БИСПЕЦИФИЧЕСКИЕ АНТИСМЫСЛОВЫЕ ОЛИГОНУКЛЕОТИДЫ ДЛЯ ПРОПУСКА ЭКЗОНА ДИСТРОФИНА Российский патент 2024 года по МПК C12N15/113 C07H21/00 A61K31/712 A61K31/7125 A61P21/00 

ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ

Настоящее изобретение относится к области антисмысловых олигонуклеотидов, более конкретно к переключающим сплайсинг олигонуклеотидам, предпочтительно для лечения генетических расстройств, более конкретно нервно-мышечных расстройств. В честности, настоящее изобретение относится к применению соединения на основе олигонуклеотида с усовершенствованными характеристиками, повышающих клиническую применимость, как дополнительно определено в данном документе.

УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ

Антисмысловые олигонуклеотиды (AON) находятся в (до)клинической разработке для многих заболеваний и патологических состояний, включая рак, воспалительные состояния, сердечно-сосудистое заболевание и нейродегенеративных и нервно-мышечных расстройств. Их механизм действия направлен на различные мишени, такие как опосредованная РНКазой Н деградация целевой РНК в ядре или цитоплазме, при модуляции сплайсинга (включение или пропуск экзонов) в ядре, или при ингибировании трансляции посредством стерических препятствий связыванию рибосомной субъединицы в цитоплазме. Модулирующие сплайсинг или переключающие сплайсинг олигонуклеотиды (SSO) впервые были описаны для коррекции аберрантного сплайсинга в человеческих пре-мРНК β-глобина (Dominski and Kole, 1993), и в настоящее время изучаются различные генетические расстройства, включая без ограничения следующее: муковисцидоз (ген CFTR, Friedman et al., 1999), рак молочной железы (ген BRCA1, Uchikawa et al., 2007), рак предстательной железы (ген FOLH1, Williams et al., 2006), воспалительные заболевания (гены IL-5R-альфа и MyD88, Karras et al., 2001, Vickers et al., 2006), глазной альбинизм 1 типа (ген OA1, Vetrini et al., 2006), атаксия-телеангиэктазия (ген ATM, Du et al., 2007), синдром базально-клеточного невуса (ген PTCH1, Uchikawa et al., 2007), метилмалоновая ацидемия (ген MUT, Rincon et al., 2007), преждевременные роды (ген COX-2, Tyson-Capper et al., 2006), атеросклероз (ген APOB, Khoo et al., 2007), пропионовая ацидемия (гены PCCA, PCCB, Rincon et al., 2007), лейкоз (гены c-myc и WT1, Renshaw et al., 2004, Giles et al., 1999), дистрофический буллезный эпидермолиз (ген COL7A1, Goto et al., 2006), семейная гиперхолестеринемия (ген APOB, Disterer et al., 2013), индуцированная лазером неоваскуляризация хориоидеи и отторжение трансплантата роговицы (ген KDR, Uehara et al., 2013), гипертрофированная кардиомиопатия (ген MYBPC3, Gedicke-Hornung et al., 2013), синдром Ушера (ген USH1C, Lentz et al., 2013), врожденная мышечная дистрофия Фукуяма (ген FKTN, Taniguchi-Ikeda et al., 2011), индуцированная лазером неоваскуляризация хориоидеи (ген FLT1, Owen et al., 2012), рак (гены STAT3 и bcl-X, Zammarchi et al., 2011, Mercatante et al., 2002) и синдром Хатчинсона-Гилфорда (ген LMNA, Osorio et al., 2011), миопатия Миеси (ген DYSF, Wein et al., 2010), спиноцеребеллярная атаксия 1 типа (ген ATXN1, Gao et al., 2008), болезнь Альцгеймера/таупатии FTDP-17 (ген MAPT, Peacey et al., 2012), миотоническая дистрофия (ген CLC1, Wheeler et al., 2007) и болезнь Хантингтона (Evers et al., 2014). Тем не менее, переключающие сплайсинг AON продвинулись дальше всех в лечении нервно-мышечного расстройства мышечной дистрофии Дюшенна (DMD).

Мышечная дистрофия Дюшенна (DMD) и мышечная дистрофия Беккера (BMD) являются наиболее распространенными детскими формами мышечной дистрофии. DMD представляет собой тяжелое смертельное нервно-мышечное расстройство, которое приводит к зависимости от инвалидной коляски до 12-летнего возраста и пациенты зачастую умирают до тридцатилетнего возраста вследствие дыхательной или сердечной недостаточности. Она вызвана делецией со сдвигом рамки считывания (~67%) или дупликацией (~7%) одного или более экзонов, или точечными мутациями (~25%) в 2,24 Мб гена DMD, что приводит к отсутствию функционального дистрофина. BMD также вызывается мутациями в гене DMD, они сохраняют открытую рамку считывания, обеспечивают полуфункциональные белки-дистрофины и, как правило, приводят к гораздо более мягкому фенотипу и более длительной продолжительности жизни. В ходе последнего десятилетия специфическая модификация сплайсинга с целью восстановления нарушенной рамки считывания транскрипта стала многообещающим способом лечения DMD (van Ommen et al., 2008; Yokota et al., 2007; van Deutekom et al., 2007; Goemans et al., 2011; Voit et al., 2014; Cirak et al., 2011). Применение высокоспецифичных к последовательности переключающих сплайсинг антисмысловых олигонуклеотидов (AON), которые связываются с экзоном, фланкирующим или содержащим мутацию, и которые препятствуют его сигналам сплайсинга, пропуск данного экзона может быть вызван в ходе процессинга пре-мРНК DMD. Несмотря на полученный в результате процессированный транскрипт, открытая рамка считывания восстанавливается и образуется белок, подобный белку, обнаруженному у пациентов с BMD. Индуцированный AON пропуск экзона обеспечивает специфичный к мутации и, таким образом, персонализированный, терапевтический подход для пациентов с DMD. Поскольку основная часть мутаций скапливаются вокруг экзонов 45-55, пропуск одного конкретного экзона может быть терапевтическим для многих пациентов с различными мутациями. Пропуск экзона 51 применим в наибольшей субпопуляции пациентов (~13%), включая пациентов с делециями экзонов 45-50, 48-50, 50 или 52. Применяемые AON могут быть химически модифицированы сопротивления эндонуклеазам, экзонуклеазам и РНКазе Н и для обеспечения связывания РНК и дуплексной стабильности. Различные химические структуры AON в настоящее время исследуются в отношении индукции корректирующего пропуска экзона для DMD, включая 2'-O-метилфосфотиоатную РНК (2OMePS; Voit et al., 2014), фосфодиамидат-морфолино (PMO; Cirak et al., 2011), трицикло-ДНК (tcDNA; Goyenvalle et al, 2015) и пептидную нуклеиновую кислоту (PNA; Gao et al., 2015). Несмотря на то, что AON, как правило, плохо усваиваются здоровыми мышечными волокнами, дефицит дистрофина в DMD и образующаяся в результате патология, характеризующаяся активированными клетками-сателлитами и поврежденными и, таким образом, более проницаемыми волокнистыми мембранами, в действительности способствует лучшему усвоению. В исследованиях на мышиной модели mdx с дефицитом дистрофина олигонуклеотиды на основе 2'-O-метилфосфотиоатной РНК в действительности продемонстрировали усвоение до 10 раз выше в различных группах мышц по сравнению с олигонуклеотидами мышей дикого типа (Heemskerk et al., 2010). Результаты клинического исследования как с 2'-O-метилфосфотиоатной РНК и AON на основе фосфордиамидат -морфолино у пациентов с DMD подтверждают наличие AON в биоптатах мышц, но уровни нового дистрофина после лечения все еще были ограничены, что ставит задачу разработки олигонуклеотидов с улучшенными характеристиками, повышающими терапевтический индекс и клиническую применимость.

Клиническая эффективность системно вводимых AON, таких как переключающие сплайсинг AON, зависит от нескольких факторов, таких как способ введения, биологическая стабильность, биораспределение, распределение внутри тканей, поглощение целевыми клетками и направление к необходимому внутриклеточному расположению (ядру). В части настоящего изобретения показано, что связывание двух AON по настоящему изобретению может обеспечивать соединения, которые демонстрируют улучшенные характеристики возможного лечения генетических расстройств, таких как DMD.

ОПИСАНИЕ СУЩНОСТИ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Соединение

В первом аспекте настоящего изобретения представлено соединение, содержащее или состоящее из первого и второго антисмысловых олигонуклеотидов, соединенного между собой связывающим фрагментом, где указанный первый антисмысловой олигонуклеотид (AON) комплементарен, или связан с, или нацелен на, или гибридизуется с или перекрывает по меньшей мере часть SEQ ID NO: 3, и где указанный второй антисмысловой олигонуклеотид (AON) комплементарен, или связан с, или нацелен на, или гибридизуется с, или перекрывает по меньшей мере часть SEQ ID NO: 4, где SEQ ID NO: 3 и 4 расположены в экзоне 51 пре-мРНК дистрофина, предпочтительно для применения в качестве лекарственного препарата, более предпочтительно для лечения, предупреждения и/или замедления мышечной дистрофии Дюшенна (DMD), еще более предпочтительно для индукции пропуска экзона 51 пре-мРНК дистрофина, как объясняется далее в данном документе. Предпочтительно указанные первый и второй антисмысловые олигонуклеотиды соединения по настоящему изобретению отличаются, более предпочтительно нуклеотидные последовательности указанных первого и второго антисмысловых олигонуклеотидов представлены разными SEQ ID NO. Предпочтительно указанный экзон 51 пре-мРНК дистрофина получен от человека и представлен нуклеотидной последовательностью SEQ ID NO: 2.

В контексте настоящего документа указанная SEQ ID NO: 3 представляет первую последовательность ESE и/или ERS, и указанная SEQ ID NO: 4 представляет вторую последовательность ESE и/или ERS с экзоном 51 пре-мРНК дистрофина. По всей заявке, если явно не указано иное, указанная первая ESE и/или ERS и указанная вторая ESE и/или ERS отличаются, предпочтительно указанная первая ESE и/или ERS и указанная вторая ESE и/или ERS представлены отличной SEQ ID NO.

В контексте настоящего документа «отличные» последовательности ESE и/или ERS расположены в различных областях в экзоне 51 пре-мРНК дистрофина, т.е. указанные последовательности ESE и/или ERS только частично перекрываются между собой в указанном экзоне, смежны между собой (нуклеотиды, разделяющие последовательности ESE и/или ERS отсутствуют) или по меньшей мере 1 нуклеотид, предпочтительно 5 нуклеотидов, разделяют обе последовательности ESE и/или ERS в указанном экзоне. Термин «частичное перекрывание» определяется в данном документе, как включающий перекрывание одного нуклеотида или нескольких нуклеотидов, предпочтительно указанное перекрывание не содержит более 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2 или 1 нуклеотида, более предпочтительно не содержит более 5 нуклеотидов. Соответственно, термин «частичное перекрывание» также может определяться как содержание перекрывания 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99%, предпочтительно указанное перекрывание составляет не более 50%, 45%, 40%, 35%, 30%, 25%, 20%, 15%, 10%, 5% или 1%, более предпочтительно не более 20%, еще более предпочтительно не более 10% длины самой короткой последовательности указанных первой и второй ESE и/или ERS. В качестве альтернативы «отличные» последовательности ESE и/или ERS представлены нуклеотидной последовательностью, которая не на 100% идентична. Предпочтительно первая ESE и/или ERS и вторая ESE и/или ERS отличаются, если их нуклеотидные последовательности перекрываются не полностью. Более предпочтительно первые ESE и/или ERS и вторые ESE и/или ERS отличаются, если их соответствующие нуклеотидные последовательности либо не перекрываются, либо перекрываются только частично. Термин «частичное перекрывание» определяется в данном документе, как включающий перекрывание одного нуклеотида или нескольких нуклеотидов, предпочтительно указанное перекрывание не содержит более 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2 или 1 нуклеотида, более предпочтительно не содержит более 5 нуклеотидов. Соответственно, термин «частичное перекрывание» также может определяться как содержание перекрывания 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99%, предпочтительно указанное перекрывание составляет не более 50%, 45%, 40%, 35%, 30%, 25%, 20%, 15%, 10%, 5% или 1%, более предпочтительно не более 20%, еще более предпочтительно не более 10% длины самой короткой последовательности указанных первой и второй ESE и/или ERS.

В контексте настоящего документа в предпочтительном варианте осуществления олигонуклеотиды, присутствующие в соединении по настоящему изобретению, представляют собой «отличные» (антисмысловые) олигонуклеотиды и представлены нуклеотидными последовательностями, которые предпочтительно перекрываются не более чем с 14, 13, 12, 11, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2, 1 или 0 нуклеотидами. Предпочтительно нуклеотидные последовательности первого и второго антисмысловых олигонуклеотидов соединения по настоящему изобретению представлены отличной SEQ ID NO. В качестве альтернативы, длина последовательности, которая перекрывается между указанными «отличными» (антисмысловыми) олигонуклеотидами, предпочтительно составляет не более 60%, 50%, 40%, 30%, 20%, 10%, 5% или 0% длины самого короткого (антисмыслового) олигонуклеотида. В данном контексте указанные «отличные» (антисмысловые) олигонуклеотиды предпочтительно представлены нуклеотидными последовательностями, которые не перекрываются.

Предпочтительно «отличные» (антисмысловые) олигонуклеотиды представляют собой олигонуклеотиды, которые связаны с, нацелены на, гибридизуются с, или комплементарны, или перекрываются с неперекрывающимися последовательностями. Более предпочтительно «разные» (антисмысловые) олигонуклеотиды представляют собой олигонуклеотиды, которые связываются с, нацеливаются на, гибридизуются с, или комплементарны, или перекрываются с отличными ESE и/или ERS в том же экзоне указанной пре-мРНК дистрофина. Последовательности ESE и ERS определены как регулирующие специфичный и эффективный сплайсинг составляющих и альтернативных экзонов и, следовательно, элементов/мотивов сплайсинга.

В данной заявке, если применяется слово «олигонуклеотид», оно может быть заменено«антисмысловым олигонуклеотидом» и, vice versa, как определено в данном документе, если не указано иное. Кроме того, слова «олигонуклеотид» или «антисмысловой олигонуклеотид» в данной заявке могут быть заменены словами «первый и/или второй олигонуклеотид» или «первый и/или второй антисмысловой олигонуклеотид», если не указано иное.

Если такой олигонуклеотид комплементарен, следует понимать, что он также может быть обратно комплементарен. В данной заявке термин «комплементарный» охватывает как прямо комплементарные, так и обратно комплементарные последовательности, что будет очевидно для специалиста в данной области техники. Следовательно, если применяется выражение «олигонуклеотид комплементарен» целевой последовательности, это означает, что указанный олигонуклеотид обратно комплементарен указанной целевой последовательности, поскольку последовательность олигонуклеотида представляет собой обратный комплемент целевой последовательности, если не указано иное. Если применяется выражение «антисмысловой олигонуклеотид комплементарен» целевой последовательности, то оно означает, что указанный антисмысловой олигонуклеотид комплементарен указанной целевой последовательности, поскольку последовательность антисмыслового олигонуклеотида является обратной относительно целевой последовательности, если не указано иное.

В контексте настоящего документа если указанные первый и второй антисмысловые олигонуклеотиды «соединены между собой связывающим фрагментом», то это означает, что антисмысловые олигонуклеотиды соединены между собой посредством связывающего фрагмента (как описано в разделе под названием «связывающий фрагмент») и, следовательно, образуют конъюгат (или соединение), содержащий указанные первый и второй антисмысловые олигонуклеотиды и связывающий фрагмент. В контексте настоящего документа «соединение» может быть взаимозаменяемым с «конъюгатом», поскольку они имеют идентичное значение в данном контексте. Следовательно, соединение по настоящему изобретению предпочтительно отличается от смеси или набора указанных первого и второго антисмысловых олигонуклеотидов, где оба антисмысловых олигонуклеотида присутствуют в виде отдельных молекул, т.e. не соединены между собой связывающим фрагментом.

В одном варианте осуществления настоящее изобретение, следовательно, обеспечивает конъюгат или соединение, содержащее или состоящее из первого и второго антисмысловых олигонуклеотидов, соединенных между собой связывающим фрагментом, где указанный первый антисмысловой олигонуклеотид (AON) комплементарен, или связан с, или нацелен на, или гибридизуется с, или перекрывается по меньшей мере с частью SEQ ID NO: 3, и где указанный второй антисмысловой олигонуклеотид (AON) комплементарен, или связан с, или нацелен на, или гибридизуется с, или перекрывается по меньшей мере с частью SEQ ID NO: 4, где SEQ ID NO: 3 и 4 расположены в экзоне 51 пре-мРНК дистрофина, предпочтительно для применения в качестве лекарственного препарата, более предпочтительно для лечения, предупреждения и/или замедления мышечной дистрофии Дюшенна (DMD). Предпочтительно указанные первый и второй антисмысловые олигонуклеотиды отличаются, как ранее было указано в данном документе.

В контексте настоящего изобретения указанный первый антисмысловой олигонуклеотид (AON) соединения комплементарен или связан с, или нацелен на, или гибридизуется с, или перекрывается по меньшей мере с частью по меньшей мере SEQ ID NO: 3, т.е. указанный первый антисмысловой олигонуклеотид может быть дополнительно комплементарен, или связан с, или нацелен на, или гибридизуется с, или перекрывается по меньшей мере с частью одной или более дополнительных последовательностей ESE и/или ERS, которые отличаются от первых ESE и/или ERS, соответствующих SEQ ID NO: 3, и который расположен в экзоне 51 пре-мРНК дистрофина, предпочтительно для применения в качестве лекарственного препарата, более предпочтительно для лечения, предупреждения и/или замедления мышечной дистрофии Дюшенна (DMD).

В контексте настоящего изобретения указанный второй антисмысловой олигонуклеотид (AON) соединения комплементарен или связан с, или нацелен на, или гибридизуется с, или перекрывается по меньшей мере с частью по меньшей мере SEQ ID NO: 4, т.е. указанный второй антисмысловой олигонуклеотид может быть дополнительно комплементарен, или связан с, или нацелен на, или гибридизуется с, или перекрывается по меньшей мере с частью одной или более дополнительных последовательностей ESE и/или ERS, которые отличаются от первой ESE, соответствующих SEQ ID NO: 4, и который расположен в экзоне 51 пре-мРНК дистрофина, предпочтительно для применения в качестве лекарственного препарата, более предпочтительно для лечения, предупреждения и/или замедления мышечной дистрофии Дюшенна (DMD).

Экзон дистрофина

В данной заявке, если явно не указано иное, указанная первая ESE и/или ERS и указанная вторая ESE и/или ERS расположены в экзоне 51 пре-мРНК дистрофина, где указанная первая ESE и/или ERS представлены SEQ ID NO: 3, и где указанная вторая ESE и/или ERS представлена SEQ ID NO: 4. Соответственно, соединение по настоящему изобретению предпочтительно предназначено для пропуска экзона 51 пре-мРНК дистрофина.

Предпочтительно указанный экзон 51 пре-мРНК дистрофина получен от человека и представлен следующей нуклеотидной последовательностью:

5'-CUCCUACUCAGACUGUUACUCUGGUGACACAACCUGUGGUUACUAAGGAA ACUGCCAUCUCCAAACUAGAAAUGCCAUCUUCCUUGAUGUUGGAGGUACCUG CUCUGGCAGAUUUCAACCGGGCUUGGACAGAACUUACCGACUGGCUUUCUCU GCUUGAUCAAGUUAUAAAAUCACAGAGGGUGAUGGUGGGUGACCUUGAGGAU AUCAACGAGAUGAUCAUCAAGCAGAAG-3' (SEQ ID NO: 2).

Первый и второй антисмысловой олигонуклеотид соединения

В одном варианте осуществления настоящего изобретения каждый из указанных первого и второго антисмысловых олигонуклеотидов соединения по настоящему изобретению комплементарен, или связан с, или нацелен на, или гибридизуется с, или перекрывается с отличным экзонным энхансером сплайсинга (ESE) и/или узнаваемой последовательностью экзона (ERS) экзона 51 дистрофина, указанный первый антисмысловой олигонуклеотид комплементарен, или связан с, или нацелен на, или гибридизуется с, или перекрывается с SEQ ID NO: 3, и указанный вторая антисмысловой олигонуклеотид комплементарен, или связан с, или нацелен на, или гибридизуется с, или перекрывается с SEQ ID NO: 4. Предпочтительно указанные первый и второй антисмысловые олигонуклеотиды соединения по настоящему изобретению отличаются, более предпочтительно нуклеотидные последовательности указанных первого и второго антисмысловых олигонуклеотидов представлены разными SEQ ID NO. В данной заявке, если не указано иное, настоящим изобретением также охватывается то, что соединение содержит или состоит из первого и второго антисмысловых олигонуклеотидов, связанных между собой связывающим фрагментом, где нуклеотидные последовательности указанных первого и второго антисмысловых олигонуклеотидов по меньшей мере на 90%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичны между собой, и где указанные первый и второй олигонуклеотид комплементарны, или связаны с, или нацелены на, или гибридизуются с, или перекрываются по меньшей мере с частью двух или более отличных ESE в том же экзоне. Предпочтительно указанные первый и второй антисмысловые олигонуклеотиды соединения по настоящему изобретению не представлены идентичной нуклеотидной последовательностью.

Последовательности ESE облегчают распознавание подлинных сайтов сплайсинга сплайсосомой (Cartegni et al., 2002; и Cartegni et al., 2003). Подгруппа факторов сплайсинга, называемых белки SR, могут связываться с данными ESE и задействовать другие факторы сплайсинга, такие как U1 и U2AF, к (слабо определенным) сайтам сплайсинга. Сайты связывания четырех наиболее распространенных белков SR (SF2/ASF, SC35, SRp40 и SRp55) были подробно проанализированы, и данные результаты реализованы в ESE-finder, сетевом источнике, который прогнозирует потенциальные сайты связывания для данных белков SR (Cartegni et al., 2002; и Cartegni et al., 2003). Альтернативным пакетом программного обеспечения для идентификации последовательности ESE является RESCUE-ESE (Fairbrother et al., 2002; и Fairbrother et al., 2004).

Специалисту в данной области техники известно, что последовательности ESE и последовательности ERS могут относиться к различным элементам, т.е. различным последовательностям внутри экзона, но в некоторых случаях последовательности ESE и последовательности ERS могут относиться к идентичным последовательностям.

По всей заявке если точно не указано иное, термины «ESE», «ERS» и «ESE и/или ERS» могут применяться взаимозаменяемо по всей заявке.

Предпочтительно, указанные последовательности «ESE и/или ERS» прогнозируются с использованием ESE-finder (Cartegni et al., 2002; и Cartegni et al., 2003) и/или RESCUE-ESE (Fairbrother et al., 2002; и Fairbrother et al., 2004). Как указано в данной документе, ESE представляет собой мотив сплайсинга, функциональность которого предпочтительно экспериментально подтверждается или обосновывается с использованием связывания, нацеливания, гибридизации или перекрывания первого или второго антисмыслового олигонуклеотида по меньшей мере с частью указанной ESE. То же определение применяется к ERS. Функциональность указанной ESE и/или ERS также может быть обоснована с использованием соединения по настоящему изобретению, где первый или второй антисмысловой олигонуклеотид связывается, нацеливается, гибридизуется или перекрывается по меньшей мере с частью указанной ESE и/или ERS.

Предпочтительно, каждый из указанных первого и второго антисмысловых олигонуклеотидов соединения по настоящему изобретению имеют длину от 8 до 37 нуклеотидов, более предпочтительно от 10 до 33 нуклеотидов, еще более предпочтительно от 16 до 22 нуклеотидов, наиболее предпочтительно от 18 до 22 нуклеотидов. Тем не менее, длина указанных первого и второго олигонуклеотидов может составлять по меньшей мере 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36 или 37 нуклеотидов. В контексте настоящего документа длина указанного первого антисмыслового олигонуклеотида может быть такой же или может отличаться от длины указанного второго антисмыслового олигонуклеотида. Соответственно, в предпочтительном варианте осуществления представлено соединение по настоящему изобретению, где первый антисмысловой олигонуклеотид комплементарен или связан с, или нацелен на, или гибридизуется с, или перекрывается по меньшей мере с частью SEQ ID NO: 3, и где второй антисмысловой олигонуклеотид комплементарен или связан с, или нацелен на, или гибридизуется с, или перекрывается по меньшей мере с частью SEQ ID NO: 4, где указанная по меньшей мере часть SEQ ID NO: 3 имеет длину 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 или 11 нуклеотидов, предпочтительно по меньшей мере 8 нуклеотидов, более предпочтительно по меньшей мере 10 нуклеотидов, и где указанная по меньшей мере часть SEQ ID NO: 4 имеет длину 4, 5 или 6 нуклеотидов, предпочтительно по меньшей мере 5 нуклеотидов. В более предпочтительном варианте осуществления по меньшей мере часть SEQ ID NO: 3 соответствует полной последовательности SEQ ID NO: 3 и/или по меньшей мере часть SEQ ID NO: 4 соответствует полной последовательности SEQ ID NO: 4. Предпочтительно указанные первый и второй антисмысловые олигонуклеотиды указанного соединения по настоящему изобретению отличаются, более предпочтительно нуклеотидные последовательности указанных первого и второго антисмысловых олигонуклеотидов представлены разными SEQ ID NO.

Предпочтительно представлено соединение по настоящему изобретению, где первый антисмысловой олигонуклеотид представлен нуклеотидной последовательностью, содержащей или состоящей из последовательности, которая способна быть комплементарной, связываться с, нацеливаться на, или гибридизоваться с, или перекрываться по меньшей мере с частью SEQ ID NO: 3, и где второй антисмысловой олигонуклеотид представлен нуклеотидной последовательностью, содержащей или состоящей из последовательности, которая способна быть комплементарной, связываться с, нацеливаться на, или гибридизоваться с, или перекрываться по меньшей мере с частью SEQ ID NO: 4. Предпочтительно указанные первый и второй антисмысловые олигонуклеотиды соединения отличаются, как указано ранее, более предпочтительно нуклеотидные последовательности указанных первого и второго антисмысловых олигонуклеотидов представлены разными SEQ ID NO. Указанная связанная, или нацеленная, или гибридизированная часть может составлять по меньшей мере 50% длины указанного первого и/или второго олигонуклеотида, или по меньшей мере 60%, или по меньшей мере 70%, или по меньшей мере 80%, или по меньшей мере 90% или по меньшей мере 95%, или 98% и до 100%. Первый и второй олигонуклеотид соединения по настоящему изобретению может быть представлен нуклеотидной последовательностью, при этом указанная нуклеотидная последовательность содержит последовательность, которая связывается с, нацелена на, гибридизуется с, или комплементарна, или перекрывается по меньшей мере с частью SEQ ID NO: 3 или 4, как указано в данном документе, и дополнительными фланкирующими последовательностями. Можно применять несколько типов фланкирующих последовательностей. Предпочтительно фланкирующие последовательности применяют для модификации связывания белка с указанным олигонуклеотидом, или модификации термодинамического свойства указанного олигонуклеотида, более предпочтительно для модификации аффинности связывания целевой РНК. В другом предпочтительном варианте осуществления дополнительные фланкирующие последовательности комплементарны последовательностям пре-мРНК дистрофина, которые не присутствуют в указанном экзоне. Такие фланкирующие последовательности предпочтительно способны связываться с или нацеливаться на последовательности, содержащие или состоящие из точки разветвления и/или акцептора или донора сайта сплайсинга консенсусных последовательностей указанного экзона. В предпочтительном варианте осуществления такие фланкирующие последовательности способны связываться с или нацеливаться на последовательности, содержащие или состоящие из последовательностей интрона дистрофина пре-мРНК, который является смежным с указанным экзоном.

Термин (обратная) комплементарность применяется в данном документе для обозначения участка нуклеиновых кислот, которые гибридизуются с другим участком нуклеиновых кислот в физиологических условиях. Антисмысловая цепь обычно считается комплементарной соответствующей смысловой цепи. В данном контексте антисмысловой олигонуклеотид комплементарен его мишени. Условия гибридизации определены далее в данном документе. Таким образом, не обязательно, чтобы все основания в области комплементарности были способны объединяться с основаниями в противоположной цепи. Например, при конструировании антисмыслового олигонуклеотида, может быть необходимо введение, например, остатка, который не объединяется с основанием на комплементарной цепи. В некоторой степени могут быть допущены несоответствия, если в данных условиях в клетке участок нуклеотидов способен к гибридизации с комплементарной частью.

В предпочтительном варианте осуществления комплементарная часть первого и/или второго антисмыслового олигонуклеотида соединения (либо открытой структуры, т.е. области экзона пре-мРНК дистрофина, которая не гибридизуется с областью экзона пре-мРНК дистрофина, или закрытой структуры, т.е. области экзона пре-мРНК дистрофина, которая гибридизуется с областью экзона пре-мРНК дистрофина) содержит по меньшей мере 3 и более предпочтительно по меньшей мере 4 последовательных нуклеотида. Комплементарные области предпочтительно разработаны таким образом, что при объединении они специфичны экзону в пре-мРНК. Такая специфичность может быть образована различными длинами комплементарных областей, поскольку это зависит от фактических последовательностей в других (пре-)мРНК в системе. Риск того, что также один или несколько других пре-мРНК будут способны гибридизоваться с олигонуклеотидом, снижается с увеличением размера указанного олигонуклеотида. Очевидно, что в настоящем изобретении можно применять антисмысловой олигонуклеотид (т.е. первый и/или второй антисмысловой олигонуклеотид, присутствующий в соединении по настоящему изобретению), содержащий несоответствия в области комплементарности, но сохраняющий способность гибридизоваться с целевой(-ыми) областью(-ями) в пре-мРНК. Тем не менее, предпочтительно по меньшей мере комплементарные части не содержат такие несоответствия, поскольку они обычно имеют более высокую эффективность и более высокую специфичность, чем олигонуклеотид с такими несоответствиями в одной или более комплементарных областях. Считается, что более высокая сила гибридизации (т.е. повышение количества взаимодействий с противоположной цепью) является благоприятной для повышения эффективности способа препятствования оборудования сплайсинга системы.

Предпочтительно, как было ранее раскрыто в данном документе, соединение по настоящему изобретению, содержащее или состоящее из первого и второго антисмысловых олигонуклеотидов, соединенных между собой посредством связывающего фрагмента, индуцирует пропуск экзона 51 пре-мРНК дистрофина, как определено в данном документе. В одном варианте осуществления первый и/или второй антисмысловой олигонуклеотид соединения, которые подходят для индукции экзона с одним пропуском, комплементарность области, нацеленной на приведенный экзон дистрофина, составляет от 90 до 100%. В целом, это обеспечивает 1 или 2 несоответствия в олигонуклеотиде из 20 нуклеотидов или 1-4 несоответствия в олигонуклеотиде из 40 нуклеотидов. Следовательно, может присутствовать 1, 2, 3, 4, 5 несоответствий в олигонуклеотиде из 10-50 нуклеотидов. Предпочтительно, 0, 1 или 2 несоответствия присутствуют в олигонуклеотиде из 10-50 нуклеотидов. В олигонуклеотиде из 10-33 нуклеотидов, может присутствовать 0, 1, 2 или 3 несоответствия, предпочтительно, присутствуют 0, 1 или 2 несоответствия. В олигонуклеотиде из 16-22 нуклеотидов, может присутствовать 0, 1, 2 несоответствия, присутствует предпочтительно 0 или 1 несоответствие.

Структура (т.е. отрытая и закрытая структуры) лучше всего анализировать в контексте пре-мРНК, в котором находится экзон. Такую структуру можно анализировать в фактической РНК. Тем не менее, в настоящее время возможно достаточно точно спрогнозировать вторичную структуру молекулы РНК (при минимальных затратах энергии) с использованием моделирующих структуру программ. Неограничивающими примерами подходящей программы являются RNAstructure версии 4.5 или RNA mfold версии 3.5 (Zuker et al., 2003). Специалист в данной области техники сможет спрогнозировать вероятную структуру экзона приведенной нуклеотидной последовательности с подходящей воспроизводимостью. Наилучшие прогнозы получаются при предоставлении таких программ моделирования как с указанным экзоном, так и фланкирующим интроном. Обычно нет необходимости моделировать структуру всего пре-мРНК.

Открытая и закрытая структура, на которую направлен олигонуклеотид (т.е. первый и/или второй олигонуклеотид соединения), предпочтительно являются смежными между собой. Считается, что таким образом отжиг олигонуклеотида до открытой структуры вызывает открытие закрытой структуры, после чего отжиг переходит в данную закрытую структуру. Благодаря данному действию ранее закрытая структура принимает отличную конформацию. Тем не менее, если потенциальный (криптический) акцептор и/или донор сплайсинга остаются внутри целевого экзона, иногда генерируется новый сигнал включения экзона, определяющий другой (нео) экзон, т.е. с другим 5' концом, другим 3' концом или обоими. Данный тип активности входит в объем настоящего изобретения, поскольку целевой экзон (экзон 51) исключен из мРНК. Наличие нового экзона, содержащего часть нацеленного экзона, в мРНК не меняет того факта, что целевой экзон исключен как таковой. Включение нео-экзона можно рассматривать как побочный эффект, который возникает только в редких случаях. Существует две возможности, когда пропуск экзона применяют для восстановления (части) открытой рамки считывания дистрофина, нарушенной в результате мутации. Во-первых, нео-экзон функционирует в восстановлении рамки считывания, в то время как в другом случае рамка считывания не восстанавливается. При выборе соединения, содержащего олигонуклеотид, для восстановления дистрофиновых рамок считывания посредством пропуска экзона, очевидно, что при данных условиях выбирают только те соединения, содержащие данный олигонуклеотид, которые действительно приводят к пропуску экзона, который восстанавливает дистрофиновую открытую рамку считывания, с нео-экзоном или без него.

В одном варианте осуществления представлено соединение по настоящему изобретению, в котором первый антисмысловой олигонуклеотид представлен нуклеотидной последовательностью, которая по меньшей мере на 95% идентична непрерывному участку по меньшей мере 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 или 11 нуклеотидов, предпочтительно по меньшей мере 8 нуклеотидов, более предпочтительно по меньшей мере 10 нуклеотидов, наиболее предпочтительно всех нуклеотидов SEQ ID NO: 5, и в котором второй антисмысловой олигонуклеотид представлен нуклеотидной последовательностью, которая по меньшей мере на 95% идентична непрерывному участку по меньшей мере 4, 5 или 6 нуклеотидов, предпочтительно по меньшей мере 5 нуклеотидов, более предпочтительно всех нуклеотидов SEQ ID NO: 6. Предпочтительно указанные первый и второй антисмысловые олигонуклеотиды соединения по настоящему изобретению отличаются, как определено ранее в данном документе, более предпочтительно нуклеотидные последовательности указанных первого и второго антисмысловых олигонуклеотидов представлены разными SEQ ID NO. Указанная SEQ ID NO: 5 и 6 представляют обратно комплементарную последовательность SEQ ID NO: 3 и 4, соответственно. Указанное непрерывный участок может быть прервано одним, двумя, тремя, четырьмя или более гэпами, поскольку процент идентичности по всей области составляет по меньшей мере 95%, предпочтительно по меньшей мере 96%, 97%, 98%, 99% или 100%, более предпочтительно по меньшей мере 97%.

В предпочтительном варианте осуществления в настоящем изобретении представлено соединение, содержащее или состоящее из первого и второго антисмысловых олигонуклеотидов, соединенных между собой посредством связывающего фрагмента, причем указанный первый антисмысловой олигонуклеотид представлен нуклеотидной последовательностью, содержащей или состоящей из любой SEQ ID NO: 14-197, или ее фрагментом, и где указанный второй антисмысловой олигонуклеотид представлен нуклеотидной последовательностью, содержащей или состоящей из любой SEQ ID NO: 198-398, или ее фрагментом. Предпочтительно указанные первый и второй антисмысловые олигонуклеотиды соединения по настоящему изобретению отличаются, более предпочтительно нуклеотидные последовательности указанных первого и второго антисмысловых олигонуклеотидов представлены разными SEQ ID NO. Каждый из указанных первого и/или второго олигонуклеотидов соединения может иметь любой из химических составов, как определено ниже в данном документе, или их комбинации.

Следовательно, указанный первый олигонуклеотид соединения по настоящему изобретению предпочтительно представлен нуклеотидной последовательностью, содержащей или состоящей из любой SEQ ID NO: 14-197, т.е. SEQ ID NO: 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 141, 142, 143, 144, 145, 146, 147, 148, 149, 150, 151, 152, 153, 154, 155, 156, 157, 158, 159, 160, 161, 162, 163, 164, 165, 166, 167, 168, 169, 170, 171, 172, 173, 174, 175, 176, 177, 178, 179, 180, 181, 182, 183, 184, 185, 186, 187, 188, 189, 190, 191, 192, 193, 194, 195, 196 или 197, или нуклеотидной последовательностью, содержащей или состоящей из фрагмента любой SEQ ID NO: 14-197, т.е. SEQ ID NO: 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 141, 142, 143, 144, 145, 146, 147, 148, 149, 150, 151, 152, 153, 154, 155, 156, 157, 158, 159, 160, 161, 162, 163, 164, 165, 166, 167, 168, 169, 170, 171, 172, 173, 174, 175, 176, 177, 178, 179, 180, 181, 182, 183, 184, 185, 186, 187, 188, 189, 190, 191, 192, 193, 194, 195, 196 или 197. Более предпочтительно указанный первый олигонуклеотид соединения по настоящему изобретению представлен нуклеотидной последовательностью, содержащей или состоящей из SEQ ID NO: 14, 15, 16, 17 или 18, еще более предпочтительно SEQ ID NO: 14, 15, 16 или 17, еще более предпочтительно SEQ ID NO: 14 или 15, наиболее предпочтительно SEQ ID NO: 14, или нуклеотидной последовательностью, содержащей или состоящей из фрагмента SEQ ID NO: 14, 15, 16, 17 или 18, еще более предпочтительно SEQ ID NO: 14, 15, 16 или 17, еще более предпочтительно SEQ ID NO: 14 или 15, наиболее предпочтительно SEQ ID NO: 14. Указанный второй олигонуклеотид соединения по настоящему изобретению предпочтительно представлен нуклеотидной последовательностью, содержащей или состоящей из любой SEQ ID NO: 198-398, т.е. SEQ ID NO: 198, 199, 200, 201, 202, 203, 204, 205, 206, 207, 208, 209, 210, 211, 212, 213, 214, 215, 216, 217, 218, 219, 220, 221, 222, 223, 224, 225, 226, 227, 228, 229, 230, 231, 232, 233, 234, 235, 236, 237, 238, 239, 240, 241, 242, 243, 244, 245, 246, 247, 248, 249, 250, 251, 252, 253, 254, 255, 256, 257, 258, 259, 260, 261, 262, 263, 264, 265, 266, 267, 268, 269, 270, 271, 272, 273, 274, 275, 276, 277, 278, 279, 280, 281, 282, 283, 284, 285, 286, 287, 288, 289, 290, 291, 292, 293, 294, 295, 296, 297, 298, 299, 300, 301, 302, 303, 304, 305, 307, 308, 309, 310, 311, 312, 313, 314, 315, 316, 317, 318, 319, 320, 321, 322, 323, 324, 325, 326, 327, 328, 329, 330, 331, 332, 333, 334, 335, 336, 337, 338, 339, 340, 341, 342, 343, 344, 345, 346, 347, 348, 349, 350, 351, 352, 353, 354, 355, 356, 357, 358, 359, 360, 361, 362, 363, 364, 365, 366, 367, 368, 369, 370, 371, 372, 373, 374, 375, 376, 377, 378, 379, 380, 381, 382, 383, 384, 385, 386, 387, 388, 389, 390, 391, 392, 393, 394, 395, 396, 397 или 398, или нуклеотидной последовательностью, содержащей или состоящей из фрагмента любой SEQ ID NO: 198-398, т.е. SEQ ID NO: 198, 199, 200, 201, 202, 203, 204, 205, 206, 207, 208, 209, 210, 211, 212, 213, 214, 215, 216, 217, 218, 219, 220, 221, 222, 223, 224, 225, 226, 227, 228, 229, 230, 231, 232, 233, 234, 235, 236, 237, 238, 239, 240, 241, 242, 243, 244, 245, 246, 247, 248, 249, 250, 251, 252, 253, 254, 255, 256, 257, 258, 259, 260, 261, 262, 263, 264, 265, 266, 267, 268, 269, 270, 271, 272, 273, 274, 275, 276, 277, 278, 279, 280, 281, 282, 283, 284, 285, 286, 287, 288, 289, 290, 291, 292, 293, 294, 295, 296, 297, 298, 299, 300, 301, 302, 303, 304, 305, 307, 308, 309, 310, 311, 312, 313, 314, 315, 316, 317, 318, 319, 320, 321, 322, 323, 324, 325, 326, 327, 328, 329, 330, 331, 332, 333, 334, 335, 336, 337, 338, 339, 340, 341, 342, 343, 344, 345, 346, 347, 348, 349, 350, 351, 352, 353, 354, 355, 356, 357, 358, 359, 360, 361, 362, 363, 364, 365, 366, 367, 368, 369, 370, 371, 372, 373, 374, 375, 376, 377, 378, 379, 380, 381, 382, 383, 384, 385, 386, 387, 388, 389, 390, 391, 392, 393, 394, 395, 396, 397 или 398. Более предпочтительно указанный второй олигонуклеотид соединения по настоящему изобретению представлен нуклеотидной последовательностью, содержащей или состоящей из SEQ ID NO: 198, 199, 200 или 201, еще более предпочтительно SEQ ID NO: 198 или 199, наиболее предпочтительно SEQ ID NO: 198, или нуклеотидной последовательностью, содержащей или состоящей из фрагмента SEQ ID NO: 198, 199, 200 или 201, еще более предпочтительно SEQ ID NO: 198 или 199, наиболее предпочтительно SEQ ID NO: 198. Предпочтительно указанные первый и второй антисмысловые олигонуклеотиды соединения по настоящему изобретению отличаются, более предпочтительно нуклеотидные последовательности указанных первого и второго антисмысловых олигонуклеотидов представлены разными SEQ ID NO. Каждый из указанных первого и/или второго олигонуклеотидов соединения может иметь любой из химических составов, как определено ниже в данном документе, или их комбинации.

В данной заявке, если не указано иное, «фрагмент SEQ ID NO:» предпочтительно означает нуклеотидную последовательность, содержащую или состоящую по меньшей мере из 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 или 20 непрерывных нуклеотидов из указанной SEQ ID NO, более предпочтительно по меньшей мере 10 непрерывных нуклеотидов. Соответственно, «фрагмент SEQ ID NO» предпочтительно означает нуклеотидную последовательность, которая содержит или состоит из указанной SEQ ID NO, причем не более 15, 14, 13, 12, 11, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2 или 1 последовательных нуклеотидов отсутствуют, предпочтительно не более 10, еще более предпочтительно не более 5. В качестве альтернативы, «фрагмент SEQ ID NO:» предпочтительно означает нуклеотидную последовательность, содержащую или состоящую из количества непрерывных нуклеотидов из указанной SEQ ID NO, и где указанное количество непрерывных нуклеотидов составляет по меньшей мере 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95; 96%, 97%, 98% или 99% длины указанной SEQ ID NO. Таким образом, «фрагмент SEQ ID NO» предпочтительно означает нуклеотидную последовательность, которая содержит или состоит из указанной SEQ ID NO, причем количество последовательных нуклеотидов отсутствует, и где указанное количество составляет не более 50%, 45%, 40%, 35%, 30%, 25%, 20%, 15%, 10%, 5%, 4%, 3%, 2% или 1%, предпочтительно не более 20%, более предпочтительно не более 10% длины указанной SEQ ID NO.

Предпочтительно, указанный фрагмент SEQ ID NO обладают активностью пропуска экзона 51 пре-мРНК дистрофина.

В другом предпочтительном варианте осуществления в настоящем изобретении представлено соединение, содержащее или состоящее из первого и второго антисмысловых олигонуклеотидов, соединенных между собой посредством связывающего фрагмента, причем указанный первый антисмысловой олигонуклеотид представлен нуклеотидной последовательностью, содержащей или состоящей из нуклеотидной последовательности, которая по меньшей мере на 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или на 99%, предпочтительно по меньшей мере на 95%, более предпочтительно по меньшей мере на 97% идентична любой SEQ ID NO: 14-197, предпочтительно SEQ ID NO: 14, 15, 16, 17 или 18, более предпочтительно SEQ ID NO: 14, 15, 16 или 17, еще более предпочтительно SEQ ID NO: 14 или 15, наиболее предпочтительно SEQ ID NO: 14, и/или где указанный второй антисмысловой олигонуклеотид представлен нуклеотидной последовательностью, содержащей или состоящей из нуклеотидной последовательности, которая по меньшей мере на 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или на 99%, предпочтительно по меньшей мере на 95%, более предпочтительно по меньшей мере на 97% идентична любой SEQ ID NO: 198-398, предпочтительно SEQ ID NO: 198, 199, 200 или 201, более предпочтительно SEQ ID NO: 198 или 199, еще более предпочтительно SEQ ID NO: 198. Предпочтительно указанные первый и второй антисмысловые олигонуклеотиды соединения по настоящему изобретению отличаются, более предпочтительно нуклеотидные последовательности указанных первого и второго антисмысловых олигонуклеотидов представлены разными SEQ ID NO. Предпочтительно, указанный первый и/или второй антисмысловой олигонуклеотид обладает активностью пропуска экзона 51 пре-мРНК дистрофина.

Каждый из указанных первого и/или второго олигонуклеотидов соединения может иметь любой из химических составов, как определено ниже в данном документе, или их комбинации.

