КОМПОЗИЦИИ И СПОСОБЫ ДЛЯ УМЕНЬШЕНИЯ ЗНАЧИТЕЛЬНЫХ ТРОМБОТИЧЕСКИХ ЯВЛЕНИЙ У ПАЦИЕНТОВ СО ЗЛОКАЧЕСТВЕННОЙ ОПУХОЛЬЮ Российский патент 2024 года по МПК A61K31/352 A61P35/00 

ПЕРЕКРЕСТНАЯ ССЫЛКА НА РОДСТВЕННЫЕ ЗАЯВКИ

[0001] Для настоящей заявки испрашивается приоритет по предварительной заявке США № 62/773696, поданной 30 ноября 2018 года, которая включена в настоящее описание посредством ссылки в полном объеме.

ИНТЕРЕС ПРАВИТЕЛЬСТВА

[0002] Настоящее изобретение было создано с поддержкой правительства по гранту № HL112302, выданному National Institutes of Health. Правительство имеет определенные права на изобретение.

СУЩНОСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ

[0003] Настоящее изобретение относится к способам уменьшения уровня растворимого P-селектина и значительных тромботических явлений у пациентов со злокачественной опухолью.

[0004] Различные варианты осуществления относятся к способу уменьшения уровня растворимого P-селектина у пациента со злокачественной опухолью, включающему введение пациенту эффективного количества изокверцетина или кверцетина.

[0005] Некоторые варианты осуществления относятся к способу уменьшения или предупреждения образования тромба у пациента со злокачественной опухолью, включающему введение пациенту эффективного количества изокверцетина или кверцетина.

[0006] Некоторые варианты осуществления относятся к способу обеспечения регрессии опухоли у пациента со злокачественной опухолью, включающему введение пациенту эффективного количества изокверцетина или кверцетина.

[0007] Различные варианты осуществления относятся к фармацевтической композиции для уменьшения уровня растворимого P-селектина у пациента со злокачественной опухолью, содержащей 500-1000 мг изокверцетина или кверцетина и фармацевтически приемлемый эксципиент.

[0008] Некоторые варианты осуществления относятся к фармацевтической композиции для уменьшения или предупреждения образования тромба у пациента со злокачественной опухолью, содержащей 500-1000 мг изокверцетина или кверцетина и фармацевтически приемлемый эксципиент.

[0009] В некоторых вариантах осуществления предусматривается фармацевтическая композиция для способствования регрессии опухоли у пациента со злокачественной опухолью, содержащая 500-1000 мг изокверцетина или кверцетина и фармацевтически приемлемый эксципиент.

[0010] Некоторые варианты осуществления относятся к фармацевтической композиции для стабилизации или уменьшения метастазирующей злокачественной опухоли у пациента со злокачественной опухолью, содержащей 500-1000 мг изокверцетина или кверцетина и фармацевтически приемлемый эксципиент.

[0011] Различные варианты осуществления относятся к пероральной дозе изокверцетина или кверцетина, составляющей 500 мг в сутки. В следующих вариантах осуществления пероральная доза изокверцетина или кверцетина составляет 1000 мг в сутки.

[0012] В следующих вариантах осуществления после введения изокверцетина или кверцетина уровень растворимого P-селектина снижается по меньшей мере приблизительно на 30% по сравнению с эталонным или исходным уровнем растворимого P-селектина.

[0013] В других вариантах осуществления после введения изокверцетина или кверцетина снижение уровня растворимого P-селектина находится в диапазоне 30-40%, 40-50%, 55-60%, 60-70%, 70-75% или 75-80% по сравнению с эталонным или исходным уровнем растворимого P-селектина.

[0014] В следующих вариантах осуществления у пациента диагностирована метастазирующая злокачественная опухоль. В следующих вариантах осуществления метастазирующая злокачественная опухоль представляет собой рак ободочной и прямой кишки, рак поджелудочной железы или немелкоклеточный рак легкого.

[0015] В следующих вариантах осуществления метастазирующая злокачественная опухоль выбрана из группы, состоящей из метастазирующих форм лимфомы Ходжкина, рака ободочной и прямой кишки, рака шейки матки, рака легкого, рака кожи, такого как плоскоклеточный рак или базально-клеточная карцинома, рака головы и шеи, рака желудка и рака поджелудочной железы.

[0016] В следующих вариантах осуществления злокачественная опухоль выбрана из группы, состоящей из зависимого от рецепторов эстрогена рака молочной железы, независимого от рецепторов эстрогена рака молочной железы, зависимого от рецепторов гормонов рака предстательной железы, независимого от рецепторов гормонов рака предстательной железы, злокачественной опухоли головного мозга, рака почки, глиобластомы, рака толстого кишечника, семейного аденоматозного полипоза (FAP), рака ободочной и прямой кишки, рака поджелудочной железы, рака мочевого пузыря, рака пищевода, рака желудка, урогенитального рака, желудочно-кишечного рака, рака тела матки, рака яичника, астроцитом, глиом, рака кожи, плоскоклеточной карциномы, кератоакантомы, болезни Боуэна, Т-клеточной лимфомы кожи, меланомы, базально-клеточной карциномы, актинического кератоза; ихтиоза; угревой сыпи, обыкновенных угрей, сарком, саркомы Капоши, остеосаркомы, рака головы и шеи, мелкоклеточной карциномы легкого, немелкоклеточной карциномы легкого, лейкоза, лимфомы и/или других злокачественных опухолей из клеток крови.

[0017] В следующих вариантах осуществления пациент не имеет серьезных неблагоприятных явлений (токсичность степени 3 или 4) в ходе лечения.

[0018] В следующих вариантах осуществления пациент не имеет первичной венозной тромбоэмболии (VTE) в ходе лечения. В следующих вариантах осуществления пациент не имеет VTE в течение по меньшей мере 30-60 суток после лечения.

[0019] В следующих вариантах осуществления пациент не имеет значительных кровотечений в ходе лечения.

[0020] В следующих вариантах осуществления пациент имеет снижение образования зависимого от тромбоцитов тромбина приблизительно на 30-60% по сравнению с эталонным или исходным уровнем зависимого от тромбоцитов тромбина после введения изокверцетина или кверцетина.

[0021] В следующих вариантах осуществления пациент имеет снижение концентрации D-димера в плазме приблизительно на 20-30% по сравнению с эталонным или исходным уровнем концентрации D-димера в плазме после введения изокверцетина или рутина.

[0022] В следующих вариантах осуществления изокверцетин или кверцетин вводят в композиции, содержащей от приблизительно 20 микрограммов до приблизительно 3 граммов витамина B3 и необязательно дополнительно содержащей от приблизительно 200 микрограммов до приблизительно 3 граммов витамина C, и необязательно дополнительно содержащей от 1000 микрограммов до приблизительно 3000 микрограммов фолиевой кислоты.

[0023] В следующих вариантах осуществления пациент имеет повышенный уровень растворимого P-селектина перед введением изокверцетина или кверцетина по сравнению с эталонным или исходным уровнем растворимого P-селектина.

[0024] Различные варианты осуществления относятся к фармацевтической композиции для уменьшения уровня растворимого P-селектина у пациента со злокачественной опухолью, содержащей 500-1000 мг изокверцетина или кверцетина и фармацевтически приемлемый эксципиент.

[0025] Различные варианты осуществления относятся к фармацевтической композиции для уменьшения или предупреждения образования тромба у пациента со злокачественной опухолью, содержащей 500-1000 мг изокверцетина или кверцетина и фармацевтически приемлемый эксципиент.

[0026] Различные варианты осуществления относятся к фармацевтической композиции для обеспечения регрессии опухоли у пациента со злокачественной опухолью, содержащей 500-1000 мг изокверцетина или кверцетина и фармацевтически приемлемый эксципиент.

[0027] Различные варианты осуществления относятся к фармацевтической композиции для стабилизации или уменьшения метастазирующей злокачественной опухоли у пациента со злокачественной опухолью, содержащей 500-1000 мг изокверцетина или кверцетина и фармацевтически приемлемый эксципиент.

[0028] В дополнительных вариантах осуществления композиция дополнительно содержит от приблизительно 20 микрограммов до приблизительно 3 граммов витамина B3.

[0029] В дополнительных вариантах осуществления композиция дополнительно содержит от приблизительно 200 микрограммов до приблизительно 3 граммов витамина C.

[0030] В дополнительных вариантах осуществления композиция дополнительно содержит от 1000 микрограммов до приблизительно 3000 микрограммов фолиевой кислоты.

[0031] В дополнительных вариантах осуществления композиция содержит 1000 мг изокверцетина или кверцетина.

КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ЧЕРТЕЖЕЙ

[0032] На фиг.1 представлена блок-схема, охватывающая пациентов, включенных в клиническое испытание, в зависимости от распределения на лечение изокверцетином. Изокверцетин вводили в клиническом испытании в композиции, включающей витамин C и витамин B₃, как далее указано в настоящем описании.

[0033] На фиг.2A-B представлены каскадные диаграммы изменения уровня D-димера после введения изокверцетина. Данные, приведенные на каскадной диаграмме, демонстрируют сравнение данных исходного уровня относительно окончания исследования для величин D-димера у каждого пациента в зависимости от введенной дозы изокверцетина. На фиг.2A представлен график, который иллюстрирует, что срединное изменение уровня D-димера составляло +9,9% (парный T-критерий 0,92) в группе A с 500 мг изокверцетина. На фиг.2B представлен график, демонстрирующий, что срединное снижение уровня D-димера составляло -21,9% в группе B с 1000 мг изокверцетина (P=0,0002).

[0034] На фиг.3A-D представлены графики, иллюстрирующие совокупную встречаемость венозной тромбоэмболии. Мониторинг венозной тромбоэмболии (VTE) проводили клинически и посредством ультразвукового исследования нижней конечности после завершения исследования в течение 2 месяцев. Представлена доля пациентов, оставшихся свободными от VTE в ходе исследования. Отсутствовала первичная VTE как в группе 500 мг изокверцетина (фиг.3A), так и в группе 1000 мг изокверцетина (фиг.3B). Совокупная встречаемость всех вторичных конечных результатов VTE (т.е. поверхностный тромбоз и дистальный тромбоз) представлена как для группы 500 мг (фиг.3C), так и для группы 1000 мг (фиг.3D).

[0035] На фиг.4A-B представлены графики, демонстрирующие измерение активности ингибирования PDI в плазме после введения изокверцетина. На каскадных графиках представлены сравнения данных исходного уровня относительно окончания исследования для каждого испытания. На фиг.4A представлено, что срединное изменение активности ингибирования PDI составляло +37,0% (парный t-критерий, P<0,001) для 500 мг изокверцетина. На фиг.4B показано, что срединное изменение активности PDI составляло +73,3% для 1000 мг изокверцетина (P<0,001).

[0036] На фиг.5A-B представлены графики, демонстрирующие измерение активности образования зависимого от тромбоцитов тромбина после ведения изокверцетина. На каскадных диаграммах представлен исходный уровень и уровень при наблюдении для образования зависимого от тромбоцитов тромбина после введения изокверцетина. На каскадной диаграмме представлено изменение (%) для каждого пациента для 500 мг изокверцетина (фиг.5A) и 1000 мг изокверцетина (фиг.5B). Введение изокверцетина приводило к значительному снижению образования тромбина как в группе A (срединное изменение -31,1%, P < 0,001), так и в группе B (срединное изменение -57,2%, P=0,004).

[0037] На фиг.6A-B представлены графики, демонстрирующие измерение уровня P-селектина в плазме после введения изокверцетина. На каскадных диаграммах представлены данные исходного уровня и уровня при наблюдении величин растворимого P-селектина в плазме после введения изокверцетина. На каскадной диаграмме представлено изменение (%) для каждого пациента для 500 мг изокверцетина (фиг.6A) и 1000 мг изокверцетина (фиг.6B).

ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ

Определения

[0038] Перед описанием настоящих композиций и способов, следует понимать, что настоящее изобретение не ограничивается конкретными описанными процессами, составами, композициями или методологиями, поскольку они могут варьироваться. Также следует понимать, что терминология, используемая в описании, предназначена только для описания конкретных версий или вариантов осуществления, и не предназначена для ограничения объема вариантов осуществления настоящего изобретения, которые ограничиваются только прилагаемой формулой изобретения. Если не определено иначе, все технические и научные термины, используемые в настоящем описании, имеют то же значение, которое обычно подразумевает специалист в данной области. Хотя любые способы и материалы, сходные или эквивалентные способам и материалам, описанным в настоящем описании, можно использовать для применения на практике или тестирования вариантов осуществления, описанных в настоящем описании, предпочтительные способы, устройства и материалы описаны далее. Все публикации, упомянутые в настоящем описании, включены в качестве ссылки в полном объеме. Никакая часть настоящего документа не должна быть истолкована как признание того, что настоящее изобретение не может быть датировано ранее такой публикации путем ссылки на более раннее изобретение.

[0039] Необходимо отметить, что, как используют в рамках изобретения и в прилагаемой формуле изобретения, форма единственного числа включает множественное число, если контекст явно не указывает на иное.

[0040] Как используют в рамках изобретения, термин "приблизительно" означает плюс или минус 10% от числовой величины, с которой его используют. Таким образом, приблизительно 50% означает диапазон 45%-55%.

