) выполняют 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49 или 50 циклов фильтрации с помощью активированного угля. В другом варианте реализации выполняют 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 циклов фильтрации с помощью активированного угля. В одном из вариантов реализации выполняют 2 или 3 цикла фильтрации с помощью активированного угля. В одном из вариантов реализации выполняют 2 цикла фильтрации с помощью активированного угля.

1.8 Необязательная дополнительная фильтрация

После обработки раствора с применением стадии фильтрации с помощью активированного угля, описанной в разделе 1.7 выше, полученный раствор (то есть фильтрат) необязательно может быть подвергнут дополнительной фильтрации. В одном из вариантов реализации раствор подвергают микрофильтрации. В одном из вариантов реализации микрофильтрация представляет собой тупиковую фильтрацию (перпендикулярную фильтрацию).

В одном из вариантов реализации раствор обрабатывают с применением стадии микрофильтрации, на которой фильтр имеет номинальный диапазон удерживания, составляющий примерно 0,01-2 мкм, примерно 0,05-2 мкм, примерно 0,1-2 мкм, примерно 0,2-2 мкм, примерно 0,3-2 мкм, примерно 0,4-2 мкм, примерно 0,45-2 мкм, примерно 0,5-2 мкм, примерно 0,6-2 мкм, примерно 0,7-2 мкм, примерно 0,8-2 мкм, примерно 0,9-2 мкм, примерно 1-2 мкм, примерно 1,25-2 мкм, примерно 1,5-2 мкм или примерно 1,75-2 мкм.

В одном из вариантов реализации раствор обрабатывают с применением стадии микрофильтрации, на которой фильтр имеет номинальный диапазон удерживания, составляющий примерно 0,01-1 мкм, примерно 0,05-1 мкм, примерно 0,1-1 мкм, примерно 0,2-1 мкм, примерно 0,3-1 мкм, примерно 0,4-1 мкм, примерно 0,45-1 мкм, примерно 0,5-1 мкм, примерно 0,6-1 мкм, примерно 0,7-1 мкм, примерно 0,8-1 мкм или примерно 0,9-1 мкм.

Любое число в любом из указанных выше диапазонов рассматривается в качестве варианта реализации настоящего раскрытия.

В одном из вариантов реализации раствор обрабатывают с применением стадии микрофильтрации, на которой фильтр имеет номинальный рейтинг фильтрации, составляющий примерно 0,01, примерно 0,05, примерно 0,1, примерно 0,2, примерно 0,3, примерно 0,4, примерно 0,45, примерно 0,5, примерно 0,6, примерно 0,7, примерно 0,8, примерно 0,9, примерно 1,0, примерно 1,1, примерно 1,2, примерно 1,3, примерно 1,4, примерно 1,5, примерно 1,6, примерно 1,7, примерно 1,8, примерно 1,9 или примерно 2,0 мкм.

В одном из вариантов реализации раствор обрабатывают с применением стадии микрофильтрации, на которой фильтр имеет номинальный рейтинг фильтрации, составляющий примерно 0,2 мкм.

В одном из вариантов реализации раствор обрабатывают с применением стадии микрофильтрации, на которой фильтр имеет производительность, составляющую 100-6000 л/м², 200-6000 л/м², 300-6000 л/м², 400-6000 л/м², 500-6000 л/м², 750-6000 л/м², 1000-6000 л/м², 1500-6000 л/м², 2000-6000 л/м², 3000-6000 л/м² или 4000-6000 л/м².

В одном из вариантов реализации раствор обрабатывают с применением стадии микрофильтрации, на которой фильтр имеет производительность, составляющую 100-4000 л/м², 200-4000 л/м², 300-4000 л/м², 400-4000 л/м², 500-4000 л/м², 750-4000 л/м², 1000-4000 л/м², 1500-4000 л/м², 2000-4000 л/м², 2500-4000 л/м², 3000-4000 л/м², 3000-4000 л/м² или 3500-4000 л/м².

В одном из вариантов реализации раствор обрабатывают с применением стадии микрофильтрации, на которой фильтр имеет производительность, составляющую 100-3750 л/м², 200-3750 л/м², 300-3750 л/м², 400-3750 л/м², 500-3750 л/м², 750-3750 л/м², 1000-3750 л/м², 1500-3750 л/м², 2000-3750 л/м², 2500-3750 л/м², 3000-3750 л/м², 3000-3750 л/м² или 3500-3750 л/м².

В одном из вариантов реализации раствор обрабатывают с применением стадии микрофильтрации, на которой фильтр имеет производительность, составляющую 100-1250 л/м², 200-1250 л/м², 300-1250 л/м², 400-1250 л/м², 500-1250 л/м², 750-1250 л/м² или 1000-1250 л/м².

Любое число в любом из указанных выше диапазонов рассматривается в качестве варианта реализации настоящего раскрытия.

В одном из вариантов реализации раствор обрабатывают с применением стадии микрофильтрации, на которой фильтр имеет производительность, составляющую примерно 100, примерно 200, примерно 300, примерно 400, примерно 550, примерно 600, примерно 700, примерно 800, примерно 900, примерно 1000, примерно 1100, примерно 1200, примерно 1300, примерно 1400, примерно 1500, примерно 1600, примерно 1700, примерно 1800, примерно 1900, примерно 2000, примерно 2100, примерно 2200, примерно 2300, примерно 2400, примерно 2500, примерно 2600, примерно 2700, примерно 2800, примерно 2900, примерно 3000, примерно 3100, примерно 3200, примерно 3300, примерно 3400, примерно 3500, примерно 3600, примерно 3700, примерно 3800, примерно 3900, примерно 4000, примерно 4100, примерно 4200, примерно 4300, примерно 4400, примерно 4500, примерно 4600, примерно 4700, примерно 4800, примерно 4900, примерно 5000, примерно 5250, примерно 5500, примерно 5750 или примерно 6000 л/²м.

1.9 Ультрафильтрация/диафильтрация

После обработки раствора с применением стадии фильтрации с помощью активированного угля, описанной в разделе 1.7 выше, и/или стадии дополнительной фильтрации, описанной в разделе 1.8 выше, полученный раствор (то есть фильтрат) необязательно может быть дополнительно осветлен с помощью ультрафильтрации и/или диафильтрации.

В одном из вариантов реализации настоящего изобретения раствор (например, полученный согласно разделу 1.7 или 1.8 выше) обрабатывают с помощью ультрафильтрации.

В одном из вариантов реализации раствор обрабатывают с помощью ультрафильтрации, и мембрана имеет порог отсечения по молекулярной массе в диапазоне от примерно 5 кДа до 1000 кДа. В одном из вариантов реализации мембрана имеет порог отсечения по молекулярной массе в диапазоне от примерно 10 кДа до 750 кДа. В одном из вариантов реализации мембрана имеет порог отсечения по молекулярной массе в диапазоне от примерно 10 кДа до 500 кДа. В одном из вариантов реализации мембрана имеет порог отсечения по молекулярной массе в диапазоне от примерно 10 кДа до 300 кДа. В одном из вариантов реализации мембрана имеет порог отсечения по молекулярной массе в диапазоне от примерно 10 кДа до 100 кДа. В одном из вариантов реализации мембрана имеет порог отсечения по молекулярной массе в диапазоне от примерно 10 кДа до 50 кДа. В одном из вариантов реализации мембрана имеет порог отсечения по молекулярной массе в диапазоне от примерно 10 кДа до 30 кДа. В одном из вариантов реализации мембрана имеет порог отсечения по молекулярной массе в диапазоне от примерно 5 кДа до 1000 кДа, от примерно 10 кДа до 1000 кДа, от примерно 20 кДа до 1000 кДа, от примерно 30 кДа до 1000 кДа, от примерно 40 кДа до 1000 кДа, от примерно 50 кДа до 1000 кДа, от примерно 75 кДа до 1000 кДа, от примерно 100 кДа до 1000 кДа, от примерно 150 кДа до 1000 кДа, от примерно 200 кДа до 1000 кДа, от примерно 300 кДа до 1000 кДа, от примерно 400 кДа до 1000 кДа, от примерно 500 кДа до 1000 кДа или от примерно 750 кДа до 1000 кДа. В одном из вариантов реализации мембрана имеет порог отсечения по молекулярной массе в диапазоне от примерно 5 кДа до 500 кДа, от примерно 10 кДа до 500 кДа, от примерно 20 кДа до 500 кДа, от примерно 30 кДа до 500 кДа, от примерно 40 кДа до 500 кДа, от примерно 50 кДа до 500 кДа, от примерно 75 кДа до 500 кДа, от примерно 100 кДа до 500 кДа, от примерно 150 кДа до 500 кДа, от примерно 200 кДа до 500 кДа, от примерно 300 кДа до 500 кДа или от примерно 400 кДа до 500 кДа.

В одном из вариантов реализации мембрана имеет порог отсечения по молекулярной массе в диапазоне от примерно 5 кДа до 300 кДа, от примерно 10 кДа до 300 кДа, от примерно 20 кДа до 300 кДа, от примерно 30 кДа до 300 кДа, от примерно 40 кДа до 300 кДа, от примерно 50 кДа до 300 кДа, от примерно 75 кДа до 300 кДа, от примерно 100 кДа до 300 кДа, от примерно 150 кДа до 300 кДа или от примерно 200 кДа до 300 кДа.

В одном из вариантов реализации мембрана имеет порог отсечения по молекулярной массе в диапазоне от примерно 5 кДа до 100 кДа, от примерно 10 кДа до 100 кДа, от примерно 20 кДа до 100 кДа, от примерно 30 кДа до 100 кДа, от примерно 40 кДа до 100 кДа, от примерно 50 кДа до 100 кДа или от примерно 75 кДа до 100 кДа.

В одном из вариантов реализации мембрана имеет порог отсечения по молекулярной массе, составляющий примерно 5 кДа, примерно 10 кДа, примерно 20 кДа, примерно 30 кДа, примерно 40 кДа, примерно 50 кДа, примерно 60 кДа, примерно 70 кДа, примерно 80 кДа, примерно 90 кДа, примерно 100 кДа, примерно 110 кДа, примерно 120 кДа, примерно 130 кДа, примерно 140 кДа, примерно 150 кДа, примерно 200 кДа, примерно 250 кДа, примерно 300 кДа, примерно 400 кДа, примерно 500 кДа, примерно 750 кДа или примерно 1000 кДа.

В одном из вариантов реализации коэффициент концентрирования на стадии ультрафильтрации составляет от примерно 1,5 до примерно 10,0. В одном из вариантов реализации коэффициент концентрирования составляет от примерно 2,0 до примерно 8,0. В одном из вариантов реализации коэффициент концентрирования составляет от примерно 2,0 до примерно 5,0.

В одном из вариантов реализации коэффициент концентрирования составляет примерно 1,5, примерно 2,0, примерно 2,5, примерно 3,0, примерно 3,5, примерно 4,0, примерно 4,5, примерно 5,0, примерно 5,5, примерно 6,0, примерно 6,5, примерно 7,0, примерно 7,5, примерно 8,0, примерно 8,5, примерно 9,0, примерно 9,5 или примерно 10,0. В одном из вариантов реализации коэффициент концентрирования составляет примерно 2,0, примерно 3,0, примерно 4,0, примерно 5,0 или примерно 6,0.

В одном из вариантов реализации настоящего изобретения раствор (например, фильтрат, полученный согласно разделу 1.7 или 1.8 выше) обрабатывают с помощью диафильтрации.

В одном из вариантов реализации настоящего изобретения раствор, полученный после ультрафильтрации (УФ), как раскрыто в настоящем разделе выше, дополнительно обрабатывают с помощью диафильтрации (обработка УФ/ДФ).

Диафильтрацию (ДФ) применяют для перевода продукта в желаемый буферный раствор (или только воду). В одном из вариантов реализации диафильтрацию применяют для изменения химических свойств удерживаемого раствора при постоянном объеме. Нежелательные частицы проходят через мембрану, в то время как состав подаваемого потока изменяется до более желательного состояния путем добавления замещающего раствора (буферного раствора, солевого раствора, буферного солевого раствора или воды).

В одном из вариантов реализации замещающий раствор представляет собой воду.

В одном из вариантов реализации замещающий раствор представляет собой раствор соли в воде. В некоторых вариантах реализации соль выбрана из групп, состоящих из хлорида магния, хлорида калия, хлорида натрия и их комбинации. В одном конкретном варианте реализации соль представляет собой хлорид натрия. В одном из вариантов реализации замещающий раствор представляет собой хлорид натрия в концентрации примерно 1, примерно 5, примерно 10, примерно 15, примерно 20, примерно 25, примерно 30, примерно 35, примерно 40, примерно 45, примерно 50, примерно 55, примерно 60, примерно 65, примерно 70, примерно 80, примерно 90, примерно 100, примерно 110, примерно 120, примерно 130, примерно 140, примерно 150, примерно 160, примерно 170, примерно 180, примерно 190, примерно 200, примерно 250, примерно 300, примерно 350, примерно 400, примерно 450 или примерно 500 мМ. В одном конкретном варианте реализации замещающий раствор представляет собой хлорид натрия в концентрации примерно 1, примерно 5, примерно 10, примерно 15, примерно 20, примерно 25, примерно 30, примерно 35, примерно 40, примерно 45, примерно 50, примерно 55, примерно 60, примерно 65, примерно 70, примерно 80, примерно 90, примерно 100, примерно 110, примерно 120, примерно 130, примерно 140, примерно 150, примерно 160, примерно 170, примерно 180, примерно 190, примерно 200, примерно 250 или примерно 300 мМ. В одном конкретном варианте реализации замещающий раствор представляет собой хлорид натрия в концентрации примерно 25, примерно 30, примерно 35, примерно 40, примерно 45, примерно 50, примерно 55, примерно 60, примерно 65, примерно 70, примерно 80, примерно 90 или примерно 100 мМ.

В одном из вариантов реализации замещающий раствор представляет собой буферный раствор. В одном из вариантов реализации замещающий раствор представляет собой буферный раствор, где буфер выбран из группы, состоящей из N-(2-ацетамидо)-аминоэтансульфоновой кислоты (ACES), соли уксусной кислоты (ацетата), N-(2-ацетамидо)-иминодиуксусной кислоты (ADA), 2-аминоэтансульфоновой кислоты (AES, таурина), аммиака, 2-амино-2-метил-1-пропанола (AMP), 2-амино-2-метил-1,3-пропандиола AMPD, аммедиола, N-(1,1-диметил-2-гидроксиэтил)-3-амино-2-гидроксипропансульфоновой кислоты (AMPSO), N,N-бис-(2-гидроксиэтил)-2-аминоэтансульфоновой кислоты (BES), гидрокарбоната натрия (бикарбоната), N,N'-бис(2-гидроксиэтил)-глицина (бицина), [бис-(2-гидроксиэтил)-имино]-трис-(гидроксиметилметана) (BIS-Tris), 1,3-бис[трис(гидроксиметил)-метиламино]пропана (BIS-Tris-пропана), борной кислоты, диметиларсиновой кислоты (какодилата), 3-(циклогексиламино)-пропансульфоновой кислоты (CAPS), 3-(циклогексиламино)-2-гидрокси-1-пропансульфоновой кислоты (CAPSO), карбоната натрия (карбоната), циклогексиламиноэтансульфоновой кислоты (CHES), соли лимонной кислоты (цитрата), 3-[N-бис(гидроксиэтил)амино]-2-гидроксипропансульфоновой кислоты (DIPSO), соли муравьиной кислоты (формиата), глицина, глицилглицина, N-(2-гидроксиэтил)-пиперазин-N-этансульфоновой кислоты (HEPES), N-(2-гидроксиэтил)-пиперазин-N'-3-пропансульфоновой кислоты (HEPPS, EPPS), N-(2-гидроксиэтил)-пиперазин-N'-2-гидроксипропансульфоновой кислоты (HEPPSO), имидазола, соли яблочной кислоты (малата), соли малеиновой кислоты (малеата), 2-(N-морфолино)-этансульфоновой кислоты (MES), 3-(N-морфолино)-пропансульфоновой кислоты (MOPS), 3-(N-морфолино)-2-гидроксипропансульфоновой кислоты (MOPSO), соли фосфорной кислоты (фосфата), пиперазин-N,N'-бис(2-этансульфоновой кислоты) (PIPES), пиперазин-N,N'-бис(2-гидроксипропансульфоновой кислоты) (POPSO), пиридина, соли янтарной кислоты (сукцината), 3-{[трис(гидроксиметил)-метил]-амино}-пропансульфоновой кислоты (TAPS), 3-[N-трис(гидроксиметил)-метиламино]-2-гидроксипропансульфоновой кислоты (TAPSO), триэтаноламина (TEA), 2-[трис(гидроксиметил)-метиламино]-этансульфоновой кислоты (TES), N-[трис(гидроксиметил)-метил]-глицина (трицина) и трис(гидроксиметил)-аминометана (Tris).

В одном из вариантов реализации буфер для диафильтрации выбран из группы, состоящей из соли уксусной кислоты (ацетата), соли лимонной кислоты (цитрата), соли муравьиной кислоты (формиата), соли яблочной кислоты (малата), соли малеиновой кислоты (малеата), соли фосфорной кислоты (фосфата) и соли янтарной кислоты (сукцината). В одном из вариантов реализации буфер для диафильтрации представляет собой соль лимонной кислоты (цитрат). В одном из вариантов реализации буфер для диафильтрации представляет собой соль янтарной кислоты (сукцинат). В одном из вариантов реализации буфер для диафильтрации представляет собой соль фосфорной кислоты (фосфат). В одном из вариантов реализации указанная соль представляет собой натриевую соль. В одном из вариантов реализации указанная соль представляет собой калиевую соль.

В одном из вариантов реализации рН буфера для диафильтрации составляет от примерно 4,0 до 11,0, от примерно 5,0 до 10,0, от примерно 5,5 до 9,0, от примерно 6,0 до 8,0, от примерно 6,0 до 7,0, от примерно 6,5 до 7,5, от примерно 6,5 до 7,0 или от примерно 6,0 до 7,5. Любое число в любом из указанных выше диапазонов рассматривается в качестве варианта реализации настоящего раскрытия. В одном из вариантов реализации рН буфера для диафильтрации составляет примерно 4,0, примерно 4,5, примерно 5,0, примерно 5,5, примерно 6,0, примерно 6,5, примерно 7,0, примерно 7,5, примерно 8,0, примерно 8,5, примерно 9,0, примерно 9,5, примерно 10,0, примерно 10,5 или примерно 11,0. В одном из вариантов реализации рН буфера для диафильтрации составляет примерно 6,0, примерно 6,5, примерно 7,0, примерно 7,5, примерно 8,0, примерно 8,5 или примерно 9,0. В одном из вариантов реализации рН буфера для диафильтрации составляет примерно 6,5, примерно 7,0 или примерно 7,5. В одном из вариантов реализации рН буфера для диафильтрации составляет примерно 6,0. В одном из вариантов реализации рН буфера для диафильтрации составляет примерно 6,5. В одном из вариантов реализации рН буфера для диафильтрации составляет примерно 7,0.

В одном из вариантов реализации концентрация буфера для диафильтрации составляет от примерно 0,01 мМ до 100 мМ, от примерно 0,1 мМ до 100 мМ, от примерно 0,5 мМ до 100 мМ, от примерно 1 мМ до 100 мМ, от примерно 2 мМ до 100 мМ, от примерно 3 мМ до 100 мМ, от примерно 4 мМ до 100 мМ, от примерно 5 мМ до 100 мМ, от примерно 6 мМ до 100 мМ, от примерно 7 мМ до 100 мМ, от примерно 8 мМ до 100 мМ, от примерно 9 мМ до 100 мМ, от примерно 10 мМ до 100 мМ, от примерно 11 мМ до 100 мМ, от примерно 12 мМ до 100 мМ, от примерно 13 мМ до 100 мМ, от примерно 14 мМ до 100 мМ, от примерно 15 мМ до 100 мМ, от примерно 16 мМ до 100 мМ, от примерно 17 мМ до 100 мМ, от примерно 18 мМ до 100 мМ, от примерно 19 мМ до 100 мМ, от примерно 20 мМ до 100 мМ, от примерно 25 мМ до 100 мМ, от примерно 30 мМ до 100 мМ, от примерно 35 мМ до 100 мМ, от примерно 40 мМ до 100 мМ, от примерно 45 мМ до 100 мМ, от примерно 50 мМ до 100 мМ, от примерно 55 мМ до 100 мМ, от примерно 60 мМ до 100 мМ, от примерно 65 мМ до 100 мМ, от примерно 70 мМ до 100 мМ, от примерно 75 мМ до 100 мМ, от примерно 80 мМ до 100 мМ, от примерно 85 мМ до 100 мМ, от примерно 90 мМ до 100 мМ или от примерно 95 мМ до 100 мМ.

В одном из вариантов реализации концентрация буфера для диафильтрации составляет от примерно 0,01 мМ до 50 мМ, от примерно 0,1 мМ до 50 мМ, от примерно 0,5 мМ до 50 мМ, от примерно 1 мМ до 50 мМ, от примерно 2 мМ до 50 мМ, от примерно 3 мМ до 50 мМ, от примерно 4 мМ до 50 мМ, от примерно 5 мМ до 50 мМ, от примерно 6 мМ до 50 мМ, от примерно 7 мМ до 50 мМ, от примерно 8 мМ до 50 мМ, от примерно 9 мМ до 50 мМ, от примерно 10 мМ до 50 мМ, от примерно 11 мМ до 50 мМ, от примерно 12 мМ до 50 мМ, от примерно 13 мМ до 50 мМ, от примерно 14 мМ до 50 мМ, от примерно 15 мМ до 50 мМ, от примерно 16 мМ до 50 мМ, от примерно 17 мМ до 50 мМ, от примерно 18 мМ до 50 мМ, от примерно 19 мМ до 50 мМ, от примерно 20 мМ до 50 мМ, от примерно 25 мМ до 50 мМ, от примерно 30 мМ до 50 мМ, от примерно 35 мМ до 50 мМ, от примерно 40 мМ до 50 мМ или от примерно 45 мМ до 50 мМ.

В одном из вариантов реализации концентрация буфера для диафильтрации составляет от примерно 0,01 мМ до 25 мМ, от примерно 0,1 мМ до 25 мМ, от примерно 0,5 мМ до 25 мМ, от примерно 1 мМ до 25 мМ, от примерно 2 мМ до 25 мМ, от примерно 3 мМ до 25 мМ, от примерно 4 мМ до 25 мМ, от примерно 5 мМ до 25 мМ, от примерно 6 мМ до 25 мМ, от примерно 7 мМ до 25 мМ, от примерно 8 мМ до 25 мМ, от примерно 9 мМ до 25 мМ, от примерно 10 мМ до 25 мМ, от примерно 11 мМ до 25 мМ, от примерно 12 мМ до 25 мМ, от примерно 13 мМ до 25 мМ, от примерно 14 мМ до 25 мМ, от примерно 15 мМ до 25 мМ, от примерно 16 мМ до 25 мМ, от примерно 17 мМ до 25 мМ, от примерно 18 мМ до 25 мМ, от примерно 19 мМ до 25 мМ или от примерно 20 мМ до 25 мМ.

В одном из вариантов реализации концентрация буфера для диафильтрации составляет от примерно 0,01 мМ до 15 мМ, от примерно 0,1 мМ до 15 мМ, от примерно 0,5 мМ до 15 мМ, от примерно 1 мМ до 15 мМ, от примерно 2 мМ до 15 мМ, от примерно 3 мМ до 15 мМ, от примерно 4 мМ до 15 мМ, от примерно 5 мМ до 15 мМ, от примерно 6 мМ до 15 мМ, от примерно 7 мМ до 15 мМ, от примерно 8 мМ до 15 мМ, от примерно 9 мМ до 15 мМ, от примерно 10 мМ до 15 мМ, от примерно 11 мМ до 15 мМ, от примерно 12 мМ до 15 мМ, от примерно 13 мМ до 15 мМ или от примерно 14 мМ до 15 мМ.

В одном из вариантов реализации концентрация буфера для диафильтрации составляет от примерно 0,01 мМ до 10 мМ, от примерно 0,1 мМ до 10 мМ, от примерно 0,5 мМ до 10 мМ, от примерно 1 мМ до 10 мМ, от примерно 2 мМ до 10 мМ, от примерно 3 мМ до 10 мМ, от примерно 4 мМ до 10 мМ, от примерно 5 мМ до 10 мМ, от примерно 6 мМ до 10 мМ, от примерно 7 мМ до 10 мМ, от примерно 8 мМ до 10 мМ или от примерно 9 мМ до 10 мМ.

Любое число в любом из указанных выше диапазонов рассматривается в качестве варианта реализации настоящего раскрытия.

В одном из вариантов реализации концентрация буфера для диафильтрации составляет примерно 0,01 мМ, примерно 0,05 мМ, примерно 0,1 мМ, примерно 0,2 мМ, примерно 0,3 мМ, примерно 0,4 мМ, примерно 0,5 мМ, примерно 0,6 мМ, примерно 0,7 мМ, примерно 0,8 мМ, примерно 0,9 мМ, примерно 1 мМ, примерно 2 мМ, примерно 3 мМ, примерно 4 мМ, примерно 5 мМ, примерно 6 мМ, примерно 7 мМ, примерно 8 мМ, примерно 9 мМ, примерно 10 мМ, примерно 11 мМ, примерно 12 мМ, примерно 13 мМ, примерно 14 мМ, примерно 15 мМ, примерно 16 мМ, примерно 17 мМ, примерно 18 мМ, примерно 19 мМ, примерно 20 мМ, примерно 25 мМ, примерно 30 мМ, примерно 35 мМ, примерно 40 мМ, примерно 45 мМ, примерно 50 мМ, примерно 55 мМ, примерно 60 мМ, примерно 65 мМ, примерно 70 мМ, примерно 75 М, примерно 80 мМ, примерно 85 мМ, примерно 90 мМ, примерно 95 мМ или примерно 100 мМ.

В одном из вариантов реализации концентрация буфера для диафильтрации составляет примерно 0,1 мМ, примерно 0,2 мМ, примерно 1 мМ, примерно 5 мМ, примерно 10 мМ, примерно 15 мМ, примерно 20 мМ, примерно 25 мМ, примерно 30 мМ, примерно 40 мМ или примерно 50 мМ. В одном из вариантов реализации концентрация буфера для диафильтрации составляет примерно 30 мМ. В одном из вариантов реализации концентрация буфера для диафильтрации составляет примерно 25 мМ. В одном из вариантов реализации концентрация буфера для диафильтрации составляет примерно 20 мМ. В одном из вариантов реализации концентрация буфера для диафильтрации составляет примерно 15 мМ. В одном из вариантов реализации концентрация буфера для диафильтрации составляет примерно 10 мМ.

В одном из вариантов реализации буферный раствор для диафильтрации содержит соль. В некоторых вариантах реализации соль выбрана из групп, состоящих из хлорида магния, хлорида калия, хлорида натрия и их комбинации. В одном конкретном варианте реализации соль представляет собой хлорид натрия. В одном конкретном варианте реализации буферный раствор для диафильтрации содержит хлорид натрия в концентрации примерно 1, примерно 5, примерно 10, примерно 15, примерно 20, примерно 25, примерно 30, примерно 35, примерно 40, примерно 45, примерно 50, примерно 55, примерно 60, примерно 65, примерно 70, примерно 80, примерно 90, примерно 100, примерно 110, примерно 120, примерно 130, примерно 140, примерно 150, примерно 160, примерно 170, примерно 180, примерно 190, примерно 200, примерно 250 или примерно 300 мМ.

В одном из вариантов реализации настоящего изобретения количество объемов диафильтрации составляет по меньшей мере 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45 или 50. В одном из вариантов реализации настоящего изобретения количество объемов диафильтрации составляет примерно 1, примерно 2, примерно 3, примерно 4, примерно 5, примерно 6, примерно 7, примерно 8, примерно 9, примерно 10, примерно 11, примерно 12, примерно 13, примерно 14, примерно 15, примерно 16, примерно 17, примерно 18, примерно 19, примерно 20, примерно 21, примерно 22, примерно 23, примерно 24, примерно 25, примерно 26, примерно 27, примерно 28, примерно 29, примерно 30, примерно 31, примерно 32, примерно 33, примерно 34, примерно 35, примерно 36, примерно 37, примерно 38, примерно 39, примерно 40, примерно 41, примерно 42, примерно 43, примерно 44, примерно 45, примерно 46, примерно 47, примерно 48, примерно 49, примерно 50, примерно 55, примерно 60, примерно 65, примерно 70, примерно 75, примерно 80, примерно 85, примерно 90, примерно 95 или примерно 100. В одном из вариантов реализации настоящего изобретения количество объемов диафильтрации составляет примерно 5, примерно 6, примерно 7, примерно 8, примерно 9, примерно 10, примерно 11, примерно 12, примерно 13, примерно 14 или примерно 15.

В одном из вариантов реализации настоящего изобретения стадии ультрафильтрации и диафильтрации проводят при температуре от примерно 20°С до примерно 90°С. В одном из вариантов реализации стадии ультрафильтрации и диафильтрации проводят при температуре от примерно 35°С до примерно 80°С, при температуре от примерно 40°С до примерно 70°С, при температуре от примерно 45°С до примерно 65°С, при температуре от примерно 50°С до примерно 60°С, при температуре от примерно 50°С до примерно 55°С, при температуре от примерно 45°С до примерно 55°С или при температуре от примерно 45°С до примерно 55°С.Любое число в любом из указанных выше диапазонов рассматривается в качестве варианта реализации настоящего раскрытия.

В одном из вариантов реализации стадии ультрафильтрации и диафильтрации проводят при температуре примерно 20°С, примерно 21°С, примерно 22°С, примерно 23°С, примерно 24°С, примерно 25°С, примерно 26°С, примерно 27°С, примерно 28°С, примерно 29°С, примерно 30°С, примерно 31°С, примерно 32°С, примерно 33°С, примерно 34°С, примерно 35°С, примерно 36°С, примерно 37°С, примерно 38°С, примерно 39°С, примерно 40°С, примерно 41°С, примерно 42°С, примерно 43°С, примерно 44°С, примерно 45°С, примерно 46°С, примерно 47°С, примерно 48°С, примерно 49°С, примерно 50°С, примерно 51°С, примерно 52°С, примерно 53°С, примерно 54°С, примерно 55°С, примерно 56°С, примерно 57°С, примерно 58°С, примерно 59°С, примерно 60°С, примерно 61°С, примерно 62°С, примерно 63°С, примерно 64°С, примерно 65°С, примерно 66°С, примерно 67°С, примерно 68°С, примерно 69°С, примерно 70°С, примерно 71°С, примерно 72°С, примерно 73°С, примерно 74°С, примерно 75°С, примерно 76°С, примерно 77°С, примерно 78°С, примерно 79°С или примерно 80°С. В одном из вариантов реализации стадию ультрафильтрации и диафильтрации проводят при температуре примерно 50°С.

В одном из вариантов реализации настоящего изобретения стадию диафильтрации проводят при температуре от примерно 20°С до примерно 90°С. В одном из вариантов реализации стадию диафильтрации проводят при температуре от примерно 35°С до примерно 80°С, при температуре от примерно 40°С до примерно 70°С, при температуре от примерно 45°С до примерно 65°С, при температуре от примерно 50°С до примерно 60°С, при температуре от примерно 50°С до примерно 55°С, при температуре от примерно 45°С до примерно 55°С или при температуре от примерно 45°С до примерно 55°С.Любое число в любом из указанных выше диапазонов рассматривается в качестве варианта реализации настоящего раскрытия.

В одном из вариантов реализации стадию диафильтрации проводят при температуре примерно 20°С, примерно 21°С, примерно 22°С, примерно 23°С, примерно 24°С, примерно 25°С, примерно 26°С, примерно 27°С, примерно 28°С, примерно 29°С, примерно 30°С, примерно 31°С, примерно 32°С, примерно 33°С, примерно 34°С, примерно 35°С, примерно 36°С, примерно 37°С, примерно 38°С, примерно 39°С, примерно 40°С, примерно 41°С, примерно 42°С, примерно 43°С, примерно 44°С, примерно 45°С, примерно 46°С, примерно 47°С, примерно 48°С, примерно 49°С, примерно 50°С, примерно 51°С, примерно 52°С, примерно 53°С, примерно 54°С, примерно 55°С, примерно 56°С, примерно 57°С, примерно 58°С, примерно 59°С, примерно 60°С, примерно 61°С, примерно 62°С, примерно 63°С, примерно 64°С, примерно 65°С, примерно 66°С, примерно 67°С, примерно 68°С, примерно 69°С, примерно 70°С, примерно 71°С, примерно 72°С, примерно 73°С, примерно 74°С, примерно 75°С, примерно 76°С, примерно 77°С, примерно 78°С, примерно 79°С или примерно 80°С. В одном из вариантов реализации стадию диафильтрации проводят при температуре примерно 50°С.

В одном из вариантов реализации настоящего изобретения стадию ультрафильтрации проводят при температуре от примерно 20°С до примерно 90°С. В одном из вариантов реализации стадию ультрафильтрации проводят при температуре от примерно 35°С до примерно 80°С, при температуре от примерно 40°С до примерно 70°С, при температуре от примерно 45°С до примерно 65°С, при температуре от примерно 50°С до примерно 60°С, при температуре от примерно 50°С до примерно 55°С, при температуре от примерно 45°С до примерно 55°С или при температуре от примерно 45°С до примерно 55°С.Любое число в любом из указанных выше диапазонов рассматривается в качестве варианта реализации настоящего раскрытия.

В одном из вариантов реализации стадию ультрафильтрации проводят при температуре примерно 20°С, примерно 21°С, примерно 22°С, примерно 23°С, примерно 24°С, примерно 25°С, примерно 26°С, примерно 27°С, примерно 28°С, примерно 29°С, примерно 30°С, примерно 31°С, примерно 32°С, примерно 33°С, примерно 34°С, примерно 35°С, примерно 36°С, примерно 37°С, примерно 38°С, примерно 39°С, примерно 40°С, примерно 41°С, примерно 42°С, примерно 43°С, примерно 44°С, примерно 45°С, примерно 46°С, примерно 47°С, примерно 48°С, примерно 49°С, примерно 50°С, примерно 51°С, примерно 52°С, примерно 53°С, примерно 54°С, примерно 55°С, примерно 56°С, примерно 57°С, примерно 58°С, примерно 59°С, примерно 60°С, примерно 61°С, примерно 62°С, примерно 63°С, примерно 64°С, примерно 65°С, примерно 66°С, примерно 67°С, примерно 68°С, примерно 69°С, примерно 70°С, примерно 71°С, примерно 72°С, примерно 73°С, примерно 74°С, примерно 75°С, примерно 76°С, примерно 77°С, примерно 78°С, примерно 79°С или примерно 80°С. В одном из вариантов реализации стадию ультрафильтрации проводят при температуре примерно 50°С.

1.10 Гомогенизация / калибровка по размеру

Полисахарид может немного уменьшаться в размере во время процедур очистки.

В одном из вариантов реализации очищенный раствор полисахарида согласно настоящему изобретению (например, полученный путем ультрафильтрации и/или диафильтрации согласно разделу 1.9) не подвергают калибровке по размеру.

В одном из вариантов реализации полисахарид может быть гомогенизирован с помощью методик калибровки по размеру. Может быть использован механический или химический способ калибровки по размеру. Может быть проведен химический гидролиз с применением, например, уксусной кислоты. Механическая калибровка по размеру может быть проведена с использованием гомогенизирующего фрагментирования под давлением.

Таким образом, в одном из вариантов реализации очищенный раствор полисахарида, полученный с помощью ультрафильтрации и/или диафильтрации в разделе 1.9, откалиброван с обеспечением размера, соответствующего целевой молекулярной массе.

В контексте настоящего описания термин «молекулярная масса» полисахарида относится к молекулярной массе, рассчитанной, например, с помощью эксклюзионной хроматографии (SEC) в сочетании с детектором многоуглового рассеяния лазерного излучения (MALLS).

В некоторых вариантах реализации очищенный полисахарид откалиброван с обеспечением молекулярной массы от примерно 5 кДа до примерно 4000 кДа. В других таких вариантах реализации очищенный полисахарид откалиброван с обеспечением молекулярной массы от примерно 10 кДа до примерно 4000 кДа. В других таких вариантах реализации очищенный полисахарид откалиброван с обеспечением молекулярной массы от примерно 50 кДа до примерно 4000 кДа. В других таких вариантах реализации очищенный полисахарид откалиброван с обеспечением молекулярной массы от примерно 50 кДа до примерно 3500 кДа; от примерно 50 кДа до примерно 3000 кДа; от примерно 50 кДа до примерно 2500 кДа; от примерно 50 кДа до примерно 2000 кДа; от примерно 50 кДа до примерно 1750 кДа; от примерно 50 кДа до примерно 1500 кДа; от примерно 50 кДа до примерно 1250 кДа; от примерно 50 кДа до примерно 1000 кДа; от примерно 50 кДа до примерно 750 кДа; от примерно 50 кДа до примерно 500 кДа; от примерно 100 кДа до примерно 4000 кДа; от примерно 100 кДа до примерно 3500 кДа; от примерно 100 кДа до примерно 3000 кДа; от примерно 100 кДа до примерно 2500 кДа; от примерно 100 кДа до примерно 2250 кДа; от примерно 100 кДа до примерно 2000 кДа; от примерно 100 кДа до примерно 1750 кДа; от примерно 100 кДа до примерно 1500 кДа; от примерно 100 кДа до примерно 1250 кДа; от примерно 100 кДа до примерно 1000 кДа; от примерно 100 кДа до примерно 750 кДа; от примерно 100 кДа до примерно 500 кДа; от примерно 200 кДа до примерно 4000 кДа; от примерно 200 кДа до примерно 3500 кДа; от примерно 200 кДа до примерно 3000 кДа; от примерно 200 кДа до примерно 2500 кДа; от примерно 200 кДа до примерно 2250 кДа; от примерно 200 кДа до примерно 2000 кДа; от примерно 200 кДа до примерно 1750 кДа; от примерно 200 кДа до примерно 1500 кДа; от примерно 200 кДа до примерно 1250 кДа; от примерно 200 кДа до примерно 1000 кДа; от примерно 200 кДа до примерно 750 кДа или от примерно 200 кДа до примерно 500 кДа. В других таких вариантах реализации очищенный полисахарид откалиброван с обеспечением молекулярной массы от примерно 250 кДа до примерно 3500 кДа; от примерно 250 кДа до примерно 3000 кДа; от примерно 250 кДа до примерно 2500 кДа; от примерно 250 кДа до примерно 2000 кДа; от примерно 250 кДа до примерно 1750 кДа; от примерно 250 кДа до примерно 1500 кДа; от примерно 250 кДа до примерно 1250 кДа; от примерно 250 кДа до примерно 1000 кДа; от примерно 250 кДа до примерно 750 кДа; от примерно 250 кДа до примерно 500 кДа; от примерно 300 кДа до примерно 4000 кДа; от примерно 300 кДа до примерно 3500 кДа; от примерно 300 кДа до примерно 3000 кДа; от примерно 300 кДа до примерно 2500 кДа; от примерно 300 кДа до примерно 2250 кДа; от примерно 300 кДа до примерно 2000 кДа; от примерно 300 кДа до примерно 1750 кДа; от примерно 300 кДа до примерно 1500 кДа; от примерно 300 кДа до примерно 1250 кДа; от примерно 300 кДа до примерно 1000 кДа; от примерно 300 кДа до примерно 750 кДа; от примерно 300 кДа до примерно 500 кДа; от примерно 500 кДа до примерно 4000 кДа; от примерно 500 кДа до примерно 3500 кДа; от примерно 500 кДа до примерно 3000 кДа; от примерно 500 кДа до примерно 2500 кДа; от примерно 500 кДа до примерно 2250 кДа; от примерно 500 кДа до примерно 2000 кДа; от примерно 500 кДа до примерно 1750 кДа; от примерно 500 кДа до примерно 1500 кДа; от примерно 500 кДа до примерно 1250 кДа; от примерно 500 кДа до примерно 1000 кДа; от примерно 500 кДа до примерно 750 кДа или от примерно 500 кДа до примерно 600 кДа.

Любое число в любом из указанных выше диапазонов рассматривается в качестве варианта реализации настоящего раскрытия.

В некоторых вариантах реализации очищенный полисахарид откалиброван с обеспечением молекулярной массы, составляющей примерно 5 кДа, примерно 10 кДа, примерно 15 кДа, примерно 20 кДа, примерно 25 кДа, примерно 30 кДа, примерно 35 кДа, примерно 40 кДа, примерно 45 кДа, примерно 50 кДа, примерно 75 кДа, примерно 90 кДа, примерно 100 кДа, примерно 150 кДа, примерно 200 кДа, примерно 250 кДа, примерно 300 кДа, примерно 350 кДа, примерно 400 кДа, примерно 450 кДа, примерно 500 кДа, примерно 550 кДа, примерно 600 кДа, примерно 650 кДа, примерно 700 кДа, примерно 750 кДа, примерно 800 кДа, примерно 850 кДа, примерно 900 кДа, примерно 950 кДа, примерно 1000 кДа, примерно 1250 кДа, примерно 1500 кДа, примерно 1750 кДа, примерно 2000 кДа, примерно 2250 кДа, примерно 2500 кДа, примерно 2750 кДа, примерно 3000 кДа, примерно 3250 кДа, примерно 3500 кДа, примерно 3750 кДа или примерно 4000 кДа. В предпочтительном варианте реализации очищенные полисахариды представляют собой капсульный полисахарид серотипов 1, 3, 4, 5, 6А, 6В, 7F, 8, 9V, 10A, 11А, 12F, 14, 15А, 15В, 18С, 19А, 19F, 22F, 23F или 33F S. pneumoniae, причем указанный капсульный полисахарид имеет молекулярную массу, находящуюся в пределах одного из указанных выше диапазонов, или имеет примерно такой размер, как описано выше в настоящем описании.

1.11 Стерилизующая фильтрация

В одном из вариантов реализации очищенный раствор полисахарида согласно настоящему изобретению подвергают стерилизующей фильтрации.

Следовательно, в одном из вариантов реализации за стадией ультрафильтрации и/или диафильтрации согласно разделу 1.9 необязательно может следовать стадия стерилизующей фильтрации.

В одном из вариантов реализации за стадией гомогенизации/калибровки по размеру согласно разделу 1.10, если она проводится, необязательно может следовать стадия стерилизующей фильтрации.

В одном из вариантов реализации за любой из стадий согласно разделам 1.2-1.8 может необязательно может следовать стадия стерилизующей фильтрации.

В одном из вариантов реализации стерилизующая фильтрация представляет собой тупиковую фильтрацию (перпендикулярную фильтрацию). В одном из вариантов реализации стерилизующая фильтрация представляет собой тангенциальную фильтрацию.

В одном из вариантов реализации раствор обрабатывают с применением стадии стерилизующей фильтрации, на которой фильтр имеет номинальный диапазон удерживания, составляющий примерно 0,01-0,2 мкм, примерно 0,05-0,2 мкм, примерно 0,1-0,2 мкм или примерно 0,15-0,2 мкм.

Любое число в любом из указанных выше диапазонов рассматривается в качестве варианта реализации настоящего раскрытия.

В одном из вариантов реализации раствор обрабатывают с применением стадии стерилизующей фильтрации, на которой фильтр имеет номинальный диапазон удерживания, составляющий примерно 0,05, примерно 0,1, примерно 0,15 или примерно 0,2 мкм.

В одном из вариантов реализации раствор обрабатывают с применением стадии стерилизующей фильтрации, на которой фильтр имеет номинальный диапазон удерживания, составляющий примерно 0,2 мкм.

В одном из вариантов реализации раствор обрабатывают с применением стадии стерилизующей фильтрации, на которой фильтр имеет производительность, составляющую примерно 25-1500 л/м², 50-1500 л/м², 75-1500 л/м², 100-1500 л/м², 150-1500 л/м², 200-1500 л/м², 250-1500 л/м², 300-1500 л/м², 350-1500 л/м², 400-1500 л/м², 500-1500 л/м², 750-1500 л/м², 1000-1500 л/м² или 1250-1500 л/м². В одном из вариантов реализации раствор обрабатывают с применением стадии стерилизующей фильтрации, на которой фильтр имеет производительность, составляющую примерно 25-1000 л/м², 50-1000 л/м², 75-1000 л/м², 100-1000 л/м², 150-1000 л/м², 200-1000 л/м², 250-1000 л/м², 300-1000 л/м², 350-1000 л/м², 400-1000 л/м², 500-1000 л/м² или 750-1000 л/м².

В одном из вариантов реализации раствор обрабатывают с применением стадии стерилизующей фильтрации, на которой фильтр имеет производительность, составляющую 25-500 л/м², 50-500 л/м², 75-500 л/м², 100-500 л/м², 150-500 л/м², 200-500 л/м², 250-500 л/м², 300-500 л/м², 350-500 л/м² или 400-500 л/м². В одном из вариантов реализации раствор обрабатывают с применением стадии стерилизующей фильтрации, на которой фильтр имеет производительность, составляющую 25-300 л/м², 50-300 л/м², 75-300 л/м², 100-300 л/м², 150-300 л/м², 200-300 л/м² или 250-300 л/м².

В одном из вариантов реализации раствор обрабатывают с применением стадии стерилизующей фильтрации, на которой фильтр имеет производительность, составляющую 25-250 л/м², 50-250 л/м², 75-250 л/м², 100-250 л/м² или 150-250 л/м², 200-250 л/м².

В одном из вариантов реализации раствор обрабатывают с применением стадии стерилизующей фильтрации, на которой фильтр имеет производительность, составляющую 25-100 л/м², 50-100 л/м² или 75-100 л/м².