В одном варианте осуществления в настоящем изобретении, следовательно, представлено соединение, предпочтительно для пропуска экзона 51, содержащее или состоящее из первого и второго антисмысловых олигонуклеотидов, связанных между собой связывающим фрагментом, где указанный первый антисмысловой олигонуклеотид представлен нуклеотидной последовательностью, содержащей или состоящей из

SEQ ID NO: 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 141, 142, 143, 144, 145, 146, 147, 148, 149, 150, 151, 152, 153, 154, 155, 156, 157, 158, 159, 160, 161, 162, 163, 164, 165, 166, 167, 168, 169, 170, 171, 172, 173, 174, 175, 176, 177, 178, 179, 180, 181, 182, 183, 184, 185, 186, 187, 188, 189, 190, 191, 192, 193, 194, 195, 196 или 197, предпочтительно SEQ ID NO: 14, 15, 16, 17 или 18, более предпочтительно SEQ ID NO: 14, 15, 16 или 17, еще более предпочтительно SEQ ID NO: 14 или 15, наиболее предпочтительно SEQ ID NO: 14, или

фрагмента SEQ ID NO: 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 141, 142, 143, 144, 145, 146, 147, 148, 149, 150, 151, 152, 153, 154, 155, 156, 157, 158, 159, 160, 161, 162, 163, 164, 165, 166, 167, 168, 169, 170, 171, 172, 173, 174, 175, 176, 177, 178, 179, 180, 181, 182, 183, 184, 185, 186, 187, 188, 189, 190, 191, 192, 193, 194, 195, 196 или 197, предпочтительно SEQ ID NO: 14, 15, 16, 17 или 18, более предпочтительно SEQ ID NO: 14, 15, 16 или 17, еще более предпочтительно SEQ ID NO: 14 или 15, наиболее предпочтительно SEQ ID NO: 14, или

SEQ ID NO: 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 141, 142, 143, 144, 145, 146, 147, 148, 149, 150, 151, 152, 153, 154, 155, 156, 157, 158, 159, 160, 161, 162, 163, 164, 165, 166, 167, 168, 169, 170, 171, 172, 173, 174, 175, 176, 177, 178, 179, 180, 181, 182, 183, 184, 185, 186, 187, 188, 189, 190, 191, 192, 193, 194, 195, 196 или 197, предпочтительно SEQ ID NO: 14, 15, 16, 17 или 18, более предпочтительно SEQ ID NO: 14, 15, 16 или 17, еще более предпочтительно SEQ ID NO: 14 или 15, наиболее предпочтительно SEQ ID NO: 14, с 1, 2, 3, 4 или 5 дополнительными нуклеотидами, или

SEQ ID NO: 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 141, 142, 143, 144, 145, 146, 147, 148, 149, 150, 151, 152, 153, 154, 155, 156, 157, 158, 159, 160, 161, 162, 163, 164, 165, 166, 167, 168, 169, 170, 171, 172, 173, 174, 175, 176, 177, 178, 179, 180, 181, 182, 183, 184, 185, 186, 187, 188, 189, 190, 191, 192, 193, 194, 195, 196 или 197, предпочтительно SEQ ID NO: 14, 15, 16, 17 или 18, более предпочтительно SEQ ID NO: 14, 15, 16 или 17, еще более предпочтительно SEQ ID NO: 14 или 15, наиболее предпочтительно SEQ ID NO: 14, с 1, 2, 3, 4 или 5 дополнительными нуклеотидами, отсутствующими в указанной SEQ ID NO, или

нуклеотидной последовательностью, которая по меньшей мере на 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99%, предпочтительно по меньшей мере на 95%, более предпочтительно по меньшей мере на 97% идентична SEQ ID NO: 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 141, 142, 143, 144, 145, 146, 147, 148, 149, 150, 151, 152, 153, 154, 155, 156, 157, 158, 159, 160, 161, 162, 163, 164, 165, 166, 167, 168, 169, 170, 171, 172, 173, 174, 175, 176, 177, 178, 179, 180, 181, 182, 183, 184, 185, 186, 187, 188, 189, 190, 191, 192, 193, 194, 195, 196 или 197, предпочтительно SEQ ID NO: 14, 15, 16, 17 или 18, более предпочтительно SEQ ID NO: 14, 15, 16 или 17, еще более предпочтительно SEQ ID NO: 14 или 15, наиболее предпочтительно SEQ ID NO: 14;

и/или где указанный второй антисмысловой олигонуклеотид представлен нуклеотидной последовательностью, содержащей или состоящей из

SEQ ID NO: 198, 199, 200, 201, 202, 203, 204, 205, 206, 207, 208, 209, 210, 211, 212, 213, 214, 215, 216, 217, 218, 219, 220, 221, 222, 223, 224, 225, 226, 227, 228, 229, 230, 231, 232, 233, 234, 235, 236, 237, 238, 239, 240, 241, 242, 243, 244, 245, 246, 247, 248, 249, 250, 251, 252, 253, 254, 255, 256, 257, 258, 259, 260, 261, 262, 263, 264, 265, 266, 267, 268, 269, 270, 271, 272, 273, 274, 275, 276, 277, 278, 279, 280, 281, 282, 283, 284, 285, 286, 287, 288, 289, 290, 291, 292, 293, 294, 295, 296, 297, 298, 299, 300, 301, 302, 303, 304, 305, 307, 308, 309, 310, 311, 312, 313, 314, 315, 316, 317, 318, 319, 320, 321, 322, 323, 324, 325, 326, 327, 328, 329, 330, 331, 332, 333, 334, 335, 336, 337, 338, 339, 340, 341, 342, 343, 344, 345, 346, 347, 348, 349, 350, 351, 352, 353, 354, 355, 356, 357, 358, 359, 360, 361, 362, 363, 364, 365, 366, 367, 368, 369, 370, 371, 372, 373, 374, 375, 376, 377, 378, 379, 380, 381, 382, 383, 384, 385, 386, 387, 388, 389, 390, 391, 392, 393, 394, 395, 396, 397 или 398, предпочтительно SEQ ID NO: 198, 199, 200 или 201, более предпочтительно SEQ ID NO: 198 или 199, еще более предпочтительно SEQ ID NO: 198, или

фрагмента SEQ ID NO: 198, 199, 200, 201, 202, 203, 204, 205, 206, 207, 208, 209, 210, 211, 212, 213, 214, 215, 216, 217, 218, 219, 220, 221, 222, 223, 224, 225, 226, 227, 228, 229, 230, 231, 232, 233, 234, 235, 236, 237, 238, 239, 240, 241, 242, 243, 244, 245, 246, 247, 248, 249, 250, 251, 252, 253, 254, 255, 256, 257, 258, 259, 260, 261, 262, 263, 264, 265, 266, 267, 268, 269, 270, 271, 272, 273, 274, 275, 276, 277, 278, 279, 280, 281, 282, 283, 284, 285, 286, 287, 288, 289, 290, 291, 292, 293, 294, 295, 296, 297, 298, 299, 300, 301, 302, 303, 304, 305, 307, 308, 309, 310, 311, 312, 313, 314, 315, 316, 317, 318, 319, 320, 321, 322, 323, 324, 325, 326, 327, 328, 329, 330, 331, 332, 333, 334, 335, 336, 337, 338, 339, 340, 341, 342, 343, 344, 345, 346, 347, 348, 349, 350, 351, 352, 353, 354, 355, 356, 357, 358, 359, 360, 361, 362, 363, 364, 365, 366, 367, 368, 369, 370, 371, 372, 373, 374, 375, 376, 377, 378, 379, 380, 381, 382, 383, 384, 385, 386, 387, 388, 389, 390, 391, 392, 393, 394, 395, 396, 397 или 398, предпочтительно SEQ ID NO: 198, 199, 200 или 201, более предпочтительно SEQ ID NO: 198 или 199, еще более предпочтительно SEQ ID NO: 198, или

SEQ ID NO: 198, 199, 200, 201, 202, 203, 204, 205, 206, 207, 208, 209, 210, 211, 212, 213, 214, 215, 216, 217, 218, 219, 220, 221, 222, 223, 224, 225, 226, 227, 228, 229, 230, 231, 232, 233, 234, 235, 236, 237, 238, 239, 240, 241, 242, 243, 244, 245, 246, 247, 248, 249, 250, 251, 252, 253, 254, 255, 256, 257, 258, 259, 260, 261, 262, 263, 264, 265, 266, 267, 268, 269, 270, 271, 272, 273, 274, 275, 276, 277, 278, 279, 280, 281, 282, 283, 284, 285, 286, 287, 288, 289, 290, 291, 292, 293, 294, 295, 296, 297, 298, 299, 300, 301, 302, 303, 304, 305, 307, 308, 309, 310, 311, 312, 313, 314, 315, 316, 317, 318, 319, 320, 321, 322, 323, 324, 325, 326, 327, 328, 329, 330, 331, 332, 333, 334, 335, 336, 337, 338, 339, 340, 341, 342, 343, 344, 345, 346, 347, 348, 349, 350, 351, 352, 353, 354, 355, 356, 357, 358, 359, 360, 361, 362, 363, 364, 365, 366, 367, 368, 369, 370, 371, 372, 373, 374, 375, 376, 377, 378, 379, 380, 381, 382, 383, 384, 385, 386, 387, 388, 389, 390, 391, 392, 393, 394, 395, 396, 397 или 398, предпочтительно SEQ ID NO: 198, 199, 200 или 201, более предпочтительно SEQ ID NO: 198 или 199, еще более предпочтительно SEQ ID NO: 198, с 1, 2, 3, 4 или 5 дополнительными нуклеотидами, или

SEQ ID NO: 198, 199, 200, 201, 202, 203, 204, 205, 206, 207, 208, 209, 210, 211, 212, 213, 214, 215, 216, 217, 218, 219, 220, 221, 222, 223, 224, 225, 226, 227, 228, 229, 230, 231, 232, 233, 234, 235, 236, 237, 238, 239, 240, 241, 242, 243, 244, 245, 246, 247, 248, 249, 250, 251, 252, 253, 254, 255, 256, 257, 258, 259, 260, 261, 262, 263, 264, 265, 266, 267, 268, 269, 270, 271, 272, 273, 274, 275, 276, 277, 278, 279, 280, 281, 282, 283, 284, 285, 286, 287, 288, 289, 290, 291, 292, 293, 294, 295, 296, 297, 298, 299, 300, 301, 302, 303, 304, 305, 307, 308, 309, 310, 311, 312, 313, 314, 315, 316, 317, 318, 319, 320, 321, 322, 323, 324, 325, 326, 327, 328, 329, 330, 331, 332, 333, 334, 335, 336, 337, 338, 339, 340, 341, 342, 343, 344, 345, 346, 347, 348, 349, 350, 351, 352, 353, 354, 355, 356, 357, 358, 359, 360, 361, 362, 363, 364, 365, 366, 367, 368, 369, 370, 371, 372, 373, 374, 375, 376, 377, 378, 379, 380, 381, 382, 383, 384, 385, 386, 387, 388, 389, 390, 391, 392, 393, 394, 395, 396, 397 или 398, предпочтительно SEQ ID NO: 198, 199, 200 или 201, более предпочтительно SEQ ID NO: 198 или 199, еще более предпочтительно SEQ ID NO: 198, с 1, 2, 3, 4 или 5 дополнительными нуклеотидами, отсутствующими в указанной SEQ ID NO, или

нуклеотидной последовательностью, которая по меньшей мере на 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99%, предпочтительно по меньшей мере на 95%, более предпочтительно по меньшей мере на 97% идентична SEQ ID NO: 198, 199, 200, 201, 202, 203, 204, 205, 206, 207, 208, 209, 210, 211, 212, 213, 214, 215, 216, 217, 218, 219, 220, 221, 222, 223, 224, 225, 226, 227, 228, 229, 230, 231, 232, 233, 234, 235, 236, 237, 238, 239, 240, 241, 242, 243, 244, 245, 246, 247, 248, 249, 250, 251, 252, 253, 254, 255, 256, 257, 258, 259, 260, 261, 262, 263, 264, 265, 266, 267, 268, 269, 270, 271, 272, 273, 274, 275, 276, 277, 278, 279, 280, 281, 282, 283, 284, 285, 286, 287, 288, 289, 290, 291, 292, 293, 294, 295, 296, 297, 298, 299, 300, 301, 302, 303, 304, 305, 307, 308, 309, 310, 311, 312, 313, 314, 315, 316, 317, 318, 319, 320, 321, 322, 323, 324, 325, 326, 327, 328, 329, 330, 331, 332, 333, 334, 335, 336, 337, 338, 339, 340, 341, 342, 343, 344, 345, 346, 347, 348, 349, 350, 351, 352, 353, 354, 355, 356, 357, 358, 359, 360, 361, 362, 363, 364, 365, 366, 367, 368, 369, 370, 371, 372, 373, 374, 375, 376, 377, 378, 379, 380, 381, 382, 383, 384, 385, 386, 387, 388, 389, 390, 391, 392, 393, 394, 395, 396, 397 или 398, предпочтительно SEQ ID NO: 198, 199, 200 или 201, более предпочтительно SEQ ID NO: 198 или 199, еще более предпочтительно SEQ ID NO: 198.

Предпочтительно указанные первый и второй антисмысловые олигонуклеотиды соединения по настоящему изобретению отличаются, более предпочтительно нуклеотидные последовательности указанных первого и второго антисмысловых олигонуклеотидов представлены разными SEQ ID NO.

Указанные «1, 2, 3, 4 или 5 дополнительных нуклеотидов» могут присутствовать со стороны 5' и/или 3' приведенной SEQ ID NO.

Указанные «1, 2, 3, 4 или 5 отсутствующих нуклеотидов» могут представлять собой нуклеотиды, отсутствующие со стороны 5' и/или 3' приведенной SEQ ID NO.

Каждый из указанных первого и/или второго олигонуклеотидов соединения может иметь любой из химических составов, как определено ниже в данном документе, или их комбинации. Также в данном контексте допускается наличие 1 или 2 несоответствий в олигонуклеотиде из 20 нуклеотидов или 1-4 несоответствий в олигонуклеотиде из 40 нуклеотидов, как ранее было указано в данном документе. В олигонуклеотиде из 10-33 нуклеотидов присутствуют 0, 1, 2 или 3 несоответствия, предпочтительно, присутствуют 0, 1 или 2 несоответствия, как ранее было указано в данном документе. В олигонуклеотиде из 16-22 нуклеотидов может присутствовать 0, 1, 2 несоответствия, предпочтительно, присутствует 0 или 1 несоответствие, как ранее было указано в данном документе.

В одном варианте осуществления соединение по настоящему изобретению предпочтительно предназначено для пропуска экзона 51 пре-мРНК дистрофина. В контексте настоящего изобретения положения указанного первого и второго антисмысловых олигонуклеотидов в соединении по настоящему изобретению являются взаимозаменяемыми.

В предпочтительном варианте осуществления соединение по настоящему изобретению предпочтительно предназначено для пропуска экзона 51 пре-мРНК дистрофина, и содержит или состоит из первого антисмыслового олигонуклеотида, представленного нуклеотидной последовательностью, содержащей или состоящей из SEQ ID NO: 14, 15, 16, 17 или 18, более предпочтительно SEQ ID NO: 14, 15, 16 или 17, еще более предпочтительно SEQ ID NO: 14 или 15, наиболее предпочтительно SEQ ID NO: 14, и второго антисмыслового олигонуклеотида, представленного нуклеотидной последовательностью, содержащей или состоящей из SEQ ID NO: 198, 199, 200 или 201, более предпочтительно SEQ ID NO: 198 или 199, еще более предпочтительно SEQ ID NO: 198, причем указанные первый и второй антисмысловые олигонуклеотиды соединены между собой посредством связывающего фрагмента (как описано в разделе под названием «связывающий фрагмент»), предпочтительно указанный связывающий фрагмент представляет собой триэтиленгликоль (TEG) или гексаэтиленгликоль (HEG).

Указанная SEQ ID NO: 14 представлена последовательностью GGUAAGUUCUGUCCAAGC, указанная SEQ ID NO: 15 представлена последовательностью GUAAGUUCUGUCCAAGCC, указанная SEQ ID NO: 16 представлена последовательностью AGUCGGUAAGUUCUGUCC, указанная SEQ ID NO: 17 представлена последовательностью CUGUCCAAGCCCGGUUGA, указанная SEQ ID NO: 18 представлена последовательностью UAAGUUCUGUCCAAG, указанная SEQ ID NO: 198 представлена последовательностью UCAAGGAAGAUGGCAUUUCU, указанная SEQ ID NO: 199 представлена последовательностью UCAAGGAAGAUGGCAUUUCUAG, указанная SEQ ID NO: 200 представлена последовательностью UCAAGGAAGAUGGCAU и указанная SEQ ID NO: 201 представлена последовательностью GAAGAUGGCAUUUCU.

В контексте настоящего изобретения положения указанного первого и второго антисмысловых олигонуклеотидов в соединении по настоящему изобретению являются взаимозаменяемыми. Таким образом, предпочтительное соединение по настоящему изобретению может быть представлено

SEQ ID NO: 16175 (GGUAAGUUCUGUCCAAGCn UCAAGGAAGAUGGCAUUUCU) или SEQ ID NO: 16176 (UCAAGGAAGAUGGCAUUUCUnGGUAAGUUCUGUCCAAGC), причем связывающий фрагмент, представленный n, представляет собой линкер TEG, или

SEQ ID NO: 16177 (GGUAAGUUCUGUCCAAGCnUCAAGGAAGAUGGCAUUUCU) или SEQ ID NO: 16178 (UCAAGGAAGAUGGCAUUUCUnGGUAAGUUCUGUCCAAGC), причем связывающий фрагмент, представленный n, представляет собой линкер HEG, или

SEQ ID NO: 16179 (GGUAAGUUCUGUCCAAGCnUCAAGGAAGAUGGCAUUUCUAG) или SEQ ID NO: 16180 (UCAAGGAAGAUGGCAUUUCUAGnGGUAAGUUCUGUCCAAGC), причем связывающий фрагмент, представленный n, представляет собой линкер TEG, или

SEQ ID NO: 16181 (GGUAAGUUCUGUCCAAGCnUCAAGGAAGAUGGCAUUUCUAG) или SEQ ID NO: 16182 (UCAAGGAAGAUGGCAUUUCUAGnGGUAAGUUCUGUCCAAGC), причем связывающий фрагмент, представленный n, представляет собой линкер HEG, или

SEQ ID NO: 16183 (GUAAGUUCUGUCCAAGCCnUCAAGGAAGAUGGCAUUUCU) или SEQ ID NO: 16184 (UCAAGGAAGAUGGCAUUUCUnGUAAGUUCUGUCCAAGCC), причем связывающий фрагмент, представленный n, представляет собой линкер TEG, или

SEQ ID NO: 16185 (GUAAGUUCUGUCCAAGCCnUCAAGGAAGAUGGCAUUUCU) или SEQ ID NO: 16186 (UCAAGGAAGAUGGCAUUUCUnGUAAGUUCUGUCCAAGCC), причем связывающий фрагмент, представленный n, представляет собой линкер HEG, или

SEQ ID NO: 16187 (GUAAGUUCUGUCCAAGCCnUCAAGGAAGAUGGCAUUUCUAG) или SEQ ID NO: 16188 (UCAAGGAAGAUGGCAUUUCUAGnGUAAGUUCUGUCCAAGCC), причем связывающий фрагмент, представленный n, представляет собой линкер TEG, или

SEQ ID NO: 16189 (GUAAGUUCUGUCCAAGCCnUCAAGGAAGAUGGCAUUUCUAG) или SEQ ID NO: 16190 (UCAAGGAAGAUGGCAUUUCUAGnGUAAGUUCUGUCCAAGCC), причем связывающий фрагмент, представленный n, представляет собой линкер HEG, или

SEQ ID NO: 16191 (AGUCGGUAAGUUCUGUCCnUCAAGGAAGAUGGCAUUUCU) или SEQ ID NO: 16192 (UCAAGGAAGAUGGCAUUUCUnAGUCGGUAAGUUCUGUCC), причем связывающий фрагмент, представленный n, представляет собой линкер TEG, или

SEQ ID NO: 16193 (AGUCGGUAAGUUCUGUCCnUCAAGGAAGAUGGCAUUUCU) или SEQ ID NO: 16194 (UCAAGGAAGAUGGCAUUUCUnAGUCGGUAAGUUCUGUCC), причем связывающий фрагмент, представленный n, представляет собой линкер HEG, или

SEQ ID NO: 16195 (AGUCGGUAAGUUCUGUCCnUCAAGGAAGAUGGCAUUUCUAG) или SEQ ID NO: 16196 (UCAAGGAAGAUGGCAUUUCUAGnAGUCGGUAAGUUCUGUCC), причем связывающий фрагмент, представленный n, представляет собой линкер TEG, или

SEQ ID NO: 16197 (AGUCGGUAAGUUCUGUCCnUCAAGGAAGAUGGCAUUUCUAG) или SEQ ID NO: 16198 (UCAAGGAAGAUGGCAUUUCUAGnAGUCGGUAAGUUCUGUCC), причем связывающий фрагмент, представленный n, представляет собой линкер HEG, или

SEQ ID NO: 16199 (CUGUCCAAGCCCGGUUGAnUCAAGGAAGAUGGCAUUUCU) или SEQ ID NO: 16200 (UCAAGGAAGAUGGCAUUUCUnCUGUCCAAGCCCGGUUGA), причем связывающий фрагмент, представленный n, представляет собой линкер TEG, или

SEQ ID NO: 16201 (CUGUCCAAGCCCGGUUGAnUCAAGGAAGAUGGCAUUUCU) или SEQ ID NO: 16202 (UCAAGGAAGAUGGCAUUUCUnCUGUCCAAGCCCGGUUGA), причем связывающий фрагмент, представленный n, представляет собой линкер HEG, или

SEQ ID NO: 16203 (CUGUCCAAGCCCGGUUGAnUCAAGGAAGAUGGCAUUUCUAG) или SEQ ID NO: 16204 (UCAAGGAAGAUGGCAUUUCUAGnCUGUCCAAGCCCGGUUGA), причем связывающий фрагмент, представленный n, представляет собой линкер TEG, или

SEQ ID NO: 16205 (CUGUCCAAGCCCGGUUGAnUCAAGGAAGAUGGCAUUUCUAG) или SEQ ID NO: 16206 (UCAAGGAAGAUGGCAUUUCUAGnCUGUCCAAGCCCGGUUGA), причем связывающий фрагмент, представленный n, представляет собой линкер HEG, или

SEQ ID NO: 16207 (UAAGUUCUGUCCAAGnUCAAGGAAGAUGGCAU) или SEQ ID NO: 16208 (UCAAGGAAGAUGGCAUnUAAGUUCUGUCCAAG), причем связывающий фрагмент, представленный n, представляет собой линкер TEG, или

SEQ ID NO: 16209 (UAAGUUCUGUCCAAGnUCAAGGAAGAUGGCAU) или SEQ ID NO: 16210 (UCAAGGAAGAUGGCAUnUAAGUUCUGUCCAAG), причем связывающий фрагмент, представленный n, представляет собой линкер HEG, или

SEQ ID NO: 16211 (UAAGUUCUGUCCAAGnGAAGAUGGCAUUUCU) или SEQ ID NO: 16212 (GAAGAUGGCAUUUCUnUAAGUUCUGUCCAAG), причем связывающий фрагмент, представленный n, представляет собой линкер TEG, или

SEQ ID NO: 16213 (UAAGUUCUGUCCAAGnGAAGAUGGCAUUUCU) или SEQ ID NO: 16214 (GAAGAUGGCAUUUCUnUAAGUUCUGUCCAAG), причем связывающий фрагмент, представленный n, представляет собой линкер HEG.

Более предпочтительное соединение по настоящему изобретению представлено одной из SEQ ID NO: 16175, 16176, 16179, 16180, 16183, 16184, 16187, 16188, 16191, 16192, 16195, 16196, 16199, 16200, 16203 и 16204 (линкер TEG) или любой из SEQ ID NO: 16177, 16178, 16181, 16182, 16185, 16186, 16189, 16190, 16193, 16194, 16197, 16198, 16201, 16202, 16205 и 16206 (линкер HEG).

Еще более предпочтительное соединение по настоящему изобретению представлено одной из SEQ ID NO: 16191, 16192, 16195, 16196, 16199, 16200, 16203 и 16204 (линкер TEG) или любой из SEQ ID NO: 16193, 16194, 16197, 16198, 16201, 16202, 16205 и 16206 (линкер HEG).

Еще более предпочтительное соединение по настоящему изобретению представлено одной из SEQ ID NO: 16175, 16176, 16179, 16180, 16183, 16184, 16187 и 16188 (линкер TEG) или любой из SEQ ID NO: 16177, 16178, 16181, 16182, 16185, 16186, 16189 и 16190 (линкер HEG).

Наиболее предпочтительное соединение по настоящему изобретению представлено SEQ ID NO: 16175 или 16176 (линкер TEG) или SEQ ID NO: 16177 или 16178 (линкер HEG).

Предпочтительные первый и/или второй AON соединения по настоящему изобретению представляют собой такие, в которых указанный первый и/или второй олигонуклеотид индуцирует модуляцию сплайсинга пре-мРНК дистрофина, предпочтительно указанная модуляция сплайсинга пре-мРНК изменяет выработку или состав белка, который предпочтительно содержит пропуск экзона или включение экзона, причем указанная модуляция сплайсинга пре-мРНК наиболее предпочтительно содержит пропуск экзона. Данную модуляцию сплайсинга пре-мРНК предпочтительно применяют в контексте терапевтического применения, как определено далее в данном документе. Сплайсинг пре-мРНК возникает посредством двух последовательных реакций переэстерификации, включающих точку ветвления интрона и область сплайсинга смежного интрона.

Целью модуляции сплайсинга пре-мРНК может заключаться в изменении выработки белка, зачастую белка, кодируемого РНК. Данную выработку можно изменять посредством повышения или снижения уровня указанной выработки. Данная выработка также может быть изменена посредством изменения состава белка, который фактически вырабатывается, например, если модуль сплайсинга пре-мРНК приводит к включению или исключению одного или нескольких экзонов и в белке, который имеет другую последовательность аминокислот. Предпочтительно, такой белок с другой аминокислотной последовательностью имеет большую функциональность, или имеет лучшую функциональность, или имеет по меньшей мере одно измененное свойство, чем белок, выработанный в результате заболевания или патологического состояния.

В случае DMD модуляцию сплайсинга пре-мРНК можно применять для пропуска одного или более конкретных экзонов в пре-мРНК дистрофина с целью восстановления открытой рамки считывания транскрипта и индукции экспрессии более короткого (более) функционального белка дистрофина, с конечной целью наличия возможности препятствования течению болезни. Таким образом, в предпочтительном варианте осуществления представлено соединение по настоящему изобретению, причем указанное соединение индуцирует модуляцию сплайсинга пре-мРНК, причем указанная модуляция сплайсинга пре-мРНК изменяет выработку белка, связанного с мышечной дистрофией Дюшенна (DMD).

В предпочтительном варианте осуществления соединение по настоящему изобретению применяют для индукции пропуска экзона в пре-мРНК дистрофина в клетке, в органе, в ткани и/или у индивида. В более предпочтительном варианте осуществления соединение по настоящему изобретению применяют для пропуска экзона 51 пре-мРНК дистрофина. Пропуск экзона обеспечивает зрелую мРНК дистрофина, которая не содержит пропущенного экзона и, таким образом, может обеспечивать экспрессию более короткого белкового продукта. Пропуск экзона 51 предпочтительно индуцирован соединением по настоящему изобретению, причем первый AON связывается с первым энхансером экзонного сплайсинга (ESE), причем нуклеотидная последовательность указанного первого ESE представлена SEQ ID NO: 3, и где второй AON связывается со вторым энхансером экзонного сплайсинга (ESE), причем нуклеотидная последовательность указанного второго ESE представлена SEQ ID NO: 4.

Предпочтительно указанные первый и второй антисмысловые олигонуклеотиды соединения по настоящему изобретению отличаются, более предпочтительно нуклеотидные последовательности указанных первого и второго антисмысловых олигонуклеотидов представлены разными SEQ ID NO.

По всей данной заявке, если не указано иное, термин «связывается с» может быть заменен на «комплементарен», «нацеливается на», «гибридизуется с», «перекрывается с» и/или «нацеливается на».

Как указано в данном документе, пре-мРНК DMD предпочтительно означает пре-мРНК гена DMD, кодирующий белок дистрофин. Мутированный пре-мРНК DMD соответствует пре-мРНК пациента DMD с мутацией по сравнению с пре-мРНК DMD дикого типа человека, не являющегося больным, что обеспечивает сниженные уровни или отсутствие функционального дистрофина (DMD). Пре-мРНК DMD также называют пре-мРНК дистрофина. Ген DMD также может называться геном дистрофина. Дистрофин и DMD можно применять взаимозаменяемо по всей заявке.

Пациент предпочтительно означает пациента с DMD, как указано далее в данном документе, или пациента, предрасположенного к развитию DMD вследствие его генетического фона. В случае пациента с DMD, применяемый олигонуклеотид предпочтительно будет корректировать мутацию, присутствующую в гене DMD указанного пациента, и создавать белок, который будет выглядеть как белок BMD: указанный белок будет предпочтительно представлять собой функциональный или полуфункциональный дистрофин, как далее указано в данном документе.

Как указано в данном документе, функциональный дистрофин предпочтительно представляет собой дистрофин дикого типа, соответствующий белку с аминокислотной последовательностью, указанной в SEQ ID NO: 1. Как указано в данном документе, полуфункциональный дистрофин предпочтительно представляет собой BMD-подобный дистрофин, соответствующий белку с действующим доменом связывания в его N-концевой части (первые 240 аминокислот на N-конце), обогащенный цистеином домен (аминокислота 3361-3685) и C-концевой домен (последние 325 аминокислот на C-конце), при этом каждый из указанных доменов присутствует в дистрофине дикого типа, как известно специалисту в данной области техники. Аминокислоты, указанные в данном документе, соответствуют аминокислотам дистрофина дикого типа, представленным SEQ ID NO: 1. Другими словами, функциональный или полуфункциональный дистрофин представляет собой дистрофин, который демонстрирует, по меньшей мере в некоторой степени, активность дистрофина дикого типа. «По меньшей мере в некоторой степени» предпочтительно означает по меньшей мере 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95% или 100% соответствующей активности функционального дистрофина дикого типа. В данном контексте, активность функционального дистрофин предпочтительно связывается с актином и дистрофин-ассоциированным гликопротеиновым комплексом (DGC или DAPC) (Ehmsen J et al, 2002).

Связывание дистрофина с актином и с комплексом DGC или DAPC может быть визуализировано либо посредством совместной иммунопреципитации с использованием экстрактов общего белка или различных антител, вступающих в реакцию с различными членами комплекса, из контрольного (не являющейся DMD) биоптата из мышцы с подозрением на дистрофию до и/или после лечения, как известно специалисту в данной области техники.

Индивиды или пациенты, страдающие мышечной дистрофией Дюшенна, как правило, имеют мутацию в гене, кодирующем дистрофин (DMD или ген дистрофина), которая препятствует синтезу полного белка, т.е. преждевременный стоп-кодон препятствует синтезу C-конца. При мышечной дистрофии Беккера ген дистрофина также содержит мутацию по сравнению с диким типом, но мутация обычно не приводит к преждевременному стоп-кодону и, как правило, синтезируется C-конец. В результате синтезируется функциональный или полуфункциональный белок дистрофина, который обладает по меньшей мере той же активностью, что и белок дикого типа, хотя не обязательно с таким же количеством активности. Геном пациента BMD обычно кодирует белок дистрофин, содержащий N-концевую часть (первые 240 аминокислот на N-конце), обогащенный цистеином домен (аминокислота 3361-3685) и C-концевой домен (последние 325 аминокислот на C-конце), но в большинстве случаев его центральный стержневой домен является более коротким, чем домен дистрофина дикого типа (Monaco et al., 1988). Индуцированный антисмысловым олигонуклеотидом пропуск экзона для лечения DMD обычно направлен на преодоление преждевременной остановки пре-мРНК пропуском экзона, предпочтительно в центральном стержневом домене, для коррекции открытой рамки считывания и обеспечивает синтез оставшегося белка дистрофина, включая C-конец, несмотря на то, что белок несколько меньше вследствие меньшего размера стержневого домена. В предпочтительном варианте осуществления индивид с DMD, подвергающийся лечению соединением, как указано в данном документе, будет получать дистрофин, который демонстрирует, по меньшей мере в некоторой степени, активность дистрофина дикого типа. Более предпочтительно, если указанный индивид представляет собой пациент с дистрофией Дюшенна или пациента с подозрением на дистрофию Дюшенна, функциональный или полуфункциональный дистрофин представляет собой дистрофин индивида с BMD: как правило, указанный дистрофин способен взаимодействовать как с актином, так и с DGC или DAPC, но его центральный стержневой домен может быть более коротким, чем домен дистрофина дикого типа (Monaco et al., 1988). Центральный стержневой домен дистрофина дикого типа содержит 24 спектриноподобных повторов. Например, центральный стержневой домен дистрофина, представленный в данном документе, может содержать 5-23, 10-22 или 12-18 спектриноподобных повторов, поскольку он может связываться с актином и DGC.

Облегчение одного или более симптомов мышечной дистрофии Дюшенна у индивида с использованием соединения по настоящему изобретению можно оценивать посредством какого-либо из следующих анализов: продление времени до потери ходьбы, улучшение силы мышц, улучшение способности поднимать вес, сокращение времени вставания с пола, сокращение времени ходьбы на девяти метрах, сокращение времени поднятия на четыре ступеньки, улучшение степени функционирования голени, улучшение дыхательной функции, улучшение сердечной функции, улучшение качества жизни. Каждый из данных анализов известен специалисту в данной области техники. В качестве примера, в публикации Manzur et al. (2008) приведено исчерпывающее объяснение каждого из данных анализов. Для каждого из данных анализов, поскольку было обнаружено детектируемое улучшение или удлинение параметра, измеренное в анализе, это будет предпочтительно означать, что один или более симптомов мышечной дистрофии Дюшенна были облегчены у индивида с использованием соединения по настоящему изобретению. Детектируемое улучшение или удлинение предпочтительно представляет собой статистически значимое улучшение или удлинение, как описано в Hodgetts et al. (2006). В качестве альтернативы, облегчение одного или более симптомов мышечной дистрофии Дюшенна можно оценивать посредством измерения улучшения функционирования мышечных волокон, целостности и/или выживаемости. В предпочтительном способе облегчаются один или более симптомов пациента с DMD и/или улучшаются одна или более характеристик одной или более мышечных клеток у пациента с DMD. Такие симптомы или характеристики можно оценивать на уровне клеток, тканей или пациентом самостоятельно.

Уменьшение одной или более характеристик мышечной клетки от пациента, можно оценивать посредством какого-либо из следующих анализов на миогенной клетке или мышечной клетке от пациента: сниженное поглощение кальция мышечными клетками, пониженный синтез коллагена, измененная морфология, измененный биосинтез липидов, пониженный окислительный стресс и/или улучшенное функционирование мышечных волокон, целостность и/или выживаемость. Данные параметры обычно оценивают с использованием иммунофлуоресцентных и/или гистохимических анализов срезов биоптатов мышц.

Улучшение функционирования мышечного волокна, целостность и/или выживаемость можно оценивать с использованием по меньшей мере одного из следующих анализов: детектируемое снижение креатинкиназы в крови, детектируемое снижение некроза мышечных волокон в поперечном срезов биоптатов мышцы с подозрением на дистрофию, и/или детектируемое повышение однородности диаметра мышечных волокон в поперечном срезе биоптата мышцы с подозрением на дистрофию. Каждый из данных анализов известен специалисту в данной области техники.

Креатинкиназа может быть обнаружена в крови, как описано в Hodgetts et al. (2006). Детектируемое снижение креатинкиназы может означать снижение на 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% или более по сравнению с концентрацией креатинкиназы у того же пациента DMD до лечения.

Детектируемое снижение некроза мышечных волокон предпочтительно оценивают в биоптате мышц, более предпочтительно, как описано в Hodgetts et al. (2006), с использованием поперечных срезов биоптата. Детектируемое снижение некроза может представлять собой снижение площади на 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% или более, причем некроз был идентифицирован с использованием поперечных срезов биоптата. Снижение измеряют посредством сравнения некроза, оцененного у того же пациента с DMD до лечения.

Детектируемое повышение однородности диаметра мышечных волокон предпочтительно оценивают в поперечном срезе биоптата мышцы, более предпочтительно, как описано в Hodgetts et al. (2006). Повышение измеряют посредством сравнения однородности диаметра мышечного волокна у того же пациента с DMD до лечения.

Предпочтительно, соединение по настоящему изобретению обеспечивает у указанного индивида функциональный или полуфункциональный белок дистрофин, и способно по меньшей мере частично снижать выработку аберрантного белка дистрофина у указанного индивида.

В контексте настоящего изобретения обеспечение у индивида функционального или полуфункционального белка дистрофина означает повышение выработки функционального или полуфункционального белка дистрофина, как было указано ранее в данном документе. Повышение выработки функционального или полуфункционального мРНК дистрофина, или функционального или полуфункционального белка дистрофина, предпочтительно означает детектируемое повышение или повышение на по меньшей мере 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 100%, 120%, 140%, 160%, 180%, 200% или более по сравнению с исходным количеством функционального или полуфункционального мРНК, или функционального или полуфункционального белка дистрофина, что можно обнаружить посредством цифровой капельной ОТ-ПЦР (мРНК) (Verheul et al., 2016) или иммунофлюоресценции (Beekman et al., 2014), вестерн-блот-анализа или капиллярного вестерн-иммуноанализа (белок) (Wes; Beekman et al., 2018). В контексте настоящего изобретения указанное исходное количество представляет собой количество функционального или полуфункционального мРНК, или функционального или полуфункционального белка дистрофина, в начале индукции пропуска экзона в пре-мРНК дистрофина в клетке, в органе, в ткани и/или у индивида с использованием соединения по настоящему изобретению.

Снижение выработки аберрантного мРНК дистрофина или аберрантного белка дистрофина, предпочтительно означает, что 90%, 80%, 70%, 60%, 50%, 40%, 30%, 20%, 10%, 5% или менее исходного количества аберрантного мРНК дистрофина или аберрантного белка дистрофина все еще детектируется посредством цифровой капельной ОТ-ПЦР (мРНК) или иммунофлюоресценции, вестерн-блот-анализа или капиллярного вестерн-иммуноанализа (белок). В контексте настоящего изобретения указанное исходное количество представляет собой количество аберрантного мРНК дистрофина, или аберрантного белка дистрофина, в начале индукции пропуска экзона в пре-мРНК дистрофина в клетке, в органе, в ткани и/или у индивида с использованием соединения по настоящему изобретению. Аберрантный мРНК дистрофина или белок также называется в данном документе менее функциональным (по сравнению с функциональным белком дистрофином дикого типа, как было указано ранее в данном документе) или нефункциональным мРНК или белком дистрофина. Нефункциональный белок дистрофин предпочтительно представляет собой белок дистрофин, который не способен связываться с актином и/или членами белкового комплекса DGC. Нефункциональный белок дистрофин или мРНК дистрофина, как правило, не содержит или не кодирует белок дистрофин интактным C-концом белка. Обнаружение функционального или полуфункционального мРНК дистрофина или белка можно осуществлять также, как для аберрантного мРНК дистрофина или белка.

После обеспечения у пациента с DMD функционального или полуфункционального белка дистрофина причина DMD по меньшей мере частично убирается. Следовательно, ожидается, что симптомы DMD по меньшей мере частично облегчаются, или скорость, с которой симптомы ухудшаются, снижается, обеспечивая в результате медленное ухудшение состояния. Повышенная частота пропуска также повышает уровень функционального или полуфункционального белка дистрофина, вырабатываемого в мышечной клетке индивида с DMD.

В контексте настоящего изобретения, первый и/или второй олигонуклеотид соединения по настоящему изобретению может содержать функциональный эквивалент олигонуклеотида. Функциональный эквивалент олигонуклеотида предпочтительно означает олигонуклеотид, определенный в данном документе (т.е. первый и/или второй антисмысловой олигонуклеотид, присутствующий в соединении по настоящему изобретению), где один или более нуклеотидов были замещены, и в котором активность указанного функционального эквивалента сохраняется по меньшей мере в некоторой степени. Предпочтительно, активность указанного олигонуклеотида, содержащего функциональный эквивалент олигонуклеотида, обеспечивает функциональный или полуфункциональный белок дистрофин. Указанную активность указанного олигонуклеотида, содержащего функциональный эквивалент олигонуклеотида, следовательно, предпочтительно оценивают посредством подсчета количества функционального или полуфункционального белка дистрофина. Функциональный или полуфункциональный дистрофин предпочтительно определен в данном документе как представляющий собой дистрофин, способный связываться с актином и членами белкового комплекса DGC (или DAPC). Оценку указанной активности указанного функционального эквивалента олигонуклеотида предпочтительно осуществляют посредством цифровой капельной ОТ-ПЦР и секвенирования (на уровне РНК; для обнаружения конкретного пропуска экзона (DMD)), или посредством иммунофлюоресценции, вестерн-блоттинга или капиллярного вестерн-иммуноанализа (Wes) (на уровне белка: для обнаружения восстановления белка). Указанная активность предпочтительно сохраняется по меньшей мере в некоторой степени, если она представляет по меньшей мере 50%, или по меньшей мере 60%, или по меньшей мере 70%, или по меньшей мере 80%, или по меньшей мере 90%, или по меньшей мере 95% или более соответствующей активности указанного олигонуклеотида, из которого образован функциональный эквивалент. В данной заявке, если применяется слово «олигонуклеотид», оно может быть замещено его «функциональным эквивалентом», как указано в данном документе.

Химические модификации первого и/или второго антисмыслового олигонуклеотида соединения

В контексте настоящего изобретения следует понимать, что первый и/или второй олигонуклеотид соединения, который содержит или состоит из любой химической модификации, или любой их комбинации, описанных в данном разделе («Химические модификации первого и/или второго антисмыслового олигонуклеотида соединения»), обладает активностью пропуска экзона, которая по меньшей мере так же удовлетворительна, как и его немодифицированного аналога, описанного выше в разделе «Первый и второй антисмысловой олигонуклеотид соединение», предпочтительно указанная активность пропуска экзона является более высокой, чем указанного немодифицированного аналога. Таким образом, соединение по настоящему изобретению, в котором указанный первый и/или второй антисмысловой олигонуклеотид содержит или состоит из любой химической модификации, или любой их комбинации, описанных в данном разделе («Химические модификации первого и/или второго антисмыслового олигонуклеотида соединения») обладает активностью пропуска экзона, которая по меньшей мере так же удовлетворительна, как и указанного соединения без указанной химической модификации или их комбинации. Предпочтительно, указанная активность пропуска экзона является более высокой, чем указанного соединения без указанной химической модификации или их комбинации.

В одном варианте осуществления настоящего изобретения указанный первый и/или второй антисмысловой олигонуклеотид соединения содержит 2'-замещенный мономер, предпочтительно 2'-замещенный мономер РНК. Для олигонуклеотидов, описанных в данной заявке, если свойство мономера не определено и не очевидно из контекста, следует оценивать соответствующее свойство мономера РНК.

В предпочтительном варианте осуществления указанный первый и/или второй олигонуклеотид соединения является одноцепочечным. Тем не менее, специалисту в данной области техники будет понятно, что возможно, что одноцепочечный олигонуклеотид может образовывать внутреннюю двухцепочечную структуру. Тем не менее, данный олигонуклеотид в контексте настоящего изобретения все еще называется одноцепочечным олигонуклеотидом. Одноцепочечный олигонуклеотид имеет несколько преимуществ по сравнению двухцепочечным олигонуклеотидом siRNA: (i) ожидается, что его синтез является более простым, чем для двух комплементарных цепей siRNA; (ii) существует более широкий диапазон химических модификаций, способных повышать поглощение в клетках, улучшать (физиологическую) стабильность и снижать потенциальные генетические нежелательные эффекты; (iii) siRNA обладает потенциалом для неспецифичных эффектов (включая нецелевые гены) и патологически усиленным фармакодинамическим эффектом (например, возможен меньший контроль эффективности и селективности схемой лечения или дозой) и (iv) siRNA с меньшей вероятностью действуют в ядре и не могут быть направлены против интронов.

Предпочтительные первый и/или второй олигонуклеотиды соединения по настоящему изобретению имеют длину менее 38 нуклеотидов. Указанный первый и/или второй олигонуклеотид может иметь 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36 или 37 нуклеотидов. Такой олигонуклеотид также может быть идентифицирован как олигонуклеотид, имеющий от 8 до 37 нуклеотидов. Более предпочтительные первый и/или второй олигонуклеотиды соединения по настоящему изобретению имеют длину от 10 до 33 нуклеотидов. Еще более предпочтительные первый и/или второй олигонуклеотиды соединения по настоящему изобретению имеют длину 16, 17, 18, 19, 20, 21 или 22 нуклеотидов. Наиболее предпочтительные первый и/или второй олигонуклеотиды соединения по настоящему изобретению имеют длину 18, 19, 20, 21 или 22 нуклеотидов и могут быть идентифицированы как олигонуклеотид, имеющий от 18 до 22 нуклеотидов.

Таким образом, в данном аспекте настоящего изобретения представлено соединение, в котором указанный первый и/или второй антисмысловой олигонуклеотид содержит

по меньшей мере один 2'-замещенный мономер и необязательно фосфотиоатную связь остова, и/или

5-метилцитозиновое и/или 5-метилурациловое основание, и/или

по меньшей мере один мономер, содержащий модификацию каркаса бициклической нуклеиновой кислоты (BNA).

Соединение по настоящему изобретению предпочтительно предназначено для применения в качестве лекарственного препарата для лечения заболевания или патологического состояния посредством модуляции сплайсинга, например, посредством пропуска экзона или включения экзона, оба из которых являются формами переключения сплайсинга. Предпочтительно, экзон 51 пре-мРНК дистрофина пропускается. Более предпочтительно, экзон 51 человеческого пре-мРНК дистрофина пропускается. Предпочтительным заболеванием в данном контексте является мышечная дистрофия Дюшенна (DMD).

Предпочтительно, указанные мономеры представляют собой мономеры РНК или образованы из мономеров РНК. Таким образом, в предпочтительном соединении указанный первый и/или второй антисмысловой олигонуклеотид содержит

по меньшей мере один 2'-замещенный мономер, предпочтительно мономер РНК или 2'-O-замещенный мономер РНК и необязательно фосфотиоатную связь остова, и/или

5-метилцитозиновое и/или 5-метилурациловое основание, и/или

по меньшей мере один мономер, содержащий модификацию каркаса бициклической нуклеиновой кислоты (BNA).

Изложенное выше охватывает ((i)) олигонуклеотиды (т.е. первый и/или второй антисмысловой олигонуклеотид, присутствующий в соединении по настоящему изобретению), которые содержат по меньшей мере один 2'-замещенный мономер, предпочтительно 2'-замещенный мономер РНК, и не содержат фосфотиоатную связь остова. Такой олигонуклеотид может иметь основную цепь, который содержит только фосфодиэфирную связь остова. Подобным образом, охватываются олигонуклеотиды (т.е. первый и/или второй антисмысловой олигонуклеотид, присутствующий в соединении по настоящему изобретению), которые содержат по меньшей мере один 2'-замещенный мономер, предпочтительно 2'-замещенный мономер РНК, и одну или более фосфотиоатных связей остова. Также охватываются олигонуклеотиды (т.е. первый и/или второй антисмысловой олигонуклеотид, присутствующий в соединении по настоящему изобретению), которые не содержат других мономеров кроме 2'-замещенных мономеров РНК, и которые содержат только связи остова, которые представляют собой фосфотиоатных связей остова. Подобным образом, охватываются олигонуклеотиды (т.е. первый и/или второй антисмысловой олигонуклеотид, присутствующий в соединении по настоящему изобретению), которые не содержат других мономеров, кроме 2'-замещенных мономеров РНК, и которые содержат только связи остова, которые представляют собой фосфодиэфирные связи остова.

Таким образом, в более предпочтительном соединении указанный первый и/или второй антисмысловой олигонуклеотид содержит

только 2'-замещенные мономеры, предпочтительно мономеры РНК или 2'-O-замещенные мономеры РНК, соединенные посредством фосфотиоатных связей остова и/или посредством фосфотиоатных связей остова, и/или

5-метилцитозиновое и/или 5-метилурациловое основание, и/или

по меньшей мере один мономер, содержащий модификацию каркаса бициклической нуклеиновой кислоты (BNA).

Как известно специалисту, олигонуклеотид, такой как РНК олигонуклеотид, обычно состоит из повторяющихся мономеров. Такой мономер зачастую представляет собой нуклеотид или аналог нуклеотида. Наиболее распространенными встречающимися в природе нуклеотидами в РНК являются аденозина монофосфат, цитидина монофосфат, гуанозина монофосфат, тимидина монофосфат и уридина монофосфат. Они состоят из сахара пентозы - рибозы, 5'-соединенной фосфатной группы, которая соединена посредством сложного эфира, фосфорной кислоты и 1'-соединенного основания. Сахар соединяет основание и фосфат и, следовательно, зачастую называется каркасом нуклеотида. Следовательно, модификация в сахаре пентозе зачастую называют модификацией каркаса. Для серьезных модификаций, исходный сахар пентоза может быть замещен во всей своей полноте другим фрагментом, который подобным образом соединяет основание и фосфат. Следовательно, необходимо понимать, что несмотря на то, что сахар пентоза зачастую представляет собой каркас, каркас необязательно представляет собой сахар пентозу.

Основание, иногда называемое нуклеотидное основание, обычно представляет собой аденин, цитозин, гуанин, тимин или урацил, или их производные. Цитозин, тимин, и урацил являются пиримидиновыми основаниями, и обычно соединены с каркасом посредством из 3'-азота. Аденин и гуанин являются пуриновыми основаниями, и обычно соединены с каркасом посредством их 9'-азота.

Нуклеотид обычно соединен с соседними нуклеотидами посредством конденсации его 5'-фосфатного фрагмента с 3'-гидроксильным фрагментом соседнего мономера нуклеотида. Подобным образом, его 3'-гидроксильный фрагмент обычно соединен с 5'-фосфатом соседнего мономера нуклеотида. При этом образуются фосфодиэфирные связи. Фосфодиэфиры и каркас образуют изменяющийся сополимер. Основания привиты к данному сополимеру, а именно к фрагментам каркаса. Вследствие данной характеристики, изменяющийся сополимер, образованный соединенными мономерами олигонуклеотида, зачастую называется остовом олигонуклеотида. Поскольку фосфодиэфирные связи соединяют соседние мономеры между собой, их зачастую называют связями остова. Следует понимать, что если фосфатная группа модифицирована таким образом, что вместо этого она представляет собой аналогичный фрагмент, такой как фосфотиоат, такой фрагмент все еще называют связью остова мономера. Это называется модификацией связи оостова. Таким образом, в общих чертах, основа олигонуклеотида состоит из чередующихся каркасов и связей остова.

Предпочтительно, первый и/или второй антисмысловой олигонуклеотид соединения по настоящему изобретению содержит или состоит из 2'-замещенного фосфотиоатного мономера, предпочтительно 2'-замещенного мономера фосфотиоатной РНК, 2'-замещенного мономера фосфатной РНК или 2'-замещенных мономеров смешанной фосфатной/фосфотиоатной РНК. Такой олигонуклеотид содержит 2'-замещенный мономер РНК, соединенный посредством или связанный посредством фосфотиоатной или фосфатной связи остова, или их смесей, или состоит из 2'-замещенной фосфотиоатной РНК, 2'-замещенной фосфатной РНК или их смесей. Более предпочтительно, такой олигонуклеотид состоит из 2'-замещенных мономеров фосфотиоатной РНК, 2'-замещенных мономеров фосфатной РНК или их смеси. 2'-замещенная РНК предпочтительно представляет собой 2'-F, 2'-O-метил или 2'-O-(2-метоксиэтил). Фрагмент 2'-O-(2-метоксиэтил) зачастую называется 2'-MOE. Более предпочтительно, 2'-замещенный мономер РНК представляет собой мономер 2'-O-метил РНК. Такие химические структуры известны специалисту. В предпочтительном варианте осуществления данного аспекта представлено соединение по настоящему изобретению, в котором указанный 2'-замещенный мономер указанного первого и/или второго олигонуклеотида представляет собой 2'-замещенный мономер РНК, 2'-F мономер, 2'-амино мономер, 2'-O-замещенный мономер, 2'-O-метил мономер или 2'-O-(2-метоксиэтил) мономер, предпочтительно 2'-O-метил мономер. Предпочтительно, указанный 2'-замещенный мономер представляет собой 2'-замещенный мономер РНК, например, мономер 2'-O-метил РНК.

В данной заявке олигонуклеотид, содержащий 2'-O-метил мономер или мономер 2'-O-метил РНК и фосфотиоатные, фосфатные или смешанные фосфатные/фосфотиоатные связи остова, может быть замещен, соответственно, олигонуклеотидом, содержащим 2'-O-метилфосфотиоатную РНК, 2'-O-метилфосфатную РНК или 2'-O-метилфосфатную/фосфотиоатную РНК. В данной заявке олигонуклеотид, состоящий из мономеров 2'-O-метил РНК, связанных или соединенных посредством фосфотиоатных, фосфатных или смешанных фосфатных/фосфотиоатных связей остова, может быть замещен олигонуклеотидом, состоящим из 2'-O-метилфосфотиоатной РНК, 2'-O-метилфосфатной РНК или 2'-O-метилфосфатной/фосфотиоатной РНК.

Кроме того, первый и/или второй антисмысловой олигонуклеотид соединения по настоящему изобретению включает модификацию основания, которая увеличивает аффинность связывания с цепями-мишенями, увеличивает температуру плавления полученного дуплекса указанного олигонуклеотида с его мишенью и/или снижает иммуностимулирующие эффекты и/или увеличивает биологическую устойчивость, и/или улучшает биораспределение, и/или внутриклеточное распределение, и/или клеточное поглощение, и транспортировку. В более предпочтительном варианте осуществления указанный первый и/или второй олигонуклеотид содержит 5-метилпиримидин. 5-метилпиримидин выбран из 5-метилцитозина, и/или 5-метилурацила, и/или тимина, причем тимин идентичен 5-метилурацилу. «Тимин» и «5-метилурацил» могут применяться в данном документе взаимозаменяемо. Выражение «олигонуклеотид содержит 5-метилпиримидин» означает, что по меньшей мере одно из цитозиновых нуклеотидных оснований указанного олигонуклеотида было модифицировано посредством замещения водорода в 5-положении пиримидинового кольца метильной группой, т.е. 5-замещенный цитозин, и/или что по меньшей мере одно из урациловых нуклеотидных оснований указанного олигонуклеотида было модифицировано посредством замещения протона в 5-положении пиримидинового кольца метильной группой (т.е. 5-метилурацил). В контексте настоящего изобретения выражение «замещение азота метильной группой в положении 5 пиримидинового кольца» может быть заменено выражением «замещение пиримидина 5-метилпиримидином», при этом пиримидин относится только к урацилу, только цитозину или к обоим. Если указанный олигонуклеотид содержит 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или более цитозинов и/или урацилов, то по меньшей мере 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 9 или более цитозинов и/или урацилов были, соответственно, модифицированы подобным образом. Разумеется, вследствие этого настоящее изобретение можно применять в олигонуклеотидах, содержащих по меньшей мере один цитозин или урацил, соответственно, в их последовательности.