[0041] Термин "индивидуум", как используют в рамках изобретения, включает, но не ограничивается ими, людей (также часто называемых "пациентами") и не являющихся человеком позвоночных, таких как дикие, домашние и сельскохозяйственные животные. В определенных вариантах осуществления индивидуумом, описанным в настоящем описании, является животное. В определенных вариантах осуществления индивидуумом является млекопитающее. В определенных вариантах осуществления индивидуумом является человек. В определенных вариантах осуществления индивидуумом является не являющееся человеком животное. В определенных вариантах осуществления индивидуумом является не являющееся человеком млекопитающее. В определенных вариантах осуществления индивидуумом является одомашненное животное, такое как собака, кошка, корова, свинья, лошадь, овца или коза. В определенных вариантах осуществления индивидуумом является животное-компаньон, такое как собака или кошка. В определенных вариантах осуществления индивидуумом является сельскохозяйственное животное, такое как корова, свинья, лошадь, овца или коза. В определенных вариантах осуществления индивидуумом является животное зоопарка. В другом варианте осуществления индивидуумом является экспериментальное животное, такое как грызун, собака или не являющийся человеком примат. В определенных вариантах осуществления индивидуумом является не являющееся человеком трансгенное животное, такое как трансгенная мышь или трансгенная свинья.

[0042] Термины "лечить", "подвергнутый лечению" или "лечение", как используют в рамках изобретения, относятся как к терапевтическому лечению, так и к профилактическим или превентивным мерам, где задачей является ингибирование, предупреждение или замедление или снижение полного эффекта или вероятности (уменьшение) какого-либо нежелательного физиологического состояния, нарушения или заболевания, или улучшение, ингибирование или иное достижение благоприятных или желательных клинических результатов. Для целей настоящего изобретения благоприятные или желательные клинические результаты включают, но не ограничиваются ими, улучшение или облегчение симптомов; уменьшение степени состояния, нарушения или заболевания; стабилизацию (т.е. не ухудшение) состояния, нарушения или заболевания; отсрочивание возникновения или замедление прогрессирования состояния, нарушения или заболевания; облегчение состояния, нарушения или заболевания; и ремиссию (как частичную, так и полную), как поддающиеся обнаружению, так и не поддающейся обнаружению, или укрепление или улучшение состояния, нарушения или заболевания. Лечение включает индукцию клинически значимого ответа без чрезмерных уровней побочных эффектов. Также лечение включает продление выживания по сравнению с ожидаемым выживанием без проведения лечения.

[0043] Термин "ингибировать" включает введение соединения согласно вариантам осуществления, описанным в настоящем описании, для предупреждения возникновения симптомов, облегчения симптомов или устранения заболевания, состояния или нарушения.

[0044] Под "фармацевтически приемлемым" подразумевают, что носитель, разбавитель или эксципиент должен быть совместимым с другими ингредиентами состава для местного применения и не вредоносным для его реципиента.

[0045] Термин "разжижающее кровь средство" относится к антитромбоцитарному лекарственному средству, например, клопидогрела бисульфату, гепарину, варфарину, эноксапарину, абциксимабу, эптифибатиду, тирофибану, прасугрелу, тиклопидину, берапросту, простациклину, илопросту, трепростинилу, аспирину, алоксиприну, карбасалату кальцию, индобуфену, трифлусалу, дипиридамолу, пикотамиду, терутробану, цилостазолу, клорикромену, дитазолу; или антикоагулянту, например, аценокумаролу, куматетралилу, дикумаролу, этилбискумацетату, фенпрокумону, клориндиону, дифенадиону, фениндиону, тиокломаролу, бемипарину, цертопарину, дальтепарину, надропарину, парнапарину, ревипарину, тинзапарину, фондапаринуксу, идрапаринуксу, данапароиду, сулодексиду, дерматансульфату, апиксабану, бетриксабану, эдоксабану, отамиксабану, ривароксабану, бивалирудину, лепирудину, десирудину, аргатробану, дабигатрану, мелагатрану, ксимелагатрану, режиму 1 (REG1; комбинация RB-006, антагониста фактора IXa и его олигонуклеотидного активного средства контроля RB-007), дефибротиду, раматробану, антитромбину III или дротрекогину альфа.

[0046] Термин "тромботическое нарушение" относится к множеству различных состояний, которые вызывают или повышают риск венозного или артериального тромботического явления, включая, но не ограничиваясь ими, фибрилляцию предсердий, тромбоз вследствие искусственного клапана сердца, инфаркт миокарда, нестабильную стенокардию, тромбоз глубоких вен, острый ишемический инсульт, легочную эмболию, атеросклероз, дефицит фактора V Лейдена, антитромбина III, дефицит белка C, дефицит белка S, мутацию в гене протромбина (G20210A), гипергомоцистеинемию, синдром антифосфолипидных антител, антикардиолипиновых антител, синдром тромбоза, волчаночный антикоагулянтный синдром, злокачественную опухоль, обширное хирургическое вмешательство, иммобилизацию, употребление пероральных контрацептивов, применение талидомида, особенно в комбинации с дексаметазоном, индуцируемую гепарином тромбоцитопению, беременность, миелопролиферативные нарушения, воспалительное заболевание кишечника, нефротический синдром, пароксизмальную ночную гемоглобинурию, синдром повышенной вязкости крови, макроглобулинемию Вальденстрема и травму. Термин "тромботическое нарушение" также относится к тромбозу, индуцируемому злокачественной опухолью, например, множественной миеломой и другими гематологическими злокачественными опухолями, аденокарциномой, раком поджелудочной железы, желудка, яичника, предстательной железы, толстой кишки, легкого, головного мозга, молочной железы, почки, кожи, шейки матки и раком уха-горла-носа.

[0047] "Витамин B₃", упоминаемый в настоящем описании, включает B₃ в его различных формах, включая ниацинамид, никотиновую кислоту, никотинамид, инозитолгексаниацинат.

[0048] "Витамин C", упоминаемый в настоящем описании, включает витамин C (т.е. L-аскорбиновую кислоту, D-аскорбиновую кислоту или обе из них) и его соли (например, аскорбат натрия).

[0049] "Фолиевая кислота", упоминаемая в настоящем описании, включает витамин B₉, фолат, птероилглутаминовую кислоту и L-метилфолат.

[0050] Термин "улучшать" используют для указания на то, что соединения или способы согласно вариантам осуществления настоящего изобретения изменяют внешний вид, форму, характеристики и/или физические признаки состояния или ткани, для которых их предоставляют, применяют или вводят.

[0051] Термины "улучшение", "лечение" и "уменьшение" относятся к введению эффективного количества композиции изокверцетина, кверцетина или рутина по изобретению индивидууму, который нуждается в улучшении одного или нескольких из вышеупомянутых состояний или имеет одно или несколько из вышеупомянутых нарушений, или симптом или предрасположенность к одному или нескольким нарушениям или состояниям с целью улучшения одного или нескольких из этих состояний или предупреждения, излечения, облегчения, смягчения, устранения или ослабления одного или нескольких из этих нарушений или симптомов или предрасположенности к одному или нескольким из них. Термин "введение" охватывает пероральную или парентеральную доставку индивидууму композиции кверцетина, изокверцетина или рутина (или любого подходящего его производного) по изобретению в любой подходящей форме, например, пищевого продукта, напитка, таблетки, капсулы, суспензии и стерильного инъекционного раствора. Термин "парентеральный" относится к подкожной, внутрикожной, внутривенной, внутримышечной, внутрисуставной, внутриартеральной, интрасиновиальной, внутригрудинной, интратекальной, осуществляемой внутрь очага повреждения и внутричерепной инъекции, а также к различным способам инфузии. "Эффективное количество" относится к дозе композиции изокверцетина, кверцетина или рутина, которая является достаточной для обеспечения терапевтической пользы (например, уменьшения уровней активности PDI в сыворотке и/или растворимого P-селектина у пациента, нуждающегося в этом, например, пациента со злокачественной опухолью, имеющего повышенные уровни растворимого P-селектина). В определенных вариантах осуществления эффективное количество изокверцетина составляет приблизительно 1000 мг. В определенных вариантах осуществления эффективное количество изокверцетина может находиться в диапазоне приблизительно 1000 мг - 2000 мг. В дополнительных вариантах осуществления эффективное количество изокверцетина находится в диапазоне приблизительно 2000 мг - 2500 мг. Особенно предпочтительное эффективное количество изокверцетина составляет 1000 мг.

Способы лечения

[0052] Образование тромба вовлекает несколько последовательных стадий, которые, как правило, начинаются после разрыва кожи или повреждения сосуда. Циркулирующие тромбоциты сначала прикрепляются к области поврежденных эндотелиальных клеток, и происходит серия событий, которые позволяют активацию этих тромбоцитов. Затем активированные тромбоциты привлекают дополнительные тромбоциты в место повреждения, где они агрегируют с образованием пробки до тех пор, пока не образуется стабильный сгусток. Затем неактивные факторы свертывания, которые всегда присутствуют и циркулируют в кровотоке, активируются в процессе, известном как каскад свертывания. Каскад свертывания в конечном итоге приводит к стабильному содержащему фибрин сгустку.

[0053] Тромботические нарушения представляют собой группу наследственных и приобретенных нарушений, которые вызывают аномальную активацию системы гемостаза, ведущую к повышению риска венозного и артериального тромбоза. Среди приобретенных нарушений, которые значительно повышают риск тромбоза, находятся злокачественные опухоли. Опухолевые клетки посредством экспрессии высоких уровней тканевого фактора на их поверхности вызывают состояние гиперкоагуляции. Для инициации упомянутого каскада свертывания необходим тканевой фактор.

[0054] Среди факторов, вовлеченных в образование тромба, находится протеиндисульфидизомераза (PDI). PDI секретируется активированными эндотелиальными клетками и тромбоцитами, после чего она играет ключевую роль в образовании тромба. PDI может активировать тканевой фактор, что приводит к активации каскада свертывания, в конечном итоге вызывая отложение фибрина и образование тромба.

[0055] Протеиндисульфидизомераза представляет собой тиолизомеразу, которая в основном локализуется в эндоплазматической сети, где она выполняет важную роль в сворачивании белка. Однако PDI также может высвобождаться из клеток при болезненных заболеваниях или после повреждения ткани и участвовать в патологических процессах. PDI вовлечена в злокачественную опухоль, нейродегенеративное заболевание, инфекционное заболеваниеи тромбоэмболию. В контексте тромбоэмболического заболевания PDI высвобождается из активированных тромбоцитов и эндотелиальных клеток, и предполагается, что она модулирует через окисление, восстановление или изомеризацию ряда внеклеточных субстратов свертывания, таких как фактор XI, тканевой фактор, фактор V, витронектин, αIIbβ3 и αVβ3. Нацеливание на активность PDI посредством блокирующих антител или низкомолекулярных соединений препятствует как накоплению тромбоцитов, так и образованию фибрина в области повреждения сосудов в нескольких различных моделях тромбоза на животных.

[0056] Необходимы дополнительные способы и композиции для предупреждения или уменьшения венозных или артериальных тромботических явлений.

[0057] Некоторые варианты осуществления настоящего изобретения относятся к способу уменьшения уровня растворимого P-селектина у пациента со злокачественной опухолью, включающему введение пациенту эффективного количества изокверцетина, или соединения-производного изокверцетина, или кверцетина или соединения-производного кверцетина, или рутина или соединения-производного рутина, в соответствии с любым из вариантов осуществления, описанных в настоящем описании. В некоторых вариантах осуществления уровень растворимого P-селектина снижен по меньшей мере приблизительно на 30% по сравнению с эталонным или исходным уровнем растворимого P-селектина после введения изокверцетина или соединения-производного изокверцетина, или кверцетина или соединения-производного кверцетина. В некоторых вариантах осуществления снижение уровня растворимого P-селектина находится в диапазоне 30-40%, 40-50%, 55-60%, 60-70%, 70-75% или 75-80% по сравнению с эталонным или исходным уровнем растворимого P-селектина после введения изокверцетина, или соединения-производного изокверцетина, или кверцетина или соединения-производного кверцетина.

[0058] Некоторые варианты осуществления настоящего изобретения относятся к способу уменьшения или предупреждения образования тромба у пациента со злокачественной опухолью, включающему введение пациенту эффективного количества изокверцетина, или соединения-производного изокверцетина, или кверцетина или соединения-производного кверцетина, или рутина или соединения-производного рутина, в соответствии с любым из вариантов осуществления, описанных в настоящем описании.

[0059] Некоторые варианты осуществления настоящего изобретения относятся к способу способствования регрессии опухоли у пациента со злокачественной опухолью, включающему введение пациенту эффективного количества изокверцетина, или соединения-производного изокверцетина, или кверцетина или соединения-производного кверцетина, или рутина или соединения-производного рутина, в соответствии с любым из вариантов осуществления, описанных в настоящем описании.

[0060] Некоторые варианты осуществления настоящего изобретения относятся к способу стабилизации или уменьшения метастазирующей злокачественной опухоли у пациента со злокачественной опухолью, включающему введение пациенту эффективного количества изокверцетина, или соединения-производного изокверцетина, или кверцетина или соединения-производного кверцетина, или рутина или соединения-производного рутина, в соответствии с любым из вариантов осуществления, описанных в настоящем описании.