Любое число в любом из указанных выше диапазонов рассматривается в качестве варианта реализации настоящего раскрытия.

В одном из вариантов реализации раствор обрабатывают с применением стадии микрофильтрации, на которой фильтр имеет производительность, составляющую примерно 25, примерно 50, примерно 75, примерно 100, примерно 150, примерно 200, примерно 250, примерно 300, примерно 350, примерно 400, примерно 500, примерно 600, примерно 700, примерно 800, примерно 900, примерно 1000, примерно 1100, примерно 1200, примерно 1300, примерно 1400 или примерно 1500 л/м².

1.12 Конечный продукт

Конечный полисахарид может быть приготовлен в виде жидкого раствора.

Полисахарид может быть подвергнут дальнейшей обработке (например, лиофилизирован в виде высушенного порошка, см. WO 2006/110381). Следовательно, в одном из вариантов реализации полисахарид представляет собой высушенный порошок.

В одном из вариантов реализации полисахарид представляет собой полученный путем сублимационной сушки осадок.

2 Применение очищенных полисахаридов

Полисахариды, очищенные с применением способа согласно настоящему изобретению, могут быть применены в качестве антигенов. Простые полисахариды применяют в качестве антигенов в вакцинах (см. 23-валентную неконъюгированную пневмококковую полисахаридную вакцину Pneumovax).

Полисахарид, очищенный с применением способа согласно настоящему изобретению, также может быть конъюгирован с белком-носителем (белками-носителями) с получением гликоконъюгата.

2.1 Гликоконъюгаты

Полисахарид, очищенный с применением способа согласно настоящему изобретению, может быть конъюгирован с белком-носителем (белками-носителями) с получением гликоконъюгата.

Применительно к настоящему изобретению термин «гликоконъюгат» означает сахарид, ковалентно связанный с белком-носителем. В одном из вариантов реализации сахарид непосредственно связан с белком-носителем. Во втором варианте реализации сахарид связан с белком-носителем посредством спейсера/линкера.

В целом, ковалентное конъюгирование сахаридов с носителями повышает иммуногенность сахаридов, поскольку оно ведет к их превращению из Т-независимых антигенов в Т-зависимые антигены, тем самым обеспечивая прайминг для иммунологической памяти. В частности, конъюгирование пригодно для применения в случае педиатрических вакцин.

Полисахариды, очищенные с применением способа согласно настоящему изобретению, могут быть активированы (например, химически активированы), что обеспечивает им способность к взаимодействию (например, с линкером или непосредственно с белком-носителем), и затем включены в гликоконъюгаты, как описано далее в настоящем описании.

Перед конъюгированием очищенный полисахарид может быть откалиброван по размеру с обеспечением целевой молекулярной массы, например, способами, описанными в разделе 1.11 выше. Следовательно, в одном из вариантов реализации очищенный полисахарид перед конъюгированием откалиброван по размеру. В одном из вариантов реализации очищенный полисахарид, описанный в настоящем описании, перед конъюгированием может быть откалиброван по размеру с получением олигосахарида. Олигосахариды имеют небольшое количество повторяющихся звеньев (как правило, 5-15 повторяющихся звеньев) и, как правило, их получают путем калибровки полисахарида по размеру (например, гидролиза).

Однако предпочтительно сахарид, применяемый для конъюгирования, представляет собой полисахарид. Высокомолекулярные полисахариды способны индуцировать определенные опосредованные антителами иммунные ответы вследствие присутствия эпитопов на антигенной поверхности. Для применения в конъюгатах согласно настоящему изобретению предпочтительно предполагается выделение и очистка высокомолекулярных полисахаридов.

Следовательно, в одном из вариантов реализации полисахарид откалиброван по размеру и сохраняет структуру полисахарида.

В одном из вариантов реализации полисахарид не откалиброван по размеру.

В некоторых вариантах реализации очищенный полисахарид перед конъюгированием (после калибровки по размеру или без калибровки по размеру) имеет молекулярную массу от 5 кДа до 4000 кДа. В других таких вариантах реализации очищенный полисахарид имеет молекулярную массу от 10 кДа до 4000 кДа. В других таких вариантах реализации очищенный полисахарид имеет молекулярную массу от 50 кДа до 4000 кДа. В других таких вариантах реализации полисахарид имеет молекулярную массу от 50 кДа до 3500 кДа; от 50 кДа до 3000 кДа; от 50 кДа до 2500 кДа; от 50 кДа до 2000 кДа; от 50 кДа до 1750 кДа; от 50 кДа до 1500 кДа; от 50 кДа до 1250 кДа; от 50 кДа до 1000 кДа; от 50 кДа до 750 кДа; от 50 кДа до 500 кДа; от 100 кДа до 4000 кДа; от 100 кДа до 3500 кДа; от 100 кДа до 3000 кДа; от 100 кДа до 2500 кДа; от 100 кДа до 2250 кДа; от 100 кДа до 2000 кДа; от 100 кДа до 1750 кДа; от 100 кДа до 1500 кДа; от 100 кДа до 1250 кДа; от 100 кДа до 1000 кДа; от 100 кДа до 750 кДа; от 100 кДа до 500 кДа; от 200 кДа до 4000 кДа; от 200 кДа до 3500 кДа; от 200 кДа до 3000 кДа; от 200 кДа до 2500 кДа; от 200 кДа до 2250 кДа; от 200 кДа до 2000 кДа; от 200 кДа до 1750 кДа; от 200 кДа до 1500 кДа; от 200 кДа до 1250 кДа; от 200 кДа до 1000 кДа; от 200 кДа до 750 кДа или от 200 кДа до 500 кДа. В других таких вариантах реализации полисахарид имеет молекулярную массу от 250 кДа до 3500 кДа; от 250 кДа до 3000 кДа; от 250 кДа до 2500 кДа; от 250 кДа до 2000 кДа; от 250 кДа до 1750 кДа; от 250 кДа до 1500 кДа; от 250 кДа до 1250 кДа; от 250 кДа до 1000 кДа; от 250 кДа до 750 кДа; от 250 кДа до 500 кДа; от 300 кДа до 4000 кДа; от 300 кДа до 3500 кДа; от 300 кДа до 3000 кДа; от 300 кДа до 2500 кДа; от 300 кДа до 2250 кДа; от 300 кДа до 2000 кДа; от 300 кДа до 1750 кДа; от 300 кДа до 1500 кДа; от 300 кДа до 1250 кДа; от 300 кДа до 1000 кДа; от 300 кДа до 750 кДа; от 300 кДа до 500 кДа; от 500 кДа до 4000 кДа; от 500 кДа до 3500 кДа; от 500 кДа до 3000 кДа; от 500 кДа до 2500 кДа; от 500 кДа до 2250 кДа; от 500 кДа до 2000 кДа; от 500 кДа до 1750 кДа; от 500 кДа до 1500 кДа; от 500 кДа до 1250 кДа; от 500 кДа до 1000 кДа; от 500 кДа до 750 кДа или от 500 кДа до 600 кДа. Любое число в любом из указанных выше диапазонов рассматривается в качестве варианта реализации настоящего раскрытия.

В некоторых вариантах реализации очищенный полисахарид имеет молекулярную массу примерно 5 кДа, 10 кДа, 15 кДа, 20 кДа, 25 кДа, 30 кДа, 35 кДа, 40 кДа, 45 кДа, 50 кДа, 75 кДа, 90 кДа, 100 кДа, 150 кДа, 200 кДа, 250 кДа, 300 кДа, 350 кДа, 400 кДа, 450 кДа, 500 кДа, 550 кДа, 600 кДа, 650 кДа, 700 кДа, 750 кДа, 800 кДа, 850 кДа, 900 кДа, 950 кДа, 1000 кДа, 1250 кДа, 1500 кДа, 1750 кДа, 2000 кДа, 2250 кДа, 2500 кДа, 2750 кДа, 3000 кДа, 3250 кДа, 3500 кДа, 3750 кДа или 4000 кДа.

В одном из вариантов реализации очищенный полисахарид представляет собой капсульный сахарид (полисахарид или олигосахарид).

В одном из вариантов реализации очищенный полисахарид представляет собой капсульный полисахарид Staphylococcus aureus. В одном из вариантов реализации очищенный полисахарид представляет собой капсульный полисахарид Staphylococcus aureus типа 5 или типа 8.

В другом варианте реализации очищенный полисахарид представляет собой капсульный полисахарид Enterococcus faecalls. В еще одном варианте реализации очищенный полисахарид представляет собой капсульный полисахарид Haemophilus influenzae типа b.

В другом варианте реализации очищенный полисахарид представляет собой капсульный полисахарид Neisseria meningitidis. В одном из вариантов реализации очищенный полисахарид представляет собой капсульный полисахарид N. meningitidis серогруппы А (MenA), N. meningitidis серогруппы W135 (MenW135), N. meningitidis серогруппы Y (MenY), N. meningitidis серогруппы X (MenX) или N. meningitidis серогруппы С (MenC).

В другом варианте реализации очищенный полисахарид представляет собой капсульный полисахарид Escherichia coli. В одном из вариантов реализации очищенный полисахарид представляет собой капсульный полисахарид части Escherichia coli группы энтеровирулентных типов Escherichia coli (группы EEC), таких как Escherichia coli - энтеротоксигенные (ETEC), Escherichia coli -энтеропатогенные (ЕРЕС), Escherichia coli - O157:Н7 энтерогеморрагические (ЕНЕС) или Escherichia coli - энтероинвазивные (EIEC). В одном из вариантов реализации очищенный полисахарид представляет собой капсульный полисахарид уропатогенной Escherichia coli (UPEC).

В одном из вариантов реализации очищенный полисахарид представляет собой капсульный полисахарид серотипа Escherichia coli, выбранного из группы, состоящей из серотипов O157:Н7, O26:1411, O111:Н- и О103:Н2. В одном из вариантов реализации очищенный полисахарид представляет собой капсульный полисахарид серотипа Escherichia coli, выбранного из группы, состоящей из серотипов O6:К2:Н1 и O18:К1:Н7. В одном из вариантов реализации очищенный полисахарид представляет собой капсульный полисахарид серотипа Escherichia coli, выбранного из группы, состоящей из серотипов O45:К1, O17:К52:Н18, O19:Н34 и O7:К1. В одном из вариантов реализации очищенный полисахарид представляет собой капсульный полисахарид Escherichia coli серотипа О104:Н4. В одном из вариантов реализации очищенный полисахарид представляет собой капсульный полисахарид Escherichia coli серотипа O1:К12:Н7. В одном из вариантов реализации очищенный полисахарид представляет собой капсульный полисахарид Escherichia coli серотипа O127.HQ. В одном из вариантов реализации очищенный полисахарид представляет собой капсульный полисахарид Escherichia coli серотипа O139:Н28. В одном из вариантов реализации очищенный полисахарид представляет собой капсульный полисахарид Escherichia coli серотипа O128:Н2. В другом варианте реализации очищенный полисахарид представляет собой капсульный полисахарид Streptococcus agalactiae (стрептококка группы В (СГБ)). В некоторых вариантах реализации очищенный полисахарид представляет собой капсульный полисахарид, выбранный из группы, состоящей из капсульных полисахаридов СГБ типов Ia, Ib, II, III, IV, V, VI, VII и VIII. В некоторых вариантах реализации очищенный полисахарид представляет собой капсульный полисахарид, выбранный из группы, состоящей из капсульных полисахаридов СГБ типов Ia, Ib, II, III и V.

В предпочтительном варианте реализации очищенный полисахарид представляет собой капсульный полисахарид Steptococcus pneumoniae. В одном из вариантов реализации очищенный полисахарид представляет собой капсульный полисахарид Streptococcus pneumoniae серотипа 1. В другом варианте реализации очищенный полисахарид представляет собой капсульный полисахарид Streptococcus pneumoniae серотипа 2. В другом варианте реализации очищенный полисахарид представляет собой капсульный полисахарид Streptococcus pneumoniae серотипа 3. В другом варианте реализации очищенный полисахарид представляет собой капсульный полисахарид Streptococcus pneumoniae серотипа 4. В другом варианте реализации очищенный полисахарид представляет собой капсульный полисахарид Streptococcus pneumoniae серотипа 5. В другом варианте реализации очищенный полисахарид представляет собой капсульный полисахарид Streptococcus pneumoniae серотипа 6А. В другом варианте реализации очищенный полисахарид представляет собой капсульный полисахарид Streptococcus pneumoniae серотипа 6 В. В другом варианте реализации очищенный полисахарид представляет собой капсульный полисахарид Streptococcus pneumoniae серотипа 6С. В другом варианте реализации очищенный полисахарид представляет собой капсульный полисахарид Streptococcus pneumoniae серотипа 7F. В другом варианте реализации очищенный полисахарид представляет собой капсульный полисахарид Streptococcus pneumoniae серотипа 8. В другом варианте реализации очищенный полисахарид представляет собой капсульный полисахарид Streptococcus pneumoniae серотипа 9V. В другом варианте реализации очищенный полисахарид представляет собой капсульный полисахарид Streptococcus pneumoniae серотипа 9N. В другом варианте реализации очищенный полисахарид представляет собой капсульный полисахарид Streptococcus pneumoniae серотипа 10А. В другом варианте реализации очищенный полисахарид представляет собой капсульный полисахарид Streptococcus pneumoniae серотипа 11 А. В другом варианте реализации очищенный полисахарид представляет собой капсульный полисахарид Streptococcus pneumoniae серотипа 12F. В другом варианте реализации очищенный полисахарид представляет собой капсульный полисахарид Streptococcus pneumoniae серотипа 14. В другом варианте реализации очищенный полисахарид представляет собой капсульный полисахарид Streptococcus pneumoniae серотипа 15А. В другом варианте реализации очищенный полисахарид представляет собой капсульный полисахарид Streptococcus pneumoniae серотипа 15 В. В другом варианте реализации очищенный полисахарид представляет собой капсульный полисахарид Streptococcus pneumoniae серотипа 15С. В другом варианте реализации очищенный полисахарид представляет собой капсульный полисахарид Streptococcus pneumoniae серотипа 16F. В другом варианте реализации очищенный полисахарид представляет собой капсульный полисахарид Streptococcus pneumoniae серотипа 17F. В другом варианте реализации очищенный полисахарид представляет собой капсульный полисахарид Streptococcus pneumoniae серотипа 18С. В другом варианте реализации очищенный полисахарид представляет собой капсульный полисахарид Streptococcus pneumoniae серотипа 19А. В другом варианте реализации очищенный полисахарид представляет собой капсульный полисахарид Streptococcus pneumoniae серотипа 19F. В другом варианте реализации очищенный полисахарид представляет собой капсульный полисахарид Streptococcus pneumoniae серотипа 20. В другом варианте реализации очищенный полисахарид представляет собой капсульный полисахарид Streptococcus pneumoniae серотипа 20А. В другом варианте реализации очищенный полисахарид представляет собой капсульный полисахарид Streptococcus pneumoniae серотипа 20 В. В другом варианте реализации очищенный полисахарид представляет собой капсульный полисахарид Streptococcus pneumoniae серотипа 22F. В другом варианте реализации очищенный полисахарид представляет собой капсульный полисахарид Streptococcus pneumoniae серотипа 23А. В другом варианте реализации очищенный полисахарид представляет собой капсульный полисахарид Streptococcus pneumoniae серотипа 23 В. В другом варианте реализации очищенный полисахарид представляет собой капсульный полисахарид Streptococcus pneumoniae серотипа 23F. В другом варианте реализации очищенный полисахарид представляет собой капсульный полисахарид Streptococcus pneumoniae серотипа 24 В. В другом варианте реализации очищенный полисахарид представляет собой капсульный полисахарид Streptococcus pneumoniae серотипа 24F. В другом варианте реализации очищенный полисахарид представляет собой капсульный полисахарид Streptococcus pneumoniae серотипа 29. В другом варианте реализации очищенный полисахарид представляет собой капсульный полисахарид Streptococcus pneumoniae серотипа 31. В другом варианте реализации очищенный полисахарид представляет собой капсульный полисахарид Streptococcus pneumoniae серотипа 33F. В другом варианте реализации очищенный полисахарид представляет собой капсульный полисахарид Streptococcus pneumoniae серотипа 34. В другом варианте реализации очищенный полисахарид представляет собой капсульный полисахарид Streptococcus pneumoniae серотипа 35 В. В другом варианте реализации очищенный полисахарид представляет собой капсульный полисахарид Streptococcus pneumoniae серотипа 35F. В другом варианте реализации очищенный полисахарид представляет собой капсульный полисахарид Streptococcus pneumoniae серотипа 38. В другом варианте реализации очищенный полисахарид представляет собой капсульный полисахарид Streptococcus pneumoniae серотипа 72. В другом варианте реализации очищенный полисахарид представляет собой капсульный полисахарид Streptococcus pneumoniae серотипа 73.

При необходимости может быть применена любая подходящая реакция конъюгации с любым подходящим линкером. См., например, WO 2007116028, стр. 17-22.

Очищенные олигосахариды или полисахариды согласно настоящему описанию химически активируют с получением сахаридов, способных вступать в реакцию с белком-носителем.

В одном из вариантов реализации гликоконъюгат получают с помощью восстановительного аминирования.

Восстановительное аминирование включает две стадии: (1) окисление (активацию) очищенного сахарида, (2) восстановление активированного сахарида и белка-носителя (например, CRM₁₉₇, DT, ТТ или PD) с получением гликоконъюгата (см., например, WO 2015110941, WO 2015110940).

Как упомянуто выше, перед окислением может быть выполнена калибровка полисахарида по размеру с обеспечением целевого диапазона молекулярной массы (М.м.). Может быть применен механический или химический гидролиз. Химический гидролиз может быть проведен с применением уксусной кислоты. В одном из вариантов реализации размер очищенного полисахарида уменьшают путем механической гомогенизации.

В одном из вариантов реализации очищенный полисахарид или олигосахарид конъюгируют с белком-носителем с помощью способа, включающего стадию:

(a) приведения указанного очищенного полисахарида или олигосахарида во взаимодействие с окислителем;

(b) необязательной остановки реакции окисления путем добавления останавливающего агента;

(c) смешивания активированного полисахарида или олигосахарида, полученного на стадии (а) или (b), с белком-носителем; и

(d) приведения смеси активированного полисахарида или олигосахарида и белка-носителя во взаимодействие с восстанавливающим агентом с получением гликоконъюгата.

После стадии окисления (а) сахарид считается активированным и называется «активированным полисахаридом или олигосахаридом».

Стадия окисления (а) может включать реакцию с периодатом. Применительно к настоящему изобретению термин «периодат» включает как периодат, так и йодную кислоту; этот термин также включает как метапериодат (IO₄^-), так и ортопериодат (IO₆^5-), а также различные соли периодата (например, периодат натрия и периодат калия).

В предпочтительном варианте реализации окислитель представляет собой периодат натрия. В одном из вариантов реализации периодат, применяемый для окисления, представляет собой метапериодат. В одном из вариантов реализации периодат, применяемый для окисления, представляет собой метапериодат натрия. Стадия окисления (а) может включать взаимодействие со стабильным соединением нитроксильного или нитроксидного радикала, таким как пиперидин-N-окси- или пирролидин-N-оксисоединения, в присутствии окислителя для селективного окисления первичных гидроксилов указанного полисахарида или олигосахарида с получением активированного сахарида, содержащего альдегидные группы (см. WO 2014097099). В одном из аспектов указанное стабильное соединение нитроксильного или нитроксидного радикала представляет собой любое из соединений, раскрытых в источнике WO 2014097099, с. 3, строка 14 - с. 4, строка 7, и окислитель представляет собой любой из окислителей, раскрытых в источнике WO 2014097099, с. 4, строки с 8 по 15. В одном из аспектов указанное стабильное соединение нитроксильного или нитроксидного радикала представляет собой 2,2,6,6-тетраметил-1-пиперидинилокси (TEMPO), и окислитель представляет собой N-хлорсукцинимид (NCS).

В одном из вариантов реализации останавливающий агент является таким, как описано в источнике WO 2015110941 (см. с. 30, строки с 3 по 26).

В одном из вариантов реализации реакцию восстановления (d) проводят в водном растворителе. В одном из вариантов реализации реакцию восстановления (d) проводят в апротонном растворителе. В одном из вариантов реализации реакцию восстановления (d) проводят в растворителе ДМСО (диметилсульфоксид) или ДМФА (диметилформамид).

В одном из вариантов реализации восстановитель представляет собой цианоборгидрид натрия, триацетоксиборгидрид натрия, боргидрид натрия или цинка в присутствии кислот Бренстеда или Льюиса, аминобораны, такие как пиридинборан, 2-пиколинборан, 2,6-диборанметанол, диметиламинборан, t-BuMeⁱPrN-ВН₃, бензиламин-ВН₃ или 5-этил-2-метилпиридинборан (РЕМВ). В предпочтительном варианте реализации восстановитель представляет собой цианоборгидрид натрия.

По завершении реакции восстановления в конъюгатах могут оставаться непрореагировавшие альдегидные группы, которые могут быть кэпированы с использованием подходящего кэпирующего агента. В одном из вариантов реализации указанный кэпирующий агент представляет собой боргидрид натрия (NaBH₄).

После конъюгирования с белком-носителем гликоконъюгат может быть очищен (обогащен по количеству конъюгата сахарид-белок) различными способами, известными специалисту в данной области техники. Эти способы включают диализ, операции концентрирования/диафильтрации, осаждение методом тангенциальной поточной фильтрации/элюирование, колоночную хроматографию (хроматографию на ДЭАЭ или хроматографию с гидрофобным взаимодействием) и глубинную фильтрацию.

В одном из вариантов реализации гликоконъюгат получают с применением химии цианилирования.

В одном из вариантов реализации очищенный полисахарид или олигосахарид активируют бромцианом. Активация представляет собой цианилирование гидроксильных групп полисахарида или олигосахарида. Затем активированный полисахарид или олигосахарид подвергают сочетанию с аминогруппой на белке-носителе непосредственно или через спейсерную (линкерную) группу.

В одном из вариантов реализации очищенный полисахарид или олигосахарид активируют 1-циано-4-диметиламинопиридиния тетрафторборатом (CDAP) с получением цианатного сложного эфира. Затем активированный полисахарид или олигосахарид подвергают сочетанию с аминогруппой на белке-носителе непосредственно или через спейсерную (линкерную) группу.

В одном из вариантов реализации спейсер может представлять собой цистамин или цистеамин, обеспечивающий получение тиолированного полисахарида или олигосахарида, который может быть подвергнут сочетанию с носителем посредством тиоэфирной связи, полученной после реакции с активированным малеимидом белком-носителем (например, с применением N-[γ-малеимидобутирилокси]сукцинимидного сложного эфира (GMBS)) или галогенацетилированным белком-носителем (например, с применением йодацетимида, N-сукцинимидилбромацетата (SBA; SIB), N-сукцинимидил(4-йодацетил)аминобензоата (SIAB), сульфосукцинимидил(4-йодацетил)аминобензоата (сульфо-SIAB), N-сукцинимидилйодацетата (SIA) или сукцинимидил-3-[бромацетамидо]проприоната (SBAP)). Предпочтительно цианатный сложный эфир (необязательно полученный с помощью химии CDAP) подвергают сочетанию с гександиамином или дигидразидом адипиновой кислоты (ADH), и аминопроизводное сахарида конъюгируют с белком-носителем (например, CRM₁₉₇) с применением химии карбодиимида (например, EDAC или EDC) через карбоксильную группу на белке-носителе. Такие конъюгаты описаны, например, в источниках WO 93/15760, WO 95/08348 и WO 96/129094.

В одном из вариантов реализации гликоконъюгат получают с применением бис-электроф ильных реагентов, таких как карбонилдиимидазол (CDI) или карбонилдитриазол (CDT). В таком варианте реализации реакцию конъюгации предпочтительно проводят в апротонных растворителях, таких как ДМФА или ДМСО, прямым путем или с применением бифункциональных линкеров (см., например, WO 2011041003).

В одном из вариантов реализации гликоконъюгат получают с применением способа получения гликоконъюгатов, описанного в WO2014027302. Полученный гликоконъюгат содержит сахарид, ковалентно конъюгированный с белком-носителем через бивалентный гетеробифункциональный спейсер (2-((2-оксоэтил)тио)этил)карбамат (еТЕС). В качестве альтернативы, гликоконъюгат получают с применением способа получения гликоконъюгатов, описанного в WO 2015121783.

В других подходящих способах конъюгирования используют карбодиимиды (например, EDC (1-этил-3-(3-диметиламинопропил)карбодиимида гидрохлорид), EDC совместно с сульфо-NHS, CMC (1-циклогексил-3-(2-морфолиноэтил)карбодиимид), DCC (N,N'-дициклогексилкарбодиимид) или DIC (диизопропилкарбодиимид).

В одном из вариантов реализации полисахарид или олигосахарид конъюгирован с белком-носителем посредством линкера, например, бифункционального линкера. Линкер необязательно является гетеробифункциональным или гомобифункциональным и содержит, например, реакционноспособную аминогруппу и реакционноспособную группу карбоновой кислоты, 2 реакционноспособные аминогруппы или две реакционноспособные группы карбоновой кислоты. Линкер содержит, например, от 4 до 20, от 4 до 12, от 5 до 10 атомов углерода. Возможным линкером является дигидразид адипиновой кислоты (ADH). Другие линкеры включают В-пропионамидо (WO 00/10599), нитрофенилэтиламин, галогеналкилгалогенид, гликозидные связи (US4673574, US4808700), гександиамин и 6-аминокапроновую кислоту (US4459286).

Белок-носитель

Компонентом гликоконъюгата является белок-носитель, с которым конъюгирован очищенный полисахарид или олигосахарид. Термины «белковый носитель», или «белок-носитель», или «носитель» могут быть использованы в настоящем описании взаимозаменяемо. Белки-носители должны быть пригодны для стандартных процедур конъюгирования.

В предпочтительном варианте реализации белок-носитель для гликоконъюгата выбран из группы, состоящей из: DT (дифтерийного токсина), ТТ (столбнячного токсина) или фрагмента С ТТ, CRM₁₉₇ (нетоксичный, но идентичный в антигенном отношении вариант дифтерийного токсина), других мутантов DT (таких как CRM₁₇₆, CRM₂₂₈, CRM₄₅ (Uchida et al. (1973) J. Biol. Chem. 218:3838-3844), CRM₉, CRM₁₀₂, CRM₁₀₃ или CRM₁₀₇; и другие мутации, описанные в источнике Nicholls and Youle in Genetically Modified Toxins, Ed: Frankel, Maecel Dekker Inc. (1992); делеция или мутация Glu-148 в Asp, Gln или Ser и/или Ala 158 в Gly и другие мутации, раскрытые в патентах США №4709017 и 4950740; мутация по меньшей мере одного или более остатков Lys 516, Lys 526, Phe 530 и/или Lys 534 и другие мутации, раскрытые в патентах США №5917017 и 6455673; или фрагмент, раскрытый в патенте США №5843711), пневмококкового пневмолизина (ply) (Kuo et al. (1995) Infect Immun 63: 2706-2713), включая ply, детоксицированный каким-либо образом, например, dPLY-GMBS (WO 2004/081515, WO 2006/032499) или dPLY-formol, PhtX, включая PhtA, PhtB, PhtD, PhtE (последовательности PhtA, PhtB, PhtD или PhtE раскрыты в WO 00/37105 и WO 00/39299) и гибриды Pht, например, гибриды PhtDE, гибриды PhtBE, Pht A-E (WO 01/98334, WO 03/054007, WO 2009/000826), OMPC (менингококкового белка наружной мембраны), который обычно экстрагируют из Neisseria meningitidis серогруппы В (ЕР0372501), PorB (из N. meningitidis), PD (белка D Haemophilus influenzae; см., например, ЕР0594610 В) или их иммунологически функциональных эквивалентов, синтетических пептидов (ЕР0378881, ЕР0427347), белков теплового шока (WO 93/17712, WO 94/03208), коклюшных белков (WO 98/58668, ЕР0471177), цитокинов, лимфокинов, факторов роста или гормонов (WO 91/01146), искусственных белков, содержащих ряд распознаваемых CD4+ Т-клетками человека эпитопов от антигенов, полученных от различных патогенов (Falugi et al. (2001) Eur J Immunol 31:3816-3824) such as N19 protein (Baraldoi et al. (2004) Infect Immun 72:4884-4887), пневмококкового поверхностного белка PspA (WO 02/091998), белков системы поглощения железа (WO 01/72337), токсина А или В Clostridium difficile (WO 00/61761), связывающих трансферрин белков, белка адгезии пневмококка (PsaA), рекомбинантного экзотоксина A Pseudomonas aeruginosa (в частности, его нетоксичных мутантов (таких как экзотоксин А, имеющий замену в глутаминовой кислоте 553 (Douglas et al. (1987) J. Bacteriol. 169(11):4967-4971)). В качестве белков-носителей также могут быть применены другие белки, такие как овальбумин, гемоцианин моллюска Megathura crenulata (KLH), бычий сывороточный альбумин (BSA) или очищенное белковое производное туберкулина (PPD). Другие подходящие белки-носители включают инактивированные бактериальные токсины, такие как холерный анатоксин (например, описанный в WO 2004/083251), LT Escherichia coli, ST Е. coli и экзотоксин А P. aeruginosa.

В предпочтительном варианте реализации белок-носитель для гликоконъюгата независимо выбран из группы, состоящей из ТТ, DT, мутантов DT (таких как CRM₁₉₇), белка D Н. influenzae, гибридов PhtX, PhtD, PhtDE (в частности, описанных в WO 01/98334 и WO 03/054007), детоксицированного пневмолизина, РогВ, белка N19, PspA, ОМРС, токсина А или В С.difficile и PsaA.

В одном из вариантов реализации белок-носитель гликоконъюгата представляет собой DT (дифтерийный анатоксин). В другом варианте реализации белок-носитель гликоконъюгата представляет собой ТТ (столбнячный анатоксин).

В другом варианте реализации белок-носитель гликоконъюгата представляет собой PD (белок D Н. influenzae; см., например, ЕР0594610 В).

В предпочтительном варианте реализации очищенный полисахарид или олигосахарид конъюгирован с белком CRM₁₉₇. Белок CRM₁₉₇ является нетоксичной формой дифтерийного токсина, но иммунологически неотличим от дифтерийного токсина. CRM₁₉₇ продуцируется бактериями Corynebacterium diphtheriae, инфицированными нетоксигенным фагом β197^tox-, полученным путем индуцированного нитрозогуанидином мутагенеза токсигенного коринефага бета (Uchida et al. (1971) Nature New Biology 233:8-11). Белок CRM₁₉₇ имеет ту же молекулярную массу, что и дифтерийный токсин, но отличается от него заменой одного основания (гуанина на аденин) в структурном гене. Эта замена одного основания обусловливает аминокислотную замену (глутаминовой кислоты на глицина) в зрелом белке и устраняет токсические свойства дифтерийного токсина. Белок CRM₁₉₇ является безопасным и эффективным Т-клеточно-зависимым носителем для сахаридов. Дополнительную информацию о CRM₁₉₇ и его получении можно найти, например, в патенте США №5614382.

В одном из вариантов реализации очищенный полисахарид или олигосахарид конъюгирован с белком CRM₁₉₇ или цепью A CRM₁₉₇ (см. CN103495161). В одном из вариантов реализации очищенный полисахарид или олигосахарид конъюгирован с цепью A CRM₁₉₇, полученного путем экспрессии с помощью генетически рекомбинантной Е. coli (см. CN103495161).

Предпочтительно отношение белка-носителя к полисахариду или олигосахариду в гликоконъюгате составляет от 1:5 до 5:1; например, от 1:0,5 до 4:1, от 1:1 до 3,5:1, от 1,2:1 до 3:1, от 1,5:1 до 2,5:1; например, от 1:2 до 2,5:1 или от 1:1 до 2:1 (масс./масс.). В одном из вариантов реализации отношение белка-носителя к полисахариду или олигосахариду в гликоконъюгате составляет примерно 1:1,1,1:1, 1,2:1, 1,3:1, 1,4:1, 1,5:1 или 1,6:1.

После конъюгирования с белком-носителем гликоконъюгат может быть очищен (обогащен по количеству конъюгата сахарид-белок) различными способами, известными специалисту в данной области техники. Эти способы включают диализ, операции концентрирования/диафильтрации, осаждение методом тангенциальной поточной фильтрации/элюирование, колоночную хроматографию (хроматографию на ДЭАЭ или хроматографию с гидрофобным взаимодействием) и глубинную фильтрацию.

Композиции могут содержать небольшое количество свободного носителя. В случае, если данный белок-носитель присутствует в композиции согласно настоящему изобретению как в свободной, так и в конъюгированной форме, неконъюгированная форма предпочтительно составляет не более 5% от общего количества белка-носителя в композиции в целом, и более предпочтительно присутствует в количестве менее 2% по массе.

2.2 Иммуногенные композиции

В одном из вариантов реализации настоящее изобретение относится к иммуногенной композиции, содержащей любой из очищенных полисахаридов и/или гликоконъюгатов, раскрытых в настоящем описании.

В одном из вариантов реализации настоящее изобретение относится к иммуногенной композиции, содержащей любой из гликоконъюгатов, раскрытых в настоящем описании.

В одном из вариантов реализации настоящее изобретение относится к иммуногенной композиции, содержащей от 1 до 25 различных гликоконъюгатов, описанных в разделе 2.1.

В одном из вариантов реализации настоящее изобретение относится к иммуногенной композиции, содержащей от 1 до 25 гликоконъюгатов различных серотипов S. pneumoniae (от 1 до 25 пневмококковых конъюгатов). В одном из вариантов реализации изобретение относится к иммуногенной композиции, содержащей гликоконъюгаты 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24 или 25 различных серотипов S. pneumoniae. В одном из вариантов реализации иммуногенные композиции содержат гликоконъюгаты 16 или 20 различных серотипов S. pneumoniae. В одном из вариантов реализации иммуногенная композиция представляет собой 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 или 20-валентные композиции пневмококковых конъюгатов. В одном из вариантов реализации иммуногенная композиция представляет собой 14, 15, 16, 17, 18 или 19-валентные композиции пневмококковых конъюгатов. В одном из вариантов реализации иммуногенная композиция представляет собой 16-валентную композицию пневмококковых конъюгатов. В одном из вариантов реализации иммуногенная композиция представляет собой 19-валентные композиции пневмококковых конъюгатов. В одном из вариантов реализации иммуногенная композиция представляет собой 20-валентную композицию пневмококковых конъюгатов.

В одном из вариантов реализации указанная иммуногенная композиция содержит гликоконъюгаты S. pneumoniae серотипов 4, 6 В, 9V, 14, 18С, 19F и 23F.

В одном из вариантов реализации указанная иммуногенная композиция дополнительно содержит гликоконъюгаты S. pneumoniae серотипов 1, 5 и 7F.

В одном из вариантов реализации любая из указанных выше иммуногенных композиций дополнительно содержит гликоконъюгаты S. pneumoniae серотипов 6А и 19А.

В одном из вариантов реализации любая из указанных выше иммуногенных композиций дополнительно содержит гликоконъюгат S. pneumoniae серотипа 3.

В одном из вариантов реализации любая из указанных выше иммуногенных композиций дополнительно содержит гликоконъюгаты S. pneumoniae серотипов 22F и 33F.

В одном из вариантов реализации любая из указанных выше иммуногенных композиций дополнительно содержит гликоконъюгаты S. pneumoniae серотипов 8, 10А, 11А, 12F и 15 В.

В одном из вариантов реализации любая из указанных выше иммуногенных композиций дополнительно содержит гликоконъюгаты S. pneumoniae серотипа 2. В одном из вариантов реализации любая из указанных выше иммуногенных композиций дополнительно содержит гликоконъюгаты S. pneumoniae серотипов 9N. В одном из вариантов реализации любая из указанных выше иммуногенных композиций дополнительно содержит гликоконъюгаты S. pneumoniae серотипов 17F.

В одном из вариантов реализации любая из указанных выше иммуногенных композиций дополнительно содержит гликоконъюгаты S. pneumoniae серотипов 20.

В одном из вариантов реализации иммуногенная композиция согласно настоящему изобретению содержит гликоконъюгаты S. pneumoniae серотипов 8, 10А, 11 A, 12F, 15 В, 22F и 33F.

В одном из вариантов реализации любая из указанных выше иммуногенных композиций дополнительно содержит гликоконъюгаты S. pneumoniae серотипа 2. В одном из вариантов реализации любая из указанных выше иммуногенных композиций дополнительно содержит гликоконъюгаты S. pneumoniae серотипов 9N. В одном из вариантов реализации любая из указанных выше иммуногенных композиций дополнительно содержит гликоконъюгаты S. pneumoniae серотипов 17F.

В одном из вариантов реализации любая из указанных выше иммуногенных композиций дополнительно содержит гликоконъюгаты S. pneumoniae серотипов 20.

Однако в предпочтительном варианте реализации сахариды, каждый индивидуально, конъюгированы с различными молекулами белкового носителя (каждая молекула белкового носителя имеет только один тип конъюгированного с ней сахарида). В указанном варианте реализации капсульные сахариды называют индивидуально конъюгированными с белком-носителем. Предпочтительно все гликоконъюгаты указанных выше иммуногенных композиций индивидуально конъюгированы с белком-носителем.

В одном из вариантов реализации любой из указанных выше иммуногенных композиций гликоконъюгат S. pneumoniae серотипа 22F конъюгирован с CRM₁₉₇. В одном из вариантов реализации любой из указанных выше иммуногенных композиций гликоконъюгат S. pneumoniae серотипа 33F конъюгирован с CRM₁₉₇. В одном из вариантов реализации любой из указанных выше иммуногенных композиций гликоконъюгат S. pneumoniae серотипа 15 В конъюгирован с CRM197. В одном из вариантов реализации любой из указанных выше иммуногенных композиций гликоконъюгат S. pneumoniae серотипа 12F конъюгирован с CRM₁₉₇. В одном из вариантов реализации любой из указанных выше иммуногенных композиций гликоконъюгат S. pneumoniae серотипа 10А конъюгирован с CRM197. В одном из вариантов реализации любой из указанных выше иммуногенных композиций гликоконъюгат S. pneumoniae серотипа 11А конъюгирован с CRM₁₉₇. В одном из вариантов реализации любой из указанных выше иммуногенных композиций гликоконъюгат S. pneumoniae серотипа 8 конъюгирован с CRM₁₉₇. В одном из вариантов реализации любой из указанных выше иммуногенных композиций гликоконъюгаты S. pneumoniae серотипов 4, 6 В, 9V, 14, 18С, 19F и 23F конъюгированы с CRM₁₉₇. В одном из вариантов реализации любой из указанных выше иммуногенных композиций гликоконъюгаты S. pneumoniae серотипов 1, 5 и 7F конъюгированы с CRM₁₉₇. В одном из вариантов реализации любой из указанных выше иммуногенных композиций гликоконъюгаты серотипов 6А и 19А S. pneumoniae конъюгированы с CRM₁₉₇. В одном из вариантов реализации любой из указанных выше иммуногенных композиций гликоконъюгат S. pneumoniae серотипа 3 конъюгирован с CRM₁₉₇.

В одном из вариантов реализации все гликоконъюгаты любой из указанных выше иммуногенных композиций индивидуально конъюгированы с CRM₁₉₇.

В одном из вариантов реализации гликоконъюгаты S. pneumoniae серотипов 1, 4, 5, 6 В, 7F, 9V, 14 и/или 23F любой из указанных выше иммуногенных композиций индивидуально конъюгированы с PD.

В одном из вариантов реализации гликоконъюгат S. pneumoniae серотипа 18С любой из указанных выше иммуногенных композиций конъюгирован с ТТ.

В одном из вариантов реализации гликоконъюгат S. pneumoniae серотипа 19F любой из указанных выше иммуногенных композиций конъюгирован с DT.

В одном из вариантов реализации гликоконъюгаты S. pneumoniae серотипов 1, 4, 5, 6 В, 7F, 9V, 14 и/или 23F любой из указанных выше иммуногенных композиций индивидуально конъюгированы с PD, гликоконъюгат S. pneumoniae серотипа 18С конъюгирован с ТТ, и гликоконъюгат S. pneumoniae серотипа 19F конъюгирован с DT.

В одном из вариантов реализации указанные выше иммуногенные композиции содержат от 8 до 20 различных серотипов S. pneumoniae.

В одном из вариантов реализации настоящее изобретение относится к иммуногенной композиции, содержащей от 1 до 5 гликоконъюгатов из различных серогрупп N. meningitidis (от 1 до 5 менингококковых конъюгатов). В одном из вариантов реализации настоящее изобретение относится к иммуногенной композиции, содержащей гликоконъюгаты 1, 2, 3, 4 или 5 различных серогрупп N. meningitidis. В одном из вариантов реализации иммуногенные композиции содержат 4 или 5 различных N. meningitidis. В одном из вариантов реализации иммуногенная композиция представляет собой 1, 2, 3, 4 или 5-валентные композиции менингококковых конъюгатов. В одном из вариантов реализации иммуногенная композиция представляет собой 2-валентную композицию менингококковых конъюгатов. В одном из вариантов реализации иммуногенная композиция представляет собой 4-валентную композицию менингококковых конъюгатов. В одном из вариантов реализации иммуногенная композиция представляет собой 5-валентную композицию менингококковых конъюгатов.

В одном из вариантов реализации иммуногенная композиция содержит конъюгированный капсульный сахарид N. meningitidis серогруппы Y (MenY) и/или конъюгированный капсульный сахарид N. meningitidis серогруппы С (MenC).

В одном из вариантов реализации иммуногенная композиция содержит конъюгированный капсульный сахарид N. meningitidis серогруппы А (MenA), конъюгированный капсульный сахарид N. meningitidis серогруппы W135 (MenW135), конъюгированный капсульный сахарид N. meningitidis серогруппы Y (MenY) и/или конъюгированный капсульный сахарид N. meningitidis серогруппы С (MenC).

В одном из вариантов реализации иммуногенные композиции содержат конъюгированный капсульный сахарид N. meningitidis серогруппы W135 (MenW135), конъюгированный капсульный сахарид N. meningitidis серогруппы Y (MenY) и/или конъюгированный капсульный сахарид N. meningitidis серогруппы С (MenC).

В одном из вариантов реализации иммуногенная композиция содержит конъюгированный капсульный сахарид N. meningitidis серогруппы А (MenA), конъюгированный капсульный сахарид N. meningitidis серогруппы W135 (MenW135), конъюгированный капсульный сахарид N. meningitidis серогруппы Y (MenY), конъюгированный капсульный сахарид N. meningitidis серогруппы С (MenC) и/или конъюгированный капсульный сахарид N. meningitidis серогруппы X (MenX).

В некоторых вариантах реализации иммуногенные композиции, раскрытые в настоящем описании, могут дополнительно содержать по меньшей мере один, два или три адъюванта. В некоторых вариантах реализации иммуногенные композиции, раскрытые в настоящем описании, могут дополнительно содержать один адъювант. Термин «адъювант» относится к соединению или смеси, которые усиливают иммунный ответ на антиген. Антигены могут действовать в первую очередь как система доставки, в первую очередь как иммуномодулятор или иметь выраженные свойства того и другого. Подходящие адъюванты включают адъюванты, которые подходят для применения у млекопитающих, включая людей.

Примеры известных подходящих адъювантов типа системы доставки, которые могут быть применены у людей, включают, но не ограничиваются перечисленными, квасцы (например, фосфат алюминия, сульфат алюминия или гидроксид алюминия), фосфат кальция, липосомы, эмульсии типа масло-в-воде, такие как MF59 (4,3% масс./об. сквалена, 0,5% масс./об. полисорбата 80 (Tween 80), 0,5% масс./об. сорбитана триолеата (Span 85)), эмульсии типа вода-в-масле, такие как монтанид (Montanide), и микрочастицы или наночастицы поли(D,L-лактид-со-гликолида) (PLG).

В одном из вариантов реализации иммуногенные композиции, раскрытые в настоящем описании, содержат в качестве адъюванта соли алюминия (квасцы) (например, фосфат алюминия, сульфат алюминия или гидроксид алюминия). В предпочтительном варианте реализации иммуногенные композиции, раскрытые в настоящем описании, содержат в качестве адъюванта фосфат алюминия или гидроксид алюминия.