Предпочтительно, указанный первый и/или второй антисмысловой олигонуклеотид соединения по настоящему изобретению содержит по меньшей мере либо 5-метилцитозиновое основание, либо основание 5-метилурациловое основание. В предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения представлен указанный первый и/или второй антисмысловой олигонуклеотид указанного соединения, в котором все цитозиновые основания представляют собой 5-метилцитозиновые основания, и/или в котором урациловые основания представляют собой 5-метилурациловые основания. Это относится к олигонуклеотидам, которые содержат 5-метилцитозин, но не содержат незамещенный цитозин или урацил, к олигонуклеотидам, которые содержат 5-метилурацил, но не содержат незамещенный цитозин или урацил, и к олигонуклеотидам, которые содержат как 5-метилцитозин, так и 5-метилурацил, но не содержат незамещенный цитозин или урацил. Это также относится к олигонуклеотидам, которые содержат 5-метилцитозин, но не содержат незамещенный цитозин, и которые содержат незамещенный урацил, или к олигонуклеотидам, которые содержат 5-метилурацил, но не содержат незамещенный урацил, и которые содержат незамещенный цитозин. В еще предпочтительном варианте настоящего изобретения представлен указанный первый и/или второй антисмысловой олигонуклеотид, где все цитозиновые основания представляют собой 5-метилцитозин.

Если указанный первый олигонуклеотид соединения по настоящему изобретению представлен нуклеотидной последовательностью, содержащей или состоящей из последовательности, представленной любой из SEQ ID NO: 14-197, или ее фрагментом, как было указано ранее в данном документе, предпочтительно по меньшей мере один 5-метилцитозин и/или 5-метилурацил содержится в первом олигонуклеотиде, более предпочтительно все цитозиновые основания представляют собой 5-метилцитозин и/или все урациловые основания представляют собой 5-метилурацил. Таким образом, предпочтительные варианты указанного первого олигонуклеотида соединения по настоящему изобретению, которые содержат или состоят из последовательности, представленной любой из SEQ ID NO: 14-197, или ее фрагмента, как было указано ранее в данном документе, представляют собой такие, в которых

все цитозиновые основания представляют собой 5-метилцитозин, представленный одной из SEQ ID NO: 399-581, или в которых

все урациловые основания представляют собой 5-метилурацил, представленный одной из SEQ ID NO: 774-957, или в которых

все цитозиновые основания представляют собой 5-метилцитозин и все урациловые основания представляют собой 5-метилурацил, представленный одной из SEQ ID NO: 1156-1338.

Если указанный второй олигонуклеотид соединения по настоящему изобретению представлен нуклеотидной последовательностью, содержащей или состоящей из последовательности, представленной любой из SEQ ID NO: 198-398, или ее фрагментом, как было указано ранее в данном документе, предпочтительно по меньшей мере один 5-метилцитозин и/или 5-метилурацил содержится в указанном втором олигонуклеотиде, более предпочтительно все цитозиновые основания представляют собой 5-метилцитозин и/или все урациловые основания представляют собой 5-метилурацил. Таким образом, предпочтительные варианты указанного второго олигонуклеотида соединения по настоящему изобретению, которые содержат или состоят из последовательности, представленной любой из SEQ ID NO: 198-398, или ее фрагмента, как было указано ранее в данном документе, представляют собой такие, в которых

все цитозиновые основания представляют собой 5-метилцитозин, представленный одной из SEQ ID NO: 582-773, или в которых

все урациловые основания представляют собой 5-метилурацил, представленный одной из SEQ ID NO: 958-1155, или в которых

все цитозиновые основания представляют собой 5-метилцитозин и все урациловые основания представляют собой 5-метилурацил, представленный одной из SEQ ID NO: 1339-1528.

В более предпочтительном варианте осуществления соединение по настоящему изобретению предпочтительно предназначено для пропуска экзона 51 пре-мРНК дистрофина, и содержит или состоит из первого антисмыслового олигонуклеотида, представленного нуклеотидной последовательностью, содержащей или состоящей из SEQ ID NO: 399, 400, 401, 402 или 403, более предпочтительно SEQ ID NO: 399, 400, 401 или 402, еще более предпочтительно SEQ ID NO: 399 или 400, наиболее предпочтительно SEQ ID NO: 399, и второго антисмыслового олигонуклеотида, представленного нуклеотидной последовательностью, содержащей или состоящей из SEQ ID NO: 582, 583, 584 или 585, более предпочтительно SEQ ID NO: 582 или 583, еще более предпочтительно SEQ ID NO: 582, причем указанные первый и второй антисмысловые олигонуклеотиды соединены между собой посредством связывающего фрагмента (как описано в разделе под названием «Связывающий фрагмент»), предпочтительно указанный связывающий фрагмент представляет собой триэтиленгликоль (TEG) или гексаэтиленгликоль (HEG).

Указанная SEQ ID NO: 399 представлена последовательностью GGUAAGUUC*UGUC*C*AAGC*, указанная SEQ ID NO: 400 представлена последовательностью GUAAGUUC*UGUC*C*AAGC*C*, указанная SEQ ID NO: 401 представлена последовательностью AGUC*GGUAAGUUC*UGUC*C*, указанная SEQ ID NO: 402 представлена последовательностью C*UGUC*C*AAGC*C*C*GGUUGA, указанная SEQ ID NO: 403 представлена последовательностью UAAGUUC*UGUC*C*AAG, указанная SEQ ID NO: 582 представлена последовательностью UC*AAGGAAGAUGGC*AUUUC*U, указанная SEQ ID NO: 583 представлена последовательностью UC*AAGGAAGAUGGC*AUUUC*UAG, указанная SEQ ID NO: 584 представлена последовательностью UC*AAGGAAGAUGGC*AU и указанная SEQ ID NO: 585 представлена последовательностью GAAGAUGGC*AUUUC*U, где C* представляет собой 5-метилцитозин.

По всей данной заявке, если не указано иное, C* означает 5-метилцитозиновое основание.

В контексте настоящего изобретения положения указанного первого и второго антисмысловых олигонуклеотидов в соединении по настоящему изобретению являются взаимозаменяемыми. Таким образом, предпочтительное соединение по настоящему изобретению может быть представлено

SEQ ID NO: 16215 (GGUAAGUUC*UGUC*C*AAGC*n UC*AAGGAAGAUGGC*AUUUC*U) или SEQ ID NO: 16216 (UC*AAGGAAGAUGGC*AUUUC*UnGGUAAGUUC*UGUC*C*AAGC), причем связывающий фрагмент, представленный n, представляет собой линкер TEG, или

SEQ ID NO: 16217 (GGUAAGUUC*UGUC*C*AAGC*nUC*AAGGAAGAUGGC*AUUUC*U) или SEQ ID NO: 16218 (UC*AAGGAAGAUGGC*AUUUC*UnGGUAAGUUC*UGUC*C*AAGC*), причем связывающий фрагмент, представленный n, представляет собой линкер HEG, или

SEQ ID NO: 16219 (GGUAAGUUC*UGUC*C*AAGC*nUC*AAGGAAGAUGGC*AUUUC*UAG) или SEQ ID NO: 16220 (UC*AAGGAAGAUGGC*AUUUC*UAGnGGUAAGUUC*UGUC*C*AAGC*), причем связывающий фрагмент, представленный n, представляет собой линкер TEG, или

SEQ ID NO: 16221 (GGUAAGUUC*UGUC*C*AAGC*nUC*AAGGAAGAUGGC*AUUUC*UAG) или SEQ ID NO: 16222 (UC*AAGGAAGAUGGC*AUUUC*UAGnGGUAAGUUC*UGUC*C*AAGC*), причем связывающий фрагмент, представленный n, представляет собой линкер HEG, или

SEQ ID NO: 16223 (GUAAGUUC*UGUC*C*AAGC*C*nUC*AAGGAAGAUGGC*AUUUC*U) или SEQ ID NO: 16224 (UC*AAGGAAGAUGGC*AUUUC*UnGUAAGUUC*UGUC*C*AAGC*C*), причем связывающий фрагмент, представленный n, представляет собой линкер TEG, или

SEQ ID NO: 16225 (GUAAGUUC*UGUC*C*AAGC*C*nUC*AAGGAAGAUGGC*AUUUC*U) или SEQ ID NO: 16226 (UC*AAGGAAGAUGGC*AUUUC*UnGUAAGUUC*UGUC*C*AAGC*C*), причем связывающий фрагмент, представленный n, представляет собой линкер HEG, или

SEQ ID NO: 16227 (GUAAGUUC*UGUC*C*AAGC*C*nUC*AAGGAAGAUGGC*AUUUC*UAG) или SEQ ID NO: 16228 (UC*AAGGAAGAUGGC*AUUUC*UAGnGUAAGUUC*UGUC*C*AAGC*C*), причем связывающий фрагмент, представленный n, представляет собой линкер TEG, или

SEQ ID NO: 16229 (GUAAGUUC*UGUC*C*AAGC*C*nUC*AAGGAAGAUGGC*AUUUC*UAG) или SEQ ID NO: 16230 (UC*AAGGAAGAUGGC*AUUUC*UAGnGUAAGUUC*UGUC*C*AAGC*C*), причем связывающий фрагмент, представленный n, представляет собой линкер HEG, или

SEQ ID NO: 16231 (AGUC*GGUAAGUUC*UGUC*C*nUC*AAGGAAGAUGGC*AUUUC*U) или SEQ ID NO: 16232 (UC*AAGGAAGAUGGC*AUUUC*UnAGUC*GGUAAGUUC*UGUC*C*), причем связывающий фрагмент, представленный n, представляет собой линкер TEG, или

SEQ ID NO: 16233 (AGUC*GGUAAGUUC*UGUC*C*nUC*AAGGAAGAUGGC*AUUUC*U) или SEQ ID NO: 16234 (UC*AAGGAAGAUGGC*AUUUC*UnAGUC*GGUAAGUUC*UGUC*C*), причем связывающий фрагмент, представленный n, представляет собой линкер HEG, или

SEQ ID NO: 16235 (AGUC*GGUAAGUUC*UGUC*C*nUC*AAGGAAGAUGGC*AUUUC*UAG) или SEQ ID NO: 16236 (UC*AAGGAAGAUGGC*AUUUC*UAGnAGUC*GGUAAGUUC*UGUC*C*), причем связывающий фрагмент, представленный n, представляет собой линкер TEG, или

SEQ ID NO: 16237 (AGUC*GGUAAGUUC*UGUC*C*nUC*AAGGAAGAUGGC*AUUUC*UAG) или SEQ ID NO: 16238 (UC*AAGGAAGAUGGC*AUUUC*UAGnAGUC*GGUAAGUUC*UGUC*C*), причем связывающий фрагмент, представленный n, представляет собой линкер HEG, или

SEQ ID NO: 16239 (C*UGUC*C*AAGC*C*C*GGUUGAnUC*AAGGAAGAUGGC*AUUUC*U) или SEQ ID NO: 16240 (UC*AAGGAAGAUGGC*AUUUC*UnC*UGUC*C*AAGC*C*C*GGUUGA), причем связывающий фрагмент, представленный n, представляет собой линкер TEG, или

SEQ ID NO: 16241 (C*UGUC*C*AAGC*C*C*GGUUGAnUC*AAGGAAGAUGGC*AUUUC*U) или SEQ ID NO: 16242 (UC*AAGGAAGAUGGC*AUUUC*UnC*UGUC*C*AAGC*C*C*GGUUGA), причем связывающий фрагмент, представленный n, представляет собой линкер HEG, или

SEQ ID NO: 16243 (C*UGUC*C*AAGC*C*C*GGUUGAnUC*AAGGAAGAUGGC*AUUUC*UAG) или SEQ ID NO: 16244 (UC*AAGGAAGAUGGC*AUUUC*UAGnC*UGUC*C*AAGC*C*C*GGUUGA), причем связывающий фрагмент, представленный n, представляет собой линкер TEG, или

SEQ ID NO: 16245 (C*UGUC*C*AAGC*C*C*GGUUGAnUC*AAGGAAGAUGGC*AUUUC*UAG) или SEQ ID NO: 16246 (UC*AAGGAAGAUGGC*AUUUC*UAGnC*UGUC*C*AAGC*C*C*GGUUGA), причем связывающий фрагмент, представленный n, представляет собой линкер HEG, или

SEQ ID NO: 16247 (UAAGUUC*UGUC*C*AAGnUC*AAGGAAGAUGGC*AU) или SEQ ID NO: 16248 (UC*AAGGAAGAUGGC*AUnUAAGUUC*UGUC*C*AAG), причем связывающий фрагмент, представленный n, представляет собой линкер TEG, или

SEQ ID NO: 16249 (UAAGUUC*UGUC*C*AAGnUC*AAGGAAGAUGGC*AU) или SEQ ID NO: 16250 (UC*AAGGAAGAUGGC*AUnUAAGUUC*UGUC*C*AAG), причем связывающий фрагмент, представленный n, представляет собой линкер HEG, или

SEQ ID NO: 16251 (UAAGUUC*UGUC*C*AAGnGAAGAUGGC*AUUUC*U) или SEQ ID NO: 16252 (GAAGAUGGC*AUUUC*UnUAAGUUC*UGUC*C*AAG), причем связывающий фрагмент, представленный n, представляет собой линкер TEG, или

SEQ ID NO: 16253 (UAAGUUC*UGUC*C*AAGnGAAGAUGGC*AUUUC*U) или SEQ ID NO: 16254 (GAAGAUGGC*AUUUC*UnUAAGUUC*UGUC*C*AAG), причем связывающий фрагмент, представленный n, представляет собой линкер HEG,

где C* представляет собой 5-метилцитозин.

Более предпочтительное соединение по настоящему изобретению представлено одной из SEQ ID NO: 16215, 16216, 16219, 16220, 16223, 16224, 16227, 16228, 16231, 16232, 16235, 16236, 16239, 16240, 16243 и 16244 (линкер TEG) или любой из SEQ ID NO: 16217, 16218, 16221, 16222, 16225, 16226, 16229, 16230, 16233, 16234, 16237, 16238, 16241, 16242, 16245 и 16246 (линкер HEG).

Еще более предпочтительное соединение по настоящему изобретению представлено одной из SEQ ID NO: 16231, 16232, 16235, 16236, 16239, 16240, 16243 и 16244 (линкер TEG) или любой из SEQ ID NO: 16233, 16234, 16237, 16238, 16241, 16242, 16245 и 16246 (линкер HEG).

Еще более предпочтительное соединение по настоящему изобретению представлено одной из SEQ ID NO: 16215, 16216, 16219, 16220, 16223, 16224, 16227 и 16228 (линкер TEG) или любой из SEQ ID NO: 16217, 16218, 16221, 16222, 16225, 16226, 16229 и 16230 (линкер HEG).

Наиболее предпочтительное соединение по настоящему изобретению представлено SEQ ID NO: 16215 или 16216 (линкер TEG) или SEQ ID NO: 16217 или 16218 (линкер HEG).

Таким образом, в другом предпочтительном варианте осуществления соединение по настоящему изобретению предпочтительно предназначено для пропуска экзона 51 пре-мРНК дистрофина, и содержит или состоит из первого антисмыслового олигонуклеотида, представленного нуклеотидной последовательностью, содержащей или состоящей из SEQ ID NO: 774, 775, 776, 777 или 778, более предпочтительно SEQ ID NO: 774, 775, 776 или 777, еще более предпочтительно SEQ ID NO: 774 или 775, наиболее предпочтительно SEQ ID NO: 774, и второго антисмыслового олигонуклеотида, представленного нуклеотидной последовательностью, содержащей или состоящей из SEQ ID NO: 958, 959, 960 или 961, более предпочтительно SEQ ID NO: 958 или 959, еще более предпочтительно SEQ ID NO: 958, причем указанные первый и второй антисмысловые олигонуклеотиды соединены между собой посредством связывающего фрагмента (как описано в разделе под названием «связывающий фрагмент»), предпочтительно указанный связывающий фрагмент представляет собой триэтиленгликоль (TEG) или гексаэтиленгликоль (HEG).

Указанная SEQ ID NO: 774 представлена последовательностью GGTAAGTTCTGTCCAAGC, указанная SEQ ID NO: 775 представлена последовательностью GTAAGTTCTGTCCAAGCC, указанная SEQ ID NO: 776 представлена последовательностью AGTCGGTAAGTTCTGTCC, указанная SEQ ID NO: 777 представлена последовательностью CTGTCCAAGCCCGGTTGA, указанная SEQ ID NO: 778 представлена последовательностью TAAGTTCTGTCCAAG, указанная SEQ ID NO: 958 представлена последовательностью TCAAGGAAGATGGCATTTCT, указанная SEQ ID NO: 959 представлена последовательностью TCAAGGAAGATGGCATTTCTAG, указанная SEQ ID NO: 960 представлена последовательностью TCAAGGAAGATGGCAT и указанная SEQ ID NO: 961 представлена последовательностью GAAGATGGCATTTCT, где T представляет собой 5-метилурацил.

По всей данной заявке, если не указано иное, T и U* означают тиминовое или 5-метилурациловое основание. Специалисту в данной области техники очевидно, что тиминовое и 5-метилурациловое основания идентичны.

В контексте настоящего изобретения положения указанного первого и второго антисмысловых олигонуклеотидов в соединении по настоящему изобретению являются взаимозаменяемыми. Таким образом, предпочтительное соединение по настоящему изобретению может быть представлено

SEQ ID NO: 16255 (GGTAAGTTCTGTCCAAGCn TCAAGGAAGATGGCATTTCT) или SEQ ID NO: 16256 (TCAAGGAAGATGGCATTTCTnGGTAAGTTCTGTCCAAGC), причем связывающий фрагмент, представленный n, представляет собой линкер TEG, или

SEQ ID NO: 16257 (GGTAAGTTCTGTCCAAGCnTCAAGGAAGATGGCATTTCT) или SEQ ID NO: 16258 (TCAAGGAAGATGGCATTTCTnGGTAAGTTCTGTCCAAGC), причем связывающий фрагмент, представленный n, представляет собой линкер HEG, или

SEQ ID NO: 16259 (GGTAAGTTCTGTCCAAGCnTCAAGGAAGATGGCATTTCTAG) или SEQ ID NO: 16260 (TCAAGGAAGATGGCATTTCTAGnGGTAAGTTCTGTCCAAGC), причем связывающий фрагмент, представленный n, представляет собой линкер TEG, или

SEQ ID NO: 16261 (GGTAAGTTCTGTCCAAGCnTCAAGGAAGATGGCATTTCTAG) или SEQ ID NO: 16262 (TCAAGGAAGATGGCATTTCTAGnGGTAAGTTCTGTCCAAGC), причем связывающий фрагмент, представленный n, представляет собой линкер HEG, или

SEQ ID NO: 16263 (GTAAGTTCTGTCCAAGCCnTCAAGGAAGATGGCATTTCT) или SEQ ID NO: 16264 (TCAAGGAAGATGGCATTTCTnGTAAGTTCTGTCCAAGCC), причем связывающий фрагмент, представленный n, представляет собой линкер TEG, или

SEQ ID NO: 16265 (GTAAGTTCTGTCCAAGCCnTCAAGGAAGATGGCATTTCT) или SEQ ID NO: 16266 (TCAAGGAAGATGGCATTTCTnGTAAGTTCTGTCCAAGCC), причем связывающий фрагмент, представленный n, представляет собой линкер HEG, или

SEQ ID NO: 16267 (GTAAGTTCTGTCCAAGCCnTCAAGGAAGATGGCATTTCTAG) или SEQ ID NO: 16268 (TCAAGGAAGATGGCATTTCTAGnGTAAGTTCTGTCCAAGCC), причем связывающий фрагмент, представленный n, представляет собой линкер TEG, или

SEQ ID NO: 16269 (GTAAGTTCTGTCCAAGCCnTCAAGGAAGATGGCATTTCTAG) или SEQ ID NO: 16270 (TCAAGGAAGATGGCATTTCTAGnGTAAGTTCTGTCCAAGCC), причем связывающий фрагмент, представленный n, представляет собой линкер HEG, или

SEQ ID NO: 16271 (AGTCGGTAAGTTCTGTCCnTCAAGGAAGATGGCATTTCT) или SEQ ID NO: 16272 (TCAAGGAAGATGGCATTTCTnAGTCGGTAAGTTCTGTCC), причем связывающий фрагмент, представленный n, представляет собой линкер TEG, или

SEQ ID NO: 16273 (AGTCGGTAAGTTCTGTCCnTCAAGGAAGATGGCATTTCT) или SEQ ID NO: 16274 (TCAAGGAAGATGGCATTTCTnAGTCGGTAAGTTCTGTCC), причем связывающий фрагмент, представленный n, представляет собой линкер HEG, или

SEQ ID NO: 16275 (AGTCGGTAAGTTCTGTCCnTCAAGGAAGATGGCATTTCTAG) или SEQ ID NO: 16276 (TCAAGGAAGATGGCATTTCTAGnAGTCGGTAAGTTCTGTCC), причем связывающий фрагмент, представленный n, представляет собой линкер TEG, или

SEQ ID NO: 16277 (AGTCGGTAAGTTCTGTCCnTCAAGGAAGATGGCATTTCTAG) или SEQ ID NO: 16278 (TCAAGGAAGATGGCATTTCTAGnAGTCGGTAAGTTCTGTCC), причем связывающий фрагмент, представленный n, представляет собой линкер HEG, или

SEQ ID NO: 16279 (CTGTCCAAGCCCGGTTGAnTCAAGGAAGATGGCATTTCT) или SEQ ID NO: 16280 (TCAAGGAAGATGGCATTTCTnCTGTCCAAGCCCGGTTGA), причем связывающий фрагмент, представленный n, представляет собой линкер TEG, или

SEQ ID NO: 16281 (CTGTCCAAGCCCGGTTGAnTCAAGGAAGATGGCATTTCT) или SEQ ID NO: 16282 (TCAAGGAAGATGGCATTTCTnCTGTCCAAGCCCGGTTGA), причем связывающий фрагмент, представленный n, представляет собой линкер HEG, или

SEQ ID NO: 16283 (CTGTCCAAGCCCGGTTGAnTCAAGGAAGATGGCATTTCTAG) или SEQ ID NO: 16284 (TCAAGGAAGATGGCATTTCTAGnCTGTCCAAGCCCGGTTGA), причем связывающий фрагмент, представленный n, представляет собой линкер TEG, или

SEQ ID NO: 16285 (CTGTCCAAGCCCGGTTGAnTCAAGGAAGATGGCATTTCTAG) или SEQ ID NO: 16286 (TCAAGGAAGATGGCATTTCTAGnCTGTCCAAGCCCGGTTGA), причем связывающий фрагмент, представленный n, представляет собой линкер HEG, или

SEQ ID NO: 16287 (TAAGTTCTGTCCAAGnTCAAGGAAGATGGCAT) или SEQ ID NO: 16288 (TCAAGGAAGATGGCATnTAAGTTCTGTCCAAG), причем связывающий фрагмент, представленный n, представляет собой линкер TEG, или

SEQ ID NO: 16289 (TAAGTTCTGTCCAAGnTCAAGGAAGATGGCAT) или SEQ ID NO: 16290 (TCAAGGAAGATGGCATnTAAGTTCTGTCCAAG), причем связывающий фрагмент, представленный n, представляет собой линкер HEG, или

SEQ ID NO: 16291 (TAAGTTCTGTCCAAGnGAAGATGGCATTTCT) или SEQ ID NO: 16292 (GAAGATGGCATTTCTnTAAGTTCTGTCCAAG), причем связывающий фрагмент, представленный n, представляет собой линкер TEG, или

SEQ ID NO: 16293 (TAAGTTCTGTCCAAGnGAAGATGGCATTTCT) или SEQ ID NO: 16294 (GAAGATGGCATTTCTnTAAGTTCTGTCCAAG), причем связывающий фрагмент, представленный n, представляет собой линкер HEG,

где T представляет собой 5-метилурацил.

Более предпочтительное соединение по настоящему изобретению представлено одной из SEQ ID NO: 16255, 16256, 16259, 16260, 16263, 16264, 16267, 16268, 16271, 16272, 16275, 16276, 16279, 16280, 16283 и 16284 (линкер TEG) или любой из SEQ ID NO: 16257, 16258, 16261, 16262, 16265, 16266, 16269, 16270, 16273, 16274, 16277, 16278, 16281, 16282, 16285 и 16285 (линкер HEG).

Еще более предпочтительное соединение по настоящему изобретению представлено одной из SEQ ID NO: 16271, 16272, 16275, 16276, 16279, 16280, 16283 и 16284 (линкер TEG) или любой из SEQ ID NO: 16273, 16274, 16277, 16278, 16281, 16282, 16285 и 16285 (линкер HEG).

Еще более предпочтительное соединение по настоящему изобретению представлено одной из SEQ ID NO: 16255, 16256, 16259, 16260, 16263, 16264, 16267 и 16268 (линкер TEG) или любой из SEQ ID NO: 16257, 16258, 16261, 16262, 16265, 16266, 16269 и 16270 (линкер HEG).

Наиболее предпочтительное соединение по настоящему изобретению представлено SEQ ID NO: 16255 или 16256 (линкер TEG) или SEQ ID NO: 16257 или 16258 (линкер HEG).

Таким образом, в другом предпочтительном варианте осуществления соединение по настоящему изобретению предпочтительно предназначено для пропуска экзона 51 пре-мРНК дистрофина, и содержит или состоит из первого антисмыслового олигонуклеотида, представленного нуклеотидной последовательностью, содержащей или состоящей из SEQ ID NO: 1156, 1157, 1158, 1159 или 1160, более предпочтительно SEQ ID NO: 1156, 1157, 1158 или 1159, еще более предпочтительно SEQ ID NO: 1156 или 1157, наиболее предпочтительно SEQ ID NO: 1156, и второго антисмыслового олигонуклеотида, представленного нуклеотидной последовательностью, содержащей или состоящей из SEQ ID NO: 1339, 1340, 1341 или 1342, более предпочтительно SEQ ID NO: 1339 или 1340, еще более предпочтительно SEQ ID NO: 1339, причем указанные первый и второй антисмысловые олигонуклеотиды соединены между собой посредством связывающего фрагмента (как описано в разделе под названием «связывающий фрагмент»), предпочтительно указанный связывающий фрагмент представляет собой триэтиленгликоль (TEG) или гексаэтиленгликоль (HEG).

Указанная SEQ ID NO: 1156 представлена последовательностью GGTAAGTTC*TGTC*C*AAGC*, указанная SEQ ID NO: 1157 представлена последовательностью GTAAGTTC*TGTC*C*AAGC*C*, указанная SEQ ID NO: 1158 представлена последовательностью AGTC*GGTAAGTTC*TGTC*C*, указанная SEQ ID NO: 1159 представлена последовательностью C*TGTC*C*AAGC*C*C*GGTTGA, указанная SEQ ID NO: 1160 представлена последовательностью TAAGTTC*TGTC*C*AAG, указанная SEQ ID NO: 1339 представлена последовательностью TC*AAGGAAGATGGC*ATTTC*T, указанная SEQ ID NO: 1340 представлена последовательностью TC*AAGGAAGATGGC*ATTTC*TAG, указанная SEQ ID NO: 1341 представлена последовательностью TC*AAGGAAGATGGC*AT и указанная SEQ ID NO: 1342 представлена последовательностью GAAGATGGC*ATTTC*T, где C* представляет собой 5-метилцитозин и T представляет собой 5-метилурацил.

В контексте настоящего изобретения положения указанного первого и второго антисмысловых олигонуклеотидов в соединении по настоящему изобретению являются взаимозаменяемыми. Таким образом, предпочтительное соединение по настоящему изобретению может быть представлено

SEQ ID NO: 16295 (GGTAAGTTC*TGTC*C*AAGC*n TC*AAGGAAGATGGC*ATTTC*T) или SEQ ID NO: 16296 (TC*AAGGAAGATGGC*ATTTC*TnGGTAAGTTC*TGTC*C*AAGC*), причем связывающий фрагмент, представленный n, представляет собой линкер TEG, или

SEQ ID NO: 16297 (GGTAAGTTC*TGTC*C*AAGC*nTC*AAGGAAGATGGC*ATTTC*T) или SEQ ID NO: 16298 (TC*AAGGAAGATGGC*ATTTC*TnGGTAAGTTC*TGTC*C*AAGC*), причем связывающий фрагмент, представленный n, представляет собой линкер HEG, или

SEQ ID NO: 16299 (GGTAAGTTC*TGTC*C*AAGC*nTC*AAGGAAGATGGC*ATTTC*TAG) или SEQ ID NO: 16300 (TC*AAGGAAGATGGC*ATTTC*TAGnGGTAAGTTC*TGTC*C*AAGC*), причем связывающий фрагмент, представленный n, представляет собой линкер TEG, или

SEQ ID NO: 16301 (GGTAAGTTC*TGTC*C*AAGC*nTC*AAGGAAGATGGC*ATTTC*TAG) или SEQ ID NO: 16302 (TC*AAGGAAGATGGC*ATTTC*TAGnGGTAAGTTC*TGTC*C*AAGC*), причем связывающий фрагмент, представленный n, представляет собой линкер HEG, или

SEQ ID NO: 16303 (GTAAGTTC*TGTC*C*AAGC*C*nTC*AAGGAAGATGGC*ATTTC*T) или SEQ ID NO: 16304 (TC*AAGGAAGATGGC*ATTTC*TnGTAAGTTC*TGTC*C*AAGC*C*), причем связывающий фрагмент, представленный n, представляет собой линкер TEG, или

SEQ ID NO: 16305 (GTAAGTTC*TGTC*C*AAGC*C*nTC*AAGGAAGATGGC*ATTTC*T) или SEQ ID NO: 16306 (TC*AAGGAAGATGGC*ATTTC*TnGTAAGTTC*TGTC*C*AAGC*C*), причем связывающий фрагмент, представленный n, представляет собой линкер HEG, или

SEQ ID NO: 16307 (GTAAGTTC*TGTC*C*AAGC*C*nTC*AAGGAAGATGGC*ATTTC*TAG) или SEQ ID NO: 16308 (TC*AAGGAAGATGGC*ATTTC*TAGnGTAAGTTC*TGTC*C*AAGC*C*), причем связывающий фрагмент, представленный n, представляет собой линкер TEG, или

SEQ ID NO: 16309 (GTAAGTTC*TGTC*C*AAGC*C*nTC*AAGGAAGATGGC*ATTTC*TAG) или SEQ ID NO: 16310 (TC*AAGGAAGATGGC*ATTTC*TAGnGTAAGTTC*TGTC*C*AAGC*C*), причем связывающий фрагмент, представленный n, представляет собой линкер HEG, или

SEQ ID NO: 16311 (AGTC*GGTAAGTTC*TGTC*C*nTC*AAGGAAGATGGC*ATTTC*T) или SEQ ID NO: 16312 (TC*AAGGAAGATGGC*ATTTC*TnAGTC*GGTAAGTTC*TGTC*C*), причем связывающий фрагмент, представленный n, представляет собой линкер TEG, или

SEQ ID NO: 16313 (AGTC*GGTAAGTTC*TGTC*C*nTC*AAGGAAGATGGC*ATTTC*T) или SEQ ID NO: 16314 (TC*AAGGAAGATGGC*ATTTC*TnAGTC*GGTAAGTTC*TGTC*C*), причем связывающий фрагмент, представленный n, представляет собой линкер HEG, или

SEQ ID NO: 16315 (AGTC*GGTAAGTTC*TGTC*C*nTC*AAGGAAGATGGC*ATTTC*TAG) или SEQ ID NO: 16316 (TC*AAGGAAGATGGC*ATTTC*TAGnAGTC*GGTAAGTTC*TGTC*C*), причем связывающий фрагмент, представленный n, представляет собой линкер TEG, или

SEQ ID NO: 16317 (AGTC*GGTAAGTTC*TGTC*C*nTC*AAGGAAGATGGC*ATTTC*TAG) или SEQ ID NO: 16318 (TC*AAGGAAGATGGC*ATTTC*TAGnAGTC*GGTAAGTTC*TGTC*C*), причем связывающий фрагмент, представленный n, представляет собой линкер HEG, или

SEQ ID NO: 16319 (C*TGTC*C*AAGC*C*C*GGTTGAnTC*AAGGAAGATGGC*ATTTC*T) или SEQ ID NO: 16320 (TC*AAGGAAGATGGC*ATTTC*TnC*TGTC*C*AAGC*C*C*GGTTGA), причем связывающий фрагмент, представленный n, представляет собой линкер TEG, или

SEQ ID NO: 16321 (C*TGTC*C*AAGC*C*C*GGTTGAnTC*AAGGAAGATGGC*ATTTC*T) или SEQ ID NO: 16322 (TC*AAGGAAGATGGC*ATTTC*TnC*TGTC*C*AAGC*C*C*GGTTGA), причем связывающий фрагмент, представленный n, представляет собой линкер HEG, или

SEQ ID NO: 16323 (C*TGTC*C*AAGC*C*C*GGTTGAnTC*AAGGAAGATGGC*ATTTC*TAG) или SEQ ID NO: 16324 (TC*AAGGAAGATGGC*ATTTC*TAGnC*TGTC*C*AAGC*C*C*GGTTGA), причем связывающий фрагмент, представленный n, представляет собой линкер TEG, или

SEQ ID NO: 16325 (C*TGTC*C*AAGC*C*C*GGTTGAnTC*AAGGAAGATGGC*ATTTC*TAG) или SEQ ID NO: 16326 (TC*AAGGAAGATGGC*ATTTC*TAGnC*TGTC*C*AAGC*C*C*GGTTGA), причем связывающий фрагмент, представленный n, представляет собой линкер HEG, или

SEQ ID NO: 16327 (TAAGTTC*TGTC*C*AAGnTC*AAGGAAGATGGC*AT) или SEQ ID NO: 16328 (TC*AAGGAAGATGGC*ATnTAAGTTC*TGTC*C*AAG), причем связывающий фрагмент, представленный n, представляет собой линкер TEG, или

SEQ ID NO: 16329 (TAAGTTC*TGTC*C*AAGnTC*AAGGAAGATGGC*AT) или SEQ ID NO: 16330 (TC*AAGGAAGATGGC*ATnTAAGTTC*TGTC*C*AAG), причем связывающий фрагмент, представленный n, представляет собой линкер HEG, или

SEQ ID NO: 16331 (TAAGTTC*TGTC*C*AAGnGAAGATGGC*ATTTC*T) или SEQ ID NO: 16332 (GAAGATGGC*ATTTC*TnTAAGTTC*TGTC*C*AAG), причем связывающий фрагмент, представленный n, представляет собой линкер TEG, или

SEQ ID NO: 16333 (TAAGTTC*TGTC*C*AAGnGAAGATGGC*ATTTC*T) или SEQ ID NO: 16334 (GAAGATGGC*ATTTC*TnTAAGTTC*TGTC*C*AAG), причем связывающий фрагмент, представленный n, представляет собой линкер HEG,

где C* представляет собой 5-метилцитозин и T представляет собой 5-метилурацил.

Более предпочтительное соединение по настоящему изобретению представлено одной из SEQ ID NO: 16295, 16296, 16299, 16300, 16303, 16304, 16307, 16308, 16311, 16312, 16315, 16316, 16319, 16320, 16323 и 16324 (линкер TEG) или любой из SEQ ID NO: 16297, 16298, 16301, 16302, 16305, 16306, 16309, 16310, 16313, 16314, 16317, 16318, 16321, 16322, 16325 и 16326 (линкер HEG).

Еще более предпочтительное соединение по настоящему изобретению представлено одной из SEQ ID NO: 16311, 16312, 16315, 16316, 16319, 16320, 16323 и 16324 (линкер TEG) или любой из SEQ ID NO: 16313, 16314, 16317, 16318, 16321, 16322, 16325 и 16326 (линкер HEG).

Еще более предпочтительное соединение по настоящему изобретению представлено одной из SEQ ID NO: 16295, 16296, 16299, 16300, 16303, 16304, 16307 и 16308 (линкер TEG) или любой из SEQ ID NO: 16297, 16298, 16301, 16302, 16305, 16306, 16309, 16310 (линкер HEG).

Наиболее предпочтительное соединение по настоящему изобретению представлено SEQ ID NO: 16295 или 16296 (линкер TEG) или SEQ ID NO: 16297 или 16298 (линкер HEG).

В одном варианте осуществления указанное соединение по настоящему изобретению содержит или состоит из первого и второго антисмысловых олигонуклеотидов, соединенных между собой посредством связывающего фрагмента, причем указанный первый и/или указанный второй антисмысловой олигонуклеотид предпочтительно содержит модификацию каркаса, которая повышает аффинность связывания с целевыми цепями, повышает температуру плавления полученного дуплекса указанного первого и/или второго олигонуклеотида с его мишенью, и/или снижает иммуностимулирующие эффекты, и/или повышает биологическую стабильность, и/или улучшает биораспределение и/или распределение внутри ткани, и/или клеточное поглощение и транспортировку. Настоящее изобретение охватывает такие модификации каркаса, которые обеспечивают мономер бициклической нуклеиновой кислоты (BNA). Бициклический каркас обычно представляет собой образованный из пентозы каркас, который был химически изменен для конформационного ограничения каркаса, что приводит к улучшенным эффектам, описанным выше. Примеры бициклических каркасов представляют собой каркасы, где первый цикл, такой как цикл пентозы, образует спиран с дополнительным циклическим фрагментом, так что оба цикла имеют общий атом, каркасы, в которых первый цикл, такой как цикл пентозы конденсирован с дополнительным циклическим фрагментом, так что оба цикла имеют два смежных атома, и каркасы, в которых первый цикл, например, цикл пентозы, образует связанное соединение посредством фрагмента, который соединен с первым циклическим фрагментом в двух несмежных атомах. Такие несмежные атомы называются атомами в голове моста. Связанные соединения содержат несколько циклов, каждый из которых перекрываются по меньшей мере тремя атомами. Соединение с двумя циклами, в котором такие циклы перекрываются двумя атомами, представляет собой вместо этого конденсированное соединение. В некоторых связанных соединениях наименьшая связь между двумя атомами в голове моста называется связывающим фрагментом или мостиковым фрагментом. В других связанных соединениях, если один цикл представляет собой характеристический цикл, например, цикл пентозы нуклеотида, фрагмент, который не является составляющим такого характеристического цикла, называется связывающим фрагментом. Отсюда следует, что номенклатура связанных бициклических соединений зависит от контекста.

Спирановое соединение Конденсированное соединение Связанное соединение

Бициклические соединения могут содержать дополнительные циклы. Бициклическое соединение является по меньшей мере бициклическим, и указанные два цикла составляют спиран, конденсированную систему или связанную систему, или их комбинацию. Настоящее изобретение не охватывает модификации каркаса, в которых два независимых цикла соединены посредством нециклического линкера с образованием спирана, конденсированного соединения или связанного соединения. Предпочтительные бициклические соединения представляют собой конденсированные и связанные соединения. В более предпочтительных вариантах осуществления мономер бициклической нуклеиновой кислоты (BNA) представляет собой мономер связанной нуклеиновой кислоты. Как описано в данном документе мономер как «связанной», так и «бициклической» нуклеиновой кислоты относится к нуклеотиду с модифицированным каркасом, который увеличивает температуру плавления олигонуклеотида против мишени РНК, по сравнению с контрольным олигонуклеотидом, содержащим отличный от BNA нуклеотид.

В предпочтительном варианте осуществления представлено соединение по настоящему изобретению, причем каждое возникновение указанной модификации каркаса бициклической нуклеиновой кислоты (BNA) в указанном первом и/или втором антисмысловом олигонуклеотиде обеспечивает мономер, который независимо выбран из группы, включающей мономер на основе конформационно ограниченного нуклеотида (CRN), мономер закрытой нуклеиновой кислоты (LNA), мономер ксило-LNA, мономер α-LNA, мономер α-L-LNA, мономер β-D-LNA, мономер 2'-амино-LNA, мономер 2'-(алкиламино)-LNA, мономер 2'-(ациламино)-LNA, 2'-N-замещенный-2'-амино-LNA мономер, мономер 2'-тио-LNA, мономер (2'-O,4'-C) конформационно-ограниченной этил (cEt) BNA, мономер (2'-O,4'-C) конформационно-ограниченной метоксиэтил (cMOE) BNA, мономер 2',4'-BNA^NC(N-H), мономер 2',4'-BNA^NC(N-Me), мономер 2',4'-BNA^NC(N-Bn), мономер соединенной этиленом нуклеиновой кислоты (ENA), мономер карбо-LNA (cLNA), мономер 3,4-дигидро-2H-пиран-нуклеиновой кислоты (DpNA), мономер на основе 2'-C-соединенного бициклического нуклеотида (CBBN), мономер гетероциклически соединенной BNA, мономер амид-соединенной BNA, мономер соединенной мочевиной BNA, мономер соединенной сульфонамидом BNA, мономер на основе бициклического карбоциклического нуклеотида, мономер TriNA, мономер α-L-TriNA, мономер бицикло-ДНК (bcDNA), мономер F-bcDNA, мономер трицикло-ДНК (tcDNA), мономер F-tcDNA, мономер на основе оксетанового нуклеотида, мономер на основе закрытого PMO, образованный из 2'-амино-LNA и их производные. Также настоящее изобретение охватывает включение более одной отличной модификации каркаса BNA в указанном олигонуклеотиде. Более предпочтительно, каждое возникновение указанной модификации каркаса BNA обеспечивает мономер, который независимо выбран из группы, включающей мономер на основе конформационно ограниченного нуклеотида (CRN), мономер закрытой нуклеиновой кислоты (LNA), мономер ксило-LNA, мономер α-L-LNA, мономер β-D-LNA, мономер 2'-амино-LNA, мономер 2'-(алкиламино)-LNA, мономер 2'-(ациламино)-LNA, мономер 2'-N-замещенный-2'-амино-LNA, мономер (2'-O,4'-C) конформационно-ограниченной этил (cEt) LNA, мономер (2'-O,4'-C) конформационно-ограниченной метоксиэтил (cMOE) BNA, мономер 2',4'-BNA^NC(N-H), мономер 2',4'-BNA^NC(N-Me), мономер связанной этиленом нуклеиновой кислоты (ENA), мономер на основе 2'-C-связанного бициклического нуклеотида (CBBN), и его производных. Еще более предпочтительно, каждое возникновение указанной модификации каркаса BNA обеспечивает мономер закрытой нуклеиновой кислоты (LNA).

Структурные примеры мономеров, содержащих данные модификации каркаса BNA, показаны ниже, где B представляет собой основание, определенное ранее в данном документе, X представляет собой переменную, X₂ представляет собой гидроксильный фрагмент или другое 2'-замещение, определенное ранее в данном документе, и L представляет собой связь остова, определенную ранее в данном документе. В литературе название таких модификаций зачастую являются произвольными и не следуют единому соглашению - в данной заявке названия, представленные ниже, предназначены для обозначения структур, представленных ниже. Для сравнения вначале показан циклический каркас обычного мономера РНК. В структурах, показанных ниже, мономеры обычно обозначены как 3'-концевые мономеры. Если хиральность не указана, делается ссылка на каждый энантиомер. Мономер, образованный в результате появления модификации каркаса BNA в указанном первом и/или втором антисмысловом олигонуклеотиде соединения по настоящему изобретению, не ограничивается данным типом мономеров, который предоставлен для иллюстративных целей. Гетероатомы, содержащиеся в циклическом фрагменте, могут быть замещены другими гетероатомами.

РНК CRN LNA Ксило-LNA α-LNA α-L-LNA β-D-LNA 2'-амино-LNA 2'-(алкиламино)-LNA 2'-(ациламино)-LNA 2'-N-замещенный-2'-амино-LNA 2'-тио-LNA cEt BNA cMOE BNA cLNA Связанная амидо LNA 2',4'-BNA^NC(N-H) 2',4'-BNA^NC(N-Me) 2',4'-BNA^NC(N-Bn) Оксо-CBBN ENA DpNA Связанная сульфонамидом BNA Связанная мочевиной BNA Бициклический карбоциклический нуклеотид TriNA α-L-TriNA bcDNA tcDNA F-bcDNA F-tcDNA гетероциклически-связанная BNA (могут существовать изменения в триазольном фрагменте) закрытый PMO, образованный из 2'-амино-LNA (в данном случае, остов удлиняется через N вместо O3')

Далее следует неисчерпывающий обзор литературных источников касаемо модификаций каркаса BNA, приведенных выше: cEt (2'-O,4'-C конформационно-ограниченная этил) LNA (doi: 10.1021/ja710342q), cMOE (2'-O,4'-C конформационно-ограниченная метоксиэтил) LNA (Seth et al., J. Org. Chem. 2010, 75, 1569-1581), 2',4'-BNA^NC(N-H), 2',4'-BNA^NC(N-Me), связанная этиленом нуклеиновая кислота (ENA) (doi: 10.1093/nass/1.1.241), карбо-LNA (cLNA) (doi: 10.1021/jo100170g), DpNA (Osawa et al., J. Org. Chem., 2015, 80 (21), pp 10474-10481), 2'-C-связанный бициклический нуклеотид (CBBN, как, например, в WO 2014/145356 (MiRagen Therapeutics)), гетероциклически-связанная LNA (как, например, в WO 2014/126229 (Mitsuoka Y et al.)), связанная амидо LNA (как, например, в Yamamoto et al. Org. Biomol. Chem. 2015, 13, 3757), связанная мочевиной LNA (как, например, в Nishida et al. Chem. Commun. 2010, 46, 5283), связанная сульфонамидом LNA (как, например, в WO 2014/112463 (Obika S et al.)), бициклические карбоциклические нуклеозиды (как, например, в WO 2015/142910 (Ionis Pharmaceuticals)), TriNA (Hanessian et al., J. Org. Chem., 2013, 78 (18), pp 9064-9075), α-L-TriNA, бицикло-ДНК (bcDNA) (Bolli et al., Chem Biol. 1996 Mar;3(3):197-206), F-bcDNA (DOI: 10.1021/jo402690j), трицикло-ДНК (tcDNA) (Murray et al., Nucl. Acids Res., 2012, Vol. 40, No. 13 6135-6143), F-tcDNA (doi: 10.1021/acs.joc.5b00184), мономер на основе оксетанового нуклеотида (Nucleic Acids Res. 2004, 32, 5791-5799). Для тех документов, которые не упомянуты выше, сделана ссылка на WO 2011/097641 (ISIS/Ionis Pharmaceuticals) и WO2016/017422 (Университет Осаки), которые полностью включены посредством ссылки.

Предпочтительно, первый и/или второй олигонуклеотид соединения по настоящему изобретению содержит мономеры РНК, поскольку дуплексы РНК/РНК являются чрезвычайно стабильными. Предпочтительно, чтобы РНК олигонуклеотид содержал модификацию, придающую РНК дополнительные свойства, например, устойчивость к эндонуклеазам, экзонуклеазам и РНКазе Н, дополнительную силу гибридизации, повышенную стабильность (например, в биологических жидкостях организма), повышенную или пониженную гибкость, повышенную активность, пониженную токсичность, повышенную внутриклеточную транспортировку, повышенное клеточное поглощение, тканеспецифичность и т.д. Кроме того, мРНК в комплексе с указанным олигонуклеотидом практически не подвержена расщеплению РНКазой Н. Предпочтительные модификации были указаны выше.

Соответственно, соединение по настоящему изобретению содержит или состоит из первого и второго антисмысловых олигонуклеотидов, причем указанный первый и/или указанный второй антисмысловой олигонуклеотид содержит мономер 2'-O-метилфосфотиоатную РНК или состоит из мономера 2'-O-метилфосфотиоатной РНК, предпочтительно указанный первый и/или второй AON дополнительно содержит BNA, необязательно присутствует 5-метилпиримидиновое основание (т.е. 5-метилцитозин и/или 5-метилурацил). Наиболее предпочтительно, указанный первый и/или второй олигонуклеотид состоит из мономеров 2'-O-метил РНК, соединенных посредством фосфотиоатных или фосфатных связей остова и все его цитозины и/или все его урацилы независимо были замещены 5-метилцитозином и/или 5-метилурацилом, соответственно, и по меньшей мере один 2'-O-метил каркас был замещен BNA, предпочтительно 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 или 9 мономеров замещены BNA, более предпочтительно 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 или 9 мономеров замещены модификацией каркаса связанной нуклеиновой кислоты, еще более предпочтительно 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 или 9 мономеров замещены LNA. Предпочтительно указанные первый и второй антисмысловые олигонуклеотиды соединения по настоящему изобретению отличаются, более предпочтительно нуклеотидные последовательности указанных первого и второго антисмысловых олигонуклеотидов представлены разными SEQ ID NO.

В предпочтительных вариантах данного аспекта настоящего изобретения (т.е. химические модификации первого и/или второго антисмыслового олигонуклеотида соединения) представлено соединение по настоящему изобретению, причем первый и/или второй олигонуклеотид указанного соединения содержит или состоит из 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 или 9 мономеров, которые содержат модификацию каркаса бициклической нуклеиновой кислоты (BNA), предпочтительно модификацию каркаса связанной нуклеиновой кислоты, более предпочтительно модификацию LNA, и причем предпочтительно указанный первый и/или второй олигонуклеотид содержит или состоит из 2'-O-замещенных мономеров РНК, соединенных фосфотиоатными связями остова, и/или в которых все цитозиновые основания представляют собой 5-метилцитозин, и/или в которых все урациловые основания представляют собой 5-метилурациловые основания в указанном первом и/или втором олигонуклеотиде, как ранее описано в данном документе.

В данных вариантах осуществления предпочтительно, чтобы по меньшей мере одна модификация каркаса BNA была включена в концевой мономер указанного первого и/или второго олигонуклеотида соединения по настоящему изобретению, предпочтительно в 5'-концевой мономер. Наиболее предпочтительно, чтобы оба концевых мономера содержали каркас BNA. Таким образом, в более предпочтительном варианте осуществления данного аспекта представлен первый и/или второй олигонуклеотид соединения по настоящему изобретению, причем по меньшей мере одна модификация каркаса бициклической нуклеиновой кислоты (BNA) содержалась в концевом мономере указанного первого и/или второго олигонуклеотида, предпочтительно в 5'-концевом мономере указанного первого и/или второго олигонуклеотида, более предпочтительно в обоих концевых мономерах указанного первого и/или второго олигонуклеотида. Другие предпочтительные варианты осуществления охватывают то, что каждый концевой мономер и его соседний мономер составляют каркас BNA. В таком случае каждый из первых двух мономеров и/или последних двух мономеров первого и/или второго олигонуклеотида соединения по настоящему изобретению составляют каркас BNA. Это можно комбинировать любым способом, таким образом что, например, каждый из первых и последних двух мономеров или первых и последних двух мономеров составляют каркас BNA. Если первый и/или второй олигонуклеотид соединения по настоящему изобретению содержит концевой мономер, содержащий каркас BNA, дополнительные мономеры с каркасом BNA предпочтительно находятся либо на другом конце, либо смежно с концевыми мономерами с каркасом BNA.