[0061] Некоторые варианты осуществления настоящего изобретения относятся к способу уменьшения уровня растворимого P-селектина у пациента со злокачественной опухолью, включающему введение пациенту эффективного количества изокверцетина, или соединения-производного изокверцетина, или кверцетина или соединения-производного кверцетина, или рутина или соединения-производного рутина, в соответствии с любым из вариантов осуществления, описанных в настоящем описании.

[0062] Некоторые варианты осуществления настоящего изобретения относятся к способу уменьшения или предупреждения образования тромба у пациента со злокачественной опухолью, включающему введение пациенту эффективного количества изокверцетина, или соединения-производного изокверцетина, или кверцетина или соединения-производного кверцетина, или рутина или соединения-производного рутина, в соответствии с любым из вариантов осуществления, описанных в настоящем описании.

[0063] Некоторые варианты осуществления настоящего изобретения относятся к способу способствования регрессии опухоли у пациента со злокачественной опухолью, включающему введение пациенту эффективного количества изокверцетина, или соединения-производного изокверцетина, или кверцетина или соединения-производного кверцетина, или рутина или соединения-производного рутина, в соответствии с любым из вариантов осуществления, описанных в настоящем описании.

[0064] Некоторые варианты осуществления настоящего изобретения относятся к способу стабилизации или уменьшения метатазирующей злокачественной опухоли у пациента со злокачественной опухолью, включающему введение пациенту эффективного количества изокверцетина, или соединения-производного изокверцетина, или кверцетина или соединения-производного кверцетина, или рутина или соединения-производного рутина, в соответствии с любым из вариантов осуществления, описанных в настоящем описании.

[0065] В некоторых вариантах осуществления в соответствии с любым из способов, описанных в настоящем описании, пациент не имеет неблагоприятных явлений (токсичность степени 3 или 4) в ходе лечения.

[0066] В некоторых вариантах осуществления в соответствии с любым способом, описанным в настоящем описании, пациент не имеет первичной венозной тромбоэмболии (VTE) в ходе лечения.

[0067] В некоторых вариантах осуществления в соответствии с любым способом, описанным в настоящем описании, пациент не имеет VTE в течение по меньшей мере 30-60 суток после лечения.

[0068] В некоторых вариантах осуществления в соответствии с любым способом, описанным в настоящем описании, пациент не имеет значительных кровотечений в ходе лечения.

[0069] В некоторых вариантах осуществления в соответствии с любым способом, описанным в настоящем описании, пациент имеет снижение образования зависимого от тромбоцитов тромбина, составляющее приблизительно 30-60%, по сравнению с эталонным или исходным уровнем зависимого от тромбоцитов тромбина после введения кверцетина или производного кверцетина.

[0070] В некоторых вариантах осуществления в соответствии с любым способом, описанным в настоящем описании, пациент имеет снижение концентрации D-димера в плазме, составляющее приблизительно 20-30%, по сравнению с эталонным или исходным уровнем D-димера после введения кверцетина или производного кверцетина.

Рутин, кверцетин, изокверцетин и родственные производные

[0071] Термины "изокверцетин" "кверцетин" и "рутин" относятся к определенным активным соединениям для введения, как описано в настоящем описании.

[0072] Изокверцетин (2-(3,4-дигидроксифенил)-5,7-дигидрокси-3-[(2S,3R,4S,5S,6R)-3,4,5-тригидрокси-6-(гидроксиметил)оксан-2-ил]оксихромен-4-он) представляет собой 3-O-глюкозид кверцетина, имеющий следующую структуру:

[0073] Рутин (2-(3,4-дигидроксифенил)-5,7-дигидрокси-3-[α-L-рамнопиранозил-(1→6)-β-D-глюкопиранозилокси]-4H-хромен-4-он) представляет собой другой распространенный гликозид, который имеет дисахарид рутинозу (α-L-рамнопиранозил-(1→6-β-D-глюкопираноза), присоединенную в 3 O-положении кверцетина, имеющего следующую структуру:

[0074] Кверцетин характеризуется следующей структурой:

[0075] В вариантах осуществления, описанных в настоящем описании, активное соединение может охватывать кверцетин или производные кверцетина, такие как: кверцетин-5-O-глюкозид, кверцетин-7-O-глюкозид, кверцетин-9-O-глюкозид, кверцетин-3-O-[альфа-рамнозил-(1→2)-альфа-рамнозил-(1→6)]-бета-глюкозид, кверцетин-3-O-галактозид, кверцетин-7-O-галактозид, кверцетин-3-O-рамнозид, изокверцетин, рутин и кверцетин-7-O-галактозид. После расщепления производные кверцетина конвертируются в организме в агликон кверцетина и/или другие активные производные, включая метилированные, сульфатированные и глюкуронированные, которые всасываются в организме.

[0076] В некоторых вариантах осуществления описанные в рамках настоящего изобретения соединения для применения в способах по настоящему изобретению представляют собой изокверцетин или кверцетин. В некоторых вариантах осуществления соединение представляет собой изокверцетин. В некоторых вариантах осуществления соединение представляет собой рутин. Подходящие конъюгаты или производные включают метилаты, сульфаты и глюкурониды.

[0077] Без связи с теорией, полагают, что изокверцетин и рутин в качестве единственных средств ингибируют активность фермента протеиндисульфидизомеразы (PDI). Как описано в настоящем описании, PDI и растворимый P-селектин также оба играют роль в инициации каскада свертывания/тромбоза. Посредством снижения уровня растворимого P-селектина у пациента, и, в частности, у пациента со злокачественной опухолью, который имеет повышенные уровни растворимого P-селектина, полагают, что изокверцетин, кверцетин или рутин могут ингибировать или предупреждать образование тромба у пациента, и, в частности, у пациента со злокачественной опухолью. Кроме того, антитромботическую активность изокверцетина или рутина можно оценивать у человека посредством измерения уровней D-димера в образцах плазмы пациентов, которых лечили изокверцетином или рутином. D-димер, небольшой белковый фрагмент, присутствующий в крови, представляет собой продукт деградации фибрина. Уровень D-димера в крови возрастает после тромботического явления вследствие его высвобождения из сгустков крови посредством фибринолиза.

[0078] В любых вариантах осуществления, описанных в настоящем описании, кверцетин или производное кверцетина можно добавлять в композицию либо в чистой форме, либо в качестве ингредиента в смеси (например, растительный экстракт). Примеры коммерчески доступного кверцетина включают QU995 (содержащий 99,5% кверцетин) и QU985 (содержащий 98,5% кверцетин) от Quercegen Pharmaceuticals LLC (Boston, Mass.).

[0079] Примеры коммерчески доступных соединений изокверцетина включают соединения изокверцетина, доступные от Quercegen Pharmaceuticals LLC: ISQ 995 AN (на 99,5% чистый полностью натуральный изокверцетин) и ISQ 995 CIT (на 99,5% чистый изокверцетин). Дополнительные способы и композиции изокверцетина могут быть найдены патентах США № 7745486 и 7745487, включенные в настоящее описание в качестве ссылок.

Злокачественные опухоли

[0080] Как используют в рамках изобретения, типы злокачественной опухоли могут быть выбраны из группы, состоящей из зависимого от рецепторов эстрогена рака молочной железы, независимого от рецепторов эстрогена рака молочной железы, зависимого от рецепторов гормонов рака предстательной железы, независимого от рецепторов гормонов рака предстательной железы, злокачественной опухоли головного мозга, рака почки, глиобластомы, рака толстого кишечника, семейного аденоматозного полипоза (FAP), рака ободочной и прямой кишки, рака поджелудочной железы, рака мочевого пузыря, рака пищевода, рака желудка, рака мочеполовой системы, желудочно-кишечного рака, рака тела матки, рака яичника, астроцитом, глиом, рака кожи, плоскоклеточной карциномы, кератоакантомы, болезни Боуена, Т-клеточной лимфомы кожи, меланомы, базально-клеточной карциномы, актинического кератоза; ихтиоза; угревой сыпи, обыкновенных угрей, сарком, саркомы Капоши, остеосаркомы, рака головы и шеи, мелкоклеточной карциномы легкого, немелкоклеточной карциномы легкого, лейкоза, лимфом и/или других злокачественных опухолей из клеток крови.

[0081] Дополнительные злокачественные опухоли, при которых являются полезными способы, описанные в настоящем описании, включают злокачественные опухоли, ассоциированные с определенными вирусами (и включают улучшение предзлокачественного состояния в ходе вирусной инфекции). Такие состояния включают состояния, ассоциированные с вирусом T-клеточного лейкоза человека, также называемым T-лимфотропным вирусом человека (HTLV-1), который связан со взрослым T-клеточным лейкозом/лимфомой. Другая такая злокачественная опухоль включает злокачественные опухоли, ассоциированные с вирусом папилломы человека (HPV), который имеет по меньшей мере 12 штаммов, которые могут вызывать злокачественную опухоль у мужчин и женщин, включая рак анального канала, шейки матки, полового члена, глотки, вагины и вульвы. Дополнительное состояние включает состояния, ассоциированные с вирусом герпеса 8 человека (HHV-8), который ассоциирован с саркомой Капоши у людей, которые имеют ослабленную иммунную систему (например, пациенты с ВИЧ). Аналогично, существуют многочисленные злокачественные опухоли, ассоциированные с ВИЧ, которые, как полагают, повреждают иммунную систему и снижают защиту против других онковирусов. Ассоциированные с ВИЧ злокачественные опухоли включают саркому Капоши, неходжкинскую лимфому и лимфому Ходжкина, рак шейки матки и злокачественные опухоли ануса, печени, рта и глотки и легкого. Кроме того, гепатит C является основной причиной рака печени, и он может вызывать неходжскинскую лимфому, и в случае него по существу могут быть полезными способы, описанные в настоящем описании. Аналогично, гепатит B является основной причиной рака печени, и при этих состояниях могут быть полезными способы, описанные в настоящем описании. Наконец, инфекция вирусом Эпштейна-Барр (EBV) повышает риск лимфомы Беркитта, некоторых типов лимфомы Ходжкина и неходжскинской лимфомы и рака желудка, и при этих состояниях также могут быть полезными способы, описанные в настоящем описании.

[0082] В определенных вариантах осуществления злокачественная опухоль представляет собой метастазирующую злокачественную опухоль. "Метастазирующая злокачественная опухоль" представляет собой злокачественную опухоль, которая может образовывать или часто образует метастазы. Метастазирующая злокачественная опухоль, которая уже распространилась из части организма, где она началась, т.е. первичной области, в другие части организма, также называется метастатической злокачественной опухолью. Когда злокачественные клетки отрываются от опухоли, они могут переноситься в другие области организма через кровоток или лимфатическую систему. Затем такие злокачественные клетки могут образовывать новые опухоли в других областях организма.

[0083] В определенных вариантах осуществления злокачественная опухоль представляет собой метастазирующую злокачественную опухоль, выбранную из группы, состоящей из метастазирующих форм лимфомы Ходжкина, рака ободочной и прямой кишки, рака шейки матки, рака легкого, рака кожи, такого как плоскоклеточный рак или базально-клеточная карцинома, рак головы и шеи, рак желудка, рак поджелудочной железы, плоскоклеточный рак головы и шеи и рак молочной железы.

[0084] В некоторых вариантах осуществления метастазирующая злокачественная опухоль представляет собой рак ободочной и прямой кишки, рак поджелудочной железы или немелкоклеточный рак легкого.

[0085] В определенных вариантах осуществления злокачественную опухоль классифицируют как опухоль стадии III или стадии IV в соответствии c системой анатомических/прогностических групп TNM системы определения стадии злокачественной опухоли Американского объединенного комитета по изучению рака. В дополнительных вариантах осуществления злокачественную опухоль классифицируют как стадия IV в соответствии c системой анатомических/прогностических групп TNM системы определения стадии злокачественной опухоли Американского объединенного комитета по изучению рака.

[0086] В определенных вариантах осуществления злокачественная опухоль представляет собой метастазрующую злокачественную опухоль, выбранную из группы, состоящей из метастазирующих форм лимфомы Ходжкина, рака ободочной и прямой кишки, рака шейки матки, рака легкого, рака кожи, такого как плоскоклеточный рак или базально-клеточная карцинома, рак головы и шеи, рак желудка, рак поджелудочной железы и рак молочной железы, где указанную метастазирующую злокачественную опухоль классифицируют как стадия IV в соответствии c системой анатомических/прогностических групп TNM системы определения стадии злокачественной опухоли Американского объединенного комитета по изучению рака (7th edition, 2010, Springer).