Другие иллюстративные адъюванты для повышения эффективности иммуногенных композиций, раскрытых в настоящем описании, включают, но не ограничиваются перечисленными: (1) составы эмульсий типа масло-в-воде (с другими специфичными иммуностимулирующими агентами, такими как мурамилпептиды (см. ниже) или компоненты бактериальной клеточной стенки, или без них), такие как, например, (a) SAF, содержащая 10% сквалана, 0,4% твина 80, 5% блоксополимера плюроника L121 и thr-MDP, микрофлюидизированная с получением субмикронной эмульсии либо перемешанная вихревым способом с получением эмульсии с частицами большего размера, и (b) адъювантная система RIBI™ (RAS), (Ribi Immunochem, Гамильтон, Монтана), содержащая 2% сквалена, 0,2% твина 80 и один или более компонентов бактериальной клеточной стенки, таких как монофосфориллипид A (MPL), трегалозы димиколат (TDM) и каркас клеточной стенки (CWS), предпочтительно MPL+CWS (DETOX™); (2) сапониновые адъюванты, такие как QS21, STIMULON™ (Cambridge Biosience, Вустер, Массачусетс), ABISCO® (Isconova, Швеция) или ISCOMATRIX® (Commonwealth Serum Laboratories, Австралия), или частицы, полученные из них, такие как ISCOMs (иммуностимулирующие комплексы), которые могут не соде ржать дополнительно го детергента (например, WO 00/07621); (3) полный адъювант Фрейнда (Complete Freund's Adjuvant, CFA) и неполный адъювант Фрейнда (Incomplete Freund's Adjuvant, IFA); (4) цитокины, такие как интерлейкины (например, IL-1, IL-2, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-12 (например, WO 99/44636)), интерфероны (например, интерферон гамма), колониестимулирующий фактор макрофагов (М-КСФ), фактор некроза опухоли (ФНО) и так далее; (5) монофосфориллипид A (MPL) или 3-0-деацилированный MPL (3dMPL) (см., например, GB-2220221, ЕР0689454), необязательно по существу в отсутствие квасцов при применении с пневмококковыми сахаридами (см., например, WO 00/56358); (6) комбинации 3dMPL например, с QS21 и/или эмульсиями типа масло-в-воде (см., например, ЕР0835318, ЕР0735898, ЕР0761231); (7) простой эфир полиоксиэтилена или сложный эфир полиоксиэтилена (см., например, WO 99/52549); (8) поверхностно-активное вещество на основе сложного эфира полиоксиэтиленсорбитана в комбинации с октоксинолом (например, WO 01/21207) или поверхностно-активное вещество на основе простого или сложного полиоксиэтиленалкилового эфира в комбинации по меньшей мере с одним дополнительным неионогенным поверхностно-активным веществом, таким как октоксинол (например, WO 01/21152); (9) сапонин и иммуностимулирующий олигонуклеотид (например, олигонуклеотид CpG) (например, WO 00/62800); (10) иммуностимулирующее вещество и частица соли металла (см., например, WO 00/23105); (11) сапонин и эмульсия типа масло-в-воде (например, WO 99/11241); (12) сапонин (например, QS21)+3dMPL+IM2 (необязательно+стерол) (например, WO 98/57659); (13) другие вещества, которые действуют как иммуностимулирующие агенты с повышением эффективности композиции. Мурамилпептиды включают N-ацетилмурамил-L-треонил-D-изоглутамин (thr-MDP), N-25-ацетилнормурамил-L-аланил-D-изоглутамин (nor-MDP), N-ацетилмурамил-L-аланил-D-изоглутаминил-L-аланин-2-((1'-2'-дипальмитоил-sn-глицеро-3-гидроксифосфорилокси)-этиламин (МТР-РЕ) и так далее

В одном из вариантов реализации настоящего изобретения иммуногенные композиции, раскрытые в настоящем описании, содержат в качестве адъюванта олигонуклеотид CpG.

Иммуногенные композиции могут быть приготовлены в жидкой форме (то есть растворы или суспензии) или в лиофилизированной форме. Преимущество жидких составов состоит в том, что они могут быть введены непосредственно из упаковки и, таким образом, превосходно подходят для инъекций и не требуют растворения в водной среде, что, напротив, требуется для лиофилизированных композиций согласно настоящему изобретению.

Приготовление иммуногенной композиции согласно настоящему раскрытию может быть осуществлено с применением способов, известных в данной области техники. Например, отдельные полисахариды и/или конъюгаты могут быть приготовлены совместно с физиологически приемлемым носителем с получением указанной композиции. Примеры таких носителей включают, но не ограничиваются перечисленными, воду, забуференный физиологический раствор, полиолы (например, глицерин, пропиленгликоль, жидкий полиэтиленгликоль) и растворы декстрозы.

В настоящем раскрытии предложена иммуногенная композиция, содержащая любую из комбинаций полисахарида или гликоконъюгатов, раскрытых в настоящем описании, и фармацевтически приемлемое вспомогательное вещество, носитель или разбавитель.

В одном из вариантов реализации иммуногенная композиция согласно настоящему раскрытию находится в жидкой форме, предпочтительно в водной жидкой форме. Иммуногенные композиции согласно настоящему раскрытию могут содержать один или более из буфера, соли, двухвалентного катиона, неионного детергента, криозащитного вещества, такого как сахар, и антиоксиданта, такого как ловушка свободных радикалов или хелатирующий агент, или любые их многочисленные комбинации.

В одном из вариантов реализации иммуногенные композиции согласно настоящему раскрытию содержат буфер. В одном из вариантов реализации указанный буфер имеет рКа от примерно 3,5 до примерно 7,5. В некоторых вариантах реализации буфер представляет собой фосфат, сукцинат, гистидин или цитрат. В некоторых вариантах реализации буфер представляет собой сукцинат в конечной концентрации от 1 мМ до 10 мМ. В одном конкретном варианте реализации конечная концентрация сукцинатного буфера составляет примерно 5 мМ.

В одном из вариантов реализации иммуногенные композиции согласно настоящему раскрытию содержат соль. В некоторых вариантах реализации соль выбрана из групп, состоящих из хлорида магния, хлорида калия, хлорида натрия и их комбинации. В одном конкретном варианте реализации соль представляет собой хлорид натрия. В одном конкретном варианте реализации иммуногенные композиции согласно настоящему изобретению содержат хлорид натрия в концентрации 150 мМ.

В одном из вариантов реализации иммуногенные композиции согласно настоящему изобретению содержат поверхностно-активное вещество. В одном из вариантов реализации поверхностно-активное вещество выбрано из группы, состоящей из полисорбата 20 (TWEEN™20), полисорбата 40 (TWEEN™40), полисорбата 60 (TWEEN™60), полисорбата 65 (TWEEN™65), полисорбата 80 (TWEEN™80), полисорбата 85 (TWEEN™85), Тритона N-101 (TRITON™ N-101), Тритона Х-100 (TRITON™ Х-100), октоксинола 40, ноноксинола-9, триэтаноламина, триэтаноламина полипептида олеата, полиоксиэтилена-660 гидроксистеарата (PEG-15, Solutol Н 15), полиоксиэтилен-35-рицинолеата (CREMOPHOR® EL), соевого лецитина и полоксамера. В одном конкретном варианте реализации поверхностно-активное вещество представляет собой полисорбат 80. В некоторых указанных вариантах реализации конечная концентрация полисорбата 80 в составе составляет по меньшей мере от 0,0001% до 10% полисорбата 80 по массе (масс./масс.). В некоторых указанных вариантах реализации конечная концентрация полисорбата 80 в составе составляет по меньшей мере от 0,001% до 1% полисорбата 80 по массе (масс./масс.). В некоторых указанных вариантах реализации конечная концентрация полисорбата 80 в составе составляет по меньшей мере от 0,01% до 1% полисорбата 80 по массе (масс./масс.). В других вариантах реализации конечная концентрация полисорбата 80 в составе составляет 0,01%, 0,02%, 0,03%, 0,04%, 0,05%, 0,06%, 0,07%, 0,08%, 0,09% или 0,1% полисорбата 80 (масс./масс.). В другом варианте реализации конечная концентрация полисорбата 80 в составе составляет 1% полисорбата 80 (масс./масс.).

В одном конкретном варианте реализации поверхностно-активное вещество представляет собой полисорбат 20. В некоторых указанных вариантах реализации конечная концентрация полисорбата 20 в составе составляет по меньшей мере от 0,0001% до 10% полисорбата 20 по массе (масс./масс.). В некоторых указанных вариантах реализации конечная концентрация полисорбата 20 в составе составляет по меньшей мере от 0,001% до 1% полисорбата 20 по массе (масс./масс.). В некоторых указанных вариантах реализации конечная концентрация полисорбата 20 в составе составляет по меньшей мере от 0,01% до 1% полисорбата 20 по массе (масс./масс.). В других вариантах реализации конечная концентрация полисорбата 20 в составе составляет 0,01%, 0,02%, 0,03%, 0,04%, 0,05%, 0,06%, 0,07%, 0,08%, 0,09% или 0,1% полисорбата 20 (масс./масс.). В другом варианте реализации конечная концентрация полисорбата 20 в составе составляет 1% полисорбата 20 (масс./масс.).

В одном конкретном варианте реализации поверхностно-активное вещество представляет собой полисорбат 40. В некоторых указанных вариантах реализации конечная концентрация полисорбата 40 в составе составляет по меньшей мере от 0,0001% до 10% полисорбата 40 по массе (масс./масс.). В некоторых указанных вариантах реализации конечная концентрация полисорбата 40 в составе составляет по меньшей мере от 0,001% до 1% полисорбата 40 по массе (масс./масс.). В некоторых указанных вариантах реализации конечная концентрация полисорбата 40 в составе составляет по меньшей мере от 0,01% до 1% полисорбата 40 по массе (масс./масс.). В других вариантах реализации конечная концентрация полисорбата 40 в составе составляет 0,01%, 0,02%, 0,03%, 0,04%, 0,05%, 0,06%, 0,07%, 0,08%, 0,09% или 0,1% полисорбата 40 (масс./масс.). В другом варианте реализации конечная концентрация полисорбата 40 в составе составляет 1% полисорбата 40 (масс./масс.).

В одном конкретном варианте реализации поверхностно-активное вещество представляет собой полисорбат 60. В некоторых указанных вариантах реализации конечная концентрация полисорбата 60 в составе составляет по меньшей мере от 0,0001% до 10% полисорбата 60 по массе (масс./масс.). В некоторых указанных вариантах реализации конечная концентрация полисорбата 60 в составе составляет по меньшей мере от 0,001% до 1% полисорбата 60 по массе (масс./масс.). В некоторых указанных вариантах реализации конечная концентрация полисорбата 60 в составе составляет по меньшей мере от 0,01% до 1% полисорбата 60 по массе (масс./масс.). В других вариантах реализации конечная концентрация полисорбата 60 в составе составляет 0,01%, 0,02%, 0,03%, 0,04%, 0,05%, 0,06%, 0,07%, 0,08%, 0,09% или 0,1% полисорбата 60 (масс./масс.). В другом варианте реализации конечная концентрация полисорбата 60 в составе составляет 1% полисорбата 60 (масс./масс.).

В одном конкретном варианте реализации поверхностно-активное вещество представляет собой полисорбат 65. В некоторых указанных вариантах реализации конечная концентрация полисорбата 65 в составе составляет по меньшей мере от 0,0001% до 10% полисорбата 65 по массе (масс./масс.). В некоторых указанных вариантах реализации конечная концентрация полисорбата 65 в составе составляет по меньшей мере от 0,001% до 1% полисорбата 65 по массе (масс./масс.). В некоторых указанных вариантах реализации конечная концентрация полисорбата 65 в составе составляет по меньшей мере от 0,01% до 1% полисорбата 65 по массе (масс./масс.). В других вариантах реализации конечная концентрация полисорбата 65 в составе составляет 0,01%, 0,02%, 0,03%, 0,04%, 0,05%, 0,06%, 0,07%, 0,08%, 0,09% или 0,1% полисорбата 65 (масс./масс.). В другом варианте реализации конечная концентрация полисорбата 65 в составе составляет 1% полисорбата 65 (масс./масс.).

В одном конкретном варианте реализации поверхностно-активное вещество представляет собой полисорбат 85. В некоторых указанных вариантах реализации конечная концентрация полисорбата 85 в составе составляет по меньшей мере от 0,0001% до 10% полисорбата 85 по массе (масс./масс.). В некоторых указанных вариантах реализации конечная концентрация полисорбата 85 в составе составляет по меньшей мере от 0,001% до 1% полисорбата 85 по массе (масс./масс.). В некоторых указанных вариантах реализации конечная концентрация полисорбата 85 в составе составляет по меньшей мере от 0,01% до 1% полисорбата 85 по массе (масс./масс.). В других вариантах реализации конечная концентрация полисорбата 85 в составе составляет 0,01%, 0,02%, 0,03%, 0,04%, 0,05%, 0,06%, 0,07%, 0,08%, 0,09% или 0,1% полисорбата 85 (масс./масс.). В другом варианте реализации конечная концентрация полисорбата 85 в составе составляет 1% полисорбата 85 (масс./масс.).

В некоторых вариантах реализации иммуногенная композиция согласно настоящему раскрытию имеет рН от 5,5 до 7,5, более предпочтительно имеет рН от 5,6 до 7,0, еще более предпочтительно имеет рН от 5,8 до 6,0.

В одном из вариантов реализации в настоящем изобретении предложена емкость, заполненная любой из иммуногенных композиций, раскрытых в настоящем описании. В одном из вариантов реализации емкость выбрана из группы, состоящей из флакона, шприца, колбы, ферментера, биореактора, пакета, банки, ампулы, картриджа и одноразовой ручки. В некоторых вариантах реализации емкость имеет кремнийорганическое покрытие.

В одном из вариантов реализации емкость согласно настоящему изобретению изготовлена из стекла, металлов (например, стали, нержавеющей стали, алюминия и так далее) и/или полимеров (например, термопластов, эластомеров, термопластичных эластомеров). В одном из вариантов реализации емкость согласно настоящему изобретению изготовлена из стекла.

В одном из вариантов реализации в настоящем изобретении предложен шприц, заполненный любой из иммуногенных композиций, раскрытых в настоящем описании. В некоторых вариантах реализации шприц имеет кремнийорганическое покрытие и/или изготовлен из стекла.

Типичная доза иммуногенной композиции согласно настоящему изобретению для инъекций имеет объем от 0,1 мл до 2 мл, более предпочтительно от 0,2 мл до 1 мл, еще более предпочтительно объем, составляющий примерно 0,5 мл.

2.3 Применение в качестве антигенов

Полисахарид, очищенный с применением способа согласно настоящему изобретению, или конъюгаты, раскрытые в настоящем описании, могут быть применены в качестве антигенов. Например, они могут представлять собой часть вакцины.

Следовательно, в одном из вариантов реализации полисахариды, очищенные способом согласно настоящему изобретению, или гликоконъюгаты, полученные с применением указанных полисахаридов, предназначены для применения для инициации иммунного ответа у субъекта. В одном из аспектов субъект представляет собой млекопитающее, такое как человек, кошка, овца, свинья, лошадь, крупный рогатый скот или собака. В одном из аспектов субъект представляет собой человека.

В одном из вариантов реализации полисахариды, очищенные способом согласно настоящему изобретению, гликоконъюгаты, полученные с применением указанных полисахаридов или иммуногенных композиций, раскрытых в настоящем описании, предназначены для применения в вакцине.

В одном из вариантов реализации полисахариды, очищенные способом согласно настоящему изобретению, гликоконъюгаты, полученные с применением указанных полисахаридов или иммуногенных композиций, раскрытых в настоящем описании, предназначены для применения в качестве лекарственного средства.

Иммуногенные композиции, описанные в настоящем описании, могут быть применены в различных терапевтических или профилактических способах для предотвращения, лечения или облегчения бактериальной инфекции, заболевания или состояния у субъекта. В частности, иммуногенные композиции, описанные в настоящем описании, могут быть применены для предотвращения, лечения или облегчения инфекции, заболевания или состояния, вызванных S. pneumoniae, S, aureus, E.faecalis, Haemophilus influenzae типа b, E.coli, Neisseria meningitidis или S. agalactiae, у субъекта.

Таким образом, в одном из аспектов настоящего раскрытия предложен способ предотвращения, лечения или облегчения инфекции, заболевания или состояния, вызванных S. pneumoniae, S, aureus, Е. faecalis, Haemophilus influenzae типа b, E. coli, Neisseria meningitidis или S. agalactiae, у субъекта, включающий введение субъекту иммунологически эффективного количества иммуногенной композиции согласно настоящему раскрытию (в частности, иммуногенной композиции, содержащей соответствующий полисахарид или его гликоконъюгат).

В одном из вариантов реализации в настоящем раскрытии предложен способ стимулирования иммунного ответа в отношении S. pneumoniae, S. aureus, Е. faecalis, Haemophilus influenzae типа b, E.coli, Neisseria meningitidis или S. agalactiae у субъекта, включающий введение субъекту иммунологически эффективного количества иммуногенной композиции согласно настоящему раскрытию (в частности, иммуногенной композиции, содержащей соответствующий полисахарид или его гликоконъюгат).

В одном из вариантов реализации иммуногенные композиции, раскрытые в настоящем описании, предназначены для применения в качестве вакцины. В таких вариантах реализации иммуногенные композиции, описанные в настоящем описании, могут быть применены для предотвращения инфекции, вызванной S. pneumoniae, S. aureus, Е, faecalis, Haemophilus influenzae типа b, E. coli, Neisseria meningitidis или S. agalactiae, у субъекта. Таким образом, в одном из аспектов настоящего изобретения предложен способ предотвращения инфекции, вызванной S. pneumoniae, S. aureus, Е, faecalis Haemophilus influenzae типа b, E.coli, Neisseria meningitidis или S. agalactiae, у субъекта, включающий введение субъекту иммунологически эффективного количества иммуногенной композиции согласно настоящему раскрытию.

В одном из аспектов субъект представляет собой млекопитающее, такое как человек, кошка, овца, свинья, лошадь, крупный рогатый скот или собака. В одном из аспектов субъект представляет собой человека.

Иммуногенные композиции согласно настоящему раскрытию могут быть применены для защиты или лечения человека, восприимчивого к инфекции, вызванной S. pneumoniae, S, aureus, Е. faecaiis, Haemophilus influenzae типа b, E. coli, Neisseria meningitidis или S. agaiactiae, путем системного введения иммуногенных композиций или введения иммуногенных композиций через слизистые оболочки. В одном из вариантов реализации иммуногенные композиции, раскрытые в настоящем описании, вводят внутримышечным, внутрибрюшинным, внутрикожным или подкожным путем. В одном из вариантов реализации иммуногенные композиции, раскрытые в настоящем описании, вводят путем внутримышечной, внутрибрюшинной, внутрикожной или подкожной инъекции. В одном из вариантов реализации иммуногенные композиции, раскрытые в настоящем описании, вводят путем внутримышечной или подкожной инъекции.

В некоторых случаях требуется только одна доза иммуногенной композиции согласно настоящему раскрытию, однако при некоторых обстоятельствах, таких как условия более выраженного иммунодефицита, может быть введена вторая, третья или четвертая доза. После первоначальной вакцинации субъекты могут подвергаться одной или нескольким бустерным иммунизациям с достаточным интервалом.

В одном из вариантов реализации схема вакцинации иммуногенной композицией согласно настоящему раскрытию представляет собой однократное введение. В одном из вариантов реализации схема вакцинации иммуногенной композицией согласно настоящему раскрытию представляет собой схему многократного введения.

3 Конкретные варианты реализации настоящего изобретения изложены в следующих пронумерованных пунктах:

1. Способ очистки бактериального полисахарида из раствора, содержащего указанный полисахарид совместно с загрязняющими примесями, причем указанный способ включает стадию флокуляции.

2. Способ по п. 1, где флокулирующий агент содержит поливалентный катион.

3. Способ по п. 2, где указанный поливалентный катион выбран из группы, состоящей из алюминия, железа, кальция и магния.

4. Способ по п. 2, где указанный флокулирующий агент представляет собой смесь по меньшей мере двух поливалентных катионов, выбранных из группы, состоящей из алюминия, железа, кальция и магния.

5. Способ по п. 2, где указанный флокулирующий агент представляет собой смесь по меньшей мере трех поливалентных катионов, выбранных из группы, состоящей из алюминия, железа, кальция и магния.

6. Способ по п. 2, где указанный флокулирующий агент представляет собой смесь четырех поливалентных катионов, выбранных из группы, состоящей из алюминия, железа, кальция и магния.

7. Способ по п. 1, где флокулирующий агент содержит агент, выбранный из группы, состоящей из квасцов (например, калиевых квасцов, натриевых квасцов или аммониевых квасцов), хлоргидрата алюминия, сульфата алюминия, оксида кальция, гидроксида кальция, сульфата железа (II) (сульфата закисного железа), хлорида железа (III) (хлорида окисного железа), полиакриламида, модифицированных полиакриламидов, polyDADMAC, полиэтиленимина (PEI), алюмината натрия и силиката натрия.

8. Способ по п. 1, где флокулирующий агент выбран из группы, состоящей из квасцов (например, калиевых квасцов, натриевых квасцов или аммониевых квасцов), хлоргидрата алюминия, сульфата алюминия, оксида кальция, гидроксида кальция, сульфата железа (II) (сульфата закисного железа), хлорида железа (III) (хлорида окисного железа), полиакриламида, модифицированных полиакриламидов, polyDADMAC, алюмината натрия и силиката натрия.

9. Способ по пункту 1, где флокулирующий агент представляет собой полиэтиленимин (PEI).

10. Способ по п. 1, где флокулирующий агент содержит квасцы.

11. Способ по п. 1, где флокулирующий агент представляет собой квасцы.

12. Способ по п. 1, где флокулирующий агент содержит калиевые квасцы.

13. Способ по п. 1, где флокулирующий агент представляет собой калиевые квасцы.

14. Способ по п. 1, где флокулирующий агент содержит натриевые квасцы.

15. Способ по п. 1, где флокулирующий агент представляет собой натриевые квасцы.

16. Способ по п. 1, где флокулирующий агент содержит аммониевые квасцы.

17. Способ по п. 1, где флокулирующий агент представляет собой аммониевые квасцы.

18. Способ по п. 1, где флокулирующий агент представляет собой смесь двух агентов, выбранных из группы, состоящей из квасцов (например, калиевых квасцов, натриевых квасцов или аммониевых квасцов), хлоргидрата алюминия, сульфата алюминия, оксида кальция, гидроксида кальция, сульфата железа (II) (сульфата закисного железа), хлорида железа (III) (хлорида окисного железа), полиакриламида, модифицированных полиакриламидов, polyDADMAC, полиэтиленимина (PEI), алюмината натрия и силиката натрия. В одном из вариантов реализации флокулирующий агент выбран из группы, состоящей из квасцов (например, калиевых квасцов, натриевых квасцов или аммониевых квасцов), хлоргидрата алюминия, сульфата алюминия, оксида кальция, гидроксида кальция, сульфата железа (II) (сульфата закисного железа), хлорида железа (III) (хлорида окисного железа), полиакриламида, модифицированных полиакриламидов, polyDADMAC, алюмината натрия и силиката натрия.

19. Способ по п. 1, где флокулирующий агент представляет собой смесь трех агентов, выбранных из группы, состоящей из квасцов (например, калиевых квасцов, натриевых квасцов или аммониевых квасцов), хлоргидрата алюминия, сульфата алюминия, оксида кальция, гидроксида кальция, сульфата железа (II) (сульфата закисного железа), хлорида железа (III) (хлорида окисного железа), полиакриламида, модифицированных полиакриламидов, polyDADMAC, полиэтиленимина (PEI), алюмината натрия и силиката натрия.

20. Способ по п. 1, где флокулирующий агент представляет собой смесь четырех агентов, выбранных из группы, состоящей из квасцов (например, калиевых квасцов, натриевых квасцов или аммониевых квасцов), хлоргидрата алюминия, сульфата алюминия, оксида кальция, гидроксида кальция, сульфата железа (II) (сульфата закисного железа), хлорида железа (III) (хлорида окисного железа), полиакриламида, модифицированных полиакриламидов, polyDADMAC, алюмината натрия и силиката натрия.

21. Способ по п. 1, где флокулирующий агент содержит агент, выбранный из группы, состоящей из хитозана, изингласса, семян Moringa oleifera (дерево хрена), желатина, семян Strychnos potatorum (ореховое дерево Nirmali), гуаровой камеди и альгинатов (например, экстрактов бурых водорослей). В одном из вариантов реализации флокулирующий агент выбран из группы, состоящей из хитозана, изингласса, семян Moringa oleifera (дерево хрена), желатина, семян Strychnos potatorum (ореховое дерево Nirmali), гуаровой камеди и альгинатов (например, экстрактов бурых водорослей).

22. Способ по п. 1, где флокулирующий агент представляет собой агент, выбранный из группы, состоящей из хитозана, изингласса, семян Moringa oleifera (дерево хрена), желатина, семян Strychnos potatorum (ореховое дерево Nirmali), гуаровой камеди и альгинатов (например, экстрактов бурых водорослей). В одном из вариантов реализации флокулирующий агент выбран из группы, состоящей из хитозана, изингласса, семян Moringa oleifera (дерево хрена), желатина, семян Strychnos potatorum (ореховое дерево Nirmali), гуаровой камеди и альгинатов (например, экстрактов бурых водорослей).

23. Способ по любому из пп. 1-22, где концентрация флокулирующего агента составляет от примерно 0,1 до примерно 20% (масс./об.).

24. Способ по любому из пп. 1-22, где концентрация флокулирующего агента составляет от примерно 0,5 до примерно 10% (масс./об.).

25. Способ по любому из пп. 1-22, где концентрация флокулирующего агента составляет от примерно 1 до примерно 5% (масс./об.).

26. Способ по любому из пп. 1-22, где концентрация флокулирующего агента составляет примерно 0,1, примерно 0,25, примерно 0,5, примерно 1,0, примерно 1,5, примерно 2,0, примерно 2,5, примерно 3,0, примерно 3,5, примерно 4,0, примерно 4,5, примерно 5,0, примерно 5,5, примерно 6,0, примерно 6,5, примерно 7,0, примерно 7,5, примерно 8,0, примерно 8,5, примерно 9,0, примерно 9,5 или примерно 10% (масс./об.).

27. Способ по любому из пп. 1-22, где концентрация флокулирующего агента составляет примерно 10,5, примерно 11,0, примерно 11,5, примерно 12,0, примерно 12,5, примерно 13,0, примерно 13,5, примерно 14,0, примерно 14,5, примерно 15,0, примерно 15,5, примерно 16,0, примерно 16,5, примерно 17,0, примерно 17,5, примерно 18,0, примерно 18,5, примерно 19,0, примерно 19,5 или примерно 20,0% (масс./об.)

28. Способ по любому из пп. 1-22, где концентрация флокулирующего агента составляет примерно 0,5, примерно 1,0, примерно 1,5, примерно 2,0, примерно 2,5, примерно 3,0, примерно 3,5, примерно 4,0, примерно 4,5 или примерно 5,0% (масс./об.)

29. Способ по любому из пп. 1-22, где применяют концентрацию флокулирующего агента, составляющую примерно 1,0, примерно 1,5, примерно 2,0, примерно 2,5, примерно 3,0, примерно 3,5 или примерно 4,0% (масс./об.).

30. Способ по любому из пп. 1-29, где флокулирующий агент добавляют в течение периода от нескольких секунд (например, от 1 до 10 секунд) до примерно одного месяца.

31. Способ по любому из пп. 1-29, где флокулирующий агент добавляют в течение периода от примерно 2 секунд до примерно двух недель.

32. Способ по любому из пп. 1-29, где флокулирующий агент добавляют в течение периода от примерно 1 минуты до примерно одной недели.

33. Способ по любому из пп. 1-29, где флокулирующий агент добавляют в течение периода от примерно 1 минуты, примерно 5 минут, примерно 10 минут, примерно 15 минут, примерно 20 минут, примерно 25 минут, примерно 30 минут, примерно 35 минут, примерно 40 минут, примерно 45 минут, примерно 50 минут, примерно 55 минут, примерно 60 минут, примерно 65 минут, примерно 70 минут, примерно 80 минут, примерно 85 минут, примерно 90 минут, примерно 95 минут, примерно 100 минут, примерно 110 минут, примерно 120 минут, примерно 130 минут, примерно 140 минут, примерно 150 минут, примерно 160 минут, примерно 170 минут, примерно 3 часов, примерно 4 часов, примерно 5 часов, примерно 6 часов, примерно 7 часов, примерно 8 часов, примерно 9 часов, примерно 10 часов, примерно 11 часов, примерно 12 часов, примерно 13 часов, примерно 14 часов, примерно 15 часов, примерно 16 часов, примерно 17 часов, примерно 18 часов, примерно 19 часов, примерно 20 часов, примерно 21 часа, примерно 22 часов, примерно 23 часов или примерно 24 часов до примерно двух дней.

34. Способ по любому из пп. 1-29, где флокулирующий агент добавляют в течение периода времени от примерно 5 минут, примерно 10 минут, примерно 15 минут, примерно 20 минут, примерно 25 минут, примерно 30 минут, примерно 35 минут, примерно 40 минут, примерно 45 минут, примерно 50 минут, примерно 55 минут, примерно 60 минут, примерно 65 минут, примерно 70 минут, примерно 80 минут, примерно 85 минут, примерно 90 минут, примерно 95 минут, примерно 100 минут, примерно 110 минут, примерно 120 минут, примерно 130 минут, примерно 140 минут, примерно 150 минут, примерно 160 минут, примерно 170 минут, примерно 3 часов, примерно 4 часов, примерно 5 часов, примерно 6 часов, примерно 7 часов, примерно 8 часов, примерно 9 часов, примерно 10 часов, примерно 11 часов или примерно 12 часов до примерно одного дня.

35. Способ по любому из пп. 1-29, где флокулирующий агент добавляют в течение периода времени от примерно 15 минут, примерно 20 минут, примерно 25 минут, примерно 30 минут, примерно 35 минут, примерно 40 минут, примерно 45 минут, примерно 50 минут, примерно 55 минут, примерно 60 минут, примерно 65 минут, примерно 70 минут, примерно 80 минут, примерно 85 минут, примерно 90 минут, примерно 95 минут, примерно 100 минут, примерно 110 минут, примерно 120 минут, примерно 130 минут, примерно 140 минут, примерно 150 минут, примерно 160 минут, примерно 170 минут, примерно 3 часов, примерно 4 часов, примерно 5 часов, примерно 6 часов, примерно 7 часов, примерно 8 часов, примерно 9 часов, примерно 10 часов, примерно 11 часов или примерно 12 часов до примерно одного дня.

36. Способ по любому из пп. 1-29, где флокулирующий агент добавляют в течение периода от примерно 15 минут до примерно 3 часов.

37. Способ по любому из пп. 1-29, где флокулирующий агент добавляют в течение периода от примерно 30 минут до примерно 120 минут.

38. Способ по любому из пп. 1-29, где флокулирующий агент добавляют в течение примерно 2 секунд, примерно 10 секунд, примерно 30 секунд, примерно 1 минуты, примерно 5 минут, примерно 10 минут, примерно 15 минут, примерно 20 минут, примерно 25 минут, примерно 30 минут, примерно 35 минут, примерно 40 минут, примерно 45 минут, примерно 50 минут, примерно 55 минут, примерно 60 минут, примерно 65 минут, примерно 70 минут, примерно 75 минут, примерно 80 минут, примерно 85 минут, примерно 90 минут, примерно 95 минут, примерно 100 минут, примерно 105 минут, примерно 110 минут, примерно 115 минут, примерно 120 минут, примерно 125 минут, примерно 130 минут, примерно 135 минут, примерно 140 минут, примерно 145 минут, примерно 150 минут, примерно 155 минут, примерно 160 минут, примерно 170 минут, примерно 3,0 часов, примерно 3,5 часов, примерно 4,0 часов, примерно 4,5 часов, примерно 5,0 часов, примерно 5,5 часов, примерно 6,0 часов, примерно 6,5 часов, примерно 7,0 часов, примерно 7,5 часов, примерно 8,0 часов, примерно 8,5 часов, примерно 9 часов, примерно 10 часов, примерно 11 часов, примерно 12 часов, примерно 13 часов, примерно 14 часов, примерно 15 часов, примерно 16 часов, примерно 17 часов, примерно 18 часов, примерно 19 часов, примерно 20 часов, примерно 21 часа, примерно 22 часов, примерно 23 часов, примерно 24 часов, примерно 30 часов, примерно 36 часов, примерно 42 часов, примерно 48 часов, примерно 3 дней, примерно 4 дней, примерно 5 дней, примерно 6 дней, примерно 7 дней, примерно 8 дней, примерно 9 дней, примерно 10 дней, примерно 11 дней, примерно 12 дней, примерно 13 дней, примерно 14 дней или примерно 15 дней.

39. Способ по любому из пп. 1-38, где флокулирующий агент добавляют без перемешивания.

40. Способ по любому из пп. 1-38, где флокулирующий агент добавляют при перемешивании.

41. Способ по любому из пп. 1-38, где флокулирующий агент добавляют при осторожном перемешивании.

42. Способ по любому из пп. 1-38, где флокулирующий агент добавляют при интенсивном перемешивании.

43. Способ по любому из пп. 1-42, где раствор выдерживают в течение некоторого времени для обеспечения осаждения хлопьев, после чего проводят последующую обработку.

44. Способ по любому из пп. 1-43, где стадию флокуляции проводят с временем отстаивания от нескольких секунд (например, от 2 до 10 секунд) до примерно 1 минуты.

45. Способ по любому из пп. 1-43, где стадию флокуляции проводят с временем отстаивания, составляющим по меньшей мере примерно 2, по меньшей мере примерно 3, по меньшей мере примерно 4, по меньшей мере примерно 5, по меньшей мере примерно 10, по меньшей мере примерно 15, по меньшей мере примерно 20, по меньшей мере примерно 25, по меньшей мере примерно 30, по меньшей мере примерно 35, по меньшей мере примерно 40, по меньшей мере примерно 45, по меньшей мере примерно 50, по меньшей мере примерно 55, по меньшей мере примерно 60, по меньшей мере примерно 65, по меньшей мере примерно 70, по меньшей мере примерно 75, по меньшей мере примерно 80, по меньшей мере примерно 85, по меньшей мере примерно 90, по меньшей мере примерно 95, по меньшей мере примерно 100, по меньшей мере примерно 105, по меньшей мере примерно 110, по меньшей мере примерно 115, по меньшей мере примерно 120, по меньшей мере примерно 125, по меньшей мере примерно 130, по меньшей мере примерно 135, по меньшей мере примерно 140, по меньшей мере примерно 145, по меньшей мере примерно 150, по меньшей мере примерно 155 или по меньшей мере примерно 160 минут.

46. Способ по п. 1-43, где время отстаивания составляет менее недели.

47. Способ по любому из пп. 1-43, где стадию флокуляции проводят с временем отстаивания, составляющим от примерно 1, примерно 2, примерно 3, примерно 4, примерно 5, примерно 6, примерно 7, примерно 8, примерно 9, примерно 10, примерно 15, примерно 20, примерно 25, примерно 30, примерно 40, примерно 50, примерно 60, примерно 70, примерно 80, примерно 90, примерно 100, примерно 120, примерно 140, примерно 160, примерно 180, примерно 220, примерно 240, примерно 300, примерно 360, примерно 420, примерно 480, примерно 540, примерно 600, примерно 660, примерно 720, примерно 780, примерно 840, примерно 900, примерно 960, примерно 1020, примерно 1080, примерно 1140, примерно 1200, примерно 1260, примерно 1320, примерно 1380, примерно 1440 минут, примерно двух дней, примерно трех дней, примерно четырех дней, примерно пяти дней или примерно шести дней до 1 недели.

48. Способ по любому из пп. 1-43, где стадию флокуляции проводят с временем отстаивания, составляющим от нескольких секунд (например, от 1 до 10 секунд) до примерно одного месяца.

49. Способ по любому из пп. 1-43, где стадию флокуляции проводят с временем отстаивания, составляющим от примерно 2 секунд до примерно двух недель.

50. Способ по любому из пп. 1-43, где стадию флокуляции проводят с временем отстаивания, составляющим от примерно 1 минуты до примерно одной недели.

51. Способ по любому из пп. 1-43, где стадию флокуляции проводят с временем отстаивания, составляющим от примерно 1 минуты, примерно 5 минут, примерно 10 минут, примерно 15 минут, примерно 20 минут, примерно 25 минут, примерно 30 минут, примерно 35 минут, примерно 40 минут, примерно 45 минут, примерно 50 минут, примерно 55 минут, примерно 60 минут, примерно 65 минут, примерно 70 минут, примерно 80 минут, примерно 85 минут, примерно 90 минут, примерно 95 минут, примерно 100 минут, примерно 110 минут, примерно 120 минут, примерно 130 минут, примерно 140 минут, примерно 150 минут, примерно 160 минут, примерно 170 минут, примерно 3 часов, примерно 4 часов, примерно 5 часов, примерно 6 часов, примерно 7 часов, примерно 8 часов, примерно 9 часов, примерно 10 часов, примерно 11 часов, примерно 12 часов, примерно 13 часов, примерно 14 часов, примерно 15 часов, примерно 16 часов, примерно 17 часов, примерно 18 часов, примерно 19 часов, примерно 20 часов, примерно 21 часа, примерно 22 часов, примерно 23 часов или примерно 24 часов до примерно двух дней.

52. Способ по любому из пп. 1-43, где стадию флокуляции проводят с временем отстаивания, составляющим от примерно 5 минут, примерно 10 минут, примерно 15 минут, примерно 20 минут, примерно 25 минут, примерно 30 минут, примерно 35 минут, примерно 40 минут, примерно 45 минут, примерно 50 минут, примерно 55 минут, примерно 60 минут, примерно 65 минут, примерно 70 минут, примерно 80 минут, примерно 85 минут, примерно 90 минут, примерно 95 минут, примерно 100 минут, примерно 110 минут, примерно 120 минут, примерно 130 минут, примерно 140 минут, примерно 150 минут, примерно 160 минут, примерно 170 минут, примерно 3 часов, примерно 4 часов, примерно 5 часов, примерно 6 часов, примерно 7 часов, примерно 8 часов, примерно 9 часов, примерно 10 часов, примерно 11 часов или примерно 12 часов до примерно одного дня.

53. Способ по любому из пп. 1-43, где стадию флокуляции проводят с временем отстаивания, составляющим от примерно 15 минут, примерно 20 минут, примерно 25 минут, примерно 30 минут, примерно 35 минут, примерно 40 минут, примерно 45 минут, примерно 50 минут, примерно 55 минут, примерно 60 минут, примерно 65 минут, примерно 70 минут, примерно 80 минут, примерно 85 минут, примерно 90 минут, примерно 95 минут, примерно 100 минут, примерно 110 минут, примерно 120 минут, примерно 130 минут, примерно 140 минут, примерно 150 минут, примерно 160 минут, примерно 170 минут, примерно 3 часов, примерно 4 часов, примерно 5 часов, примерно 6 часов, примерно 7 часов, примерно 8 часов, примерно 9 часов, примерно 10 часов, примерно 11 часов или примерно 12 часов до примерно одного дня.

54. Способ по любому из пп. 1-43, где стадию флокуляции проводят с временем отстаивания, составляющим от примерно 15 минут до примерно 3 часов.

55. Способ по любому из пп. 1-43, где стадию флокуляции проводят с временем отстаивания, составляющим от примерно 30 минут до примерно 120 минут.

56. Способ по любому из пп. 1-43, где стадию флокуляции проводят с временем отстаивания, составляющим примерно 10 секунд, примерно 30 секунд, примерно 1 минуту, примерно 5 минут, примерно 10 минут, примерно 15 минут, примерно 20 минут, примерно 25 минут, примерно 30 минут, примерно 35 минут, примерно 40 минут, примерно 45 минут, примерно 50 минут, примерно 55 минут, примерно 60 минут, примерно 65 минут, примерно 70 минут, примерно 75 минут, примерно 80 минут, примерно 85 минут, примерно 90 минут, примерно 95 минут, примерно 100 минут, примерно 105 минут, примерно 110 минут, примерно 115 минут, примерно 120 минут, примерно 125 минут, примерно 130 минут, примерно 135 минут, примерно 140 минут, примерно 145 минут, примерно 150 минут, примерно 155 минут, примерно 160 минут, примерно 170 минут, примерно 3 часа, примерно 3,5 часа, примерно 4 часа, примерно 4,5 часа, примерно 5 часов, примерно 5,5 часа, примерно 6 часов, примерно 6,5 часа, примерно 7 часов, примерно 7,5 часа, примерно 8 часов, примерно 8,5 часа, примерно 9 часов, примерно 10 часов, примерно 11 часов, примерно 12 часов, примерно 13 часов, примерно 14 часов, примерно 15 часов, примерно 16 часов, примерно 17 часов, примерно 18 часов, примерно 19 часов, примерно 20 часов, примерно 21 час, примерно 22 часа, примерно 23 часа, примерно 24 часа, примерно 30 часов, примерно 36 часов, примерно 42 часа, примерно 48 часов, примерно 3 дня, примерно 4 дня, примерно 5 дней, примерно 6 дней, примерно 7 дней, примерно 8 дней, примерно 9 дней, примерно 10 дней, примерно 11 дней, примерно 12 дней, примерно 13 дней, примерно 14 дней или примерно 15 дней.

57. Способ по любому из пп. 1-43, где стадию флокуляции проводят с временем отстаивания, составляющим от примерно 5, примерно 10, примерно 15, примерно 20, примерно 25, примерно 30, примерно 60, примерно 90, примерно 120, примерно 180, примерно 220, примерно 240, примерно 300, примерно 360, примерно 420, примерно 480, примерно 540, примерно 600, примерно 660, примерно 720, примерно 780, примерно 840, примерно 900, примерно 960, примерно 1020, примерно 1080, примерно 1140, примерно 1200, примерно 1260, примерно 1320, примерно 1380 или примерно 1440 минут до двух дней.

58. Способ по любому из пп. 1-43, где стадию флокуляции проводят с временем отстаивания, составляющим от примерно 5 минут до примерно одного дня.

59. Способ по любому из пп. 1-43, где стадию флокуляции проводят с временем отстаивания, составляющим от примерно 5 минут до примерно 120 минут.

60. Способ по любому из пп. 1-43, где стадию флокуляции проводят с временем отстаивания, составляющим примерно 5 минут, примерно 10 минут, примерно 15 минут, примерно 20 минут, примерно 25 минут, примерно 30 минут, примерно 35 минут, примерно 40 минут, примерно 45 минут, примерно 50 минут, примерно 55 минут, примерно 60 минут, примерно 65 минут, примерно 70 минут, примерно 75 минут, примерно 80 минут, примерно 85 минут, примерно 90 минут, примерно 95 минут, примерно 100 минут, примерно 105 минут, примерно 110 минут, примерно 115 минут, примерно 120 минут, примерно 125 минут, примерно 130 минут, примерно 135 минут, примерно 140 минут, примерно 145 минут, примерно 150 минут, примерно 155 минут или примерно 160 минут.

61. Способ по любому из пп. 43-60, где стадию отстаивания проводят без перемешивания.

62. Способ по любому из пп. 43-60, где стадию отстаивания проводят при перемешивании.

63. Способ по любому из пп. 43-60, где стадию отстаивания проводят при осторожном перемешивании.

64. Способ по любому из пп. 43-60, где стадию отстаивания проводят при интенсивном перемешивании.

65. Способ по любому из пп. 1-64, где указанную стадию флокуляции проводят при кислом рН.

66. Способ по любому из пп. 1-64, где указанную стадию флокуляции проводят при рН ниже 7,0, 6,0, 5,0 или 4,0.

67. Способ по любому из пп. 1-64, где указанную стадию флокуляции проводят при рН от 7,0 до 1,0.

68. Способ по любому из пп. 1-64, где указанную стадию флокуляции проводят при рН от 5,5 до 2,5, от 5,0 до 2,5, от 4,5 до 2,5, от 4,0 до 2,5, от 5,5 до 3,0, от 5,0 до 3,0, от 4,5 до 3,0, от 4,0 до 3,0, от 5,5 до 3,5, от 5,0 до 3,5, от 4,5 до 3,5 или от 4,0 до 3,5.

69. Способ по любому из пп. 1-64, где указанную стадию флокуляции проводят при рН, составляющем примерно 5,5, примерно 5,0, примерно 4,5, примерно 4,0, примерно 3,5, примерно 3,0, примерно 2,5, примерно 2,0, примерно 1,5 или примерно 1,0.

70. Способ по любому из пп. 1-64, где указанную стадию флокуляции проводят при рН, составляющем примерно 4,0, примерно 3,5, примерно 3,0 или примерно 2,5.

71. Способ по любому из пп. 1-64, где указанную стадию флокуляции проводят при рН, составляющем примерно 3,5.

72. Способ по любому из пп. 65-71, где указанный кислый рН обеспечивают путем подкисления раствора кислотой.

73. Способ по любому из пп. 65-71, где указанный кислый рН обеспечивают путем подкисления раствора кислотой, выбранной из группы, состоящей из HCl, H₃PO₄, лимонной кислоты, уксусной кислоты, азотистой кислоты и серной кислоты.

74. Способ по любому из пп. 65-71, где указанный кислый рН обеспечивают путем подкисления раствора аминокислотой.

75. Способ по любому из пп. 65-71, где указанный кислый рН обеспечивают путем подкисления раствора аминокислотой, выбранной из группы, состоящей из глицина, аланина и глутамата.

76. Способ по любому из пп. 65-71, где указанный кислый рН обеспечивают путем подкисления раствора серной кислотой.

77. Способ по любому из пп. 65-71, где кислоту добавляют при перемешивании.

78. Способ по любому из пп. 65-71, где кислоту добавляют при осторожном перемешивании.

79. Способ по любому из пп. 65-71, где кислоту добавляют при интенсивном перемешивании.

80. Способ по любому из пп. 1-79, где добавление флокулирующего агента осуществляют при температуре от примерно 4°С до примерно 30°С.

81. Способ по любому из пп. 1-79, где добавление фл окулирующего агента осуществляют при температуре примерно 4°С, примерно 5°С, примерно 6°С, примерно 7°С, примерно 8°С, примерно 9°С, примерно 10°С, примерно 11°С, примерно 12°С, примерно 13°С, примерно 14°С, примерно 15°С, примерно 16°С, примерно 17°С, примерно 18°С, примерно 19°С, примерно 20°С, примерно 21°С, примерно 22°С, примерно 23°С, примерно 24°С, примерно 25°С, примерно 26°С, примерно 27°С, примерно 28°С, примерно 29°С или примерно 30°С.

82. Способ по любому из пп. 1-79, где добавление флокулирующего агента осуществляют при температуре примерно 20°С.