В предпочтительном варианте осуществления данного аспекта настоящего изобретения (т.е. химические модификации первого и/или второго антисмыслового олигонуклеотида соединения) представлено соединение по настоящему изобретению, причем первый и/или второй олигонуклеотид указанного соединения содержит или состоит из модификаций BNA, выбранных из списка, включающего

- одну модификацию каркаса BNA в мономере на 5'-конце,

- одну модификацию каркаса BNA в мономере на 3'-конце,

- две модификации каркаса BNA, причем одна находится в мономере на 5'-конце, и вторая находится в мономере на 3'-конце,

- две модификации каркаса BNA, по одной в каждом из двух мономеров, ближайших к 5'-концу,

- две модификации каркаса BNA, по одной в каждом из двух мономеров, ближайших к 3'-концу,

- четыре модификации каркаса BNA, по одной в каждом из двух мономеров, ближайших к 5'-концу, и по одной в каждом из двух мономеров, ближайших к 3'-концу;

необязательно присутствуют 1, 2, 3, 4 или 5 дополнительных модификаций каркаса BNA, и предпочтительно в которых указанный первый и/или второй олигонуклеотид соединения содержит или состоит из 2'-O-замещенных мономеров РНК, соединенных посредством фосфотиоатных связей остова и/или в которых все цитозиновые основания представляют собой 5-метилцитозин и/или, в которых все урациловые основания представляют собой 5-метилурациловые основания в указанном первом и/или втором олигонуклеотиде, описанном ранее в данном документе.

Если первый олигонуклеотид и/или второй олигонуклеотид соединения по настоящему изобретению содержит или состоит из последовательности, представленной любой из SEQ ID NO: 14-197 (первый олигонуклеотид) или любой из SEQ ID NO: 198-398 (второй олигонуклеотид), предпочтительно 5'-концевой мономер указанного первого и/или второго олигонуклеотида содержит модификацию каркаса BNA и необязательно 1, 2, 3, 4 или 5 дополнительных мономеров содержат модификацию каркаса BNA, более предпочтительно только 5'-концевой мономер указанного первого и/или второго олигонуклеотида содержит модификацию каркаса BNA, и предпочтительно где указанный первый и/или второй олигонуклеотид содержит или состоит из 2'-O-замещенных мономеров РНК, соединенных посредством фосфотиоатных связей остова и/или где все цитозиновые основания представляют собой 5-метилцитозин и/или где все урациловые основания представляют собой 5-метилурациловые основания в указанном первом и/или втором олигонуклеотиде, как было указано ранее в данном документе. Таким образом, предпочтительные варианты указанного первого и/или второго олигонуклеотида соединения по настоящему изобретению содержат или состоят из последовательности, представленной любой из SEQ ID NO: 14-197 (первый олигонуклеотид) или SEQ ID NO: 198-398 (второй олигонуклеотид), или ее фрагмента, как было указано ранее в данном документе, представлены любой из SEQ ID NO: 1529-1712, предпочтительно SEQ ID NO: 1529, 1530, 1531, 1532 или 1533, более предпочтительно SEQ ID NO: 1529, 1530, 1531 или 1532, еще более предпочтительно SEQ ID NO: 1529 или 1530, наиболее предпочтительно SEQ ID NO: 1529 (первый олигонуклеотид); или любой из SEQ ID NO: 1713-1913, предпочтительно SEQ ID NO: 1713, 1714, 1715 или 1716, более предпочтительно SEQ ID NO: 1713 или 1714, еще более предпочтительно SEQ ID NO: 1713 (второй олигонуклеотид). Более предпочтительные варианты представляют собой такие, в которых

все цитозиновые основания представляют собой 5-метилцитозин, представленный одной из SEQ ID NO: 3839-4021, предпочтительно SEQ ID NO: 3839, 3840, 3841, 3842 или 3843, более предпочтительно SEQ ID NO: 3839, 3840, 3841 или 3842, еще более предпочтительно SEQ ID NO: 3839 или 3840, наиболее предпочтительно SEQ ID NO: 3839 (первый олигонуклеотид) или любой из SEQ ID NO: 4022-4213, предпочтительно SEQ ID NO: 4022, 4023 4024 или 4025, более предпочтительно SEQ ID NO: 4022 или 4023, еще более предпочтительно SEQ ID NO: 4022 (второй олигонуклеотид), или в которых

все урациловые основания представляют собой 5-метилурацил, представленный одной из SEQ ID NO: 6089-6272, предпочтительно SEQ ID NO: 6089, 6090, 6091, 6092 или 6093, более предпочтительно SEQ ID NO: 6089, 6090, 6091 или 6092, еще более предпочтительно SEQ ID NO: 6089 или 6090, наиболее предпочтительно SEQ ID NO: 6089 (первый олигонуклеотид) или любой из SEQ ID NO: 6273-6470, предпочтительно SEQ ID NO: 6273, 6274, 6275 или 6276, более предпочтительно SEQ ID NO: 6273 или 6274, еще более предпочтительно SEQ ID NO: 6273 (второй олигонуклеотид), или в которых

все цитозиновые основания представляют собой 5-метилцитозин и все урациловые основания представляют собой 5-метилурацил представленный одной из SEQ ID NO: 8381-8563, предпочтительно SEQ ID NO: 8381, 8382, 8383, 8384 или 8385, более предпочтительно SEQ ID NO: 8381, 8382, 8383 или 8384, еще более предпочтительно SEQ ID NO: 8381 или 8382, наиболее предпочтительно SEQ ID NO: 8381 (первый олигонуклеотид) или любой из SEQ ID NO: 8564-8753, предпочтительно SEQ ID NO: 8564, 8565, 8566 или 8567, более предпочтительно SEQ ID NO: 8564 или 8565, еще более предпочтительно SEQ ID NO: 8564 (второй олигонуклеотид).

Если первый олигонуклеотид и/или второй олигонуклеотид соединения по настоящему изобретению содержит или состоит из последовательности, представленной любой из SEQ ID NO: 14-197 (первый олигонуклеотид) или любой из SEQ ID NO: 198-398 (второй олигонуклеотид), предпочтительно 3'-концевой мономер указанного первого и/или второго олигонуклеотида содержит модификацию каркаса BNA и необязательно 1, 2, 3, 4 или 5 дополнительных мономеров содержат модификацию каркаса BNA, более предпочтительно только 3'-концевой мономер указанного первого и/или второго олигонуклеотида содержит модификацию каркаса BNA, и предпочтительно где указанный первый и/или второй олигонуклеотид содержит или состоит из 2'-O-замещенных мономеров РНК, соединенных посредством фосфотиоатных связей остова и/или где все цитозиновые основания представляют собой 5-метилцитозин и/или где все урациловые основания представляют собой 5-метилурациловые основания в указанном первом и/или втором олигонуклеотиде, как было указано ранее в данном документе. Таким образом, предпочтительные варианты указанного первого и/или второго олигонуклеотида соединения содержат или состоят из последовательности, представленной любой из SEQ ID NO: 14-197 (первый олигонуклеотид) или SEQ ID NO: 198-398 (второй олигонуклеотид), или ее фрагмента, как было указано ранее в данном документе, представлены любой из SEQ ID NO: 1914-2097, предпочтительно SEQ ID NO: 1914, 1915, 1916, 1917 или 1918, более предпочтительно SEQ ID NO: 1914, 1915, 1916 или 1917, еще более предпочтительно SEQ ID NO: 1914 или 1915, наиболее предпочтительно SEQ ID NO: 1914 (первый олигонуклеотид); или любой из SEQ ID NO: 2098-2298, предпочтительно SEQ ID NO: 2098, 2099, 2100 или 2101, более предпочтительно SEQ ID NO: 2098 или 2099, еще более предпочтительно SEQ ID NO: 2098 (второй олигонуклеотид). Более предпочтительные варианты представляют собой такие, в которых

все цитозиновые основания представляют собой 5-метилцитозин, представленный одной из SEQ ID NO: 4214-4396, предпочтительно SEQ ID NO: 4214, 4215, 4216, 4217 или 4218, более предпочтительно SEQ ID NO: 4214, 4215, 4216 или 4217, еще более предпочтительно SEQ ID NO: 4214 или 4215, наиболее предпочтительно SEQ ID NO: 4214 (первый олигонуклеотид) или любой из SEQ ID NO: 4397-4588, предпочтительно SEQ ID NO: 4397, 4398, 4399 или 4400, более предпочтительно SEQ ID NO: 4397 или 4398, еще более предпочтительно SEQ ID NO: 4397 (второй олигонуклеотид), или в которых

все урациловые основания представляют собой 5-метилурацил, представленный одной из SEQ ID NO: 6471-6654, предпочтительно SEQ ID NO: 6471, 6472, 6473, 6474 или 6475, более предпочтительно SEQ ID NO: 6471, 6472, 6473 или 6474, еще более предпочтительно SEQ ID NO: 6471 или 6472, наиболее предпочтительно SEQ ID NO: 6471 (первый олигонуклеотид) или любой из SEQ ID NO: 6655-6852, предпочтительно SEQ ID NO: 6655, 6656, 6657 или 6658, более предпочтительно SEQ ID NO: 6655 или 6656, еще более предпочтительно SEQ ID NO: 6655 (второй олигонуклеотид), или в которых

все цитозиновые основания представляют собой 5-метилцитозин и все урациловые основания представляют собой 5-метилурацил представленный одной из SEQ ID NO: 8754-8936, предпочтительно SEQ ID NO: 8754, 8755, 8756, 8757 или 8758, более предпочтительно SEQ ID NO: 8754, 8755, 8756 или 8757, еще более предпочтительно SEQ ID NO: 8754 или 8755, наиболее предпочтительно SEQ ID NO: 8754 (первый олигонуклеотид) или любой из SEQ ID NO: 8937-9126, предпочтительно SEQ ID NO: 8937, 8938, 8939 или 8940, более предпочтительно SEQ ID NO: 8937 или 8938, еще более предпочтительно SEQ ID NO: 8937 (второй олигонуклеотид).

Если первый олигонуклеотид и/или второй олигонуклеотид соединения по настоящему изобретению содержит или состоит из последовательности, представленной любой из SEQ ID NO: 14-197 (первый олигонуклеотид) или любой из SEQ ID NO: 198-398 (второй олигонуклеотид), предпочтительно 5'-концевой мономер и 3'-концевой мономер указанного первого и/или второго олигонуклеотида содержит модификацию каркаса BNA и необязательно 1, 2, 3, 4 или 5 дополнительных мономеров содержат модификацию каркаса BNA, более предпочтительно только 5'-концевой мономер и 3'-концевой мономер указанного первого и/или второго олигонуклеотида содержит модификацию каркаса BNA, и предпочтительно где указанный первый и/или второй олигонуклеотид содержит или состоит из 2'-O-замещенных мономеров РНК, соединенных посредством фосфотиоатных связей остова и/или где все цитозиновые основания представляют собой 5-метилцитозин и/или где все урациловые основания представляют собой 5-метилурациловые основания в указанном первом и/или втором олигонуклеотиде, как было указано ранее в данном документе. Таким образом, предпочтительные варианты указанного первого и/или второго олигонуклеотида соединения содержат или состоят из последовательности, представленной любой из SEQ ID NO: 14-197 (первый олигонуклеотид) или SEQ ID NO: 198-398 (второй олигонуклеотид), или ее фрагмента, как было указано ранее в данном документе, представлены любой из SEQ ID NO: 2299-2482, предпочтительно SEQ ID NO: 2299, 2300, 2301, 2302 или 2303, более предпочтительно SEQ ID NO: 2299, 2300, 2301 или 2302, еще более предпочтительно SEQ ID NO: 2299 или 2300, наиболее предпочтительно SEQ ID NO: 2299 (первый олигонуклеотид); или любой из SEQ ID NO: 2483-2683, предпочтительно SEQ ID NO: 2483, 2484, 2485 или 2486, более предпочтительно SEQ ID NO: 2483 или 2484, еще более предпочтительно SEQ ID NO: 2483 (второй олигонуклеотид). Более предпочтительные варианты представляют собой такие, в которых

все цитозиновые основания представляют собой 5-метилцитозин, представленный одной из SEQ ID NO: 4589-4771, предпочтительно SEQ ID NO: 4589, 4590, 4591, 4592 или 4593, более предпочтительно SEQ ID NO: 4589, 4590, 4591 или 4592, еще более предпочтительно SEQ ID NO: 4589 или 4590, наиболее предпочтительно SEQ ID NO: 4589 (первый олигонуклеотид) или любой из SEQ ID NO: 4772-4963, предпочтительно SEQ ID NO: 4772, 4773, 4774 или 4775, более предпочтительно SEQ ID NO: 4772 или 4773, еще более предпочтительно SEQ ID NO: 4772 (второй олигонуклеотид), или в которых

все урациловые основания представляют собой 5-метилурацил, представленный одной из SEQ ID NO: 6853-7036, предпочтительно SEQ ID NO: 6853, 6854, 6855, 6856 или 6857, более предпочтительно SEQ ID NO: 6853, 6854, 6855 или 6856, еще более предпочтительно SEQ ID NO: 6853 или 6854, наиболее предпочтительно SEQ ID NO: 6853 (первый олигонуклеотид) или любой из SEQ ID NO: 7037-7234, предпочтительно SEQ ID NO: 7037, 7038, 7039 или 7040, более предпочтительно SEQ ID NO: 7037 или 7038, еще более предпочтительно SEQ ID NO: 7037 (второй олигонуклеотид), или в которых

все основания цитозин представляют собой 5-метилцитозин и все урациловые основания представляют собой 5-метилурацил представленный одной из SEQ ID NO: 9127-9309, предпочтительно SEQ ID NO: 9127, 9128, 9129, 9130 или 9131, более предпочтительно SEQ ID NO: 9127, 9128, 9129 или 9130, еще более предпочтительно SEQ ID NO: 9127 или 9128, наиболее предпочтительно SEQ ID NO: 9127 (первый олигонуклеотид) или любой из SEQ ID NO: 9310-9499, предпочтительно SEQ ID NO: 9310, 9311, 9312 или 9313, более предпочтительно SEQ ID NO: 9310 или 9311, еще более предпочтительно SEQ ID NO: 9310 (второй олигонуклеотид).

Если первый олигонуклеотид и/или второй олигонуклеотид соединения по настоящему изобретению содержит или состоит из последовательности, представленной любой из SEQ ID NO: 14-197 (первый олигонуклеотид) или любой из SEQ ID NO: 198-398 (второй олигонуклеотид), предпочтительно два наибольших 5'-концевых мономера указанного первого и/или второго олигонуклеотида содержит модификацию каркаса BNA и необязательно 1, 2, 3, 4 или 5 дополнительных мономеров содержат модификацию каркаса BNA, более предпочтительно только два наибольших 5'-концевых мономера указанного первого и/или второго олигонуклеотида содержат модификацию каркаса BNA, и причем предпочтительно указанный первый и/или второй олигонуклеотид содержит или состоит из 2'-O-замещенных мономеров РНК, соединенных посредством фосфотиоатных связей остова и/или где все цитозиновые основания представляют собой 5-метилцитозин, и/или причем все урациловые основания представляют собой 5-метилурациловые основания в указанном первом и/или втором олигонуклеотиде, как было указано ранее в данном документе. Таким образом, предпочтительные варианты указанного первого и/или второго олигонуклеотида соединения содержат или состоят из последовательности, представленной любой из SEQ ID NO: 14-198 (первый олигонуклеотид) или SEQ ID NO: 198-398 (второй олигонуклеотид), или ее фрагмента, как было указано ранее в данном документе, представлены любой из SEQ ID NO: 2684-2867, предпочтительно SEQ ID NO: 2684, 2685, 2686, 2687 или 2688, более предпочтительно SEQ ID NO: 2684, 2685, 2686 или 2687, еще более предпочтительно SEQ ID NO: 2684 или 2685, наиболее предпочтительно SEQ ID NO: 2684 (первый олигонуклеотид); или любой из SEQ ID NO: 2868-3068, предпочтительно SEQ ID NO: 2868, 2869, 2870 или 2871, более предпочтительно SEQ ID NO: 2868 или 2869, еще более предпочтительно SEQ ID NO: 2868 (второй олигонуклеотид). Более предпочтительные варианты представляют собой такие, в которых

все цитозиновые основания представляют собой 5-метилцитозин, представленный одной из SEQ ID NO: 4964-5146 предпочтительно SEQ ID NO: 4964, 4965, 4966, 4967 или 4968, более предпочтительно SEQ ID NO: 4964, 4965, 4966 или 4967, еще более предпочтительно SEQ ID NO: 4964 или 4965, наиболее предпочтительно SEQ ID NO: 4964 (первый олигонуклеотид) или любой из SEQ ID NO: 5147-5338, предпочтительно SEQ ID NO: 5147, 5148, 5149 или 5150, более предпочтительно SEQ ID NO: 5147 или 5148, еще более предпочтительно SEQ ID NO: 5147 (второй олигонуклеотид), или в которых

все урациловые основания представляют собой 5-метилурацил, представленный одной из SEQ ID NO: 7235-7418, предпочтительно SEQ ID NO: 7235, 7236, 7237, 7238 или 7239, более предпочтительно SEQ ID NO: 7235, 7236, 7237 или 7238, еще более предпочтительно SEQ ID NO: 7235 или 7236, наиболее предпочтительно SEQ ID NO: 7235 (первый олигонуклеотид) или любой из SEQ ID NO: 7419-7616, предпочтительно SEQ ID NO: 7419, 7420, 7421 или 7422, более предпочтительно SEQ ID NO: 7419 или 7420, еще более предпочтительно SEQ ID NO: 7419 (второй олигонуклеотид), или в которых

все основания цитозин представляют собой 5-метилцитозин и все урациловые основания представляют собой 5-метилурацил представленный одной из SEQ ID NO: 9500-9682, предпочтительно SEQ ID NO: 9500, 9501, 9502, 9503 или 9504, более предпочтительно SEQ ID NO: 9500, 9501, 9502 или 9503, еще более предпочтительно SEQ ID NO: 9500 или 9501, наиболее предпочтительно SEQ ID NO: 9500 (первый олигонуклеотид) или любой из SEQ ID NO: 9683-9872, предпочтительно SEQ ID NO: 9683, 9684, 9685 или 9686, более предпочтительно SEQ ID NO: 9683 или 9684, еще более предпочтительно SEQ ID NO: 9683 (второй олигонуклеотид).

Если первый олигонуклеотид и/или второй олигонуклеотид соединения по настоящему изобретению содержит или состоит из последовательности, представленной любой из SEQ ID NO: 14-197 (первый олигонуклеотид) или любой из SEQ ID NO: 198-398 (второй олигонуклеотид), предпочтительно два наибольших 3'-концевых мономера указанного первого и/или второго олигонуклеотида содержат модификацию каркаса BNA и необязательно 1, 2, 3, 4 или 5 дополнительных мономеров содержат модификацию каркаса BNA, более предпочтительно только два наибольших 3'-концевых мономера указанного первого и/или второго олигонуклеотида содержат модификацию каркаса BNA, и причем предпочтительно указанный первый и/или второй олигонуклеотид содержит или состоит из 2'-O-замещенных мономеров РНК, соединенных посредством фосфотиоатных связей остова и/или где все цитозиновые основания представляют собой 5-метилцитозин, и/или причем все урациловые основания представляют собой 5-метилурациловые основания в указанном первом и/или втором олигонуклеотиде, как было указано ранее в данном документе. Таким образом, предпочтительные варианты указанного первого и/или второго олигонуклеотида соединения содержат или состоят из последовательности, представленной любой из SEQ ID NO: 14-197 (первый олигонуклеотид) или SEQ ID NO: 198-398 (второй олигонуклеотид), или ее фрагмента, как было указано ранее в данном документе, представлены любой из SEQ ID NO: 3069-3252, предпочтительно SEQ ID NO: 3069, 3070, 3071, 3072 или 3073, более предпочтительно SEQ ID NO: 3069, 3070, 3071 или 3072, еще более предпочтительно SEQ ID NO: 3069 или 3070, наиболее предпочтительно SEQ ID NO: 3069 (первый олигонуклеотид); или любой из SEQ ID NO: 3253-3453, предпочтительно SEQ ID NO: 3253, 3254, 3255 или 3256, более предпочтительно SEQ ID NO: 3253 или 3254, еще более предпочтительно SEQ ID NO: 3253 (второй олигонуклеотид). Более предпочтительные варианты представляют собой такие, в которых

все цитозиновые основания представляют собой 5-метилцитозин, представленный одной из SEQ ID NO: 5339-5521, предпочтительно SEQ ID NO: 5339, 5340, 5341, 5342 или 5343, более предпочтительно SEQ ID NO: 5339, 5340, 5341 или 5342, еще более предпочтительно SEQ ID NO: 5339 или 5340, наиболее предпочтительно SEQ ID NO: 5339 (первый олигонуклеотид) или любой из SEQ ID NO: 5522-5713, предпочтительно SEQ ID NO: 5522, 5523, 5524 или 5525, более предпочтительно SEQ ID NO: 5522 или 5523, еще более предпочтительно SEQ ID NO: 5522 (второй олигонуклеотид), или в которых

все урациловые основания представляют собой 5-метилурацил, представленный одной из SEQ ID NO: 7617-7800, предпочтительно SEQ ID NO: 7617, 7618, 7619, 7620 или 7621, более предпочтительно SEQ ID NO: 7617, 7618, 7619 или 7620, еще более предпочтительно SEQ ID NO: 7617 или 7618, наиболее предпочтительно SEQ ID NO: 7617 (первый олигонуклеотид) или любой из SEQ ID NO: 7801-7998, предпочтительно SEQ ID NO: 7801, 7802, 7803 или 7804, более предпочтительно SEQ ID NO: 7801 или 7802, еще более предпочтительно SEQ ID NO: 7801 (второй олигонуклеотид), или в которых

все основания цитозин представляют собой 5-метилцитозин и все урациловые основания представляют собой 5-метилурацил представленный одной из SEQ ID NO: 9873-10055, предпочтительно SEQ ID NO: 9873, 9874, 9875, 9876 или 9877, более предпочтительно SEQ ID NO: 9873, 9874, 9875 или 9876, еще более предпочтительно SEQ ID NO: 9873 или 9874, наиболее предпочтительно SEQ ID NO: 9873 (первый олигонуклеотид) или любой из SEQ ID NO: 10056-10245, предпочтительно SEQ ID NO: 10056, 10057, 10058 или 10059, более предпочтительно SEQ ID NO: 10056 или 10057, еще более предпочтительно SEQ ID NO: 10056 (второй олигонуклеотид).

Если первый олигонуклеотид и/или второй олигонуклеотид соединения по настоящему изобретению содержит или состоит из последовательности, представленной любой из SEQ ID NO: 14-197 (первый олигонуклеотид) или любой из SEQ ID NO: 198-398 (второй олигонуклеотид), предпочтительно два наибольших 5'-концевых мономера и два наибольших 3'-концевых мономера указанного первого и/или второго олигонуклеотида содержит модификацию каркаса BNA и необязательно 1, 2, 3, 4 или 5 дополнительных мономеров содержат модификацию каркаса BNA, более предпочтительно только два наибольших 5'-концевых мономера и два наибольших 3'-концевых мономера указанного первого и/или второго олигонуклеотида содержит модификацию каркаса BNA, и причем предпочтительно указанный первый и/или второй олигонуклеотид содержит или состоит из 2'-O-замещенных мономеров РНК, соединенных посредством фосфотиоатных связей остова и/или где все цитозиновые основания представляют собой 5-метилцитозин, и/или причем все урациловые основания представляют собой 5-метилурациловые основания в указанном первом и/или втором олигонуклеотиде, как было указано ранее в данном документе. Таким образом, предпочтительные варианты указанного первого и/или второго олигонуклеотида соединения содержат или состоят из последовательности, представленной любой из SEQ ID NO: 14-197 (первый олигонуклеотид) или SEQ ID NO: 198-398 (второй олигонуклеотид), или ее фрагмента, как было указано ранее в данном документе, представлены любой из SEQ ID NO: 3454-3637, предпочтительно SEQ ID NO: 3454, 3455, 3456, 3457 или 3458, более предпочтительно SEQ ID NO: 3454, 3455, 3456 или 3457, еще более предпочтительно SEQ ID NO: 3454 или 3455, наиболее предпочтительно SEQ ID NO: 3454 (первый олигонуклеотид); или любой из SEQ ID NO: 3638-3838, предпочтительно SEQ ID NO: 3638, 3639, 3640 или 3641, более предпочтительно SEQ ID NO: 3638 или 3639, еще более предпочтительно SEQ ID NO: 3638 (второй олигонуклеотид). Более предпочтительные варианты представляют собой такие, в которых

все цитозиновые основания представляют собой 5-метилцитозин, представленный одной из SEQ ID NO: 5714-5896, предпочтительно SEQ ID NO: 5714, 5715, 5716, 5717 или 5718, более предпочтительно SEQ ID NO: 5714, 5715, 5716 или 5717, еще более предпочтительно SEQ ID NO: 5714 или 5715, наиболее предпочтительно SEQ ID NO: 5714 (первый олигонуклеотид) или любой из SEQ ID NO: 5897-6088, предпочтительно SEQ ID NO: 5897, 5898, 5899 или 5900, более предпочтительно SEQ ID NO: 5897 или 5898, еще более предпочтительно SEQ ID NO: 5897 (второй олигонуклеотид), или в которых

все урациловые основания представляют собой 5-метилурацил, представленный одной из SEQ ID NO: 7999-8182, предпочтительно SEQ ID NO: 7999, 7800, 7801, 7802 или 7803, более предпочтительно SEQ ID NO: 7999, 7800, 7801 или 7802, еще более предпочтительно SEQ ID NO: 7999 или 7800, наиболее предпочтительно SEQ ID NO: 7999 (первый олигонуклеотид) или любой из SEQ ID NO: 8183-8380, предпочтительно SEQ ID NO: 8183, 8184, 8185 или 8186, более предпочтительно SEQ ID NO: 8183 или 8184, еще более предпочтительно SEQ ID NO: 8183 (второй олигонуклеотид), или в которых

все основания цитозин представляют собой 5-метилцитозин и все урациловые основания представляют собой 5-метилурацил представленный одной из SEQ ID NO: 10246-10428, предпочтительно SEQ ID NO: 10246, 10247, 10248, 10249 или 10250, более предпочтительно SEQ ID NO: 10246, 10247, 10248 или 10249, еще более предпочтительно SEQ ID NO: 10246 или 10247, наиболее предпочтительно SEQ ID NO: 10246 (первый олигонуклеотид) или любой из SEQ ID NO: 10429-10618, предпочтительно SEQ ID NO: 10429, 10430, 10431 или 10432, более предпочтительно SEQ ID NO: 10429 или 10430, еще более предпочтительно SEQ ID NO: 10429 (второй олигонуклеотид).

В данной заявке, если SEQ ID NO ссылается на T или U и указанный мономер содержит модификацию каркаса BNA, указанный мономер может быть необязательно заменен на U или T, соответственно.

В данной заявке модификация каркаса BNA всегда может содержаться в олигонуклеотиде (т.е. в первом и/или втором антисмысловом олигонуклеотиде, присутствующем в соединении по настоящему изобретению), если явно не указано иное. Тем не менее, для наглядности это не всегда четко прописано. Это означает, что всякий раз, когда указано, что олигонуклеотид (т.е. первый и/или второй антисмысловой олигонуклеотид, присутствующий в соединении по настоящему изобретению) содержит или состоит только из конкретного вида мономера, это не исключает наличие модификации каркаса BNA в случаях, когда упоминается наличие модификации каркаса BNA. Например, олигонуклеотид, который состоит только из мономеров 2'-O-метил РНК, тем не менее может состоять из мономера с модификацией каркаса BNA. Это будет очевидно из контекста (например, если указано, что AON состоит исключительно из одного мономера, но все же содержит модификацию каркаса BNA).

Олигонуклеотид по настоящему изобретению, т.е. первый и/или второй олигонуклеотид соединения, предпочтительно содержит по меньшей мере одно из 5-метилцитозинового основания или 5-метилурацилового основания, предпочтительно все цитозиновые основания представляют собой 5-метилцитозиновые основания и/или все урациловые основания представляют собой 5-метилурациловые основания, и указанный олигонуклеотид предпочтительно содержит по меньшей мере один 2'-O-метилфосфотиоатный мономер, более предпочтительно содержит только 2'-O-метилфосфотиоатный мономер, как ранее указано в данном документе.

Первый олигонуклеотид и второй олигонуклеотид соединения по настоящему изобретению содержат концевые и неконцевые мономеры. В контексте данной заявки концевые мономеры указанного первого и/или второго олигонуклеотида определены как мономеры, выбранные из группы, включающей 5'-концевой мономер и 3'-концевой мономер указанного первого и/или второго олигонуклеотида, как ранее было описано в данной заявке. Проще говоря, неконцевые мономеры первого и/или второго олигонуклеотида определяются как мономеры, содержащиеся в указанном первом и/или втором олигонуклеотиде, которые не определяются как концевые мономеры. В контексте настоящего изобретения термин «концевые мономеры» относится к концевым мономерам первого олигонуклеотида и/или второго олигонуклеотида соединения по настоящему изобретению, и не относится к концевым мономерам соединения в целом, если не указано иное.

Специалисту в данной области техники очевидно, что как концевые, так и неконцевые мономеры первого олигонуклеотида и/или второго олигонуклеотида соединения по настоящему изобретению могут содержать модификацию каркаса BNA.

В предпочтительном варианте представлены первый и/или второй олигонуклеотид соединения по настоящему изобретению, причем указанный первый и/или второй олигонуклеотид содержит или состоит из 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 или 9 мономеров, предпочтительно 1, 2, 3, 4 или 5 мономеров, которые содержат модификацию каркаса бициклической нуклеиновой кислоты (BNA), предпочтительно модификацию каркаса связанной нуклеиновой кислоты, более предпочтительно модификацию LNA, и причем предпочтительно указанный первый и/или второй олигонуклеотид содержит или состоит из 2'-O-замещенных мономеров РНК, соединенных фосфотиоатными связями остова и/или, в которых все цитозиновые основания представляют собой 5-метилцитозин, и/или причем все урациловые основания представляют собой 5-метилурацил (т.е. тимин) в указанном первом и/или втором олигонуклеотиде, как указано ранее в данном документе.

В еще более предпочтительном варианте осуществления представлен первый и/или второй олигонуклеотид соединения по настоящему изобретению,

в котором

5'-концевой мономер указанного первого и/или второго олигонуклеотида содержит модификацию каркаса BNA, или

3'-концевой мономер указанного первого и/или второго олигонуклеотида содержит модификацию каркаса BNA, или

5'-концевой мономер и 3'-концевой мономер указанного первого и/или второго олигонуклеотида содержат модификацию каркаса BNA, или

два наибольших 5'-концевых мономера указанного первого и/или второго олигонуклеотида содержат модификацию каркаса BNA, или

два наибольших 3'-концевых мономера указанного первого и/или второго олигонуклеотида содержат модификацию каркаса BNA, или

два наибольших 5'-концевых мономера и два наибольших 3'-концевых мономера указанного первого и/или второго олигонуклеотида содержат модификацию каркаса BNA;

и в котором указанный олигонуклеотид содержит или состоит из 1, 2, 3, 4 или 5 дополнительных неконцевых мономеров, содержащих модификацию каркаса BNA, более предпочтительно 1 или 2 дополнительных неконцевых мономера, содержащих модификацию каркаса BNA, причем указанные дополнительные неконцевые мономеры предпочтительно содержат основание аденозин, урацил и/или тимин; более предпочтительно основание гуанин, цитозин и/или 5-метилцитозин. Предпочтительно, модификация каркаса BNA предпочтительно представляет собой модификацию LNA.

Если первый олигонуклеотид и/или второй олигонуклеотид соединения по настоящему изобретению содержит или состоит из последовательности, представленной любой из SEQ ID NO: 14-197 (первый олигонуклеотид) или любой из SEQ ID NO: 198-398 (второй олигонуклеотид), предпочтительно один или два неконцевых мономера содержат модификацию каркаса BNA и необязательно 1, 2, 3, 4 или 5 дополнительных мономеров содержат модификацию каркаса BNA, более предпочтительно только один или два неконцевых мономера содержат модификацию каркаса BNA, и предпочтительно где указанный первый и/или второй олигонуклеотид содержит или состоит из 2'-O-замещенных мономеров РНК, соединенных посредством фосфотиоатных связей остова и/или причем все цитозиновые основания представляют собой 5-метилцитозин и/или где все урациловые основания представляют собой 5-метилурациловые основания в указанном первом и/или втором олигонуклеотиде, как было указано ранее в данном документе. Предпочтительно, указанные неконцевые мономеры, содержащие модификацию каркаса BNA, содержат основание аденозин, урацил и/или тимин. Более предпочтительно, указанные неконцевые мономеры, содержащие модификацию каркаса BNA, содержат гуаниновое основание, цитозиновое основание или 5-метилцитозиновое основание.

Предпочтительные варианты указанного первого и/или второго олигонуклеотида соединения содержат или состоят из последовательности, представленной любой из SEQ ID NO: 14, 15, 16 или 17, предпочтительно SEQ ID NO: 14 или 15, более предпочтительно SEQ ID NO: 14 (первый олигонуклеотид); или любой из SEQ ID NO: 198 или 199, предпочтительно SEQ ID NO: 198 (второй олигонуклеотид), или ее фрагмента, как было указано ранее в данном документе, причем указанный неконцевой мономер, содержащий модификацию каркаса BNA, содержит гуаниновое основание, цитозиновое основание или 5-метилцитозиновое основание. Таким образом, данные предпочтительные варианты первого олигонуклеотида и/или второго олигонуклеотида соединения по настоящему изобретению

содержат только один мономер, содержащий модификацию каркаса BNA, причем указанный мономер представляет собой неконцевой мономер, содержащий гуаниновое или цитозиновое основание, причем указанный первый и/или второй олигонуклеотид может быть представлен любой из SEQ ID NO 10619-10625 (образованной из SEQ ID NO: 14), 10626-10632 (образованной из SEQ ID NO: 15), 10633-10640 (образованной из SEQ ID NO: 16) или 10641-10650 (образованной из SEQ ID NO: 17), предпочтительно 10619-10625 или 10626-10632, более предпочтительно 10619-10625 (первый олигонуклеотид), или 10766-10773 (образованной из SEQ ID NO: 198) или 10774-10781 (образованной из SEQ ID NO: 199), более предпочтительно 10766-10773 (второй олигонуклеотид), предпочтительно

в котором все цитозиновые основания указанного первого и/или второго олигонуклеотида представляют собой 5-метилцитозин, представленный SEQ ID NO: 10838-10844 (образованной из SEQ ID NO: 14), 10845-10851 (образованной из SEQ ID NO: 15), 10852-10859 (образованной из SEQ ID NO: 16) или 10860-10869 (образованной из SEQ ID NO: 17), предпочтительно 10838-10844 или 10845-10851, более предпочтительно 10838-10844 (первый олигонуклеотид); или 10985-10992 (образованной из SEQ ID NO: 198) или 10993-11000 (образованной из SEQ ID NO: 199), более предпочтительно 10985-10992 (второй олигонуклеотид), или

в котором все урациловые основания указанного первого и/или второго олигонуклеотида представляют собой 5-метилурацил, представленный SEQ ID NO: 11057-11063 (образованной из SEQ ID NO: 14), 11064-11070 (образованной из SEQ ID NO: 15), 11071-11078 (образованной из SEQ ID NO: 16) или 11079-11088 (образованной из SEQ ID NO: 17), предпочтительно 11057-11063 или 11064-11070, более предпочтительно 11057-11063 (первый олигонуклеотид); или 11204-11211 (образованной из SEQ ID NO: 198) или 11212-11219 (образованной из SEQ ID NO: 199), более предпочтительно 11204-11211 (второй олигонуклеотид), или

в котором все цитозиновые основания указанного первого и/или второго олигонуклеотида представляют собой 5-метилцитозин и все урациловые основания указанного первого и/или второго олигонуклеотида представляют собой 5-метилурацил, представленный SEQ ID NO: 11276-11282 (образованной из SEQ ID NO: 14), 11283-11289 (образованной из SEQ ID NO: 15), 11290-11297 (образованной из SEQ ID NO: 16) или 11298-11307 (образованной из SEQ ID NO: 17), предпочтительно 11276-11282 или 11283-11289, более предпочтительно 11276-11282 (первый олигонуклеотид); или 11423-11430 (образованной из SEQ ID NO: 198) или 11431-11438 (образованной из SEQ ID NO: 199), более предпочтительно 11423-11430 (второй олигонуклеотид); или

содержат только два мономера, содержащие модификацию каркаса BNA, причем указанный мономер представляет собой неконцевой мономер, содержащий гуаниновое или цитозиновое основание, причем указанный первый и/или второй олигонуклеотид может быть представлен любой из SEQ ID NO 10651-10671 (образованной из SEQ ID NO: 14), 10672-10692 (образованной из SEQ ID NO: 15), 10693-10720 (образованной из SEQ ID NO: 16) или 10721-10765 (образованной из SEQ ID NO: 17), предпочтительно 10651-10671 или 10672-10692, более предпочтительно 10651-10671 (первый олигонуклеотид), или 10782-10809 (образованной из SEQ ID NO: 198) или 10810-10837 (образованной из SEQ ID NO: 199), более предпочтительно 10782-10809 (второй олигонуклеотид), предпочтительно

в котором все цитозиновые основания указанного первого и/или второго олигонуклеотида представляют собой 5-метилцитозин, представленный SEQ ID NO: 10870-10890 (образованной из SEQ ID NO: 14), 10891-10911 (образованной из SEQ ID NO: 15), 10912-10939 (образованной из SEQ ID NO: 16) или 10940-10984 (образованной из SEQ ID NO: 17), предпочтительно 10870-10890 или 10891-10911, более предпочтительно 10870-10890 (первый олигонуклеотид); или 11001-11028 (образованной из SEQ ID NO: 198) или 11029-11056 (образованной из SEQ ID NO: 199), более предпочтительно 11001-11028 (второй олигонуклеотид), или

в котором все урациловые основания указанного первого и/или второго олигонуклеотида представляют собой 5-метилурацил, представленный SEQ ID NO: 11089-11109 (образованной из SEQ ID NO: 14), 11110-11130 (образованной из SEQ ID NO: 15), 11131-11158 (образованной из SEQ ID NO: 16) или 11159-11203 (образованной из SEQ ID NO: 17), предпочтительно 11089-11109 или 11110-11130, более предпочтительно 11089-11109 (первый олигонуклеотид); или 11220-11247 (образованной из SEQ ID NO: 198) или 11248-11275 (образованной из SEQ ID NO: 199), более предпочтительно 11220-11247 (второй олигонуклеотид), или

в котором все цитозиновые основания указанного первого и/или второго олигонуклеотида представляют собой 5-метилцитозин и все урациловые основания указанного первого и/или второго олигонуклеотида представляют собой 5-метилурацил, представленный SEQ ID NO: 11308-11328 (образованной из SEQ ID NO: 14), 11329-11349 (образованной из SEQ ID NO: 15), 11350-11377 (образованной из SEQ ID NO: 16) или 11378-11422 (образованной из SEQ ID NO: 17), предпочтительно 11308-11328 или 11329-11349, более предпочтительно 11308-11328 (первый олигонуклеотид); или 11439-11466 (образованной из SEQ ID NO: 198) или 11467-11494 (образованной из SEQ ID NO: 199), более предпочтительно 11439-11466 (второй олигонуклеотид).

Если первый олигонуклеотид и/или a второй олигонуклеотид соединения по настоящему изобретению содержит или состоит из последовательности, представленной любой из SEQ ID NO: 14-197 (первый олигонуклеотид) или любой из SEQ ID NO: 198-398 (второй олигонуклеотид), причем 5'-концевой мономер и/или 3'-концевой мономер и/или два наибольших 5'-концевых мономера и/или два наибольших 3'-концевых мономера содержат модификацию каркаса BNA, предпочтительно один или два неконцевых мономера содержат модификацию каркаса BNA и необязательно 1, 2, 3, 4 или 5 дополнительных неконцевых мономеров содержат модификацию каркаса BNA, более предпочтительно только один или два неконцевых мономера указанного первого и/или второго олигонуклеотида содержат модификацию каркаса BNA, и причем предпочтительно указанный олигонуклеотид содержит или состоит из 2'-O-замещенных мономеров РНК, соединенных фосфотиоатными связями остова, и/или причем все цитозиновые основания представляют собой 5-метилцитозин и/или причем все урациловые основания представляют собой 5-метилурациловые основания в указанном первом и/или втором олигонуклеотиде. Предпочтительно, указанный неконцевой мономер, содержащий модификацию каркаса BNA, содержит аденозиновое основание, урациловое основание или тиминовое основание. Более предпочтительно, указанный неконцевой мономер, содержащий модификацию каркаса BNA, содержит гуаниновое основание, цитозиновое основание или 5-метилцитозиновое основание.

Предпочтительные варианты указанного первого и/или второго олигонуклеотида соединения содержат или состоят из последовательности, представленной любой из SEQ ID NO: 14, 15, 16 или 17, предпочтительно SEQ ID NO: 14 или 15, более предпочтительно SEQ ID NO: 14 (первый олигонуклеотид) или любой из SEQ ID NO: 198 или 199, предпочтительно SEQ ID NO: 198 (второй олигонуклеотид), или ее фрагмента, как было указано ранее в данном документе, предпочтительно в которых указанный неконцевой мономер, содержащий модификацию каркаса BNA, содержит аденозиновое основание, урациловое или тиминовое основание, более предпочтительно в которых неконцевой мономер, содержащий модификацию каркаса BNA, содержит гуаниновое основание, цитозиновое основание или 5-метилцитозиновое основание. Наиболее предпочтительные варианты указанного первого и/или второго олигонуклеотида соединения представляют собой такие олигонуклеотиды, которые содержат или состоят из последовательности, представленной любой из SEQ ID NO: 14, 15, 16 или 17, предпочтительно SEQ ID NO: 14 или 15, более предпочтительно SEQ ID NO: 14 (первый олигонуклеотид) или любой из SEQ ID NO: 198 или 199, предпочтительно SEQ ID NO: 198 (второй олигонуклеотид), причем указанные неконцевые мономеры, содержащие модификацию каркаса BNA, содержат гуаниновое основание, цитозиновое основание или 5-метилцитозиновое основание, и

причем 5'-концевой мономер и один неконцевой мономер указанного первого и/или второго олигонуклеотида содержит модификацию каркаса BNA, представленную одной из SEQ ID NO: 11495-11500 (образованной из SEQ ID NO: 14), 11501-11507 (образованной из SEQ ID NO: 15), 11508-11514 (образованной из SEQ ID NO: 16) или 11515-11524 (образованной из SEQ ID NO: 17), предпочтительно 11495-11500 или 11501-11507, более предпочтительно 11495-11500 (первый олигонуклеотид); или 11627-11633 (образованной из SEQ ID NO: 198) или 11634-11640 (образованной из SEQ ID NO: 199), более предпочтительно 11627-11633 (второй олигонуклеотид), предпочтительно

в котором все цитозиновые основания указанного первого и/или второго олигонуклеотида представляют собой 5-метилцитозин, представленный SEQ ID NO: 11683-11688 (образованной из SEQ ID NO: 14), 11689-11695 (образованной из SEQ ID NO: 15), 11696-11702 (образованной из SEQ ID NO: 16) или 11703-11712 (образованной из SEQ ID NO: 17), предпочтительно 11683-11688 или 11689-11695, более предпочтительно 11683-11688 (первый олигонуклеотид); или 11815-11821 (образованной из SEQ ID NO: 198) или 11822-11828 (образованной из SEQ ID NO: 199), более предпочтительно 11815-11821 (второй олигонуклеотид), или

в котором все урациловые основания указанного первого и/или второго олигонуклеотида представляют собой 5-метилурацил, представленный SEQ ID NO: 11871-11876 (образованной из SEQ ID NO: 14), 11877-11883 (образованной из SEQ ID NO: 15), 11884-11890 (образованной из SEQ ID NO: 16) или 11891-11900 (образованной из SEQ ID NO: 17), предпочтительно 11871-11876 или 11877-11883, более предпочтительно 11871-11876 (первый олигонуклеотид); или 12003-12009 (образованной из SEQ ID NO: 198) или 12010-12016 (образованной из SEQ ID NO: 199), более предпочтительно 12003-12009 (второй олигонуклеотид), или

в котором все цитозиновые основания указанного первого и/или второго олигонуклеотида представляют собой 5-метилцитозин и все урациловые основания указанного первого и/или второго олигонуклеотида представляют собой 5-метилурацил, представленный SEQ ID NO: 12059-12064 (образованной из SEQ ID NO: 14), 12065-12071 (образованной из SEQ ID NO: 15), 12072-12078 (образованной из SEQ ID NO: 16) или 12079-12088 (образованной из SEQ ID NO: 17), предпочтительно 12059-12064 или 12065-12071, более предпочтительно 12059-12064 (первый олигонуклеотид); или 12191-12197 (образованной из SEQ ID NO: 198) или 12198-12204 (образованной из SEQ ID NO: 199), более предпочтительно 12191-12197 (второй олигонуклеотид); или

причем 5'-концевой мономер и два неконцевых мономера указанного первого и/или второго олигонуклеотида содержат модификацию каркаса BNA, представленную одной из SEQ ID NO: 11525-11539 (образованной из SEQ ID NO: 14), 11540-11560 (образованной из SEQ ID NO: 15), 11561-11581 (образованной из SEQ ID NO: 16) или 11582-11626 (образованной из SEQ ID NO: 17), предпочтительно 11525-11539 или 11540-11560, более предпочтительно 11525-11539 (первый олигонуклеотид); или 11641-11661 (образованной из SEQ ID NO: 198) или 11662-11682 (образованной из SEQ ID NO: 199), более предпочтительно 11641-11661 (второй олигонуклеотид), предпочтительно

в котором все цитозиновые основания указанного первого и/или второго олигонуклеотида представляют собой 5-метилцитозин, представленный SEQ ID NO: 11713-11727 (образованной из SEQ ID NO: 14), 11728-11748 (образованной из SEQ ID NO: 15), 11749-11769 (образованной из SEQ ID NO: 16) или 11770-11814 (образованной из SEQ ID NO: 17), предпочтительно 11713-11727 или 11728-11748, более предпочтительно 11713-11727 (первый олигонуклеотид); или 11829-11849 (образованной из SEQ ID NO: 198) или 11850-11870 (образованной из SEQ ID NO: 199), более предпочтительно 11829-11849 (второй олигонуклеотид), или

в котором все урациловые основания указанного первого и/или второго олигонуклеотида представляют собой 5-метилурацил, представленный SEQ ID NO: 11901-11915 (образованной из SEQ ID NO: 14), 11916-11936 (образованной из SEQ ID NO: 15), 11937-11957 (образованной из SEQ ID NO: 16) или 11958-12002 (образованной из SEQ ID NO: 17), предпочтительно 11901-11915 или 11916-11936, более предпочтительно 11901-11915 (первый олигонуклеотид); или 12017-12037 (образованной из SEQ ID NO: 198) или 12038-12058 (образованной из SEQ ID NO: 199), более предпочтительно 12017-12037 (второй олигонуклеотид), или

в котором все цитозиновые основания указанного первого и/или второго олигонуклеотида представляют собой 5-метилцитозин и все урациловые основания указанного первого и/или второго олигонуклеотида представляют собой 5-метилурацил, представленный SEQ ID NO: 12089-12103 (образованной из SEQ ID NO: 14), 12104-12124 (образованной из SEQ ID NO: 15), 12125-12145 (образованной из SEQ ID NO: 16) или 12146-12190 (образованной из SEQ ID NO: 17), предпочтительно 12089-12103 или 12104-12124, более предпочтительно 12089-12103 (первый олигонуклеотид); или 12205-12225 (образованной из SEQ ID NO: 198) или 12226-12246 (образованной из SEQ ID NO: 199), более предпочтительно 12205-12225 (второй олигонуклеотид); или

причем 3'-концевой мономер и один неконцевой мономер указанного первого и/или второго олигонуклеотида содержит модификацию каркаса BNA, представленную одной из SEQ ID NO: 12247-12252 (образованной из SEQ ID NO: 14), 12253-12258 (образованной из SEQ ID NO: 15), 12259-12265 (образованной из SEQ ID NO: 16) или 12266-12274 (образованной из SEQ ID NO: 17), предпочтительно 12247-12252 или 12253-12258, более предпочтительно 12247-12252 (первый олигонуклеотид); или 12362-12368 (образованной из SEQ ID NO: 198) или 12369-12376 (образованной из SEQ ID NO: 199), более предпочтительно 12362-12368 (второй олигонуклеотид), предпочтительно

в котором все цитозиновые основания указанного первого и/или второго олигонуклеотида представляют собой 5-метилцитозин, представленный SEQ ID NO: 12426-12431 (образованной из SEQ ID NO: 14), 12432-12437 (образованной из SEQ ID NO: 15), 12438-12444 (образованной из SEQ ID NO: 16) или 12445-12453 (образованной из SEQ ID NO: 17), предпочтительно 12426-12431 или 12432-12437, более предпочтительно 12426-12431 (первый олигонуклеотид); или 12541-12547 (образованной из SEQ ID NO: 198) или 12548-12555 (образованной из SEQ ID NO: 199), более предпочтительно 12541-12547 (второй олигонуклеотид), или

в котором все урациловые основания указанного первого и/или второго олигонуклеотида представляют собой 5-метилурацил, представленный SEQ ID NO: 12605-12610 (образованной из SEQ ID NO: 14), 12611-12616 (образованной из SEQ ID NO: 15), 12617-12623 (образованной из SEQ ID NO: 16) или 12624-12632 (образованной из SEQ ID NO: 17), предпочтительно 12605-12610 или 12611-12616, более предпочтительно 12605-12610 (первый олигонуклеотид); или 12720-12726 (образованной из SEQ ID NO: 198) или 12727-12734 (образованной из SEQ ID NO: 199), более предпочтительно 12720-12726 (второй олигонуклеотид), или