[0087] В определенных вариантах осуществления композиции изокверцетина, кверцетина или рутина применяют для лечения злокачественных опухолей или уменьшения уровня PDI и/или растворимого P-селектина у индивидуумов с метастазами, которые уже сформировались, такими как метастазирующие формы лимфомы Ходжкина, рака ободочной и прямой кишки, рака шейки матки, рака головы и шеи, рака желудка, немелкоклеточного рака легкого, рака поджелудочной железы и рака молочной железы у млекопитающего, как правило, у человека. В дополнительных вариантах осуществления композиции изокверцетина, кверцетина или рутина используют для лечения злокачественных опухолей или уменьшения уровня PDI и/или растворимого P-селектина в плазме у индивидуумов без метастазирующей злокачественной опухоли, но которые демонстрируют злокачественную опухоль только в первичной области. Кроме того, ожидается, что способы и терапии, описанные в настоящем описании, будут эффективными для лечения любой солидной злокачественной опухоли или злокачественной опухоли из клеток крови, поскольку для всех пациентов с этими злокачественными опухолями, независимо от того, являются ли они метастазирующими или нет, будет полезным снижение уровней PDI и/или растворимого P-селектина в плазме, и, более того, будет полезным устранение венозных тромбоэмболий (VTE) без повышения риска значительного кровотечения. Следует отметить, что пациенты со злокачественной опухолью, как правило, имеют высокие уровни растворимого P-селектина и в результате имеют повышенный риск развития венозных тромбоэмболий (VTE) и родственных тромботических состояний.

[0088] Полагают, что введение изокверцетина, как показано в результатах, описанных в настоящем описании, может быть полезным для всех пациентов со злокачественной опухолью и может служить для "замедления прогрессирования", обеспечивая состояние "не прогрессирования" или ремиссии у этих пациентов, частично путем уменьшения их уровней растворимого P-селектина. Это является следствием по меньшей мере частично того, что P-селектин имеет функциональную роль в метастазировании опухолей, сходную с E-селектином. P-селектин экспрессируется на поверхности как стимулированных эндотелиальных клеток, так и активированных тромбоцитов, и помогает злокачественным клеткам проникать в кровоток для метастазирования. Более того, известно, что тромбоциты способствуют метастазированию опухоли посредством образования комплексов с опухолевыми клетками и лейкоцитами в сосудах и, таким образом, препятствования распознаванию макрофагами; полагают, что это приводит к распределению опухолевых микроэмболов в отдаленные органы. Эксперименты на мышах in vivo показали, что снижение уровней циркулирующих тромбоцитов может уменьшать метастазирование злокачественной опухоли.

[0089] Кроме того, одним из сульфатированных лигандов является хондроитинсульфат, тип гликозаминогликана (GAG). Его активность при метастазировании опухоли исследовали добавлением гепарина, который функционирует, блокируя метастазирование опухоли. В дополнение к GAG, муцин представляет интерес в опосредуемом P-селектином метастазировании опухоли. Селективное устранение муцина приводит к снижению взаимодействия между P-селектином и тромбоцитами in vivo и in vitro.

[0090] Аналогично, гепарин давно известен тем, что он проявляет антигепариназную активность, т.е. препятствует деградации эндогликозидазами гепаринсульфата, одного из гликозаминогликанов, и эффективно ингибирует P-селектин. Несмотря на поразительный эффект гепарина на прогрессирование опухоли, показанный в ряде клинических испытаний, применение гепарина в качестве средства против злокачественной опухоли ограничено вследствие риска, что он может индуцировать неблагоприятные осложнения, связанные с кровотечениями. Таким образом, селективное уменьшение уровня растворимого P-селектина посредством изокверцетина без риска значительных тромботических явлений является значительным достижением, которое обеспечит терапевтическую пользу для всех пациентов со злокачественной опухолью, потенциально выступая в качестве долговременного "фактора уменьшения метастазирования", который может обеспечить периоды выживания без прогрессирования и длительную ремиссию.

[0091] Композиции изокверцетина, кверцетина или рутина, или любого их производного в соответствии с любым из вариантов осуществления, описанных в настоящем описании, можно вводить посредством пероральной или парентеральной (например, внутримышечная, внутрибрюшинная, внутривенная, ICV, интрацистернальная инъекция или инфузия, подкожная инъекция, или имплант) дозированной формы, и они могут быть составлены, отдельно или вместе, в виде подходящих единичных дозированных составов, содержащих общепринятые нетоксичные фармацевтически приемлемые носители, адъюванты и наполнители, подходящие для каждого пути введения. Соединения и композиции, описанные в настоящем описании, также можно составлять в качестве состава с контролируемым высвобождением.

[0092] Композиции изокверцетина, кверцетина или рутина, или любых их производных, в соответствии с любым вариантом осуществления, описанным в настоящем описании, можно вводить в широком диапазоне дозированных форм, включая, например, твердые дозированные формы и жидкие дозированные формы. Твердые дозированные формы могут включать порошки, таблетки, пилюли, капсулы, суппозитории или диспергируемые гранулы. Твердый носитель может представлять собой одно или несколько веществ, которые выполняют функцию разбавителя, вкусовой добавки, растворителя, смазывающего вещества, суспендирующего вещества, связующего вещества, консерванта, вещества для улучшения распадаемости таблеток или инкапсулирующего материала. В порошковой форме носитель может представлять собой мелкораспыленное твердое вещество, включающее лактозу, гидроксипропилметилцеллюлозу и PVP, смешанное с соответствующим количеством активного ингредиента. Подходящие носители для порошковых и таблеточных форм включают, например, карбонат магния, стеарат магния, тальк, сахар, лактозу, пектин, декстрин, повышающие жесткость средства, желатины, трагакант, метилцеллюлозу и натрий карбоксиметилцеллюлозу.

[0093] Жидкие дозированные формы включают, например, растворы, суспензии и эмульсии. Также включены композиции в твердой форме, которые необходимо конвертировать в жидкую форму непосредственно перед применением. Эти формы могут включать, в дополнение к активным ингредиентам, искусственные красители, вкусовые добавки, стабилизаторы, буферы, натуральные или искусственные подсластители, диспергирующие вещества, загустители, растворители и т.п.

[0094] Растворы и смеси можно вводить непосредственно в полость носа с использованием общепринятых средств, таких как капли или спреи. Композиция может быть изготовлена в индивидуальной или многодозовой форме. Многодозовые формы включают капельницу, пипетку или распылитель, которые доставляют заданный объем композиции.

[0095] Композиции изокверцетина, кверцетина или рутина, или любого их производного, в соответствии с любым вариантом осуществления, описанным в настоящем описании, могут быть предоставлены в индивидуальных дозированных единицах, которые содержат подходящее количество активного ингредиента.

[0096] Индивидуальные дозы могут быть предоставлены в упаковке или в качестве набора, который включает отмеряющее устройство, например, устройства для отмеривания пероральных или инъекционных дозировок (т.е. мерная чашка, игла или шприц). Набор также может включать другие материалы, такие как буферы, разбавители, фильтры и вкладыши в упаковку с инструкциями по применению. На наборе может находиться ярлык для указания на то, что композицию применяют для конкретной терапии, а также на нем могут быть указаны инструкции по применению.

[0097] Если желательно, композиции по настоящему изобретению, кроме того, могут содержать одно или несколько дополнительных активных веществ. В соответствующих случаях любое из активных веществ можно вводить в форме непосредственно соединения и/или в форме соли, полиморфа, сложного эфира, амида, пролекарства, производного и т.п., при условии, что соль, полиморф, сложный эфир, амид, пролекарство или производное являются фармакологически приемлемыми. В соответствующих случаях соли, сложные эфиры, амиды, пролекарства и другие производные активных веществ можно получать с использованием стандартных методик, известных специалистам в области синтетической органической химии и описанных, например, J. March, Advanced Organic Chemistry: Reactions, Mechanisms and Structure, 4th Ed. (New York: Wiley-Interscience, 1992). Для любых активных веществ, которые могут существовать в энантиомерных формах, активное вещество может быть включено в композиции по настоящему изобретению либо в качестве рацемата, либо в энантиомерно обогащенной форме.

[0098] В некоторых вариантах осуществления вводимая дозировка композиций изокверцетина, кверцетина или рутина, или любого их производного, согласно любому из описанных вариантов осуществления, зависит от состояния, от которого лечат, конкретного соединения, и других клинических факторов, таких как возраст, пол, масса тела и состояние здоровья индивидуума, подвергаемого лечению, пути введения соединения(ий) и типа вводимой композиции (таблетка, желатиновая капсула, капсула, раствор, суспензия, ингаляционная форма, аэрозоль, эликсир, пастилка, инъекционная форма, пластырь, мазь, крем и т.д.). Следует понимать, что настоящее изобретение применимо как для человека, так и для животных. Количество кверцетина или производного кверцетина согласно любому из описанных вариантов осуществления, требуемое для применения для лечения, в конечном итоге зависит от мнения лечащего врача или клинициста.

[0099] В некоторых вариантах осуществления композиции изокверцетина, кверцетина или рутина, или любого их подходящего производного могут иметь форму мягкой жевательной композиции, которая включает изокверцетин, кверцетин или рутин или любое их подходящее производное, ниацинамид, аскорбиновую кислоту, аскорбат натрия, фолиевую кислоту, сахар, кукурузный сироп, сукралозу, соевый лецитин, подсолнечный лецитин, кукурузный крахмал, глицерин, пальмовое масло, ксилит, каррагенан, FD&C Yellow #6, FD&C Yellow #5, или натуральные или искусственные вкусовые добавки. Необязательно, любая из композиций кверцетина, производного кверцетина, изокверцетина, производного изокверцетина, или рутина или прозиводного рутина, описанных в настоящем описании, может дополнительно содержать компоненты, такие как витамин B₃, витамин C и/или фолиевая кислота. Иллюстративная мягкая жевательная композиция (5,15 г) включает 250 мг изокверцетина, 12,9 мг витамина B₃ (т.е. ниацинамид) и 382,8 мг витамина C (т.е. L-аскорбиновая кислота и аскорбат натрия). В следующих иллюстративных вариантах осуществления компоненты иллюстративной мягкой жевательной композиции являются такими же, за исключением того, что активное вещество заменено на 500 мг или 1000 мг изокверцетина. Например, индивидуум может принимать от одной до восьми порций (например, 4 порции) этой мягкой жевательной композиции в сутки. Принимаемые количества могут варьироваться в зависимости, например, от нарушения или состояния, от которого лечат, и физического состояния индивидуума. Другая иллюстративная композиция этой мягкой жевательной композиции включает 5,25 масс.% кверцетина, 0,25 масс.% витамина B₃, и 7,81 масс.% витамина C (т.е. L-аскорбиновая кислота и аскорбат натрия) плюс 200 мкг фолиевой кислоты на жевательную композицию.

[0100] В некоторых вариантах осуществления изокверцетин, кверцетин или рутин вводят в композиции, содержащей витамин B3, и она необязательно дополнительно содержит витамин C и необязательно дополнительно содержит фолиевую кислоту.

[0101] В некоторых вариантах осуществления изокверцетин, кверцетин или рутин вводят в композиции, содержащей от приблизительно 20 микрограммов до приблизительно 3 граммов витамина B3, и она необязательно дополнительно содержит от приблизительно 200 микрограммов до приблизительно 3 граммов витамина C, и необязательно дополнительно содержит от 1000 микрограммов до приблизительно 3000 микрограммов фолиевой кислоты (например, фолата).

[0102] Когда описанная выше композиция имеет форму порошка, ее можно использовать удобным образом для получения напитка, пасты, желе, капсул или таблеток. Часто в качестве разбавителей для капсул и в качестве носителей для таблеток используют лактозу и кукурузный крахмал. Как правило, в таблетки включают смазывающие вещества, такие как стеарат магния.

[0103] Пероральная биодоступность изокверцетина, кверцетина или рутина в вышеупомянутых составах капсул или таблеток может быть улучшена с использованием определенных добавок. Например, капсула или таблетка может включать обработанный кислотой желатин, цитрат, гидроксид калия и/или циклодекстрин. Предпочтительное количество этих добавок на мг изокверцетина, кверцетина или рутина составляет 0,01-0,5 мг гидроксида калия, 0,01-0,7 мг обработанного кислотой желатина, 0,1-1 мг цитрата и 0,01-1 мг циклодекстрина. Изокверцетин, кверцетин или рутин в присутствии добавок может иметь растворимость в водном растворе 2-5%. Кроме того, pH состава, содержащего изокверцетин, кверцетин или рутин, с улучшенной пероральной биодоступностью может составлять от pH 7 до pH 12.

[0104] Композиция изокверцетина, кверцетина или рутина, вводимая в способах по настоящему изобретению, может представлять собой биоактивную пищевую добавку или фармацевтический состав. В случае биоактивной пищевой добавки, могут быть включены дополнительные питательные вещества, такие как минералы или аминокислоты. Фармацевтический состав может представлять собой стерильный инъекционный или инфузионный раствор, который содержит композицию изокверцетина, кверцетина или рутина вместе с фармацевтически приемлемыми эксципиентами. Композиция изокверцетина, кверцетина или рутина также может представлять собой продукт питания. Как используют в рамках изобретения, термин "продукт питания" в широком значении относится к любому типу жидких и твердых/полутвердых материалов, которые используются для питания человека или животных, для поддержания нормального или ускоренного роста, или для поддержания выносливости или активности. Примеры пищевых продуктов для человека включают, но не ограничиваются ими, напитки на основе чая, сок, кофе, молок, желе, печенье, крупы, шоколад, батончики, травяные экстракты, молочные продукты (например, мороженое и йогурт), соевые продукты (например, тофу) и продукты из риса.