83. Способ по любому из пп. 1-79, где добавление флокулирующего агента осуществляют при температуре от примерно 30°С до примерно 95°С.

84. Способ по любому из пп. 1-79, где добавление флокулирующего агента осуществляют при температуре от примерно 35°С до примерно 80°С, при температуре от примерно 40°С до примерно 70°С, при температуре от примерно 45°С до примерно 65°С, при температуре от примерно 50°С до примерно 60°С, при температуре от примерно 50°С до примерно 55°С, при температуре от примерно 45°С до примерно 55°С или при температуре от примерно 45°С до примерно 55°С.

85. Способ по любому из пп. 1-79, где добавление флокулирующего агента осуществляют при температуре примерно 35°С, примерно 36°С, примерно 37°С, примерно 38°С, примерно 39°С, примерно 40°С, примерно 41°С, примерно 42°С, примерно 43°С, примерно 44°С, примерно 45°С, примерно 46°С, примерно 47°С, примерно 48°С, примерно 49°С, примерно 50°С, примерно 51°С, примерно 52°С, примерно 53°С, примерно 54°С, примерно 55°С, примерно 56°С, примерно 57°С, примерно 58°С, примерно 59°С, примерно 60°С, примерно 61°С, примерно 62°С, примерно 63°С, примерно 64°С, примерно 65°С, примерно 66°С, примерно 67°С, примерно 68°С, примерно 69°С, примерно 70°С, примерно 71°С, примерно 72°С, примерно 73°С, примерно 74°С, примерно 75°С, примерно 76°С, примерно 77°С, примерно 78°С, примерно 79°С или примерно 80°С.

86. Способ по любому из пп. 1-79, где добавление флокулирующего агента осуществляют при температуре примерно 50°С.

87. Способ по любому из пп. 43-86, где стадию отстаивания, если она присутствует, проводят при температуре от примерно 4°С до примерно 30°С.

88. Способ по любому из пп. 43-86, где стадию отстаивания, если она присутствует, проводят при температуре примерно 4°С, примерно 5°С, примерно 6°С, примерно 7°С, примерно 8°С, примерно 9°С, примерно 10°С, примерно 11°С, примерно 12°С, примерно 13°С, примерно 14°С, примерно 15°С, примерно 16°С, примерно 17°С, примерно 18°С, примерно 19°С, примерно 20°С, примерно 21°С, примерно 22°С, примерно 23°С, примерно 24°С, примерно 25°С, примерно 26°С, примерно 27°С, примерно 28°С, примерно 29°С или примерно 30°С.

89. Способ по любому из пп. 43-86, где стадию отстаивания, если она присутствует, проводят при температуре примерно 20°С.

90. Способ по любому из пп. 43-86, где стадию отстаивания, если она присутствует, проводят при температуре от примерно 30°С до примерно 95°С.

91. Способ по любому из пп. 43-86, где стадию отстаивания, если она присутствует, проводят при температуре от примерно 35°С до примерно 80°С, при температуре от примерно 40°С до примерно 70°С, при температуре от примерно 45°С до примерно 65°С, при температуре от примерно 50°С до примерно 60°С, при температуре от примерно 50°С до примерно 55°С, при температуре от примерно 45°С до примерно 55°С или при температуре от примерно 45°С до примерно 55°С.

92. Способ по любому из пп. 43-86, где стадию отстаивания, если она присутствует, проводят при температуре примерно 35°С, примерно 36°С, примерно 37°С, примерно 38°С, примерно 39°С, примерно 40°С, примерно 41°С, примерно 42°С, примерно 43°С, примерно 44°С, примерно 45°С, примерно 46°С, примерно 47°С, примерно 48°С, примерно 49°С, примерно 50°С, примерно 51°С, примерно 52°С, примерно 53°С, примерно 54°С, примерно 55°С, примерно 56°С, примерно 57°С, примерно 58°С, примерно 59°С, примерно 60°С, примерно 61°С, примерно 62°С, примерно 63°С, примерно 64°С, примерно 65°С, примерно 66°С, примерно 67°С, примерно 68°С, примерно 69°С, примерно 70°С, примерно 71°С, примерно 72°С, примерно 73°С, примерно 74°С, примерно 75°С, примерно 76°С, примерно 77°С, примерно 78°С, примерно 79°С или примерно 80°С.

93. Способ по любому из пп. 43-86, где стадию отстаивания, если она присутствует, проводят при температуре примерно 50°С.

94. Способ по любому из пп. 72-93, где стадию подкисления, если она присутствует, проводят при температуре от примерно 4°С до примерно 30°С.

95. Способ по любому из пп. 72-93, где стадию подкисления, если она присутствует, проводят при температуре примерно 4°С, примерно 5°С, примерно 6°С, примерно 7°С, примерно 8°С, примерно 9°С, примерно 10°С, примерно 11°С, примерно 12°С, примерно 13°С, примерно 14°С, примерно 15°С, примерно 16°С, примерно 17°С, примерно 18°С, примерно 19°С, примерно 20°С, примерно 21°С, примерно 22°С, примерно 23°С, примерно 24°С, примерно 25°С, примерно 26°С, примерно 27°С, примерно 28°С, примерно 29°С или примерно 30°С.

96. Способ по любому из пп. 72-93, где стадию подкисления, если она присутствует, проводят при температуре примерно 20°С.

97. Способ по любому из пп. 72-93, где стадию подкисления, если она присутствует, проводят при температуре от примерно 30°С до примерно 95°С.

98. Способ по любому из пп. 72-93, где стадию подкисления, если она присутствует, проводят при температуре от примерно 35°С до примерно 80°С, при температуре от примерно 40°С до примерно 70°С, при температуре от примерно 45°С до примерно 65°С, при температуре от примерно 50°С до примерно 60°С, при температуре от примерно 50°С до примерно 55°С, при температуре от примерно 45°С до примерно 55°С или при температуре от примерно 45°С до примерно 55°С.

99. Способ по любому из пп. 72-93, где стадию подкисления, если она присутствует, проводят при температуре примерно 35°С, примерно 36°С, примерно 37°С, примерно 38°С, примерно 39°С, примерно 40°С, примерно 41°С, примерно 42°С, примерно 43°С, примерно 44°С, примерно 45°С, примерно 46°С, примерно 47°С, примерно 48°С, примерно 49°С, примерно 50°С, примерно 51°С, примерно 52°С, примерно 53°С, примерно 54°С, примерно 55°С, примерно 56°С, примерно 57°С, примерно 58°С, примерно 59°С, примерно 60°С, примерно 61°С, примерно 62°С, примерно 63°С, примерно 64°С, примерно 65°С, примерно 66°С, примерно 67°С, примерно 68°С, примерно 69°С, примерно 70°С, примерно 71°С, примерно 72°С, примерно 73°С, примерно 74°С, примерно 75°С, примерно 76°С, примерно 77°С, примерно 78°С, примерно 79°С или примерно 80°С.

100. Способ по любому из пп. 72-93, где стадию подкисления, если она присутствует, проводят при температуре примерно 50°С.

101. Способ по любому из пп. 1 -79, где добавление флокулирующего агента и стадию отстаивания, если они присутствуют, проводят при температуре от примерно 4°С до примерно 30°С.

102. Способ по любому из пп. 1 -79, где добавление флокулирующего агента и стадию отстаивания, если они присутствуют, проводят при температуре примерно 4°С, примерно 5°С, примерно 6°С, примерно 7°С, примерно 8°С, примерно 9°С, примерно 10°С, примерно 11°С, примерно 12°С, примерно 13°С, примерно 14°С, примерно 15°С, примерно 16°С, примерно 17°С, примерно 18°С, примерно 19°С, примерно 20°С, примерно 21°С, примерно 22°С, примерно 23°С, примерно 24°С, примерно 25°С, примерно 26°С, примерно 27°С, примерно 28°С, примерно 29°С или примерно 30°С.

103. Способ по любому из пп. 1-79, где добавление флокулирующего агента и стадию отстаивания, если они присутствуют, проводят при температуре примерно 20°С.

104. Способ по любому из пп. 1-79, где добавление флокулирующего агента и стадию отстаивания, если они присутствуют, проводят при температуре от примерно 30°С до примерно 95°С.

105. Способ по любому из пп. 1-79, где добавление флокулирующего агента и стадию отстаивания, если они присутствуют, проводят при температуре от примерно 35°С до примерно 80°С, при температуре от примерно 40°С до примерно 70°С, при температуре от примерно 45°С до примерно 65°С, при температуре от примерно 50°С до примерно 60°С, при температуре от примерно 50°С до примерно 55°С, при температуре от примерно 45°С до примерно 55°С или при температуре от примерно 45°С до примерно 55°С.

106. Способ по любому из пп. 1-79, где добавление флокулирующего агента и стадию отстаивания, если они присутствуют, проводят при температуре примерно 35°С, примерно 36°С, примерно 37°С, примерно 38°С, примерно 39°С, примерно 40°С, примерно 41°С, примерно 42°С, примерно 43°С, примерно 44°С, примерно 45°С, примерно 46°С, примерно 47°С, примерно 48°С, примерно 49°С, примерно 50°С, примерно 51°С, примерно 52°С, примерно 53°С, примерно 54°С, примерно 55°С, примерно 56°С, примерно 57°С, примерно 58°С, примерно 59°С, примерно 60°С, примерно 61°С, примерно 62°С, примерно 63°С, примерно 64°С, примерно 65°С, примерно 66°С, примерно 67°С, примерно 68°С, примерно 69°С, примерно 70°С, примерно 71°С, примерно 72°С, примерно 73°С, примерно 74°С, примерно 75°С, примерно 76°С, примерно 77°С, примерно 78°С, примерно 79°С или примерно 80°С.

107. Способ по любому из пп. 1-79, где добавление флокулирующего агента и стадию отстаивания, если они присутствуют, проводят при температуре примерно 50°С.

108. Способ по любому из пп. 72-79, где добавление флокулирующего агента и стадию подкисления проводят при температуре от примерно 4°С до примерно 30°С.

109. Способ по любому из пп. 72-79, где добавление флокулирующего агента и стадию подкисления проводят при температуре примерно 4°С, примерно 5°С, примерно 6°С, примерно 7°С, примерно 8°С, примерно 9°С, примерно 10°С, примерно 11°С, примерно 12°С, примерно 13°С, примерно 14°С, примерно 15°С, примерно 16°С, примерно 17°С, примерно 18°С, примерно 19°С, примерно 20°С, примерно 21°С, примерно 22°С, примерно 23°С, примерно 24°С, примерно 25°С, примерно 26°С, примерно 27°С, примерно 28°С, примерно 29°С или примерно 30°С.

110. Способ по любому из пп. 72-79, где добавление флокулирующего агента и стадию подкисления проводят при температуре примерно 20°С.

111. Способ по любому из пп. 72-79, где добавление флокулирующего агента и стадию подкисления проводят при температуре от примерно 30°С до примерно 95°С.

112. Способ по любому из пп. 72-79, где добавление флокулирующего агента и стадию подкисления проводят при температуре от примерно 35°С до примерно 80°С, при температуре от примерно 40°С до примерно 70°С, при температуре от примерно 45°С до примерно 65°С, при температуре от примерно 50°С до примерно 60°С, при температуре от примерно 50°С до примерно 55°С, при температуре от примерно 45°С до примерно 55°С или при температуре от примерно 45°С до примерно 55°С.

113. Способ по любому из пп. 72-79, где добавление флокулирующего агента и стадию подкисления проводят при температуре примерно 35°С, примерно 36°С, примерно 37°С, примерно 38°С, примерно 39°С, примерно 40°С, примерно 41°С, примерно 42°С, примерно 43°С, примерно 44°С, примерно 45°С, примерно 46°С, примерно 47°С, примерно 48°С, примерно 49°С, примерно 50°С, примерно 51°С, примерно 52°С, примерно 53°С, примерно 54°С, примерно 55°С, примерно 56°С, примерно 57°С, примерно 58°С, примерно 59°С, примерно 60°С, примерно 61°С, примерно 62°С, примерно 63°С, примерно 64°С, примерно 65°С, примерно 66°С, примерно 67°С, примерно 68°С, примерно 69°С, примерно 70°С, примерно 71°С, примерно 72°С, примерно 73°С, примерно 74°С, примерно 75°С, примерно 76°С, примерно 77°С, примерно 78°С, примерно 79°С или примерно 80°С.

114. Способ по любому из пп. 72-79, где добавление флокулирующего агента и стадию подкисления проводят при температуре примерно 50°С.

115. Способ по любому из пп. 72-79, где добавление флокулирующего агента, стадии отстаивания и подкисления проводят при температуре от примерно 4°С до примерно 30°С.

116. Способ по любому из пп. 72-79, где добавление флокулирующего агента, стадии отстаивания и подкисления проводят при температуре примерно 4°С, примерно 5°С, примерно 6°С, примерно 7°С, примерно 8°С, примерно 9°С, примерно 10°С, примерно 11°С, примерно 12°С, примерно 13°С, примерно 14°С, примерно 15°С, примерно 16°С, примерно 17°С, примерно 18°С, примерно 19°С, примерно 20°С, примерно 21°С, примерно 22°С, примерно 23°С, примерно 24°С, примерно 25°С, примерно 26°С, примерно 27°С, примерно 28°С, примерно 29°С или примерно 30°С.

117. Способ по любому из пп. 72-79, где добавление флокулирующего агента, стадии отстаивания и подкисления проводят при температуре примерно 20°С.

118. Способ по любому из пп. 72-79, где добавление флокулирующего агента, стадии отстаивания и подкисления проводят при температуре от примерно 30°С до примерно 95°С.

119. Способ по любому из пп. 72-79, где добавление флокулирующего агента, стадии отстаивания и подкисления проводят при температуре от примерно 35°С до примерно 80°С, при температуре от примерно 40°С до примерно 70°С, при температуре от примерно 45°С до примерно 65°С, при температуре от примерно 50°С до примерно 60°С, при температуре от примерно 50°С до примерно 55°С, при температуре от примерно 45°С до примерно 55°С или при температуре от примерно 45°С до примерно 55°С.

120. Способ по любому из пп. 72-79, где добавление флокулирующего агента, стадии отстаивания и подкисления проводят при температуре примерно 35°С, примерно 36°С, примерно 37°С, примерно 38°С, примерно 39°С, примерно 40°С, примерно 41°С, примерно 42°С, примерно 43°С, примерно 44°С, примерно 45°С, примерно 46°С, примерно 47°С, примерно 48°С, примерно 49°С, примерно 50°С, примерно 51°С, примерно 52°С, примерно 53°С, примерно 54°С, примерно 55°С, примерно 56°С, примерно 57°С, примерно 58°С, примерно 59°С, примерно 60°С, примерно 61°С, примерно 62°С, примерно 63°С, примерно 64°С, примерно 65°С, примерно 66°С, примерно 67°С, примерно 68°С, примерно 69°С, примерно 70°С, примерно 71°С, примерно 72°С, примерно 73°С, примерно 74°С, примерно 75°С, примерно 76°С, примерно 77°С, примерно 78°С, примерно 79°С или примерно 80°С.

121. Способ по любому из пп. 72-79, где добавление флокулирующего агента, стадии отстаивания и подкисления проводят при температуре примерно 50°С.

122. Способ по любому из пп. 1-71, 80-93 или 101-107, где стадия флокуляции включает добавление флокулирующего агента без регулирования рН.

123. Способ по любому из пп. 1-122, где стадия флокуляции включает добавление флокулирующего агента, регулирование рН и отстаивание раствора.

124. Способ по п. 123, где флокулирующий агент добавляют перед регулированием рН.

125. Способ по п. 123, где рН регулируют перед добавлением флокулирующего агента.

126. Способ по п. 123, где рН регулируют перед добавлением флокулирующего агента и отстаиванием раствора.

127. Способ по п. 123, где добавляют флокулирующий агент и отстаивают раствор перед регулированием рН.

128. Способ по любому из пп. 1-127, где после флокуляции суспензию осветляют путем декантации, осаждения, фильтрования или центрифугирования.

129. Способ по любому из пп. 1-127, где после флокуляции суспензию осветляют путем декантации.

130. Способ по любому из пп. 1-127, где после флокуляции суспензию осветляют с помощью гидроциклона.

131. Способ по любому из пп. 1-127, где после флокуляции суспензию осветляют путем осаждения.

132. Способ по любому из пп. 1-127, где после флокуляции суспензию осветляют путем флотации.

133. Способ по любому из пп. 1-127, где после флокуляции суспензию осветляют путем фильтрования.

134. Способ по любому из пп. 1-127, где после флокуляции суспензию осветляют путем центрифугирования.

135. Способ по любому из пп. 127-134, где содержащий полисахарид раствор собирают для хранения.

136. Способ по любому из пп. 127-134, где содержащий полисахарид раствор собирают для дополнительной обработки.

137. Способ по любому из пп. 127-134, где содержащий полисахарид раствор хранят и затем дополнительно обрабатывают.

138. Способ по любому из пп. 134-137, где указанное центрифугирование представляет собой непрерывное центрифугирование.

139. Способ по любому из пп. 134-137, где указанное центрифугирование представляет собой центрифугирование в бакет-роторе.

140. Способ по любому из пп. 134-139, где суспензию центрифугируют при ускорении, составляющем примерно 1000 g, примерно 2000 g, примерно 3000 g, примерно 4000 g, примерно 5000 g, примерно 6000 g, примерно 8000 g, примерно 9000 g, примерно 10000 g, примерно 11000 g, примерно 12000 g, примерно 13000 g, примерно 14000 g, примерно 15000 g, примерно 16000 g, примерно 17000 g, примерно 18000 g, примерно 19000 g, примерно 20000 g, примерно 25000 g, примерно 30000 g, примерно 35000 g, примерно 40000 g, примерно 50000 g, примерно 60000 g, примерно 70000 g, примерно 80000 g, примерно 90000 g, примерно 100000 g, примерно 120000 g, примерно 140000 g, примерно 160000 g или примерно 180000 g.

141. Способ по любому из пп. 134-139, где суспензию центрифугируют при ускорении, составляющем примерно 8000 g, примерно 9000 g, примерно 10000 g, примерно 11000 g, примерно 12000 g, примерно 13000 g, примерно 14000 g, примерно 15000 g, примерно 16000 g, примерно 17000 g, примерно 18000 g, примерно 19000 g, примерно 20000 g или примерно 25000 g.

142. Способ по любому из пп. 134-139, где суспензию центрифугируют при ускорении, составляющем от примерно 5000 g до примерно 25000 д.

143. Способ по любому из пп. 134-139, где суспензию центрифугируют при ускорении, составляющем от примерно 8000 g до примерно 20000 g.

144. Способ по любому из пп. 134-139, где суспензию центрифугируют при ускорении, составляющем от примерно 10000 g до примерно 15000 g.

145. Способ по любому из пп. 134-139, где суспензию центрифугируют при ускорении, составляющем от примерно 10000 g до примерно 12000 g.

146. Способ по любому из пп. 134-145, где суспензию центрифугируют в течение по меньшей мере 2, по меньшей мере 3, по меньшей мере 4, по меньшей мере 5, по меньшей мере 10, по меньшей мере 15, по меньшей мере 20, по меньшей мере 25, по меньшей мере 30, по меньшей мере 35, по меньшей мере 40, по меньшей мере 45, по меньшей мере 50, по меньшей мере 55, по меньшей мере 60, по меньшей мере 65, по меньшей мере 70, по меньшей мере 75, по меньшей мере 80, по меньшей мере 85, по меньшей мере 90, по меньшей мере 95, по меньшей мере 100, по меньшей мере 105, по меньшей мере 110, по меньшей мере 115, по меньшей мере 120, по меньшей мере 125, по меньшей мере 130, по меньшей мере 135, по меньшей мере 140, по меньшей мере 145, по меньшей мере 150, по меньшей мере 155 или по меньшей мере 160 минут.

147. Способ по любому из пп. 146, где время центрифугирования суспензии составляет менее 24 часов.

148. Способ по любому из пп. 134-145, где время центрифугирования суспензии составляет от примерно 5, примерно 10, примерно 15, примерно 20, примерно 30, примерно 40, примерно 50, примерно 60, примерно 70, примерно 80, примерно 90, примерно 100, примерно 120, примерно 140, примерно 160, примерно 180, примерно 220, примерно 240, примерно 300, примерно 360, примерно 420, примерно 480, примерно 540, примерно 600, примерно 660, примерно 720, примерно 780, примерно 840, примерно 900, примерно 960, примерно 1020, примерно 1080, примерно 1140, примерно 1200, примерно 1260, примерно 1320 или примерно 1380 минут до 1440 минут.

149. Предпочтительно время центрифугирования суспензии составляет от примерно 5, примерно 10, примерно 15, примерно 20, примерно 25, примерно 30, примерно 60, примерно 90, примерно 120, примерно 180, примерно 240, примерно 300, примерно 360, примерно 420, примерно 480 или примерно 540 минут до примерно 600 минут.

150. Способ по любому из пп. 134-145, где время центрифугирования суспензии составляет от примерно 5 минут до примерно 3 часов.

151. Способ по любому из пп. 134-145, где время центрифугирования суспензии составляет от примерно 5 минут до примерно 120 минут.

152. Способ по любому из пп. 134-145, время центрифугирования суспензии составляет от примерно 5 минут, примерно 10 минут, примерно 15 минут, примерно 20 минут, примерно 25 минут, примерно 30 минут, примерно 35 минут, примерно 40 минут, примерно 45 минут, примерно 50 минут, примерно 55 минут, примерно 60 минут, примерно 65 минут, примерно 70 минут, примерно 75 минут, примерно 80 минут, примерно 85 минут, примерно 90 минут, примерно 95 минут, примерно 100 минут, примерно 105 минут, примерно 110 минут, примерно 115 минут, примерно 120 минут, примерно 125 минут, примерно 130 минут, примерно 135 минут, примерно 140 минут, примерно 145 минут, примерно 150 минут или примерно 155 минут до примерно 160 минут.

153. Способ по любому из пп. 134-145, время центрифугирования суспензии составляет от примерно 10 минут, примерно 15 минут, примерно 20 минут, примерно 25 минут, примерно 30 минут, примерно 35 минут, примерно 40 минут, примерно 45 минут, примерно 50 минут или примерно 55 минут до примерно 60 минут.

154. Способ по любому из пп. 134-145, где время центрифугирования суспензии составляет примерно 5, примерно 10, примерно 15, примерно 20, примерно 30, примерно 40, примерно 50, примерно 60, примерно 70, примерно 80, примерно 90, примерно 100, примерно 120, примерно 140, примерно 160, примерно 180, примерно 220, примерно 240, примерно 300, примерно 360, примерно 420, примерно 480, примерно 540, примерно 600, примерно 660, примерно 720, примерно 780, примерно 840, примерно 900, примерно 960, примерно 1020, примерно 1080, примерно 1140, примерно 1200, примерно 1260, примерно 1320, примерно 1380 минут или примерно 1440 минут.

155. Способ по любому из пп. 134-145, где время центрифугирования суспензии составляет примерно 5 минут, примерно 10 минут, примерно 15 минут, примерно 20 минут, примерно 25 минут, примерно 30 минут, примерно 35 минут, примерно 40 минут, примерно 45 минут, примерно 50 минут, примерно 55 минут, примерно 60 минут, примерно 65 минут, примерно 70 минут, примерно 75 минут, примерно 80 минут, примерно 85 минут, примерно 90 минут, примерно 95 минут, примерно 100 минут, примерно 105 минут, примерно 110 минут, примерно 115 минут, примерно 120 минут, примерно 125 минут, примерно 130 минут, примерно 135 минут, примерно 140 минут, примерно 145 минут, примерно 150 минут, примерно 155 минут или примерно 160 минут.

156. Способ по любому из пп. 134-138 или 140-155, где указанное центрифугирование представляет собой непрерывное центрифугирование, и скорость подачи составляет 50-5000 мл/мин, 100-4000 мл/мин, 150-3000 мл/мин, 200-2500 мл/мин, 250-2000 мл/мин, 300-1500 мл/мин, 300-1000 мл/мин, 200-1000 мл/мин, 200-1500 мл/мин, 400-1500 мл/мин, 500-1500 мл/мин, 500-1000 мл/мин, 500-2000 мл/мин, 500-2500 мл/мин или 1000-2500 мл/мин.

157. Способ по любому из пп. 134-138 или 140-155, где указанное центрифугирование представляет собой непрерывное центрифугирование, и скорость подачи составляет примерно 10, примерно 25, примерно 50, примерно 75, примерно 100, примерно 150, примерно 200, примерно 250, примерно 300, примерно 350, примерно 400, примерно 450, примерно 500, примерно 550, примерно 600, примерно 650, примерно 700, примерно 750, примерно 800, примерно 850, примерно 900, примерно 950, примерно 1000, примерно 1050, примерно 1100, примерно 1150, примерно 1200, примерно 1250, примерно 1300, примерно 1350, примерно 1400, примерно 1450, примерно 1500, примерно 1650, примерно 1700, примерно 1800, примерно 1900, примерно 2000, примерно 2100, примерно 2200, примерно 2300, примерно 2400, примерно 2500, примерно 2600, примерно 2700, примерно 2800, примерно 2900, примерно 3000, примерно 3250, примерно 3500, примерно 3750, примерно 4000, примерно 4250, примерно 4500 или примерно 5000 мл/мин.

158. Способ по любому из пп. 1-157, где содержащий полисахарид раствор фильтруют.

159. Способ по п. 158, где указанная фильтрация выбрана из группы, состоящей из глубинной фильтрации, фильтрации через активированный уголь, гель-фильтрации, диафильтрации и ультрафильтрации.

160. Способ по п. 158, где указанная стадия фильтрации представляет собой диафильтрацию.

161. Способ по п. 160, где указанная фильтрация представляет собой тангенциальную проточную фильтрацию.

162. Способ по п. 158, где указанная фильтрация представляет собой глубинную фильтрацию.

163. Способ по п. 162, где конструкция глубинного фильтра выбрана из группы, состоящей из кассет, картриджей, глубинных фильтров (например, песчаного фильтра) и линзовидных фильтров.

164. Способ по любому из пп. 158-159 или 162-163, где глубинный фильтр имеет номинальный диапазон удерживания, составляющий примерно 0,01-100 мкм, примерно 0,05-100 мкм, примерно 0,1-100 мкм, примерно 0,2-100 мкм, примерно 0,3-100 мкм, примерно 0,4-100 мкм, примерно 0,5-100 мкм, примерно 0,6-100 мкм, примерно 0,7-100 мкм, примерно 0,8-100 мкм, примерно 0,9-100 мкм, примерно 1-100 мкм, примерно 1,25-100 мкм, примерно 1,5-100 мкм, примерно 1,75-100 мкм, примерно 2-100 мкм, примерно 3-100 мкм, примерно 4-100 мкм, примерно 5-100 мкм, примерно 6-100 мкм, примерно 7-100 мкм, примерно 8-100 мкм, примерно 9-100 мкм, примерно 10-100 мкм, примерно 15-100 мкм, примерно 20-100 мкм, примерно 25-100 мкм, примерно 30-100 мкм, примерно 40-100 мкм, примерно 50-100 мкм или примерно 75-100 мкм.

165. Способ по любому из пп. 158-159 или 162-163, где глубинный фильтр имеет номинальный диапазон удерживания, составляющий примерно 0,01-75 мкм, примерно 0,05-75 мкм, примерно 0,1-75 мкм, примерно 0,2-75 мкм, примерно 0,3-75 мкм, примерно 0,4-75 мкм, примерно 0,5-75 мкм, примерно 0,6-75 мкм, примерно 0,7-75 мкм, примерно 0,8-75 мкм, примерно 0,9-75 мкм, примерно 1-75 мкм, примерно 1,25-75 мкм, примерно 1,5-75 мкм, примерно 1,75-75 мкм, примерно 2-75 мкм, примерно 3-75 мкм, примерно 4-75 мкм, примерно 5-75 мкм, примерно 6-75 мкм, примерно 7-75 мкм, примерно 8-75 мкм, примерно 9-75 мкм, примерно 10-75 мкм, примерно 15-75 мкм, примерно 20-75 мкм, примерно 25-75 мкм, примерно 30-75 мкм, примерно 40-75 мкм или примерно 50-75 мкм.

166. Способ по любому из пп. 158-159 или 162-163, где глубинный фильтр имеет номинальный диапазон удерживания, составляющий примерно 0,01-50 мкм, примерно 0,05-50 мкм, примерно 0,1-50 мкм, примерно 0,2-50 мкм, примерно 0,3-50 мкм, примерно 0,4-50 мкм, примерно 0,5-50 мкм, примерно 0,6-50 мкм, примерно 0,7-50 мкм, примерно 0,8-50 мкм, примерно 0,9-50 мкм, примерно 1-50 мкм, примерно 1,25-50 мкм, примерно 1,5-50 мкм, примерно 1,75-50 мкм, примерно 2-50 мкм, примерно 3-50 мкм, примерно 4-50 мкм, примерно 5-50 мкм, примерно 6-50 мкм, примерно 7-50 мкм, примерно 8-50 мкм, примерно 9-50 мкм, примерно 10-50 мкм, примерно 15-50 мкм, примерно 20-50 мкм, примерно 25-50 мкм, примерно 30-50 мкм, примерно 40-50 мкм или примерно 50-50 мкм.

167. Способ по любому из пп. 158-159 или 162-163, где глубинный фильтр имеет номинальный диапазон удерживания, составляющий примерно 0,01-25 мкм, примерно 0,05-25 мкм, примерно 0,1-25 мкм, примерно 0,2-25 мкм, примерно 0,3-25 мкм, примерно 0,4-25 мкм, примерно 0,5-25 мкм, примерно 0,6-25 мкм, примерно 0,7-25 мкм, примерно 0,8-25 мкм, примерно 0,9-25 мкм, примерно 1-25 мкм, примерно 1,25-25 мкм, примерно 1,5-25 мкм, примерно 1,75-25 мкм, примерно 2-25 мкм, примерно 3-25 мкм, примерно 4-25 мкм, примерно 5-25 мкм, примерно 6-25 мкм, примерно 7-25 мкм, примерно 8-25 мкм, примерно 9-25 мкм, примерно 10-25 мкм, примерно 15-25 мкм или примерно 20-25 мкм.

168. Способ по любому из пп. 158-159 или 162-163, где глубинный фильтр имеет номинальный диапазон удерживания, составляющий примерно 0,01-10 мкм, примерно 0,05-10 мкм, примерно 0,1-10 мкм, примерно 0,2-10 мкм, примерно 0,3-10 мкм, примерно 0,4-10 мкм, примерно 0,5-10 мкм, примерно 0,6-10 мкм, примерно 0,7-10 мкм, примерно 0,8-10 мкм, примерно 0,9-10 мкм, примерно 1-10 мкм, примерно 1,25-10 мкм, примерно 1,5-10 мкм, примерно 1,75-10 мкм, примерно 2-10 мкм, примерно 3-10 мкм, примерно 4-10 мкм, примерно 5-10 мкм, примерно 6-10 мкм, примерно 7-10 мкм, примерно 8-10 мкм или примерно 9-10 мкм.

169. Способ по любому из пп. 158-159 или 162-163, где глубинный фильтр имеет номинальный диапазон удерживания, составляющий примерно 0,01-8 мкм, примерно 0,05-8 мкм, примерно 0,1-8 мкм, примерно 0,2-8 мкм, примерно 0,3-8 мкм, примерно 0,4-8 мкм, примерно 0,5-8 мкм, примерно 0,6-8 мкм, примерно 0,7-8 мкм, примерно 0,8-8 мкм, примерно 0,9-8 мкм, примерно 1-8 мкм, примерно 1,25-8 мкм, примерно 1,5-8 мкм, примерно 1,75-8 мкм, примерно 2-8 мкм, примерно 3-8 мкм, примерно 4-8 мкм, примерно 5-8 мкм, примерно 6-8 мкм или примерно 7-8 мкм.

170. Способ по любому из пп. 158-159 или 162-163, где глубинный фильтр имеет номинальный диапазон удерживания, составляющий примерно 0,01-5 мкм, примерно 0,05-5 мкм, примерно 0,1-5 мкм, примерно 0,2-5 мкм, примерно 0,3-5 мкм, примерно 0,4-5 мкм, примерно 0,5-5 мкм, примерно 0,6-5 мкм, примерно 0,7-5 мкм, примерно 0,8-5 мкм, примерно 0,9-5 мкм, примерно 1-5 мкм, примерно 1,25-5 мкм, примерно 1,5-5 мкм, примерно 1,75-5 мкм, примерно 2-5 мкм, примерно 3-5 мкм или примерно 4-5 мкм.

171. Способ по любому из пп. 158-159 или 162-163, где глубинный фильтр имеет номинальный диапазон удерживания, составляющий примерно 0,01-2 мкм, примерно 0,05-2 мкм, примерно 0,1-2 мкм, примерно 0,2-2 мкм, примерно 0,3-2 мкм, примерно 0,4-2 мкм, примерно 0,5-2 мкм, примерно 0,6-2 мкм, примерно 0,7-2 мкм, примерно 0,8-2 мкм, примерно 0,9-2 мкм, примерно 1-2 мкм, примерно 1,25-2 мкм, примерно 1,5-2 мкм, примерно 1,75-2 мкм, примерно 2-2 мкм, примерно 3-2 мкм или примерно 4-2 мкм.

172. Способ по любому из пп. 158-159 или 162-163, где глубинный фильтр имеет номинальный диапазон удерживания, составляющий примерно 0,01-1 мкм, примерно 0,05-1 мкм, примерно 0,1-1 мкм, примерно 0,2-1 мкм, примерно 0,3-1 мкм, примерно 0,4-1 мкм, примерно 0,5-1 мкм, примерно 0,6-1 мкм, примерно 0,7-1 мкм, примерно 0,8-1 мкм или примерно 0,9-1 мкм.

173. Способ по любому из пп. 158-159 или 162-163, где глубинный фильтр имеет номинальный диапазон удерживания, составляющий примерно 0,05-50 мкм, 0,1-25 мкм, 0,2-10 мкм, 0,1-10 мкм, 0,2-5 мкм или 0,25-1 мкм.

174. Способ по любому из пп. 158-159 или 162-173, где глубинный фильтр имеет производительность, составляющую 1-2500 л/м², 5-2500 л/м², 10-2500 л/м², 25-2500 л/м², 50-2500 л/м², 75-2500 л/м², 100-2500 л/м², 150-2500 л/м², 200-2500 л/м², 300-2500 л/м², 400-2500 л/м², 500-2500 л/м², 750-2500 л/м², 1000-2500 л/м², 1500-2500 л/м² или 2000-2500 л/м².

175. Способ по любому из пп. 158-159 или 162-173, где глубинный фильтр имеет производительность, составляющую 1-1000 л/м², 5-1000 л/м², 10-1000 л/м², 25-1000 л/м², 50-1000 л/м², 75-1000 л/м², 100-1000 л/м², 150-1000 л/м², 200-1000 л/м², 300-1000 л/м², 400-1000 л/м², 500-1000 л/м² или 750-1000 л/м².

176. Способ по любому из пп. 155-156 или 159-170, где глубинный фильтр имеет производительность, составляющую 1-750 л/м², 5-750 л/м², 10-750 л/м², 25-750 л/м², 50-750 л/м², 75-750 л/м², 100-750 л/м², 150-750 л/м², 200-750 л/м², 300-750 л/м², 400-750 л/м² или 500-750 л/м².

177. Способ по любому из пп. 158-159 или 162-173, где глубинный фильтр имеет производительность, составляющую 1-500 л/м², 5-500 л/м², 10-500 л/м², 25-500 л/м², 50-500 л/м², 75-500 л/м², 100-500 л/м², 150-500 л/м², 200-500 л/м², 300-500 л/м² или 400-500 л/м².

178. Способ по любому из пп. 158-159 или 162-173, где глубинный фильтр имеет производительность, составляющую 1-400 л/м², 5-400 л/м², 10-400 л/м², 25-400 л/м², 50-400 л/м², 75-400 л/м², 100-400 л/м², 150-400 л/м², 200-400 л/м² или 300-400 л/м².

179. Способ по любому из пп. 158-159 или 162-173, где глубинный фильтр имеет производительность, составляющую 1-300 л/м², 5-300 л/м², 10-300 л/м², 25-300 л/м², 50-300 л/м², 75-300 л/м², 100-300 л/м², 150-300 л/м² или 200-300 л/м².

180. Способ по любому из пп. 158-159 или 162-173, где глубинный фильтр имеет производительность, составляющую 1-200 л/м², 5-200 л/м², 10-200 л/м², 25-200 л/м², 50-200 л/м², 75-200 л/м², 100-200 л/м² или 150-200 л/м².

181. Способ по любому из пп. 158-159 или 162-173, где глубинный фильтр имеет производительность, составляющую 1-100 л/м², 5-100 л/м², 10-100 л/м², 25-100 л/м², 50-100 л/м² или 75-100 л/м².

182. Способ по любому из пп. 158-159 или 162-173, где глубинный фильтр имеет производительность, составляющую 1-50 л/м², 5-50 л/м², 10-50 л/м² или 25-50 л/м².

183. Способ по любому из пп. 158-159 или 162-182, где скорость подачи составляет 1-1000 LMH (л/м²/час), 10-1000 LMH, 25-1000 LMH, 50-1000 LMH, 100-1000 LMH, 125-1000 LMH, 150-1000 LMH, 200-1000 LMH, 250-1000 LMH, 300-1000 LMH, 400-1000 LMH, 500-1000 LMH, 600-1000 LMH, 700-1000 LMH, 800-1000 LMH или 900-1000 LMH.

184. Способ по любому из пп. 158-159 или 162-182, где скорость подачи составляет 1-500 LMH, 10-500 LMH, 25-500 LMH, 50-500 LMH, 100-500 LMH, 125-500 LMH, 150-500 LMH, 200-500 LMH, 250-500 LMH, 300-500 LMH или 400-500 LMH.

185. Способ по любому из пп. 158-159 или 162-182, где скорость подачи составляет 1-400 LMH, 10-400 LMH, 25-400 LMH, 50-400 LMH, 100-400 LMH, 125-400 LMH, 150-400 LMH, 200-400 LMH, 250-400 LMH или 300-400 LMH.

186. Способ по любому из пп. 158-159 или 162-182, где скорость подачи составляет 1-250 LMH, 10-250 LMH, 25-250 LMH, 50-250 LMH, 100-250 LMH, 125-250 LMH, 150-250 LMH или 200-250 LMH.

187. Способ по любому из пп. 158-159 или 162-182, где скорость подачи составляет примерно 1, примерно 2, примерно 5, примерно 10, примерно 25, примерно 50, примерно 60, примерно 70, примерно 80, примерно 90, примерно 100, примерно 110, примерно 120, примерно 130, примерно 140, примерно 150, примерно 160, примерно 170, примерно 180, примерно 190, примерно 200, примерно 210, примерно 220, примерно 230, примерно 240, примерно 250, примерно 260, примерно 270, примерно 280, примерно 290, примерно 300, примерно 310, примерно 320, примерно 330, примерно 340, примерно 350, примерно 360, примерно 370, примерно 380, примерно 390, примерно 400, примерно 425, примерно 450, примерно 475, примерно 500, примерно 525, примерно 550, примерно 575, примерно 600, примерно 650, примерно 700, примерно 750, примерно 800, примерно 850, примерно 900, примерно 950 или примерно 1000 LMH.

188. Способ по любому из пп. 158-187, где фильтрат подвергают микрофильтрации.

189. Способ по п. 188, где указанная микрофильтрация представляет собой тупиковую фильтрацию.

190. Способ по п. 188, где указанная микрофильтрация представляет собой тангенциальную микрофильтрацию.

191. Способ по любому из пп. 188-190, где фильтр для микрофильтрации имеет номинальный диапазон удерживания, составляющий примерно 0,01-2 мкм, примерно 0,05-2 мкм, примерно 0,1-2 мкм, примерно 0,2-2 мкм, примерно 0,3-2 мкм, примерно 0,4-2 мкм, примерно 0,45-2 мкм, примерно 0,5-2 мкм, примерно 0,6-2 мкм, примерно 0,7-2 мкм, примерно 0,8-2 мкм, примерно 0,9-2 мкм, примерно 1-2 мкм, примерно 1,25-2 мкм, примерно 1,5-2 мкм или примерно 1,75-2 мкм.

192. Способ по любому из пп. 188-190, где фильтр для микрофильтрации имеет номинальный диапазон удерживания, составляющий примерно 0,01-1 мкм, примерно 0,05-1 мкм, примерно 0,1-1 мкм, примерно 0,2-1 мкм, примерно 0,3-1 мкм, примерно 0,4-1 мкм, примерно 0,45-1 мкм, примерно 0,5-1 мкм, примерно 0,6-1 мкм, примерно 0,7-1 мкм, примерно 0,8-1 мкм или примерно 0,9-1 мкм.

193. Способ по любому из пп. 188-190, где фильтр для микрофильтрации имеет номинальный диапазон удерживания, составляющий примерно 0,01, примерно 0,05, примерно 0,1, примерно 0,2, примерно 0,3, примерно 0,4, примерно 0,45, примерно 0,5, примерно 0,6, примерно 0,7, примерно 0,8, примерно 0,9, примерно 1, примерно 1,1, примерно 1,2, примерно 1,3, примерно 1,4, примерно 1,5, примерно 1,6, примерно 1,7, примерно 1,8, примерно 1,9 или примерно 2 мкм.

194. Способ по любому из пп. 188-190, где фильтр для микрофильтрации имеет номинальное удерживание примерно 0,45 мкм.

195. Способ по любому из пп. 188-194, где производительность фильтра для микрофильтрации составляет 100-5000 л/м², 200-5000 л/м², 300-5000 л/м², 400-5000 л/м², 500-5000 л/м², 750-5000 л/м², 1000-5000 л/м², 1500-5000 л/м², 2000-5000 л/м², 3000-5000 л/м² или 4000-5000 л/м².

196. Способ по любому из пп. 188-194, где производительность фильтра для микрофильтрации составляет 100-2500 л/м², 200-2500 л/м², 300-2500 л/м², 400-2500 л/м², 500-2500 л/м², 750-2500 л/м², 1000-2500 л/м², 1500-2500 л/м² или 2000-2500 л/м².

197. Способ по любому из пп. 188-194, где производительность фильтра для микрофильтрации составляет 100-1500 л/м², 200-1500 л/м², 300-1500 л/м², 400-1500 л/м², 500-1500 л/м², 750-1500 л/м² или 1000-1500 л/м².

198. Способ по любому из пп. 188-194, где производительность фильтра для микрофильтрации составляет 100-1250 л/м², 200-1250 л/м², 300-1250 л/м², 400-1250 л/м², 500-1250 л/м², 750-1250 л/м² или 1000-1250 л/м².

199. Способ по любому из пп. 188-194, где производительность фильтра для микрофильтрации составляет 100-1000 л/м², 200-1000 л/м², 300-1000 л/м², 400-1000 л/м², 500-1000 л/м² или 750-1000 л/м².

200. Способ по любому из пп. 188-194, где производительность фильтра для микрофильтрации составляет 100-750 л/м², 200-750 л/м², 300-750 л/м², 400-750 л/м² или 500-750 л/м².

201. Способ по любому из пп. 188-194, где производительность фильтра для микрофильтрации составляет 100-600 л/м², 200-600 л/м², 300-600 л/м², 400-600 л/м² или 400-600 л/м².

202. Способ по любому из пп. 188-194, где производительность фильтра для микрофильтрации составляет 100-500 л/м², 200-500 л/м², 300-500 л/м² или 400-500 л/м².

203. Способ по любому из пп. 188-194, где производительность фильтра для микрофильтрации составляет 100, примерно 150, примерно 200, примерно 250, примерно 300, примерно 350, примерно 400, примерно 450, примерно 500, примерно 550, примерно 600, примерно 650, примерно 700, примерно 750, примерно 800, примерно 850, примерно 900, примерно 950, примерно 1000, примерно 1050, примерно 1100, примерно 1150, примерно 1200, примерно 1250, примерно 1300, примерно 1350, примерно 1400, примерно 1450, примерно 1500, примерно 1550, примерно 1600, примерно 1650, примерно 1700, примерно 1750, примерно 1800, примерно 1850, примерно 1900, примерно 1950, примерно 2000, примерно 2050, примерно 2100, примерно 2150, примерно 2200, примерно 2250, примерно 2300, примерно 2350, примерно 2400, примерно 2450 или примерно 2500 л/м².

204. Способ по любому из пп. 158-203, где фильтрат дополнительно обрабатывают с помощью ультрафильтрации и/или диафильтрации.

205. Способ по любому из пп. 158-203, где фильтрат дополнительно обрабатывают с помощью ультрафильтрации.

206. Способ по любому из пп. 204-205, где мембрана для ультрафильтрации имеет порог отсечения по молекулярной массе в диапазоне от примерно 5 кДа до 1000 кДа.

207. Способ по любому из пп. 204-205, где мембрана для ультрафильтрации имеет порог отсечения по молекулярной массе в диапазоне от примерно 10 кДа до 750 кДа.

208. Способ по любому из пп. 204-205, где мембрана для ультрафильтрации имеет порог отсечения по молекулярной массе в диапазоне от примерно 10 кДа до 500 кДа.

209. Способ по любому из пп. 204-205, где мембрана для ультрафильтрации имеет порог отсечения по молекулярной массе в диапазоне от примерно 10 кДа до 300 кДа.

210. Способ по любому из пп. 204-205, где мембрана для ультрафильтрации имеет порог отсечения по молекулярной массе в диапазоне от примерно 10 кДа до 100 кДа.

211. Способ по любому из пп. 204-205, где мембрана для ультрафильтрации имеет порог отсечения по молекулярной массе в диапазоне от примерно 10 кДа до 50 кДа.