в котором все цитозиновые основания указанного первого и/или второго олигонуклеотида представляют собой 5-метилцитозин и все урациловые основания указанного первого и/или второго олигонуклеотида представляют собой 5-метилурацил, представленный SEQ ID NO: 12784-12789 (образованной из SEQ ID NO: 14), 12790-12795 (образованной из SEQ ID NO: 15), 12796-12802 (образованной из SEQ ID NO: 16) или 12803-12811 (образованной из SEQ ID NO: 17), предпочтительно 12784-12789 или 12790-12795, более предпочтительно 12784-12789 (первый олигонуклеотид); или 12899-12905 (образованной из SEQ ID NO: 198) или 12906-12913 (образованной из SEQ ID NO: 199), более предпочтительно 12899-12905 (второй олигонуклеотид); или

причем 3'-концевой мономер и два неконцевых мономера указанного первого и/или второго олигонуклеотида содержат модификацию каркаса BNA, представленную одной из SEQ ID NO: 12275-12289 (образованной из SEQ ID NO: 14), 12290-12304 (образованной из SEQ ID NO: 15), 12305-12325 (образованной из SEQ ID NO: 16) или 12326-12361 (образованной из SEQ ID NO: 17), предпочтительно 12275-12289 или 12290-12304, более предпочтительно 12275-12289 (первый олигонуклеотид); или 12377-12397 (образованной из SEQ ID NO: 198) или 12398-12425 (образованной из SEQ ID NO: 199), более предпочтительно 12377-12397 (второй олигонуклеотид), предпочтительно

в котором все цитозиновые основания указанного первого и/или второго олигонуклеотида представляют собой 5-метилцитозин, представленный SEQ ID NO: 12454-12468 (образованной из SEQ ID NO: 14), 12469-12483 (образованной из SEQ ID NO: 15), 12484-12504 (образованной из SEQ ID NO: 16) или 12505-12540 (образованной из SEQ ID NO: 17), предпочтительно 12454-12468 или 12469-12483, более предпочтительно 12454-12468 (первый олигонуклеотид); или 12556-12576 (образованной из SEQ ID NO: 198) или 12577-12604 (образованной из SEQ ID NO: 199), более предпочтительно 12556-12576 (второй олигонуклеотид), или

в котором все урациловые основания указанного первого и/или второго олигонуклеотида представляют собой 5-метилурацил, представленный SEQ ID NO: 12633-12647 (образованной из SEQ ID NO: 14), 12648-12662 (образованной из SEQ ID NO: 15), 12663-12683 (образованной из SEQ ID NO: 16) или 12684-12719 (образованной из SEQ ID NO: 17), предпочтительно 12633-12647 или 12648-12662, более предпочтительно 12633-12647 (первый олигонуклеотид); или 12735-12755 (образованной из SEQ ID NO: 198) или 12756-12783 (образованной из SEQ ID NO: 199), более предпочтительно 12735-12755 (второй олигонуклеотид), или

в котором все цитозиновые основания указанного первого и/или второго олигонуклеотида представляют собой 5-метилцитозин и все урациловые основания указанного олигонуклеотида представляют собой 5-метилурацил, представленный SEQ ID NO: 12812-12826 (образованной из SEQ ID NO: 14), 12827-12841 (образованной из SEQ ID NO: 15), 12842-12862 (образованной из SEQ ID NO: 16) или 12863-12898 (образованной из SEQ ID NO: 17), предпочтительно 12812-12826 или 12827-12841, более предпочтительно 12812-12826 (первый олигонуклеотид); или 12914-12934 (образованной из SEQ ID NO: 198) или 12935-12962 (образованной из SEQ ID NO: 199), более предпочтительно 12914-12934 (второй олигонуклеотид); или

причем 5'-концевой мономер, 3'-концевой мономер и один неконцевой мономер указанного первого и/или второго олигонуклеотида содержат модификацию каркаса BNA, представленную одной из SEQ ID NO: 12963-12969 (образованной из SEQ ID NO: 14), 12970-12976 (образованной из SEQ ID NO: 15), 12977-12984 (образованной из SEQ ID NO: 16) или 12985-12994 (образованной из SEQ ID NO: 17), предпочтительно 12963-12969 или 12970-12976, более предпочтительно 12963-12969 (первый олигонуклеотид); или 13110-13117 (образованной из SEQ ID NO: 198) или 13118-13125 (образованной из SEQ ID NO: 199), более предпочтительно 13110-13117 (второй олигонуклеотид), предпочтительно

в котором все цитозиновые основания указанного первого и/или второго олигонуклеотида представляют собой 5-метилцитозин, представленный SEQ ID NO: 13182-13188 (образованной из SEQ ID NO: 14), 13189-13195 (образованной из SEQ ID NO: 15), 13196-13203 (образованной из SEQ ID NO: 16) или 13204-13213 (образованной из SEQ ID NO: 17), предпочтительно 13182-13188 или 13189-13195, более предпочтительно 13182-13188 (первый олигонуклеотид); или 13329-13336 (образованной из SEQ ID NO: 198) или 13337-13344 (образованной из SEQ ID NO: 199), более предпочтительно 13329-13336 (второй олигонуклеотид), или

в котором все урациловые основания указанного первого и/или второго олигонуклеотида представляют собой 5-метилурацил, представленный SEQ ID NO: 13401-13407 (образованной из SEQ ID NO: 14), 13408-13414 (образованной из SEQ ID NO: 15), 13415-13422 (образованной из SEQ ID NO: 16) или 13423-13432 (образованной из SEQ ID NO: 17), предпочтительно 13401-13407 или 13408-13414, более предпочтительно 13401-13407 (первый олигонуклеотид); или 13548-13555 (образованной из SEQ ID NO: 198) или 13556-13563 (образованной из SEQ ID NO: 199), более предпочтительно 13548-13555 (второй олигонуклеотид), или

в котором все цитозиновые основания указанного первого и/или второго олигонуклеотида представляют собой 5-метилцитозин и все урациловые основания указанного первого и/или второго олигонуклеотида представляют собой 5-метилурацил, представленный SEQ ID NO: 13620-13626 (образованной из SEQ ID NO: 14), 13627-13633 (образованной из SEQ ID NO: 15), 13634-13641 (образованной из SEQ ID NO: 16) или 13642-13651 (образованной из SEQ ID NO: 17), предпочтительно 13620-13626 или 13627-13633, более предпочтительно 13620-13626 (первый олигонуклеотид); или 13767-13774 (образованной из SEQ ID NO: 198) или 13775-13782 (образованной из SEQ ID NO: 199), более предпочтительно 13767-13774 (второй олигонуклеотид); или

причем 5'-концевой мономер, 3'-концевой мономер и два неконцевых мономера указанного первого и/или второго олигонуклеотида содержат модификацию каркаса BNA, представленную одной из SEQ ID NO: 12995-13015 (образованной из SEQ ID NO: 14), 13016-13036 (образованной из SEQ ID NO: 15), 13037-13064 (образованной из SEQ ID NO: 16) или 13065-13109 (образованной из SEQ ID NO: 17), предпочтительно 12995-13015 или 13016-13036, более предпочтительно 12995-13015 (первый олигонуклеотид); или 13126-13153 (образованной из SEQ ID NO: 198) или 13154-13181 (образованной из SEQ ID NO: 199), более предпочтительно 13126-13153 (второй олигонуклеотид), предпочтительно

в котором все цитозиновые основания указанного первого и/или второго олигонуклеотида представляют собой 5-метилцитозин, представленный SEQ ID NO: 13214-13234 (образованной из SEQ ID NO: 14), 13235-13255 (образованной из SEQ ID NO: 15), 13256-13283 (образованной из SEQ ID NO: 16) или 13284-13328 (образованной из SEQ ID NO: 17), предпочтительно 13214-13234 или 13235-13255, более предпочтительно 13214-13234 (первый олигонуклеотид); или 13345-13372 (образованной из SEQ ID NO: 198) или 13373-13400 (образованной из SEQ ID NO: 199), более предпочтительно 13345-13372 (второй олигонуклеотид), или

в котором все урациловые основания указанного первого и/или второго олигонуклеотида представляют собой 5-метилурацил, представленный SEQ ID NO: 13433-13453 (образованной из SEQ ID NO: 14), 13454-13474 (образованной из SEQ ID NO: 15), 13475-13502 (образованной из SEQ ID NO: 16) или 13503-13547 (образованной из SEQ ID NO: 17), предпочтительно 13433-13453 или 13454-13474, более предпочтительно 13433-13453 (первый олигонуклеотид); или 13564-13591 (образованной из SEQ ID NO: 198) или 13592-13619 (образованной из SEQ ID NO: 199), более предпочтительно 13564-13591 (второй олигонуклеотид), или

в котором все цитозиновые основания указанного первого и/или второго олигонуклеотида представляют собой 5-метилцитозин и все урациловые основания указанного первого и/или второго олигонуклеотида представляют собой 5-метилурацил, представленный SEQ ID NO: 13652-13672 (образованной из SEQ ID NO: 14), 13673-13693 (образованной из SEQ ID NO: 15), 13694-13721 (образованной из SEQ ID NO: 16) или 13722-13766 (образованной из SEQ ID NO: 17), предпочтительно 13652-13672 или 13673-13693, более предпочтительно 13652-13672 (первый олигонуклеотид); или 13783-13810 (образованной из SEQ ID NO: 198) или 13811-13838 (образованной из SEQ ID NO: 199), более предпочтительно 13783-13810 (второй олигонуклеотид); или

причем два наибольших 5'-концевых мономера и один неконцевой мономер указанного первого и/или второго олигонуклеотида содержит модификацию каркаса BNA, представленную одной из SEQ ID NO: 13839-13844 (образованной из SEQ ID NO: 14), 13845-13851 (образованной из SEQ ID NO: 15), 13852-13858 (образованной из SEQ ID NO: 16) или 13859-13868 (образованной из SEQ ID NO: 17), предпочтительно 13839-13844 или 13845-13851, более предпочтительно 13839-13844 (первый олигонуклеотид); или 13971-13977 (образованной из SEQ ID NO: 198) или 13978-13984 (образованной из SEQ ID NO: 199), более предпочтительно 13971-13977 (второй олигонуклеотид), предпочтительно

в котором все цитозиновые основания указанного первого и/или второго олигонуклеотида представляют собой 5-метилцитозин, представленный SEQ ID NO: 14027-14032 (образованной из SEQ ID NO: 14), 14033-14039 (образованной из SEQ ID NO: 15), 14040-14046 (образованной из SEQ ID NO: 16) или 14047-14056 (образованной из SEQ ID NO: 17), предпочтительно 14027-14032 или 14033-14039, более предпочтительно 14027-14032 (первый олигонуклеотид); или 14159-14165 (образованной из SEQ ID NO: 198) или 14166-14172 (образованной из SEQ ID NO: 199), более предпочтительно 14159-14165 (второй олигонуклеотид), или

в котором все урациловые основания указанного первого и/или второго олигонуклеотида представляют собой 5-метилурацил, представленный SEQ ID NO: 14215-14220 (образованной из SEQ ID NO: 14), 14221-14227 (образованной из SEQ ID NO: 15), 14228-14234 (образованной из SEQ ID NO: 16) или 14235-14244 (образованной из SEQ ID NO: 17), предпочтительно 14215-14220 или 14221-14227, более предпочтительно 14215-14220 (первый олигонуклеотид); или 14347-14353 (образованной из SEQ ID NO: 198) или 14354-14360 (образованной из SEQ ID NO: 199), более предпочтительно 14347-14353 (второй олигонуклеотид), или

в котором все цитозиновые основания указанного первого и/или второго олигонуклеотида представляют собой 5-метилцитозин и все урациловые основания указанного первого и/или второго олигонуклеотида представляют собой 5-метилурацил, представленный SEQ ID NO: 14403-14408 (образованной из SEQ ID NO: 14), 14409-14415 (образованной из SEQ ID NO: 15), 14416-14422 (образованной из SEQ ID NO: 16) или 14423-14432 (образованной из SEQ ID NO: 17), предпочтительно 14403-14408 или 14409-14415, более предпочтительно 14403-14408 (первый олигонуклеотид); или 14535-14541 (образованной из SEQ ID NO: 198) или 14542-14548 (образованной из SEQ ID NO: 199), более предпочтительно 14535-14541 (второй олигонуклеотид); или

причем два наибольших 5'-концевых мономера и один неконцевой мономер указанного первого и/или второго олигонуклеотида содержит модификацию каркаса BNA, представленную одной из SEQ ID NO: 13869-13883 (образованной из SEQ ID NO: 14), 13884-13904 (образованной из SEQ ID NO: 15), 13905-13925 (образованной из SEQ ID NO: 16) или 13926-13970 (образованной из SEQ ID NO: 17), предпочтительно 13869-13883 или 13884-13904, более предпочтительно 13869-13883 (первый олигонуклеотид); или 13985-14005 (образованной из SEQ ID NO: 198) или 14006-14026 (образованной из SEQ ID NO: 199), более предпочтительно 13985-14005 (второй олигонуклеотид), предпочтительно

в котором все цитозиновые основания указанного первого и/или второго олигонуклеотида представляют собой 5-метилцитозин, представленный SEQ ID NO: 14057-14071 (образованной из SEQ ID NO: 14), 14072-14092 (образованной из SEQ ID NO: 15), 14093-14113 (образованной из SEQ ID NO: 16) или 14114-14158 (образованной из SEQ ID NO: 17), предпочтительно 14057-14071 или 14072-14092, более предпочтительно 14057-14071 (первый олигонуклеотид); или 14173-14193 (образованной из SEQ ID NO: 198) или 14194-14214 (образованной из SEQ ID NO: 199), более предпочтительно 14173-14193 (второй олигонуклеотид), или

в котором все урациловые основания указанного первого и/или второго олигонуклеотида представляют собой 5-метилурацил, представленный SEQ ID NO: 14245-14259 (образованной из SEQ ID NO: 14), 14260-14280 (образованной из SEQ ID NO: 15), 14281-14301 (образованной из SEQ ID NO: 16) или 14302-14346 (образованной из SEQ ID NO: 17), предпочтительно 14245-14259 или 14260-14280, более предпочтительно 14245-14259 (первый олигонуклеотид); или 14361-14381 (образованной из SEQ ID NO: 198) или 14382-14402 (образованной из SEQ ID NO: 199), более предпочтительно 14361-14381 (второй олигонуклеотид), или

в котором все цитозиновые основания указанного первого и/или второго олигонуклеотида представляют собой 5-метилцитозин и все урациловые основания указанного первого и/или второго олигонуклеотида представляют собой 5-метилурацил, представленный SEQ ID NO: 14433-14447 (образованной из SEQ ID NO: 14), 14448-14468 (образованной из SEQ ID NO: 15), 14469-14489 (образованной из SEQ ID NO: 16) или 14490-14534 (образованной из SEQ ID NO: 17), предпочтительно 14433-14447 или 14448-14468, более предпочтительно 14433-14447 (первый олигонуклеотид); или 14549-14569 (образованной из SEQ ID NO: 198) или 14570-14590 (образованной из SEQ ID NO: 199), более предпочтительно 14549-14569 (второй олигонуклеотид); или

причем два наибольших 3'-концевых мономера и один неконцевой мономер указанного первого и/или второго олигонуклеотида содержит модификацию каркаса BNA, представленную одной из SEQ ID NO: 14591-14596 (образованной из SEQ ID NO: 14), 14597-14602 (образованной из SEQ ID NO: 15), 14603-14609 (образованной из SEQ ID NO: 16) или 14610-14618 (образованной из SEQ ID NO: 17), предпочтительно 14591-14596 или 14597-14602, более предпочтительно 14591-14596 (первый олигонуклеотид); или 14706-14712 (образованной из SEQ ID NO: 198) или 14713-14720 (образованной из SEQ ID NO: 199), более предпочтительно 14706-14712 (второй олигонуклеотид), предпочтительно

в котором все цитозиновые основания указанного первого и/или второго олигонуклеотида представляют собой 5-метилцитозин, представленный SEQ ID NO: 14770-14775 (образованной из SEQ ID NO: 14), 14776-14781 (образованной из SEQ ID NO: 15), 14782-14788 (образованной из SEQ ID NO: 16) или 14789-14797 (образованной из SEQ ID NO: 17), предпочтительно 14770-14775 или 14776-14781, более предпочтительно 14770-14775 (первый олигонуклеотид); или 14885-14891 (образованной из SEQ ID NO: 198) или 14892-14899 (образованной из SEQ ID NO: 199), более предпочтительно 14885-14891 (второй олигонуклеотид), или

в котором все урациловые основания указанного первого и/или второго олигонуклеотида представляют собой 5-метилурацил, представленный SEQ ID NO: 14949-14954 (образованной из SEQ ID NO: 14), 14955-14960 (образованной из SEQ ID NO: 15), 14961-14967 (образованной из SEQ ID NO: 16) или 14968-14976 (образованной из SEQ ID NO: 17), предпочтительно 14949-14954 или 14955-14960, более предпочтительно 14949-14954 (первый олигонуклеотид); или 15064-15070 (образованной из SEQ ID NO: 198) или 15071-15078 (образованной из SEQ ID NO: 199), более предпочтительно 15064-15070 (второй олигонуклеотид), или

в котором все цитозиновые основания указанного первого и/или второго олигонуклеотида представляют собой 5-метилцитозин и все урациловые основания указанного первого и/или второго олигонуклеотида представляют собой 5-метилурацил, представленный SEQ ID NO: 15128-15133 (образованной из SEQ ID NO: 14), 15134-15139 (образованной из SEQ ID NO: 15), 15140-15146 (образованной из SEQ ID NO: 16) или 15147-15155 (образованной из SEQ ID NO: 17), предпочтительно 15128-15133 или 15134-15139, более предпочтительно 15128-15133 (первый олигонуклеотид); или 15243-15249 (образованной из SEQ ID NO: 198) или 15250-15257 (образованной из SEQ ID NO: 199), более предпочтительно 15243-15249 (второй олигонуклеотид); или

причем два наибольших 3'-концевых мономера и один неконцевой мономер указанного первого и/или второго олигонуклеотида содержит модификацию каркаса BNA, представленную одной из SEQ ID NO: 14619-14633 (образованной из SEQ ID NO: 14), 14634-14648 (образованной из SEQ ID NO: 15), 14649-14669 (образованной из SEQ ID NO: 16) или 14670-14705 (образованной из SEQ ID NO: 17), предпочтительно 14619-14633 или 14634-14648, более предпочтительно 14619-14633 (первый олигонуклеотид); или 14721-14741 (образованной из SEQ ID NO: 198) или 14742-14769 (образованной из SEQ ID NO: 199), более предпочтительно 14721-14741 (второй олигонуклеотид), предпочтительно

в котором все цитозиновые основания указанного первого и/или второго олигонуклеотида представляют собой 5-метилцитозин, представленный SEQ ID NO: 14798-14812 (образованной из SEQ ID NO: 14), 14813-14827 (образованной из SEQ ID NO: 15), 14828-14848 (образованной из SEQ ID NO: 16) или 14849-14884 (образованной из SEQ ID NO: 17), предпочтительно 14798-14812 или 14813-14827, более предпочтительно 14798-14812 (первый олигонуклеотид); или 14900-14920 (образованной из SEQ ID NO: 198) или 14921-14948 (образованной из SEQ ID NO: 199), более предпочтительно 14900-14920 (второй олигонуклеотид), или

в котором все урациловые основания указанного первого и/или второго олигонуклеотида представляют собой 5-метилурацил, представленный SEQ ID NO: 14977-14991 (образованной из SEQ ID NO: 14), 14992-15006 (образованной из SEQ ID NO: 15), 15007-15027 (образованной из SEQ ID NO: 16) или 15028-15063 (образованной из SEQ ID NO: 17), предпочтительно 14977-14991 или 14992-15006, более предпочтительно 14977-14991 (первый олигонуклеотид); или 15079-15099 (образованной из SEQ ID NO: 198) или 15100-15127 (образованной из SEQ ID NO: 199), более предпочтительно 15079-15099 (второй олигонуклеотид), или

в котором все цитозиновые основания указанного первого и/или второго олигонуклеотида представляют собой 5-метилцитозин и все урациловые основания указанного первого и/или второго олигонуклеотида представляют собой 5-метилурацил, представленный SEQ ID NO: 15156-15170 (образованной из SEQ ID NO: 14), 15171-15185 (образованной из SEQ ID NO: 15), 15186-15206 (образованной из SEQ ID NO: 16) или 15207-15242 (образованной из SEQ ID NO: 17), предпочтительно 15156-15170 или 15171-15185, более предпочтительно 15156-15170 (первый олигонуклеотид); или 15258-15278 (образованной из SEQ ID NO: 198) или 15279-15306 (образованной из SEQ ID NO: 199), более предпочтительно 15258-15278 (второй олигонуклеотид); или

причем два наибольших 5'-концевых мономера, два наибольших 3'-концевых мономера и один неконцевой мономер указанного первого и/или второго олигонуклеотида содержат модификацию каркаса BNA, представленную одной из SEQ ID NO: 15307-15311 (образованной из SEQ ID NO: 14), 15312-15317 (образованной из SEQ ID NO: 15), 15318-15323 (образованной из SEQ ID NO: 16) или 15324-15332 (образованной из SEQ ID NO: 17), предпочтительно 15307-15311 или 15312-15317, более предпочтительно 15307-15311 (первый олигонуклеотид); или 15409-15414 (образованной из SEQ ID NO: 198) или 15415-15421 (образованной из SEQ ID NO: 199), более предпочтительно 15409-15414 (второй олигонуклеотид), предпочтительно

в котором все цитозиновые основания указанного первого и/или второго олигонуклеотида представляют собой 5-метилцитозин, представленный SEQ ID NO: 15458-15462 (образованной из SEQ ID NO: 14), 15463-15468 (образованной из SEQ ID NO: 15), 15469-15474 (образованной из SEQ ID NO: 16) или 15475-15483 (образованной из SEQ ID NO: 17), предпочтительно 15458-15462 или 15463-15468, более предпочтительно 15458-15462 (первый олигонуклеотид); или 15560-15565 (образованной из SEQ ID NO: 198) или 15566-15572 (образованной из SEQ ID NO: 199), более предпочтительно 15560-15565 (второй олигонуклеотид), или

в котором все урациловые основания указанного первого и/или второго олигонуклеотида представляют собой 5-метилурацил, представленный SEQ ID NO: 15609-15613 (образованной из SEQ ID NO: 14), 15614-15619 (образованной из SEQ ID NO: 15), 15620-15625 (образованной из SEQ ID NO: 16) или 15626-15634 (образованной из SEQ ID NO: 17), предпочтительно 15609-15613 или 15614-15619, более предпочтительно 15609-15613 (первый олигонуклеотид); или 15711-15716 (образованной из SEQ ID NO: 198) или 15717-15723 (образованной из SEQ ID NO: 199), более предпочтительно 15711-15716 (второй олигонуклеотид), или

в котором все цитозиновые основания указанного первого и/или второго олигонуклеотида представляют собой 5-метилцитозин и все урациловые основания указанного первого и/или второго олигонуклеотида представляют собой 5-метилурацил, представленный SEQ ID NO: 15760-15764 (образованной из SEQ ID NO: 14), 15765-15770 (образованной из SEQ ID NO: 15), 15771-15776 (образованной из SEQ ID NO: 16) или 15777-15785 (образованной из SEQ ID NO: 17), предпочтительно 15760-15764 или 15765-15770, более предпочтительно 15760-15764 (первый олигонуклеотид); или 15862-15867 (образованной из SEQ ID NO: 198) или 15868-15874 (образованной из SEQ ID NO: 199), более предпочтительно 15862-15867 (второй олигонуклеотид); или

причем два наибольших 5'-концевых мономера, два наибольших 3'-концевых мономера и два неконцевых мономера указанного первого и/или второго олигонуклеотида содержат модификацию каркаса BNA, представленную одной из SEQ ID NO: 15333-15342 (образованной из SEQ ID NO: 14), 15343-15357 (образованной из SEQ ID NO: 15), 15358-15372 (образованной из SEQ ID NO: 16) или 15373-15408 (образованной из SEQ ID NO: 17), предпочтительно 15333-15342 или 15343-15357, более предпочтительно 15333-15342 (первый олигонуклеотид); или 15422-15436 (образованной из SEQ ID NO: 198) или 15437-15457 (образованной из SEQ ID NO: 199), более предпочтительно 15422-15436 (второй олигонуклеотид), предпочтительно

в котором все цитозиновые основания указанного первого и/или второго олигонуклеотида представляют собой 5-метилцитозин, представленный SEQ ID NO: 15484-15493 (образованной из SEQ ID NO: 14), 15494-15508 (образованной из SEQ ID NO: 15), 15509-15523 (образованной из SEQ ID NO: 16) или 15524-15559 (образованной из SEQ ID NO: 17), предпочтительно 15484-15493 или 15494-15508, более предпочтительно 15484-15493 (первый олигонуклеотид); или 15573-15587 (образованной из SEQ ID NO: 198) или 15588-15608 (образованной из SEQ ID NO: 199), более предпочтительно 15573-15587 (второй олигонуклеотид), или

в котором все урациловые основания указанного первого и/или второго олигонуклеотида представляют собой 5-метилурацил, представленный SEQ ID NO: 15635-15644 (образованной из SEQ ID NO: 14), 15645-15659 (образованной из SEQ ID NO: 15), 15660-15674 (образованной из SEQ ID NO: 16) или 15675-15710 (образованной из SEQ ID NO: 17), предпочтительно 15635-15644 или 15645-15659, более предпочтительно 15635-15644 (первый олигонуклеотид); или 15724-15738 (образованной из SEQ ID NO: 198) или 15739-15759 (образованной из SEQ ID NO: 199), более предпочтительно 15724-15738 (второй олигонуклеотид), или

в котором все цитозиновые основания указанного первого и/или второго олигонуклеотида представляют собой 5-метилцитозин и все урациловые основания указанного первого и/или второго олигонуклеотида представляют собой 5-метилурацил, представленный SEQ ID NO: 15786-15795 (образованной из SEQ ID NO: 14), 15796-15810 (образованной из SEQ ID NO: 15), 15811-15825 (образованной из SEQ ID NO: 16) или 15826-15861 (образованной из SEQ ID NO: 17), предпочтительно 15786-15795 или 15796-15810, более предпочтительно 15786-15795 (первый олигонуклеотид); или 15875-15889 (образованной из SEQ ID NO: 198) или 15890-15910 (образованной из SEQ ID NO: 199), более предпочтительно 15875-15889 (второй олигонуклеотид).

В еще более предпочтительном варианте осуществления, если указанный первый олигонуклеотид соединения по настоящему изобретению представлен нуклеотидной последовательностью, содержащей или состоящей из последовательности, представленной SEQ ID NO: 14, 15, 16, 17 или 18, или ее фрагментом, как было указано ранее в данном документе, один или более мономеров указанной нуклеотидной последовательности содержат модификацию каркаса BNA, модификацию каркаса связанной нуклеиновой кислоты, более предпочтительно модификацию LNA, как указано далее (см. таблицы 1 и 2):

если они представлены SEQ ID NO: 14:

любой из SEQ ID NO: 15911-15922, причем предпочтительно:

все цитозиновые основания представляют собой 5-метилцитозин, представленный SEQ ID NO: 15977-15988, или

все урациловые основания представляют собой 5-метилурацил, представленный одной из SEQ ID NO: 16043-16054, или

все цитозиновые основания представляют собой 5-метилцитозин и все урациловые основания представляют собой 5-метилурацил, представленный одной из SEQ ID NO: 16109-16120, или

более предпочтительно, где все цитозиновые основания 5-метилированы, представленный одной из SEQ ID NO: 15977-15988;

если они представлены SEQ ID NO: 15:

SEQ ID NO: 15923 или 15924, причем предпочтительно:

все цитозиновые основания представляют собой 5-метилцитозин, представленный SEQ ID NO: 15989 или 15990, или

все урациловые основания представляют собой 5-метилурацил, представленный SEQ ID NO: 16055 или 16056, или

все цитозиновые основания представляют собой 5-метилцитозин и все урациловые основания представляют собой 5-метилурацил, представленный SEQ ID NO: 16121 или 16122, или

более предпочтительно, где все цитозиновые основания 5-метилированы, как представлено SEQ ID NO: 15989 или 15990;

если они представлены SEQ ID NO: 16:

любой из SEQ ID NO: 15925-15934, причем предпочтительно:

все цитозиновые основания представляют собой 5-метилцитозин, представленный SEQ ID NO: 15991-16000, или

все урациловые основания представляют собой 5-метилурацил, представленный одной из SEQ ID NO: 16057-16066, или

все цитозиновые основания представляют собой 5-метилцитозин и все урациловые основания представляют собой 5-метилурацил, представленный одной из SEQ ID NO: 16123-16132, или

более предпочтительно, где все цитозиновые основания 5-метилированы, представленный одной из SEQ ID NO: 15991-16000;

если они представлены SEQ ID NO: 17:

любой из SEQ ID NO: 15935-15945, причем предпочтительно:

все цитозиновые основания представляют собой 5-метилцитозин, представленный SEQ ID NO: 16001-16011, или

все урациловые основания представляют собой 5-метилурацил, представленный одной из SEQ ID NO: 16067-16077, или

все цитозиновые основания представляют собой 5-метилцитозин и все урациловые основания представляют собой 5-метилурацил, представленный одной из SEQ ID NO: 16133-16143;

более предпочтительно, где все цитозиновые основания 5-метилированы, представленный одной из SEQ ID NO: 16001-16011;

если они представлены SEQ ID NO: 18:

SEQ ID NO: 15946 или 15947, причем предпочтительно:

все цитозиновые основания представляют собой 5-метилцитозин, представленный SEQ ID NO: 16012 или 16013, или

все урациловые основания представляют собой 5-метилурацил, представленный SEQ ID NO: 16078 или 16079, или

все цитозиновые основания представляют собой 5-метилцитозин и все урациловые основания представляют собой 5-метилурацил, представленный SEQ ID NO: 16144 или 16145;

более предпочтительно, где все цитозиновые основания 5-метилированы, представленный одной из SEQ ID NO: 16012 или 16013;

и/или если указанный второй олигонуклеотид соединения по настоящему изобретению представлен нуклеотидной последовательностью, содержащей или состоящей из последовательности, представленной SEQ ID NO: 198, 199, 200 или 201, или ее фрагментом, как было указано ранее в данном документе, один или более мономеров указанной нуклеотидной последовательности содержат модификацию каркаса BNA, модификацию каркаса связанной нуклеиновой кислоты, более предпочтительно модификацию LNA, как указано далее:

если они представлены SEQ ID NO: 198:

любой из SEQ ID NO: 15948-15962, причем предпочтительно:

все цитозиновые основания представляют собой 5-метилцитозин, представленный SEQ ID NO: 16014-16028, или

все урациловые основания представляют собой 5-метилурацил, представленный одной из SEQ ID NO: 16080-16094, или

все цитозиновые основания представляют собой 5-метилцитозин и все урациловые основания представляют собой 5-метилурацил, представленный одной из SEQ ID NO: 16146-16160;

более предпочтительно, где все цитозиновые основания 5-метилированы, представленный одной из SEQ ID NO: 16014-16028;

если они представлены SEQ ID NO: 199:

любой из SEQ ID NO: 15963-15972, причем предпочтительно:

все цитозиновые основания представляют собой 5-метилцитозин, представленный SEQ ID NO: 16029-16038, или

все урациловые основания представляют собой 5-метилурацил, представленный одной из SEQ ID NO: 16095-16104, или

все цитозиновые основания представляют собой 5-метилцитозин и все урациловые основания представляют собой 5-метилурацил, представленный одной из SEQ ID NO: 16161-16170;

более предпочтительно, где все цитозиновые основания 5-метилированы, представленный одной из SEQ ID NO: 16029-16038;

если они представлены SEQ ID NO: 200:

любой из SEQ ID NO: 15973-15975, причем предпочтительно:

все цитозиновые основания представляют собой 5-метилцитозин, представленный SEQ ID NO: 16039-16041, или

все урациловые основания представляют собой 5-метилурацил, представленный одной из SEQ ID NO: 16105-16107, или

все цитозиновые основания представляют собой 5-метилцитозин и все урациловые основания представляют собой 5-метилурацил, представленный одной из SEQ ID NO: 16171-16173;

более предпочтительно, где все цитозиновые основания 5-метилированы, представленный одной из SEQ ID NO: 16039-16041;

если они представлены SEQ ID NO: 201:

SEQ ID NO: 15976, причем предпочтительно:

все цитозиновые основания представляют собой 5-метилцитозин, представленный SEQ ID NO: 16042, или

все урациловые основания представляют собой 5-метилурацил, представленный SEQ ID NO: 16108, или

все цитозиновые основания представляют собой 5-метилцитозин и все урациловые основания представляют собой 5-метилурацил, представленный SEQ ID NO: 16174;

более предпочтительно, где все цитозиновые основания и все урациловые основания 5-метилированы, как представлено SEQ ID NO: 16042.

Предпочтительно указанные первый и второй антисмысловые олигонуклеотиды соединения по настоящему изобретению отличаются, более предпочтительно нуклеотидные последовательности указанных первого и второго антисмысловых олигонуклеотидов представлены разными SEQ ID NO.

Указанный первый и/или второй олигонуклеотид соединения предпочтительно содержит по меньшей мере один 2'-O-замещенный мономер РНК и необязательно фосфотиоатную связь остова, более предпочтительно содержит или состоит из 2'-O-замещенных мономеров РНК, соединенных посредством фосфотиоатных связей остова, как ранее было указано в данном документе.

Таким образом, в более предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения, следовательно, представлено соединение, предпочтительно для пропуска экзона 51, содержащее или состоящее из первого и второго антисмысловых олигонуклеотидов, связанных между собой связывающим фрагментом, где указанный первый антисмысловой олигонуклеотид представлен нуклеотидной последовательностью, содержащей или состоящей из любого из

SEQ ID NO: 15911-15922, предпочтительно 15977-15988 (образованной из SEQ ID NO: 14), SEQ ID NO: 15923 или 15924, предпочтительно 15989 или 15990 (образованной из SEQ ID NO: 15), SEQ ID NO: 15925-15934, предпочтительно 15991-16000 (образованной из SEQ ID NO: 16), SEQ ID NO: 15935-15945, предпочтительно 16001-16011 (образованной из SEQ ID NO: 17), или 15946 или 15947, предпочтительно 16012 или 16013 (образованной из SEQ ID NO: 18), или

фрагмента любой из SEQ ID NO: 15911-15922, предпочтительно 15977-15988 (образованной из SEQ ID NO: 14), SEQ ID NO: 15923 или 15924, предпочтительно 15989 или 15990 (образованной из SEQ ID NO: 15), SEQ ID NO: 15925-15934, предпочтительно 15991-16000 (образованной из SEQ ID NO: 16), SEQ ID NO: 15935-15945, предпочтительно 16001-16011 (образованной из SEQ ID NO: 17), или 15946 или 15947, предпочтительно 16012 или 16013 (образованной из SEQ ID NO: 18), или

SEQ ID NO: 15911-15922, предпочтительно 15977-15988 (образованной из SEQ ID NO: 14), SEQ ID NO: 15923 или 15924, предпочтительно 15989 или 15990 (образованной из SEQ ID NO: 15), SEQ ID NO: 15925-15934, предпочтительно 15991-16000 (образованной из SEQ ID NO: 16), SEQ ID NO: 15935-15945, предпочтительно 16001-16011 (образованной из SEQ ID NO: 17), или 15946 или 15947, предпочтительно 16012 или 16013 (образованной из SEQ ID NO: 18) с 1, 2, 3, 4 или 5 дополнительными нуклеотидами, или

SEQ ID NO: 15911-15922, предпочтительно 15977-15988 (образованной из SEQ ID NO: 14), SEQ ID NO: 15923 или 15924, предпочтительно 15989 или 15990 (образованной из SEQ ID NO: 15), SEQ ID NO: 15925-15934, предпочтительно 15991-16000 (образованной из SEQ ID NO: 16), SEQ ID NO: 15935-15945, предпочтительно 16001-16011 (образованной из SEQ ID NO: 17), или 15946 или 15947, предпочтительно 16012 или 16013 (образованной из SEQ ID NO: 18) с 1, 2, 3, 4 или 5 нуклеотидами, отсутствующими в указанной SEQ ID NO, или

нуклеотидной последовательностью, которая по меньшей мере на 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или на 99%, предпочтительно по меньшей мере на 95%, более предпочтительно по меньшей мере на 97% идентична любой из SEQ ID NO: 15911-15922, предпочтительно 15977-15988 (образованной из SEQ ID NO: 14), SEQ ID NO: 15923 или 15924, предпочтительно 15989 или 15990 (образованной из SEQ ID NO: 15), SEQ ID NO: 15925-15934, предпочтительно 15991-16000 (образованной из SEQ ID NO: 16), SEQ ID NO: 15935-15945, предпочтительно 16001-16011 (образованной из SEQ ID NO: 17), или 15946 или 15947, предпочтительно 16012 или 16013 (образованной из SEQ ID NO: 18);

и/или где указанный второй антисмысловой олигонуклеотид представлен нуклеотидной последовательностью, содержащей или состоящей из любого из следующего:

SEQ ID NO: 15948-15962, предпочтительно 16014-16028 (образованной из SEQ ID NO: 198), SEQ ID NO: 15963-15972, предпочтительно 16029-16038 (образованной из SEQ ID NO: 199), SEQ ID NO: 15973-15975, предпочтительно 16039-16107 (образованной из SEQ ID NO: 200), или SEQ ID NO: 15976, предпочтительно 16042 (образованной из SEQ ID NO: 201), или

фрагмент любой из SEQ ID NO: 15948-15962, предпочтительно 16014-16028 (образованной из SEQ ID NO: 198), SEQ ID NO: 15963-15972, предпочтительно 16029-16038 (образованной из SEQ ID NO: 199), SEQ ID NO: 15973-15975, предпочтительно 16039-16107 (образованной из SEQ ID NO: 200), или SEQ ID NO: 15976, предпочтительно 16042 (образованной из SEQ ID NO: 201), или

SEQ ID NO: 15948-15962, предпочтительно 16014-16028 (образованной из SEQ ID NO: 198), SEQ ID NO: 15963-15972, предпочтительно 16029-16038 (образованной из SEQ ID NO: 199), SEQ ID NO: 15973-15975, предпочтительно 16039-16107 (образованной из SEQ ID NO: 200), или SEQ ID NO: 15976, предпочтительно 16042 (образованной из SEQ ID NO: 201) с 1, 2, 3, 4, или 5 дополнительных нуклеотидов, или

SEQ ID NO: 15948-15962, предпочтительно 16014-16028 (образованной из SEQ ID NO: 198), SEQ ID NO: 15963-15972, предпочтительно 16029-16038 (образованной из SEQ ID NO: 199), SEQ ID NO: 15973-15975, предпочтительно 16039-16107 (образованной из SEQ ID NO: 200), или SEQ ID NO: 15976, предпочтительно 16042 (образованной из SEQ ID NO: 201) с 1, 2, 3, 4, или 5 дополнительными нуклеотидами, отсутствующими в указанной SEQ ID NO, или

нуклеотидной последовательностью, которая по меньшей мере на 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или на 99%, предпочтительно по меньшей мере на 95%, более предпочтительно по меньшей мере на 97% идентична любой из SEQ ID NO: 15948-15962, предпочтительно 16014-16028 (образованной из SEQ ID NO: 198), SEQ ID NO: 15963-15972, предпочтительно 16029-16038 (образованной из SEQ ID NO: 199), SEQ ID NO: 15973-15975, предпочтительно 16039-16107 (образованной из SEQ ID NO: 200), или SEQ ID NO: 15976, предпочтительно 16042 (образованной из SEQ ID NO: 201),

причем указанный антисмысловой олигонуклеотид комплементарен, или связывается с, или нацеливается на, или гибридизуется с, или перекрывается по меньшей мере частью SEQ ID NO: 3, и причем указанный второй антисмысловой олигонуклеотид комплементарен, или связывается с, или нацеливается на, или гибридизуется с, или перекрывается по меньшей мере частью SEQ ID NO: 4, причем указанные SEQ ID NO: 3 и 4 расположены внутри экзона 51 пре-мРНК дистрофина.

Предпочтительно указанные первый и второй антисмысловые олигонуклеотиды соединения по настоящему изобретению отличаются, более предпочтительно нуклеотидные последовательности указанных первого и второго антисмысловых олигонуклеотидов представлены разными SEQ ID NO.

Указанные «1, 2, 3, 4 или 5 дополнительных нуклеотидов» могут присутствовать со стороны 5' и/или 3' приведенной SEQ ID NO.

Указанные «1, 2, 3, 4 или 5 отсутствующих нуклеотидов» могут представлять собой нуклеотиды, отсутствующие со стороны 5' и/или 3' приведенной SEQ ID NO.

Также в данном контексте допускается наличие 1 или 2 несоответствий в олигонуклеотиде из 20 нуклеотидов или 1-4 несоответствий в олигонуклеотиде из 40 нуклеотидов. В олигонуклеотиде из 10-33 нуклеотидов присутствуют 0, 1, 2 или 3 несоответствия, предпочтительно, присутствуют 0, 1 или 2 несоответствия, как ранее было указано в данном документе. В олигонуклеотиде из 16-22 нуклеотидов, может присутствовать 0, 1, 2 несоответствия, присутствует предпочтительно 0 или 1 несоответствие.

Указанный первый и/или второй олигонуклеотид соединения предпочтительно содержит по меньшей мере один 2'-O-замещенный мономер РНК и необязательно фосфотиоатную связь остова, более предпочтительно содержит или состоит из 2'-O-замещенных мономеров РНК, соединенных посредством фосфотиоатных связей остова, как ранее было указано в данном документе.

Таблица 1: Предпочтительная модифицированная BNA последовательность первого и/или второго антисмыслового олигонуклеотида соединения

Модифицированная BNA последовательность
(подчеркнутые нуклеотиды содержат BNA, предпочтительно LNA) Образовано из немодифицированной последовательности Экзон 51 ESE 1 (SEQ ID NO: 3) GGUAAGUUCUGUCCAAGC (SEQ ID NO: 15911)
GGUAAGUUCTGUCCAAGC (SEQ ID NO: 15912)
GGUAAGUUCUGUCCAAGC (SEQ ID NO: 15913)
GGUAAGUUCUGUCCAAGC (SEQ ID NO: 15914)
GGUAAGUUCUGUCCAAGC (SEQ ID NO: 15915)
GGUAAGUUCUGUCCAAGC (SEQ ID NO: 15916)
GGUAAGUUCUGUCCAAGC (SEQ ID NO: 15917)
GGUAAGUUCUGUCCAAGC (SEQ ID NO: 15918)
GGUAAGUUCUGUCCAAGC (SEQ ID NO: 15919)
GGUAAGUUCUGUCCAAGC (SEQ ID NO: 15920)
GGUAAGUUCUGUCCAAGC (SEQ ID NO: 15921)
GGUAAGUUCUGUCCAAGC (SEQ ID NO: 15922)
GUAAGUUCUGUCCAAGCC (SEQ ID NO: 15923)
GUAAGUUCUGUCCAAGCC (SEQ ID NO: 15924)
AGUCGGUAAGUUCUGUCC (SEQ ID NO: 15925)
AGUCGGUAAGUUCUGUCC (SEQ ID NO: 15926)
AGUCGGUAAGUUCUGUCC (SEQ ID NO: 15927)
AGUCGGUAAGUUCUGUCC (SEQ ID NO: 15928)
AGUCGGUAAGUUCUGUCC (SEQ ID NO: 15929)
AGUCGGUAAGUUCUGUCC (SEQ ID NO: 15930)
AGUCGGUAAGUUCUGUCC (SEQ ID NO: 15931)
AGUCGGUAAGUUCUGUCC (SEQ ID NO: 15932)
AGUCGGUAAGUUCUGUCC (SEQ ID NO: 15933)
AGUCGGUAAGUUCUGUCC (SEQ ID NO: 15934)
CUGUCCAAGCCCGGUUGA (SEQ ID NO: 15935)
CUGUCCAAGCCCGGUUGA (SEQ ID NO: 15936)
CUGUCCAAGCCCGGUUGA (SEQ ID NO: 15937)
CUGUCCAAGCCCGGUUGA (SEQ ID NO: 15938)
CUGUCCAAGCCCGGUUGA (SEQ ID NO: 15939)
CUGUCCAAGCCCGGUUGA (SEQ ID NO: 15940)
CUGUCCAAGCCCGGUUGA (SEQ ID NO: 15941)
CUGUCCAAGCCCGGUUGA (SEQ ID NO: 15942)
CUGUCCAAGCCCGGUUGA (SEQ ID NO: 15943)
CUGUCCAAGCCCGGUUGA (SEQ ID NO: 15944)
CUGUCCAAGCCCGGUUGA (SEQ ID NO: 15945)
TAAGUUCUGUCCAAG (SEQ ID NO: 15946)
TAAGUUCUGUCCAAG (SEQ ID NO: 15947) SEQ ID NO: 14
SEQ ID NO: 14
SEQ ID NO: 14
SEQ ID NO: 14
SEQ ID NO: 14
SEQ ID NO: 14
SEQ ID NO: 14
SEQ ID NO: 14
SEQ ID NO: 14
SEQ ID NO: 14
SEQ ID NO: 14
SEQ ID NO: 14
SEQ ID NO: 15
SEQ ID NO: 15
SEQ ID NO: 16
SEQ ID NO: 16
SEQ ID NO: 16
SEQ ID NO: 16
SEQ ID NO: 16
SEQ ID NO: 16
SEQ ID NO: 16
SEQ ID NO: 16
SEQ ID NO: 16
SEQ ID NO: 16
SEQ ID NO: 17
SEQ ID NO: 17
SEQ ID NO: 17
SEQ ID NO: 17
SEQ ID NO: 17
SEQ ID NO: 17
SEQ ID NO: 17
SEQ ID NO: 17
SEQ ID NO: 17
SEQ ID NO: 17
SEQ ID NO: 17
SEQ ID NO: 18
SEQ ID NO: 18 ESE 2
(SEQ ID NO: 4) TCAAGGAAGAUGGCAUUUCU (SEQ ID NO: 15948)
UCAAGGAAGAUGGCAUUUCU (SEQ ID NO: 15949)
TCAAGGAAGAUGGCAUUUCT (SEQ ID NO: 15950)
TCAAGGAAGAUGGCAUUUCU (SEQ ID NO: 15951)
TCAAGGAAGAUGGCAUUUCU (SEQ ID NO: 15952)
TCAAGGAAGAUGGCAUUUCT (SEQ ID NO: 15953)
TCAAGGAAGAUGGCAUUUCT (SEQ ID NO: 15954)
TCAAGGAAGAUGGCAUUUCT (SEQ ID NO: 15955)
TCAAGGAAGAUGGCAUUUCT (SEQ ID NO: 15956)
TCAAGGAAGATGGCAUUUCT (SEQ ID NO: 15957)
TCAAGGAAGAUGGCAUUUCT (SEQ ID NO: 15958)
TCAAGGAAGAUGGCAUUUCT (SEQ ID NO: 15959)
TCAAGGAAGAUGGCAUUUCT (SEQ ID NO: 15960)
TCAAGGAAGAUGGCAUUUCT (SEQ ID NO: 15961)
TCAAGGAAGAUGGCAUUUCT (SEQ ID NO: 15962)
TCAAGGAAGAUGGCAUUUCUAG (SEQ ID NO: 15963)
TCAAGGAAGAUGGCAUUUCUAG (SEQ ID NO: 15964)
TCAAGGAAGAUGGCAUUUCUAG (SEQ ID NO: 15965)
TCAAGGAAGAUGGCAUUUCUAG (SEQ ID NO: 15966)
TCAAGGAAGAUGGCAUUUCUAG (SEQ ID NO: 15967)
TCAAGGAAGAUGGCAUUUCUAG (SEQ ID NO: 15968)
TCAAGGAAGAUGGCAUUUCUAG (SEQ ID NO: 15969)
TCAAGGAAGAUGGCAUUUCUAG (SEQ ID NO: 15970)
TCAAGGAAGAUGGCAUUUCUAG (SEQ ID NO: 15971)
TCAAGGAAGAUGGCAUUUCUAG (SEQ ID NO: 15972)
TCAAGGAAGAUGGCAT (SEQ ID NO: 15973)
TCAAGGAAGAUGGCAT (SEQ ID NO: 15974)
UCAAGGAAGAUGGCAU (SEQ ID NO: 15975)
GAAGAUGGCAUUUCT (SEQ ID NO: 15976) SEQ ID NO: 198
SEQ ID NO: 198
SEQ ID NO: 198
SEQ ID NO: 198
SEQ ID NO: 198
SEQ ID NO: 198
SEQ ID NO: 198
SEQ ID NO: 198
SEQ ID NO: 198
SEQ ID NO: 198
SEQ ID NO: 198
SEQ ID NO: 198
SEQ ID NO: 198
SEQ ID NO: 198
SEQ ID NO: 198
SEQ ID NO: 199
SEQ ID NO: 199
SEQ ID NO: 199
SEQ ID NO: 199
SEQ ID NO: 199
SEQ ID NO: 199
SEQ ID NO: 199
SEQ ID NO: 199
SEQ ID NO: 199
SEQ ID NO: 199
SEQ ID NO: 200
SEQ ID NO: 200
SEQ ID NO: 200
SEQ ID NO: 201

Таблица 2: Более предпочтительная модифицированная BNA последовательность первого и/или второго антисмыслового олигонуклеотида соединения