[0105] Дозировка соединения в качестве активного ингредиента в композициях по настоящему изобретению может варьироваться, так чтобы была получена подходящая дозированная форма. Активный ингредиент можно вводить пациентам (животные и человек), нуждающимся в таком лечении, в дозировках, которые обеспечивают оптимальную фармацевтическую эффективность. Выбранная дозировка зависит от желаемого терапевтического эффекта, от пути введения и от длительности лечения. Доза варьируется от пациента к пациенту в зависимости от природы и тяжести заболевания, массы тела пациента, специальной диеты, соблюдаемой пациентом, сопутствующего лечения и других факторов, понятных специалистам в данной области.

[0106] В некоторых вариантах осуществления терапевтически эффективное количество составляет приблизительно от 500 мг до 5 граммов в сутки. В определенных дополнительных вариантах осуществления терапевтически эффективное количество составляет приблизительно 4 грамма, или 3 грамма, или даже 2 грамма. В определенных вариантах осуществления терапевтически эффективное количество составляет от приблизительно 500 мг до приблизительно 2000 мг в сутки.

[0107] В некоторых вариантах осуществления терапевтически эффективное количество находится между нижним пределом, составляющим приблизительно 500 мг/сутки, приблизительно 525 мг/сутки, приблизительно 550 мг/сутки, приблизительно 575 мг/сутки, приблизительно 600 мг/сутки, приблизительно 625 мг/сутки, приблизительно 650 мг/сутки, приблизительно 675 мг/сутки, приблизительно 700 мг/сутки, приблизительно 725 мг/сутки, приблизительно 750 мг/сутки, приблизительно 775 мг/сутки, приблизительно 800 мг/сутки, приблизительно 825 мг/сутки, приблизительно 850 мг/сутки, приблизительно 875 мг/сутки, приблизительно 900 мг/сутки, приблизительно 925 мг/сутки, приблизительно 950 мг/сутки, приблизительно 975 мг/сутки, приблизительно 1000 мг/сутки, приблизительно 1025 мг/сутки, приблизительно 1050 мг/сутки, приблизительно 1075 мг/сутки, приблизительно 1100 мг/сутки, 1125 мг/сутки, приблизительно 1150 мг/сутки, приблизительно 1175 мг/сутки, приблизительно 1200 мг/сутки, 1225 мг/сутки, приблизительно 1250 мг/сутки, приблизительно 1275 мг/сутки, приблизительно 1300 мг/сутки, 1325 мг/сутки, приблизительно 1350 мг/сутки, приблизительно 1375 мг/сутки, приблизительно 1400 мг/сутки, 1425 мг/сутки, приблизительно 1450 мг/сутки, приблизительно 1475 мг/сутки, приблизительно 1500 мг/сутки, приблизительно 1525 мг/сутки, приблизительно 1550 мг/сутки, приблизительно 1575 мг/сутки, приблизительно 1600 мг/сутки, приблизительно 1625 мг/сутки, приблизительно 1650 мг/сутки, приблизительно 1675 мг/сутки, приблизительно 1700 мг/сутки, приблизительно 1725 мг/сутки, приблизительно 1750 мг/сутки, приблизительно 1775 мг/сутки, приблизительно 1800 мг/сутки, приблизительно 1825 мг/сутки, приблизительно 1850 мг/сутки, приблизительно 1875 мг/сутки, приблизительно 1900 мг/сутки, приблизительно 1925 мг/сутки, приблизительно 1950 мг/сутки, приблизительно 1975 мг/сутки, приблизительно 2000 мг/сутки, приблизительно 2025 мг/сутки, приблизительно 2050 мг/сутки, приблизительно 2075 мг/сутки, приблизительно 2100 мг/сутки, 2125 мг/сутки, приблизительно 2150 мг/сутки, приблизительно 2175 мг/сутки, приблизительно 2200 мг/сутки, 2225 мг/сутки, приблизительно 2250 мг/сутки, приблизительно 2275 мг/сутки, приблизительно 2300 мг/сутки, 2325 мг/сутки, приблизительно 2350 мг/сутки, приблизительно 2375 мг/сутки, приблизительно 2400 мг/сутки, 2425 мг/сутки, приблизительно 2450 мг/сутки, приблизительно 2475 мг/сутки, приблизительно 2500 мг/сутки, приблизительно 2525 мг/сутки, приблизительно 2550 мг/сутки, приблизительно 2575 мг/сутки, приблизительно 2600 мг/сутки, приблизительно 2625 мг/сутки, приблизительно 2650 мг/сутки, приблизительно 2675 мг/сутки, приблизительно 2700 мг/сутки, приблизительно 2725 мг/сутки, приблизительно 2750 мг/сутки, приблизительно 2775 мг/сутки, приблизительно 2800 мг/сутки, приблизительно 2825 мг/сутки, приблизительно 2850 мг/сутки, приблизительно 2875 мг/сутки, приблизительно 2900 мг/сутки, приблизительно 2925 мг/сутки, приблизительно 2950 мг/сутки, приблизительно 2975 мг/сутки, приблизительно 3000 мг/сутки, приблизительно 3025 мг/сутки, приблизительно 3050 мг/сутки, приблизительно 3075 мг/сутки, приблизительно 3100 мг/сутки, 3125 мг/сутки, приблизительно 3150 мг/сутки, приблизительно 3175 мг/сутки, приблизительно 3200 мг/сутки, 3225 мг/сутки, приблизительно 3250 мг/сутки, приблизительно 3275 мг/сутки, приблизительно 3300 мг/сутки, 3325 мг/сутки, приблизительно 3350 мг/сутки, приблизительно 3375 мг/сутки, приблизительно 3400 мг/сутки, 3425 мг/сутки, приблизительно 3450 мг/сутки, приблизительно 3475 мг/сутки, приблизительно 3500 мг/сутки, приблизительно 3525 мг/сутки, приблизительно 3550 мг/сутки, приблизительно 3575 мг/сутки, приблизительно 3600 мг/сутки, приблизительно 3625 мг/сутки, приблизительно 3650 мг/сутки, приблизительно 3675 мг/сутки, приблизительно 3700 мг/сутки, приблизительно 3725 мг/сутки, приблизительно 3750 мг/сутки, приблизительно 3775 мг/сутки, приблизительно 3800 мг/сутки, приблизительно 3825 мг/сутки, приблизительно 3850 мг/сутки, приблизительно 3875 мг/сутки, приблизительно 3900 мг/сутки, приблизительно 3925 мг/сутки, приблизительно 3950 мг/сутки, приблизительно 3975 мг/сутки, приблизительно 4000 мг/сутки, приблизительно 4025 мг/сутки, приблизительно 4050 мг/сутки, приблизительно 4075 мг/сутки, приблизительно 4100 мг/сутки, 4125 мг/сутки, приблизительно 4150 мг/сутки, приблизительно 4175 мг/сутки, приблизительно 4200 мг/сутки, 4225 мг/сутки, приблизительно 4250 мг/сутки, приблизительно 4275 мг/сутки, приблизительно 4300 мг/сутки, 4325 мг/сутки, приблизительно 4350 мг/сутки, приблизительно 4375 мг/сутки, приблизительно 4400 мг/сутки, 4425 мг/сутки, приблизительно 4450 мг/сутки, приблизительно 4475 мг/сутки, приблизительно 4500 мг/сутки, приблизительно 4525 мг/сутки, приблизительно 4550 мг/сутки, приблизительно 4575 мг/сутки, приблизительно 4600 мг/сутки, приблизительно 4625 мг/сутки, приблизительно 4650 мг/сутки, приблизительно 4675 мг/сутки, приблизительно 4700 мг/сутки, приблизительно 4725 мг/сутки, приблизительно 4750 мг/сутки, приблизительно 4775 мг/сутки, приблизительно 4800 мг/сутки, приблизительно 4825 мг/сутки, приблизительно 4850 мг/сутки, приблизительно 4875 мг/сутки, приблизительно 4900 мг/сутки, приблизительно 4925 мг/сутки, приблизительно 4950 мг/сутки, приблизительно 4975 мг/сутки и приблизительно 5000 мг/сутки; и верхним пределом, составляющим приблизительно 5000 мг/сутки, приблизительно 4975 мг/сутки, приблизительно 4950 мг/сутки, приблизительно 4925 мг/сутки, приблизительно 4900 мг/сутки, приблизительно 4875 мг/сутки, приблизительно 4850 мг/сутки, приблизительно 4825 мг/сутки, приблизительно 4800 мг/сутки, приблизительно 4775 мг/сутки, приблизительно 4750 мг/сутки, приблизительно 4725 мг/сутки, приблизительно 4700 мг/сутки, приблизительно 4675 мг/сутки, приблизительно 4650 мг/сутки, приблизительно 4625 мг/сутки, приблизительно 4600 мг/сутки, приблизительно 4575 мг/сутки, приблизительно 4550 мг/сутки, приблизительно 4525 мг/сутки, приблизительно 4500 мг/сутки, 4475 мг/сутки, приблизительно 4450 мг/сутки, приблизительно 4425 мг/сутки, приблизительно 4400 мг/сутки, приблизительно 4375 мг/сутки, приблизительно 4350 мг/сутки, приблизительно 4325 мг/сутки, приблизительно 4300 мг/сутки, приблизительно 4275 мг/сутки, приблизительно 4250 мг/сутки, приблизительно 4225 мг/сутки, приблизительно 4200 мг/сутки, приблизительно 4175 мг/сутки, приблизительно 4150 мг/сутки, приблизительно 4125 мг/сутки, приблизительно 4100 мг/сутки, приблизительно 4075 мг/сутки, приблизительно 4050 мг/сутки, приблизительно 4025 мг/сутки, приблизительно 4000 мг/сутки, 3975 мг/сутки, приблизительно 3950 мг/сутки, приблизительно 3925 мг/сутки, приблизительно 3900 мг/сутки, приблизительно 3875 мг/сутки, приблизительно 3850 мг/сутки, приблизительно 3825 мг/сутки, приблизительно 3800 мг/сутки, приблизительно 3775 мг/сутки, приблизительно 3750 мг/сутки, приблизительно 3725 мг/сутки, приблизительно 3700 мг/сутки, приблизительно 3675 мг/сутки, приблизительно 3650 мг/сутки, приблизительно 3625 мг/сутки, приблизительно 3600 мг/сутки, приблизительно 3575 мг/сутки, приблизительно 3550 мг/сутки, приблизительно 3525 мг/сутки, приблизительно 3500 мг/сутки, 3475 мг/сутки, приблизительно 3450 мг/сутки, приблизительно 3425 мг/сутки, приблизительно 3400 мг/сутки, приблизительно 3375 мг/сутки, приблизительно 3350 мг/сутки, приблизительно 3325 мг/сутки, приблизительно 3300 мг/сутки, приблизительно 3275 мг/сутки, приблизительно 3250 мг/сутки, приблизительно 3225 мг/сутки, приблизительно 3200 мг/сутки, приблизительно 3175 мг/сутки, приблизительно 3150 мг/сутки, приблизительно 3125 мг/сутки, приблизительно 3100 мг/сутки, приблизительно 3075 мг/сутки, приблизительно 3050 мг/сутки, приблизительно 3025 мг/сутки, приблизительно 3000 мг/сутки, 2975 мг/сутки, приблизительно 2950 мг/сутки, приблизительно 2925 мг/сутки, приблизительно 2900 мг/сутки, приблизительно 2875 мг/сутки, приблизительно 2850 мг/сутки, приблизительно 2825 мг/сутки, приблизительно 2800 мг/сутки, приблизительно 2775 мг/сутки, приблизительно 2750 мг/сутки, приблизительно 2725 мг/сутки, приблизительно 2700 мг/сутки, приблизительно 2675 мг/сутки, приблизительно 2650 мг/сутки, приблизительно 2625 мг/сутки, приблизительно 2600 мг/сутки, приблизительно 2575 мг/сутки, приблизительно 2550 мг/сутки, приблизительно 2525 мг/сутки, приблизительно 2500 мг/сутки, 2475 мг/сутки, приблизительно 2450 мг/сутки, приблизительно 2425 мг/сутки, приблизительно 2400 мг/сутки, приблизительно 2375 мг/сутки, приблизительно 2350 мг/сутки, приблизительно 2325 мг/сутки, приблизительно 2300 мг/сутки, приблизительно 2275 мг/сутки, приблизительно 2250 мг/сутки, приблизительно 2225 мг/сутки, приблизительно 2200 мг/сутки, приблизительно 2175 мг/сутки, приблизительно 2150 мг/сутки, приблизительно 2125 мг/сутки, приблизительно 2100 мг/сутки, приблизительно 2075 мг/сутки, приблизительно 2050 мг/сутки, приблизительно 2025 мг/сутки, приблизительно 2000 мг/сутки, 1975 мг/сутки, приблизительно 1950 мг/сутки, приблизительно 1925 мг/сутки, приблизительно 1900 мг/сутки, приблизительно 1875 мг/сутки, приблизительно 1850 мг/сутки, приблизительно 1825 мг/сутки, приблизительно 1800 мг/сутки, приблизительно 1775 мг/сутки, приблизительно 1750 мг/сутки, приблизительно 1725 мг/сутки, приблизительно 1700 мг/сутки, приблизительно 1675 мг/сутки, приблизительно 1650 мг/сутки, приблизительно 1625 мг/сутки, приблизительно 1600 мг/сутки, приблизительно 1575 мг/сутки, приблизительно 1550 мг/сутки, приблизительно 1525 мг/сутки, приблизительно 1500 мг/сутки, 1475 мг/сутки, приблизительно 1450 мг/сутки, приблизительно 1425 мг/сутки, приблизительно 1400 мг/сутки, приблизительно 1375 мг/сутки, приблизительно 1350 мг/сутки, приблизительно 1325 мг/сутки, приблизительно 1300 мг/сутки, приблизительно 1275 мг/сутки, приблизительно 1250 мг/сутки, приблизительно 1225 мг/сутки, приблизительно 1200 мг/сутки, приблизительно 1175 мг/сутки, приблизительно 1150 мг/сутки, приблизительно 1125 мг/сутки, приблизительно 1100 мг/сутки, приблизительно 1075 мг/сутки, приблизительно 1050 мг/сутки, приблизительно 1025 мг/сутки, приблизительно 1000 мг/сутки, приблизительно 975 мг/сутки, приблизительно 950 мг/сутки, приблизительно 925 мг/сутки, приблизительно 900 мг/сутки, приблизительно 875 мг/сутки, приблизительно 850 мг/сутки, приблизительно 825 мг/сутки, приблизительно 800 мг/сутки, приблизительно 775 мг/сутки, приблизительно 750 мг/сутки, приблизительно 725 мг/сутки, приблизительно 700 мг/сутки, приблизительно 675 мг/сутки, приблизительно 650 мг/сутки, приблизительно 625 мг/сутки, приблизительно 600 мг/сутки, приблизительно 575 мг/сутки, приблизительно 550 мг/сутки, приблизительно 525 мг/сутки, и приблизительно 500 мг/сутки.