212. Способ по любому из пп. 204-205, где мембрана для ультрафильтрации имеет порог отсечения по молекулярной массе в диапазоне примерно от 10 кДа до 30 кДа.

213. Способ по любому из пп. 204-205, где мембрана для ультрафильтрации имеет порог отсечения по молекулярной массе в диапазоне от примерно 5 кДа до 1000 кДа, от примерно 10 кДа до 1000 кДа, от примерно 20 кДа до 1000 кДа, от примерно 30 кДа до 1000 кДа, от примерно 40 кДа до 1000 кДа, от примерно 50 кДа до 1000 кДа, от примерно 75 кДа до 1000 кДа, от примерно 100 кДа до 1000 кДа, от примерно 150 кДа до 1000 кДа, от примерно 200 кДа до 1000 кДа, от примерно 300 кДа до 1000 кДа, от примерно 400 кДа до 1000 кДа, от примерно 500 кДа до 1000 кДа или от примерно 750 кДа до 1000 кДа.

214. Способ по любому из пп. 204-205, где мембрана для ультрафильтрации имеет порог отсечения по молекулярной массе в диапазоне от примерно 5 кДа до 500 кДа, от примерно 10 кДа до 500 кДа, от примерно 20 кДа до 500 кДа, от примерно 30 кДа до 500 кДа, от примерно 40 кДа до 500 кДа, от примерно 50 кДа до 500 кДа, от примерно 75 кДа до 500 кДа, от примерно 100 кДа до 500 кДа, от примерно 150 кДа до 500 кДа, от примерно 200 кДа до 500 кДа, от примерно 300 кДа до 500 кДа или от примерно 400 кДа до 500 кДа.

215. Способ по любому из пп. 204-205, где мембрана для ультрафильтрации имеет порог отсечения по молекулярной массе в диапазоне от примерно 5 кДа до 300 кДа, от примерно 10 кДа до 300 кДа, от примерно 20 кДа до 300 кДа, от примерно 30 кДа до 300 кДа, от примерно 40 кДа до 300 кДа, от примерно 50 кДа до 300 кДа, от примерно 75 кДа до 300 кДа, от примерно 100 кДа до 300 кДа, от примерно 150 кДа до 300 кДа или от примерно 200 кДа до 300 кДа.

216. Способ по любому из пп. 204-205, где мембрана для ультрафильтрации имеет порог отсечения по молекулярной массе в диапазоне от примерно 5 кДа до 100 кДа, от примерно 10 кДа до 100 кДа, от примерно 20 кДа до 100 кДа, от примерно 30 кДа до 100 кДа, от примерно 40 кДа до 100 кДа, от примерно 50 кДа до 100 кДа или от примерно 75 кДа до 100 кДа.

217. Способ по любому из пп. 204-205, где мембрана для ультрафильтрации имеет порог отсечения по молекулярной массе, составляющий примерно 5 кДа, примерно 10 кДа, примерно 20 кДа, примерно 30 кДа, примерно 40 кДа, примерно 50 кДа, примерно 60 кДа, примерно 70 кДа, примерно 80 кДа, примерно 90 кДа, примерно 100 кДа, примерно 110 кДа, примерно 120 кДа, примерно 130 кДа, примерно 140 кДа, примерно 150 кДа, примерно 200 кДа, примерно 250 кДа, примерно 300 кДа, примерно 400 кДа, примерно 500 кДа, примерно 750 кДа или примерно 1000 кДа.

218. Способ по любому из пп. 204-217, где коэффициент концентрирования на стадии ультрафильтрации составляет от примерно 1,5 до примерно 10.

219. Способ по любому из пп. 204-217, где коэффициент концентрирования составляет от примерно 2 до примерно 8.

220. Способ по любому из пп. 204-217, где коэффициент концентрирования составляет от примерно 2 до примерно 5.

221. Способ по любому из пп. 204-217, где коэффициент концентрирования составляет примерно 1,5, примерно 2,0, примерно 2,5, примерно 3,0, примерно 3,5, примерно 4,0, примерно 4,5, примерно 5,0, примерно 5,5, примерно 6,0, примерно 6,5, примерно 7,0, примерно 7,5, примерно 8,0, примерно 8,5, примерно 9,0, примерно 9,5 или примерно 10,0.

222. Способ по любому из пп. 204-217, где коэффициент концентрирования составляет примерно 2, примерно 3, примерно 4, примерно 5 или примерно 6.

223. Способ по любому из пп. 204-222, где указанную стадию ультрафильтрации проводят при температуре от примерно 20°С до примерно 90°С.

224. Способ по любому из пп. 204-222, где указанную стадию ультрафильтрации проводят при температуре от примерно 35°С до примерно 80°С, при температуре от примерно 40°С до примерно 70°С, при температуре от примерно 45°С до примерно 65°С, при температуре от примерно 50°С до примерно 60°С, при температуре от примерно 50°С до примерно 55°С, при температуре от примерно 45°С до примерно 55°С или при температуре от примерно 45°С до примерно 55°С.

225. Способ по любому из пп. 204-222, где указанную стадию ультрафильтрации проводят при температуре примерно 20°С, примерно 21°С, примерно 22°С, примерно 23°С, примерно 24°С, примерно 25°С, примерно 26°С, примерно 27°С, примерно 28°С, примерно 29°С, примерно 30°С, примерно 31°С, примерно 32°С, примерно 33°С, примерно 34°С, примерно 35°С, примерно 36°С, примерно 37°С, примерно 38°С, примерно 39°С, примерно 40°С, примерно 41°С, примерно 42°С, примерно 43°С, примерно 44°С, примерно 45°С, примерно 46°С, примерно 47°С, примерно 48°С, примерно 49°С, примерно 50°С, примерно 51°С, примерно 52°С, примерно 53°С, примерно 54°С, примерно 55°С, примерно 56°С, примерно 57°С, примерно 58°С, примерно 59°С, примерно 60°С, примерно 61°С, примерно 62°С, примерно 63°С, примерно 64°С, примерно 65°С, примерно 66°С, примерно 67°С, примерно 68°С, примерно 69°С, примерно 70°С, примерно 71°С, примерно 72°С, примерно 73°С, примерно 74°С, примерно 75°С, примерно 76°С, примерно 77°С, примерно 78°С, примерно 79°С или примерно 80°С.

226. Способ по любому из пп. 204-222, где указанную стадию ультрафильтрации проводят при температуре примерно 50°С.

227. Способ по любому из пп. 158-226, где полученный при ультрафильтрации фильтрат обрабатывают с помощью диафильтрации.

228. Способ по п. 227, где замещающий раствор представляет собой воду.

229. Способ по п. 227, где замещающий раствор представляет собой раствор соли в воде.

230. Способ по п. 229, где соль выбрана из группы, состоящей из хлорида магния, хлорида калия, хлорида натрия и их комбинации.

231. Способ по п. 229, где соль представляет собой хлорид натрия.

232. Способ по п. 229, где замещающий раствор представляет собой хлорид натрия в концентрации примерно 1 мМ, примерно 5 мМ, примерно 10 мМ, примерно 15 мМ, примерно 20 мМ, примерно 25 мМ, примерно 30 мМ, примерно 35 мМ, примерно 40 мМ, примерно 45 мМ, примерно 50 мМ, примерно 55 мМ, примерно 60 мМ, примерно 65 мМ, примерно 70 мМ, примерно 80 мМ, примерно 90 мМ, примерно 100 мМ, примерно 110 мМ, примерно 120 мМ, примерно 130 мМ, примерно 140 мМ, примерно 150 мМ, примерно 160 мМ, примерно 170 мМ, примерно 180 мМ, примерно 190 мМ, примерно 200 мМ, примерно 250 мМ, примерно 300 мМ, примерно 350 мМ, примерно 400 мМ, примерно 450 мМ или примерно 500 мМ.

233. Способ по п. 227, где замещающий раствор представляет собой буферный раствор.

234. Способ по п. 227, где замещающий раствор представляет собой буферный раствор, причем буфер выбран из группы, состоящей из N-(2-ацетамидо)-аминоэтансульфоновой кислоты (ACES), соли уксусной кислоты (ацетата), 1М-(2-ацетамидо)-иминоуксусной кислоты (ADA), 2-аминоэтансульфоновой кислоты (AES, таурина), аммиака, 2-амино-2-метил-1-пропанола (AMP), 2-амино-2-метил-1,3-пропандиола (AMPD), аммедиола, N-(1,1-диметил-2-гидроксиэтил)-3-амино-2-гидроксипропансульфоновой кислоты (AMPSO), N,N-бис-(2-гидроксиэтил)-2-аминоэтансульфоновой кислоты (BES), гидро карбоната натрия (бикарбоната), N,N'-бис-(2-гидроксиэтил)-глицина (бицина), [бис-(2-гидроксиэтил)-имино]-трис-(гидроксиметилметана) (BIS-Tris), 1,3-бис[трис(гидроксиметил)-метиламино]пропана (BIS-Tris-пропана), борной кислоты, диметиларсиновой кислоты (какодилата),3-(циклогексиламино)-пропансульфоновой кислоты (CAPS), 3-(циклогексиламино)-2-гидрокси-1-пропансульфоновой кислоты (CAPSO), карбоната натрия (карбоната), циклогексиламиноэтансульфоновой кислоты (CHES), соли лимонной кислоты (цитрата), 3-[N-бис(гидроксиэтил)амино]-2-гидроксипропансульфоновой кислоты (DIPSO), соль муравьиной кислоты (формиат), глицин, глицилглицин, N-(2-гидроксиэтил)-пиперазин-N'-этансульфоновой кислоты (HEPES), N-(2-гидроксиэтил)-пиперазин-N'-3-пропансульфоновой кислоты (HEPPS, EPPS), N-(2-гидроксиэтил)-пиперазин-N'-2-гидроксипропансульфоновой кислоты (HEPPSO), имидазола, соли яблочной кислоты (малата), соли малеиновой кислоты (малеата), 2-(N-морфолино)-этансульфоновой кислоты (MES), 3-(N-морфолино)-пропансульфоновой кислоты (MOPS), 3-(1N-морфолино)-2-гидроксипропансульфоновой кислоты (MOPSO), соли фосфорной кислоты (фосфата), пиперазин-N,N'-бис(2-этансульфоновой кислоты) (PIPES), пиперазин-N,N'-бис(2-гидроксипропансульфоновой кислоты) (POPSO), пиридина, соли янтарной кислоты (сукцината), 3-{[трис(гидроксиметил)-метил]-амино}-пропансульфоновой кислоты (TAPS), 3-[N-трис(гидроксиметил)-метиламино]-2-гидроксипропансульфоновой кислоты (TAPSO), триэтаноламина (TEA), 2-[трис(гидроксиметил)-метиламино]-этансульфоновой кислоты (TES), N-[трис(гидроксиметил)-метил]-глицина (трицина) и трис(гидроксиметил)-аминометана (Tris).

235. Способ по п. 227, где замещающий раствор представляет собой буферный раствор, причем буфер выбран из группы, состоящей из соли уксусной кислоты (ацетата), соли лимонной кислоты (цитрата), соли муравьиной кислоты (формиата), соли яблочной кислоты (малата), соли малеиновой кислоты (малеата), соли фосфорной кислоты (фосфата) и соли янтарной кислоты (сукцината).

236. Способ по п. 227, где замещающий раствор представляет собой буферный раствор, причем буфер представляет собой соль лимонной кислоты (цитрат).

237. Способ по п. 227, где замещающий раствор представляет собой буферный раствор, причем буфер представляет собой соль янтарной кислоты (сукцинат).

238. Способ по любому из пп. 234-237, где указанная соль представляет собой натриевую соль.

239. Способ по любому из пп. 234-237, где указанная соль представляет собой калиевую соль.

240. Способ по любому из пп. 233-239, где рН буфера для диафильтрации составляет от примерно 4,0 до 11,0, от примерно 5,0 до 10,0, от примерно 5,5 до 9,0, от примерно 6,0 до 8,0, от примерно 6,0 до 7,0, от примерно 6,5 до 7,5, от примерно 6,5 до 7,0 или от примерно 6,0 до 7,5.

241. Способ по любому из пп. 233-239, где рН буфера для диафильтрации составляет примерно 4,0, примерно 4,5, примерно 5,0, примерно 5,5, примерно 6,0, примерно 6,5, примерно 7,0, примерно 7,5, примерно 8,0, примерно 8,5, примерно 9,0, примерно 9,5, примерно 10,0, примерно 10,5 или примерно 11,0.

242. Способ по любому из пп. 233-239, где рН буфера для диафильтрации составляет примерно 6,0, примерно 6,5, примерно 7,0, примерно 7,5, примерно 8,0, примерно 8,5 или примерно 9,0.

243. Способ по любому из пп. 226-231, где рН буфера для диафильтрации составляет примерно 6,5, примерно 7,0 или примерно 7,5.

244. Способ по любому из пп. 233-239, где рН буфера для диафильтрации составляет примерно 7,0.

245. Способ по любому из пп. 233-244, где концентрация буфера для диафильтрации составляет от примерно 0,01 мМ до 100 мМ, от примерно 0,1 мМ до 100 мМ, от примерно 0,5 мМ до 100 мМ, от примерно 1 мМ до 100 мМ, от примерно 2 мМ до 100 мМ, от примерно 3 мМ до 100 мМ, от примерно 4 мМ до 100 мМ, от примерно 5 мМ до 100 мМ, от примерно 6 мМ до 100 мМ, от примерно 7 мМ до 100 мМ, от примерно 8 мМ до 100 мМ, от примерно 9 мМ до 100 мМ, от примерно 10 мМ до 100 мМ, от примерно 11 мМ до 100 мМ, от примерно 12 мМ до 100 мМ, от примерно 13 мМ до 100 мМ, от примерно 14 мМ до 100 мМ, от примерно 15 мМ до 100 мМ, от примерно 16 мМ до 100 мМ, от примерно 17 мМ до 100 мМ, от примерно 18 мМ до 100 мМ, от примерно 19 мМ до 100 мМ, от примерно 20 мМ до 100 мМ, от примерно 25 мМ до 100 мМ, от примерно 30 мМ до 100 мМ, от примерно 35 мМ до 100 мМ, от примерно 40 мМ до 100 мМ, от примерно 45 мМ до 100 мМ, от примерно 50 мМ до 100 мМ, от примерно 55 мМ до 100 мМ, от примерно 60 мМ до 100 мМ, от примерно 65 мМ до 100 мМ, от примерно 70 мМ до 100 мМ, от примерно 75 мМ до 100 мМ, от примерно 80 мМ до 100 мМ, от примерно 85 мМ до 100 мМ, от примерно 90 мМ до 100 мМ или от примерно 95 мМ до 100 мМ.

246. Способ по любому из пп. 233-244, где концентрация буфера для диафильтрации составляет от примерно 0,01 мМ до 50 мМ, от примерно 0,1 мМ до 50 мМ, от примерно 0,5 мМ до 50 мМ, от примерно 1 мМ до 50 мМ, от примерно 2 мМ до 50 мМ, от примерно 3 мМ до 50 мМ, от примерно 4 мМ до 50 мМ, от примерно 5 мМ до 50 мМ, от примерно 6 мМ до 50 мМ, от примерно 7 мМ до 50 мМ, от примерно 8 мМ до 50 мМ, от примерно 9 мМ до 50 мМ, от примерно 10 мМ до 50 мМ, от примерно 11 мМ до 50 мМ, от примерно 12 мМ до 50 мМ, от примерно 13 мМ до 50 мМ, от примерно 14 мМ до 50 мМ, от примерно 15 мМ до 50 мМ, от примерно 16 мМ до 50 мМ, от примерно 17 мМ до 50 мМ, от примерно 18 мМ до 50 мМ, от примерно 19 мМ до 50 мМ, от примерно 20 мМ до 50 мМ, от примерно 25 мМ до 50 мМ, от примерно 30 мМ до 50 мМ, от примерно 35 мМ до 50 мМ, от примерно 40 мМ до 50 мМ или от примерно 45 мМ до 50 мМ.

247. Способ по любому из пп. 233-244, где концентрация буфера для диафильтрации составляет от примерно 0,01 мМ до 25 мМ, от примерно 0,1 мМ до 25 мМ, от примерно 0,5 мМ до 25 мМ, от примерно 1 мМ до 25 мМ, от примерно 2 мМ до 25 мМ, от примерно 3 мМ до 25 мМ, от примерно 4 мМ до 25 мМ, от примерно 5 мМ до 25 мМ, от примерно 6 мМ до 25 мМ, от примерно 7 мМ до 25 мМ, от примерно 8 мМ до 25 мМ, от примерно 9 мМ до 25 мМ, от примерно 10 мМ до 25 мМ, от примерно 11 мМ до 25 мМ, от примерно 12 мМ до 25 мМ, от примерно 13 мМ до 25 мМ, от примерно 14 мМ до 25 мМ, от примерно 15 мМ до 25 мМ, от примерно 16 мМ до 25 мМ, от примерно 17 мМ до 25 мМ, от примерно 18 мМ до 25 мМ, от примерно 19 мМ до 25 мМ или от примерно 20 мМ до 25 мМ.

248. Способ по любому из пп. 233-244, где концентрация буфера для диафильтрации составляет от примерно 0,01 мМ до 15 мМ, от примерно 0,1 мМ до 15 мМ, от примерно 0,5 мМ до 15 мМ, от примерно 1 мМ до 15 мМ, от примерно 2 мМ до 15 мМ, от примерно 3 мМ до 15 мМ, от примерно 4 мМ до 15 мМ, от примерно 5 мМ до 15 мМ, от примерно 6 мМ до 15 мМ, от примерно 7 мМ до 15 мМ, от примерно 8 мМ до 15 мМ, от примерно 9 мМ до 15 мМ, от примерно 10 мМ до 15 мМ, от примерно 11 мМ до 15 мМ, от примерно 12 мМ до 15 мМ, от примерно 13 мМ до 15 мМ или от примерно 14 мМ до 15 мМ.

249. Способ по любому из пп. 233-244, где концентрация буфера для диафильтрации составляет от примерно 0,01 мМ до 10 мМ, от примерно 0,1 мМ до 10 мМ, от примерно 0,5 мМ до 10 мМ, от примерно 1 мМ до 10 мМ, от примерно 2 мМ до 10 мМ, от примерно 3 мМ до 10 мМ, от примерно 4 мМ до 10 мМ, от примерно 5 мМ до 10 мМ, от примерно 6 мМ до 10 мМ, от примерно 7 мМ до 10 мМ, от примерно 8 мМ до 10 мМ или от примерно 9 мМ до 10 мМ.

250. Способ по любому из пп. 233-244, где концентрация буфера для диафильтрации составляет примерно 0,01 мМ, примерно 0,05 мМ, примерно 0,1 мМ, примерно 0,2 мМ, примерно 0,3 мМ, примерно 0,4 мМ, примерно 0,5 мМ, примерно 0,6 мМ, примерно 0,7 мМ, примерно 0,8 мМ, примерно 0,9 мМ, примерно 1 мМ, примерно 2 мМ, примерно 3 мМ, примерно 4 мМ, примерно 5 мМ, примерно 6 мМ, примерно 7 мМ, примерно 8 мМ, примерно 9 мМ, примерно 10 мМ, примерно 11 мМ, примерно 12 мМ, примерно 13 мМ, примерно 14 мМ, примерно 15 мМ, примерно 16 мМ, примерно 17 мМ, примерно 18 мМ, примерно 19 мМ, примерно 20 мМ, примерно 25 мМ, примерно 30 мМ, примерно 35 мМ, примерно 40 мМ, примерно 45 мМ, примерно 50 мМ, примерно 55 м, примерно 60 мМ, примерно 65 мМ, примерно 70 мМ, примерно 75 мМ, примерно 80 мМ, примерно 85 мМ, примерно 90 мМ, примерно 95 мМ или примерно 100 мМ.

251. Способ по любому из пп. 233-244, где концентрация буфера для диафильтрации составляет примерно 0,1 мМ, примерно 0,2 мМ, примерно 1 мМ, примерно 5 мМ, примерно 10 мМ, примерно 15 мМ, примерно 20 мМ, примерно 30 мМ, примерно 40 мМ или примерно 50 мМ.

252. Способ по любому из пп. 233-244, где концентрация буфера для диафильтрации составляет примерно 10 мМ.

253. Способ по любому из пп. 233-252, где замещающий раствор содержит хелатирующий агент.

254. Способ по любому из пп. 233-252, где замещающий раствор содержит хелатирующий агент на основе квасцов.

255. Способ по любому из пп. 233-252, где замещающий раствор содержит хелатирующий агент, выбранный из групп, состоящих из этилендиаминтетраацетата (ЭДТА), N-(2-гидроксиэтил)этилендиамин-N,N',N'-триуксусной кислоты (ЭДТА-ОН), гидроксиэтилендиаминтриуксусной кислоты (HEDTA), этиленгликоль-бис(2-аминоэтиловый эфир)-N,N,N',N'-тетрауксусной кислоты (EGTA), 1,2-циклогександиамин-N,N,N',N'-тетрауксусной кислоты (CyDTA), диэтилентриамин-N,N,N',N'',N''-пентауксусной кислоты (DTPA), 1,3-диаминопропан-2-ол-N,N,N',N'-тетрауксусной кислоты (DPTA-OH), этилендиамин-N,N'-бис(2-гидроксифенилуксусной кислоты) (EDDHA), этилендиамин-N,N'-дипропионовой кислоты дигидрохлорида (EDDP), этилендиамин-тетракис(метиленсульфоновой кислоты) (EDTPO), нитрилотри-(метиленфосфоновой кислоты) (NTPO), иминодиуксусной кислоты (IDA), гидроксииминодиуксусной кислоты (HIDA), нитрилотриуксусной кислоты (NTP), триэтилентетрамингексауксусной кислоты (ТТНА), димеркаптоянтарной кислоты (DMSA), 2,3-димеркапто-1-пропансульфоновой кислоты (DMPS), альфа-липоевой кислоты (ALA), нитрилотриуксусной кислоты (NTA), тиаминтетрагидрофурфурилдисульфида (TTFD), димеркапрола, пеницилламина, дефероксамина (DFOA), деферазирокса, фосфонатов, соли лимонной кислоты (цитрата) и их комбинаций.

256. Способ по любому из пп. 233-255, где замещающий раствор содержит хелатирующий агент, выбранный из групп, состоящих из этилендиаминтетраацетата (ЭДТА), N-(2-гидроксиэтил)этилендиамин-N,N',N'-триуксусной кислоты (ЭДТА-ОН), гидроксиэтилендиаминтриуксусной кислоты (HEDTA), этиленгликоль-бис(2-аминоэтиловый эфир)-N,N,N',N'-тетрауксусной кислоты (EGTA), 1,2-циклогександиамин-N,N,N',N'-тетрауксусной кислоты (CyDTA), диэтилентриамин-N,N,N',N'',N''-пентауксусной кислоты (DTPA), 1,3-диаминопропан-2-оп-N,N,N',N'-тетрауксусной кислоты (DPTA-OH), этилендиамин-N,N'-бис(2-гидроксифенилуксусной кислоты) (EDDHA), соли лимонной кислоты (цитрата) и их комбинаций.

257. Способ по любому из пп. 233-254, где замещающий раствор содержит этилендиаминтетраацетат (ЭДТА) в качестве хелатирующего агента.

258. Способ по любому из пп. 233-254, где замещающий раствор содержит соль лимонной кислоты (цитрат) в качестве хелатирующего агента.

259. Способ по любому из пп. 233-254, где замещающий раствор содержит цитрат натрия в качестве хелатирующего агента.

260. Способ по любому из пп. 253-258, где концентрация хелатирующего агента в замещающем растворе составляет от 1 до 500 мМ.

261. Способ по любому из пп. 253-258, где концентрация хелатирующего агента в замещающем растворе составляет от 2 до 400 мМ.

262. Способ по любому из пп. 253-258, где концентрация хелатирующего агента в замещающем растворе составляет от 10 до 400 мМ.

263. Способ по любому из пп. 253-258, где концентрация хелатирующего агента в замещающем растворе составляет от 10 до 200 мМ.

264. Способ по любому из пп. 253-258, где концентрация хелатирующего агента в замещающем растворе составляет от 10 до 100 мМ.

265. Способ по любому из пп. 253-258, где концентрация хелатирующего агента в замещающем растворе составляет от 10 до 50 мМ.

266. Способ по любому из пп. 253-258, где концентрация хелатирующего агента в замещающем растворе составляет от 10 до 30 мМ.

267. Способ по любому из пп. 253-258, где концентрация хелатирующего агента в замещающем растворе составляет примерно 0,01 мМ, примерно 0,05 мМ, примерно 0,1 мМ, примерно 0,2 мМ, примерно 0,3 мМ, примерно 0,4 мМ, примерно 0,5 мМ, примерно 0,6 мМ, примерно 0,7 мМ, примерно 0,8 мМ, примерно 0,9 мМ, примерно 1 мМ, примерно 2 мМ, примерно 3 мМ, примерно 4 мМ, примерно 5 мМ, примерно 6 мМ, примерно 7 мМ, примерно 8 мМ, примерно 9 мМ, примерно 10 мМ, примерно 11 мМ, примерно 12 мМ, примерно 13 мМ, примерно 14 мМ, примерно 15 мМ, примерно 16 мМ, примерно 17 мМ, примерно 18 мМ, примерно 19 мМ, примерно 20 мМ, примерно 21 мМ, примерно 22 мМ, примерно 23 мМ, примерно 24 мМ, примерно 25 мМ, примерно 26 мМ, примерно 27 мМ, примерно 28 мМ, примерно 29 мМ, примерно 30 мМ, примерно 31 мМ, примерно 32 мМ, примерно 33 мМ, примерно 34 мМ, примерно 35 мМ, примерно 36 мМ, примерно 37 мМ, примерно 38 мМ, примерно 39 мМ, примерно 40 мМ, примерно 45 мМ, примерно 50 мМ, примерно 55 мМ, примерно 60 мМ, примерно 65 мМ, примерно 70 мМ, примерно 75 мМ, примерно 80 мМ, примерно 85 мМ, примерно 90 мМ, примерно 95 или примерно 100 мМ.

268. Способ по любому из пп. 253-258, где концентрация хелатирующего агента в замещающем растворе составляет примерно 5 мМ, примерно 10 мМ, примерно 15 мМ, примерно 20 мМ, примерно 25 мМ, примерно 30 мМ, примерно 35 мМ, примерно 40 мМ, примерно 45 мМ, примерно 50 мМ, примерно 55 мМ, примерно 60 мМ, примерно 65 мМ, примерно 70 мМ, примерно 75 мМ, примерно 80 мМ, примерно 85 мМ, примерно 90 мМ, примерно 95 мМ или примерно 100 мМ.

269. Способ по любому из пп. 253-258, где концентрация хелатирующего агента в замещающем растворе составляет примерно 15 мМ, примерно 20 мМ, примерно 25 мМ, примерно 30 мМ, примерно 35 мМ, примерно 40 мМ, примерно 45 мМ или примерно 50 мМ.

270. Способ по любому из пп. 233-269, где замещающий раствор содержит соль.

271. Способ по п. 270, где указанная соль выбрана из групп, состоящих из хлорида магния, хлорида калия, хлорида натрия и их комбинации.

272. Способ по п. 270, где соль представляет собой хлорид натрия.

273. Способ по любому из пп. 270-272, где замещающий раствор содержит хлорид натрия в концентрации примерно 1, примерно 5, примерно 10, примерно 15, примерно 20, примерно 25, примерно 30, примерно 35, примерно 40, примерно 45, примерно 50, примерно 55, примерно 60, примерно 65, примерно 70, примерно 80, примерно 90, примерно 100, примерно 110, примерно 120, примерно 130, примерно 140, примерно 150, примерно 160, примерно 170, примерно 180, примерно 190, примерно 200, примерно 250 или примерно 300 мМ.

274. Способ по любому из пп. 227-273, где количество объемов диафильтрации составляет по меньшей мере 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45 или 50.

275. Способ по любому из пп. 227-273, где количество объемов диафильтрации составляет примерно 1, примерно 2, примерно 3, примерно 4, примерно 5, примерно 6, примерно 7, примерно 8, примерно 9, примерно 10, примерно 11, примерно 12, примерно 13, примерно 14, примерно 15, примерно 16, примерно 17, примерно 18, примерно 19, примерно 20, примерно 21, примерно 22, примерно 23, примерно 24, примерно 25, примерно 26, примерно 27, примерно 28, примерно 29, примерно 30, примерно 31, примерно 32, примерно 33, примерно 34, примерно 35, примерно 36, примерно 37, примерно 38, примерно 39, примерно 40, примерно 41, примерно 42, примерно 43, примерно 44, примерно 45, примерно 46, примерно 47, примерно 48, примерно 49, примерно 50, примерно 55, примерно 60, примерно 65, примерно 70, примерно 75, примерно 80, примерно 85, примерно 90, примерно 95 или примерно 100.

276. Способ по любому из пп. 227-273, где количество объемов диафильтрации составляет примерно 5, примерно 6, примерно 7, примерно 8, примерно 9, примерно 10, примерно 11, примерно 12, примерно 13, примерно 14 или примерно 15.

277. Способ по любому из пп. 227-276, где указанную стадию диафильтрации проводят при температуре от примерно 20°С до примерно 90°С.

278. Способ по любому из пп. 227-276, где указанную стадию диафильтрации проводят при температуре от примерно 35°С до примерно 80°С, при температуре от примерно 40°С до примерно 70°С, при температуре от примерно 45°С до примерно 65°С, при температуре от примерно 50°С до примерно 60°С, при температуре от примерно 50°С до примерно 55°С, при температуре от примерно 45°С до примерно 55°С или при температуре от примерно 45°С до примерно 55°С.

279. Способ по любому из пп. 227-276, где указанную стадию диафильтрации проводят при температуре примерно 20°С, примерно 21°С, примерно 22°С, примерно 23°С, примерно 24°С, примерно 25°С, примерно 26°С, примерно 27°С, примерно 28°С, примерно 29°С, примерно 30°С, примерно 31°С, примерно 32°С, примерно 33°С, примерно 34°С, примерно 35°С, примерно 36°С, примерно 37°С, примерно 38°С, примерно 39°С, примерно 40°С, примерно 41°С, примерно 42°С, примерно 43°С, примерно 44°С, примерно 45°С, примерно 46°С, примерно 47°С, примерно 48°С, примерно 49°С, примерно 50°С, примерно 51°С, примерно 52°С, примерно 53°С, примерно 54°С, примерно 55°С, примерно 56°С, примерно 57°С, примерно 58°С, примерно 59°С, примерно 60°С, примерно 61°С, примерно 62°С, примерно 63°С, примерно 64°С, примерно 65°С, примерно 66°С, примерно 67°С, примерно 68°С, примерно 69°С, примерно 70°С, примерно 71°С, примерно 72°С, примерно 73°С, примерно 74°С, примерно 75°С, примерно 76°С, примерно 77°С, примерно 78°С, примерно 79°С или примерно 80°С.

280. Способ по любому из пп. 227-276, где указанную стадию диафильтрации проводят при температуре примерно 50°С.

281. Способ по любому из пп. 204-277, где указанные стадии ультрафильтрации и диафильтрации, если они обе проводятся, проводят при температуре от примерно 20°С до примерно 90°С.

282. Способ по любому из пп. 204-277, где указанные стадии ультрафильтрации и диафильтрации, если они обе проводятся, проводят при температуре от примерно 35°С до примерно 80°С, при температуре от примерно 40°С до примерно 70°С, при температуре от примерно 45°С до примерно 65°С, при температуре от примерно 50°С до примерно 60°С, при температуре от примерно 50°С до примерно 55°С, при температуре от примерно 45°С до примерно 55°С или при температуре от примерно 45°С до примерно 55°С.

283. Способ по любому из пп. 204-277, где указанные стадии ультрафильтрации и диафильтрации, если они обе проводятся, проводят при температуре примерно 20°С, примерно 21°С, примерно 22°С, примерно 23°С, примерно 24°С, примерно 25°С, примерно 26°С, примерно 27°С, примерно 28°С, примерно 29°С, примерно 30°С, примерно 31°С, примерно 32°С, примерно 33°С, примерно 34°С, примерно 35°С, примерно 36°С, примерно 37°С, примерно 38°С, примерно 39°С, примерно 40°С, примерно 41°С, примерно 42°С, примерно 43°С, примерно 44°С, примерно 45°С, примерно 46°С, примерно 47°С, примерно 48°С, примерно 49°С, примерно 50°С, примерно 51°С, примерно 52°С, примерно 53°С, примерно 54°С, примерно 55°С, примерно 56°С, примерно 57°С, примерно 58°С, примерно 59°С, примерно 60°С, примерно 61°С, примерно 62°С, примерно 63°С, примерно 64°С, примерно 65°С, примерно 66°С, примерно 67°С, примерно 68°С, примерно 69°С, примерно 70°С, примерно 71°С, примерно 72°С, примерно 73°С, примерно 74°С, примерно 75°С, примерно 76°С, примерно 77°С, примерно 78°С, примерно 79°С или примерно 80°С.

284. Способ по любому из пп. 204-277, где указанные стадии ультрафильтрации и диафильтрации, если они обе проводятся, проводят при температуре примерно 50°С.

285. Способ по любому из пп. 1-284, где содержащий полисахарид раствор (например, супернатант, фильтрат или ретентат) обрабатывают с применением стадии фильтрации с помощью активированного угля.

286. Способ по любому из пп. 285, где активированный уголь добавляют в форме порошка, в виде слоя гранулированного угля, в виде блока прессованного угля или блока экструдированного угля (см., например, активированный уголь Norit).

287. Способ по п. 286, где активированный уголь добавляют в количестве от примерно 0,1 до 20% (масса/объем), от 1 до 15% (масса/объем), от 1 до 10% (масса/объем), от 2 до 10% (масса/объем), от 3 до 10% (масса/объем), от 4 до 10% (масса/объем), от 5 до 10% (масса/объем), от 1 до 5% (масса/объем) или от 2 до 5% (масса/объем).

288. Способ по любому из пп. 286-287, где полученную смесь перемешивают и отстаивают.

289. Способ по любому из пп. 286-287, где полученную смесь перемешивают и отстаивают в течение примерно 5, примерно 10, примерно 15, примерно 20, примерно 30, примерно 45, примерно 60, примерно 90, примерно 120, примерно 180, примерно 240 минут или более.

290. Способ по любому из пп. 286-289, где активированный уголь затем удаляют.

291. Способ по любому из пп. 286-290, где активированный уголь удаляют путем центрифугирования или фильтрования.

292. Способ по п. 285, где раствор фильтруют через активированный уголь, иммобилизованный в матрице.

293. Способ по п. 285, где указанная матрица представляет собой пористую фильтрующую среду, проницаемую для раствора.

294. Способ по любому из пп. 292-293, где указанная матрица содержит материал подложки.

295. Способ по любому из пп. 292-293, где указанная матрица содержит связующее вещество.

296. Способ по любому из пп. 294-295, где указанный материал подложки представляет собой синтетический полимер.

297. Способ по любому из пп. 294-295, где указанный материал подложки представляет собой полимер природного происхождения.

298. Способ по п. 296, где указанные синтетические полимеры включают любой из полистирола, полиакриламида или полиметилметакрилата.

299. Способ по п. 296, где указанные синтетические полимеры выбраны из группы, состоящей из полистирола, полиакриламида и полиметилметакрилата.

300. Способ по п. 297, где указанный полимер природного происхождения включает любой из целлюлозы, полисахарида, декстрана или агарозы.

301. Способ по п. 297, где указанный полимер природного происхождения выбран из группы, состоящей из целлюлозы, полисахарида, декстрана и агарозы.

302. Способ по любому из пп. 294-301, где указанный полимерный материал подложки, если он присутствует, выполнен в форме волоконной сетки для обеспечения механической жесткости.

303. Способ по любому из пп. 294-302, где указанное связующее вещество, если оно присутствует, представляет собой смолу.

304. Способ по любому из пп. 292-303, где указанная матрица имеет форму плоской мембраны.

305. Способ по любому из пп. 292-304, где активированный уголь, иммобилизованный в матрице, имеет форму проточного углеродного картриджа.

306. Способ по любому из пп. 304, где плоская мембрана скручена в спираль.

307. Способ по любому из пп. 292-306, где несколько дисков наложены один на другой.

308. Способ по пп. 307, где конфигурация наложенных один на другой дисков является линзообразной.

309. Способ по любому из пп. 292-308, где активированный уголь в угольном фильтре получают из торфа, лигнита, древесины или скорлупы кокосового ореха.

310. Способ по любому из пп. 292-309, где активированный уголь, иммобилизованный в матрице, помещают в корпус с получением независимого фильтрующего элемента.

311. Способ по любому из пп. 292-310, где фильтры с активированным углем содержат целлюлозную матрицу, в которую включен порошок активированного угля, иммобилизованный смолой.

312. Способ по любому из пп. 285-311, где фильтр с активированным углем имеет номинальный размер пор в диапазоне примерно 0,01-100 мкм, примерно 0,05-100 мкм, примерно 0,1-100 мкм, примерно 0,2-100 мкм, примерно 0,3-100 мкм, примерно 0,4-100 мкм, примерно 0,5-100 мкм, примерно 0,6-100 мкм, примерно 0,7-100 мкм, примерно 0,8-100 мкм, примерно 0,9-100 мкм, примерно 1-100 мкм, примерно 1,25-100 мкм, примерно 1,5-100 мкм, примерно 1,75-100 мкм, примерно 2-100 мкм, примерно 3-100 мкм, примерно 4-100 мкм, примерно 5-100 мкм, примерно 6-100 мкм, примерно 7-100 мкм, примерно 8-100 мкм, примерно 9-100 мкм, примерно 10-100 мкм, примерно 15-100 мкм, примерно 20-100 мкм, примерно 25-100 мкм, примерно 30-100 мкм, примерно 40-100 мкм, примерно 50-100 мкм или примерно 75-100 мкм.

313. Способ по любому из пп. 285-311, где фильтр с активированным углем имеет номинальный размер пор в диапазоне примерно 0,01-50 мкм, примерно 0,05-50 мкм, примерно 0,1-50 мкм, примерно 0,2-50 мкм, примерно 0,3-50 мкм, примерно 0,4-50 мкм, примерно 0,5-50 мкм, примерно 0,6-50 мкм, примерно 0,7-50 мкм, примерно 0,8-50 мкм, примерно 0,9-50 мкм, примерно 1 -50 мкм, примерно 1,25-50 мкм, примерно 1,5-50 мкм, примерно 1,75-50 мкм, примерно 2-50 мкм, примерно 3-50 мкм, примерно 4-50 мкм, примерно 5-50 мкм, примерно 6-50 мкм, примерно 7-50 мкм, примерно 8-50 мкм, примерно 9-50 мкм, примерно 10-50 мкм, примерно 15-50 мкм, примерно 20-50 мкм, примерно 25-50 мкм, примерно 30-50 мкм, примерно 40-50 мкм или примерно 50-50 мкм.

314. Способ по любому из пп. 285-311, где фильтр с активированным углем имеет номинальный размер пор в диапазоне примерно 0,01-25 мкм, примерно 0,05-25 мкм, примерно 0,1-25 мкм, примерно 0,2-25 мкм, примерно 0,3-25 мкм, примерно 0,4-25 мкм, примерно 0,5-25 мкм, примерно 0,6-25 мкм, примерно 0,7-25 мкм, примерно 0,8-25 мкм, примерно 0,9-25 мкм, примерно 1 -25 мкм, примерно 1,25-25 мкм, примерно 1,5-25 мкм, примерно 1,75-25 мкм, примерно 2-25 мкм, примерно 3-25 мкм, примерно 4-25 мкм, примерно 5-25 мкм, примерно 6-25 мкм, примерно 7-25 мкм, примерно 8-25 мкм, примерно 9-25 мкм, примерно 10-25 мкм, примерно 15-25 мкм или примерно 20-25 мкм.

315. Способ по любому из пп. 285-311, где фильтр с активированным углем имеет номинальный размер пор в диапазоне примерно 0,01-10 мкм, примерно 0,05-10 мкм, примерно 0,1-10 мкм, примерно 0,2-10 мкм, примерно 0,3-10 мкм, примерно 0,4-10 мкм, примерно 0,5-10 мкм, примерно 0,6-10 мкм, примерно 0,7-10 мкм, примерно 0,8-10 мкм, примерно 0,9-10 мкм, примерно 1 -10 мкм, примерно 1,25-10 мкм, примерно 1,5-10 мкм, примерно 1,75-10 мкм, примерно 2-10 мкм, примерно 3-10 мкм, примерно 4-10 мкм, примерно 5-10 мкм, примерно 6-10 мкм, примерно 7-10 мкм, примерно 8-10 мкм или примерно 9-10 мкм.

316. Способ по любому из пп. 285-311, где фильтр с активированным углем имеет номинальный размер пор в диапазоне примерно 0,01 -8 мкм, примерно 0,05-8 мкм, примерно 0,1-8 мкм, примерно 0,2-8 мкм, примерно 0,3-8 мкм, примерно 0,4-8 мкм, примерно 0,5-8 мкм, примерно 0,6-8 мкм, примерно 0,7-8 мкм, примерно 0,8-8 мкм, примерно 0,9-8 мкм, примерно 1-8 мкм, примерно 1,25-8 мкм, примерно 1,5-8 мкм, примерно 1,75-8 мкм, примерно 2-8 мкм, примерно 3-8 мкм, примерно 4-8 мкм, примерно 5-8 мкм, примерно 6-8 мкм или примерно 7-8 мкм.

317. Способ по любому из пп. 285-311, где фильтр с активированным углем имеет номинальный размер пор в диапазоне примерно 0,01 -5 мкм, примерно 0,05-5 мкм, примерно 0,1-5 мкм, примерно 0,2-5 мкм, примерно 0,3-5 мкм, примерно 0,4-5 мкм, примерно 0,5-5 мкм, примерно 0,6-5 мкм, примерно 0,7-5 мкм, примерно 0,8-5 мкм, примерно 0,9-5 мкм, примерно 1-5 мкм, примерно 1,25-5 мкм, примерно 1,5-5 мкм, примерно 1,75-5 мкм, примерно 2-5 мкм, примерно 3-5 мкм или примерно 4-5 мкм.

318. Способ по любому из пп. 285-311, где фильтр с активированным углем имеет номинальный размер пор в диапазоне примерно 0,01 -2 мкм, примерно 0,05-2 мкм, примерно 0,1-2 мкм, примерно 0,2-2 мкм, примерно 0,3-2 мкм, примерно 0,4-2 мкм, примерно 0,5-2 мкм, примерно 0,6-2 мкм, примерно 0,7-2 мкм, примерно 0,8-2 мкм, примерно 0,9-2 мкм, примерно 1-2 мкм, примерно 1,25-2 мкм, примерно 1,5-2 мкм, примерно 1,75-2 мкм, примерно 2-2 мкм, примерно 3-2 мкм или примерно 4-2 мкм.

319. Способ по любому из пп. 285-311, где фильтр с активированным углем имеет номинальный размер пор в диапазоне примерно 0,01-1 мкм, примерно 0,05-1 мкм, примерно 0,1-1 мкм, примерно 0,2-1 мкм, примерно 0,3-1 мкм, примерно 0,4-1 мкм, примерно 0,5-1 мкм, примерно 0,6-1 мкм, примерно 0,7-1 мкм, примерно 0,8-1 мкм или примерно 0,9-1 мкм.

320. Способ по любому из пп. 285-311, где фильтр с активированным углем имеет номинальный размер пор в диапазоне примерно 0,05-50 мкм, 0,1-25 мкм 0,2-10 мкм, 0,1-10 мкм, 0,2-5 мкм или 0,25-1 мкм.

321. Способ по любому из пп. 285-320, где фильтрацию с помощью активированного угля проводят со скоростью подачи 1-500 LMH, 10-500 LMH, 15-500 LMH, 20-500 LMH, 25-500 LMH, 30-500 LMH, 40-500 LMH, 50-500 LMH, 100-500 LMH, 125-500 LMH, 150-500 LMH, 200-500 LMH, 250-500 LMH, 300-500 LMH или 400-500 LMH.

322. Способ по любому из пп. 285-320, где фильтрацию с помощью активированного угля проводят со скоростью подачи 1-200 LMH, 10-200 LMH, 15-200 LMH, 20-200 LMH, 25-200 LMH, 30-200 LMH, 40-200 LMH, 50-200 LMH, 100-200 LMH, 125-200 LMH или 150-200 LMH.

323. Способ по любому из пп. 285-320, где фильтрацию с помощью активированного угля проводят со скоростью подачи 1-150 LMH, 10-150 LMH, 15-150 LMH, 20-150 LMH, 25-150 LMH, 30-150 LMH, 40-150 LMH, 50-150 LMH, 100-150 LMH или 125-150 LMH.

324. Способ по любому из пп. 285-320, где фильтрацию с помощью активированного угля проводят со скоростью подачи 1-100 LMH, 10-100 LMH, 15-100 LMH, 20-100 LMH, 25-100 LMH, 30-100 LMH, 40-100 LMH или 50-100 LMH.

325. Способ по любому из пп. 285-320, где фильтрацию с помощью активированного угля проводят со скоростью подачи 1-75 LMH, 5-75 LMH, 10-75 LMH, 15-75 LMH, 20-75 LMH, 25-75 LMH, 30-75 LMH, 35-75 LMH, 40-75 LMH, 45-75 LMH, 50-75 LMH, 55-75 LMH, 60-75 LMH, 65-75 LMH или 70-75 LMH.