Модифицированная BNA последовательность
(подчеркнутые нуклеотиды содержат BNA, предпочтительно LNA;
C* = 5mC; U* = 5mU=T) Образовано из немодифицированной последовательности Экзон 51 ESE 1
(SEQ ID NO: 3) GGUAAGUUC*UGUC*C*AAGC* (SEQ ID NO: 15977)
GGUAAGUUC*TGUC*C*AAGC* (SEQ ID NO: 15978)
GGUAAGUUC*UGUC*C*AAGC* (SEQ ID NO: 15979)
GGUAAGUUC*UGUC*C*AAGC* (SEQ ID NO: 15980)
GGUAAGUUC*UGUC*C*AAGC* (SEQ ID NO: 15981)
GGUAAGUUC*UGUC*C*AAGC* (SEQ ID NO: 15982)
GGUAAGUUC*UGUC*C*AAGC* (SEQ ID NO: 15983)
GGUAAGUUC*UGUC*C*AAGC* (SEQ ID NO: 15984)
GGUAAGUUC*UGUC*C*AAGC* (SEQ ID NO: 15985)
GGUAAGUUC*UGUC*C*AAGC* (SEQ ID NO: 15986)
GGUAAGUUC*UGUC*C*AAGC* (SEQ ID NO: 15987)
GGUAAGUUC*UGUC*C*AAGC* (SEQ ID NO: 15988)
GUAAGUUC*UGUC*C*AAGC*C* (SEQ ID NO: 15989)
GUAAGUUC*UGUC*C*AAGC*C* (SEQ ID NO: 15990)
AGUC*GGUAAGUUC*UGUC*C* (SEQ ID NO: 15991)
AGUC*GGUAAGUUC*UGUC*C* (SEQ ID NO: 15992)
AGUC*GGUAAGUUC*UGUC*C* (SEQ ID NO: 15993)
AGUC*GGUAAGUUC*UGUC*C* (SEQ ID NO: 15994)
AGUC*GGUAAGUUC*UGUC*C* (SEQ ID NO: 15995)
AGUC*GGUAAGUUC*UGUC*C* (SEQ ID NO: 15996)
AGUC*GGUAAGUUC*UGUC*C* (SEQ ID NO: 15997)
AGUC*GGUAAGUUC*UGUC*C* (SEQ ID NO: 15998)
AGUC*GGUAAGUUC*UGUC*C* (SEQ ID NO: 15999)
AGUC*GGUAAGUUC*UGUC*C* (SEQ ID NO: 16000)
C*UGUC*C*AAGC*C*C*GGUUGA (SEQ ID NO: 16001)
C*UGUC*C*AAGC*C*C*GGUUGA (SEQ ID NO: 16002)
C*UGUC*C*AAGC*C*C*GGUUGA (SEQ ID NO: 16003)
C*UGUC*C*AAGC*C*C*GGUUGA (SEQ ID NO: 16004)
C*UGUC*C*AAGC*C*C*GGUUGA (SEQ ID NO: 16005)
C*UGUC*C*AAGC*C*C*GGUUGA (SEQ ID NO: 16006)
C*UGUC*C*AAGC*C*C*GGUUGA (SEQ ID NO: 16007)
C*UGUC*C*AAGC*C*C*GGUUGA (SEQ ID NO: 16008)
C*UGUC*C*AAGC*C*C*GGUUGA (SEQ ID NO: 16009)
C*UGUC*C*AAGC*C*C*GGUUGA (SEQ ID NO: 16010)
C*UGUC*C*AAGC*C*C*GGUUGA (SEQ ID NO: 16011)
TAAGUUC*UGUC*C*AAG (SEQ ID NO: 16012)
TAAGUUC*UGUC*C*AAG (SEQ ID NO: 16013) SEQ ID NO: 14
SEQ ID NO: 14
SEQ ID NO: 14
SEQ ID NO: 14
SEQ ID NO: 14
SEQ ID NO: 14
SEQ ID NO: 14
SEQ ID NO: 14
SEQ ID NO: 14
SEQ ID NO: 14
SEQ ID NO: 14
SEQ ID NO: 14
SEQ ID NO: 15
SEQ ID NO: 15
SEQ ID NO: 16
SEQ ID NO: 16
SEQ ID NO: 16
SEQ ID NO: 16
SEQ ID NO: 16
SEQ ID NO: 16
SEQ ID NO: 16
SEQ ID NO: 16
SEQ ID NO: 16
SEQ ID NO: 16
SEQ ID NO: 17
SEQ ID NO: 17
SEQ ID NO: 17
SEQ ID NO: 17
SEQ ID NO: 17
SEQ ID NO: 17
SEQ ID NO: 17
SEQ ID NO: 17
SEQ ID NO: 17
SEQ ID NO: 17
SEQ ID NO: 17
SEQ ID NO: 18
SEQ ID NO: 18 ESE 2 (SEQ ID NO: 4) TC*AAGGAAGAUGGC*AUUUC*U (SEQ ID NO: 16014)
UC*AAGGAAGAUGGC*AUUUC*U (SEQ ID NO: 16015)
TC*AAGGAAGAUGGC*AUUUC*T (SEQ ID NO: 16016)
TC*AAGGAAGAUGGC*AUUUC*U (SEQ ID NO: 16017)
TC*AAGGAAGAUGGC*AUUUC*U (SEQ ID NO: 16018)
TC*AAGGAAGAUGGC*AUUUC*T (SEQ ID NO: 16019)
TC*AAGGAAGAUGGC*AUUUC*T (SEQ ID NO: 16020)
TC*AAGGAAGAUGGC*AUUUC*T (SEQ ID NO: 16021)
TC*AAGGAAGAUGGC*AUUUC*T (SEQ ID NO: 16022)
TC*AAGGAAGATGGC*AUUUC*T (SEQ ID NO: 16023)
TC*AAGGAAGAUGGC*AUUUC*T (SEQ ID NO: 16024)
TC*AAGGAAGAUGGC*AUUUC*T (SEQ ID NO: 16025)
TC*AAGGAAGAUGGC*AUUUC*T (SEQ ID NO: 16026)
TC*AAGGAAGAUGGC*AUUUC*T (SEQ ID NO: 16027)
TC*AAGGAAGAUGGC*AUUUC*T (SEQ ID NO: 16028)
TC*AAGGAAGAUGGC*AUUUC*UAG (SEQ ID NO: 16029)
TC*AAGGAAGAUGGC*AUUUC*UAG (SEQ ID NO: 16030)
TC*AAGGAAGAUGGC*AUUUC*UAG (SEQ ID NO: 16031)
TC*AAGGAAGAUGGC*AUUUC*UAG (SEQ ID NO: 16032)
TC*AAGGAAGAUGGC*AUUUC*UAG (SEQ ID NO: 16033)
TC*AAGGAAGAUGGC*AUUUC*UAG (SEQ ID NO: 16034)
TC*AAGGAAGAUGGC*AUUUC*UAG (SEQ ID NO: 16035)
TC*AAGGAAGAUGGC*AUUUC*UAG (SEQ ID NO: 16036)
TC*AAGGAAGAUGGC*AUUUC*UAG (SEQ ID NO: 16037)
TC*AAGGAAGAUGGC*AUUUC*UAG (SEQ ID NO: 16038)
TC*AAGGAAGAUGGC*AT (SEQ ID NO: 16039)
TC*AAGGAAGAUGGC*AT (SEQ ID NO: 16040)
TC*AAGGAAGAUGGC*AU (SEQ ID NO: 16041)
GAAGAUGGC*AUUUC*T (SEQ ID NO: 16042) SEQ ID NO: 198
SEQ ID NO: 198
SEQ ID NO: 198
SEQ ID NO: 198
SEQ ID NO: 198
SEQ ID NO: 198
SEQ ID NO: 198
SEQ ID NO: 198
SEQ ID NO: 198
SEQ ID NO: 198
SEQ ID NO: 198
SEQ ID NO: 198
SEQ ID NO: 198
SEQ ID NO: 198
SEQ ID NO: 198
SEQ ID NO: 199
SEQ ID NO: 199
SEQ ID NO: 199
SEQ ID NO: 199
SEQ ID NO: 199
SEQ ID NO: 199
SEQ ID NO: 199
SEQ ID NO: 199
SEQ ID NO: 199
SEQ ID NO: 199
SEQ ID NO: 200
SEQ ID NO: 200
SEQ ID NO: 200
SEQ ID NO: 201

Таким образом, в более предпочтительном варианте осуществления соединение по настоящему изобретению предпочтительно предназначено для пропуска экзона 51 пре-мРНК дистрофина, и содержит или состоит из первого антисмыслового олигонуклеотида, представленного нуклеотидной последовательностью, содержащей или состоящей из SEQ ID NO: 15980, 16145 или 16144, более предпочтительно SEQ ID NO: 15980, и второго антисмыслового олигонуклеотида, представленного нуклеотидной последовательностью, содержащей или состоящей из SEQ ID NO: 16026, 16174, 16172 или 16171, более предпочтительно SEQ ID NO: 16026, причем указанные первый и второй антисмысловые олигонуклеотиды соединены между собой посредством связывающего фрагмента (как описано в разделе под названием «Связывающий фрагмент»), предпочтительно указанный связывающий фрагмент представляет собой триэтиленгликоль (TEG) или гексаэтиленгликоль (HEG).

Указанная SEQ ID NO: 15980 представлена последовательностью GGUAAGUUC*UGUC*C*AAGC*, указанная SEQ ID NO: 16145 представлена последовательностью TAAGTTC*TGTC*C*AAG, указанная SEQ ID NO: 16144 представлена последовательностью TAAGTTC*TGTC*C*AAG, указанная SEQ ID NO: 16026 представлена последовательностью TC*AAGGAAGAUGGC*AUUUC*T, указанная SEQ ID NO: 16174 представлена последовательностью GAAGATGGC*ATTTC*T, указанная SEQ ID NO: 16172 представлена последовательностью TC*AAGGAAGATGGC*AT и указанная SEQ ID NO: 16171 представлена последовательностью TC*AAGGAAGATGGC*AT, где C* представляет собой 5-метилцитозин и T представляет собой 5-метилурацил.

В контексте настоящего изобретения положения указанного первого и второго антисмысловых олигонуклеотидов в соединении по настоящему изобретению являются взаимозаменяемыми. Таким образом, предпочтительное соединение по настоящему изобретению может быть представлено

SEQ ID NO: 16335 (GGUAAGUUC*UGUC*C*AAGC*n TC*AAGGAAGAUGGC*AUUUC*T) или SEQ ID NO: 16336 (TC*AAGGAAGAUGGC*AUUUC*TnGGUAAGUUC*UGUC*C*AAGC*), причем связывающий фрагмент, представленный n, представляет собой линкер TEG, или

SEQ ID NO: 16337 (GGUAAGUUC*UGUC*C*AAGC*nTC*AAGGAAGAUGGC*AUUUC*T) или SEQ ID NO: 16338 (TC*AAGGAAGAUGGC*AUUUC*TnGGUAAGUUC*UGUC*C*AAGC*), причем связывающий фрагмент, представленный n, представляет собой линкер HEG, или

SEQ ID NO: 16339 (TAAGTTC*TGTC*C*AAGnGAAGATGGC*ATTTC*T) или SEQ ID NO: 16340 (GAAGATGGC*ATTTC*TnTAAGTTC*TGTC*C*AAG), причем связывающий фрагмент, представленный n, представляет собой линкер TEG, или

SEQ ID NO: 16341 (TAAGTTC*TGTC*C*AAGnGAAGATGGC*ATTTC*T) или SEQ ID NO: 16342 (GAAGATGGC*ATTTC*TnTAAGTTC*TGTC*C*AAG), причем связывающий фрагмент, представленный n, представляет собой линкер HEG, или

SEQ ID NO: 16343 (TAAGTTC*TGTC*C*AAGnTC*AAGGAAGATGGC*AT) или SEQ ID NO: 16344 (TC*AAGGAAGATGGC*ATnTAAGTTC*TGTC*C*AAG), причем связывающий фрагмент, представленный n, представляет собой линкер TEG, или

SEQ ID NO: 16345 (TAAGTTC*TGTC*C*AAGnTC*AAGGAAGATGGC*AT) или SEQ ID NO: 16346 (TC*AAGGAAGATGGC*ATnTAAGTTC*TGTC*C*AAG), причем связывающий фрагмент, представленный n, представляет собой линкер HEG, или

SEQ ID NO: 16347 (TAAGTTC*TGTC*C*AAGnTC*AAGGAAGATGGC*AT) или SEQ ID NO: 16348 (TC*AAGGAAGATGGC*ATnTAAGTTC*TGTC*C*AAG), причем связывающий фрагмент, представленный n, представляет собой линкер TEG, или

SEQ ID NO: 16349 (TAAGTTC*TGTC*C*AAGnTC*AAGGAAGATGGC*AT) или SEQ ID NO: 16350 (TC*AAGGAAGATGGC*ATnTAAGTTC*TGTC*C*AAG), причем связывающий фрагмент, представленный n, представляет собой линкер HEG.

Еще более предпочтительное соединение по настоящему изобретению представлено SEQ ID NO: 16335 или 16336 (линкер TEG) или SEQ ID NO: 16337 или 16338 (линкер HEG).

В предпочтительных вариантах соединение по настоящему изобретению представляет собой соединение, где указанное соединение имеет улучшенный параметр по сравнением с соответствующей смесью указанного первого и второго антисмысловых олигонуклеотидов, соединенного в указанном соединении (в соединении указанный первый и второй антисмысловые олигонуклеотиды соединены между собой посредством связывающего фрагмента, тогда как в смеси указанных первого и второго антисмысловых олигонуклеотидов не соединены между собой), предпочтительно где концентрация указанного первого и второго антисмысловых олигонуклеотидов в смеси является такой же, что и в соединении по настоящему изобретению. В других предпочтительных вариантах осуществления соединение по настоящему изобретению представляет собой соединение, причем соединение имеет улучшенный параметр по сравнению с Дрисаперсен (SEQ ID NO: 7, т.е. UCAAGGAAGAUGGCAUUUCU, причем каждый мономер РНК является 2-O-метилированным и причем весь остов представляет собой фосфотиоат) и/или Этеплирсен (SEQ ID NO: 8, т.е. CTCCAACATCAAGGAAGATGGCATTTCTAG, причем каждый мономер модифицирован с образованием фосфодиамидат-морфолино олигомера).

В данном контексте параметры могут включать аффинность связывания и/или кинетику, активность пропуска экзона, биологическую стабильность, (внутритканевое) распределение, клеточное поглощение и/или транспортировку, и/или иммуногенность. Предпочтительно указанные улучшенные параметры представляют собой активность пропуска экзона.

Активность пропуска экзона предпочтительно измеряют посредством анализа общей РНК, выделенной из обработанных соединением/смесью мышечных клеточных культур или мышечной ткани посредством количественной полимеразной цепной реакции с обратной транскриптазой или цифровой капельной полимеразной цепной реакции (ОТ-кПЦР или ОТ-цкПЦР) с использованием специфичных к гену DMD праймеров, фланкирующих нацеленный экзон, как описано ранее (Spitali et al., 2013, Verheul et al., 2016). Оценивают отношение более коротких фрагментов транскрипта, представляющих транскрипты, в которых пропущен целевой экзон, к общему количеству продуктов транскрипта (рассчитывается как процент пропусков экзона, индуцированных олигонуклеотидом). Более короткие фрагменты также могут быть секвенированы для определения корректности и специфичности пропущенного целевого экзона.

В некоторых вариантах осуществления активность модуляции РНК может представлять собой повышение или снижение количества нуклеиновой кислоты или белка. В определенных вариантах осуществления такая активность может представлять собой изменение отношения вариантов сплайсинга нуклеиновой кислоты или белка. Обнаружение и/или измерение антисмысловой активности может быть прямым или непрямым. В определенных вариантах осуществления антисмысловую активность оценивают посредством наблюдения фенотипического изменения в клетке или животном.

В контексте данного документа и как объяснено выше, «модуляция» может относиться к изменению количества или качества функции или активности по сравнению с функцией или активностью до модуляции. Например, модуляция включает изменение, либо увеличение (стимуляцию или индукцию), либо уменьшение (ингибирование или уменьшение) мРНК дистрофина или белка, как определено ранее в данном документе. В качестве следующего примера, модуляция экспрессии может включать выбор, изменяющий сайт сплайсинга для процессинга пре-мРНК, что приводит к изменению количества присутствующего конкретного варианта сплайсинга по сравнению с условиями, которые не были нарушены.

Биораспределение и биологическая стабильность предпочтительно по меньшей мере частично определены посредством утвержденного анализа контактной гибридизации, на основе материалов Straarup et al., 2010. В одном варианте осуществления образцы плазмы или гомогенизированной ткани инкубируют со специфическим улавливающим олигонуклеотидным зондом, комплементарным части анализируемого вещества AON. После разделения меченный DIG олигонуклеотидный зонд гибридизуется с другой частью анализируемого вещества AON, и следует количественное определение с использованием пероксидазы, связанной с антителами к DIG. Содержание олигонуклеотидов в плазме (мкг/мл) контролируется с течением времени для оценки максимальной концентрации (C_max), времени достижения максимальной концентрации (T_max), площади под кривой (AUC) и периода полужизни. Концентрации образца ткани в конце исследования (мкг/г ткани) измеряют для оценки распределения в тканях. Некомпартментный фармакокинетический анализ выполняют с использованием программного пакета Phoenix (модуль WinNonlin, версия 6.4, Pharsight, Mountainview, CA).

Соответственно, предпочтительное соединение по настоящему изобретению имеет улучшенный параметр, например, приемлемую или пониженную иммуногенность, и/или улучшенное биораспределение, и/или приемлемую или улучшенную кинетику связывания РНК, и/или термодинамические свойства, посредством сравнения соответствующей смеси указанного первого и второго антисмысловых олигонуклеотидов, связанных с указанным соединением, причем указанная смесь отличается от соединения по настоящему изобретению только отсутствием связывающего фрагмента (связывающего оба AON в соединении по настоящему изобретению), т.е. первый и второй антисмысловые олигонуклеотиды в смеси имеют ту же последовательность и так же модифицированы, что и первый и второй антисмысловые олигонуклеотиды соединения по настоящему изобретению. Каждый из данных параметров можно оценивать с использованием анализов, известных специалисту, или предпочтительно, как описано в данном документе.

Дальнейшие химические модификации первого и/или второго антисмыслового олигонуклеотида соединения

В контексте настоящего изобретения следует понимать, что олигонуклеотид, содержащий или состоящий из любой химической модификации, или любой их комбинации, как описано в данном разделе («Дальнейшие химические модификации первого и/или второго антисмыслового олигонуклеотида соединения») обладает активностью пропуска экзона, которая по меньшей мере является такой же удовлетворительной, что и его аналог без данных модификаций, как описано выше в разделе «Первый и второй антисмысловой олигонуклеотид соединения» и/или «Химические модификации первого и/или второго антисмыслового олигонуклеотида соединения», предпочтительно указанная активность пропуска экзона является более высокой, чем указанного аналога без данных модификаций. Таким образом, соединение по настоящему изобретению, в котором указанный первый и/или второй антисмысловой олигонуклеотид содержит или состоит из любой химической модификации, или любой их комбинации, описанных в данном разделе («Химические модификации первого и/или второго антисмыслового олигонуклеотида соединения») обладает активностью пропуска экзона, которая по меньшей мере не уступает указанному соединению без указанной химической модификации или их комбинации. Предпочтительно, указанная активность пропуска экзона является более высокой, чем у одного указанного соединения без указанной химической модификации или их комбинации.

Ниже определены другие химические структуры и модификации первого и/или второго антисмыслового олигонуклеотида соединения по настоящему изобретению. Данные дополнительные химические структуры и модификации могут присутствовать в комбинации с химическими составами, уже определенными для указанного первого и/или второго олигонуклеотида, т.е. включающего или состоящего по меньшей мере из одного 2'-замещенного мономера с необязательными фосфотиоатными связями остова, с 5-метилцитозином и/или 5-метилурацилом или без них, и/или в присутствии по меньшей мере 1 модификации каркаса BNA.

В дополнение к данным модификациям, описанным выше, первый и/или второй олигонуклеотид соединения по настоящему изобретению может содержать дополнительные модификации, такие как различные типы мономеров нуклеиновой кислоты или нуклеотидов, как описано ниже. Различные типы мономеров нуклеиновой кислоты можно применять для получения указанного первого и/или второго олигонуклеотида. Указанный первый и/или второй олигонуклеотид может иметь по меньшей мере один остов, и/или модификацию каркаса, и/или по меньшей мере одну модификацию основания по сравнению с олигонуклеотидом на основе РНК.

Модификация основания может включать модифицированную версию природных пуриновых и пиримидиновых оснований (таких как, аденин, урацил, гуанин, цитозин и тимин), например, гипоксантин, псевдоурацил, псевдоцитозин, 1-метилпсевдоурацил, оротовая кислота, агматидин, лизидин, 2-тиопиримидин (например, 2-тиоурацил, 2-тиотимин), G-фиксирующее основание и его производные, 5-замещенный пиримидин (например, 5-галогенурацил, 5-галогенметилурацил, 5-трифторметилурацил, 5-пропинилурацил, 5-пропинилцитозин, 5-аминометилурацил, 5-гидроксиметилурацил, 5-аминометилцитозин, 5-гидроксиметилцитозин, супер-Т или как описано, например, Kumar et al. J. Org. Chem. 2014, 79, 5047; Leszczynska et al. Org. Biol. Chem. 2014, 12, 1052), пиразоло[1,5-a]-1,3,5-триазин-C-нуклеозида (как, например, в Lefoix et al. J. Org. Chem. 2014, 79, 3221), 7-деазагуанин, 7-деазааденин, 7-аза-2,6-диаминопурин, 8-аза-7-деазагуанин, 8-аза-7-деазааденин, 8-аза-7-деаза-2,6-диаминопурин, супер-G, супер-A, борсодержащий цитозин (как, например, в Nizioł et al. Bioorg. Med. Chem. 2014, 22, 3906), псевдоизоцитидин, C(Pyc) (как, например, в Yamada et al. Org. Biomol. Chem. 2014, 12, 2255) и N4-этилцитозин, или их производные; N²-циклопентилгуанин (cPent-G), N²-циклопентил-2-аминопурин (cPent-AP), и N²-пропил-2-аминопурин (Pr-AP), модифицированный углеводородом урацил (как, например, в Kaura et al. Org. Lett. 2014, 16, 3308), модифицированный аминокислотой урацил (как, например, в Guenther et al. Chem. Commun. 2014, 50, 9007); или их производные; и вырожденные или универсальные основания, как 2,6-дифтортолуол, или отсутствующие основания, как участки с удаленными азотистыми основаниями (например 1-деоксирибоза, 1,2-дидеоксирибоза, 1-деокси-2-O-метилрибоза; или производные пирролидина, в которых кольцевой кислород был замещен азотом (азарибоза)). Примеры производных супер-A, супер-G и супер-T можно найти в патенте США 6683173 (Epoch Biosciences), включенном в данный документ посредством ссылки во всей своей полноте. Было показано, что cPent-G, cPent-AP и Pr-AP снижают иммуностимулирующие эффекты при введении в siRNA (Peacock H. et al. J. Am. Chem. Soc. 2011, 133, 9200). Примеры модифицированных оснований описаны, например, в WO2014/093924 (ModeRNA).

В зависимости от длины, указанный первый и/или второй олигонуклеотид соединения по настоящему изобретению могут содержать или состоять из 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 34, 35, 36 или 37 модификаций основания. Настоящее изобретение также охватывает введение более одной отдельной модификации основания в указанный первый и/или второй олигонуклеотид.

Помимо модификаций каркаса BNA, описанных ранее, модификация каркаса может включать модифицированную версию рибозильного фрагмента, например, 2'-O-модифицированную РНК, такую как 2'-O-алкил или 2'-O-(замещенный)алкил, например, 2'-O-метил, 2'-O-(2-цианоэтил), 2'-O-(2-метокси)этил (2'-MOE), 2'-O-(2-тиометил)этил, 2'-O-бутирил, 2'-O-пропаргил, 2'-O-ацеталевый эфир (как, например, в Biscans et al. Bioorg. Med. Chem. 2015, 23, 5360), 2'-O-аллил, 2'-O-(2S-метоксипропил), 2'-O-(N-(аминоэтил)карбамоил)метил) (2'-AECM), 2'-O-(2-карбоксиэтил) и карбамоильные производные (Yamada et al. Org. Biomol. Chem. 2014, 12, 6457), 2'-O-(2-амино)пропил, 2'-O-(2-(диметиламино)пропил), 2'-O-(2-амино)этил, 2'-O-(2-(диметиламино)этил); 2'-деокси (ДНК); 2'-O-(галогеналкокси)метил (Arai K. et al. Bioorg. Med. Chem. 2011, 21, 6285) например, 2'-O-(2-хлорэтокси)метил (MCEM), 2'-O-(2,2-дихлорэтокси)метил (DCEM); 2'-O-алкоксикарбонил например, 2'-O-[2-(метоксикарбонил)этил] (MOCE), 2'-O-[2-(N-метилкарбамоил)этил] (MCE), 2'-O-[2-(N, N-диметилкарбамоил)этил] (DCME), 2'-O-[2-(метилтио)этил] (2'-MTE), 2'-(ω-O-серинод); 2'-галоген например, 2'-F, FANA (2'-F арабинозилнуклеиновая кислота); 2',4'-дифтор-2'-деокси; карбосахарные и азасахарные модификации; 3'-O-замещенный, например, 3'-O-метил, 3'-O-бутирил, 3'-O-пропаргил; 4'-замещенный например, 4'-аминометил-2'-O-метил или 4'-аминометил-2'-фтор; 5'-замещенный, например, 5'-метил или CNA (Ostergaard et al. ACS Chem. Biol. 2014, 22, 6227); и их производные.

В зависимости от длины, указанный первый и/или второй олигонуклеотид соединения по настоящему изобретению могут содержать или состоять из 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35 или 36 модификаций каркаса помимо по меньшей мере 1 модификации каркаса BNA. Настоящее изобретение также охватывает введение более одной отдельной модификации каркаса в указанный первый и/или второй олигонуклеотид.

Другие модификации включают незакрытую нуклеиновую кислоту (UNA); циклогексенилнуклеиновую кислоту (CeNA), F-CeNA, циклогексанилнуклеиновую кислоту (CNA), рибо-циклогексанилнуклеиновую кислоту (r-CNA), альтритолнуклеиновую кислоту (ANA), гекситолнуклеиновую кислоту (HNA), фторированную HNA (F-HNA), пиранозил-РНК (p-RNA), 3'-деоксипиранозил-ДНК (p-DNA); и их производные. Примеры аналогов фторированной нуклеиновой кислоты с фуранозными и нефуранозными кольцами сахара охватываются и описаны, например, в Østergaard et al. J. Org. Chem. 2014, 79, 8877.

В зависимости от длины, указанный первый и/или второй олигонуклеотид соединения по настоящему изобретению могут содержать или состоять из 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36 или 37 модификаций каркаса помимо по меньшей мере 1 модификации каркаса BNA. В предпочтительном варианте осуществления первый и/или второй олигонуклеотид соединения по настоящему изобретению полностью модифицирован 2'-O-метилом и содержит 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 или 9 модификаций каркаса BNA.

Первый и/или второй олигонуклеотид соединения по настоящему изобретению может содержать модификации связей остова. Модификация связей остова может представлять собой без ограничения модифицированную версию сложного фосфодиэфира, присутствующего в РНК, например, фосфотиоат (PS), хирально чистый фосфотиоат, фосфодитиоат (PS2), фосфоноацетат (PACE), фосфоноацетамид (PACA), тиофосфоноацетат (тио-PACE), тиофосфоноацетамид, пролекарство на основе фосфотиоата, H-фосфонат, метилфосфонат, метилфосфонотиоат, метилфосфат, метилфосфотиоат, этилфосфат, этилфосфотиоат, боранофосфат, боранофосфотиоат, метилборанофосфат, метилборанофосфотиоат, метилборанофосфонат, метилборанофосфонотиоат, фосфат, фосфотриэфир, аминоалкилфосфотриэфир и их производные. Другая модификация включает фосфорамидит, фосфорамидат, N3'→P5' фосфорамидат, фосфордиамидат, фосфорoтиодиамидат, сульфамат, диметиленсульфоксид, амид, сульфонат, силоксан, сульфид, сульфон, формацетил, тиоформацетил, метиленформацетил, алкенил, метиленгидразино, сульфонамид, амид, триазол, оксалил, карбамат, метиленимино (MMI) и тиоацетамидонуклеиновую кислоту (TANA); и их производные. Примеры хирально чистых фосфотиоатных связей описаны, например, в WO2014/010250 (WaVe Life Sciences). Также включены различные соли, смешанные соли и формы свободной кислоты, а также связи 3'→3' и 2'→5'.

В зависимости от длины, указанный первый и/или второй олигонуклеотид соединения по настоящему изобретению могут содержать или состоять из 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36 или 37 модификаций связей остова. Также настоящее изобретение охватывает включение более одной отличной от модификации остова в указанном олигонуклеотиде.

В предпочтительном варианте осуществления указанный первый и/или второй олигонуклеотид соединения по настоящему изобретению содержит по меньшей мере одну фосфотиоатную модификацию. В более предпочтительном варианте осуществления указанный первый и/или второй олигонуклеотид соединения по настоящему изобретению представляет собой полностью модифицированный фосфотиоат. В другом предпочтительном варианте осуществления, указанный первый и/или второй олигонуклеотид соединения по настоящему изобретению содержит по меньшей мере один фосфат.

Другие химические модификации первого и/или второго олигонуклеотида соединения по настоящему изобретению включают замещение одного или более одного из атомов водорода дейтерием или тритием, примеры которых можно найти, например, в WO2014/022566 (Ased) или WO2015/011694 (Celgene).

С появлением технологии имитации нуклеиновой кислоты стало возможным генерировать молекулы, которые имеют схожие, предпочтительно те же характеристики гибридизации, не обязательно по количеству, как сама нуклеиновая кислота. Разумеется, такие функциональные эквиваленты также подходят для применения в настоящем изобретении.

Специалисту будет понятно, что не каждый из каркаса, основания и/или остова может быть модифицирован подобным образом. Несколько различных модифицированных каркасов, оснований и/или остовов могут быть объединены в один единственный олигонуклеотид.

Связывающий фрагмент

В одном варианте осуществления настоящего изобретения указанный связывающий фрагмент может представлять собой любой тип фрагмента, способного связывать (антисмысловые) олигонуклеотиды между собой. Связывающий фрагмент может быть гидрофильным, гидрофобным или амфифильным. В контексте настоящего изобретения выражение первый и второй антисмысловой олигонуклеотид «соединены между собой посредством связывающего фрагмента» означает, что указанный первый и указанный второй антисмысловой олигонуклеотид соединены в соединении посредством связывающего фрагмента с образованием одного соединения, причем указанное соединение содержит или состоит из указанного первого антисмыслового олигонуклеотида, связывающего фрагмента и указанного второго антисмыслового олигонуклеотида, как указано в данном документе. Термин «связывающий фрагмент» в данной заявке может взаимозаменяемо применяться с термином «спейсер» или «линкер».

Связь между антисмысловым олигонуклеотидом и связывающим фрагментом может быть ковалентной. Указанная связь может быть достигнута посредством нуклеотидной связи, предпочтительно, содержащей или состоящей из 1-50 нуклеотидов, более предпочтительно 4-40 нуклеотидов.

В предпочтительном варианте осуществления указанный связывающий фрагмент или спейсер содержит или состоит из мономера этиленгликоля, олигомера этиленгликоля или полимера этиленгликоля (также известного как полиэтиленгликоль, PEG). Предпочтительно указанный связывающий фрагмент содержит или состоит по меньшей мере из 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 или 20 мономеров этиленгликоля. Более предпочтительно указанный связывающий фрагмент содержит или состоит из 1-20, 3-15, 3-12, 3-10, 3-6, 6-20, 6-15, 6-12 или 6-10 мономеров этиленгликоля. Еще более предпочтительно указанный связывающий фрагмент содержит или состоит из 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 или 12 мономеров или цепей этиленгликоля.

В другом предпочтительном варианте осуществления, указанный связывающий фрагмент или спейсер содержит или состоит из любого из следующего неограничивающего списка: N-малеимидопропилоксисукцинимидный эфир (BMPS), сукцинимидил 4-малеимидобутират (GMBS), DMSS (Sugo et al. J. Control. Rel. 2016, 237, 1), сукцинимидил 3-(2-пиридилдитио)пропионат (SPDP), 4-сукцинимидилоксикарбонил-α-метил-(2-пиридилдитио)толуол (SMPT), сукцинимидил 4-(N-малеимидометил)циклогексан-1-карбоксилат (SMCC), сульфо-SMCC, сукцинимидил 4-формилбензамид (S-4FB), сульфо-S-4FB, S-HyNic, ω-аминоалканол (например, 6-аминогексанол, 5-аминопентанол, 12-аминододеканол), ω-меркаптоалканол (например, 6-меркаптогексанол), ω-гидроксиалканол (например, 1,6-гександиол, 1,12-додекандиол, 1,2-этандиол, 1,3-пропандиол), аминокислота (например, β-Ala, Gly, Pro, Hyp, Lys, Cys), дипептид (например, Val-Cit или Val-Cit-содержащий, как, например, в Sugo et al. J. Control. Rel. 2016, 237, 1), трипептид, тетрапептид, пентапептид, гексапептид, гептапептид, октапептид, нонапептид, декапептид или олигопептид, пиперазин, пиперидин, p-аминобензоил, p-аминобензил карбамат, p-аминобензил карбоксилат, нуклеотиды с удаленными азотистыми основаниями (например, 1,2-дидеоксирибозил, 1-деокси-2-O-метилрибозил, 1-деоксиазарибозил) и их производные. Примеры линкеров также описаны, например, в Leriche et al. Bioorg. Med. Chem. 2012, 20, 571, Saneyoshi et al. J. Org. Chem. 2017, 82, 1796, US 9732340 и US 9790494 (Translate Bio MA, Inc.).

В более предпочтительном варианте осуществления указанный связывающий фрагмент представляет собой диэтиленгликоль, триэтиленгликоль (TEG), тетраэтиленгликоль, пентаэтиленгликоль или гексаэтиленгликоль (HEG). Более предпочтительно, указанный связывающий фрагмент представляет собой TEG или HEG.

Специалисту в данной области техники также будет понятно, что в соединение по настоящему изобретению могут быть введены один или более связывающих фрагментов. Например, первый и второй антисмысловой олигонуклеотид соединения могут быть соединены между собой посредством введения одного гексаэтиленгликолевого фрагмента или посредством введения двух последовательных триэтиленгликолевых фрагментов. Тем не менее, связывающий фрагмент, содержащий или состоящий из одного или более связывающих фрагментов, все еще называется «связывающим фрагментом» в контексте настоящего изобретения.

Также объем настоящего изобретения охватывает применение модифицированного пегилирования, причем указанный (поли)этиленгликоль химически модифицирован и/или содержит прикрепленный к нему фрагмент. Таким образом, указанный связывающий фрагмент получает дополнительное свойство, известное в данной области техники. Например, указанный связывающий фрагмент становится отщепляемым или флуоресцентным. Пример модифицированного пегилирования включает без ограничения отщепляемое пегилирование, причем связь представляет собой разлагаемую (отщепляемую) связь. Примеры включают связи, которые чувствительны, например, к pH, свету, температуре, восстановительным или окислительным средам, нуклеофилам, синтетическим реагентам, ферментам, протеазам, катепсину, реакции «click-to-release» или (другим) внешним факторам.

Следует понимать, что линкер может состоять из одного химического фрагмента, как упомянуто выше, или из нескольких экземпляров одного и того же или комбинации разных линкеров, которые в конечном итоге связывают два олигонуклеотида между собой.

Прикрепление линкеров к первому и/или второму олигонуклеотиду соединения по настоящему изобретению может достигаться, например, посредством амида, карбоксамида, сложного эфира, простого эфира, тиоэфира, сложного тиоэфира, тиола/малеимида, дисульфида, сложного фосфодиэфира, фосфата, сложного фосфотриэфира, сложного тиофосфодиэфира, сложного тиофосфотриэфира, сложного дитиофосфодиэфира, фосфордиамидата, метилфосфоната, фосфорилгуанидина, фосфотиоата, (R)-фосфотиоата, (S)-фосфотиоата, сульфона, сульфонамида, сульфоксида, сульфодиоксида, карбамата, карбоната, мочевины, гуанидина, амидина, гидроксамата, гидроксиламина, имина, ксантата, азида/алкина, оксима, тиазолидина, азо, гидразидо, гидразона.

ПЭГилирование, то есть присоединение (химически активированных) цепей этиленгликоля, нуклеиновых кислот, включая (антисмысловые) олигонуклеотиды, хорошо известно специалисту в данной области техники. ПЭГилирование можно проводить по -ОН-группе 5'-концевого мономера и/или 3'-концевого мономера нуклеиновой кислоты. Это может быть выполнено напрямую или через спейсер (например, аминоалкиловый линкер), например, посредством клик-химии, как известно специалисту в данной области техники.

Композиция

Во втором аспекте представлена композиция, содержащая соединение, описанное в предыдущем разделе под названием «Соединение».

В одном варианте осуществления настоящего изобретения указанная композиция содержит по меньшей мере одно вспомогательное вещество, и/или причем указанное соединение содержит по меньшей мере один конъюгированный лиганд, что может дополнительно облегчить усиление нацеливания и/или доставку указанной композиции и/или указанного соединения к ткани и/или клетке, и/или в ткань и/или клетку. Композиции, описанные в данном документе, называются композициями по настоящему изобретению. Композиция по настоящему изобретению может содержать одно или более одного соединения по настоящему изобретению. В контексте настоящего изобретения вспомогательное вещество может представлять собой отдельную молекулу, но он также может представлять собой конъюгированный фрагмент. В первом случае, вспомогательное вещество может представлять собой наполнитель, такой как крахмал. В последнем случае вспомогательное вещество может, например, представлять собой нацеливающий лиганд, который соединен с первым и/или вторым олигонуклеотидом соединения по настоящему изобретению.

В предпочтительном варианте осуществления указанная композиция предназначена для применения в качестве лекарственного препарата. Следовательно, указанная композиция представляет собой фармацевтическую композицию. Фармацевтическая композиция обычно содержит фармацевтически приемлемый носитель, разбавитель и/или вспомогательное вещество. В предпочтительном варианте осуществления композиция по настоящему изобретению содержит соединение, определенное в данном документе, и необязательно дополнительно содержит фармацевтически приемлемый состав, наполнитель, консервант, солюбилизатор, носитель, разбавитель, вспомогательное вещество, соль, адъювант и/или растворитель. Такие фармацевтически приемлемые носитель, наполнитель, консервант, солюбилизатор, разбавитель, соль, адъювант, растворитель и/или вспомогательное вещество можно найти, например, в Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 20th Edition. Baltimore, MD: Lippincott Williams & Wilkins, 2000. Соединение, описанное в настоящем изобретении, может иметь по меньшей мере одну ионизируемую группу. Ионизируемая группа может быть основной или кислотной, и может иметь заряд или быть нейтральной. Ионизируемая группа может присутствовать в виде ионной пары с соответствующим противоионом, который имеет противоположный(-ые) заряд(-ы). Примерами катионных противоионов являются натрий, калий, цезий, Трис, литий, кальций, магний, триалкиламмоний, триэтиламмоний и тетраалкиламмоний. Примерами анионных противоионов являются хлорид, бромид, йодид, лактат, мезилат, безилат, трифлат, ацетат, трифторацетат, дихлорацетат, тартрат, лактат и цитрат. Примеры противоионов описаны, например, в [Kumar, 2008], включенном в данный документ посредством ссылки во всей своей полноте.

Фармацевтическая композиция может облегчать усиление стабильности, растворимости, поглощения, биодоступности, активности, фармакокинетики, фармакодинамики, клеточного поглощения и внутриклеточной транспортировки указанного соединения, в частности, вспомогательное вещество, способное образовывать комплексы, наночастицы, микрочастицы, нанотрубки, наногели, гидрогели, полоксамеры или плюроники, полимерсомы, коллоиды, микропузырьки, везикулы, мицеллы, липоплексы и/или липосомы. Примеры наночастиц включают полимерные наночастицы, (смешанные) наночастицы металлов, наночастицы углерода, наночастицы золота, магнитные наночастицы, наночастицы диоксида кремния, наночастицы липидов, частицы сахара, наночастицы белка и наночастицы пептида. Примером комбинации наночастиц и олигонуклеотидов является сферическая нуклеиновая кислота (SNA), как, например, в Barnaby et al. Cancer Treat. Res. 2015, 166, 23.

Предпочтительная композиция содержит по меньшей мере одно вспомогательное вещество, которое может дополнительно способствовать усилению нацеливания и/или доставки указанной композиции и/или указанного соединения к ткани и/или клетке, и/или в ткань и/или клетку. Предпочтительной тканью или клеткой является мышечная ткань или мышечная клетка.

Многие из данных вспомогательных веществ известны в данной области техники (например, см. Bruno, 2011) и могут быть отнесены к категории вспомогательных веществ первого типа. Примеры вспомогательных веществ первого типа включают полимеры (например, полиэтиленимин (PEI), полипропиленимин (PPI), производные декстрана, бутилцианоакрилат (PBCA), гексилцианоакрилат (PHCA), сополимер молочной кислоты и гликолевой кислоты (PLGA), полиамины (например, спермин, спермидин, путресцин, кадаверин), хитозан, поли(амидоамины) (PAMAM), поли(эфир амин), поливиниловый эфир, поливинилпирролидон (PVP), полиэтилененгликоль (PEG), циклодекстрины, гиалуроновую кислоту, коломиновую кислоту и их производные), дендримеры (например, поли(амидоамин)), липиды {например, 1,2-диолеоил-3-диметиламмония пропан (DODAP), диолеоилдиметиламмония хлорид (DODAC), производные фосфатидилхолина [например, 1,2- дистеароил-sn-глицеро-3-фосфохолин (DSPC)], производные лизо-фосфатидилхолина [например, 1-стеароил-2-лизо-sn-глицеро-3-фосфохолин (S-LysoPC)], сфингомиелин, 2-{3-[бис-(3-амино-пропил)-амино]-пропиламино}-N-дитетрацедил карбамоил метилацетамид (RPR209120), производные фосфоглицерина [например, 1,2-дипальмитоил-sn-глицеро-3-фосфоглицерин, натриевая соль (DPPG-Na), производные фосфатидной кислоты [1,2-дистеароил-sn-глицеро-3-фосфатидная кислота, натриевая соль (DSPA), производные фосфатидилэтаноламин [например, диолеоил-L-R-фосфатидилэтаноламин (DOPE), 1,2-дистеароил-sn-глицеро-3-фосфоэтаноламин (DSPE), 2-дифитаноил-sn-глицеро-3-фосфоэтаноламин (DPhyPE),], N-[1-(2,3-диолеоилокси)пропил]-N, N,N-триметиламмония (DOTAP), N-[1-(2,3-диолeилокси)пропил]-N, N,N-триметиламмония (DOTMA), 1,3-ди-олеоилокси-2-(6-карбокси-спермил)-пропиламид (DOSPER), (1,2-димиристилоксипропил-3-диметилгидроксиэтил аммония (DMRIE), (N1-холестерилоксикарбонил-3,7-диазанонан-1,9-диамин (CDAN), диметилдиоктадециламмония бромид (DDAB), 1-пальмитоил-2-олеоил-sn-глицерин-3-фосфохолин (POPC), (b-L-аргинил-2,3-L-диаминопропионовая кислота-N-пальмитил-N-олеил-амид тригидрохлорид (AtuFECT01), производные N, N-диметил-3-аминопропана [например, 1,2-дистеароилокси-N, N-диметил-3-аминопропан (DSDMA), 1,2-диолeилокси-N, N-диметил-3-аминопропан (DoDMA), 1,2-дилинолеилокси-N, N-3-диметиламинопропан (DLinDMA), 2,2-дилинолеил-4-диметиламинометил [1,3]-диоксолан (DLin-K-DMA), производные фосфатидилсерина [1,2-диолеил-sn-глицеро-3-фосфо-L-серин, натриевая соль (DOPS)], белки (например, альбумин, желатины, ателоколлаген) и пептиды (например, протамин, PepFects, NickFects, полиаргинин, полилизин, CADY, MPG). Углеводы и углеводные кластеры, как описано ниже, при использовании в качестве отдельных соединений также подходят для применения в качестве вспомогательного вещества первого типа.

Другая предпочтительная композиция может содержать по меньшей мере одно вспомогательное вещество, которое относится ко вспомогательному веществу второго типа. Вспомогательное вещество второго типа может включать или содержать группу конъюгата, как описано в данном документе, для усиления нацеливания и/или доставки композиции и/или соединения по настоящему изобретению к ткани и/или клетке и/или в ткань и/или клетку, например, мышечную ткань или мышечную клетку. Группа конъюгата может отображать один или несколько разных или идентичных лигандов. Примерами лигандов группы конъюгатов являются, например, пептиды, углеводы или смеси углеводов (Han et al., Nature Communications, 2016, doi:10.1038/ncomms10981; Cao et al., Mol. Ther. Nucleic Acids, 2016, doi:10.1038/mtna.2016.46), белки, малые молекулы, антитела, полимеры, лекарственные средства. Примерами углеводных конъюгатов лигандов являются глюкоза, манноза, галактоза, мальтоза, фруктоза, N-ацетилгалактозамин (GalNac), глюкозамин, N-ацетилглюкозамин (GlcNAc), глюкоза-6-фосфат, манноза-6-фосфат и мальтотриоза. Углеводы могут присутствовать во множестве, например, в виде концевых групп на дендритных или разветвленных линкерных фрагментах, которые связывают углеводы с компонентом композиции. Углевод также может содержаться в части кластера углеводов, такой как часть кластера GalNAc. Часть углеводного кластера может включать нацеливающий фрагмент и, необязательно, конъюгированный линкер. В некоторых вариантах осуществления часть углеводного кластера содержит 1, 2, 3, 4, 5, 6 или более групп GalNAc. В контексте данного документа «углеводный кластер» означает соединение, имеющее один или несколько углеводных остатков, прикрепленных к каркасу или линкерной группе, (см., например, Maier et al., «Synthesis of Antisense Oligonucleotides Conjugated to a Multivalent Carbohydrate Cluster for Cellular Targeting» Bioconjugate Chem., 2003, (14): 18-29; Rensen et al., «Design and Synthesis of Novel N- Acetylgalactosamine-Terminated Glycolipids for Targeting of Lipoproteins to the Hepatic Asiaglycoprotein Receptor» J. Med. Chem. 2004, (47): 5798-5808). В данном контексте «модифицированный углевод» означает любой углевод, имеющий одну или несколько химических модификаций относительно встречающихся в природе углеводов. В контексте данного документа «производное углевода» означает любое соединение, которое может быть синтезировано с использованием углевода в качестве исходного материала или промежуточного продукта. В контексте данного документе «углевод» означает встречающийся в природе углевод, модифицированный углевод или производное углевода. Оба типа вспомогательных веществ могут быть объединены вместе в одну композицию, как определено в данном документе.

Специалист может выбрать, объединить и/или адаптировать одно или несколько из вышеуказанных или других альтернативных вспомогательных веществ и систем доставки для составления и доставки соединения для применения в настоящем изобретении.

Такую фармацевтическую композицию по настоящему изобретению можно вводить в виде эффективного средства в заданное время животному, предпочтительно млекопитающему. Более предпочтительным млекопитающим является человек. Соединение или композиция, как определено в данном документе для использования по настоящему изобретению, может подходить для прямого введения в клетку, ткань и/или орган in vivo индивидов, пораженных или подверженных риску развития заболевания или патологического состояния, как указано в настоящем документе, и ее можно вводить непосредственно in vivo, ex vivo или in vitro. Введение может осуществляться местным, системным и/или парентеральным путями, например, внутривенным, подкожным, внутрибрюшинным, интратекальным, внутримышечным, глазным, назальным, урогенитальным, внутрикожным, кожным, энтеральным, интравитреальным, внутрикавернозным, внутримозговым, интратекальным, эпидуральным или пероральным путем.

Предпочтительно, такая фармацевтическая композиция по настоящему изобретению может быть инкапсулирована в форме эмульсии, суспензии, пилюли, таблетки, капсулы или мягкого геля для пероральной доставки или в форме аэрозоля или сухого порошка для доставки в дыхательные пути и легкие.

В другом варианте осуществления настоящего изобретения указанное соединение можно применять вместе с другим соединением, уже известным для применения в лечении указанного заболевания. Такие другие соединения можно применять для снижения воспаления, предпочтительно, для снижения воспаление мышечной ткани, и/или вспомогательное соединение для улучшения функции мышечных волокон, целостности и/или выживания и/или улучшения, повышения или восстановления сердечной функции.

Примерами являются без ограничения стероид, предпочтительно, (глюко)кортикостероид, стероидоподобное средство (предпочтительно, ваморолон (VBP15)), эпикатехин, ингибитор ACE (предпочтительно, периндоприл) и ингибитор HDAC (предпочтительно, гивиностат), блокатор рецепторов ангиотензина II 1 типа (предпочтительно, лозартан), пептид ангиотензин (1-7) (предпочтительно, TXA127), ингибитор фактор некроза опухоли альфа (TNFα), ингибитор TGFβ (предпочтительно, декорин), ингибитор NF-κB (предпочтительно, эдасалонексент (CAT-1004)), рекомбинантный бигликан человека, источник mIGF-1, ингибитор миостатина (предпочтительно, PF-06252616 или RG6206), манноза-6-фосфат, антиоксидант (предпочтительно, идебенон), ингибитор ионных каналов, дантролен, ингибитор протеазы, ингибитор фосфодиэстеразы (предпочтительно ингибитор PDE5, такой как силденафил или тадалафил), противовоспалительное и/или антифибротическое средство (предпочтительно HT-100), модулятор атрофина (предпочтительно эзутромид), метформин, моногидрат креатина (CrM), гепарин, гранулоцитарный колониестимулирующий фактор (GCSF) (предпочтительно филграстим), ингибитор фактора роста соединительной ткани (CTGF/CCN2) (предпочтительно FG-3019), модулятор кальция (предпочтительно AT-300), модулятор рецептора андрогенов (предпочтительно DT-200), L-цитруллин и/или L-аргинин. Такое комбинированное применение может представлять собой последовательное применение: каждый компонент вводят отдельным способом, возможно, в виде отдельной композиции. В качестве альтернативы, каждое соединение можно применять вместе в одной композиции.

Соединения, которые включены в композицию по настоящему изобретению, также могут быть предоставлены отдельно, например, для обеспечения последовательного введения активных компонентов композиции по настоящему изобретению. В таком случае композиция по настоящему изобретению представляет собой комбинацию соединений, содержащую по меньшей мере соединение по настоящему изобретению с конъюгированным лигандом или без него, по меньшей мере одно вспомогательное вещество, как описано выше.

Способ

В третьем аспекте предоставляется способ предотвращения, лечения, излечения, облегчения и/или отсрочки патологического состояния или заболевания, как определено в предыдущих разделах, у индивида, в клетке (предпочтительно в мышечной клетке), в ткани (предпочтительно в мышечной ткани) или органе указанного индивида. Способ включает введение соединения (как описано в разделе под названием «Соединение») или композиции (как описано в разделе под названием «Композиция») по настоящему изобретению указанному индивиду или субъекту, нуждающемуся в этом.

Способ по настоящему изобретению, в котором соединение или композиция, как определено в данном документе, могут подходить для введения в клетку (предпочтительно мышечную клетку), ткань (в частности мышечную ткань) и/или орган in vivo индивидов, пораженных любым из определенных в данном документе заболеваний или с риском развития воспалительного расстройства, и их можно вводить in vivo, ex vivo или in vitro. Человек или нуждающийся субъект предпочтительно представляет собой млекопитающее, более предпочтительно человека. В качестве альтернативы, субъект не является человеком. Введение можно осуществлять местным, системным и/или парентеральным путями, например, внутривенным, подкожным, назальным, окулярным, внутрибрюшинным, интратекальным, внутримышечным, внутрикавернозным, урогенитальным, внутрикожным, кожным, энтеральным, интравитреальным, внутримозговым, интратекальным, эпидуральным или пероральным путем.