[0108] Соединения можно вводить согласно режиму от 1 до 4 раз в сутки, например, один раз, два раза, три раза или четыре раза в сутки.

[0109] Проводили оценку эффективности введения изокверцетина для снижения повышенной свертываемости крови у пациентов со злокачественной опухолью. Венозную тромбоэмболию (VTE) часто наблюдают у пациентов со злокачественной опухолью, и она является основной причиной смертности в этой группе. У пациентов со злокачественной опухолью высокого риска, особенно когда проводится предусматриваемый протоколом радиографический мониторинг тромбоза глубоких вен, встречаемость VTE в пределах первых нескольких месяцев химиотерапии часто превышает 20%. Пациенты со злокачественной опухолью также имеют увеличенный риск кровотечений, который ограничивает применение стандартной первичной профилактики тромбоза амбулаторных пациентов со злокачественной опухолью, которым проводят химиотерапию. Разработка антитромботических средств, которые снижают встречаемость VTE без повышения риска значительных кровотечений, может оказать значительное влияние на лечение пациентов с развернутой злокачественной опухолью, а также для любого пациента со злокачественной опухолью.

ПРИМЕРЫ

ПРИМЕР 1: Многоцентровое многодозовое испытание фазы II

[0110] Многоцентровое многодозовое испытание фазы II проводили для оценки, среди других маркеров и показателей, эффективности нацеливания на протеиндисульфидизомеразу (PDI) вместе с растворимым P-селектином посредством изокверцетина для снижения повышенной свертываемости крови у пациентов со злокачественной опухолью, имеющих высокой риск венозной тромбоэмболии (VTE). Пациентам вводили изокверцетин в дозе 500 мг (группа A) или 1000 мг (группа B) каждые сутки в течение 56 суток с проведением лабораторных анализов в начале и при завершении испытания (вместе с дуплексным ультразвуковым исследованием). Первичным результатом было снижение уровня D-димера и первичный клинический результат включал легочную эмболию или проксимальный тромбоз глубоких вен, а также включал измерение уровня растворимого P-селектина. (См., Zwicker et al., JCI Insight.2019; 4(4):e125851).

[0111] Для участия в испытании было привлечено всего 64 пациента. Всех пациентов, которые получали по меньшей мере 1 дозу изокверцетина, оценивали в отношении развития VTE, кровотечения и безопасности (фиг.1). Всего было 28 оцениваемых пациентов в группе A (изокверцетин 500 мг каждые сутки) и 29 в группе B (изокверцетин 1000 мг каждые сутки). В таблице 1 представлены исходные демографические данные для этих двух групп дозирования. Распределение на группы было сходным в отношении злокачественных опухолей поджелудочной железы, немелкоклеточного рака легкого и рака ободочной и прямой кишки. Приблизительно половина пациентов была включена в начале первоначального химиотерапевтического режима и половина в начале терапии второй линии.

[0112] Ингибирование D-димера и PDI

[0113] Первичным результатом исследования было сравнение уровня D-димера в плазме на исходном уровне и в конце исследования. D-димер высвобождается из сшитого фибрина после опосредуемой плазмой деградации. Анализ на D-димер является наиболее проверенным или часто используемым лабораторным анализом в клинике для выявления глубокого тромбоза вен. У пациентов с развернутой злокачественной опухолью уровни D-димера в плазме часто повышены и коррелируют с повышенным риском развития VTE.

[0114] Как показано на фиг.2A, в группе A наблюдали незначимое срединное изменение уровня D-димера +9,90% после введения изокверцетина 500 мг каждые сутки в 25 доступных парных образцах (парный t-критерий P=0,92). В группе B, фиг.2B, уровень D-димера были снижен у большинства индивидуумов (18 из 22) со значимым срединным изменением -21,9% (парный t-критерий P=0,0002).

[0115] Мониторинг ингибиторной активности PDI можно проводить с использованием анализа на основе плазмы, который измеряет предотвращение тушения частей эозина в флуоресцентном зонде ди-эозин-GSSG. В обоих группах ингибиторная активность PDI значительно снижалась после ежедневного введения изокверцетина в течение 2 месяцев (фиг.4A-B). Срединное изменение ингибиторной активности PDI для группы A (фиг.4A) составляло +37,0% (P=0,001) и +73,3% в группе B (фиг.4B) (P<0,001).

[0116] Венозная тромбоэмболия

[0117] Пациентов подвергали мониторингу в отношении и развития венозной тромбоэмболии (VTE) на протяжении двух месяцев испытания, включая двухстороннее ультразвуковое исследование нижних конечностей в конце испытания для оценки бессимптомного проксимального DVT нижних конечностей. На фиг.3A-D представлена доля пациентов, оставшихся не имеющими VTE в ходе исследования. Не было VTE, которые удовлетворяли критериям первичного результата VTE в какой-либо из групп (фиг. 3A-B). В группе A было зарегистрировано три вторичных результата VTE (фиг.3C, два несущественных ассоциированных с катетером DVT, диагностированных при визуализации для повторного определения стадии, и тромб поверхностной вены нижней конечности). В группе B (фиг.3D) было зарегистрировано два вторичных конечных тромботических явления (тромб поверхностной вены нижней конечности и несущественный тромбоз, выявленный в вене язычка легкого при визуализации для повторного определения стадии).

[0118] Ингибирование образования тромбина

[0119] Анализ образования зависимого от тромбоцитов тромбина измеряет образование тромбина после активации тромбоцитов и требует PDI. Как показано на фиг.5A-B, введение изокверцетина приводило к значительному снижению образования тромбина как в группе A (фиг.5A) (срединное изменение -31,1% P=0,001), так и в группе B (фиг.5B) (срединное изменение -57,2%, P=0,004). Корреляция между ингибиторной активностью PDI в плазме и образованием зависимого от тромбоцитов тромбина подтвердила зависимость от PDI образования тромбина (коэффициент Спирмана 0,29, P=0,004). Существовала значимая корреляция между повышением ингибиторной активности PDI в плазме и снижением образования тромбина (коэффициент корреляции Пирсона 0,45, P=0,002).

[0120] В стандартных анализах свертывания после введения изокверцетина не было обнаружено эффектов. В группе A среднее PT на исходном уровне составило 14,0 секунды по сравнению с 14,3 секунды через 2 месяца (P=0,37) и среднее PTT составило 49,6 секунды на исходном уровне и 45,6 секунды при завершении испытания (P=0,11). В группе B среднее PT на исходном уровне составило 15,1 секунды по сравнению с 15,2 секунды через 2 месяца (P=0,88) и среднее PTT составило 54,2 секунды и 51,9 секунды в соответствующие моменты времени (P=0,37).

[0121] P-селектин представляет собой трансмембранный рецептор адгезии, который высвобождается из α-гранул в тромбоцитах и телец Вейбеля-Палада в эндотелиальных клетках после активации клеток. P-селектин может отделяться от поверхности клетки после высвобождения и отделение P-селектина повышено при сердечно-сосудистых заболеваниях, сепсисе и злокачественной опухоли. Было показано, что повышенные уровни растворимого P-селектина является прогностическим фактором для VTE в группах со злокачественной опухолью. Поскольку ингибирование PDI изменяет тромбоцитарную и эндотелиальную реактивность, проводили сравнение уровней в плазме на исходном уровне и в конце лечения растворимого P-селектина после лечения изокверцетином. Как показано на фиг.6A-B, не было изменений растворимого P-селектина в группе A (фиг.6A) (срединное изменение -0,3%, P= 0,26). Напротив, в группе B (фиг.6B) уровень растворимого P-селектина снизился у всех пациентов кроме одного, со срединным снижением -57,9% (P<0,001). Пять пациентов в каждой группе одновременно принимали аспирин в низкой дозе, однако введение аспирина в низкой дозе не влияло на наблюдаемое изменение уровня растворимого P-селектина в группе A (P=0,62) или группе B (P=0,81).

Безопасность

[0122] Не было выявлено значительных кровотечений ни в одной из групп лечения в модифицированном анализе выборки с намерением лечиться. У одного пациента в группе A было носовое кровотечение степени 1 и у двух пациентов в группе B было нетяжелое желудочно-кишечное кровотечение (геморроидальный узел степени 1 и ректальное кровотечение степени 2, связанное с радиационном проктитом). Наиболее часто сообщаемой токсичностью в ходе исследования были тошнота и диарея, которые являются частыми видами токсичности сопутствующих вводимых химиотерапевтических средств. Не было тяжелых неблагоприятных явлений (степени 3 или 4), связанных с введением изокверцетина. Не было сообщенных смертей после начала введения изокверцетина в ходе наблюдения в течение 2 месяцев.

[0123] Результаты этого клинического испытания фазы II подтверждают, что внеклеточный PDI является подходящей терапевтической мишенью для антитромботической терапии. В дозе 1000 мг каждые сутки изокверцетин ингибировал активность PDI в плазме и значительно снижал уровни D-димера в плазме. В выборке со злокачественной опухолью, которая считается имеющей более высокий риск тромбоза и кровотечения, у подвергаемых лечению пациентов не наблюдали ни одно из следующих: проксимальный тромбоз глубоких вен, легочные эмболы или значительное кровотечение.

[0124] Повышение уровня D-димера в плазме ассоциировано с повышенным риском тромбоза у пациентов со злокачественной опухолью. Терапевтическая антикоагуляция с прямыми пероральными антикоагулянтами снижает уровень D-димера приблизительно на 20%, что является сходным с процентным снижением, наблюдаемым при дозировании 1000 мг изокверцетина у здоровых индивидуумов (Clinicaltrials.gov NCT01722669). Более низкая доза изокверцетина (500 мг) не снижала уровни D-димера. Предшествующие фармакокинетические исследования указывают на то, что концентрации изокверцетина в плазме в случае 500 мг снижаются ниже ингибиторной концентрации (IC50) для активности PDI in vitro.

[0125] Таким образом, данные, иллюстрирующие уменьшение уровней растворимого P-селектина, ассоциированное с дозой 1000 мг в группе B, указывают на то, что P-селектин является хорошей мишенью и, возможно, индикатором снижения вероятности и снижения риска тромбоза у пациентов со злокачественной опухолью. В выборке со злокачественной опухолью, считающейся имеющей более высокий риск тромбоза и кровотечения, у подвергаемых лечению пациентов не наблюдали ни одного из следующих: проксимальный тромбоз глубоких вен, легочные эмболы и значительное кровотечение.

[0126] Наблюдаемое снижение на 37% активности ингибирования PDI в дозе 500 мг каждые сутки может быть ниже порогового уровня, требуемого для влияния на уровни D-димера в плазме. Решение продолжать клиническое испытание при обеих уровнях доз было основано на отсутствии данных о долговременной безопасности изокверцетина, особенно в выборке пациентов, считающейся имеющей повышенный риск кровотечения (в соответствии с рекомендациями Управление по контролю за качеством пищевых продуктов и медикаментов). Это решение было частично основано на неясности в отношении кумулятивного эффекта повторяющегося дозирования на активности PDI и плохо понятных механизмах, посредством которых PDI регулирует тромбоз, особенно учитывая, что доза кверцетин-3-рутинозида, требуемая для ингибирования агрегации тромбоцитов in vitro, имеет такой порядок величины, который превышает требуемый для ингибирования агрегации тромбоцитов in vivo. Интересно, что, несмотря на отсутствие наблюдения снижения уровня D-димера при более низком уровне дозы изокверцетина (группа A в дозе 500 мг), было измерено значительное уменьшение образования зависимого от тромбоцитов тромбина и не было зарегистрированных первичных конечных результатов VTE. Эти данные указывают на то, что D-димер может не быть чувствительным биомаркером для прогнозирования терапевтической эффективности изокверцетина в отношении предупреждения VTE и, в действительности, уменьшение уровня растворимого P-селектина может быть подходящим биомаркером.