326. Способ по любому из пп. 285-320, где фильтрацию с помощью активированного угля проводят со скоростью подачи 1-50 LMH, 5-50 LMH, 7-50 LMH, 10-50 LMH, 15-50 LMH, 20-50 LMH, 25-50 LMH, 30-50 LMH, 35-50 LMH, 40-50 LMH или 45-50 LMH.

327. Способ по любому из пп. 285-320, где фильтрацию с помощью активированного угля проводят со скоростью подачи примерно 1, примерно 2, примерно 5, примерно 10, примерно 15, примерно 20, примерно 25, примерно 30, примерно 35, примерно 40, примерно 45, примерно 50, примерно 55, примерно 60, примерно 65, примерно 70, примерно 75, примерно 80, примерно 85, примерно 90, примерно 95, примерно 100, примерно 110, примерно 120, примерно 130, примерно 140, примерно 150, примерно 160, примерно 170, примерно 180, примерно 190, примерно 200, примерно 225, примерно 250, примерно 300, примерно 350, примерно 400, примерно 450, примерно 500, примерно 550, примерно 600, примерно 700, примерно 800, примерно 900, примерно 950 или примерно 1000 LMH.

328. Способ по любому из пп. 285-327, где раствор обрабатывают с применением фильтра с активированным углем, причем указанный фильтр имеет производительность в диапазоне 5-1000 л/м², 10-750 л/м², 15-500 л/м², 20-400 л/м², 25-300 л/м², 30-250 л/м², 40-200 л/м² или 30-100 л/м².

329. Способ по любому из пп. 285-327, где раствор обрабатывают с применением фильтра с активированным углем, причем указанный фильтр имеет производительность, составляющую примерно 5, примерно 10, примерно 15, примерно 20, примерно 25, примерно 30, примерно 35, примерно 40, примерно 45, примерно 50, примерно 55, примерно 60, примерно 65, примерно 70, примерно 75, примерно 80, примерно 85, примерно 90, примерно 100, примерно 125, примерно 150, примерно 175, примерно 200, примерно 225, примерно 250, примерно 275, примерно 300, примерно 400, примерно 500, примерно 600, примерно 700, примерно 800, примерно 900 или примерно 1000 л/м².

330. Способ по любому из пп. 285-329, где осуществляют 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 стадий фильтрации с помощью активированного угля.

331. Способ по любому из пп. 285-329, где осуществляют 1, 2 или 3 стадии фильтрации с помощью активированного угля.

332. Способ по любому из пп. 285-329, где осуществляют 1 или 2 стадии фильтрации с помощью активированного угля.

333. Способ по любому из пп. 285-332, где раствор последовательно обрабатывают с применением фильтров с активированным углем.

334. Способ по любому из пп. 285-332, где раствор последовательно обрабатывают с применением 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 фильтров с активированным углем.

335. Способ по любому из пп. 285-332, где раствор последовательно обрабатывают с применением 2, 3, 4 или 5 фильтров с активированным углем.

336. Способ по любому из пп. 285-332, где раствор последовательно обрабатывают с применением 2 фильтров с активированным углем.

337. Способ по любому из пп. 285-332, где раствор последовательно обрабатывают с применением 3 фильтров с активированным углем.

338. Способ по любому из пп. 285-332, где раствор последовательно обрабатывают с применением 4 фильтров с активированным углем.

339. Способ по любому из пп. 285-332, где раствор последовательно обрабатывают с применением 5 фильтров с активированным углем.

340. Способ по любому из пп. 285-339, где стадию фильтрации с помощью активированного угля проводят в однопроходном режиме.

341. Способ по любому из пп. 285-339, где стадию фильтрации с помощью активированного угля проводят в режиме рециркуляции.

342. Способ по п. 341, где осуществляют 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49 или 50 циклов фильтрации с помощью активированного угля.

343. Способ по п. 341, где выполняют 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 циклов фильтрации с помощью активированного угля.

344. Способ по п. 341, где выполняют 2 или 3 цикла фильтрации с помощью активированного угля.

345. Способ по п. 341, где выполняют 2 цикла фильтрации с помощью активированного угля.

346. Способ по любому из пп. 285-345, где фильтрат дополнительно фильтруют.

347. Способ по любому из пп. 285-345, где фильтрат подвергают микрофильтрации.

348. Способ по п. 347, где указанная микрофильтрация представляет собой тупиковую фильтрацию (перпендикулярную фильтрацию).

349. Способ по п. 347, где указанная микрофильтрация представляет собой тангенциальную микрофильтрацию.

350. Способ по любому из пп. 347-349, где указанный фильтр для микрофильтрации имеет номинальный диапазон удерживания, составляющий примерно 0,01-2 мкм, примерно 0,05-2 мкм, примерно 0,1-2 мкм, примерно 0,2-2 мкм, примерно 0,3-2 мкм, примерно 0,4-2 мкм, примерно 0,45-2 мкм, примерно 0,5-2 мкм, примерно 0,6-2 мкм, примерно 0,7-2 мкм, примерно 0,8-2 мкм, примерно 0,9-2 мкм, примерно 1-2 мкм, примерно 1,25-2 мкм, примерно 1,5-2 мкм или примерно 1,75-2 мкм.

351. Способ по любому из пп. 347-349, где указанный фильтр для микрофильтрации имеет номинальный диапазон удерживания, составляющий примерно 0,01-1 мкм, примерно 0,05-1 мкм, примерно 0,1-1 мкм, примерно 0,2-1 мкм, примерно 0,3-1 мкм, примерно 0,4-1 мкм, примерно 0,45-1 мкм, примерно 0,5-1 мкм, примерно 0,6-1 мкм, примерно 0,7-1 мкм, примерно 0,8-1 мкм или примерно 0,9-1 мкм.

352. Способ по любому из пп. 347-349, где указанный фильтр для микрофильтрации имеет номинальный диапазон удерживания, составляющий примерно 0,01, примерно 0,05, примерно 0,1, примерно 0,2, примерно 0,3, примерно 0,4, примерно 0,45, примерно 0,5, примерно 0,6, примерно 0,7, примерно 0,8, примерно 0,9, примерно 1,0, примерно 1,1, примерно 1,2, примерно 1,3, примерно 1,4, примерно 1,5, примерно 1,6, примерно 1,7, примерно 1,8, примерно 1,9 или примерно 2,0 мкм.

353. Способ по любому из пп. 343-345, где указанный фильтр для микрофильтрации имеет номинальный диапазон удерживания, составляющий примерно 0,2 мкм.

354. Способ по любому из пп. 347-353, где производительность указанного фильтра для микрофильтрации составляет 100-6000 л/м², 200-6000 л/м², 300-6000 л/м², 400-6000 л/м², 500-6000 л/м², 750-6000 л/м², 1000-6000 л/м², 1500-6000 л/м², 2000-6000 л/м², 3000-6000 л/м² или 4000-6000 л/м².

355. Способ по любому из пп. 347-353, где производительность указанного фильтра для микрофильтрации составляет 100-4000 л/м², 200-4000 л/м², 300-4000 л/м², 400-4000 л/м², 500-4000 л/м², 750-4000 л/м², 1000-4000 л/м², 1500-4000 л/м², 2000-4000 л/м², 2500-4000 л/м², 3000-4000 л/м², 3000-4000 л/м² или 3500-4000 л/м².

356. Способ по любому из пп. 347-353, где производительность указанного фильтра для микрофильтрации составляет 100-3750 л/м², 200-3750 л/м², 300-3750 л/м², 400-3750 л/м², 500-3750 л/м², 750-3750 л/м², 1000-3750 л/м², 1500-3750 л/м², 2000-3750 л/м², 2500-3750 л/м², 3000-3750 л/м², 3000-3750 л/м² или 3500-3750 л/м².

357. Способ по любому из пп. 347-353, где производительность указанного фильтра для микрофильтрации составляет 100-1250 л/м², 200-1250 л/м², 300-1250 л/м², 400-1250 л/м², 500-1250 л/м², 750-1250 л/м² или 1000-1250 л/м².

358. Способ по любому из пп. 347-353, где производительность указанного фильтра для микрофильтрации составляет примерно 100, примерно 200, примерно 300, примерно 400, примерно 550, примерно 600, примерно 700, примерно 800, примерно 900, примерно 1000, примерно 1100, примерно 1200, примерно 1300, примерно 1400, примерно 1500, примерно 1600, примерно 1700, примерно 1800, примерно 1900, примерно 2000, примерно 2100, примерно 2200, примерно 2300, примерно 2400, примерно 2500, примерно 2600, примерно 2700, примерно 2800, примерно 2900, примерно 3000, примерно 3100, примерно 3200, примерно 3300, примерно 3400, примерно 3500, примерно 3600, примерно 3700, примерно 3800, примерно 3900, примерно 4000, примерно 4100, примерно 4200, примерно 4300, примерно 4400, примерно 4500, примерно 4600, примерно 4700, примерно 4800, примерно 4900, примерно 5000, примерно 5250, примерно 5500, примерно 5750 или примерно 6000 л/² м.

359. Способ по любому из пп. 285-359, где фильтрат дополнительно осветляют с помощью ультрафильтрации и/или диафильтрации.

360. Способ по любому из пп. 285-359, где фильтрат дополнительно осветляют с помощью ультрафильтрации.

361. Способы по п. 359 или п. 360, отличающиеся тем, что указанная мембрана для ультрафильтрации имеет порог отсечения по молекулярной массе в диапазоне от примерно 5 кДа до 1000 кДа.

362. Способы по п. 359 или п. 360, отличающиеся тем, что указанная мембрана для ультрафильтрации имеет порог отсечения по молекулярной массе в диапазоне от примерно 10 кДа до 750 кДа.

363. Способы по п. 359 или п. 360, отличающиеся тем, что указанная мембрана для ультрафильтрации имеет порог отсечения по молекулярной массе в диапазоне примерно от 10 кДа до 500 кДа.

364. Способы по п. 359 или п. 360, отличающиеся тем, что указанная мембрана для ультрафильтрации имеет порог отсечения по молекулярной массе в диапазоне от примерно 10 кДа до 300 кДа.

365. Способы по п. 359 или п. 360, отличающиеся тем, что указанная мембрана для ультрафильтрации имеет порог отсечения по молекулярной массе в диапазоне от примерно 10 кДа до 100 кДа.

366. Способы по п. 359 или п. 360, отличающиеся тем, что указанная мембрана для ультрафильтрации имеет порог отсечения по молекулярной массе в диапазоне от примерно 10 кДа до 50 кДа.

367. Способы по п. 359 или п. 360, отличающиеся тем, что указанная мембрана для ультрафильтрации имеет порог отсечения по молекулярной массе в диапазоне от примерно 10 кДа до 30 кДа.

368. Способы по п. 359 или п. 360, отличающиеся тем, что указанная мембрана для ультрафильтрации имеет порог отсечения по молекулярной массе в диапазоне от примерно 5 кДа до 1000 кДа, от примерно 10 кДа до 1000 кДа, от примерно 20 кДа до 1000 кДа, от примерно 30 кДа до 1000 кДа, от примерно 40 кДа до 1000 кДа, от примерно 50 кДа до 1000 кДа, от примерно 75 кДа до 1000 кДа, от примерно 100 кДа до 1000 кДа, от примерно 150 кДа до 1000 кДа, от примерно 200 кДа до 1000 кДа, от примерно 300 кДа до 1000 кДа, от примерно 400 кДа до 1000 кДа, от примерно 500 кДа до 1000 кДа или от примерно 750 кДа до 1000 кДа.

369. Способы по п. 359 или п. 360, отличающиеся тем, что указанная мембрана для ультрафильтрации имеет порог отсечения по молекулярной массе в диапазоне от примерно 5 кДа до 500 кДа, от примерно 10 кДа до 500 кДа, от примерно 20 кДа до 500 кДа, от примерно 30 кДа до 500 кДа, от примерно 40 кДа до 500 кДа, от примерно 50 кДа до 500 кДа, от примерно 75 кДа до 500 кДа, от примерно 100 кДа до 500 кДа, от примерно 150 кДа до 500 кДа, от примерно 200 кДа до 500 кДа, от примерно 300 кДа до 500 кДа или от примерно 400 кДа до 500 кДа.

370. Способы по п. 359 или п. 360, отличающиеся тем, что указанная мембрана для ультрафильтрации имеет порог отсечения по молекулярной массе в диапазоне от примерно 5 кДа до 300 кДа, от примерно 10 кДа до 300 кДа, от примерно 20 кДа до 300 кДа, от примерно 30 кДа до 300 кДа, от примерно 40 кДа до 300 кДа, от примерно 50 кДа до 300 кДа, от примерно 75 кДа до 300 кДа, от примерно 100 кДа до 300 кДа, от примерно 150 кДа до 300 кДа или от примерно 200 кДа до 300 кДа.

371. Способы по п. 359 или п. 360, отличающиеся тем, что указанная мембрана для ультрафильтрации имеет порог отсечения по молекулярной массе в диапазоне от примерно 5 кДа до 100 кДа, от примерно 10 кДа до 100 кДа, от примерно 20 кДа до 100 кДа, от примерно 30 кДа до 100 кДа, от примерно 40 кДа до 100 кДа, от примерно 50 кДа до 100 кДа или от примерно 75 кДа до 100 кДа.

372. Способы по п. 359 или п. 360, отличающиеся тем, что указанная мембрана для ультрафильтрации имеет порог отсечения по молекулярной массе, составляющий примерно 5 кДа, примерно 10 кДа, примерно 20 кДа, примерно 30 кДа, примерно 40 кДа, примерно 50 кДа, примерно 60 кДа, примерно 70 кДа, примерно 80 кДа, примерно 90 кДа, примерно 100 кДа, примерно 110 кДа, примерно 120 кДа, примерно 130 кДа, примерно 140 кДа, примерно 150 кДа, примерно 200 кДа, примерно 250 кДа, примерно 300 кДа, примерно 400 кДа, примерно 500 кДа, примерно 750 кДа или примерно 1000 кДа.

373. Способы по любому из пп. 359-371, отличающиеся тем, что коэффициент концентрирования на указанной стадии ультрафильтрации составляет от примерно 1,5 до примерно 10,0.

374. Способы по любому из пп. 359-371, отличающиеся тем, что коэффициент концентрирования на указанной стадии ультрафильтрации составляет от примерно 2,0 до примерно 8,0.

375. Способы по любому из пп. 359-371, отличающиеся тем, что коэффициент концентрирования на указанной стадии ультрафильтрации составляет от примерно 2,0 до примерно 5,0.

376. Способы по любому из пп. 359-371, отличающиеся тем, что коэффициент концентрирования на указанной стадии ультрафильтрации составляет примерно 1,5, примерно 2,0, примерно 2,5, примерно 3,0, примерно 3,5, примерно 4,0, примерно 4,5, примерно 5,0, примерно 5,5, примерно 6,0, примерно 6,5, примерно 7,0, примерно 7,5, примерно 8,0, примерно 8,5, примерно 9,0, примерно 9,5 или примерно 10,0. В одном из вариантов реализации коэффициент концентрирования составляет примерно 2,0, примерно 3,0, примерно 4,0, примерно 5,0 или примерно 6,0.

377. Способ по любому из пп. 359-376, где указанную стадию ультрафильтрации проводят при температуре от примерно 20°С до примерно 90°С.

378. Способ по любому из пп. 359-376, где указанную стадию ультрафильтрации проводят при температуре от примерно 35°С до примерно 80°С, при температуре от примерно 40°С до примерно 70°С, при температуре от примерно 45°С до примерно 65°С, при температуре от примерно 50°С до примерно 60°С, при температуре от примерно 50°С до примерно 55°С, при температуре от примерно 45°С до примерно 55°С или при температуре от примерно 45°С до примерно 55°С.

379. Способ по любому из пп. 359-376, где указанную стадию ультрафильтрации проводят при температуре примерно 20°С, примерно 21°С, примерно 22°С, примерно 23°С, примерно 24°С, примерно 25°С, примерно 26°С, примерно 27°С, примерно 28°С, примерно 29°С, примерно 30°С, примерно 31°С, примерно 32°С, примерно 33°С, примерно 34°С, примерно 35°С, примерно 36°С, примерно 37°С, примерно 38°С, примерно 39°С, примерно 40°С, примерно 41°С, примерно 42°С, примерно 43°С, примерно 44°С, примерно 45°С, примерно 46°С, примерно 47°С, примерно 48°С, примерно 49°С, примерно 50°С, примерно 51°С, примерно 52°С, примерно 53°С, примерно 54°С, примерно 55°С, примерно 56°С, примерно 57°С, примерно 58°С, примерно 59°С, примерно 60°С, примерно 61°С, примерно 62°С, примерно 63°С, примерно 64°С, примерно 65°С, примерно 66°С, примерно 67°С, примерно 68°С, примерно 69°С, примерно 70°С, примерно 71°С, примерно 72°С, примерно 73°С, примерно 74°С, примерно 75°С, примерно 76°С, примерно 77°С, примерно 78°С, примерно 79°С или примерно 80°С.

380. Способ по любому из пп. 359-376, где указанную стадию ультрафильтрации проводят при температуре примерно 50°С.

381. Способ по любому из пп. 359-380, где полученный при ультрафильтрации фильтрат обрабатывают с помощью диафильтрации.

382. Способ по пп. 381, где замещающий раствор представляет собой воду.

383. Способ по п. 381, где замещающий раствор представляет собой раствор соли в воде.

384. Способ по п. 383, где соль выбрана из группы, состоящей из хлорида магния, хлорида калия, хлорида натрия и их комбинации.

385. Способ по пп. 383, где соль представляет собой хлорид натрия.

386. Способ по пп. 383, где замещающий раствор представляет собой хлорид натрия в концентрации примерно 1 мМ, примерно 5 мМ, примерно 10 мМ, примерно 15 мМ, примерно 20 мМ, примерно 25 мМ, примерно 30 мМ, примерно 35 мМ, примерно 40 мМ, примерно 45 мМ, примерно 50 мМ, примерно 55 мМ, примерно 60 мМ, примерно 65 мМ, примерно 70 мМ, примерно 80 мМ, примерно 90 мМ, примерно 100 мМ, примерно 110 мМ, примерно 120 мМ, примерно 130 мМ, примерно 140 мМ, примерно 150 мМ, примерно 160 мМ, примерно 170 мМ, примерно 180 мМ, примерно 190 мМ, примерно 200 мМ, примерно 250 мМ, примерно 300 мМ, примерно 350 мМ, примерно 400 мМ, примерно 450 мМ или примерно 500 мМ.

387. Способ по п. 381, где замещающий раствор представляет собой буферный раствор.

388. Способ по п. 381, где замещающий раствор представляет собой буферный раствор, причем буфер выбран из группы, состоящей из N-(2-ацетамидо)-аминоэтансульфоновой кислоты (ACES), соли уксусной кислоты (ацетата), N-(2-ацетамидо)-иминоуксусной кислоты (ADA), 2-аминоэтансульфоновой кислоты (AES, таурина), аммиака, 2-амино-2-метил-1-пропанола (AMP), 2-амино-2-метил-1,3-пропандиола (AMPD), аммедиола, N-(1,1-диметил-2-гидроксиэтил)-3-амино-2-гидроксипропансульфоновой кислоты (AMPSO), N,N-бис-(2-гидроксиэтил)-2-аминоэтансульфоновой кислоты (BES), гидрокарбоната натрия (бикарбоната), N,N'-бис-(2-гидроксиэтил)-глицина (бицина), [бис-(2-гидроксиэтил)-имино]-трис-(гидроксиметилметана) (BIS-Tris), 1,3-бис[трис(гидроксиметил)-метиламино]пропана (BIS-Tris-пропана), борной кислоты, диметиларсиновой кислоты (какодилата),3-(циклогексиламино)-пропансульфоновой кислоты (CAPS), 3-(циклогексиламино)-2-гидрокси-1-пропансульфоновой кислоты (CAPSO), карбоната натрия (карбоната),циклогексиламиноэтансульфоновой кислоты (CHES), соли лимонной кислоты (цитрата), 3-[N-бис(гидроксиэтил)амино]-2-гидроксипропансульфоновой кислоты (DIPSO), соль муравьиной кислоты (формиат), глицин, глицилглицин, N-(2-гидроксиэтил)-пиперазин-N'-этансульфоновой кислоты (HEPES), N-(2-гидроксиэтил)-пиперазин-N'-3-пропансульфоновой кислоты (HEPPS, EPPS), N-(2-гидроксиэтил)-пиперазин-N'-2-гидроксипропансульфоновой кислоты (HEPPSO), имидазола, соли яблочной кислоты (малата), соли малеиновой кислоты (малеата), 2-(N-морфолино)-этансульфоновой кислоты (MES), 3-(N-морфолино)-пропансульфоновой кислоты (MOPS), 3-(N-морфолино)-2-гидроксипропансульфоновой кислоты (MOPSO), соли фосфорной кислоты (фосфата), пиперазин-N,N'-бис(2-этансульфоновой кислоты) (PIPES), пиперазин-N,N'-бис(2-гидроксипропансульфоновой кислоты) (POPSO), пиридина, соли янтарной кислоты (сукцината), 3-{[трис(гидроксиметил)-метил]-амино}-пропансульфоновой кислоты (TAPS), 3-[N-трис(гидроксиметил)-метиламино]-2-гидроксипропансульфоновой кислоты (TAPSO), триэтаноламина (TEA), 2-[трис(гидроксиметил)-метиламино]-этансульфоновой кислоты (TES), N-[трис(гидроксиметил)-метил]-глицина (трицина) и трис(гидроксиметил)-аминометана (Tris).

389. Способ по п. 381, где замещающий раствор представляет собой буферный раствор, причем буфер выбран из группы, состоящей из соли уксусной кислоты (ацетата), соли лимонной кислоты (цитрата), соли муравьиной кислоты (формиата), соли яблочной кислоты (малата), соли малеиновой кислоты (малеата), соли фосфорной кислоты (фосфата) и соли янтарной кислоты (сукцината).

390. Способ по п. 381, где замещающий раствор представляет собой буферный раствор, причем буфер представляет собой соль лимонной кислоты (цитрат).

391. Способ по п. 381, где замещающий раствор представляет собой буферный раствор, причем буфер представляет собой соль янтарной кислоты (сукцинат).

392. Способ по п. 381, где замещающий раствор представляет собой буферный раствор, причем буфер представляет собой соль фосфорной кислоты (фосфат).

393. Способ по любому из пп. 388-392, где указанная соль представляет собой натриевую соль.

394. Способ по любому из пп. 388-392, где указанная соль представляет собой калиевую соль.

395. Способ по п. 381, где замещающий раствор представляет собой буферный раствор, причем буфер представляет собой фосфат калия.

396. Способ по любому из пп. 381-395, где рН буфера для диафильтрации составляет от примерно 4,0 до 11,0, от примерно 5,0 до 10,0, от примерно 5,5 до 9,0, от примерно 6,0 до 8,0, от примерно 6,0 до 7,0, от примерно 6,5 до 7,5, от примерно 6,5 до 7,0 или от примерно 6,0 до 7,5.

397. Способ по п. 381-395, где рН буфера для диафильтрации составляет примерно 4,0, примерно 4,5, примерно 5,0, примерно 5,5, примерно 6,0, примерно 6,5, примерно 7,0, примерно 7,5, примерно 8,0, примерно 8,5, примерно 9,0, примерно 9,5, примерно 10,0, примерно 10,5 или примерно 11,0.

398. Способ по любому из пп. 381-395, где рН буфера для диафильтрации составляет примерно 6,0, примерно 6,5, примерно 7,0, примерно 7,5, примерно 8,0, примерно 8,5 или примерно 9,0.

399. Способ по любому из пп. 381-395, где рН буфера для диафильтрации составляет примерно 6,5, примерно 7,0 или примерно 7,5.

400. Способ по любому из пп. 381-395, где рН буфера для диафильтрации составляет примерно 6,0.

401. Способ по любому из пп. 381-395, где рН буфера для диафильтрации составляет примерно 6,5.

402. Способ по любому из пп. 381-395, где рН буфера для диафильтрации составляет примерно 7,0.

403. Способ по любому из пп. 387-402, где концентрация буфера для диафильтрации составляет от примерно 0,01 мМ до 100 мМ, от примерно 0,1 мМ до 100 мМ, от примерно 0,5 мМ до 100 мМ, от примерно 1 мМ до 100 мМ, от примерно 2 мМ до 100 мМ, от примерно 3 мМ до 100 мМ, от примерно 4 мМ до 100 мМ, от примерно 5 мМ до 100 мМ, от примерно 6 мМ до 100 мМ, от примерно 7 мМ до 100 мМ, от примерно 8 мМ до 100 мМ, от примерно 9 мМ до 100 мМ, от примерно 10 мМ до 100 мМ, от примерно 11 мМ до 100 мМ, от примерно 12 мМ до 100 мМ, от примерно 13 мМ до 100 мМ, от примерно 14 мМ до 100 мМ, от примерно 15 мМ до 100 мМ, от примерно 16 мМ до 100 мМ, от примерно 17 мМ до 100 мМ, от примерно 18 мМ до 100 мМ, от примерно 19 мМ до 100 мМ, от примерно 20 мМ до 100 мМ, от примерно 25 мМ до 100 мМ, от примерно 30 мМ до 100 мМ, от примерно 35 мМ до 100 мМ, от примерно 40 мМ до 100 мМ, от примерно 45 мМ до 100 мМ, от примерно 50 мМ до 100 мМ, от примерно 55 мМ до 100 мМ, от примерно 60 мМ до 100 мМ, от примерно 65 мМ до 100 мМ, от примерно 70 мМ до 100 мМ, от примерно 75 мМ до 100 мМ, от примерно 80 мМ до 100 мМ, от примерно 85 мМ до 100 мМ, от примерно 90 мМ до 100 мМ или от примерно 95 мМ до 100 мМ.

404. Способ по любому из пп. 387-402, где концентрация буфера для диафильтрации составляет от примерно 0,01 мМ до 50 мМ, от примерно 0,1 мМ до 50 мМ, от примерно 0,5 мМ до 50 мМ, от примерно 1 мМ до 50 мМ, от примерно 2 мМ до 50 мМ, от примерно 3 мМ до 50 мМ, от примерно 4 мМ до 50 мМ, от примерно 5 мМ до 50 мМ, от примерно 6 мМ до 50 мМ, от примерно 7 мМ до 50 мМ, от примерно 8 мМ до 50 мМ, от примерно 9 мМ до 50 мМ, от примерно 10 мМ до 50 мМ, от примерно 11 мМ до 50 мМ, от примерно 12 мМ до 50 мМ, от примерно 13 мМ до 50 мМ, от примерно 14 мМ до 50 мМ, от примерно 15 мМ до 50 мМ, от примерно 16 мМ до 50 мМ, от примерно 17 мМ до 50 мМ, от примерно 18 мМ до 50 мМ, от примерно 19 мМ до 50 мМ, от примерно 20 мМ до 50 мМ, от примерно 25 мМ до 50 мМ, от примерно 30 мМ до 50 мМ, от примерно 35 мМ до 50 мМ, от примерно 40 мМ до 50 мМ или от примерно 45 мМ до 50 мМ.

405. Способ по любому из пп. 387-402, где концентрация буфера для диафильтрации составляет от примерно 0,01 мМ до 25 мМ, от примерно 0,1 мМ до 25 мМ, от примерно 0,5 мМ до 25 мМ, от примерно 1 мМ до 25 мМ, от примерно 2 мМ до 25 мМ, от примерно 3 мМ до 25 мМ, от примерно 4 мМ до 25 мМ, от примерно 5 мМ до 25 мМ, от примерно 6 мМ до 25 мМ, от примерно 7 мМ до 25 мМ, от примерно 8 мМ до 25 мМ, от примерно 9 мМ до 25 мМ, от примерно 10 мМ до 25 мМ, от примерно 11 мМ до 25 мМ, от примерно 12 мМ до 25 мМ, от примерно 13 мМ до 25 мМ, от примерно 14 мМ до 25 мМ, от примерно 15 мМ до 25 мМ, от примерно 16 мМ до 25 мМ, от примерно 17 мМ до 25 мМ, от примерно 18 мМ до 25 мМ, от примерно 19 мМ до 25 мМ или от примерно 20 мМ до 25 мМ.

406. Способ по любому из пп. 387-402, где концентрация буфера для диафильтрации составляет от примерно 0,01 мМ до 15 мМ, от примерно 0,1 мМ до 15 мМ, от примерно 0,5 мМ до 15 мМ, от примерно 1 мМ до 15 мМ, от примерно 2 мМ до 15 мМ, от примерно 3 мМ до 15 мМ, от примерно 4 мМ до 15 мМ, от примерно 5 мМ до 15 мМ, от примерно 6 мМ до 15 мМ, от примерно 7 мМ до 15 мМ, от примерно 8 мМ до 15 мМ, от примерно 9 мМ до 15 мМ, от примерно 10 мМ до 15 мМ, от примерно 11 мМ до 15 мМ, от примерно 12 мМ до 15 мМ, от примерно 13 мМ до 15 мМ или от примерно 14 мМ до 15 мМ.

407. Способ по любому из пп. 387-402, где концентрация буфера для диафильтрации составляет от примерно 0,01 мМ до 10 мМ, от примерно 0,1 мМ до 10 мМ, от примерно 0,5 мМ до 10 мМ, от примерно 1 мМ до 10 мМ, от примерно 2 мМ до 10 мМ, от примерно 3 мМ до 10 мМ, от примерно 4 мМ до 10 мМ, от примерно 5 мМ до 10 мМ, от примерно 6 мМ до 10 мМ, от примерно 7 мМ до 10 мМ, от примерно 8 мМ до 10 мМ или от примерно 9 мМ до 10 мМ.

408. Способ по любому из пп. 387-402, где концентрация буфера для диафильтрации составляет примерно 0,01 мМ, примерно 0,05 мМ, примерно 0,1 мМ, примерно 0,2 мМ, примерно 0,3 мМ, примерно 0,4 мМ, примерно 0,5 мМ, примерно 0,6 мМ, примерно 0,7 мМ, примерно 0,8 мМ, примерно 0,9 мМ, примерно 1 мМ, примерно 2 мМ, примерно 3 мМ, примерно 4 мМ, примерно 5 мМ, примерно 6 мМ, примерно 7 мМ, примерно 8 мМ, примерно 9 мМ, примерно 10 мМ, примерно 11 мМ, примерно 12 мМ, примерно 13 мМ, примерно 14 мМ, примерно 15 мМ, примерно 16 мМ, примерно 17 мМ, примерно 18 мМ, примерно 19 мМ, примерно 20 мМ, примерно 25 мМ, примерно 30 мМ, примерно 35 мМ, примерно 40 мМ, примерно 45 мМ, примерно 50 мМ, примерно 55 м, примерно 60 мМ, примерно 65 мМ, примерно 70 мМ, примерно 75 мМ, примерно 80 мМ, примерно 85 мМ, примерно 90 мМ, примерно 95 мМ или примерно 100 мМ.

409. Способ по любому из пп. 387-402, где концентрация буфера для диафильтрации составляет примерно 0,1 мМ, примерно 0,2 мМ, примерно 1 мМ, примерно 5 мМ, примерно 10 мМ, примерно 15 мМ, примерно 20 мМ, примерно 30 мМ, примерно 40 мМ или примерно 50 мМ.

410. Способ по любому из пп. 387-402, где концентрация буфера для диафильтрации составляет примерно 30 мМ.

411. Способ по любому из пп. 387-402, где концентрация буфера для диафильтрации составляет примерно 25 мМ.

412. Способ по любому из пп. 387-402, где концентрация буфера для диафильтрации составляет примерно 20 мМ.

413. Способ по любому из пп. 387-402, где концентрация буфера для диафильтрации составляет примерно 15 мМ.

414. Способ по любому из пп. 387-402, где концентрация буфера для диафильтрации составляет примерно 10 мМ.

415. Способ по любому из пп. 381-414, где замещающий раствор содержит хелатирующий агент.

416. Способ по любому из пп. 381-414, где замещающий раствор содержит хелатирующий агент на основе квасцов.

417. Способ по любому из пп. 381-414, где замещающий раствор содержит хелатирующий агент, выбранный из групп, состоящих из этилендиаминтетраацетата (ЭДТА), N-(2-гидроксизтил)зтилендиамин-N,N',N'-триуксусной кислоты (ЭДТА-ОН), гидроксиэтилендиаминтриуксусной кислоты (HEDTA), этиленгликоль-бис(2-аминоэтиловый эфир)-N,N,N',N'-тетрауксусной кислоты (EGTA), 1,2-циклогександиамин-N,N,N',N'-тетрауксусной кислоты (CyDTA), диэтилентриамин-N,N,N',N'',N''-пентауксусной кислоты (DTPA), 1,3-диаминопропан-2-ол-N,N,N',N'-тетрауксусной кислоты (DPTA-OH), этилендиамин-N,N',-бис(2-гидроксифенилуксусной кислоты) (EDDHA), этилендиамин-М,1\Г-дипропионовой кислоты дигидрохлорида (EDDP), этилендиамин-тетракис(метиленсульфоновой кислоты) (EDTPO), нитрилотри-(метиленфосфоновой кислоты) (NTPO), иминодиуксусной кислоты (IDA), гидроксииминодиуксусной кислоты (HIDA), нитрилотриуксусной кислоты (NTP), триэтилентетрамингексауксусной кислоты (ТТНА), димеркаптоянтарной кислоты (DMSA), 2,3-димеркапто-1-пропансульфоновой кислоты (DMPS), альфа-липоевой кислоты (ALA), нитрилотриуксусной кислоты (NTA), тиаминтетрагидрофурфурилдисульфида (TTFD), димеркапрола, пеницилламина, дефероксамина (DFOA), деферазирокса, фосфонатов, соли лимонной кислоты (цитрата) и их комбинаций.

418. Способ по любому из пп. 381-414, где замещающий раствор содержит хелатирующий агент, выбранный из групп, состоящих из этилендиаминтетраацетата (ЭДТА), 1\1-(2-гидроксиэтил)этилендиамин-N,N',N'-триуксусной кислоты (ЭДТА-ОН), гидроксиэтилендиаминтриуксусной кислоты (HEDTA), этиленгликоль-бис(2-аминоэтиловый эфир)-N,N,N',N'-тетрауксусной кислоты (EGTA), 1,2-циклогександиамин-N,N,N',N'-тетрауксусной кислоты (CyDTA), диэтилентриамин-N,N,N',N'',N''-пентауксусной кислоты (DTPA), 1,3-диаминопропан-2-ол-N,N,N',N'-тетрауксусной кислоты (DPTA-OH), этилендиамин-N,N'-бис(2-гидроксифенилуксусной кислоты) (EDDHA), соли лимонной кислоты (цитрата) и их комбинаций.

419. Способ по любому из пп. 381-414, где замещающий раствор содержит этилендиаминтетраацетат (ЭДТА) в качестве хелатирующего агента.

420. Способ по любому из пп. 381-414, где замещающий раствор содержит соль лимонной кислоты (цитрат) в качестве хелатирующего агента.

421. Способ по любому из пп. 381-414, где замещающий раствор содержит цитрат натрия в качестве хелатирующего агента.

422. Способ по любому из пп. 415-421, где концентрация хелатирующего агента в замещающем растворе составляет от 1 до 500 мМ.

423. Способ по любому из пп. 415-421, где концентрация хелатирующего агента в замещающем растворе составляет от 2 до 400 мМ.

424. Способ по любому из пп. 415-421, где концентрация хелатирующего агента в замещающем растворе составляет от 10 до 400 мМ.

425. Способ по любому из пп. 415-421, где концентрация хелатирующего агента в замещающем растворе составляет от 10 до 200 мМ.

426. Способ по любому из пп. 415-421, где концентрация хелатирующего агента в замещающем растворе составляет от 10 до 100 мМ.

427. Способ по любому из пп. 415-421, где концентрация хелатирующего агента в замещающем растворе составляет от 10 до 50 мМ.

428. Способ по любому из пп. 415-421, где концентрация хелатирующего агента в замещающем растворе составляет от 10 до 30 мМ.

429. Способ по любому из пп. 415-421, где концентрация хелатирующего агента в замещающем растворе составляет примерно 0,01 мМ, примерно 0,05 мМ, примерно 0,1 мМ, примерно 0,2 мМ, примерно 0,3 мМ, примерно 0,4 мМ, примерно 0,5 мМ, примерно 0,6 мМ, примерно 0,7 мМ, примерно 0,8 мМ, примерно 0,9 мМ, примерно 1 мМ, примерно 2 мМ, примерно 3 мМ, примерно 4 мМ, примерно 5 мМ, примерно 6 мМ, примерно 7 мМ, примерно 8 мМ, примерно 9 мМ, примерно 10 мМ, примерно 11 мМ, примерно 12 мМ, примерно 13 мМ, примерно 14 мМ, примерно 15 мМ, примерно 16 мМ, примерно 17 мМ, примерно 18 мМ, примерно 19 мМ, примерно 20 мМ, примерно 21 мМ, примерно 22 мМ, примерно 23 мМ, примерно 24 мМ, примерно 25 мМ, примерно 26 мМ, примерно 27 мМ, примерно 28 мМ, примерно 29 мМ, примерно 30 мМ, примерно 31 мМ, примерно 32 мМ, примерно 33 мМ, примерно 34 мМ, примерно 35 мМ, примерно 36 мМ, примерно 37 мМ, примерно 38 мМ, примерно 39 мМ, примерно 40 мМ, примерно 45 мМ, примерно 50 мМ, примерно 55 мМ, примерно 60 мМ, примерно 65 мМ, примерно 70 мМ, примерно 75 мМ, примерно 80 мМ, примерно 85 мМ, примерно 90 мМ, примерно 95 или примерно 100 мМ.

430. Способ по любому из пп. 415-421, где концентрация хелатирующего агента в замещающем растворе составляет примерно 5 мМ, примерно 10 мМ, примерно 15 мМ, примерно 20 мМ, примерно 25 мМ, примерно 30 мМ, примерно 35 мМ, примерно 40 мМ, примерно 45 мМ, примерно 50 мМ, примерно 55 мМ, примерно 60 мМ, примерно 65 мМ, примерно 70 мМ, примерно 75 мМ, примерно 80 мМ, примерно 85 мМ, примерно 90 мМ, примерно 95 мМ или примерно 100 мМ.

431. Способ по любому из пп. 415-421, где концентрация хелатирующего агента в замещающем растворе составляет примерно 15 мМ, примерно 20 мМ, примерно 25 мМ, примерно 30 мМ, примерно 35 мМ, примерно 40 мМ, примерно 45 мМ или примерно 50 мМ.

432. Способ по любому из пп. 387-431, где замещающий раствор содержит соль.

433. Способ по п. 432, где указанная соль выбрана из групп, состоящих из хлорида магния, хлорида калия, хлорида натрия и их комбинации.

434. Способ по п. 432, где соль представляет собой хлорид натрия.

435. Способ по любому из пп. 432-434, где замещающий раствор содержит хлорид натрия в концентрации примерно 1, примерно 5, примерно 10, примерно 15, примерно 20, примерно 25, примерно 30, примерно 35, примерно 40, примерно 45, примерно 50, примерно 55, примерно 60, примерно 65, примерно 70, примерно 80, примерно 90, примерно 100, примерно 110, примерно 120, примерно 130, примерно 140, примерно 150, примерно 160, примерно 170, примерно 180, примерно 190, примерно 200, примерно 250 или примерно 300 мМ.

436. Способ по любому из пп. 381-435, где количество объемов диафильтрации составляет по меньшей мере 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45 или 50.

437. Способ по любому из пп. 381-435, где количество объемов диафильтрации составляет примерно 1, примерно 2, примерно 3, примерно 4, примерно 5, примерно 6, примерно 7, примерно 8, примерно 9, примерно 10, примерно 11, примерно 12, примерно 13, примерно 14, примерно 15, примерно 16, примерно 17, примерно 18, примерно 19, примерно 20, примерно 21, примерно 22, примерно 23, примерно 24, примерно 25, примерно 26, примерно 27, примерно 28, примерно 29, примерно 30, примерно 31, примерно 32, примерно 33, примерно 34, примерно 35, примерно 36, примерно 37, примерно 38, примерно 39, примерно 40, примерно 41, примерно 42, примерно 43, примерно 44, примерно 45, примерно 46, примерно 47, примерно 48, примерно 49, примерно 50, примерно 55, примерно 60, примерно 65, примерно 70, примерно 75, примерно 80, примерно 85, примерно 90, примерно 95 или примерно 100.

438. Способ по любому из пп. 381-435, где количество объемов диафильтрации составляет примерно 5, примерно 6, примерно 7, примерно 8, примерно 9, примерно 10, примерно 11, примерно 12, примерно 13, примерно 14 или примерно 15.

439. Способ по любому из пп. 381-438, где указанную стадию диафильтрации проводят при температуре от примерно 20°С до примерно 90°С.

440. Способ по любому из пп. 381-438, где указанную стадию диафильтрации проводят при температуре от примерно 35°С до примерно 80°С, при температуре от примерно 40°С до примерно 70°С, при температуре от примерно 45°С до примерно 65°С, при температуре от примерно 50°С до примерно 60°С, при температуре от примерно 50°С до примерно 55°С, при температуре от примерно 45°С до примерно 55°С или при температуре от примерно 45°С до примерно 55°С.

441. Способ по любому из пп. 381-438, где указанную стадию диафильтрации проводят при температуре примерно 20°С, примерно 21°С, примерно 22°С, примерно 23°С, примерно 24°С, примерно 25°С, примерно 26°С, примерно 27°С, примерно 28°С, примерно 29°С, примерно 30°С, примерно 31°С, примерно 32°С, примерно 33°С, примерно 34°С, примерно 35°С, примерно 36°С, примерно 37°С, примерно 38°С, примерно 39°С, примерно 40°С, примерно 41°С, примерно 42°С, примерно 43°С, примерно 44°С, примерно 45°С, примерно 46°С, примерно 47°С, примерно 48°С, примерно 49°С, примерно 50°С, примерно 51°С, примерно 52°С, примерно 53°С, примерно 54°С, примерно 55°С, примерно 56°С, примерно 57°С, примерно 58°С, примерно 59°С, примерно 60°С, примерно 61°С, примерно 62°С, примерно 63°С, примерно 64°С, примерно 65°С, примерно 66°С, примерно 67°С, примерно 68°С, примерно 69°С, примерно 70°С, примерно 71°С, примерно 72°С, примерно 73°С, примерно 74°С, примерно 75°С, примерно 76°С, примерно 77°С, примерно 78°С, примерно 79°С или примерно 80°С.

442. Способ по любому из пп. 381-438, где указанную стадию диафильтрации проводят при температуре примерно 50°С.

443. Способ по любому из пп. 359-438, где указанные стадии ультрафильтрации и диафильтрации, если они обе проводятся, проводят при температуре от примерно 20°С до примерно 90°С.

444. Способ по любому из пп. 359-438, где указанные стадии ультрафильтрации и диафильтрации, если они обе проводятся, проводят при температуре от примерно 35°С до примерно 80°С, при температуре от примерно 40°С до примерно 70°С, при температуре от примерно 45°С до примерно 65°С, при температуре от примерно 50°С до примерно 60°С, при температуре от примерно 50°С до примерно 55°С, при температуре от примерно 45°С до примерно 55°С или при температуре от примерно 45°С до примерно 55°С.

445. Способ по любому из пп. 359-438, где указанные стадии ультрафильтрации и диафильтрации, если они обе проводятся, проводят при температуре примерно 20°С, примерно 21°С, примерно 22°С, примерно 23°С, примерно 24°С, примерно 25°С, примерно 26°С, примерно 27°С, примерно 28°С, примерно 29°С, примерно 30°С, примерно 31°С, примерно 32°С, примерно 33°С, примерно 34°С, примерно 35°С, примерно 36°С, примерно 37°С, примерно 38°С, примерно 39°С, примерно 40°С, примерно 41°С, примерно 42°С, примерно 43°С, примерно 44°С, примерно 45°С, примерно 46°С, примерно 47°С, примерно 48°С, примерно 49°С, примерно 50°С, примерно 51°С, примерно 52°С, примерно 53°С, примерно 54°С, примерно 55°С, примерно 56°С, примерно 57°С, примерно 58°С, примерно 59°С, примерно 60°С, примерно 61°С, примерно 62°С, примерно 63°С, примерно 64°С, примерно 65°С, примерно 66°С, примерно 67°С, примерно 68°С, примерно 69°С, примерно 70°С, примерно 71°С, примерно 72°С, примерно 73°С, примерно 74°С, примерно 75°С, примерно 76°С, примерно 77°С, примерно 78°С, примерно 79°С или примерно 80°С.

446. Способ по любому из пп. 359-438, где указанные стадии ультрафильтрации и диафильтрации, если они обе проводятся, проводят при температуре примерно 50°С.

447. Способ по любому из пп. 359-446, где указанный очищенный раствор полисахарида гомогенизируют путем калибровки.

448. Способ по любому из пп. 359-446, где указанный очищенный раствор полисахарида подвергают механической калибровке.

449. Способ по любому из пп. 359-446, где указанный очищенный раствор полисахарида подвергают гомогенизирующему фрагментированию под давлением.

450. Способ по любому из пп. 359-446, где указанный очищенный раствор полисахарида подвергают химическому гидролизу.

451. Способ по любому из пп. 359-450, где указанный очищенный раствор полисахарида откалиброван с обеспечением целевой молекулярной массы.

452. Способ по любому из пп. 359-451, где указанный очищенный раствор полисахарида откалиброван с обеспечением молекулярной массы от примерно 5 кДа до примерно 4000 кДа.

453. Способ по любому из пп. 359-451, где указанный очищенный раствор полисахарида откалиброван с обеспечением молекулярной массы от примерно 10 кДа до примерно 4000 кДа.