В другом варианте осуществления в способе по настоящему изобретению величина соединения или композиции находится в диапазоне от 0,01 нМ до 1 мкМ, более предпочтительно применяемое количество составляет от 0,05 до 500 нМ, или от 0,1 до 500 нМ, или от 0,02 до 500 нМ, или от 0,05 до 500 нМ, еще более предпочтительно от 1 до 200 нМ.

Диапазоны доз соединения или композиции по настоящему изобретению специально разработаны на основе исследований возрастающих доз в клинических испытаниях (использование in vivo), для которых существуют строгие требования протокола. Соединение, определенное в данном документе, можно применять в дозе, которая находится в диапазоне от 0,01 до 200 мг/кг, или от 0,05 до 100 мг/кг, или от 0,1 до 50 мг/кг, или от 0,1 до 20 мг/кг, предпочтительно от 0,5 до 10 мг/кг.

Приведенные выше диапазоны или дозы соединения или композиции являются предпочтительными для использования in vitro или ex vivo. Специалисту будет понятно, что в зависимости от идентичности применяемого соединения, целевой клетки, подлежащей лечению, гена-мишени и его уровней экспрессии, применяемой среды и условий трансфекции и инкубации, концентрация или доза применяемого соединения может дополнительно варьировать и может потребоваться дальнейшая оптимизация.

В одном варианте осуществления данного аспекта настоящего изобретения представлен способ предупреждения, лечения и/или замедления мышечной дистрофии Дюшенна (DMD), включающий введение субъекту соединения по настоящему изобретению, или композиции по настоящему изобретению.

В другом варианте осуществления настоящего изобретения представлен способ диагностики, причем соединение по настоящему изобретению представлено в радиоактивной меткой или флуоресцентной меткой.

Применение

В четвертом аспекте представлено соединение (описанное в разделе под названием «Соединение») или композиция (описанная в разделе под названием «Композиция») для применения в качестве лекарственного препарата или части терапии, или вариантов применения, в которых соединение или композиция проявляют свою активность предпочтительно внутриклеточно.

В предпочтительном варианте осуществления соединение или композиция по настоящему изобретению предназначены для применения в качестве лекарственного препарата или части терапии для предупреждения, замедления, лечения, облегчения и/или излечивания мышечной дистрофии Дюшенна (DMD).

В пятом аспекте представлено применение соединения (описанного в разделе под названием «Соединение») или композиции (описанной в разделе под названием «Композиция») в производстве лекарственного препарата. Предпочтительно, указанное применение соединения или композиции в производстве лекарственного препарата предназначено для предупреждения, замедления, лечения, облегчения и/или излечивания мышечной дистрофии Дюшенна (DMD).

Третий антисмысловой олигонуклеотид

Другой аспект настоящего изобретения относится к антисмысловому олигонуклеотиду, т.е. «третьему антисмысловому олигонуклеотиду». Указанный третий антисмысловой олигонуклеотид не является соединением по настоящему изобретению, содержащим или состоящим из двух антисмысловых олигонуклеотидов, соединенных между собой посредством связывающего фрагмента, причем первый антисмысловой олигонуклеотид (AON) комплементарен, или связывается с, или нацелен на, или гибридизуется с, или перекрывается по меньшей мере с частью SEQ ID NO: 3, и причем второй антисмысловой олигонуклеотид (AON) комплементарен, или связывается с, или нацелен на, или гибридизуется с, или перекрывается по меньшей мере с частью SEQ ID NO: 4, причем SEQ ID NO: 3 и 4 расположены в экзоне 51 пре-мРНК дистрофина. Указанный третий антисмысловой олигонуклеотид комплементарен, или связывается с, или нацелен на, или гибридизуется с, или перекрывается по меньшей мере частью экзона 51 пре-мРНК дистрофина, предпочтительно для применения в качестве лекарственного препарата, более предпочтительно для лечения, предупреждения и/или замедления мышечной дистрофии Дюшенна (DMD) и более предпочтительно для индукции пропуска экзона 51 пре-мРНК дистрофина, как указано в данном документе. Предпочтительно указанный экзон 51 пре-мРНК дистрофина получен от человека и представлен нуклеотидной последовательностью SEQ ID NO: 2.

В предпочтительном варианте осуществления данного аспекта настоящего изобретения указанный третий антисмысловой олигонуклеотид представлен нуклеотидной последовательностью, содержащей или состоящей из SEQ ID NO: 16351 или 16352, или нуклеотидной последовательностью, содержащей или состоящей из фрагмента SEQ ID NO: 16351 или 16352. Указанная SEQ ID NO: 16351 представлена последовательностью TAAGTTC*TGTC*C*AAGTC*AAGGAAGATGGC*AT и указанная SEQ ID NO: 16352 представлена последовательностью TC*AAGGAAGATGGC*ATTAAGTTC*TGTC*C*AAG, причем C* представляет собой 5-метилцитозин, T представляет собой 5-метилурацил, и T и G представляют собой модифицированные LNA основания. Предпочтительно, каждый мономер указанного третьего антисмыслового олигонуклеотида представляет собой мономер РНК. Также предпочтительно, чтобы указанный третий антисмысловой олигонуклеотид был одноцепочечным. Кроме того, предпочтительным является наличие по меньшей мере одного 2'-замещенного мономера, предпочтительно 2'-O-метилированного мономера, и/или наличие по меньшей мере одной фосфотиоатной связи остова. Более предпочтительно, все связи остова представляют собой фосфотиоатные связи остова.

В другом предпочтительном варианте осуществления данного аспекта настоящего изобретения указанный третий антисмысловой олигонуклеотид содержит или состоит из связывающего фрагмента (определенного ранее в данном документе в разделе «Связывающий фрагмент» и вносящего определенные изменения в указанный третий антисмысловой олигонуклеотид) на 5' концевом мономере и/или на 3' концевом мономере указанного третьего антисмыслового олигонуклеотида.

Следующие аспекты, описанные в контексте соединения по настоящему изобретению (см. выше), также применяются к указанному третьему антисмысловому олигонуклеотиду с внесением определенных изменений:

«Дальнейшие химические модификации указанного первого и/или второго антисмыслового олигонуклеотида соединения»;

«Композиция»; и

«Применение».

Определения

В данном документе и в формуле изобретения глагол «содержать» и его спряжения применяются в неограничивающем смысле для обозначения того, что элементы, следующие за словом, включены, но элементы, не упомянутые специально, не исключаются. Кроме того, глагол «состоять» может быть заменен на «состоять по существу из», что означает, что соединение, или олигонуклеотид, или композиция, определенные в данном документе, могут содержать дополнительный(-ые) компонент(-ы), чем те, которые конкретно определены, указанный дополнительный(-ые) компонент(-ы) не изменяет уникальную характеристику настоящего изобретения. Кроме того, ссылка на элемент в единственном числе не исключает возможности присутствия более чем одного элемента, если только контекст явно не требует наличия одного и только одного из элементов. Таким образом, формы единственного числа обычно означают «по меньшей мере один».

Каждый вариант осуществления, как определено в данном документе, может быть объединен вместе, если не указано иное. Все патентные и литературные источники, цитируемые в настоящем описании, включены в настоящее описание посредством ссылки во всей своей полноте.

В данной заявке слова «связывается с», «нацеливается на», «гибридизуется с» могут применяться взаимозаменяемо при использовании в контексте антисмыслового олигонуклеотида, который комплементарен части пре-мРНК, как определено в данном документе. В контексте настоящего изобретения «гибридизуется с» употребляется в физиологических условиях в клетке, особенно в мышечной клетке, если не указано иное.

Если структурная формула или химическое название понимается специалистом как имеющий хиральные центры, но хиральность не указана, для каждого хирального центра делается отдельная ссылка на все три рацемические смеси, чистого R-энантиомера и чистого S энантиомера.

Всякий раз, когда в контексте данного изобретения обсуждается параметр вещества, предполагается, что, если не указано иное, параметр определяется, измеряется или проявляется в физиологических условиях. Физиологические условия известны специалисту в данной области техники и включают системы водного растворителя, атмосферное давление, значения pH от 6 до 8, температуру в диапазоне от комнатной температуры до примерно 37°C (от примерно 20°C до примерно 40°C) и подходящие буферные соли или другие компоненты. Следует понимать, что заряд часто ассоциируется с равновесием. Фрагмент, который, как считается, несет или имеет заряд, представляет собой часть, которая будет обнаружена в состоянии, когда он несет или имеет такой заряд чаще, чем когда он не несет или не имеет такой заряд. По существу, атом, который указан в данном раскрытии как заряженный, может быть незаряженным при определенных условиях, и нейтральный фрагмент может быть заряжен при определенных условиях, что будет понятно специалисту в данной области техники.

Обычно замещение заменяет один фрагмент, который может представлять собой водород, другим фрагментом. При рассмотрении углеродного скелета органических молекул мономер РНК по своей природе является 2'-замещенным, поскольку он имеет гидроксильный фрагмент в своем 2'-положении. Следовательно, мономер ДНК не будет 2'-замещенным, а мономер РНК может рассматриваться как 2'-замещенный мономер ДНК. Если мономер РНК, в свою очередь, является 2'-замещенным, данное замещение может заменить либо 2'-OH, либо 2'-H. Если мономер РНК является 2'-O-замещенным, данное замещение заменяет H фрагмента 2'-OH. В качестве неограничивающего примера, 2'-O-метил РНК представляет собой 2'-замещенный мономер (-OMe замещает -H) и 2'-замещенный мономер РНК (-OMe замещает -OH) и 2'-O-замещенный мономер РНК (-Me замещает -H), тогда как 2'-F РНК представляет собой 2'-замещенный мономер РНК (-F замещает -OH или -H), но не 2'-O-замещенный мономер РНК (2'-O либо отсутствует, либо не замещен). 2'-F РНК, где F замещен 2'-OH, представляет собой 2'-F-2'-деокси РНК, который также представляет собой 2'-F ДНК.

В контексте настоящего изобретения снижение или повышение параметра, подлежащего оценке, означает изменение значения, соответствующего данному параметру, по меньшей мере на 5%. Более предпочтительно, снижение или повышение значения означает изменение по меньшей мере на 10%, еще более предпочтительно по меньшей мере на 20%, по меньшей мере на 30%, по меньшей мере на 40%, по меньшей мере на 50%, по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 90% или на 100%. В последнем случае может случиться так, что обнаруживаемое значение, связанное с параметром, больше не существует.

Применение вещества в качестве лекарственного препарата, как описано в данном документе, также можно интерпретировать как применение указанного вещества при производстве лекарственного препарата. Подобным образом, всякий раз, когда вещество используется для лечения или в качестве лекарственного препарата, его также можно применять для изготовления лекарственного препарата для лечения.

Слово «около» или «приблизительно», если его применяют в ассоциации с числовым значением (например, около 10), предпочтительно означает, что значение может быть заданным значением (10) больше или меньше 0,1% от значения.

Соединения или композиции по настоящему изобретению предпочтительно предназначены для применения в способах или применениях по настоящему изобретению.

Как будет понятно специалисту, в этой заявке термины «BNA», «каркас BNA», «нуклеотид BNA», «нуклеозид BNA», «модификация BNA» или «модификация каркаса BNA» могут быть заменены конформационно ограниченной модификацией каркаса, закрытой модификацией каркаса, закрытым нуклеотидом, закрытым нуклеозидом, закрытым мономером или модификацией с увеличением Tm, или модификацией с высокой аффинностью и т.п., в зависимости от ситуации.

«Идентичность последовательности» в данном документе определяется как взаимосвязь между двумя или более нуклеиновыми кислотами (полинуклеотид, нуклеиновая кислота или нуклеотид или олигонуклеотид), как определено посредством сравнения последовательности. В предпочтительном варианте осуществления идентичность последовательности рассчитывают на основании полной длины двух приведенных SEQ ID NO или их части. Их часть предпочтительно означает по меньшей мере 50%, 60%, 70%, 80%, 90% или 100% обеих SEQ ID NO. В данной области техники, «идентичность» также означает степень родства последовательности между последовательностями нуклеиновой кислоты, в зависимости от обстоятельств, как это определено совпадением строк в таких последовательностях.

Предпочтительные способы определения идентичности разработаны для обеспечения наибольшего соответствия между испытываемыми последовательностями. Данные способы определения идентичности и подобия запрограммированы в общедоступных компьютерных программах. Предпочтительные компьютерные программные способы для определения идентичности и сходства между двумя последовательностями включают, например, программный пакет GCG (Devereux, J., et al., Nucleic Acids Research 12 (1): 387 (1984)), BestFit, BLASTN, и FASTA (Altschul, S. F. et al., J. Mol. Biol. 215:403-410 (1990). Программа BLAST X находится в открытом доступе в NCBI и других источниках (BLAST Manual, Altschul, S., et al., NCBI NLM NIH Bethesda, MD 20894; Altschul, S., et al., J. Mol. Biol. 215:403-410 (1990). Для определения идентичности также можно применять хорошо известный алгоритм Смита-Ватермана.

Предпочтительные параметры для сравнения нуклеиновой кислоты включают следующие: Algorithm: Needleman и Wunsch, J. Mol. Biol. 48:443-453 (1970); Матрица сравнения: совпадения = + 10, несовпадение=0; Штраф за открытие гэпа: 50; Штраф за продолжение гэпа: 3. Доступен как программа Gap от Genetics Computer Group, расположенной в г. Медисон, штат Висконсин. Выше приведены параметры по умолчанию для сравнений нуклеиновой кислоты.

Условия гибридизации молекулы нуклеиновой кислоты могут иметь низкую, среднюю или высокую строгость (процедуры саузерн-блоттинга). Условия низкой, средней или высокой строгости означают предварительную гибридизацию и гибридизацию при 42°C в 5x SSPE, 0,3% SDS, 200 пг/мл фрагментированной в результате гидродинамического сдвига и денатурированной ДНК спермы лосося, а также 25%, 35% или 50% формамида для низкой, или средней, или высокой строгости, соответственно. Затем, реакционную смесь гибридизации промывают три раза по 30 минут каждую с использованием 2x SSC, 0,2% SDS и либо при 55°C, либо при 65°C, либо при 75°C для низкой, средней или высокой строгости, соответственно.

Следующие ниже примеры предлагаются только для иллюстративных целей и никоим образом не предназначены для ограничения объема настоящего изобретения.

Подписи к фигурам

Фиг. 1.

Анализ посредством ОТ-цкПЦР, показывающий синергетический эффект объединения AON, нацеливания различных участков последовательностей, на эффективность пропуска экзона 51 в мышечных клетках пациента с DMD с делецией экзонов 48-50, в частности, путем связывания их посредством TEG=триэтиленгликолевый линкер или HEG=гексаэтиленгликолевый линкер. Отдельные AON испытывали при 400 или 800 нМ; смеси AON состояли из 400 нМ каждого отдельного AON; и связанные AON испытывали при 800 нМ. Средние проценты пропуска экзона 51 определяли на основании образцов РНК из 6 лунок планшета, планки погрешностей указывают на стандартное отклонение. NT=необработанные клетки.

Фиг. 2.

Анализ посредством ОТ-цкПЦР, показывающий синергетический эффект объединения AON с SEQ ID NO: 15980 и 16026, нацеливания отдельных участков последовательности ESE, на эффективность пропуска экзона 51 в четырехглавой мышце мышей del52hDMD/mdx, особенно если данные AON связаны линкером, таким как HEG=гексаэтиленгликолевоый линкер (соединение, представленное SEQ ID NO: 16338). Эффективность пропуска для смеси AON с SEQ ID NO: 15980 и 16026 при 4,05 мкмоль/кг выше, чем у каждого из отдельных AON при 8,1 мкмоль/кг. Молекула, в которой данные AON были физически связаны посредством HEG (соединение, представленное SEQ ID NO: 16338), была даже более эффективной: 2,7 мкмоль/кг, аналогична таковой смеси при 8,1 мкмоль/кг. Средние проценты пропуска экзона 51 определяли на основании образцов РНК от 10 мышей, планки погрешностей указывают на стандартное отклонение. VEH=носитель.

Обзор перечня последовательностей

SEQ ID NO Описание 1 Человеческий белок дистрофин 2 Экзон 51 3 Мотив 1 ESE экзона 51 4 Мотив 2 ESE экзона 51 5 Обратный комплемент SEQ ID NO: 3 6 Обратный комплемент SEQ ID NO: 4 7 Дрисаперсен 8 Этеплирсен 9-13 Праймеры для ПЦР 14-197 Представляет предпочтительный AON 1 198-398 Представляет предпочтительный AON 2 399-581 Представляет предпочтительный AON 1, причем все цитозиновые основания представляют собой 5-метилцитозин 582-773 Представляет предпочтительный AON 2, причем все цитозиновые основания представляют собой 5-метилцитозин 774-957 Представляет предпочтительный AON 1, причем все урациловые основания представляют собой 5-метилурацил (т.е. тимин) 958-1155 Представляет предпочтительный AON 2, причем все урациловые основания представляют собой 5-метилурацил (т.е. тимин) 1156-1338 Представляет предпочтительный AON 1, причем все цитозиновые основания представляют собой 5-метилцитозин и все урациловые основания представляют собой 5-метилурацил (т.е. тимин) 1339-1528 Представляет предпочтительный AON 2, причем все цитозиновые основания представляют собой 5-метилцитозин и все урациловые основания представляют собой 5-метилурацил (т.е. тимин) 1529-1913 Представляет предпочтительный AON 1 и AON 2, причем 5'-концевой мономер содержит модификацию каркаса BNA 1914-2298 Представляет предпочтительный AON 1 и AON 2, причем 3'-концевой мономер содержит модификацию каркаса BNA 2299-2683 Представляет предпочтительный AON 1 и AON 2, причем 5'- и 3'-концевые мономеры содержат модификацию каркаса BNA 2684-3068 Представляет предпочтительный AON 1 и AON 2, причем два 5'-концевых мономера содержат модификацию каркаса BNA 3069-3453 Представляет предпочтительный AON 1 и AON 2, причем два 3'-концевых мономера содержат модификацию каркаса BNA 3454-3838 Представляет предпочтительный AON 1 и AON 2, причем два 5'- и два 3'-концевых мономера содержат модификацию каркаса BNA 3839-4213 Представляет предпочтительный AON 1 и AON 2, причем 5'-концевой мономер содержит модификацию каркаса BNA и причем все цитозиновые основания представляют собой 5-метилцитозин 4214-4588 Представляет предпочтительный AON 1 и AON 2, причем 3'-концевой мономер содержит модификацию каркаса BNA и причем все цитозиновые основания представляют собой 5-метилцитозин 4589-4963 Представляет предпочтительный AON 1 и AON 2, причем 5'- и 3'- концевые мономеры содержат модификацию каркаса BNA и причем все цитозиновые основания представляют собой 5-метилцитозин 4964-5338 Представляет предпочтительный AON 1 и AON 2, причем два 5'-концевых мономера содержат модификацию каркаса BNA и причем все цитозиновые основания представляют собой 5-метилцитозин 5339-5713 Представляет предпочтительный AON 1 и AON 2, причем два 3'-концевых мономера содержат модификацию каркаса BNA и причем все цитозиновые основания представляют собой 5-метилцитозин 5714-6088 Представляет предпочтительный AON 1 и AON 2, причем два 5'- и два 3'-концевых мономера содержат модификацию каркаса BNA и причем все цитозиновые основания представляют собой 5-метилцитозин 6089-6470 Представляет предпочтительный AON 1 и AON 2, причем 5'-концевой мономер содержит модификацию каркаса BNA и причем все урациловые основания представляют собой 5-метилурацил (т.е. тимин) 6471-6852 Представляет предпочтительный AON 1 и AON 2, причем 3'-концевой мономер содержит модификацию каркаса BNA и причем все урациловые основания представляют собой 5-метилурацил (т.е. тимин) 6853-7234 Представляет предпочтительный AON 1 и AON 2, причем 5'- и 3'- концевые мономеры содержат модификацию каркаса BNA и причем все урациловые основания представляют собой 5-метилурацил (т.е. тимин) 7235-7616 Представляет предпочтительный AON 1 и AON 2, причем два 5'- концевых мономера содержат модификацию каркаса BNA и причем все урациловые основания представляют собой 5-метилурацил (т.е. тимин) 7617-7998 Представляет предпочтительный AON 1 и AON 2, причем два 3'- концевых мономера содержат модификацию каркаса BNA и причем все урациловые основания представляют собой 5-метилурацил (т.е. тимин) 7999-8380 Представляет предпочтительный AON 1 и AON 2, причем два 5'- и два 3'- концевых мономера содержат модификацию каркаса BNA и причем все урациловые основания представляют собой 5-метилурацил (т.е. тимин) 8381-8753 Представляет предпочтительный AON 1 и AON 2, причем 5' концевой мономер содержит модификацию каркаса BNA и причем все цитозиновые основания представляют собой 5-метилцитозин все урациловые основания представляют собой 5-метилурацил (т.е. тимин) 8754-9126 Представляет предпочтительный AON 1 и AON 2, причем 3' концевой мономер содержит модификацию каркаса BNA и причем все цитозиновые основания представляют собой 5-метилцитозин все урациловые основания представляют собой 5-метилурацил (т.е. тимин) 9127-9499 Представляет предпочтительный AON 1 и AON 2, причем 5' и 3' концевые мономеры содержат модификацию каркаса BNA и причем все цитозиновые основания представляют собой 5-метилцитозин и все урациловые основания представляют собой 5-метилурацил (т.е. тимин) 9500-9872 Представляет предпочтительный AON 1 и AON 2, причем два 5' концевых мономера содержат модификацию каркаса BNA и причем все цитозиновые основания представляют собой 5-метилцитозин и все урациловые основания представляют собой 5-метилурацил (т.е. тимин) 9873-10245 Представляет предпочтительный AON 1 и AON 2, причем два 3' концевых мономера содержат модификацию каркаса BNA и причем все цитозиновые основания представляют собой 5-метилцитозин и все урациловые основания представляют собой 5-метилурацил (т.е. тимин) 10246-10618 Представляет предпочтительный AON 1 и AON 2, причем два 5'-и два 3'-концевых мономера содержат модификацию каркаса BNA и причем все цитозиновые основания представляют собой 5-метилцитозин и все урациловые основания представляют собой 5-метилурацил (т.е. тимин) 10619-10837 Представляет предпочтительный AON 1 и AON 2, причем 1 или 2 неконцевых мономера содержат модификацию каркаса BNA 10838-11056 Представляет предпочтительный AON 1 и AON 2, причем 1 или 2 неконцевых мономера содержат модификацию каркаса BNA и причем все цитозиновые основания представляют собой 5-метилцитозин 11057-11275 Представляет предпочтительный AON 1 и AON 2, причем 1 или 2 неконцевых мономера содержат модификацию каркаса BNA и причем все урациловые основания представляют собой 5-метилурацил (т.е. тимин) 11276-11494 Представляет предпочтительный AON 1 и AON 2, причем 1 или 2 неконцевых мономера содержат модификацию каркаса BNA и причем все цитозиновые основания представляют собой 5-метилцитозин и все урациловые основания представляют собой 5-метилурацил (т.е. тимин) 11495-11682 Представляет предпочтительный AON 1 и AON 2, причем 1 или 2 неконцевых мономера и 5'-концевой мономер содержит модификацию каркаса BNA 11683-11870 Представляет предпочтительный AON 1 и AON 2, причем 1 или 2 неконцевых мономера и 5'-концевой мономер содержат модификацию каркаса BNA и причем все цитозиновые основания представляют собой 5-метилцитозин 11871-12058 Представляет предпочтительный AON 1 и AON 2, причем 1 или 2 неконцевых мономера и 5'-концевой мономер содержат модификацию каркаса BNA и причем все урациловые основания представляют собой 5-метилурацил (т.е. тимин) 12059-12246 Представляет предпочтительный AON 1 и AON 2, причем 1 или 2 неконцевых мономера и 5'-концевой мономер содержат модификацию каркаса BNA и причем все цитозиновые основания представляют собой 5-метилцитозин и все урациловые основания представляют собой 5-метилурацил (т.е. тимин) 12247-12425 Представляет предпочтительный AON 1 и AON 2, причем 1 или 2 неконцевых мономера и 3'-концевой мономер содержит модификацию каркаса BNA 12426-12604 Представляет предпочтительный AON 1 и AON 2, причем 1 или 2 неконцевых мономера и 3'-концевой мономер содержат модификацию каркаса BNA и причем все цитозиновые основания представляют собой 5-метилцитозин 12605-12783 Представляет предпочтительный AON 1 и AON 2, причем 1 или 2 неконцевых мономера и 3'-концевой мономер содержат модификацию каркаса BNA и причем все урациловые основания представляют собой 5-метилурацил (т.е. тимин) 12784-12962 Представляет предпочтительный AON 1 и AON 2, причем 1 или 2 неконцевых мономера и 3'-концевой мономер содержат модификацию каркаса BNA и причем все цитозиновые основания представляют собой 5-метилцитозин и все урациловые основания представляют собой 5-метилурацил (т.е. тимин) 12963-13181 Представляет предпочтительный AON 1 и AON 2, причем 1 или 2 неконцевых мономера и 5'- и 3'-концевые мономеры содержат модификацию каркаса BNA 13182-13400 Представляет предпочтительный AON 1 и AON 2, причем 1 или 2 неконцевых мономера и 5'- и 3'-концевые мономеры содержат модификацию каркаса BNA и причем все цитозиновые основания представляют собой 5-метилцитозин 13401-13619 Представляет предпочтительный AON 1 и AON 2, причем 1 или 2 неконцевых мономера и 5'- и 3'-концевые мономеры содержат модификацию каркаса BNA и причем все урациловые основания представляют собой 5-метилурацил (т.е. тимин) 13620-13838 Представляет предпочтительный AON 1 и AON 2, причем 5'- и 3'-концевые мономеры содержат модификацию каркаса BNA и причем все цитозиновые основания представляют собой 5-метилцитозин и все урациловые основания представляют собой 5-метилурацил (т.е. тимин) 13829-14026 Представляет предпочтительный AON 1 и AON 2, причем 1 или 2 неконцевых мономера и два 5'-концевых мономера содержат модификацию каркаса BNA 14027-14214 Представляет предпочтительный AON 1 и AON 2, причем 1 или 2 неконцевых мономера и два 5'-концевых мономера содержат модификацию каркаса BNA и причем все цитозиновые основания представляют собой 5-метилцитозин 14215-14402 Представляет предпочтительный AON 1 и AON 2, причем 1 или 2 неконцевых мономера и два 5'-концевых мономера содержат модификацию каркаса BNA и причем все урациловые основания представляют собой 5-метилурацил (т.е. тимин) 14403-14590 Представляет предпочтительный AON 1 и AON 2, причем 1 или 2 неконцевых мономера и два 5'-концевых мономера содержат модификацию каркаса BNA и причем все цитозиновые основания представляют собой 5-метилцитозин и все урациловые основания представляют собой 5-метилурацил (т.е. тимин) 14591-14769 Представляет предпочтительный AON 1 и AON 2, причем 1 или 2 неконцевых мономера и два 3'-концевых мономера содержат модификацию каркаса BNA 14770-14948 Представляет предпочтительный AON 1 и AON 2, причем 1 или 2 неконцевых мономера и два 3'-концевых мономера содержат модификацию каркаса BNA и причем все цитозиновые основания представляют собой 5-метилцитозин 14949-15127 Представляет предпочтительный AON 1 и AON 2, причем 1 или 2 неконцевых мономера и два 3'-концевых мономера содержат модификацию каркаса BNA и причем все урациловые основания представляют собой 5-метилурацил (т.е. тимин) 15128-15306 Представляет предпочтительный AON 1 и AON 2, причем 1 или 2 неконцевых мономера и два 3'-концевых мономера содержат модификацию каркаса BNA и причем все цитозиновые основания представляют собой 5-метилцитозин и все урациловые основания представляют собой 5-метилурацил (т.е. тимин) 15307-15457 Представляет предпочтительный AON 1 и AON 2, причем 1 или 2 неконцевых мономера и два 5'- и два 3'-концевых мономера содержат модификацию каркаса BNA 15458-15608 Представляет предпочтительный AON 1 и AON 2, причем 1 или 2 неконцевых мономера и два 5'- и два 3'- концевых мономера содержат модификацию каркаса BNA и причем все цитозиновые основания представляют собой 5-метилцитозин 15609-15759 Представляет предпочтительный AON 1 и AON 2, причем 1 или 2 неконцевых мономера и два 5'- и два 3'-концевых мономера содержат модификацию каркаса BNA и причем все урациловые основания представляют собой 5-метилурацил (т.е. тимин) 15760-15910 Представляет предпочтительный AON 1 и AON 2, причем 1 или 2 неконцевых мономера и два 5'- и два 3'-концевых мономера содержат модификацию каркаса BNA и причем все цитозиновые основания представляют собой 5-метилцитозин и все урациловые основания представляют собой 5-метилурацил (т.е. тимин) 15911-15947 Представляет предпочтительный AON 1 с конкретными мономерами, содержащими модификацию каркаса BNA 15948-15976 Представляет предпочтительный AON 2 с конкретными мономерами, содержащими модификацию каркаса BNA 15977-16013 Представляет предпочтительный AON 1 с конкретными мономерами, содержащими модификацию каркаса BNA, причем все цитозиновые основания представляют собой 5-метилцитозин 16014-16042 Представляет предпочтительный AON 2 с конкретными мономерами, содержащими модификацию каркаса BNA, причем все цитозиновые основания представляют собой 5-метилцитозин 16043-16079 Представляет предпочтительный AON 1 с конкретными мономерами, содержащими модификацию каркаса BNA, причем все урациловые основания представляют собой 5-метилурацил (т.е. тимин) 16080-16108 Представляет предпочтительный AON 2 с конкретными мономерами, содержащими модификацию каркаса BNA, причем все урациловые основания представляют собой 5-метилурацил (т.е. тимин) 16109-16145 Представляет предпочтительный AON 1 с конкретными мономерами, содержащими модификацию каркаса BNA, причем все цитозиновые основания представляют собой 5-метилцитозин и все урациловые основания представляют собой 5-метилурацил (т.е. тимин) 16146-16174 Представляет предпочтительный AON 2 с конкретными мономерами, содержащими модификацию каркаса BNA, причем все цитозиновые основания представляют собой 5-метилцитозин и все урациловые основания представляют собой 5-метилурацил (т.е. тимин) 16175-16214 Предпочтительные соединения по настоящему изобретению (линкер TEG или HEG) 16215-16254 Предпочтительные соединения по настоящему изобретению (линкер TEG или HEG), причем все цитозиновые основания представляют собой 5-метилцитозин 16255-16294 Предпочтительные соединения по настоящему изобретению (линкер TEG или HEG), причем все урациловые основания представляют собой 5-метилурацил (т.е. тимин) 16295-16334 Предпочтительные соединения по настоящему изобретению (линкер TEG или HEG), причем все цитозиновые основания представляют собой 5-метилцитозин и все урациловые основания представляют собой 5-метилурацил (т.е. тимин) 16335-16350 Более предпочтительные соединения по настоящему изобретению (линкер TEG или HEG) 16351-16352 Предпочтительный AON по настоящему изобретению 16353 AON

Примеры

Пример 1 (in vitro)

Материалы и способы

Соединения

Все антисмысловые олигонуклеотиды (AON) (таблица 3, фиг. 1) имели фосфотиоатный остов с 2'-O-метил мономерами и по меньшей мере одну модификацию LNA (SEQ ID NO: 16353, 16026 и 15980), то же относится к первому AON и второму AON соединений по настоящему изобретению, представленных SEQ ID NO: 16336, 16335, 16338 и 16337. AON были синтезированы в масштабе 5 мкмоль с использованием синтезатора OP-10 (GE/ÄKTA Oligopilot) или MerMade 12 Synthesizer (BioAutomation) посредством стандартных протоколов фосфорамидита. Линкеры TEG и HEG в соединениях с SEQ ID NO: 16336, 16335, 16338 и 16337 вводили с использованием соответствующих структурных блоков фосфорамидита и стандартных протоколов синтеза. AON отщепляли и снимали защиту в двухстадийной последовательности (обработка DEA, а затем конц. NH₄OH), очищали посредством анионообменной хроматографии, обессоливали посредством эксклюзионной хроматографии и лиофилизировали. Посредством масс-спектрометрии подтверждали идентичность всех AON, и чистота (определенная UPLC-UV) оказалась приемлемой для всех AON (более 80%).

Таблица 3

Последовательность (5'-3') SEQ ID NO C*AAGGAAGAUGGC*AUUUC*T 16353 TC*AAGGAAGAUGGC*AUUUC*T 16026 GGUAAGUUC*UGUC*C*AAGC* 15980 TC*AAGGAAGAUGGC*AUUUC*T -TEG- GGUAAGUUC*UGUC*C*AAGC* 16336 GGUAAGUUC*UGUC*C*AAGC* -TEG- TC*AAGGAAGAUGGC*AUUUC*T 16335 TC*AAGGAAGAUGGC*AUUUC*T - HEG- GGUAAGUUC*UGUC*C*AAGC* 16338 GGUAAGUUC*UGUC*C*AAGC* - HEG- TC*AAGGAAGAUGGC*AUUUC*T 16337

A=аденозин; G=гуанин; U=урацил; T=тимин; C*=5-метилцитозин; G, A, C, T=нуклеотиды LNA; TEG=триэтиленгликолевый линкер, и HEG=гексаэтиленгликолевый линкер.

Свободный захват и синтез кДНК

Иммортализованные миобласты, полученные от пациента с DMD с делецией экзонов 48-50, культивировали до конфлюэнтности в 12-луночных планшетах. Для индукции образования мышечных трубок, среду для пролиферации заменяли средой с низким содержанием сыворотки для дифференцировки в течение 6 дней с добавлением 400 или 800 нМ AON (N=6) в соответствии со стандартными рабочими процедурами, не относящимися к GLP. Затем выделяли общий РНК, и 1000 нг РНК применяли в качестве исходных данных для синтеза cДНК с использованием случайных праймеров гексамеров.

Анализ посредством цифровой капельной (цк)ПЦР

Специфические анализы Taqman для связывания белка с малыми бороздками (MGB) были разработаны для обнаружения продуктов транскрипции дистрофина с экзоном 51 и без него (таблица 4) и были приобретены в Applied Biosystems. Анализ посредством цифровой капельной ПЦР проводили на 1 мкл (для транскрипта без пропуска экзона) или 4 мкл (для транскрипта с пропуском экзона) кДНК в реакционном объеме 20 мкл с использованием температуры отжига/удлинения 60°C в соответствии с инструкциями производителя (BioRad). Данные были представлены в виде процента пропуска экзона [N₀ пропущено/(N₀ пропущено+N₀ не пропущено)*100].

Таблица 4

Анализ Целевые экзоны Последовательности SEQ ID NO DMD_
47-52 47/52 Прямой праймер TGAAAATAAGCTCAAGCAGACAAATC 9 Обратный праймер GACGCCTCTGTTCCAAATCC 10 Зонд CAGTGGATAAAGGCAACA 11 DMD_
51-52,2 51/52 Прямой праймер GTGATGGTGGGTGACCTTGAG 12 Обратный праймер GACGCCTCTGTTCCAAATCC 10 Зонд CAAGCAGAAGGCAACAA 13

Результаты

Применение смеси AON (представленных SEQ ID NO: 16353 и 15980; или SEQ ID NO: 16026 и 15980), нацеливающихся на отличные участки последовательности в экзоне 51 обеспечивало более высокие уровни пропуска экзона 51 (до 24%), чем с каждым отдельным AON (представленным SEQ ID NO: 16353, 16026 или 15980); до 5,7% для SEQ ID NO: 16026 при 800 нМ) (фиг. 1). Смесь AON (представленных SEQ ID NO: 16353 и 16026), нацеливающихся на тот же участок последовательности в экзоне 51 не усиливало эффективность пропуска экзона 51 (3,2%). Примечательно, применение AON, нацеливающихся на отличные участки последовательности в экзоне 51 (представленных SEQ ID NO: 16026 и 15980) и связанных между собой триэтиленовым или гексаэтиленгликолевым линкерами обеспечивало получение еще больших уровней пропуска экзона 51 (до 81,6% для SEQ ID NO: 16335) (фиг. 1). В данном примере соединения, в которых AON, представленный SEQ ID NO: 15980, связан с 5' концом AON, представленным SEQ ID NO: 16026, были наиболее эффективными (соединения, представленные SEQ ID NO: 16335 и 16337).

Пример 2 (in vivo)

Материалы и способы

Эксперимент на мышах

Данный эксперимент на мышах проводили в соответствии с рекомендациями Национального института здоровья (NIH) по уходу и использованию лабораторных животных. Мышей Del52hDMD/mdx (Leiden University Medical Center, Veltrop et al., 2018; PLoS ONE 13 (2):e0193289) рандомизировали по группам (n=10), учитывая начальный вес и распределение в зависимости от половой принадлежности. Мышам вводили 1 раз в неделю внутривенную инъекцию в хвостовую вену с отдельно взятыми антисмысловыми олигонуклеотидами, представленными SEQ ID NO: 16026 или 15980 (при 2,7 или 8,1 мкмоль/кг), их смесью (4,05 мкмоль/кг каждого) или с представленным связанным соединением AON, представленным SEQ ID NO: 16338 (2,7 мкмоль/кг), начиная с возраста 5-6 недель в течение всего 12 недель. Через десять дней после последней инъекции AON животных умерщвляли и собирали образцы тканей (после транскардиальной перфузии PBS для удаления крови из тканей). Образцы ткани четырехглавой мышцы мгновенно замораживали и хранили при -80°C.

Выделение РНК и синтез кДНК

Образцы ткани четырехглавой мышцы гомогенизировали в 1 мл нуклеозола (Macherey Nagel) посредством измельчения в MagNa Lyser с использованием Lysing Matrix D Tubes (MP Biomedicals). Общую РНК экстрагировали из гомогената в соответствии с инструкциями производителя. Для синтеза кДНК применяли 1000 нг общего количества РНК. кДНК генерировали в реакциях объемом 20 мкл с использованием случайных гексамерных праймеров и обратной транскриптазы GoScript и инкубации в течение 40 минут при 50°C.

Анализ посредством цифровой капельной ПЦР

Специфические анализы Taqman для связывания малых бороздок (MGB) были разработаны (с использованием программного обеспечения Primer Express 3.0.1; Applied Biosystems) для обнаружения продуктов транскрипции дистрофина с экзоном 51 и без него (таблица 4) и были приобретены в Applied Biosystems. Анализ посредством цифровой капельной ПЦР проводили на 2 или 4 мкл кДНК в реакционном объеме 20 мкл с использованием температуры отжига/удлинения 60°C в соответствии с инструкциями производителя (BioRad). Данные были представлены в виде процента пропуска экзона [N₀ пропущено/(N₀ пропущено+N₀ не пропущено)*100].

Результаты

Синергетический эффект объединения AON с SEQ ID NO: 15980 и 16026, нацеливающихся на различные участки последовательности ESE, относительно эффективности пропуска экзона 51 продемонстрирован в исследовании in vivo на мышах del52hDMD/mdx. Данные мыши являются дистрофин-дефицитными на основании мутации mdx в экзоне 23 мышиного гена DMD и делеции экзона 52 в трансгене DMD человека на хромосоме 5 (Veltrop et al., 2018). Эффект является более сильным, если данные AON связаны линкером, таким как HEG=гексаэтиленгликолевый линкер (соединение, представленное SEQ ID NO: 16338) (фиг. 2). Эффективность пропуска для смеси AON с SEQ ID NO: 15980 и 16026 при 4,05 мкмоль/кг выше, чем у каждого из отдельных AON при 8,1 мкмоль/кг. Молекула, в которой данные AON были физически связаны посредством HEG (соединение, представленное SEQ ID NO: 16338), была даже более эффективной: 2,7 мкмоль/кг, аналогичны таковой смеси при 8,1 мкмоль/кг.

Список литературных источников

Aartsma-Rus et al., Hum Mol Gen 2003; 12(8):907-14.

Arai K et al.Bioorg. Med. Chem. 2011, 21, 6285

Baltimore, MD: Lippincott Williams & Wilkins, 2000

Beekman etal., PLoS ONE 2014; 9(9): e107494

Beekman et al., PLoS ONE 2018; 13(4): e0195850

Bolli et al., Chem Biol. 1996 Mar;3(3):197-206

Braida C., et al, Human Molecular Genetics, 2010, vol 9: 1399-1412

Bruno, K., Advanced Drug Delivery Reviews 2011; 63: 1210.

Cao et al., Mol. Ther. Nucleic Acids, 2016, doi:10.1038/mtna.2016.46

Cartegni L, et al, Nat Rev Genet 2002;3(4):285-98.

Cartegni L, et al, Nucleic Acids Res 2003;31(13):3568-71

Cirak et al., Lancet 2011; 378: 595-605.

Diebold S.S., et.al., Eur J Immunol. 2006; Dec;36(12):3256-67.

Disterer et al., Mol Ther 2013, 21(3):602-609

doi: 10.1021/ja710342q

doi: 10.1093/nass/1.1.241

doi: 10.1021/jo100170g

DOI: 10.1021/jo402690j

doi: 10.1021/acs.joc.5b00184

Dominski and Kole, PNAS 1993, 90(18):8673-8677

Dorn and Kippenberger, Curr Opin Mol Ther 2008; 10(1): 10-20

Du et al., PNAS 2007, 104(14):6007-12

Ehmsen J. et al, J. Cell Sci. 2002, 115 (Pt14): 2801-2803.

Evers et al. PLoS ONE 2011, 6 (9) e24308

Evers et al., Nucleic Acid Ther 2014, 24(1):4-12

Fairbrother et al., Science 2002, 297(5583) : 1007-1013

Fairbrother et al., Nucleic Acids 2004, 32 : W187-190

Friedman et al., J Biol Chem 1999, 274(51):36193-36199

Gao et al., Cell Transplant 2008, 17(7):723-34

Gao et al., Mol Ther Nucleic Acids 2015, 4:e255

Gedicke-Hornung et al., EMBO Mol Med 2013, 5(7):1060-77

Giles et al., Antisense Nucleic Acid Drug Dev 1999, 9(2):213-20

Goemans et al., N Engl J Med. 2011; 364(16):1513-22.

Goto et al., J Invest Dermatol 2006, 126(12):2614-20

Goyenvalle et al., Nat Med 2015, 21(3):270-5

Han et al., Nature Communications, 2016, doi:10.1038/ncomms10981

Hanessian et al., J. Org. Chem., 2013, 78 (18), pp 9064-9075

Heemskerk et al., Mol Ther 2010; 18(6):1210-7.

Hodgetts S., et al, Neuromuscular Disorders 2006; 16: 591-602

Hua et al., Am J Hum Genet 2008, 82(4): 834-48

Hua et al., Nature 2011, 478(7367):123-6

Karras et al., Biochemistry 2001, 40(26):7853-9

Khoo et al., BMC Mol Biol 2007, 8;3

Krieg AM. et al., Nature 1995; 374: 546-549.

Krieg, A. M., Curr. Opin. Immunol. 2000; 12: 35-43.

Kumar L, Pharm. Technol. 2008, 3, 128

Lentz et al., Nat Med 2013, 19(3):345-350

Manzur A.Y. et al., Wiley publishers, 2008. The Cochrane collaboration.

Mercatante et al., J Biol Chem 2002, 277(51):49374-82

Monaco A.P., et al., Genomics 1988; 2: 90-95.

Murray et al., Nucl. Acids Res., 2012, Vol. 40, No. 13 6135-6143

Nishida et al. Chem. Commun. 2010, 46, 5283

Opalinska et al., Nucleic Acids Res., 2004, 32(19): 5791-5795

Osawa et al., J. Org. Chem., 2015, 80 (21), pp 10474-10481

Osorio et al., Sci Transl Med 2011, 3(106):106ra107

Owen et al., PLoS One 2012, 7(3):e33576

Peacey et al., NAR 2012, 40(19):9836-49

Peacock H et al. J. Am. Chem. Soc. 2011, 133, 9200

Popovic PJ. et al. J of Immunol 2006; 177: 8701-8707.

Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 20th Edition.

Renshaw et al., Mol Cancer Ther 2004, 3(11):1467-84

Rincon et al., Am J Hum Genet 2007, 81(6):1262-1270

Seth et al., J. Org. Chem. 2010, 75, 1569-1581

Spitali et al., FASEB J 2013, 27(12): 4909-4916

Taniguchi-Ikeda et al., Nature 2011, 478(7367):127-31

Tyson-Capper et al., Mol Pharmacol 2006, 69(3):796-804

Uchikawa et al., J Hum Genet 2007, 52(11):891-897

Uehara et al., FASEB J 2013, 27(1):76-85

van Deutekom et al., N Engl J Med. 2007; 357(26):2677-86.

van Ommen, van Deutekom, Aartsma-Rus, Curr Opin Mol Ther. 2008; 10(2):140-9.

Veltrop et al., 2018; PLoS ONE 13(2):e0193289

Verheul et al., 2016 ; PLoS ONE 11(9):e0162467

Vetrini et al., Hum Mutat 2006, 27(5):420-6

Vickers et al., J Immunol 2006, 176(6):3652-61

Voit et al., Lancet Neurol 2014, 13(10):987-96

Wagner, H., Adv. Immunol. 1999; 73: 329-368.

Wein et al., Hum Mut 2010, 31(2):136-42

Wheeler et al., J Clin Invest 2007, 117(12):3952-7

Williams et al., Oligonucleotides 2006, 16(2):186-95

WO 2011/097641 (ISIS/Ionis Pharmaceuticals)

WO 2014/112463 (Obika S et al.)

WO 2014/126229 (Mitsuoka Y et al.)

WO 2014/145356 (MiRagen Therapeutics)

WO 2015/142910 (Ionis Pharmaceuticals)

WO2016/017422 (Osaka University)

Yamamoto et al. Org. Biomol. Chem. 2015, 13, 3757

Yokota, Duddy, Partidge, Acta Myol. 2007; 26(3):179-84.

Straarup et al., 2010; Nucleic Acids Res 38(20): 7100-7111

Zammarchi et al., PNAS 2011, 108(43):17779-84

Zuker M., et al, Nucleic Acids Res. 2003; 31(13):3406-15.

--->

СПИСОК ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ

<110> БиоМарин Текнолоджис Б.В.