[0127] Отсутствие VTE в обеих группах является интересным и важным наблюдением. Аналогично другому испытанию фазы II, проведенному для оценки эффективности низкомолекулярного гепарина для предупреждения тромбоза у пациентов с высоким риском, была осуществлена интенсивная скрининговая стратегия для идентификации бессимптомных проксимальных тромбов глубоких вен. Те же критерии включения и исключения использовали в предшествующем испытании, направленном на фармакокинетические и фармакодинамические показатели безопасности у здоровых индивидуумов (Clinicaltrials.gov NCT01722669), где VTE была документально подтверждена приблизительно у 20% из тех, которым не проводили фармакологическую профилактику тромбов (JCI Insight 2017; 2(1)e89373). В других исследованиях злокачественной опухоли, в которых проводилась определяемая протоколом визуализация VTE, более чем у 20% пациентов с высоким риском была диагностирована VTE. В настоящем описании была назначена предварительно запланированная независимая комиссия по оценке VTE, и она включала централизованное радиологическое изучение всех радиографических исследований, указывающих на тромботическое явление. Подтверждение уменьшения встречаемости проксимального DVT или легочной эмболии (PE) посредством изокверцетина требует дальнейшей клинической оценки, такой как большое рандомизированное контролируемое клиническое испытание.

[0128] В дозах, оцениваемых в текущем испытании, введение изокверцетина снижало зависимое от тромбоцитов образование тромбина, но не вызывало серьезных кровотечений. Было показано, что полное ингибирование активности PDI в плазме посредством блокирующих антител продлевает время кровотечения из хвоста у мышей. Kim и коллеги выявили, что время кровотечения из хвоста не продлевалось у мышей с дефицитом специфичного к тромбоцитам PDI, несмотря на общее уменьшение размера тромба после индуцированного лазером повреждения (Kim K. et al. Blood. 2013;122(6):1052-61). Ввиду этих данных и наблюдений, полагают, что гемостатическое-антитромботическое равновесие является сходным с тем, которое наблюдалось в моделях на животных, причем неполное ингибирование активности внеклеточного PDI влияет на увеличение тромба без значительного влияния на гемостаз.

[0129] Эти результаты показывают, что изокверцетин значительно снижает уровни растворимого P-селективна, и что это является активностью, которой не обладают другие стандартные антикоагулянты, такие как варфарин, дабигатран или ривароксабан. P-селектин опосредует связывание с гликопротеиновым лигандом 1 на поверхности лейкоцитов, способствуя образованию микрочастиц, несущих тканевой фактор, и образованию тромба. Растворимый P-селектин образуется посредством протеолитического расщепления эктодомена после адгезии лейкоцитов посредством активированных тромбоцитов. Повышенные уровни растворимого P-селектина являются прогностическими для VTE у пациентов со злокачественной опухолью. В проспективном исследовании 687 пациентов со злокачественной опухолью растворимый P-селектин в наивысшем квартиле был ассоциирован с 2,6 раза более высоким риском развития VTE по сравнению с более низкими уровнями. Аналогично, в модели на мышах ассоциированного со злокачественной опухолью тромбоза ингибирование P-селектина полностью устраняло скопление тромбов после инфузии происходящих из клеток рака поджелудочной железы микрочастиц. Эти данные указывают на то, что опосредуемый P-селектином тромбоз играет центральную роль в повышенной свертываемости крови при злокачественной опухоли и, кроме того, служит в поддержку клинической разработки изокверцетина при ассоциированном со злокачественной опухолью тромбозе.

[0130] В общем, пациенты со злокачественной опухолью, которых лечили в группах A и B, имели многочисленную терапевтическую пользу от лечения 500 мг или 1000 мг изокверцетина в ходе курса из 56 суток. Сходная польза может ожидаться для курсов лечения любой длительности, включая 60 суток, 90 суток, 120 суток, 150 суток, 6 месяцев и настолько длительно, насколько лечение изокверцетином является эффективным.

[0131] Важно, что ни в одной из групп не наблюдались первичные конечные результаты VTE. Для первичного результата D-димеров, введение изокверцетина 1000 мг снижало концентрации D-димера в плазме на срединную величину 21,9% (P=0,0002). В группах A и B повышение срединной ингибиторной активности PDI измеряли в плазме на 56 сутки (37,0%, P=0,001; 73,3%, P<0,001, соответственно). В подтверждение антитромботической эффективности, также наблюдали значительное снижение образования зависимого от тромбоцитов тромбина (срединное снижение в группе A -31,1%, P=0,001; срединное снижение в группе B -57,2%, P=0,004) и циркулирующего растворимого P-селектина в дозе изокверцетина 1000 мг (срединное снижение -57,9%, P<0,001). Не наблюдали значительных кровотечений.

[0132] Результаты настоящего клинического испытания демонстрируют прямую корреляцию между активностью PDI и образованием зависимого от тромбоцитов тромбина, а также активностью PDI и уровнями D-димеров, что указывает на то, что антитромботическая активность изокверцетина в основном определяется ингибированием PDI. Не было описано токсичности степени 3 или 4, которая была связана с введением изокверцетина. Эти результаты получены в первом клиническом испытании (Clinicaltrials.gov NCT02195232) для оценки специально клинической эффективности ингибирования PDI у человека. Результаты, иллюстрирующие, что введение изокверцетина пациентам со злокачественной опухолью, имеющим метастазирующее заболевание, успешно достигли всех первичных и вторичных конечных результатов без сигналов безопасности, обеспечивают важную стадию валидации при разработки этого класса терапевтических средств. Наконец, эти данные указывают на то, что опосредуемый P-селектином тромбоз играет центральную роль в повышенной свертываемости при злокачественной опухоли и, кроме того, служит в поддержку клинической разработки изокверцетина при ассоциированном со злокачественной опухолью тромбозе.

СПОСОБЫ

[0133] Схема исследования и участники

Таблица 1. Исходные демографические данные

[0134] Общие количества в каждой группе и проценты (в скобках)

Группа A
n=28 Группа B
n=29 Пол Женский 14 (50) 9 (31) Мужской 14 (50) 20 (69) Возраст - медиана (диапазон) 65 (55-70) 65 (58-69) Тип заболевания Ободочной и прямой кишки - стадия IV 8 (29) 11 (38) NSCLC - стадия III 1 (4) 3 (10) NSCLC - стадия IV 8 (29) 6 (21) Поджелудочной железы - локально развернутый 9 (32) 5 (17) Поджелудочной железы - метастазирующий 2 (7) 4 (14) Предшествующие режимы химиотерапии 0 16 (57) 15 (52) 1 12 (43) 14 (48)

[0135] CATIQ предоставляло собой инициированное исследователями многоцентровое многодозовое открытое клиническое испытание фазы II, проведенное в 10 штатах США. Требовалось, чтобы включаемые в исследование пациенты имели развернутую злокачественную опухоль (нерезектабельная или метастазирующая аденокарцинома поджелудочной железы, рак ободочной и прямой кишки стадии IV, или немелкоклеточный рак легкого стадии III/IV). Пациентов включали в пределах 4 недель от начала химиотерапии первой или второй линии. Дополнительные критерии включения представляли собой: возраст > 18 лет, ожидаемая продолжительной жизни > 4 месяцев, показатель общего состояния Восточной кооперативной онкологической группы (ECOG) < 2, абсолютное количество нейтрофилов > 1×10⁹/л, количество тромбоцитов > 90×10⁹/л, протромбиновое время и частичное тромбопластиновое время в < 1,5 раза больше действующего верхнего предела нормы, общий билирубин < 2,0 мг/дл, аспартатаминотрансфераза и аланинаминотрансфераза в < 2,5 раза больше действующего верхнего предела нормы и креатинин < 2,0 мг/дл. Участников исключали, если им проводили любую другую терапию антикоагулянтами, они имели установленные метастазы в головной мозг, имели предшествующую VTE в анамнезе в течение последних двух лет, имели кровотечение в анамнезе, требующее переливания или госпитализации в течение последних двух лет, имели сопутствующее применение антитромбоцитарных средств (помимо аспирина 81 мг в сутки) или имели данные о диссеминированном внутрисосудистом свертывании. Пациентов включали из онкологических амбулаторных клиник между 2014 и 2018 годами. Все пациенты добровольно давали информированное согласие перед началом процедур исследования. Протокол был одобрен экспертным советом 10 участвующих клинических центров и центрального Dana Farber/Harvard Cancer Center. Кроме того, протокол был изучен и одобрен научно-экспертным советом Quercegen Pharmaceuticals LLC. Координирование и мониторинг исследования проводилось в Офисе научных исследований человека и Офисе качества данных Dana Farber/Harvard Cancer Center, а также Офисе клинических испытаний злокачественных опухолей Beth Israel Deaconess Medical Center.

[0136] Участников последовательно включали в две группы дозирования: группа A (изокверцетин 500 мг) и группа B (изокверцетин 1000 мг). Изокверцетин предоставляли в капсулах, каждая из которых содержала 250 мг изокверцетина с добавлением избыточных 10 мг для гарантии минимум 250 мг изокверцетина на капсулу с добавлением витамина C и витамина B₃, от Quercegen Pharmaceuticals LLC (Boston, MA). Капсулы с лекарственным продуктом производились Pharmavize NV, Kleinmoer 4, 9030 Mariakerke, Бельгия.

[0137] Соотношение компонентов в капсулах составляло: 1:0,25:0,02 изокверцетина, витамина C и витамина B₃, соответственно. Следует отметить, что в композиции изокверцетина необязательно может присутствовать фолиевая кислота. Изокверцетин принимали перорально каждые сутки в течение всего 56 суток. Для первых 5 пациентов в каждой группе проводили мониторинг в отношении признаков токсичности (> 1 случая токсичности степени 3 или выше, возможно связанной с изокверцетином) перед последующим включением 25 пациентов в каждую группу. Пациентов подвергали мониторингу в отношении развития венозного тромбоэмболического явления в ходе испытания, включающему двухстороннее ультразвуковое исследование нижней конечности при конечном посещении в испытании (сутки 56+5). Пациентов исключали из испытания в следующих случаях: если у них развивалось случайное заболевание, которое препятствовало дальнейшему введению; неприемлемые неблагоприятные явления; плохое соблюдение режима лечения; решение участника; VTE или состояние, требующее терапевтической антикоагуляции; необходимость в профилактической антикоагуляции в течение > 7 последовательных дней; или кровотечение степени > 3 или в ином случае удовлетворяющее критериям ISTH для значительного кровотечения. Дозы сохраняли при кровотечении степени 2 или количестве тромбоцитов < 50×10⁹/л.

[0138] Определение результатов

[0139] Взятие крови проводили посредством периферической венопункции в 3,2% цитрат. Плазму разделяли при 2100 g в течение 20 минут в течение одного часа от получения образца. Второе центрифугирование проводили при 2100 g в течение 20 минут для получения свободной от тромбоцитов плазмы и хранили аликвотами при -80°C до анализа. Первичным результатом исследования было снижение уровня D-димера в плазме в конце исследования. Определение D-димер проводили централизованно с использованием Asserrachrom D-Di ELISA, считающегося стандартным анализом для D-димера (Stago, France) (Meyer G. et al., Blood Coagulation & Fibrinolysis. 1998;9(7):603-8.).

[0140] Первичный результат VTE включал любой симптоматический проксимальный или дистальный тромбоз глубоких вен, симптоматическую PE или фатальную PE, диагностированную при вскрытии, бессимптомный проксимальный DVT, диагностированный посредством определяемого протоколом ультразвукового исследования в конце испытания. Все предполагаемые VTE оценивались независимой экспертной комиссией, которая включала центральное радиологическое изучение изображений. Критерии новой VTE включали любой из следующих: A) вновь обнаруженная несжимаемость глубоких сегментов вен нижней конечности при компрессионном ультразвуковом исследовании (дистальные тромбы нижней конечности определяли в качестве первичного результата VTE, только если они были симптоматическими). B) Внутрипросветные дефекты на двух или более изображениях ангиографии легких, внезапное отсечение контраста в одном или нескольких сосудах диаметром более 2,5 мм на ангиограмме легких; высокая вероятность сканирования легких VQ, демонстрирующего один или несколько дефектов перфузии с соответствующей нормальной вентиляцией (дефект несоответствия); или аномальная спиральная CT, демонстрирующая тромб в сосудах легких (субсегментарных или более крупных). Все другие венозные или артериальные явления регистрировали и анализировали в качестве вторичных результатов. Критерии значительного кровотечения соответствовали определению ISTH (Schulman S, and Kearon C. J Thromb Haemost. 2005;3(4):692-4). Всю токсичность оценивали в соответствии с общими терминологическими критериями для неблагоприятных явлений NCI (CTCAE). Надзор за испытанием проводился независимым комитетом по мониторингу безопасности данных в Dana Farber Harvard Cancer Center.