454. Способ по любому из пп. 359-451, где указанный очищенный раствор полисахарида откалиброван с обеспечением молекулярной массы от примерно 50 кДа до примерно 4000 кДа.

455. Способ по любому из пп. 359-451, где указанный очищенный раствор полисахарида откалиброван с обеспечением молекулярной массы от примерно 50 кДа до примерно 3500 кДа; от примерно 50 кДа до примерно 3000 кДа; от примерно 50 кДа до примерно 2500 кДа; от примерно 50 кДа до примерно 2000 кДа; от примерно 50 кДа до примерно 1750 кДа; от примерно 50 кДа до примерно 1500 кДа; от примерно 50 кДа до примерно 1250 кДа; от примерно 50 кДа до примерно 10ОО кДа; от примерно 50 кДа до примерно 750 кДа; от примерно 50 кДа до примерно 500 кДа; от примерно 100 кДа до примерно 4000 кДа; от примерно 100 кДа до примерно 3500 кДа; от примерно 100 кДа до примерно 3000 кДа; от примерно 100 кДа до примерно 2500 кДа; от примерно 100 кДа до примерно 2250 кДа; от примерно 100 кДа до примерно 2000 кДа; от примерно 100 кДа до примерно 1750 кДа; от примерно 100 кДа до примерно 1500 кДа; от примерно 100 кДа до примерно 1250 кДа; от примерно 100 кДа до примерно 1000 кДа; от примерно 100 кДа до примерно 750 кДа; от примерно 100 кДа до примерно 500 кДа; от примерно 200 кДа до примерно 4000 кДа; от примерно 200 кДа до примерно 3500 кДа; от примерно 200 кДа до примерно 3000 кДа; от примерно 200 кДа до примерно 2500 кДа; от примерно 200 кДа до примерно 2250 кДа; от примерно 200 кДа до примерно 2000 кДа; от примерно 200 кДа до примерно 1750 кДа; от примерно 200 кДа до примерно 1500 кДа; от примерно 200 кДа до примерно 1250 кДа; от примерно 200 кДа до примерно 1000 кДа; от примерно 200 кДа до примерно 750 кДа или от примерно 200 кДа до примерно 500 кДа. В других таких вариантах реализации очищенный полисахарид откалиброван с обеспечением молекулярной массы от примерно 250 кДа до примерно 3500 кДа; от примерно 250 кДа до примерно 3000 кДа; от примерно 250 кДа до примерно 2500 кДа; от примерно 250 кДа до примерно 2000 кДа; от примерно 250 кДа до примерно 1750 кДа; от примерно 250 кДа до примерно 1500 кДа; от примерно 250 кДа до примерно 1250 кДа; от примерно 250 кДа до примерно 1000 кДа; от примерно 250 кДа до примерно 750 кДа; от примерно 250 кДа до примерно 500 кДа; от примерно 300 кДа до примерно 4000 кДа; от примерно 300 кДа до примерно 3500 кДа; от примерно 300 кДа до примерно 3000 кДа; от примерно 300 кДа до примерно 2500 кДа; от примерно 300 кДа до примерно 2250 кДа; от примерно 300 кДа до примерно 2000 кДа; от примерно 300 кДа до примерно 1750 кДа; от примерно 300 кДа до примерно 1500 кДа; от примерно 300 кДа до примерно 1250 кДа; от примерно 300 кДа до примерно 1000 кДа; от примерно 300 кДа до примерно 750 кДа; от примерно 300 кДа до примерно 500 кДа; от примерно 500 кДа до примерно 4000 кДа; от примерно 500 кДа до примерно 3500 кДа; от примерно 500 кДа до примерно 3000 кДа; от примерно 500 кДа до примерно 2500 кДа; от примерно 500 кДа до примерно 2250 кДа; от примерно 500 кДа до примерно 2000 кДа; от примерно 500 кДа до примерно 1750 кДа; от примерно 500 кДа до примерно 1500 кДа; от примерно 500 кДа до примерно 1250 кДа; от примерно 500 кДа до примерно 1000 кДа; от примерно 500 кДа до примерно 750 кДа или от примерно 500 кДа до примерно 600 кДа.

456. Способ по любому из пп. 359-451, где указанный очищенный раствор полисахарида откалиброван с обеспечением молекулярной массы, составляющей примерно 5 кДа, примерно 10 кДа, примерно 15 кДа, примерно 20 кДа, примерно 25 кДа, примерно 30 кДа, примерно 35 кДа, примерно 40 кДа, примерно 45 кДа, примерно 50 кДа, примерно 75 кДа, примерно 90 кДа, примерно 100 кДа, примерно 150 кДа, примерно 200 кДа, примерно 250 кДа, примерно 300 кДа, примерно 350 кДа, примерно 400 кДа, примерно 450 кДа, примерно 500 кДа, примерно 550 кДа, примерно 600 кДа, примерно 650 кДа, примерно 700 кДа, примерно 750 кДа, примерно 800 кДа, примерно 850 кДа, примерно 900 кДа, примерно 950 кДа, примерно 1000 кДа, примерно 1250 кДа, примерно 1500 кДа, примерно 1750 кДа, примерно 2000 кДа, примерно 2250 кДа, примерно 2500 кДа, примерно 2750 кДа, примерно 3000 кДа, примерно 3250 кДа, примерно 3500 кДа, примерно 3750 кДа или примерно 4000 кДа.

457. Способ по любому из пп. 1-456, где указанный очищенный раствор полисахарида подвергают стерилизующей фильтрации.

458. Способ по п. 457, где указанная стерилизующая фильтрация представляет собой тупиковую фильтрацию.

459. Способ по п. 457, где указанная стерилизующая фильтрация представляет собой тангенциальную фильтрацию.

460. Способ по любому из пп. 457-459, где фильтр имеет номинальный диапазон удерживания, составляющий примерно 0,01-0,2 мкм, примерно 0,05-0,2 мкм, примерно 0,1-0,2 мкм или примерно 0,15-0,2 мкм.

461. Способ по любому из пп. 457-459, где фильтр имеет номинальный диапазон удерживания, составляющий примерно 0,05, примерно 0,1, примерно 0,15 или примерно 0,2 мкм.

462. Способ по любому из пп. 457-459, где номинальный диапазон удерживания фильтра составляет примерно 0,2 мкм.

463. Способ по любому из пп. 457-462, где фильтр имеет производительность, составляющую примерно 25-1500 л/м², 50-1500 л/м², 75-1500 л/м², 100-1500 л/м², 150-1500 л/м², 200-1500 л/м², 250-1500 л/м², 300-1500 л/м², 350-1500 л/м², 400-1500 л/м², 500-1500 л/м², 750-1500 л/м², 1000-1500 л/м² или 1250-1500 л/м².

464. Способ по любому из пп. 457-462, где фильтр имеет производительность, составляющую примерно 25-1000 л/м², 50-1000 л/м², 75-1000 л/м², 100-1000 л/м², 150-1000 л/м², 200-1000 л/м², 250-1000 л/м², 300-1000 л/м², 350-1000 л/м², 400-1000 л/м², 500-1000 л/м² или 750-1000 л/м².

465. Способ по любому из пп. 457-462, где фильтр имеет производительность, составляющую 25-500 л/м², 50-500 л/м², 75-500 л/м², 100-500 л/м², 150-500 л/м², 200-500 л/м², 250-500 л/м², 300-500 л/м², 350-500 л/м² или 400-500 л/м².

466. Способ по любому из пп. 457-462, где фильтр имеет производительность, составляющую 25-300 л/м², 50-300 л/м², 75-300 л/м², 100-300 л/м², 150-300 л/м², 200-300 л/м² или 250-300 л/м².

467. Способ по любому из пп. 457-462, где фильтр имеет производительность, составляющую 25-250 л/м², 50-250 л/м², 75-250 л/м², 100-250 л/м² или 150-250 л/м², 200-250 л/м².

468. Способ по любому из пп. 457-462, где фильтр имеет производительность, составляющую 25-100 л/м², 50-100 л/м² или 75-100 л/м².

469. Способ по любому из пп. 457-462, где фильтр имеет производительность, составляющую примерно 25, примерно 50, примерно 75, примерно 100, примерно 150, примерно 200, примерно 250, примерно 300, примерно 350, примерно 400, примерно 500, примерно 600, примерно 700, примерно 800, примерно 900, примерно 1000, примерно 1100, примерно 1200, примерно 1300, примерно 1400 или примерно 1500 л/м².

470. Способ по любому из пп. 1-469, где полученный очищенный полисахарид находится в форме жидкого раствора.

471. Способ по любому из пп. 1-469, где полученный очищенный полисахарид представляет собой высушенный порошок.

472. Способ по любому из пп. 1-469, где полученный очищенный раствор полисахарида лиофилизируют.

473. Способ по любому из пп. 1-469 или 472, где полученный очищенный раствор полисахарида представляет собой полученный путем сублимационной сушки осадок.

474. Способ по любому из пп. 1-473, где указанный бактериальный полисахарид представляет собой капсульный полисахарид, субкапсульный полисахарид или липополисахарид.

475. Способ по любому из пп. 1-473, где указанный бактериальный полисахарид представляет собой капсульный полисахарид.

476. Способ по любому из пп. 1-473, где указанный бактериальный полисахарид представляет собой капсульный полисахарид Staphylococcus aureus.

477. Способ по любому из пп. 1-473, где указанный бактериальный полисахарид представляет собой капсульный полисахарид Staphylococcus aureus типа 5.

478. Способ по любому из пп. 1-473, где указанный бактериальный полисахарид представляет собой капсульный полисахарид Staphylococcus aureus типа 8.

479. Способ по любому из пп. 1-473, где указанный бактериальный полисахарид представляет собой капсульный полисахарид Enterococcus faecal is.

480. Способ по любому из пп. 1-473, где указанный бактериальный полисахарид представляет собой капсульный полисахарид Haemophilus influenzae типа b.

481. Способ по любому из пп. 1-473, где указанный бактериальный полисахарид представляет собой капсульный полисахарид Neisseria meningitidis.

482. Способ по любому из пп. 1-473, где указанный бактериальный полисахарид представляет собой капсульный полисахарид N. meningitidis серогруппы А (MenA), N. meningitidis серогруппы W135 (MenW135), N. meningitidis серогруппы Y (MenY), N. meningitidis серогруппы X (MenX) или N. meningitidis серогруппы С (MenC).

483. Способ по любому из пп. 1-473, где указанный бактериальный полисахарид представляет собой капсульный полисахарид Escherichia coli.

484. Способ по любому из пп. 1-473, где указанный бактериальный полисахарид представляет собой капсульный полисахарид Streptococcus agaiactiae (стрептококка группы В (СГБ)).

485. Способ по любому из пп. 1-473, где указанный бактериальный полисахарид представляет собой капсульный полисахарид, выбранный из группы, состоящей из капсульного полисахарида СГБ типов Ia, Ib, II, III, IV, V, VI, VII и VIII.

486. Способ по любому из пп. 1-473, где указанный бактериальный полисахарид представляет собой капсульный полисахарид штамма Escherichia coli, входящего в группу энтеровирулентных типов Escherichia coli (группу EEC).

487. Способ по любому из пп. 1-473, где указанный бактериальный полисахарид представляет собой капсульный полисахарид штамма Escherichia coli, входящего в группу энтеровирулентных типов Escherichia coli (группу EEC), таких как Escherichia coli - энтеротоксигенные (ЕТЕС), Escherichia coli - энтеропатогенные (ЕРЕС), Escherichia coli - 0157:Н7 энтерогеморрагические (ЕНЕС) или Escherichia coli - энтероинвазивные (EIEC). В одном из вариантов реализации источником бактериального капсульного полисахарида является уропатогенная Escherichia coli (UPEC).

488. Способ по любому из пп. 1-473 где указанный бактериальный полисахарид представляет собой капсульный полисахарид серотипа Escherichia coli, выбранного из группы, состоящей из серотипов O157:Н7, O26:1-111, 0111:1-1-и O103:1-12.

489. Способ по любому из пп. 1-473 где указанный бактериальный полисахарид представляет собой капсульный полисахарид серотипа Escherichia coli, выбранного из группы, состоящей из серотипов O6:K:Н1 и O18:K1:Н7.

490. Способ по любому из пп. 1-473, где указанный бактериальный полисахарид представляет собой капсульный полисахарид серотипа Escherichia coli, выбранного из группы, состоящей из серотипов O45:K1, O17:K52:Н18, O19:Н34 и O7:K1.

491. Способ по любому из пп. 1-473, где указанный бактериальный полисахарид представляет собой капсульный полисахарид Escherichia coli серотипа O104:Н4.

492. Способ по любому из пп. 1-473, где указанный бактериальный полисахарид представляет собой капсульный полисахарид Escherichia coli серотипа O1:K12:Н7.

493. Способ по любому из пп. 1-473, где указанный бактериальный полисахарид представляет собой капсульный полисахарид Escherichia coli серотипа O127:Н6.

494. Способ по любому из пп. 1-473, где указанный бактериальный полисахарид представляет собой капсульный полисахарид Escherichia coli серотипа O139:Н28.

495. Способ по любому из пп. 1-473, где указанный бактериальный полисахарид представляет собой капсульный полисахарид Escherichia coli серотипа O128:Н2.

496. Способ по любому из пп. 1-473, где указанный бактериальный полисахарид представляет собой капсульный полисахарид Steptococcus pneumoniae.

497. Способ по любому из пп. 1-473, где указанный бактериальный полисахарид представляет собой капсульный полисахарид серотипа Streptococcus pneumoniae, выбранного из группы, состоящей изсеротипов 1, 2, 3, 4, 5, 6А, 6 В, 6С, 7F, 8, 9V, 9N, 10А, 11А, 12F, 14, 15А, 15 В, 15С, 16F, 17F, 18С, 19А, 19F, 20, 22F, 23А, 23 В, 23F, 24 В, 24F, 29, 31, 33F, 34, 35 В, 35F, 38, 72 и 73.

498. Способ по любому из пп. 1-473, где указанный бактериальный полисахарид представляет собой капсульный полисахарид серотипа Streptococcus pneumoniae, выбранного из группы, состоящей изсеротипов 1, 2,3, 4, 5, 6А, 6B.7F, 8, 9V, 9N, 10А, 11А, 12F, 14, 15А, 15 В, 15С, 16F, 17F, 18С, 19А, 19F, 20, 22F, 23А, 23 В, 23F, 24F, 29, 31, 33F, 35 В, 35F, 38, 72 и 73.

499. Способ по любому из пп. 1-473, в котором указанный бактериальный полисахарид представляет собой капсульный полисахарид серотипа Streptococcus pneumoniae, выбранного из группы, состоящей изсеротипов 8, 10А, 11 A, 12F, 15 В, 22F и 33F.

500. Способ по любому из пп. 1-473, где указанный бактериальный полисахарид представляет собой капсульный полисахарид Streptococcus pneumoniae серотипа 1.

501. Способ по любому из пп. 1-473, где указанный бактериальный полисахарид представляет собой капсульный полисахарид Streptococcus pneumoniae серотипа 2.

502. Способ по любому из пп. 1-473, где указанный бактериальный полисахарид представляет собой капсульный полисахарид Streptococcus pneumoniae серотипа 3.

503. Способ по любому из пп. 1-473, где указанный бактериальный полисахарид представляет собой капсульный полисахарид Streptococcus pneumoniae серотипа 4.

504. Способ по любому из пп. 1-473, где указанный бактериальный полисахарид представляет собой капсульный полисахарид Streptococcus pneumoniae серотипа 5.

505. Способ по любому из пп. 1-473, где указанный бактериальный полисахарид представляет собой капсульный полисахарид Streptococcus pneumoniae серотипа 6А.

506. Способ по любому из пп. 1-473, где указанный бактериальный полисахарид представляет собой капсульный полисахарид Streptococcus pneumoniae серотипа 6 В.

507. Способ по любому из пп. 1-473, где указанный бактериальный полисахарид представляет собой капсульный полисахарид Streptococcus pneumoniae серотипа 6С.

508. Способ по любому из пп. 1-473, где указанный бактериальный полисахарид представляет собой капсульный полисахарид Streptococcus pneumoniae серотипа 7F.

509. Способ по любому из пп. 1-473, где указанный бактериальный полисахарид представляет собой капсульный полисахарид Streptococcus pneumoniae серотипа 8.

510. Способ по любому из пп. 1-473, где указанный бактериальный полисахарид представляет собой капсульный полисахарид Streptococcus pneumoniae серотипа 9V.

511. Способ по любому из пп. 1-473, где указанный бактериальный полисахарид представляет собой капсульный полисахарид Streptococcus pneumoniae серотипа 9N.

512. Способ по любому из пп. 1-473, где указанный бактериальный полисахарид представляет собой капсульный полисахарид Streptococcus pneumoniae серотипа 10А.

513. Способ по любому из пп. 1-473, где указанный бактериальный полисахарид представляет собой капсульный полисахарид Streptococcus pneumoniae серотипа 11А.

514. Способ по любому из пп. 1-473, где указанный бактериальный полисахарид представляет собой капсульный полисахарид Streptococcus pneumoniae серотипа 12F.

515. Способ по любому из пп. 1-473, где указанный бактериальный полисахарид представляет собой капсульный полисахарид Streptococcus pneumoniae серотипа 14.

516. Способ по любому из пп. 1-473, где указанный бактериальный полисахарид представляет собой капсульный полисахарид Streptococcus pneumoniae серотипа 15А.

517. Способ по любому из пп. 1-473, где указанный бактериальный полисахарид представляет собой капсульный полисахарид Streptococcus pneumoniae серотипа 15В.

518. Способ по любому из пп. 1-473, где указанный бактериальный полисахарид представляет собой капсульный полисахарид Streptococcus pneumoniae серотипа 15С.

519. Способ по любому из пп. 1-473, где указанный бактериальный полисахарид представляет собой капсульный полисахарид Streptococcus pneumoniae серотипа 16F.

520. Способ по любому из пп. 1-473, где указанный бактериальный полисахарид представляет собой капсульный полисахарид Streptococcus pneumoniae серотипа 17F.

521. Способ по любому из пп. 1-473, где указанный бактериальный полисахарид представляет собой капсульный полисахарид Streptococcus pneumoniae серотипа 18С.

522. Способ по любому из пп. 1-473, где указанный бактериальный полисахарид представляет собой капсульный полисахарид Streptococcus pneumoniae серотипа 19А.

523. Способ по любому из пп. 1-473, где указанный бактериальный полисахарид представляет собой капсульный полисахарид Streptococcus pneumoniae серотипа 19F.

524. Способ по любому из пп. 1-473, где указанный бактериальный полисахарид представляет собой капсульный полисахарид Streptococcus pneumoniae серотипа 20.

525. Способ по любому из пп. 1-473, где указанный бактериальный полисахарид представляет собой капсульный полисахарид Streptococcus pneumoniae серотипа 20А.

526. Способ по любому из пп. 1-473, где указанный бактериальный полисахарид представляет собой капсульный полисахарид Streptococcus pneumoniae серотипа 20В.

527. Способ по любому из пп. 1-473, где указанный бактериальный полисахарид представляет собой капсульный полисахарид Streptococcus pneumoniae серотипа 22F.

528. Способ по любому из пп. 1-473, где указанный бактериальный полисахарид представляет собой капсульный полисахарид Streptococcus pneumoniae серотипа 23А.

529. Способ по любому из пп. 1-473, где указанный бактериальный полисахарид представляет собой капсульный полисахарид Streptococcus pneumoniae серотипа 23В.

530. Способ по любому из пп. 1-473, где указанный бактериальный полисахарид представляет собой капсульный полисахарид Streptococcus pneumoniae серотипа 23F.

531. Способ по любому из пп. 1-473, где указанный бактериальный полисахарид представляет собой капсульный полисахарид Streptococcus pneumoniae серотипа 24В.

532. Способ по любому из пп. 1-473, где указанный бактериальный полисахарид представляет собой капсульный полисахарид Streptococcus pneumoniae серотипа 24F.

533. Способ по любому из пп. 1-473, где указанный бактериальный полисахарид представляет собой капсульный полисахарид Streptococcus pneumoniae серотипа 29.

534. Способ по любому из пп. 1-473, где указанный бактериальный полисахарид представляет собой капсульный полисахарид Streptococcus pneumoniae серотипа 31.

535. Способ по любому из пп. 1-473, где указанный бактериальный полисахарид представляет собой капсульный полисахарид Streptococcus pneumoniae серотипа 33F.

536. Способ по любому из пп. 1-473, где указанный бактериальный полисахарид представляет собой капсульный полисахарид Streptococcus pneumoniae серотипа 34.

537. Способ по любому из пп. 1-473, где указанный бактериальный полисахарид представляет собой капсульный полисахарид Streptococcus pneumoniae серотипа 35В.

538. Способ по любому из пп. 1-473, где указанный бактериальный полисахарид представляет собой капсульный полисахарид Streptococcus pneumoniae серотипа 35F.

539. Способ по любому из пп. 1-473, где указанный бактериальный полисахарид представляет собой капсульный полисахарид Streptococcus pneumoniae серотипа 38.

540. Способ по любому из пп. 1-473, где указанный бактериальный полисахарид представляет собой капсульный полисахарид Streptococcus pneumoniae серотипа 72.

541. Способ по любому из пп. 1-473, где указанный бактериальный полисахарид представляет собой капсульный полисахарид Streptococcus pneumoniae серотипа 73.

542. Очищенный бактериальный полисахарид, полученный способом по любому из пп. 1-541.

543. Очищенный бактериальный полисахарид, который можно получить способом по любому из пп. 1-541.

544. Очищенный бактериальный полисахарид, полученный способом по любому из пп. 1-541, для применения в качестве антигена.

545. Очищенный бактериальный полисахарид, полученный способом по любому из пп. 1-541, конъюгированный с белком-носителем.

546. Очищенный бактериальный полисахарид, полученный способом по любому из пп. 1-541, дополнительно конъюгированный с белком-носителем.

547. Гликоконъюгат очищенного бактериального полисахарида, полученного способом по любому из пп. 1-541.

548. Иммуногенная композиция, содержащая любой из очищенных полисахаридов по любому из пп. 542-543.

549. Иммуногенная композиция, содержащая гликоконъюгат по любому из пп. 546-547.

550. Иммуногенная композиция, содержащая любой из гликоконъюгатов, раскрытых в настоящем описании.

551. Иммуногенная композиция, содержащая любую из комбинаций гликоконъюгатов, раскрытых в настоящем описании.

В настоящем описании термин «примерно» означает нахождение в пределах статистически значимого диапазона значений, такого как указанный диапазон концентраций, период времени, молекулярная масса, температура или рН. Такой диапазон может находиться в пределах порядка величины, обычно в пределах 20%, более типично в пределах 10%, и еще более типично в пределах 5% или в пределах 1% от заданного значения или диапазона. Иногда такой диапазон может находиться в пределах погрешности эксперимента, типичной для стандартных способов, применяемых для оценки и/или определения заданного значения или диапазона. Допустимое отклонение, охватываемое термином «примерно», будет зависеть от конкретной исследуемой системы и может быть легко оценено специалистом в данной области техники. Всякий раз, когда в настоящей заявке указан диапазон, каждое число в пределах диапазона также рассматривается в качестве варианта реализации настоящего раскрытия.

Термины «содержащий», «содержать» и «содержит» в контексте настоящего описания рассматриваются авторами изобретения как являющиеся необязательно взаимозаменяемыми с терминами «состоящий по существу из», «состоять по существу из», «состоит по существу из», «состоящий из», «состоять из» и «состоит из», соответственно, в каждом случае.

Термины «иммуногенное количество», «иммунологически эффективное количество», «терапевтически эффективное количество», «профилактически эффективное количество» или «доза», которые в контексте настоящего описания используются взаимозаменяемо, как правило, относятся к количеству антигена или иммуногенной композиции, достаточному для того, чтобы вызвать иммунный ответ, либо клеточный (опосредованный Т-клетками) ответ, либо гуморальный (опосредованный В-клетками или антителами) ответ, либо и то, и другое, что определяют с помощью стандартных методов анализа, известных специалисту в данной области техники.

Любое целое число в любом из диапазонов в настоящем документе рассматривается в качестве варианта реализации настоящего раскрытия. Все ссылки или патентные заявки, цитируемые в настоящем описании изобретения, включены в настоящее описание посредством ссылки. Настоящее изобретение проиллюстрировано в прилагаемых примерах. Приведенные ниже примеры выполняют с применением стандартных методик, которые хорошо известны и являются рутинными для специалистов в данной области техники, за исключением случаев, когда подробно описано иное. Приведенные примеры являются иллюстративными, но не ограничивают настоящее изобретение.

ПРИМЕРЫ

Пример 1. Очистка пневмококкового полисахарида серотипа 8

Схема технологического процесса очистки представлена на фигуре 1. Процесс начинается с инактивированной NLS культуральной жидкости (см. ЕР 2129693) и включает отдельные операции извлечения (флокуляцию, центрифугирование и глубинную фильтрацию), за которыми следуют отдельные операции очистки (ультрафильтрация и фильтрация с помощью активированного угля).

1. Исходный материал

Процесс начинается с инактивированной NLS культуральной жидкости S. pneumoniae серотипа 8

Культуры выращивали в среде Hy-Soy. В конце роста (о чем свидетельствует отсутствие дальнейшего увеличения оптической плотности) культуры инактивировали с помощью NLS (см. ЕР 2129693).

2. Флокуляция

Основная цель этой стадии заключается в осаждении клеточного дебриса, белков и нуклеиновых кислот клеток-хозяев. Она также помогает в последующих операциях осветления. Флокуляцию проводили с применением культуральной жидкости, лизированной путем добавления NLS.

2.1 Влияние рН и квасцов

Были проведены эксперименты по изучению влияния рН, процентного содержания квасцов и времени выдерживания.

Заданное количество культуральной жидкости отмеривали в разные емкости и добавляли исходный 10% (масс/масс.) раствор квасцов (приготовленный с применением додекагидрата алюмосульфата калия и деионизированной воды) до конечной концентрации 2% (масс/об.).

Затем доводили рН до желаемых значений. Затем, после различных периодов выдерживания, емкости центрифугировали при 12000 g в течение 15 минут.Супернатант анализировали на содержание на белка, содержание полисахарида и прозрачность. Влияние рН на удаление белка и прозрачность в присутствии 2% квасцов при времени выдерживания 1, 4 и 24 часа показано на фигуре 2. Эти данные показывают, что удаление белка при рН 2,5-4,0 и 2% квасцов было достаточно эффективным. На этой отдельной стадии было удалено более 80% белковых примесей. На прозрачность центрифугата влияли как рН, так и время выдерживания. На фигуре 2 показано, что рН 3,5 обеспечивает наибольшую прозрачность центрифугата.

Влияние концентрации квасцов и времени выдерживания на удаление белка и прозрачность центрифугата при рН 3,5 показано на фигуре 3. Исследование времени выдерживания проводили при температуре окружающей среды (20±2°С). Результаты показывают, что 1,0% квасцов не было достаточно ни для удаления белка, ни для осветления центрифугата. Различия между 2% и 3% квасцов были незначительны.

2.2 Влияние температуры

Подвергнутую флокуляции культуральную жидкость (рН 3,5 и 2% квасцов) нагревали до 50°С и выдерживали в течение 30 и 60 минут. После охлаждения до температуры окружающей среды образцы центрифугировали при 12000 g. Прозрачность центрифугата определяли по сравнению с центрифугатом, подвергнутым флокуляции, проведенной при температуре окружающей среды.

OD600 центрифугата, полученного после флокуляции при температуре окружающей среды, составила 0,99. После 30 минут при 50°С OD600 снижается до 0,13, а после 60 минут при 50°С OD600 дополнительно снижается до 0,04. Это явным образом показывает, что прозрачность центрифугата может быть значительно повышена путем выполнения флокуляции при более высокой температуре.

2.3 Влияние параметров, оказывающих действие на флокуляцию Было проведено исследование с целью лучшей оценки влияния параметров, оказывающих действие на процесс флокуляции серотипа 8. Авторы изобретения исследовали влияние параметров концентрации квасцов, рН, температуры и времени выдерживания на степень извлечения полисахарида, прозрачность и удаление примесей.

К культуральной жидкости при комнатной температуре добавляли указанное количество квасцов, и затем регулировали рН с помощью 5 н. H2SO4 или 5 н. NaOH. Образцы помещали на водяную баню, в которой устанавливали желаемую температуру, и в каждый момент времени отбирали образцы для анализа и затем центрифугировали при 12000 х д. Супернатант анализировали в отношении концентрации полисахарида, содержания белка и мутности (OD600)

Анализ результатов показал, что диапазон предпочтительных значений для рН, процентного содержания квасцов и времени выдерживания для операций флокуляции был достаточно широким, рН: 2,75-3,75; квасцы: 1,5-3,0% масс/об.; и время выдерживания: 1,5-3 часа. Желаемый диапазон для температуры составлял примерно 45-60°С.

3. Центрифугирование

Центрифугирование проводили для очистки центрифугата, чтобы он мог быть отфильтрован с приемлемой производительностью. Скорость центрифугирования составляла 12000 xg.

4. Глубинная фильтрация

Несмотря на то, что центрифугирование является основной операцией разделения твердой и жидкой фаз, оно не обеспечивает удаление всех частиц из потока сырья, между центрифугированием и первой операцией ультрафильтрации была включена операция глубинной фильтрации.

Первоначальные исследования проводили с применением фильтра с номинальным диапазоном удерживания 0,25-1,0 мкм. Чистота центрифугата оказывала влияние на производительность фильтра.

В частности, если флокуляцию проводили при температуре примерно 20°С, прозрачность центрифугата была не такой хорошей, при этом OD600 находилась в диапазоне 0,8-1,4, и это влияло на производительность фильтра. При использовании условий флокуляции с более высокой температурой процесс глубинной фильтрации имел более устойчивую и воспроизводимую производительность, производительностью фильтра составляла более 400 л/м² даже при OD600 центрифугата в диапазоне от 0,04 до 0,2.

5. Необязательная фильтрация при диаметре пор 0,45 мкм

Несмотря на то, что это необязательно, для некоторых образцов после глубинной фильтрации использовали фильтр с диаметром пор 0,45 мкм.

6. Ультрафильтрация/диафильтрация (УФДФ-1)

Очистка начинается с фильтрата, полученного при глубинной фильтрации (на стадиях 4 или 5, описанных выше).

Эта операция обеспечивает замену отработанной культуральной среды на буфер при одновременном снижении содержания низкомолекулярных примесей из клеток-хозяев и остаточного флокулянта (алюминия).

Перед первой операцией УФДФ рН полученного при глубинной фильтрации фильтрата доводили до 7,0 с применением 5 н. гидроксида натрия. В качестве альтернативы, рН не регулируют перед проведением диафильтрации УФДФ против цитрата натрия/фосфата натрия, рН 7,0 (например, 10 мМ фосфата/25 мМ цитрата, рН 7,0) в качестве буфера для диафильтрации.

7. Фильтрация с помощью активированного угля

Эта операция обеспечивает снижение содержания примесей из клеток-хозяев, таких как белки и нуклеиновые кислоты, а также окрашенных примесей (см. WO 2008118752).

Изучали эффективность удаления белковых примесей с помощью угольного фильтра. Последовательно применяли три угольных фильтра R32SP диаметром 7 дюймов (примерно 17,8 см). Ретентат, полученный при УФДФ-1, фильтровали при скорости потока 40 LMH и регистрировали УФ280 для фильтрата с угольного фильтра.

Сигнал УФ280 для ретентата составлял лишь 460 мОЕ до фильтрации с помощью активированного угля, что являлось достаточно низким значением по сравнению с фоновым значением при промывке водой (380 мОЕ). Это позволяет предположить, что большинство примесей, связанных с белком, уже были удалены пр предыдущих операциях. Однако, несмотря на это, угольные фильтры достаточно эффективно удаляли остаточные примеси. Это отражено в снижении сигнала УФ280 после включения фильтров в линию, при этом УФ-сигнал снизился до фонового значения. Эти данные указывают на то, что примеси, связанные с белком, были удалены при однократном прохождении через угольные фильтры.

8. Ультрафильтрация/диафильтрация (УФДФ-2)

Эта операция обеспечивает концентрирование продукта до желаемой концентрации и замену 25 мМ цитрата натрия, 10 мМ фосфата натрия, рН 7,0 на буфер, подходящий для конъюгации. Эту стадию выполняют с применением фильтра с отсечением по молекулярной массе, составляющим 30 кДа.

Присутствие остаточного цитрата может препятствовать протеканию реакции конъюгации. В качестве буфера для диафильтрации использовали различные растворы: комбинацию 50 мМ NaCl и воды или 25 мМ фосфат калия с рН 6,0 в качестве буфера для диафильтрации.

Оценивали влияние 25 мМ фосфата калия с рН 6,0 на удаление цитрата. В этом эксперименте фильтрат после применения угольного фильтра концентрировали в 2,6 раза и затем подвергали диафильтрации против 25 мМ фосфата калия, рН 6,0. Образцы удаляли и анализировали на содержание остаточного цитрата в различные моменты времени диафильтрации.

Был получен коэффициент задержания 0,13. Для достижения 6-кратного снижения требуется менее семи объемов диафильтрации 25 мМ фосфата калия с рН 6,0.

9. Однородность

Для демонстрации того, что описанный выше способ извлечения и очистки может обеспечить воспроизводимые результаты, были получены три установочных серии. Всю серию культуральной жидкости подвергали флокуляции и центрифугированию с применением способа, описанного выше.

Стадия и общие выходы для трех установочных серий приведены в таблице 2. Выходы всех стадий составляют примерно 77-99%, высоко воспроизводимы и устойчивы.

Результаты анализа для трех установочных серий приведены в таблице 3. Указанные три установочные серии соответствовали всем предварительно определенным критериям приемлемости.

Пример 2. Очистка пневмококкового полисахарида серотипа 33F

Схема технологического процесса очистки пневмококкового полисахарида 33F представлена на фигуре 1. Процесс начинается с обработанной NLS культуральной жидкости и включает отдельные операции извлечения (флокуляцию, центрифугирование и глубинную фильтрацию), за которыми следуют отдельные операции очистки (ультрафильтрация и фильтрация с помощью активированного угля).

1. Исходный материал

Процесс начинается с инактивированной NLS культуральной жидкости S. pneumoniae серотипа 33F. Культуры выращивали в среде Hy-Soy. В конце роста (о чем свидетельствует отсутствие дальнейшего увеличения оптической плотности) культуры обрабатывали NLS (см. ЕР 2129693).

2. Флокуляция

Основная цель этой стадии заключается в осаждении клеточного дебриса, белков и нуклеиновых кислот клеток-хозяев. Она также помогает в последующих операциях осветления. Флокуляцию проводили с применением культуральной жидкости, лизированной путем добавления NLS.

2.1 Влияние рН

Были проведены эксперименты по изучению влияния рН.

С целью определения оптимального значения рН для флокуляции серотипа 33F было проведено исследование влияния титрования кислотой на инактивированную культуральную жидкость 33F. Результаты этого исследования показаны на фигуре 4. График зависимости удаления примесей от рН показывает, что максимального удаления примесей достигали при рН, равном 3,5 или менее. Было проведено исследование флокуляции с применением квасцов с использованием значения рН, определенного в предыдущем эксперименте. Результаты этого исследования показаны на фигуре 5. Скорость осаждения, определенная с помощью OD600, в значительной степени постоянна при концентрациях квасцов >1,0%. Наибольшее удаление примесей обеспечивает 1,5% квасцов, хотя в диапазоне 1-3% квасцов не наблюдается значимых различий. Не наблюдали значимого изменения концентрации полисахарида в диапазоне титрования.

2.2 Влияние других параметров

Для определения влияния скорости добавления квасцов партию культуральной жидкости разделяли на две части и добавляли исходный раствор квасцов либо в течение 3 мин, либо в течение 60 мин. Не наблюдали существенного влияния ни на прозрачность после центрифугирования, ни на производительность глубинного фильтра. Это указывает на то, что скорость добавления квасцов не является существенным технологическим параметром.

Для дальнейшего уточнения условий флокуляции был разработан план эксперимента (ПЭ), в котором изучали влияние концентрации квасцов, рН, температуры и времени выдерживания на извлечение полисахарида, прозрачность и удаление белка. Исследованные факторы приведены в таблице 4.

Не наблюдали существенного влияния на степень извлечения полисахарида ни при каких из исследуемых условий, поскольку при всех условиях степень извлечения превышала 95%. Схожим образом, при всех исследуемых условиях степень удаления белка превышала 90%. Наибольшее влияние на прозрачность, определяемую на основании OD600, оказывает концентрация квасцов. При низких концентрациях квасцов OD600 увеличивалась. Также наблюдали небольшое повышение прозрачности по мере снижения температуры и повышения рН.

Для определения влияния условий флокуляции на осветления было проведено исследование непрерывного центрифугирования культуральной жидкости, подвергавшейся флокуляции при 50°С.

Как и в случае с культуральной жидкостью, подвергавшейся флокуляции при 20°С, не наблюдали значительного увеличения прозрачности центрифугата при скоростях подачи 400-1200 мл/мин для культуральной жидкости, подвергавшейся флокуляции при 50°С. Тем не менее, как прозрачность центрифугата, так и производительность глубинного фильтра значительно увеличились по сравнению с флокуляцией при 20°С. При новых условиях флокуляции производительность глубинного фильтра превышает 400 л/м².

Настоящим подтверждается, что повышение температуры флокуляции с 20°С до 50°С улучшало прозрачность центрифугата и, следовательно, производительность глубинных фильтров (см. ниже). Определяли прозрачность центрифугата и полученного при глубинной фильтрации фильтрата (см. таблицу 5).

3. Центрифугирование

Центрифугирование проводили для очистки центрифугата, чтобы он мог быть отфильтрован с приемлемой производительностью. Скорость центрифугирования составляла 12000 xg.

4. Глубинная фильтрация

Несмотря на то, что центрифугирование является основной операцией разделения твердой и жидкой фаз, оно не обеспечивает удаление всех частиц из потока сырья, между центрифугированием и первой операцией ультрафильтрации была включена операция глубинной фильтрации.

5. Необязательная фильтрация при диаметре пор 0,45 мкм

Несмотря на то, что это необязательно, для некоторых образцов после глубинной фильтрации использовали фильтр с диаметром пор 0,45 мкм.

6. Ультрафильтрация/диафильтрация (УФДФ-1)

Очистка начинается с фильтрата, полученного при глубинной фильтрации (на стадиях 4 или 5, описанных выше).

Эта операция обеспечивает замену отработанной культуральной среды на буфер при одновременном снижении содержания низкомолекулярных примесей из клеток-хозяев и остаточного флокулянта (алюминия).

В первоначальных экспериментах рН полученного при глубинной фильтрации фильтрата доводили от 3,5 до 7,0 с применением 5 н. гидроксида натрия. Несмотря на отсутствие влияния на молекулярную массу полисахарида, это привело к частичному деацетилированию О-ацетильных групп 33F.

Было высказано предположение, что деацетилирование было вызвано высоким локальным рН, возникшим при нейтрализации 5 н. гидроксидом натрия. Поэтому было решено регулировать рН раствора 33F во время диафильтрации после концентрирования полученного при глубинной фильтрации фильтрата до удобного в обращении объема.

Диафильтрацию проводили против цитрата натрия/фосфата натрия, рН 7,0 (например, 10 мМ фосфата/25 мМ цитрата, рН 7,0).

В качестве альтернативы, вместо цитрата также можно использовать 25 мМ ЭДТА.

7. Фильтрация с помощью активированного угля

Эта операция обеспечивает снижение содержания примесей из клеток-хозяев, таких как белки и нуклеиновые кислоты, а также окрашенных примесей (см. WO 2008118752).

Стадия фильтрации с помощью активированного угля может быть выполнена либо в однопроходном режиме, либо в режиме рециркуляции. Чтобы определить, какой режим обработки лучше всего подходит для серотипа 33F, проводили исследование рециркуляционной фильтрации с помощью активированного угля. В этом эксперименте ретентат, полученный при УФДФ-1, последовательно фильтровали через два 47-миллиметровых диска Cuno R32SP (общая площадь 35 см2) при 170 LMH и определяли содержание примесей после каждого цикла (всего 5 циклов). Удаление примесей было наилучшим при наименьшей нагрузке подачи ~30 л/м². Дополнительное удаление примесей при более чем одном цикле было незначительным, что указывает на то, что использование режима рециркуляции малополезно или не полезно.

8. Дополнительная фильтрация при диаметре пор 0,2 мкм

Несмотря на то, что это необязательно, для некоторых образцов при фильтрации с помощью активированного угля использовали фильтр с диаметром пор 0,2 мкм.

9. Ультрафильтрация/диафильтрация (УФДФ-2)

Эта операция обеспечивает концентрирование продукта до желаемой концентрации и замену 25 мМ цитрата натрия, 10 мМ фосфата натрия, рН 7,0 на буфер, подходящий для конъюгации. Эту стадию выполняют с применением фильтра с отсечением по молекулярной массе, составляющим 30 кДа.

Присутствие остаточного цитрата может препятствовать протеканию реакции конъюгации. Для обеспечения существенного снижения содержания цитрата проводили эксперименты по диафильтрации с применением различных буферов. В этих экспериментах фильтрат после применения угольного фильтра концентрировали в 4 раза и затем подвергали диафильтрации против различных буферов. Образцы удаляли и анализировали на содержание остаточного цитрата. Вода имела наивысший коэффициент задержания, составляющий 50%, и потребовалось бы применение примерно 22 объемов диафильтрации для достижения целевого концентрирования.

Как 10 мМ фосфат натрия, рН 7,0, так и 10 мМ фосфат калия, рН 6,5, имели схожие коэффициенты задержания, составляющие примерно 20%, и потребовалось бы применение 10 объемов диафильтрации для достижения целевого 6-кратного концентрирования.

Хлорид натрия в концентрации 25 мМ имел самый низкий коэффициент задержания, составляющий 8%, и обеспечивал достижение целевого концентрирования при применении 7 объемов диафильтрации. Снижение концентрации хлорида натрия до 10 мМ привело к увеличению коэффициента задержания до 28%.

Для обеспечения достижения остаточного содержания цитрата концентрацию хлорида натрия увеличивали до 50 мМ. После применения шести объемов диафильтрации 50 мМ хлорида натрия ретентат подвергали диафильтрации против воды с применением еще шести объемов диафильтрации.

10. Стерилизующая фильтрация

Заключительной операцией перед наполнением бутылей для хранения является стерилизующая фильтрация (фильтрация при диаметре пор 0,2 мкм).

11. Однородность

Для демонстрации того, что описанный выше способ извлечения и очистки может обеспечить воспроизводимые результаты, были получены три установочных серии. Серию культуральной жидкости подвергали флокуляции и центрифугированию с применением способа, описанного выше.

Стадия и общие выходы для трех установочных серий приведены в таблице 6. Выходы всех стадий составляют примерно 90% или более и характеризуются высокой воспроизводимостью. Средний общий выход составляет 73%.

Результаты анализа для трех установочных серий приведены в таблице 3. Указанные три установочные серии соответствовали всем предварительно определенным критериям приемлемости.

Результаты анализа для трех установочных серий приведены в таблице 7.

Были получены еще две серии с применением той же процедуры за исключением того, что флокуляцию проводили при 50°С вместо 20°С. Результаты анализа для этих серий совместно со средними результатами для установочных серий приведены в таблице 8. Эти результаты явным образом показывают, что повышение температуры флокуляции не оказало никакого влияния на качество продукта.

Пример 3. Очистка пневмококкового полисахарида серотипа 15В

Схема технологического процесса очистки пневмококкового полисахарида 15В представлена на фигуре 1. Процесс начинается с обработанной NLS культуральной жидкости и включает отдельные операции извлечения (флокуляцию, центрифугирование и глубинную фильтрацию), за которыми следуют отдельные операции очистки (ультрафильтрация и фильтрация с помощью активированного угля).

1. Исходный материал

Процесс начинается с инактивированной NLS культуральной жидкости S. pneumoniae серотипа 15В. Культуры выращивали в среде Hy-Soy. В конце роста (о чем свидетельствует отсутствие дальнейшего увеличения оптической плотности) культуры инактивировали с помощью NLS (см. ЕР 2129693).

2. Флокуляция

Основная цель этой стадии заключается в осаждении клеточного дебриса, белков и нуклеиновых кислот клеток-хозяев. Она также помогает в последующих операциях осветления. Флокуляцию проводили с применением культуральной жидкости, лизированной путем добавления NLS.

Подобно примерам 1 и 2, были проведены эксперименты для изучения влияния различных параметров на флокуляцию.

Оцениваемыми параметрами являлись рН, процентное содержание квасцов и время выдерживания.

Эти данные показали, что удаление белка при рН 2,5-4,0 и 1-3% квасцов было достаточно эффективным, при этом более 90% белковых примесей было удалено за одну эту стадию. На эффективность удаления примесей не влияло время выдерживания (1, 4 или 24 часа).

Для подтверждения условий флокуляции, разработанных для 15В, было проведено исследование согласно ПЭ по изучению влияния концентрации квасцов, рН и времени выдерживания на извлечение полисахарида, прозрачность и удаление примесей. Диапазон параметров для рН, процентного содержания квасцов и времени выдерживания: 2-4, 0-4% масс./об. и 1-4 часа, соответственно.

Экспериментальные данные для этого исследования согласно ПЭ приведены в таблице 9. Всего в проектном поле было проведено 20 экспериментов.

Результаты показали, что в пределах проектного поля диапазон предпочтительных значений для рН, процентного содержания квасцов и времени выдерживания для операций флокуляции был достаточно широким, рН: 2,7-3,8; квасцы: 1-2,5% (масс./об.); и время выдерживания: 1,5-3 часа. Схожие результаты наблюдали в исследованиях согласно ПЭ для других серотипов.

Описанные выше эксперименты проводили при 20°С.

Для дальнейшего определения влияния условий флокуляции на отдельные операции осветления было проведено исследование непрерывного центрифугирования культуральной жидкости, подвергнутой флокуляции при 50°С. Как и в случае с культуральной жидкостью, подвергавшейся флокуляции при 20°С, не наблюдали значительного увеличения прозрачности центрифугата при скоростях подачи 400-800 мл/мин для культуральной жидкости, подвергавшейся флокуляции при 50°С.

3. Центрифугирование

Центрифугирование проводили для очистки центрифугата, чтобы он мог быть отфильтрован с приемлемой производительностью. Скорость центрифугирования составляла 12000 xg.

4. Глубинная фильтрация

Несмотря на то, что центрифугирование является основной операцией разделения твердой и жидкой фаз, оно не обеспечивает удаление всех частиц из потока сырья, между центрифугированием и первой операцией ультрафильтрации была включена операция глубинной фильтрации.

5. Необязательная фильтрация при диаметре пор 0,45 мкм

Несмотря на то, что это необязательно, для некоторых образцов после глубинной фильтрации использовали фильтр с диаметром пор 0,45 мкм.

6. Ультрафильтрация/диафильтрация (УФДФ-1)

Очистка начинается с фильтрата, полученного при глубинной фильтрации (на стадиях 4 или 5, описанных выше).

Эта операция обеспечивает замену отработанной культуральной среды на буфер при одновременном снижении содержания низкомолекулярных примесей из клеток-хозяев и остаточного флокулянта (алюминия).

В первоначальных экспериментах рН полученного при глубинной фильтрации фильтрата доводили от 3,5 до 7,0 с применением 5 н. гидроксида натрия. Однако это может привести к частичному деацетилированию О-ацетильных групп 15В.

Поэтому было решено регулировать рН раствора 15В во время диафильтрации после концентрирования полученного при глубинной фильтрации фильтрата до удобного в обращении объема.

В исследованиях по выбору буфера для 15В оценивали концентрации цитрата от 10 до 50 мМ совместно с различными концентрациями фосфата натрия.

Диафильтрацию проводили против цитрата натрия/фосфата натрия, рН 7,0 (например, 10 мМ фосфата/25 мМ цитрата, рН 7,0).

7. Фильтрация с помощью активированного угля

Эта операция обеспечивает снижение содержания примесей из клеток-хозяев, таких как белки и нуклеиновые кислоты, а также окрашенных примесей (см. WO 2008118752).

Последовательно применяли три угольных фильтра Cuno R32SP диаметром 7 дюймов (примерно 17,8 см). Ретентат, полученный при УФДФ-1, сначала пропускали через фильтр таким образом, чтобы был зарегистрирован УФ-сигнал при 280 нм для исходного раствора. После этого ретентат фильтровали при скорости потока 32 LMH, и регистрировали УФ280 для фильтрата с угольного фильтра и сравнивали с таковым для ретентата. Снижение сигнала УФ280 примерно на 95% показало, что примеси, связанные с белком, удаляются при однократном прохождении через угольные фильтры.

Стадия фильтрации с помощью активированного угля может быть выполнена либо в однопроходном режиме, либо в многопроходном режиме, либо в режиме рециркуляции. Чтобы определить, будут ли дополнительные прохождения через угольный фильтр каким-либо образом полезны в случае серотипа 15В, проводили эксперимент, в котором ретентат, полученный при УФДФ-1, последовательно фильтровали через три диска Cuno R32SP диаметром 7 дюймов (примерно 17,8 см) при 64 LMH. Оценку содержания примесей, оценку сигнала УФ280 и анализ Лоури с применением бората на содержание белка выполняли после каждого прохождения. Результаты показали, что одного прохождения было достаточно для удаления большинства примесей. Концентрация белка в фильтрате после одного прохождения и в фильтрате после второго прохождения составляла 25,2 и 20,6 мкг/мл, соответственно. С учетом разбавления вследствие промывки фильтров, количество белка в фильтрате после первого прохождения и в фильтрате после второго прохождения было примерно одинаковым.

8. Ультрафильтрация/диафильтрация (УФДФ-2)

Эта операция обеспечивает концентрирование продукта до желаемой концентрации и замену 25 мМ цитрата натрия, 10 мМ фосфата натрия, рН 7,0 на буфер, подходящий для конъюгации. Эту стадию выполняют с применением фильтра с отсечением по молекулярной массе, составляющим 30 кДа.

Присутствие остаточного цитрата может препятствовать протеканию реакции конъюгации. Для обеспечения существенного снижения содержания цитрата проводили эксперименты по диафильтрации с применением различных буферов (см. примеры 1 и 2).

9. Гомогенизация

Очищенные полисахариды 15В могут быть гомогенизированы, например, путем механической калибровки (см., например, WO 2015110942).

10. Стерилизующая фильтрация

Заключительной операцией перед наполнением бутылей для хранения является стерилизующая фильтрация (фильтрация при диаметре пор 0,2 мкм).

11. Однородность

Для демонстрации того, что описанный выше способ извлечения и очистки может обеспечить воспроизводимые результаты, были получены три установочных серии. Серию культуральной жидкости подвергали флокуляции и центрифугированию с применением способа, описанного выше.

Стадия и общие выходы для трех установочных серий приведены в таблице 10. Выходы всех стадий составляют примерно 75-98%, высоко воспроизводимы и устойчивы. Средний общий выход составляет 60%.

Результаты анализа для трех установочных серий приведены в таблице 11. Указанные три установочные серии соответствовали всем предварительно определенным критериям приемлемости.

Результаты анализа для трех установочных серий приведены в таблице 11.

Были получены еще две серии с применением той же процедуры за исключением того, что флокуляцию проводили при 50°С вместо 20°С. Результаты анализа для этих серий совместно со средними результатами для установочных серий приведены в таблице 8. Эти результаты явным образом показывают, что повышение температуры флокуляции не оказало никакого влияния на качество продукта.

Пример 4. Очистка пневмококкового полисахарида серотипа 22F

Схема технологического процесса очистки пневмококкового полисахарида 22F представлена на фигуре 1. Процесс начинается с инактивированной NLS культуральной жидкости и включает типовые операции извлечения (флокуляцию, центрифугирование и глубинную фильтрацию), за которыми следуют типовые операции очистки (ультрафильтрация и фильтрация с помощью активированного угля).

1. Исходный материал

Процесс начинается с инактивированной NLS культуральной жидкости S. pneumoniae серотипа 22F. Культуры выращивали в среде Hy-Soy. В конце роста (о чем свидетельствует отсутствие дальнейшего увеличения оптической плотности) культуры обрабатывали NLS (см. ЕР 2129693).

2. Флокуляция

Основная цель этой стадии заключается в осаждении клеточного дебриса, белков и нуклеиновых кислот клеток-хозяев. Она также помогает в последующих операциях осветления. Флокуляцию проводили с применением культуральной жидкости, лизированной путем добавления NLS.

2.1 Влияние рН и квасцов

Подобно примерам 1 и 2, были проведены эксперименты для изучения влияния различных параметров на флокуляцию.

Эти данные показали, что удаление белка при рН 2,5-4,0 и 1,5-3% квасцов было достаточно эффективным, при этом более 90% белковых примесей было удалено за одну эту стадию.

Для подтверждения условий флокуляции, разработанных для 22F, было проведено исследование согласно ПЭ по изучению влияния концентрации квасцов и рН на извлечение полисахарида, прозрачность и удаление примесей. Эффективность удаления белка была очень высокой при пониженном рН. Комбинация квасцов и регулирования рН оказалась эффективной.

2.2 Влияние температуры

Было проведено исследование по изучению влияния температуры на размер частиц в культуральной жидкости после флокуляции. После флокуляции (2% масс./об. квасцов, рН 3,5) при 20°С подвергнутую флокуляции культуральную жидкость нагревали до требуемой температуры и выдерживали в течение одного часа. После охлаждения до комнатной температуры (15-25°С) подвергнутую флокуляции культуральную жидкость центрифугировали при 12000 xg и определяли прозрачность (OD600).

Результаты приведены в таблице 13.

При повышенных температурах наблюдали значительное снижение OD600 центрифугата.

В предыдущих экспериментах было замечено, что размер частиц в культуральной жидкости после флокуляции был больше при более высоких температурах. Визуальное сравнение, показывающее изменение размера частиц в зависимости от температуры флокуляции, показано на фигуре 6. Для первого эксперимента температуру флокуляции поддерживали равной комнатной температуре (КТ), а для второго эксперимента повышали до 45°С на 1 час.

На фигуре 6 средний размер частиц в подвергнутой флокуляции культуральной жидкости после 1 часа выдерживания при комнатной температуре и при нагревании до 45°С составлял 9,8 мкм и 65 мкм, соответственно. Было отмечено существенное увеличение размера частиц в случае подвергнутой флокуляции культуральной жидкости, нагретой до 45°С. Помимо большего размера частиц, наблюдается также уменьшение количества мелких частиц (<1 мкм). Образование крупных частиц и уменьшение количества мелких частиц облегчает проведение последующих стадий (например, центрифугирования и глубинной фильтрации) и приводит к получению более чистого центрифугата.

Были получены две дополнительные серии 22F, для которых единственным отличием была температура флокуляции (20°С или 50°С). Прозрачность центрифугата (после центрифугирования) и полученного при глубинной фильтрации фильтрата (см. ниже) для этих серий показаны в таблице 14.

3. Центрифугирование

Центрифугирование проводили для очистки центрифугата, чтобы он мог быть отфильтрован с приемлемой производительностью. Скорость центрифугирования составляла 12000 xg.

4. Глубинная фильтрация

Несмотря на то, что центрифугирование является основной операцией разделения твердой и жидкой фаз, оно не обеспечивает удаление всех частиц из потока сырья, между центрифугированием и первой операцией ультрафильтрации была включена операция глубинной фильтрации.

5. Необязательная фильтрация при диаметре пор 0,45 мкм

Несмотря на то, что это необязательно, для некоторых образцов после глубинной фильтрации использовали фильтр с диаметром пор 0,45 мкм.

6. Ультрафильтрация/диафильтрация (УФДФ-1)

Очистка начинается с фильтрата, полученного при глубинной фильтрации (на стадиях 4 или 5, описанных выше).

Эта операция обеспечивает замену отработанной культуральной среды на буфер при одновременном снижении содержания низкомолекулярных примесей из клеток-хозяев и остаточного флокулянта (алюминия).

Перед выполнением фильтрации с помощью активированного угля рН полисахарида 22F доводили до 7,0±0,5. Как показано выше, использование NaOH для регулирования рН может привести к частичному деацетилированию О-ацетильных групп. Поскольку полисахарид 22F также содержит О-ацетильную группу, было решено регулировать рН раствора 22F во время диафильтрации после концентрирования полученного при глубинной фильтрации фильтрата до удобного в обращении объема.

В исследованиях по выбору буфера для серотипа 22F оценивали концентрации цитрата от 0 до 40 мМ совместно с различными концентрациями фосфата натрия. Наибольшей производительности мембраны при диафильтрации достигают, когда концентрация цитрата превышает 20 мМ, а концентрация фосфата составляет 10 мМ или менее.

7. Фильтрация с помощью активированного угля

Эта операция обеспечивает снижение содержания примесей из клеток-хозяев, таких как белки и нуклеиновые кислоты, а также окрашенных примесей (см. WO 2008118752).

Ретентат УФДФ1 фильтровали через три или четыре угольных фильтра R32SP диаметром 7 дюймов (примерно 17,8 см), наложенных один на другой. Был проведен ряд экспериментов по определению эффективности угольных фильтров R32SP для удаления остаточного сигнала УФ и остаточных примесей (RI) из ретентата УФДФ1. Поглощение УФ-излучения при длине волны 260/280 нм снижалось по меньшей мере на 95%. Это указывает на существенное удаление связанных с белком и нуклеиновыми кислотами примесей из ретентата УФДФ1. Результаты показывают, что уголь обладает превосходной способностью к удалению примесей, связанных с белком.

8. Ультрафильтрация/диафильтрация (УФДФ-2)

Эта операция обеспечивает концентрирование продукта до желаемой концентрации и замену 25 мМ цитрата натрия, 10 мМ фосфата натрия, рН 7,0 на буфер, подходящий для конъюгации. Эту стадию выполняют с применением фильтра с отсечением по молекулярной массе, составляющим 30 кДа.

Присутствие остаточного цитрата может препятствовать протеканию реакции конъюгации. Для обеспечения существенного снижения содержания цитрата проводили эксперименты по диафильтрации с применением различных буферов (см. примеры 1 и 2).

9. Гомогенизация

Очищенные полисахариды 22F могут быть гомогенизированы, например, путем механической калибровки (см., например, WO 2015110942).

10. Стерилизующая фильтрация

Заключительной операцией перед наполнением бутылей для хранения является стерилизующая фильтрация (фильтрация при диаметре пор 0,2 мкм).

11. Однородность

Для демонстрации того, что описанный выше способ извлечения и очистки может обеспечить воспроизводимые результаты, были получены три установочных серии (температура флокуляции 20°С). Серию культуральной жидкости подвергали флокуляции и центрифугированию с применением способа, описанного выше.

Стадия и общие выходы для трех установочных серий приведены в таблице 14. Выходы всех стадий составляют примерно 90% или более и характеризуются высокой воспроизводимостью. Средний общий выход составляет 58%.

Результаты анализа для трех установочных серий приведены в таблице 15.

Были получены еще две серии с применением той же процедуры за исключением того, что флокуляцию проводили при 50°С вместо 20°С. Результаты анализа для этих серий совместно со средними результатами для установочных серий приведены в таблице 16. Эти результаты явным образом показывают, что повышение температуры флокуляции не оказало никакого влияния на качество продукта.

Пример 5. Очистка пневмококкового полисахарида серотипа 10А

Схема технологического процесса очистки пневмококкового полисахарида 10А представлена на фигуре 1. Процесс начинается с инактивированной NLS культуральной жидкости и включает типовые операции извлечения (флокуляцию, центрифугирование и глубинную фильтрацию), за которыми следуют типовые операции очистки (ультрафильтрация и фильтрация с помощью активированного угля).

1. Исходный материал

Процесс начинается с инактивированной NLS культуральной жидкости S. pneumoniae серотипа 10А. Культуры выращивали в среде Hy-Soy. В конце роста (о чем свидетельствует отсутствие дальнейшего увеличения оптической плотности) культуры инактивировали с помощью NLS (см. ЕР 2129693).

2. Флокуляция

Основная цель этой стадии заключается в осаждении клеточного дебриса, белков и нуклеиновых кислот клеток-хозяев. Она также помогает в последующих операциях осветления. Флокуляцию проводили с применением культуральной жидкости, лизированной путем добавления NLS.

Оптимальные значения рН для флокуляции серотипа 10A определяли согласно ПЭ (см., например, примеры 1 и 3).

На основании предсказанных профилей, диапазон предпочтительных значений практически оптимален при рН 3,5 и 2% квасцов. Это также показывает, что рН несколько ниже 3,5 приведет к незначительным улучшениям в удалении белка и прозрачности центрифугата при небольшом снижении выхода полисахарида, но в то же время чистота пика может быть немного выше.

Исследовательская работа для других серотипов показала, что повышение температуры во время флокуляции приводило к повышению производительности глубинного фильтра. Однако нагревание культуральной жидкости может влиять на молекулярную массу полисахарида. Проводили эксперименты с 10А, чтобы определить, приведет ли повышение температуры к снижению молекулярной массы. В первом эксперименте подвергнутые флокуляции культуральные жидкости инкубировали при температуре 20, 50, 60 и 70°С и времени выдерживания 1, 4 и 22 часа. Очищали только образцы с 4-часовым временем выдерживания при каждой температуре. Для всех образцов были показаны одинаковые спектры 1Н-ЯМР, однако для образцов, инкубированных при 60°С и 70°С, были показано существенное снижение молекулярной массы. Во втором эксперименте подвергнутые флокуляции культуральные жидкости инкубировали при температуре 20, 35, 45 и 55°С с временем выдерживания 1, 2 и 4 часа, и очищали все образцы. Это исследование показало очень незначительные изменения в молекулярной массе в течение периода до 4 часов при 45°С. Наблюдали небольшое снижение молекулярной массы в течение первого часа обработки при 55°С, но разница находилась в пределах погрешности анализа.

3. Центрифугирование

Центрифугирование проводили для очистки центрифугата, чтобы он мог быть отфильтрован с приемлемой производительностью. Скорость центрифугирования составляла 12000 xg.

4. Глубинная фильтрация

Несмотря на то, что центрифугирование является основной операцией разделения твердой и жидкой фаз, оно не обеспечивает удаление всех частиц из потока сырья, между центрифугированием и первой операцией ультрафильтрации была включена операция глубинной фильтрации.

5. Необязательная фильтрация при диаметре пор 0,45 мкм

Несмотря на то, что это необязательно, для некоторых образцов после глубинной фильтрации использовали фильтр с диаметром пор 0,45 мкм.

6. Ультрафильтрация/диафильтрация (УФДФ-1)

Очистка начинается с фильтрата, полученного при глубинной фильтрации (на стадиях 4 или 5, описанных выше).

Эта операция обеспечивает замену отработанной культуральной среды на буфер при одновременном снижении содержания низкомолекулярных примесей из клеток-хозяев и остаточного флокулянта (алюминия).

Перед выполнением фильтрации с помощью активированного угля рН полисахарида 22F доводили до 7,0±0,5.

Первоначально диафильтрацию проводили против 10 мМ фосфата натрия, рН 7,0. Это позволило довести рН до желаемого значения. Однако во время диафильтрации при использовании только фосфата натрия образовывался осадок белого цвета. Указанное твердое вещество белого цвета выделили и определили, что оно содержит фосфат алюминия. Фосфат алюминия нерастворим в воде при нейтральном рН и образуется из остаточного алюминия, присутствующего после стадии флокуляции. Для предотвращения образования фосфата алюминия было решено добавить в буфер для диафильтрации хелатирующий агент. По результатам работы с другими серотипами был выбран цитрат натрия. Концентрации цитрата более 10 мМ были эффективны для предотвращения помутнения с течением времени. Было показано, что концентрации цитрата от 25 мМ обеспечивают удаление остаточного алюминия до содержания менее 1 ppm.

7. Фильтрация с помощью активированного угля

Эта операция обеспечивает снижение содержания примесей из клеток-хозяев, таких как белки и нуклеиновые кислоты, а также окрашенных примесей (см. WO 2008118752).

Ретентат УФДФ1 фильтровали через дисковый угольный фильтр R32SP. Результаты показывают, что уголь обладает превосходной способностью к удалению примесей, связанных с белком.

8. Ультрафильтрация/диафильтрация (УФДФ-2)

Эта операция обеспечивает концентрирование продукта до желаемой концентрации и замену 25 мМ цитрата натрия, 10 мМ фосфата натрия, рН 7,0 на буфер, подходящий для конъюгации. Эту стадию выполняют с применением фильтра с отсечением по молекулярной массе, составляющим 30 кДа.

Присутствие остаточного цитрата может препятствовать протеканию реакции конъюгации. Для обеспечения существенного снижения содержания цитрата проводили эксперименты по диафильтрации с применением различных буферов (см. примеры 1 и 2).

9. Стерилизующая фильтрация

Заключительной операцией перед наполнением бутылей для хранения является стерилизующая фильтрация (фильтрация при диаметре пор 0,2 мкм).

10. Однородность

Для демонстрации того, что описанный выше способ извлечения и очистки может обеспечить воспроизводимые результаты, были получены три установочных серии (температура флокуляции 45°С). Серию культуральной жидкости подвергали флокуляции и центрифугированию с применением способа, описанного выше.

Стадия и общие выходы для трех установочных серий приведены в таблице 17. Выходы всех стадий составляют более 72% и характеризуются высокой воспроизводимостью. Средний общий выход составляет 68%.

Результаты анализа для трех установочных серий приведены в таблице 18.

Пример 6. Очистка пневмококкового полисахарида серотипа 11А

Схема технологического процесса очистки пневмококкового полисахарида 11А представлена на фигуре 1. Процесс начинается с инактивированной NLS культуральной жидкости и включает типовые операции извлечения (флокуляцию, центрифугирование и глубинную фильтрацию), за которыми следуют типовые операции очистки (ультрафильтрация и фильтрация с помощью активированного угля).

1. Исходный материал

Процесс начинается с инактивированной NLS культуральной жидкости S. pneumoniae серотипа 11А. Культуры выращивали в среде Hy-Soy. В конце роста (о чем свидетельствует отсутствие дальнейшего увеличения оптической плотности) культуры инактивировали с помощью NLS (см. ЕР 2129693).

2. Флокуляция

Основная цель этой стадии заключается в осаждении клеточного дебриса, белков и нуклеиновых кислот клеток-хозяев. Она также помогает в последующих операциях осветления. Флокуляцию проводили с применением культуральной жидкости, лизированной путем добавления NLS.

Предыдущая работа над процессом очистки для других серотипов показала, что на операцию осветления влияли рН раствора и концентрация добавленных квасцов. Для понимания влияния этих факторов на флокуляцию серотипа 11А было проведено исследование согласно ПЭ, которое также включает еще один фактор - время флокуляции, которое может влиять на процесс флокуляции. Диапазоны для каждого параметра перечислены в таблице 19.

Была проведена серия из 20 экспериментов с изменением этих 3 параметров.

Взаимосвязь между каждым параметром (концентрация квасцов, рН и время флокуляции) и откликами (извлечение ПС, OD600 и удаление белка) в процессе флокуляции анализировали с помощью профилей прогнозирования. Наименее значимым параметром является время флокуляции, которое почти не влияет ни на удаление белка, ни на прозрачность, и оказывает очень незначительное влияние на извлечение полисахарида, когда концентрация квасцов и рН имеют их средние значения. Концентрация квасцов преимущественно влияет на прозрачность. Оптимальная концентрация квасцов составляет примерно 2,5%, что обеспечивает наилучшую прозрачность. Однако разница в OD600 мала, когда концентрация квасцов составляет от 1,5% до 3%. С другой стороны, рН флокуляции преимущественно влияет на удаление белка, большее удаление белка происходит при более низком рН. При рН 3,5 и ниже достигается максимальное удаление примесей.

Были спланированы дополнительные эксперименты для определения того, улучшает ли повышение температуры флокуляции также последующие операции.

Для определения влияния температуры на флокуляцию серотипа 11А проводили эксперимент при трех различных температурах. Помимо температуры, оценивали две различные скорости перемешивания во время флокуляции. Культуральную жидкость 11А подвергали флокуляции с применением 2% квасцов, рН 3,5, при различных температурах в течение одного часа. После флокуляции культуральную жидкость центрифугировали и определяли прозрачность центрифугата. Затем центрифугат фильтровали через глубинный фильтр и определяли производительность фильтра. Экспериментальные условия и результаты показаны в таблице 20. Фильтрат после применения глубинного фильтра дополнительно фильтровали через тупиковый фильтр с диаметром пор 0,45 мкм с применением модели Vmax.

Не наблюдали различий в производительности глубинного фильтра для всех четырех условий, так как во всех случаях она превышала 400 л/м². Тем не менее, были обнаружены значимые отличия в результатах определения Vmax при диаметре пор 0,45 мкм. Флокуляция при 50°С характеризовалась значением Vmax ~1300 л/м², что было примерно в 8 раз выше, чем в других условиях. Схожим образом, флокуляция при 10°С характеризовалась самым низким значением Vmax.

Потенциальной проблемой флокуляции при повышенной температуре является влияние повышенной температуры на молекулярную структуру и молекулярную массу 11А. Серотип 11А содержит три О-ацетильные группы и одну глицериновую группу, соединенную с повторяющимся полисахаридным звеном через фосфат. Все эти группы потенциально могут расщепляться во время флокуляции при низком рН и повышенной температуре. Другим влиянием повышенной температуры на молекулу является влияние на молекулярную массу. Во время флокуляции при этих условиях (рН 3,5) более длинная цепь полисахаридов может расщепляться с образованием более коротких цепей, что может привести к снижению молекулярной массы. Проведенный авторами изобретения эксперимент показывает, что полученный продукт идентичен исходному 11А, очищенному после флокуляции при комнатной температуре (см. таблицу 24).

3. Центрифугирование

Центрифугирование проводили для очистки центрифугата, чтобы он мог быть отфильтрован с приемлемой производительностью. Скорость центрифугирования составляла 12000 xg.

4. Глубинная фильтрация

Несмотря на то, что центрифугирование является основной операцией разделения твердой и жидкой фаз, оно не обеспечивает удаление всех частиц из потока сырья, между центрифугированием и первой операцией ультрафильтрации была включена операция глубинной фильтрации.

Для определения влияние времени выдерживания культуральной жидкости на производительность глубинного фильтра концентрат, полученный после флокуляции при 20°С с применением 2% квасцов и рН 3,5, выдерживали до трех дней при 2-8°С. Затем концентрат фильтровали с применением глубинного фильтра и определяли производительность фильтра. Не наблюдали существенных различий в производительности глубинного фильтра в течение двух дней выдерживания (таблица 21).

5. Необязательная фильтрация при диаметре пор 0,45 мкм

Несмотря на то, что это необязательно, для некоторых образцов после глубинной фильтрации использовали фильтр с диаметром пор 0,45 мкм.

6. Ультрафильтрация/диафильтрация (УФДФ-1)

Очистка начинается с фильтрата, полученного при глубинной фильтрации (на стадиях 4 или 5, описанных выше).

Эта операция обеспечивает замену отработанной культуральной среды на буфер при одновременном снижении содержания низкомолекулярных примесей из клеток-хозяев и остаточного флокулянта (алюминия).

В ходе исследовательской работы для других серотипов (см. выше) было обнаружено, что 10 мМ фосфат натрия, 25 мМ цитрат натрия, рН 7,0, является подходящим буфером для применения в процессе УФ/ДФ. Фосфатный буфер применяют для обеспечения нейтрального значения рН. Цитратный буфер применяют в качестве хелатирующего агента для удаления алюминия.

7. Фильтрация с помощью активированного угля

Эта операция обеспечивает снижение содержания примесей из клеток-хозяев, таких как белки и нуклеиновые кислоты, а также окрашенных примесей (см. WO 2008118752).

Ретентат УФДФ1 фильтровали через дисковый угольный фильтр R32SP. Результаты показывают, что уголь обладает превосходной способностью к удалению примесей, связанных с белком.

8. Ультрафильтрация/диафильтрация (УФДФ-2)

Эта операция обеспечивает концентрирование продукта до желаемой концентрации и замену 25 мМ цитрата натрия, 10 мМ фосфата натрия, рН 7,0 на буфер, подходящий для конъюгации. Эту стадию выполняют с применением фильтра с отсечением по молекулярной массе, составляющим 30 кДа.

Присутствие остаточного цитрата может препятствовать протеканию реакции конъюгации. Для обеспечения существенного снижения содержания цитрата проводили эксперименты по диафильтрации с применением различных буферов (см. примеры 1 и 2).

9. Гомогенизация

Очищенные полисахариды 11А могут быть гомогенизированы, например, путем механической калибровки (см., например, WO 2015110942).

10. Стерилизующая фильтрация

Заключительной операцией перед наполнением бутылей для хранения является стерилизующая фильтрация (фильтрация при диаметре пор 0,2 мкм).

11. Однородность

Для демонстрации того, что описанный выше способ извлечения и очистки может обеспечить воспроизводимые результаты, были получены три установочных серии. Серию культуральной жидкости подвергали флокуляции и центрифугированию с применением способа, описанного выше.

Стадия и общие выходы для трех установочных серий приведены в таблице 17.

Результаты анализа для трех установочных серий приведены в таблице 23.

Проводили флокуляцию при различных температурах. Одну из флокуляции проводили при 50°С, и часть этого материала очищали с применением описанного выше способа. Результаты анализа этой очистки совместно со средними результатами для установочных серий приведены в таблице 24. Эти результаты явным образом показывают, что повышение температуры флокуляции не оказывало никакого влияния на качество продукта.

Пример 7. Очистка пневмококкового полисахарида серотипа 12F

Схема технологического процесса очистки пневмококкового полисахарида 12F представлена на фигуре 1. Процесс начинается с инактивированной NLS культуральной жидкости и включает типовые операции извлечения (флокуляцию, центрифугирование и глубинную фильтрацию), за которыми следуют типовые операции очистки (ультрафильтрация и фильтрация с помощью активированного угля).

Стадия гомогенизации является необязательной.

1. Исходный материал

Процесс начинается с инактивированной NLS культуральной жидкости S. pneumoniae серотипа 12F. Культуры выращивали в среде Hy-Soy. В конце роста (о чем свидетельствует отсутствие дальнейшего увеличения оптической плотности) культуры обрабатывали NLS (см. ЕР 2129693).

2. Флокуляция

Основная цель этой стадии заключается в осаждении клеточного дебриса, белков и нуклеиновых кислот клеток-хозяев. Она также помогает в последующих операциях осветления. Флокуляцию проводили с применением культуральной жидкости, лизированной путем добавления NLS.

Предыдущая работа над процессом очистки для других серотипов показала, что на операцию осветления влияли рН раствора и концентрация квасцов, но не время перемешивания при флокуляции. Для понимания влияния этих факторов на флокуляцию серотипа 12F было проведено исследование согласно ПЭ. Диапазоны для каждого параметра перечислены в таблице 25.

Была проведена серия из 16 экспериментов с изменением этих 3 параметров (при комнатной температуре).

Взаимосвязь между каждым параметром (концентрация квасцов, рН и время флокуляции) и откликами (извлечение ПС, OD600 и удаление белка) в процессе флокуляции анализировали с помощью профилей прогнозирования. Наименее значимым параметром является время флокуляции, которое почти не влияет ни на удаление белка, ни на извлечение полисахарида, и очень незначительно влияет на прозрачность, когда концентрация квасцов и рН имеют их средние значения. Концентрация квасцов преимущественно влияет на прозрачность. Оптимальная концентрация квасцов составляет примерно 2,7%, что обеспечивает наилучшую прозрачность. Однако разница OD600 мала, когда концентрация квасцов составляет от 1,5% до 3,5%. Концентрация квасцов оказывает некоторое влияние на извлечение полисахарида. Когда ее увеличивают до примерно 4%, степень извлечения полисахарида немного снижается. С другой стороны, рН флокуляции преимущественно влияет на удаление белка, большее удаление белка происходит при более низком рН. При рН 3,5 и ниже достигается максимальное удаление примесей.

Работа над другими серотипами показала, что повышение температуры во время флокуляции приводило к повышению производительности глубинного фильтра.

Когда температура флокуляции была увеличена до 50°С, прозрачность центрифугата резко возрастала (OD600 снижалась от 0,338 (при 20°С) до 0,073 (при 50°С)), а производительность фильтра увеличилась более чем в 8 раз. В случае использования для флокуляции более высокой температуры размеры частиц резко смещались в диапазон больших размеров частиц, что затем облегчало центрифугирование.

Также были проведены другие эксперименты для понимания влияния температуры флокуляции на процесс флокуляции. Культуральную жидкость серотипа 12F подвергали флокуляции с применением 2% квасцов, рН 3,5, при двух различных температурах в течение одного часа. После флокуляции культуральную жидкость центрифугировали и определяли прозрачность центрифугата (OD600). Затем центрифугат фильтровали через глубинные фильтры для определения производительности фильтра. Фильтрат после применения глубинного фильтра дополнительно фильтровали через тупиковый фильтр с диаметром пор 0,45 мкм с применением модели Vmax. Результаты этих экспериментов приведены в таблице 26.

Из таблицы 26 видно, что OD600 ниже в случае использования для флокуляции температуры 50°С. Не наблюдали различий в производительности глубинного фильтра для всех указанных условий, поскольку производительность фильтра не была достигнута ни для одного из них. Однако данные Vmax при 0,45 мкм по-прежнему показывают, что более высокая температура флокуляции намного предпочтительнее.

3. Центрифугирование

Центрифугирование проводили для очистки центрифугата, чтобы он мог быть отфильтрован с приемлемой производительностью. Скорость центрифугирования составляла 12000 xg.

4. Глубинная фильтрация

Несмотря на то, что центрифугирование является основной операцией разделения твердой и жидкой фаз, оно не обеспечивает удаление всех частиц из потока сырья, между центрифугированием и первой операцией ультрафильтрации была включена операция глубинной фильтрации.

5. Необязательная фильтрация при диаметре пор 0,45 мкм

Несмотря на то, что это необязательно, для некоторых образцов после глубинной фильтрации использовали фильтр с диаметром пор 0,45 мкм.

6. Ультрафильтрация/диафильтрация (УФДФ-1)

Очистка начинается с фильтрата, полученного при глубинной фильтрации (на стадиях 4 или 5, описанных выше).

Эта операция обеспечивает замену отработанной культуральной среды на буфер при одновременном снижении содержания низкомолекулярных примесей из клеток-хозяев и остаточного флокулянта (алюминия).

В ходе исследовательской работы для других серотипов (см. выше) было обнаружено, что 10 мМ фосфат натрия, 25 мМ цитрат натрия, рН 7,0, является подходящим буфером для применения в процессе УФ/ДФ. Фосфатный буфер применяют для обеспечения нейтрального значения рН. Цитратный буфер применяют в качестве хелатирующего агента для удаления алюминия.

7. Фильтрация с помощью активированного угля

Эта операция обеспечивает снижение содержания примесей из клеток-хозяев, таких как белки и нуклеиновые кислоты, а также окрашенных примесей (см. WO 2008118752).

Ретентат УФДФ1 фильтровали через дисковый угольный фильтр R32SP. Результаты показывают, что уголь обладает превосходной способностью к удалению примесей, связанных с белком, а извлечение продукта при фильтрации с помощью активированного угля является превосходным.

Для некоторых образцов (необязательно) после фильтрации с помощью активированного угля была выполнена фильтрация через фильтр с размером пор 0,2 мкм.

8. Ультрафильтрация/диафильтрация (УФДФ-2)

Эта операция обеспечивает концентрирование продукта до желаемой концентрации и замену 25 мМ цитрата натрия, 10 мМ фосфата натрия, рН 7,0 на буфер, подходящий для конъюгации. Эту стадию выполняют с применением фильтра с отсечением по молекулярной массе, составляющим 30 кДа. Присутствие остаточного цитрата может препятствовать протеканию реакции конъюгации. Для обеспечения существенного снижения содержания цитрата проводили эксперименты по диафильтрации с применением различных буферов (см. примеры 1 и 2).

9. Стерилизующая фильтрация

Заключительной операцией перед наполнением бутылей для хранения является стерилизующая фильтрация (фильтрация при диаметре пор 0,2 мкм).

10. Однородность

Для демонстрации того, что описанный выше способ извлечения и очистки может обеспечить воспроизводимые результаты, были получены три установочных серии. Серию культуральной жидкости подвергали флокуляции и центрифугированию с применением способа, описанного выше.

Стадия и общие выходы для трех установочных серий приведены в таблице 27.

Результаты анализа для трех установочных серий приведены в таблице 28.

Пример 8. Очистка полисахаридов Ср5 и Ср8 S. aureus

В этом примере описан процесс очистки для выделения капсульных полисахаридов типа 5 (Ср5) и типа 8 (Ср8) Staphylococcus aureus.

1. Исходный материал

Исходным материалом для процесса очистки являлась собранная содержащая цельные (нелизированные) клетки культуральная жидкость S. aureus.

2. Кислотный гидролиз

После сбора культуральной жидкости S. aureus рН содержащей цельные клетки культуральной жидкости доводили до кислого значения путем добавления сильной кислоты (например, серной кислоты), нагревали и затем инкубировали в течение некоторого периода времени (см. WO 2011041003). После гидролиза культуральную жидкость охлаждали и затем нейтрализовали путем добавления раствора гидроксида натрия.

3. Флокуляция

Флокуляцию проводили путем добавления 10% (масс./об.) водного раствора квасцов (фосфата натрия-алюминия) к охлажденной (20-30°С) нейтрализованной культуральной жидкости (полученной согласно стадии 2 выше) при перемешивании с получением раствора квасцов в культуральной жидкости с конечной концентрацией 2% (масс./об.). Культуральную жидкость нейтрализовали (рН 6,9-7,1) путем добавления раствора гидроксида натрия (1-10 н.). После нейтрализации подвергнутую флокуляции культуральную жидкость инкубировали при комнатной температуре в течение по меньшей мере 10 минут, после чего проводили осветление с помощью микрофильтрации.

4. Осветление культуральной жидкости (микрофильтрация или центрифугирование)

Подвергнутую флокуляции культуральную жидкость осветляли с помощью тангенциальной проточной микрофильтрации с применением мембраны из полых волокон с диаметром пор 0,2 мкм. Целевым продуктом этого осветления являлся пермеат, полученный как на стадии концентрирования, так и на стадии диафильтрации; ретентат в конечном счете отбрасывают. Подвергнутую флокуляции культуральную жидкость концентрировали примерно в 4 раза в условиях постоянного потока при скорости сдвига 4000-8000 с-1. После концентрирования проводили диафильтрацию при постоянном объеме (5 объемов диафильтрации) против деионизированной воды. Диафильтрацию также проводят в условиях постоянного потока.

После диафильтрации объединенный пермеат со стадий концентрирования и диафильтрации использовали в качестве сырья для следующей операции.

5. Ультрафильтрация/диафильтрация (УФДФ-1)

Полученный при микрофильтрации пермеат концентрировали и подвергали диафильтрации с применением мембраны из полых волокон для тангенциальной поточной ультрафильтрации. Ретентат собирали в качестве продукта; пермеат отбрасывали как отходы. Сырье (полученный при микрофильтрации пермеат) концентрировали примерно в 8-15 раз. После концентрирования ретентат подвергали диафильтрации (при постоянном объеме) против по меньшей мере 10 объемов диафильтрации 125 мМ натрий-фосфатного буфера, рН 7,5.

После диафильтрации ретентат извлекали путем слива из фильтрующего устройства.

В качестве альтернативы, центрифугирование также может быть применено в качестве способа осветления для отделения осажденного в культуральной жидкости после флокуляции клеточного дебриса от жидкой фазы. Затем супернатант может быть обработан с применением последующей стадии фильтрации с помощью активированного угля.

6. Фильтрация с помощью активированного угля

Затем ретентат для ультрафильтрации/диафильтрации фильтровали с применением стадии фильтрации с помощью активированного угля. Для очистки как Ср5, так и Ср8 применяли угольный фильтр Cuno класса R32SP. Ретентат, как правило, подавали через угольный фильтр (фильтры) в однопроходном режиме. Углеродный фильтрат с угольного фильтра собирали в качестве продукта. После фильтрации продукта уголь промывали 125 мМ натрий-фосфатным (рН 7,5) буфером. Этот промывочный раствор объединяли с фильтратом продукта и проводили периодатное окисление.

7. Периодатное окисление

Затем объединенный фильтрат после применения угольного фильтра и промывочный раствор подвергают реакции окисления периодатом. При комнатной температуре к фильтрату после применения угольного фильтра/промывочному раствору с предыдущей стадии очистки добавляют 1,0 М раствор йодной кислоты (с получением конечной концентрации периодата 50 мМ). Указанную реакционную смесь инкубировали при комнатной температуре в течение 30 минут. Затем к реакционной смеси добавляли молярный избыток пропиленгликоля для остановки реакции. После остановки реакции продукты реакции нейтрализовали (рН 6,9-7,1) путем добавления гидроксида натрия. Затем для раствора продукта реакции проводят заключительную операцию ультрафильтрации/диафильтрации.

8. Ультрафильтрация/диафильтрация (УФДФ-2)

Смесь продуктов периодатного окисления концентрировали и подвергали диафильтрации с применением мембраны из полых волокон для тангенциальной поточной ультрафильтрации. Материал концентрировали в 2-4 раза (до примерно 4-8 г/л Ср5/Ср8) при постоянных условиях трансмембранного давления (ТМД) и постоянной скорости сдвига. Затем ретентат подвергают диафильтрации (при постоянном объеме) против по меньшей мере 10 объемов диафильтрации деионизированной воды.

После диафильтрации ретентат извлекали, и затем промывали фильтр, используя минимальный объем деионизированной воды. Промывочный раствор сливали и объединяли с ретентатом; затем объединенный материал подвергали стерилизующей фильтрации.

9. Стерилизующая фильтрация

Объединенные ретентат и промывочный раствор фильтровали через тупиковый стерилизующий фильтр с подходящим размером пор (размер пор 0,2 мкм) в стерильную емкость. Затем этот фильтрат хранили при 4°С.

Все публикации и патентные заявки, упомянутые в настоящем описании, указывают на уровень специалистов в данной области техники, к которой относится настоящее изобретение. Все публикации и патентные заявки включены в настоящее описание посредством ссылки в той же степени, как если бы для каждой отдельной публикации или патентной заявки было конкретно и отдельно указано, что она включена посредством ссылки.

Несмотря на то, что описанное выше изобретение было достаточно подробно описано с помощью иллюстраций и примеров для ясности понимания, могут быть осуществлены некоторые изменения и модификации в пределах объема прилагаемой формулы изобретения.

Изобретение относится к способу очистки бактериального полисахарида из раствора, содержащего указанный полисахарид совместно с загрязняющими примесями, причем указанный способ включает стадию флокуляции, которая включает добавление флокулирующего агента, и одну или более стадию фильтрации, где флокулирующий агент содержит квасцы и где фильтрация выбрана из глубинной фильтрации, фильтрации с помощью активированного угля, гель-фильтрации, диафильтрации и ультрафильтрации, при этом полисахарид представляет собой полисахарид Streptococcus pneumoniae. Настоящее изобретение обеспечивает упрощенный способ очистки, обеспечивающий снижение содержания растворимого белка в бактериальных лизатах, с получением по существу очищенных бактериальных полисахаридов, подходящих для включения в вакцины. 23 з.п. ф-лы, 6 ил., 8 пр., 28 табл.

1. Способ очистки бактериального полисахарида из раствора, содержащего указанный полисахарид совместно с загрязняющими примесями, причем указанный способ включает стадию флокуляции, которая включает добавление флокулирующего агента, и одну или более стадию фильтрации, где флокулирующий агент содержит квасцы и где фильтрация выбрана из глубинной фильтрации, фильтрации с помощью активированного угля, гель-фильтрации, диафильтрации и ультрафильтрации, при этом полисахарид представляет собой полисахарид Streptococcus pneumoniae.

2. Способ по п. 1, где квасцы выбраны из калиевых квасцов, натриевых квасцов или аммониевых квасцов.

3. Способ по п. 1 или 2, где серотип полисахарида Streptococcus pneumoniae выбран из серотипов 1, 2, 3, 4, 5, 6A, 6B, 6C, 7F, 8, 9V, 9N, 10A, 11A, 12F, 14, 15A, 15B, 15C, 16F, 17F, 18C, 19A, 19F, 20, 22F, 23A, 23B, 23F, 24B, 24F, 29, 31, 33F, 34, 35B, 35F, 38, 72 и 73.

4. Способ по п. 3, где серотип полисахарида Streptococcus pneumoniae выбран из серотипов 8, 10A, 11A, 12F, 15B, 22F и 33F.

5. Способ по любому из пп. 1-4, где концентрация флокулирующего агента составляет от 0,1 до 20 мас./об.%.

6. Способ по любому из пп. 1-5, где раствор выдерживают в течение некоторого времени для обеспечения осаждения хлопьев, после чего проводят последующую обработку.

7. Способ по п. 6, где указанную стадию флокуляции проводят при кислом рН.

8. Способ по любому из пп. 6, 7, где стадию осаждения проводят при температуре от 4 до 30°С.

9. Способ по любому из пп. 6, 7, где стадию осаждения проводят при температуре от 30 до 95°С.

10. Способ по любому из пп. 1-9, где после флокуляции суспензию дополнительно осветляют путем декантации, осаждения или центрифугирования.

11. Способ по любому из пп. 1-9, где указанная фильтрация представляет собой глубинную фильтрацию.

12. Способ по п. 11, где фильтрат дополнительно подвергают микрофильтрации.

13. Способ по любому из пп. 11, 12, где фильтрат дополнительно обрабатывают с помощью ультрафильтрации и диафильтрации.

14. Способ по п. 13, где указанную стадию ультрафильтрации проводят при температуре от 20 до 90°С.

15. Способ по любому из пп. 13, 14, где замещающий раствор, который добавляют при диафильтрации, содержит хелатирующий агент.

16. Способ по любому из пп. 13-15, где указанную стадию диафильтрации проводят при температуре от 20 до 90°С.

17. Способ по любому из пп. 1-9, где фильтрация представляет собой фильтрацию с помощью активированного угля.

18. Способ по п. 17, где фильтрат дополнительно подвергают микрофильтрации.

19. Способ по любому из пп. 17, 18, где фильтрат дополнительно осветляют с помощью ультрафильтрации и диафильтрации.

20. Способ по п. 19, где замещающий раствор, который добавляют при диафильтрации, содержит хелатирующий агент.

21. Способ по любому из пп. 19, 20, где указанную стадию диафильтрации проводят при температуре от 20 до 90°С.

22. Способ по любому из пп. 1-21, где указанный очищенный раствор полисахарида гомогенизируют путем калибровки.

23. Способ по любому из пп. 1-22, где указанный очищенный раствор полисахарида подвергают стерилизующей фильтрации.

24. Способ по любому из пп. 1-23, в котором указанный бактериальный полисахарид представляет собой капсульный полисахарид.