[0141] Анализ ингибирования PDI в плазме проводили, как описано ранее (Stopa J.D. et al. JCI insight. 2017;2(1):e89373). Рекомбинантный PDI человека с двойным мечением посредством FLAG и стрептавидин-связывающего пептида экспрессировали и выделяли из E.coli (BL21) посредством аффинной хроматографии со связанной со стрептавидином агарозной смолой. Очищенный рекомбинантный PDI добавляли в различных концентрациях к фильтрованной обработанной GSSG плазме с 5 мкМ DTT и 150 нМ ди-эозин-GSSG. Мониторинг ферментативной активности проводили посредством флуоресценции эозина (EGSH).

[0142] Анализ с ди-эозин-GSSG. Получение ди-эозин-GSSG проводили, как описано. Обедненную тромбоцитами плазму фильтровали через фильтр Millipore с пороговым значением 30 кДа при 14000 g и фильтрат инкубировали с 10 мкМ GSSG в течение 20 минут при комнатной температуре. Рекомбинантный PDI человека с двойным мечением посредством FLAG и стрептавидин-связывающего пептида экспрессировали и выделяли из E.coli (BL21) посредством аффинной хроматографии со связанной со стрептавидином агарозной смолой. Очищенный рекомбинантный PDI добавляли в различных концентрациях (0, 50, 100, и 250 нМ) к фильтрованной обработанной GSSG плазме с 5 мкМ DTT и 150 нМ ди-эозин-GSSG. Мониторинг ферментативной активности проводили посредством флуоресценции эозина (EGSH) с возбуждением при 525 нм и регистрацией испускания при 545 нм. Были получены линейные показатели, и их конвертировали в единицы ферментативной активности на мл исходного раствора PDI. После стандартизации 2 Е/мл PDI добавляли к 5 мкМ DTT и 150 нМ ди-эозин-GSSG в общем объеме 80 мкл с обработанной GSSG фильтрованной плазмой. Процентное ингибирование оценивали по разности между измеренными единицами активности относительно единиц активности стандарта. Для определения IC₅₀ 100 мкМ рекомбинантного PDI инкубировали в обработанной GSSG фильтрованной плазме в течение 5 минут с концентрациями аналога кверцетина в диапазоне от 20 нМ до 3 мМ в обработанной GSSG фильтрованной плазме, а затем анализировали в отношении ферментативной активности, как описано. Процентное ингибирование нормализовывали относительно контроля без добавления (100%).

[0143] Определение образования зависимого от тромбоцитов тромбина проводили в соответствии с описанной ранее методологией (Stopa JD et al., JCI insight. 2017;2(1):e89373; Jurk K et al. J Thromb Haemost. 2011;9(11):2278-90). В кратком изложении, свободную от тромбоцитов плазму смешивали с донорской обогащенной тромбоцитами плазмой, разбавленной до концентрации тромбоцитов 250000 тромбоцитов на микролитр, в присутствии 5 мМ GPRP и 6 мМ CaCl₂, а затем стимулировали 0,1 Е/мл тромбина. Образцы инкубировали в течение 90 мин при комнатной температуре при вращении и измеряли уровни тромбина с использованием отщепления флуоресцентного тромбин-специфического субстрата (Haemtech SN-20 Boc-L-FPR-ANSNH-C2H5) посредством возбуждения при 352 нм и испускания в качестве функции времени при 470 нм. Уровни расщепления субстрата использовали для вычисления концентрации тромбина в каждом образце.

[0144] Измерение уровня растворимого P-селектина (CD62) проводили централизованно с использованием коммерческого ELISA (Invitrogen/ThermoFisher Scientific #BMS219-4), и протромбиновое время и частичное тромбопластиновое время определяли в соответствии со стандартным протоколом изготовителя на устройстве Sago Start 4 (STA-Neoplastine CI Plus 5 #00606, STA-PTT Automate 5 #00595).

[0145] Статистический анализ

[0146] Уровни D-димера в плазме снижаются приблизительно на 20% после начала терапевтической антикоагуляции. Срединный исходный показатель D-димера в аналогичном исследовании составлял 815 мкг/л (Zwicker et al. Br J Haematol. 2013;160(4):530-7). На основе оцененного стандартного отклонения 0,3 для доли D-димера при завершении испытания по сравнению с 1 сутками, заданное включение в испытание составляло 26 пациентов в каждой группе для мощности 90% для утверждения о значимом снижении, если истинная концентрация в конце лечения снижалась на 20% (одностороннее значение α = 0,05).

[0147] Совокупную встречаемость VTE или кровотечения оценивали посредством конкурентного анализа риска для учета смерти в качестве конкурирующего риска (Campigotto et al. J Thromb Haemost. 2012;10(7):1449-51). Сравнения между показателями на исходном уровне и при наблюдении проводили с использованием двухстороннего парного анализа T-критерия. Сравнение исходных демографических данных проводили с использованием точного критерия Фишера. Статистическую корреляцию между ингибиторной активностью PDI и D-димером оценивали с использованием коэффициента корреляции Пирсона. Статистическую значимость определяли в качестве значения P < 0,05.

ОСНОВНЫЕ СПОСОБЫ

[0148] Стандартные способы молекулярной биологии описаны Sambrook, Fritsch и Maniatis (1982 & 1989 2^nd Edition, 2001 3^rd Edition) Molecular Cloning, A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY; Sambrook and Russell (2001) Molecular Cloning, 3^rd ed., Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY; Wu (1993) Recombinant DNA, Vol. 217, Academic Press, San Diego, CA). Стандартные способы также представлены в Ausbel, et al. (2001) Current Protocols in Molecular Biology, Vols.1-4, John Wiley and Sons, Inc. New York, NY, в которой описано клонирование в бактериальных клетках и мутагенез ДНК (Vol. 1), клонирование в клетках млекопитающих и дрожжей (Vol. 2), экспрессия гликоконъюгатов и белков (Vol. 3) и биоинформатика (Vol. 4).

[0149] Способы очистки белков, включающие иммунопреципитацию, хроматографию, электрофорез, центрифугирование и кристаллизацию, описаны (Coligan, et al. (2000) Current Protocols in Protein Science, Vol. 1, John Wiley and Sons, Inc., New York). Химический анализ, химическая модификация, посттрансляционная модификация, продуцирование слитых белков, гликозилирование белков описаны (см., например, Coligan, et al. (2000) Current Protocols in Protein Science, Vol. 2, John Wiley and Sons, Inc., New York; Ausubel, et al. (2001) Current Protocols in Molecular Biology, Vol. 3, John Wiley and Sons, Inc., NY, NY, pp. 16,0,5-16,22,17; Sigma-Aldrich, Co. (2001) Products for Life Science Research, St. Louis, MO; pp. 45-89; Amersham Pharmacia Biotech (2001) BioDirectory, Piscataway, N.J., pp. 384-391). Продуцирование, очистка и фрагментация поликлональных и моноклональных антител описаны (Coligan, et al. (2001) Current Protcols in Immunology, Vol. 1, John Wiley and Sons, Inc., New York; Harlow и Lane (1999) Using Antibodies, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY; Harlow and Lane, выше). Стандартные способы охарактеризации взаимодействий лиганд/рецептор доступны (см., например, Coligan, et al. (2001) Current Protocols in Immunology, Vol. 4, John Wiley, Inc., New York).

[0150] Все ссылки, цитированные в настоящем описании, включены в качестве ссылок в той же степени, как если бы каждая индивидуальная публикация, запись в базе данных (например, последовательности Genbank или записи GeneID), патентная заявка или патент, были конкретно и индивидуально указаны как включенные в качестве ссылок. Заявители подразумевают, что это утверждение о включении в качестве ссылки, согласно 37 C.F.R. §1.57(b)(1), касается каждой индивидуальной публикации, записи в базе данных (например, последовательности Genbank или записи GeneID), патентной заявки или патента, каждый из которых явно указан, в соответствии с 37 C.F.R. §1.57(b)(2), даже если рядом с таким цитированием отсутствует специализированное утверждение о включении в качестве ссылки. Включение специализированных утверждений о включении в качестве ссылки, при их наличии, в описании никоим образом не противоречит этому общему утверждению о включении в качестве ссылки. Цитирование ссылок в настоящем описании не предназначено для допущения того, что ссылка является текущим уровнем техники, а также не предназначено для какого-либо допущения в отношении содержания или даты этих публикаций или документов.

[0151] Объем настоящего изобретения не ограничивается конкретными вариантами осуществления, описанными в настоящем описании. Действительно, различные модификации изобретения в дополнение к модификациям, описанным в настоящем описании, станут понятными специалистам в данной области, исходя из вышеуказанного описания и прилагаемых чертежей. Подразумевается, что такие модификации входят в объем прилагаемой формулы изобретения.

[0152] Вышеуказанное описание считается достаточным, чтобы позволить специалисту в данной области применять настоящее изобретение на практике. Различные модификации изобретения в дополнение к модификациям, показанным и описанным в настоящем описании, станут понятными специалистам в данной области из приведенного выше описания, и они входят в объем прилагаемой формулы изобретения.

Настоящее изобретение относится к способу уменьшения или предупреждения образования тромба у пациента со злокачественной опухолью, включающему введение пациенту эффективного количества изокверцетина, витамина В3 и витамина С в течение периода, по меньшей мере, 2 месяца; при этом у пациента диагностирован рак и ему противопоказана профилактика тромбоза; и у него наблюдается повышенный уровень растворимого Р-селектина до введения изокверцетина, при сравнении с эталонным или исходным уровнем растворимого Р-селектина; где доза изокверцетина составляет 500 мг в день, при этом пациент не имеет первичную венозную тромбоэмболию (ВТЭ) в ходе лечения или после введения эффективного количества изокверцетина, витамина В3 и витамина С в течение периода, по меньшей мере, 2 месяца; и где растворимый Р-селектин снижается, по меньшей мере, на 30% при сравнении с эталонным или исходным уровнем растворимого Р-селектина после введения изокверцетина. Настоящее изобретение обеспечивает значительное снижение циркулирующего растворимого Р-селектина и тромбоцитарно-зависимого образования тромбина при введении 500 мг изокверцетина, и при этом не наблюдаются значительные кровотечения. 5 з.п. ф-лы, 6 ил., 1 табл.

1. Способ уменьшения или предупреждения образования тромба у пациента со злокачественной опухолью, включающий введение пациенту эффективного количества изокверцетина, витамина В3 и витамина С в течение периода, по меньшей мере, 2 месяца; при этом у пациента диагностирован рак и ему противопоказана профилактика тромбоза; и у него наблюдается повышенный уровень растворимого Р-селектина до введения изокверцетина, при сравнении с эталонным или исходным уровнем растворимого Р-селектина; где доза изокверцетина составляет 500 мг в день, при этом пациент не имеет первичную венозную тромбоэмболию (ВТЭ) в ходе лечения или после введения эффективного количества изокверцетина, витамина В3 и витамина С в течение периода, по меньшей мере, 2 месяца; и где растворимый Р-селектин снижается, по меньшей мере, на 30% при сравнении с эталонным или исходным уровнем растворимого Р-селектина после введения изокверцетина.

2. Способ по п. 1, дополнительно включающий введение от 1000 микрограммов до 3000 микрограммов фолиевой кислоты.

3. Способ по п. 1, где злокачественная опухоль является метастазирующей злокачественной опухолью.

4. Способ по п. 3, где метастазирующая злокачественная опухоль представляет собой рак ободочной и прямой кишки, рак поджелудочной железы или немелкоклеточный рак легкого.

5. Способ по п. 3, где метастазирующая злокачественная опухоль выбрана из группы, состоящей из метастазирующих форм лимфомы Ходжкина, рака ободочной и прямой кишки, рака шейки матки, рака легкого, рака кожи, такого как плоскоклеточный рак или базально-клеточная карцинома, рака головы и шеи, рака желудка и рака поджелудочной железы.

6. Способ по п. 1, где злокачественная опухоль выбрана из группы, состоящей из зависимого от рецепторов эстрогена рака молочной железы, независимого от рецепторов эстрогена рака молочной железы, зависимого от рецепторов гормонов рака предстательной железы, независимого от рецепторов гормонов рака предстательной железы, злокачественной опухоли головного мозга, рака почки, глиобластомы, рака толстого кишечника, семейного аденоматозного полипоза (FAP), рака ободочной и прямой кишки, рака поджелудочной железы, рака мочевого пузыря, рака пищевода, рака желудка, урогенитального рака, желудочно-кишечного рака, рака тела матки, рака яичника, астроцитом, глиом, рака кожи, плоскоклеточной карциномы, кератоакантомы, болезни Боуэна, Т-клеточной лимфомы кожи, меланомы, базально-клеточной карциномы, актинического кератоза; ихтиоза; угревой сыпи, обыкновенных угрей, сарком, саркомы Капоши, остеосаркомы, рака головы и шеи, мелкоклеточной карциномы легкого, немелкоклеточной карциномы легкого, лейкоза, лимфомы и/или других злокачественных опухолей из клеток крови.