<120> Биспецифические нтисмысловые олигонуклеотиды для пропуска экзона

дистрофина

<130> 105324PC

<160> 16353

<210> 1

<211> 3685

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 1

Met Leu Trp Trp Glu Glu Val Glu Asp Cys Tyr Glu Arg Glu Asp Val

1. 5 10 15

Gln Lys Lys Thr Phe Thr Lys Trp Val Asn Ala Gln Phe Ser Lys Phe

20 25 30

Gly Lys Gln His Ile Glu Asn Leu Phe Ser Asp Leu Gln Asp Gly Arg

35 40 45

Arg Leu Leu Asp Leu Leu Glu Gly Leu Thr Gly Gln Lys Leu Pro Lys

50 55 60

Glu Lys Gly Ser Thr Arg Val His Ala Leu Asn Asn Val Asn Lys Ala

65 70 75 80

Leu Arg Val Leu Gln Asn Asn Asn Val Asp Leu Val Asn Ile Gly Ser

85 90 95

Thr Asp Ile Val Asp Gly Asn His Lys Leu Thr Leu Gly Leu Ile Trp

100 105 110

Asn Ile Ile Leu His Trp Gln Val Lys Asn Val Met Lys Asn Ile Met

115 120 125

Ala Gly Leu Gln Gln Thr Asn Ser Glu Lys Ile Leu Leu Ser Trp Val

130 135 140

Arg Gln Ser Thr Arg Asn Tyr Pro Gln Val Asn Val Ile Asn Phe Thr

145 150 155 160

Thr Ser Trp Ser Asp Gly Leu Ala Leu Asn Ala Leu Ile His Ser His

165 170 175

Arg Pro Asp Leu Phe Asp Trp Asn Ser Val Val Cys Gln Gln Ser Ala

180 185 190

Thr Gln Arg Leu Glu His Ala Phe Asn Ile Ala Arg Tyr Gln Leu Gly

195 200 205

Ile Glu Lys Leu Leu Asp Pro Glu Asp Val Asp Thr Thr Tyr Pro Asp

210 215 220

Lys Lys Ser Ile Leu Met Tyr Ile Thr Ser Leu Phe Gln Val Leu Pro

225 230 235 240

Gln Gln Val Ser Ile Glu Ala Ile Gln Glu Val Glu Met Leu Pro Arg

245 250 255

Pro Pro Lys Val Thr Lys Glu Glu His Phe Gln Leu His His Gln Met

260 265 270

His Tyr Ser Gln Gln Ile Thr Val Ser Leu Ala Gln Gly Tyr Glu Arg

275 280 285

Thr Ser Ser Pro Lys Pro Arg Phe Lys Ser Tyr Ala Tyr Thr Gln Ala

290 295 300

Ala Tyr Val Thr Thr Ser Asp Pro Thr Arg Ser Pro Phe Pro Ser Gln

305 310 315 320

His Leu Glu Ala Pro Glu Asp Lys Ser Phe Gly Ser Ser Leu Met Glu

325 330 335

Ser Glu Val Asn Leu Asp Arg Tyr Gln Thr Ala Leu Glu Glu Val Leu

340 345 350

Ser Trp Leu Leu Ser Ala Glu Asp Thr Leu Gln Ala Gln Gly Glu Ile

355 360 365

Ser Asn Asp Val Glu Val Val Lys Asp Gln Phe His Thr His Glu Gly

370 375 380

Tyr Met Met Asp Leu Thr Ala His Gln Gly Arg Val Gly Asn Ile Leu

385 390 395 400

Gln Leu Gly Ser Lys Leu Ile Gly Thr Gly Lys Leu Ser Glu Asp Glu

405 410 415

Glu Thr Glu Val Gln Glu Gln Met Asn Leu Leu Asn Ser Arg Trp Glu

420 425 430

Cys Leu Arg Val Ala Ser Met Glu Lys Gln Ser Asn Leu His Arg Val

435 440 445

Leu Met Asp Leu Gln Asn Gln Lys Leu Lys Glu Leu Asn Asp Trp Leu

450 455 460

Thr Lys Thr Glu Glu Arg Thr Arg Lys Met Glu Glu Glu Pro Leu Gly

465 470 475 480

Pro Asp Leu Glu Asp Leu Lys Arg Gln Val Gln Gln His Lys Val Leu

485 490 495

Gln Glu Asp Leu Glu Gln Glu Gln Val Arg Val Asn Ser Leu Thr His

500 505 510

Met Val Val Val Val Asp Glu Ser Ser Gly Asp His Ala Thr Ala Ala

515 520 525

Leu Glu Glu Gln Leu Lys Val Leu Gly Asp Arg Trp Ala Asn Ile Cys

530 535 540

Arg Trp Thr Glu Asp Arg Trp Val Leu Leu Gln Asp Ile Leu Leu Lys

545 550 555 560

Trp Gln Arg Leu Thr Glu Glu Gln Cys Leu Phe Ser Ala Trp Leu Ser

565 570 575

Glu Lys Glu Asp Ala Val Asn Lys Ile His Thr Thr Gly Phe Lys Asp

580 585 590

Gln Asn Glu Met Leu Ser Ser Leu Gln Lys Leu Ala Val Leu Lys Ala

595 600 605

Asp Leu Glu Lys Lys Lys Gln Ser Met Gly Lys Leu Tyr Ser Leu Lys

610 615 620

Gln Asp Leu Leu Ser Thr Leu Lys Asn Lys Ser Val Thr Gln Lys Thr

625 630 635 640

Glu Ala Trp Leu Asp Asn Phe Ala Arg Cys Trp Asp Asn Leu Val Gln

645 650 655

Lys Leu Glu Lys Ser Thr Ala Gln Ile Ser Gln Ala Val Thr Thr Thr

660 665 670

Gln Pro Ser Leu Thr Gln Thr Thr Val Met Glu Thr Val Thr Thr Val

675 680 685

Thr Thr Arg Glu Gln Ile Leu Val Lys His Ala Gln Glu Glu Leu Pro

690 695 700

Pro Pro Pro Pro Gln Lys Lys Arg Gln Ile Thr Val Asp Ser Glu Ile

705 710 715 720

Arg Lys Arg Leu Asp Val Asp Ile Thr Glu Leu His Ser Trp Ile Thr

725 730 735

Arg Ser Glu Ala Val Leu Gln Ser Pro Glu Phe Ala Ile Phe Arg Lys

740 745 750

Glu Gly Asn Phe Ser Asp Leu Lys Glu Lys Val Asn Ala Ile Glu Arg

755 760 765

Glu Lys Ala Glu Lys Phe Arg Lys Leu Gln Asp Ala Ser Arg Ser Ala

770 775 780

Gln Ala Leu Val Glu Gln Met Val Asn Glu Gly Val Asn Ala Asp Ser

785 790 795 800

Ile Lys Gln Ala Ser Glu Gln Leu Asn Ser Arg Trp Ile Glu Phe Cys

805 810 815

Gln Leu Leu Ser Glu Arg Leu Asn Trp Leu Glu Tyr Gln Asn Asn Ile

820 825 830

Ile Ala Phe Tyr Asn Gln Leu Gln Gln Leu Glu Gln Met Thr Thr Thr

835 840 845

Ala Glu Asn Trp Leu Lys Ile Gln Pro Thr Thr Pro Ser Glu Pro Thr

850 855 860

Ala Ile Lys Ser Gln Leu Lys Ile Cys Lys Asp Glu Val Asn Arg Leu

865 870 875 880

Ser Gly Leu Gln Pro Gln Ile Glu Arg Leu Lys Ile Gln Ser Ile Ala

885 890 895

Leu Lys Glu Lys Gly Gln Gly Pro Met Phe Leu Asp Ala Asp Phe Val

900 905 910

Ala Phe Thr Asn His Phe Lys Gln Val Phe Ser Asp Val Gln Ala Arg

915 920 925

Glu Lys Glu Leu Gln Thr Ile Phe Asp Thr Leu Pro Pro Met Arg Tyr

930 935 940

Gln Glu Thr Met Ser Ala Ile Arg Thr Trp Val Gln Gln Ser Glu Thr

945 950 955 960

Lys Leu Ser Ile Pro Gln Leu Ser Val Thr Asp Tyr Glu Ile Met Glu

965 970 975

Gln Arg Leu Gly Glu Leu Gln Ala Leu Gln Ser Ser Leu Gln Glu Gln

980 985 990

Gln Ser Gly Leu Tyr Tyr Leu Ser Thr Thr Val Lys Glu Met Ser Lys

995 1000 1005

Lys Ala Pro Ser Glu Ile Ser Arg Lys Tyr Gln Ser Glu Phe Glu

1010 1015 1020

Glu Ile Glu Gly Arg Trp Lys Lys Leu Ser Ser Gln Leu Val Glu

1025 1030 1035

His Cys Gln Lys Leu Glu Glu Gln Met Asn Lys Leu Arg Lys Ile

1040 1045 1050

Gln Asn His Ile Gln Thr Leu Lys Lys Trp Met Ala Glu Val Asp

1055 1060 1065

Val Phe Leu Lys Glu Glu Trp Pro Ala Leu Gly Asp Ser Glu Ile

1070 1075 1080

Leu Lys Lys Gln Leu Lys Gln Cys Arg Leu Leu Val Ser Asp Ile

1085 1090 1095

Gln Thr Ile Gln Pro Ser Leu Asn Ser Val Asn Glu Gly Gly Gln

1100 1105 1110

Lys Ile Lys Asn Glu Ala Glu Pro Glu Phe Ala Ser Arg Leu Glu

1115 1120 1125

Thr Glu Leu Lys Glu Leu Asn Thr Gln Trp Asp His Met Cys Gln

1130 1135 1140

Gln Val Tyr Ala Arg Lys Glu Ala Leu Lys Gly Gly Leu Glu Lys

1145 1150 1155

Thr Val Ser Leu Gln Lys Asp Leu Ser Glu Met His Glu Trp Met

1160 1165 1170

Thr Gln Ala Glu Glu Glu Tyr Leu Glu Arg Asp Phe Glu Tyr Lys

1175 1180 1185

Thr Pro Asp Glu Leu Gln Lys Ala Val Glu Glu Met Lys Arg Ala

1190 1195 1200

Lys Glu Glu Ala Gln Gln Lys Glu Ala Lys Val Lys Leu Leu Thr

1205 1210 1215

Glu Ser Val Asn Ser Val Ile Ala Gln Ala Pro Pro Val Ala Gln

1220 1225 1230

Glu Ala Leu Lys Lys Glu Leu Glu Thr Leu Thr Thr Asn Tyr Gln

1235 1240 1245

Trp Leu Cys Thr Arg Leu Asn Gly Lys Cys Lys Thr Leu Glu Glu

1250 1255 1260

Val Trp Ala Cys Trp His Glu Leu Leu Ser Tyr Leu Glu Lys Ala

1265 1270 1275

Asn Lys Trp Leu Asn Glu Val Glu Phe Lys Leu Lys Thr Thr Glu

1280 1285 1290

Asn Ile Pro Gly Gly Ala Glu Glu Ile Ser Glu Val Leu Asp Ser

1295 1300 1305

Leu Glu Asn Leu Met Arg His Ser Glu Asp Asn Pro Asn Gln Ile

1310 1315 1320

Arg Ile Leu Ala Gln Thr Leu Thr Asp Gly Gly Val Met Asp Glu

1325 1330 1335

Leu Ile Asn Glu Glu Leu Glu Thr Phe Asn Ser Arg Trp Arg Glu

1340 1345 1350

Leu His Glu Glu Ala Val Arg Arg Gln Lys Leu Leu Glu Gln Ser

1355 1360 1365

Ile Gln Ser Ala Gln Glu Thr Glu Lys Ser Leu His Leu Ile Gln

1370 1375 1380

Glu Ser Leu Thr Phe Ile Asp Lys Gln Leu Ala Ala Tyr Ile Ala

1385 1390 1395

Asp Lys Val Asp Ala Ala Gln Met Pro Gln Glu Ala Gln Lys Ile

1400 1405 1410

Gln Ser Asp Leu Thr Ser His Glu Ile Ser Leu Glu Glu Met Lys

1415 1420 1425

Lys His Asn Gln Gly Lys Glu Ala Ala Gln Arg Val Leu Ser Gln

1430 1435 1440

Ile Asp Val Ala Gln Lys Lys Leu Gln Asp Val Ser Met Lys Phe

1445 1450 1455

Arg Leu Phe Gln Lys Pro Ala Asn Phe Glu Gln Arg Leu Gln Glu

1460 1465 1470

Ser Lys Met Ile Leu Asp Glu Val Lys Met His Leu Pro Ala Leu

1475 1480 1485

Glu Thr Lys Ser Val Glu Gln Glu Val Val Gln Ser Gln Leu Asn

1490 1495 1500

His Cys Val Asn Leu Tyr Lys Ser Leu Ser Glu Val Lys Ser Glu

1505 1510 1515

Val Glu Met Val Ile Lys Thr Gly Arg Gln Ile Val Gln Lys Lys

1520 1525 1530

Gln Thr Glu Asn Pro Lys Glu Leu Asp Glu Arg Val Thr Ala Leu

1535 1540 1545

Lys Leu His Tyr Asn Glu Leu Gly Ala Lys Val Thr Glu Arg Lys

1550 1555 1560

Gln Gln Leu Glu Lys Cys Leu Lys Leu Ser Arg Lys Met Arg Lys

1565 1570 1575

Glu Met Asn Val Leu Thr Glu Trp Leu Ala Ala Thr Asp Met Glu

1580 1585 1590

Leu Thr Lys Arg Ser Ala Val Glu Gly Met Pro Ser Asn Leu Asp

1595 1600 1605

Ser Glu Val Ala Trp Gly Lys Ala Thr Gln Lys Glu Ile Glu Lys

1610 1615 1620

Gln Lys Val His Leu Lys Ser Ile Thr Glu Val Gly Glu Ala Leu

1625 1630 1635

Lys Thr Val Leu Gly Lys Lys Glu Thr Leu Val Glu Asp Lys Leu

1640 1645 1650

Ser Leu Leu Asn Ser Asn Trp Ile Ala Val Thr Ser Arg Ala Glu

1655 1660 1665

Glu Trp Leu Asn Leu Leu Leu Glu Tyr Gln Lys His Met Glu Thr

1670 1675 1680

Phe Asp Gln Asn Val Asp His Ile Thr Lys Trp Ile Ile Gln Ala

1685 1690 1695

Asp Thr Leu Leu Asp Glu Ser Glu Lys Lys Lys Pro Gln Gln Lys

1700 1705 1710

Glu Asp Val Leu Lys Arg Leu Lys Ala Glu Leu Asn Asp Ile Arg

1715 1720 1725

Pro Lys Val Asp Ser Thr Arg Asp Gln Ala Ala Asn Leu Met Ala

1730 1735 1740

Asn Arg Gly Asp His Cys Arg Lys Leu Val Glu Pro Gln Ile Ser

1745 1750 1755

Glu Leu Asn His Arg Phe Ala Ala Ile Ser His Arg Ile Lys Thr

1760 1765 1770

Gly Lys Ala Ser Ile Pro Leu Lys Glu Leu Glu Gln Phe Asn Ser

1775 1780 1785

Asp Ile Gln Lys Leu Leu Glu Pro Leu Glu Ala Glu Ile Gln Gln

1790 1795 1800

Gly Val Asn Leu Lys Glu Glu Asp Phe Asn Lys Asp Met Asn Glu

1805 1810 1815

Asp Asn Glu Gly Thr Val Lys Glu Leu Leu Gln Arg Gly Asp Asn

1820 1825 1830

Leu Gln Gln Arg Ile Thr Asp Glu Arg Lys Arg Glu Glu Ile Lys

1835 1840 1845

Ile Lys Gln Gln Leu Leu Gln Thr Lys His Asn Ala Leu Lys Asp

1850 1855 1860

Leu Arg Ser Gln Arg Arg Lys Lys Ala Leu Glu Ile Ser His Gln

1865 1870 1875

Trp Tyr Gln Tyr Lys Arg Gln Ala Asp Asp Leu Leu Lys Cys Leu

1880 1885 1890

Asp Asp Ile Glu Lys Lys Leu Ala Ser Leu Pro Glu Pro Arg Asp

1895 1900 1905

Glu Arg Lys Ile Lys Glu Ile Asp Arg Glu Leu Gln Lys Lys Lys

1910 1915 1920

Glu Glu Leu Asn Ala Val Arg Arg Gln Ala Glu Gly Leu Ser Glu

1925 1930 1935

Asp Gly Ala Ala Met Ala Val Glu Pro Thr Gln Ile Gln Leu Ser

1940 1945 1950

Lys Arg Trp Arg Glu Ile Glu Ser Lys Phe Ala Gln Phe Arg Arg

1955 1960 1965

Leu Asn Phe Ala Gln Ile His Thr Val Arg Glu Glu Thr Met Met

1970 1975 1980

Val Met Thr Glu Asp Met Pro Leu Glu Ile Ser Tyr Val Pro Ser

1985 1990 1995

Thr Tyr Leu Thr Glu Ile Thr His Val Ser Gln Ala Leu Leu Glu

2000 2005 2010

Val Glu Gln Leu Leu Asn Ala Pro Asp Leu Cys Ala Lys Asp Phe

2015 2020 2025

Glu Asp Leu Phe Lys Gln Glu Glu Ser Leu Lys Asn Ile Lys Asp

2030 2035 2040

Ser Leu Gln Gln Ser Ser Gly Arg Ile Asp Ile Ile His Ser Lys

2045 2050 2055

Lys Thr Ala Ala Leu Gln Ser Ala Thr Pro Val Glu Arg Val Lys

2060 2065 2070

Leu Gln Glu Ala Leu Ser Gln Leu Asp Phe Gln Trp Glu Lys Val

2075 2080 2085

Asn Lys Met Tyr Lys Asp Arg Gln Gly Arg Phe Asp Arg Ser Val

2090 2095 2100

Glu Lys Trp Arg Arg Phe His Tyr Asp Ile Lys Ile Phe Asn Gln

2105 2110 2115

Trp Leu Thr Glu Ala Glu Gln Phe Leu Arg Lys Thr Gln Ile Pro

2120 2125 2130

Glu Asn Trp Glu His Ala Lys Tyr Lys Trp Tyr Leu Lys Glu Leu

2135 2140 2145

Gln Asp Gly Ile Gly Gln Arg Gln Thr Val Val Arg Thr Leu Asn

2150 2155 2160

Ala Thr Gly Glu Glu Ile Ile Gln Gln Ser Ser Lys Thr Asp Ala

2165 2170 2175

Ser Ile Leu Gln Glu Lys Leu Gly Ser Leu Asn Leu Arg Trp Gln

2180 2185 2190

Glu Val Cys Lys Gln Leu Ser Asp Arg Lys Lys Arg Leu Glu Glu

2195 2200 2205

Gln Lys Asn Ile Leu Ser Glu Phe Gln Arg Asp Leu Asn Glu Phe

2210 2215 2220

Val Leu Trp Leu Glu Glu Ala Asp Asn Ile Ala Ser Ile Pro Leu

2225 2230 2235

Glu Pro Gly Lys Glu Gln Gln Leu Lys Glu Lys Leu Glu Gln Val

2240 2245 2250

Lys Leu Leu Val Glu Glu Leu Pro Leu Arg Gln Gly Ile Leu Lys

2255 2260 2265

Gln Leu Asn Glu Thr Gly Gly Pro Val Leu Val Ser Ala Pro Ile

2270 2275 2280

Ser Pro Glu Glu Gln Asp Lys Leu Glu Asn Lys Leu Lys Gln Thr

2285 2290 2295

Asn Leu Gln Trp Ile Lys Val Ser Arg Ala Leu Pro Glu Lys Gln

2300 2305 2310

Gly Glu Ile Glu Ala Gln Ile Lys Asp Leu Gly Gln Leu Glu Lys

2315 2320 2325

Lys Leu Glu Asp Leu Glu Glu Gln Leu Asn His Leu Leu Leu Trp

2330 2335 2340

Leu Ser Pro Ile Arg Asn Gln Leu Glu Ile Tyr Asn Gln Pro Asn

2345 2350 2355

Gln Glu Gly Pro Phe Asp Val Gln Glu Thr Glu Ile Ala Val Gln

2360 2365 2370

Ala Lys Gln Pro Asp Val Glu Glu Ile Leu Ser Lys Gly Gln His

2375 2380 2385

Leu Tyr Lys Glu Lys Pro Ala Thr Gln Pro Val Lys Arg Lys Leu

2390 2395 2400

Glu Asp Leu Ser Ser Glu Trp Lys Ala Val Asn Arg Leu Leu Gln

2405 2410 2415

Glu Leu Arg Ala Lys Gln Pro Asp Leu Ala Pro Gly Leu Thr Thr

2420 2425 2430

Ile Gly Ala Ser Pro Thr Gln Thr Val Thr Leu Val Thr Gln Pro

2435 2440 2445

Val Val Thr Lys Glu Thr Ala Ile Ser Lys Leu Glu Met Pro Ser

2450 2455 2460

Ser Leu Met Leu Glu Val Pro Ala Leu Ala Asp Phe Asn Arg Ala

2465 2470 2475

Trp Thr Glu Leu Thr Asp Trp Leu Ser Leu Leu Asp Gln Val Ile

2480 2485 2490

Lys Ser Gln Arg Val Met Val Gly Asp Leu Glu Asp Ile Asn Glu

2495 2500 2505

Met Ile Ile Lys Gln Lys Ala Thr Met Gln Asp Leu Glu Gln Arg

2510 2515 2520

Arg Pro Gln Leu Glu Glu Leu Ile Thr Ala Ala Gln Asn Leu Lys

2525 2530 2535

Asn Lys Thr Ser Asn Gln Glu Ala Arg Thr Ile Ile Thr Asp Arg

2540 2545 2550

Ile Glu Arg Ile Gln Asn Gln Trp Asp Glu Val Gln Glu His Leu

2555 2560 2565

Gln Asn Arg Arg Gln Gln Leu Asn Glu Met Leu Lys Asp Ser Thr

2570 2575 2580

Gln Trp Leu Glu Ala Lys Glu Glu Ala Glu Gln Val Leu Gly Gln

2585 2590 2595

Ala Arg Ala Lys Leu Glu Ser Trp Lys Glu Gly Pro Tyr Thr Val

2600 2605 2610

Asp Ala Ile Gln Lys Lys Ile Thr Glu Thr Lys Gln Leu Ala Lys

2615 2620 2625

Asp Leu Arg Gln Trp Gln Thr Asn Val Asp Val Ala Asn Asp Leu

2630 2635 2640

Ala Leu Lys Leu Leu Arg Asp Tyr Ser Ala Asp Asp Thr Arg Lys

2645 2650 2655

Val His Met Ile Thr Glu Asn Ile Asn Ala Ser Trp Arg Ser Ile

2660 2665 2670

His Lys Arg Val Ser Glu Arg Glu Ala Ala Leu Glu Glu Thr His

2675 2680 2685

Arg Leu Leu Gln Gln Phe Pro Leu Asp Leu Glu Lys Phe Leu Ala

2690 2695 2700

Trp Leu Thr Glu Ala Glu Thr Thr Ala Asn Val Leu Gln Asp Ala

2705 2710 2715

Thr Arg Lys Glu Arg Leu Leu Glu Asp Ser Lys Gly Val Lys Glu

2720 2725 2730

Leu Met Lys Gln Trp Gln Asp Leu Gln Gly Glu Ile Glu Ala His

2735 2740 2745

Thr Asp Val Tyr His Asn Leu Asp Glu Asn Ser Gln Lys Ile Leu

2750 2755 2760

Arg Ser Leu Glu Gly Ser Asp Asp Ala Val Leu Leu Gln Arg Arg

2765 2770 2775

Leu Asp Asn Met Asn Phe Lys Trp Ser Glu Leu Arg Lys Lys Ser

2780 2785 2790

Leu Asn Ile Arg Ser His Leu Glu Ala Ser Ser Asp Gln Trp Lys

2795 2800 2805

Arg Leu His Leu Ser Leu Gln Glu Leu Leu Val Trp Leu Gln Leu

2810 2815 2820

Lys Asp Asp Glu Leu Ser Arg Gln Ala Pro Ile Gly Gly Asp Phe

2825 2830 2835

Pro Ala Val Gln Lys Gln Asn Asp Val His Arg Ala Phe Lys Arg

2840 2845 2850

Glu Leu Lys Thr Lys Glu Pro Val Ile Met Ser Thr Leu Glu Thr

2855 2860 2865

Val Arg Ile Phe Leu Thr Glu Gln Pro Leu Glu Gly Leu Glu Lys

2870 2875 2880

Leu Tyr Gln Glu Pro Arg Glu Leu Pro Pro Glu Glu Arg Ala Gln

2885 2890 2895

Asn Val Thr Arg Leu Leu Arg Lys Gln Ala Glu Glu Val Asn Thr

2900 2905 2910

Glu Trp Glu Lys Leu Asn Leu His Ser Ala Asp Trp Gln Arg Lys

2915 2920 2925

Ile Asp Glu Thr Leu Glu Arg Leu Gln Glu Leu Gln Glu Ala Thr

2930 2935 2940

Asp Glu Leu Asp Leu Lys Leu Arg Gln Ala Glu Val Ile Lys Gly

2945 2950 2955

Ser Trp Gln Pro Val Gly Asp Leu Leu Ile Asp Ser Leu Gln Asp

2960 2965 2970

His Leu Glu Lys Val Lys Ala Leu Arg Gly Glu Ile Ala Pro Leu

2975 2980 2985

Lys Glu Asn Val Ser His Val Asn Asp Leu Ala Arg Gln Leu Thr

2990 2995 3000

Thr Leu Gly Ile Gln Leu Ser Pro Tyr Asn Leu Ser Thr Leu Glu

3005 3010 3015

Asp Leu Asn Thr Arg Trp Lys Leu Leu Gln Val Ala Val Glu Asp

3020 3025 3030

Arg Val Arg Gln Leu His Glu Ala His Arg Asp Phe Gly Pro Ala

3035 3040 3045

Ser Gln His Phe Leu Ser Thr Ser Val Gln Gly Pro Trp Glu Arg

3050 3055 3060

Ala Ile Ser Pro Asn Lys Val Pro Tyr Tyr Ile Asn His Glu Thr

3065 3070 3075

Gln Thr Thr Cys Trp Asp His Pro Lys Met Thr Glu Leu Tyr Gln

3080 3085 3090

Ser Leu Ala Asp Leu Asn Asn Val Arg Phe Ser Ala Tyr Arg Thr

3095 3100 3105

Ala Met Lys Leu Arg Arg Leu Gln Lys Ala Leu Cys Leu Asp Leu

3110 3115 3120

Leu Ser Leu Ser Ala Ala Cys Asp Ala Leu Asp Gln His Asn Leu

3125 3130 3135

Lys Gln Asn Asp Gln Pro Met Asp Ile Leu Gln Ile Ile Asn Cys

3140 3145 3150

Leu Thr Thr Ile Tyr Asp Arg Leu Glu Gln Glu His Asn Asn Leu

3155 3160 3165

Val Asn Val Pro Leu Cys Val Asp Met Cys Leu Asn Trp Leu Leu

3170 3175 3180

Asn Val Tyr Asp Thr Gly Arg Thr Gly Arg Ile Arg Val Leu Ser

3185 3190 3195

Phe Lys Thr Gly Ile Ile Ser Leu Cys Lys Ala His Leu Glu Asp

3200 3205 3210

Lys Tyr Arg Tyr Leu Phe Lys Gln Val Ala Ser Ser Thr Gly Phe

3215 3220 3225

Cys Asp Gln Arg Arg Leu Gly Leu Leu Leu His Asp Ser Ile Gln

3230 3235 3240

Ile Pro Arg Gln Leu Gly Glu Val Ala Ser Phe Gly Gly Ser Asn

3245 3250 3255

Ile Glu Pro Ser Val Arg Ser Cys Phe Gln Phe Ala Asn Asn Lys

3260 3265 3270

Pro Glu Ile Glu Ala Ala Leu Phe Leu Asp Trp Met Arg Leu Glu

3275 3280 3285

Pro Gln Ser Met Val Trp Leu Pro Val Leu His Arg Val Ala Ala

3290 3295 3300

Ala Glu Thr Ala Lys His Gln Ala Lys Cys Asn Ile Cys Lys Glu

3305 3310 3315

Cys Pro Ile Ile Gly Phe Arg Tyr Arg Ser Leu Lys His Phe Asn

3320 3325 3330

Tyr Asp Ile Cys Gln Ser Cys Phe Phe Ser Gly Arg Val Ala Lys

3335 3340 3345

Gly His Lys Met His Tyr Pro Met Val Glu Tyr Cys Thr Pro Thr

3350 3355 3360

Thr Ser Gly Glu Asp Val Arg Asp Phe Ala Lys Val Leu Lys Asn

3365 3370 3375

Lys Phe Arg Thr Lys Arg Tyr Phe Ala Lys His Pro Arg Met Gly

3380 3385 3390

Tyr Leu Pro Val Gln Thr Val Leu Glu Gly Asp Asn Met Glu Thr

3395 3400 3405

Pro Val Thr Leu Ile Asn Phe Trp Pro Val Asp Ser Ala Pro Ala

3410 3415 3420

Ser Ser Pro Gln Leu Ser His Asp Asp Thr His Ser Arg Ile Glu

3425 3430 3435

His Tyr Ala Ser Arg Leu Ala Glu Met Glu Asn Ser Asn Gly Ser

3440 3445 3450

Tyr Leu Asn Asp Ser Ile Ser Pro Asn Glu Ser Ile Asp Asp Glu

3455 3460 3465

His Leu Leu Ile Gln His Tyr Cys Gln Ser Leu Asn Gln Asp Ser

3470 3475 3480

Pro Leu Ser Gln Pro Arg Ser Pro Ala Gln Ile Leu Ile Ser Leu

3485 3490 3495

Glu Ser Glu Glu Arg Gly Glu Leu Glu Arg Ile Leu Ala Asp Leu

3500 3505 3510

Glu Glu Glu Asn Arg Asn Leu Gln Ala Glu Tyr Asp Arg Leu Lys

3515 3520 3525

Gln Gln His Glu His Lys Gly Leu Ser Pro Leu Pro Ser Pro Pro

3530 3535 3540

Glu Met Met Pro Thr Ser Pro Gln Ser Pro Arg Asp Ala Glu Leu

3545 3550 3555

Ile Ala Glu Ala Lys Leu Leu Arg Gln His Lys Gly Arg Leu Glu

3560 3565 3570

Ala Arg Met Gln Ile Leu Glu Asp His Asn Lys Gln Leu Glu Ser

3575 3580 3585

Gln Leu His Arg Leu Arg Gln Leu Leu Glu Gln Pro Gln Ala Glu

3590 3595 3600

Ala Lys Val Asn Gly Thr Thr Val Ser Ser Pro Ser Thr Ser Leu

3605 3610 3615

Gln Arg Ser Asp Ser Ser Gln Pro Met Leu Leu Arg Val Val Gly

3620 3625 3630

Ser Gln Thr Ser Asp Ser Met Gly Glu Glu Asp Leu Leu Ser Pro

3635 3640 3645

Pro Gln Asp Thr Ser Thr Gly Leu Glu Glu Val Met Glu Gln Leu

3650 3655 3660

Asn Asn Ser Phe Pro Ser Ser Arg Gly Arg Asn Thr Pro Gly Lys

3665 3670 3675

Pro Met Arg Glu Asp Thr Met

3680 3685

<210> 2

<211> 233

<212> РНК

<213> Homo sapiens

<220>

<223> Экзон 51

<400> 2

cuccuacuca gacuguuacu cuggugacac aaccuguggu 40

uacuaaggaa acugccaucu ccaaacuaga aaugccaucu 80

uccuugaugu uggagguacc ugcucuggca gauuucaacc 120

gggcuuggac agaacuuacc gacuggcuuu cucugcuuga 160

ucaaguuaua aaaucacaga gggugauggu gggugaccuu 200

gaggauauca acgagaugau caucaagcag aag 233

<210> 3

<211> 11

<212> РНК

<213> Homo sapiens

<220>

<223> Экзонный энхансер сплайсинга

<400> 3

ggacagaacu u 11

<210> 4

<211> 6

<212> РНК

<213> Homo sapiens

<220>

<223> Экзонный энхансер сплайсинга

<400> 4

aucuuc 6

<210> 5

<211> 11

<212> РНК

<213> Homo sapiens

<220>

<223> Экзонный энхансер сплайсинга

<400> 5

aaguucuguc c 11

<210> 6

<211> 6

<212> РНК

<213> Homo sapiens

<220>

<223> Экзонный энхансер сплайсинга

<400> 6

gaagau 6

<210> 7

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Дрисаперсен

<400> 7

ucaaggaaga uggcauuucu 20

<210> 8

<211> 30

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Этеплирсен

<400> 8

ctccaacatc aaggaagatg gcatttctag 30

<210> 9

<211> 26

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Праймер

<400> 9

tgaaaataag ctcaagcaga caaatc 26

<210> 10

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Праймер

<400> 10

gacgcctctg ttccaaatcc 20

<210> 11

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Праймер

<400> 11

cagtggataa aggcaaca 18

<210> 12

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Праймер

<400> 12

gtgatggtgg gtgaccttga g 21

<210> 13

<211> 17

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Праймер

<400> 13

caagcagaag gcaacaa 17

<210> 14

<211> 18

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 14

gguaaguucu guccaagc 18

<210> 15

<211> 18

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 15

guaaguucug uccaagcc 18

<210> 16

<211> 18

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 16

agucgguaag uucugucc 18

<210> 17

<211> 18

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 17

cuguccaagc ccgguuga 18

<210> 18

<211> 15

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 18

uaaguucugu ccaag 15

<210> 19

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 19

uucuguccaa gcccgguuga 20

<210> 20

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 20

uucuguccaa gcccgguug 19

<210> 21

<211> 18

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 21

uucuguccaa gcccgguu 18

<210> 22

<211> 17

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 22

uucuguccaa gcccggu 17

<210> 23

<211> 16

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 23

uucuguccaa gcccgg 16

<210> 24

<211> 15

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 24

uucuguccaa gcccg 15

<210> 25

<211> 14

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 25

uucuguccaa gccc 14

<210> 26

<211> 13

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 26

uucuguccaa gcc 13

<210> 27

<211> 12

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 27

uucuguccaa gc 12

<210> 28

<211> 11

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 28

uucuguccaa g 11

<210> 29

<211> 10

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 29

uucuguccaa 10

<210> 30

<211> 9

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 30

uucugucca 9

<210> 31

<211> 8

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 31

uucugucc 8

<210> 32

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 32

ucuguccaag cccgguuga 19

<210> 33

<211> 18

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 33

ucuguccaag cccgguug 18

<210> 34

<211> 17

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 34

ucuguccaag cccgguu 17

<210> 35

<211> 16

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 35

ucuguccaag cccggu 16

<210> 36

<211> 15

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 36

ucuguccaag cccgg 15

<210> 37

<211> 14

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 37

ucuguccaag cccg 14

<210> 38

<211> 13

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 38

ucuguccaag ccc 13

<210> 39

<211> 12

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 39

ucuguccaag cc 12

<210> 40

<211> 11

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 40

ucuguccaag c 11

<210> 41

<211> 10

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 41

ucuguccaag 10

<210> 42

<211> 9

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 42

ucuguccaa 9

<210> 43

<211> 8

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 43

ucugucca 8

<210> 44

<211> 17

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 44

cuguccaagc ccgguug 17

<210> 45

<211> 16

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 45

cuguccaagc ccgguu 16

<210> 46

<211> 15

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 46

cuguccaagc ccggu 15

<210> 47

<211> 14

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 47

cuguccaagc ccgg 14

<210> 48

<211> 13

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 48

cuguccaagc ccg 13

<210> 49

<211> 12

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 49

cuguccaagc cc 12

<210> 50

<211> 11

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 50

cuguccaagc c 11

<210> 51

<211> 10

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 51

cuguccaagc 10

<210> 52

<211> 9

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 52

cuguccaag 9

<210> 53

<211> 8

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 53

cuguccaa 8

<210> 54

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 54

guucugucca agcccgguug 20

<210> 55

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 55

guucugucca agcccgguu 19

<210> 56

<211> 18

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 56

guucugucca agcccggu 18

<210> 57

<211> 17

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 57

guucugucca agcccgg 17

<210> 58

<211> 16

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 58

guucugucca agcccg 16

<210> 59

<211> 15

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 59

guucugucca agccc 15

<210> 60

<211> 14

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 60

guucugucca agcc 14

<210> 61

<211> 13

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 61

guucugucca agc 13

<210> 62

<211> 12

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 62

guucugucca ag 12

<210> 63

<211> 11

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 63

guucugucca a 11

<210> 64

<211> 10

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 64

guucugucca 10

<210> 65

<211> 9

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 65

guucugucc 9

<210> 66

<211> 8

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 66

guucuguc 8

<210> 67

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 67

aguucugucc aagcccgguu 20

<210> 68

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 68

aguucugucc aagcccggu 19

<210> 69

<211> 18

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 69

aguucugucc aagcccgg 18

<210> 70

<211> 17

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 70

aguucugucc aagcccg 17

<210> 71

<211> 16

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 71

aguucugucc aagccc 16

<210> 72

<211> 15

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 72

aguucugucc aagcc 15

<210> 73

<211> 14

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 73

aguucugucc aagc 14

<210> 74

<211> 13

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 74

aguucugucc aag 13

<210> 75

<211> 12

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 75

aguucugucc aa 12

<210> 76

<211> 11

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 76

aguucugucc a 11

<210> 77

<211> 10

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 77

aguucugucc 10

<210> 78

<211> 9

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 78

aguucuguc 9

<210> 79

<211> 8

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 79

aguucugu 8

<210> 80

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 80

aaguucuguc caagcccggu 20

<210> 81

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 81

aaguucuguc caagcccgg 19

<210> 82

<211> 18

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 82

aaguucuguc caagcccg 18

<210> 83

<211> 17

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 83

aaguucuguc caagccc 17

<210> 84

<211> 16

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 84

aaguucuguc caagcc 16

<210> 85

<211> 15

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 85

aaguucuguc caagc 15

<210> 86

<211> 14

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 86

aaguucuguc caag 14

<210> 87

<211> 13

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 87

aaguucuguc caa 13

<210> 88

<211> 12

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 88

aaguucuguc ca 12

<210> 89

<211> 11

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 89

aaguucuguc c 11

<210> 90

<211> 10

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 90

aaguucuguc 10

<210> 91

<211> 9

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 91

aaguucugu 9

<210> 92

<211> 8

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 92

aaguucug 8

<210> 93

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 93

uaaguucugu ccaagcccgg 20

<210> 94

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 94

uaaguucugu ccaagcccg 19

<210> 95

<211> 18

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 95

uaaguucugu ccaagccc 18

<210> 96

<211> 17

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 96

uaaguucugu ccaagcc 17

<210> 97

<211> 16

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 97

uaaguucugu ccaagc 16

<210> 98

<211> 14

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 98

uaaguucugu ccaa 14

<210> 99

<211> 13

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 99

uaaguucugu cca 13

<210> 100

<211> 12

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 100

uaaguucugu cc 12

<210> 101

<211> 11

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 101

uaaguucugu c 11

<210> 102

<211> 10

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 102

uaaguucugu 10

<210> 103

<211> 9

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 103

uaaguucug 9

<210> 104

<211> 8

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 104

uaaguucu 8

<210> 105

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 105

guaaguucug uccaagcccg 20

<210> 106

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 106

guaaguucug uccaagccc 19

<210> 107

<211> 17

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 107

guaaguucug uccaagc 17

<210> 108

<211> 16

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 108

guaaguucug uccaag 16

<210> 109

<211> 15

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 109

guaaguucug uccaa 15

<210> 110

<211> 14

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 110

guaaguucug ucca 14

<210> 111

<211> 13

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 111

guaaguucug ucc 13

<210> 112

<211> 12

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 112

guaaguucug uc 12

<210> 113

<211> 11

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 113

guaaguucug u 11

<210> 114

<211> 10

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 114

guaaguucug 10

<210> 115

<211> 9

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 115

guaaguucu 9

<210> 116

<211> 8

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 116

guaaguuc 8

<210> 117

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 117

gguaaguucu guccaagccc 20

<210> 118

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 118

gguaaguucu guccaagcc 19

<210> 119

<211> 17

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 119

gguaaguucu guccaag 17

<210> 120

<211> 16

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 120

gguaaguucu guccaa 16

<210> 121

<211> 15

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 121

gguaaguucu gucca 15

<210> 122

<211> 14

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 122

gguaaguucu gucc 14

<210> 123

<211> 13

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 123

gguaaguucu guc 13

<210> 124

<211> 12

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 124

gguaaguucu gu 12

<210> 125

<211> 11

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 125

gguaaguucu g 11

<210> 126

<211> 10

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 126

gguaaguucu 10

<210> 127

<211> 9

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 127

gguaaguuc 9

<210> 128

<211> 8

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 128

gguaaguu 8

<210> 129

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 129

cgguaaguuc uguccaagcc 20

<210> 130

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 130

cgguaaguuc uguccaagc 19

<210> 131

<211> 18

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 131

cgguaaguuc uguccaag 18

<210> 132

<211> 17

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 132

cgguaaguuc uguccaa 17

<210> 133

<211> 16

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 133

cgguaaguuc ugucca 16

<210> 134

<211> 15

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 134

cgguaaguuc ugucc 15

<210> 135

<211> 14

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 135

cgguaaguuc uguc 14

<210> 136

<211> 13

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 136

cgguaaguuc ugu 13

<210> 137

<211> 12

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 137

cgguaaguuc ug 12

<210> 138

<211> 11

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 138

cgguaaguuc u 11

<210> 139

<211> 10

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 139

cgguaaguuc 10

<210> 140

<211> 9

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 140

cgguaaguu 9

<210> 141

<211> 8

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 141

cgguaagu 8

<210> 142

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 142

ucgguaaguu cuguccaagc 20

<210> 143

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 143

ucgguaaguu cuguccaag 19

<210> 144

<211> 18

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 144

ucgguaaguu cuguccaa 18

<210> 145

<211> 17

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 145

ucgguaaguu cugucca 17

<210> 146

<211> 16

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 146

ucgguaaguu cugucc 16

<210> 147

<211> 15

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 147

ucgguaaguu cuguc 15

<210> 148

<211> 14

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 148

ucgguaaguu cugu 14

<210> 149

<211> 13

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 149

ucgguaaguu cug 13

<210> 150

<211> 12

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 150

ucgguaaguu cu 12

<210> 151

<211> 11

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 151

ucgguaaguu c 11

<210> 152

<211> 10

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 152

ucgguaaguu 10

<210> 153

<211> 9

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 153

ucgguaagu 9

<210> 154

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 154

gucgguaagu ucuguccaag 20

<210> 155

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 155

gucgguaagu ucuguccaa 19

<210> 156

<211> 18

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 156

gucgguaagu ucugucca 18

<210> 157

<211> 17

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 157

gucgguaagu ucugucc 17

<210> 158

<211> 16

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 158

gucgguaagu ucuguc 16

<210> 159

<211> 15

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 159

gucgguaagu ucugu 15

<210> 160

<211> 14

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 160

gucgguaagu ucug 14

<210> 161

<211> 13

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 161

gucgguaagu ucu 13

<210> 162

<211> 12

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 162

gucgguaagu uc 12

<210> 163

<211> 11

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 163

gucgguaagu u 11

<210> 164

<211> 10

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 164

gucgguaagu 10

<210> 165

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 165

agucgguaag uucuguccaa 20

<210> 166

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 166

agucgguaag uucugucca 19

<210> 167

<211> 17

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 167

agucgguaag uucuguc 17

<210> 168

<211> 16

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 168

agucgguaag uucugu 16

<210> 169

<211> 15

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 169

agucgguaag uucug 15

<210> 170

<211> 14

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 170

agucgguaag uucu 14

<210> 171

<211> 13

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 171

agucgguaag uuc 13

<210> 172

<211> 12

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 172

agucgguaag uu 12

<210> 173

<211> 11

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 173

agucgguaag u 11

<210> 174

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 174

cagucgguaa guucugucca 20

<210> 175

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 175

cagucgguaa guucugucc 19

<210> 176

<211> 18

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 176

cagucgguaa guucuguc 18

<210> 177

<211> 17

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 177

cagucgguaa guucugu 17

<210> 178

<211> 16

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 178

cagucgguaa guucug 16

<210> 179

<211> 15

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 179

cagucgguaa guucu 15

<210> 180

<211> 14

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 180

cagucgguaa guuc 14

<210> 181

<211> 13

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 181

cagucgguaa guu 13

<210> 182

<211> 12

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 182

cagucgguaa gu 12

<210> 183

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 183

ccagucggua aguucugucc 20

<210> 184

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 184

ccagucggua aguucuguc 19

<210> 185

<211> 18

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 185

ccagucggua aguucugu 18

<210> 186

<211> 17

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 186

ccagucggua aguucug 17

<210> 187

<211> 16

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 187

ccagucggua aguucu 16

<210> 188

<211> 15

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 188

ccagucggua aguuc 15

<210> 189

<211> 14

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 189

ccagucggua aguu 14

<210> 190

<211> 13

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 190

ccagucggua agu 13

<210> 191

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 191

gccagucggu aaguucuguc 20

<210> 192

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 192

gccagucggu aaguucugu 19

<210> 193

<211> 18

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 193

gccagucggu aaguucug 18

<210> 194

<211> 17

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 194

gccagucggu aaguucu 17

<210> 195

<211> 16

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 195

gccagucggu aaguuc 16

<210> 196

<211> 15

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 196

gccagucggu aaguu 15

<210> 197

<211> 14

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 197

gccagucggu aagu 14

<210> 198

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 198

ucaaggaaga uggcauuucu 20

<210> 199

<211> 22

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 199

ucaaggaaga uggcauuucu ag 22

<210> 200

<211> 16

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 200

ucaaggaaga uggcau 16

<210> 201

<211> 15

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 201

gaagauggca uuucu 15

<210> 202

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 202

ucaaggaaga uggcauuucu a 21

<210> 203

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 203

ucaaggaaga uggcauuuc 19

<210> 204

<211> 18

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 204

ucaaggaaga uggcauuu 18

<210> 205

<211> 17

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 205

ucaaggaaga uggcauu 17

<210> 206

<211> 15

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 206

ucaaggaaga uggca 15

<210> 207

<211> 14

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 207

ucaaggaaga uggc 14

<210> 208

<211> 13

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 208

ucaaggaaga ugg 13

<210> 209

<211> 12

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 209

ucaaggaaga ug 12

<210> 210

<211> 11

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 210

ucaaggaaga u 11

<210> 211

<211> 10

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 211

ucaaggaaga 10

<210> 212

<211> 9

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 212

ucaaggaag 9

<210> 213

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 213

caaggaagau ggcauuucua g 21

<210> 214

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 214

caaggaagau ggcauuucua 20

<210> 215

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 215

caaggaagau ggcauuucu 19

<210> 216

<211> 18

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 216

caaggaagau ggcauuuc 18

<210> 217

<211> 17

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 217

caaggaagau ggcauuu 17

<210> 218

<211> 16

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 218

caaggaagau ggcauu 16

<210> 219

<211> 15

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 219

caaggaagau ggcau 15

<210> 220

<211> 14

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 220

caaggaagau ggca 14

<210> 221

<211> 13

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 221

caaggaagau ggc 13

<210> 222

<211> 12

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 222

caaggaagau gg 12

<210> 223

<211> 11

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 223

caaggaagau g 11

<210> 224

<211> 10

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 224

caaggaagau 10

<210> 225

<211> 9

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 225

caaggaaga 9

<210> 226

<211> 8

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 226

caaggaag 8

<210> 227

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 227

aaggaagaug gcauuucuag 20

<210> 228

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 228

aaggaagaug gcauuucua 19

<210> 229

<211> 18

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 229

aaggaagaug gcauuucu 18

<210> 230

<211> 17

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 230

aaggaagaug gcauuuc 17

<210> 231

<211> 16

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 231

aaggaagaug gcauuu 16

<210> 232

<211> 15

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 232

aaggaagaug gcauu 15

<210> 233

<211> 14

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 233

aaggaagaug gcau 14

<210> 234

<211> 13

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 234

aaggaagaug gca 13

<210> 235

<211> 12

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 235

aaggaagaug gc 12

<210> 236

<211> 11

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 236

aaggaagaug g 11

<210> 237

<211> 10

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 237

aaggaagaug 10

<210> 238

<211> 9

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 238

aaggaagau 9

<210> 239

<211> 8

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 239

aaggaaga 8

<210> 240

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 240

aggaagaugg cauuucuag 19

<210> 241

<211> 18

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 241

aggaagaugg cauuucua 18

<210> 242

<211> 17

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 242

aggaagaugg cauuucu 17

<210> 243

<211> 16

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 243

aggaagaugg cauuuc 16

<210> 244

<211> 15

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 244

aggaagaugg cauuu 15

<210> 245

<211> 14

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 245

aggaagaugg cauu 14

<210> 246

<211> 13

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 246

aggaagaugg cau 13

<210> 247

<211> 12

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 247

aggaagaugg ca 12

<210> 248

<211> 10

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 248

aggaagaugg 10

<210> 249

<211> 9

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 249

aggaagaug 9

<210> 250

<211> 8

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 250

aggaagau 8

<210> 251

<211> 18

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 251

ggaagauggc auuucuag 18

<210> 252

<211> 17

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 252

ggaagauggc auuucua 17

<210> 253

<211> 16

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 253

ggaagauggc auuucu 16

<210> 254

<211> 15

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 254

ggaagauggc auuuc 15

<210> 255

<211> 14

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 255

ggaagauggc auuu 14

<210> 256

<211> 13

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 256

ggaagauggc auu 13

<210> 257

<211> 12

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 257

ggaagauggc au 12

<210> 258

<211> 11

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 258

ggaagauggc a 11

<210> 259

<211> 10

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 259

ggaagauggc 10

<210> 260

<211> 8

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 260

ggaagaug 8

<210> 261

<211> 17

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 261

gaagauggca uuucuag 17

<210> 262

<211> 16

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 262

gaagauggca uuucua 16

<210> 263

<211> 14

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 263

gaagauggca uuuc 14

<210> 264

<211> 13

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 264

gaagauggca uuu 13

<210> 265

<211> 12

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 265

gaagauggca uu 12

<210> 266

<211> 11

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 266

gaagauggca u 11

<210> 267

<211> 10

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 267

gaagauggca 10

<210> 268

<211> 9

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 268

gaagauggc 9

<210> 269

<211> 8

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 269

gaagaugg 8

<210> 270

<211> 16

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 270

aagauggcau uucuag 16

<210> 271

<211> 15

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 271

aagauggcau uucua 15

<210> 272

<211> 14

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 272

aagauggcau uucu 14

<210> 273

<211> 13

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 273

aagauggcau uuc 13

<210> 274

<211> 12

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 274

aagauggcau uu 12

<210> 275

<211> 11

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 275

aagauggcau u 11

<210> 276

<211> 10

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 276

aagauggcau 10

<210> 277

<211> 9

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 277

aagauggca 9

<210> 278

<211> 8

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 278

aagauggc 8

<210> 279

<211> 15

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 279

agauggcauu ucuag 15

<210> 280

<211> 14

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 280

agauggcauu ucua 14

<210> 281

<211> 13

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 281

agauggcauu ucu 13

<210> 282

<211> 12

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 282

agauggcauu uc 12

<210> 283

<211> 11

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 283

agauggcauu u 11

<210> 284

<211> 10

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 284

agauggcauu 10

<210> 285

<211> 9

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 285

agauggcau 9

<210> 286

<211> 8

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 286

agauggca 8

<210> 287

<211> 30

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 287

cuccaacauc aaggaagaug gcauuucuag 30

<210> 288

<211> 29

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 288

cuccaacauc aaggaagaug gcauuucua 29

<210> 289

<211> 28

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 289

cuccaacauc aaggaagaug gcauuucu 28

<210> 290

<211> 27

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 290

cuccaacauc aaggaagaug gcauuuc 27

<210> 291

<211> 26

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 291

cuccaacauc aaggaagaug gcauuu 26

<210> 292

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 292

cuccaacauc aaggaagaug gcauu 25

<210> 293

<211> 24

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 293

cuccaacauc aaggaagaug gcau 24

<210> 294

<211> 23

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 294

cuccaacauc aaggaagaug gca 23

<210> 295

<211> 22

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 295

cuccaacauc aaggaagaug gc 22

<210> 296

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 296

cuccaacauc aaggaagaug g 21

<210> 297

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 297

cuccaacauc aaggaagaug 20

<210> 298

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 298

cuccaacauc aaggaagau 19

<210> 299

<211> 18

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 299

cuccaacauc aaggaaga 18

<210> 300

<211> 17

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 300

cuccaacauc aaggaag 17

<210> 301

<211> 29

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 301

uccaacauca aggaagaugg cauuucuag 29

<210> 302

<211> 28

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 302

uccaacauca aggaagaugg cauuucua 28

<210> 303

<211> 27

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 303

uccaacauca aggaagaugg cauuucu 27

<210> 304

<211> 26

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 304

uccaacauca aggaagaugg cauuuc 26

<210> 305

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 305

uccaacauca aggaagaugg cauuu 25

<210> 306

<211> 24

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 306

uccaacauca aggaagaugg cauu 24

<210> 307

<211> 23

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 307

uccaacauca aggaagaugg cau 23

<210> 308

<211> 22

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 308

uccaacauca aggaagaugg ca 22

<210> 309

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 309

uccaacauca aggaagaugg c 21

<210> 310

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 310

uccaacauca aggaagaugg 20

<210> 311

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 311

uccaacauca aggaagaug 19

<210> 312

<211> 18

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 312

uccaacauca aggaagau 18

<210> 313

<211> 17

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 313

uccaacauca aggaaga 17

<210> 314

<211> 16

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 314

uccaacauca aggaag 16

<210> 315

<211> 28

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 315

ccaacaucaa ggaagauggc auuucuag 28

<210> 316

<211> 27

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 316

ccaacaucaa ggaagauggc auuucua 27

<210> 317

<211> 26

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 317

ccaacaucaa ggaagauggc auuucu 26

<210> 318

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 318

ccaacaucaa ggaagauggc auuuc 25

<210> 319

<211> 24

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 319

ccaacaucaa ggaagauggc auuu 24

<210> 320

<211> 23

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 320

ccaacaucaa ggaagauggc auu 23

<210> 321

<211> 22

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 321

ccaacaucaa ggaagauggc au 22

<210> 322

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 322

ccaacaucaa ggaagauggc a 21

<210> 323

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 323

ccaacaucaa ggaagauggc 20

<210> 324

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 324

ccaacaucaa ggaagaugg 19

<210> 325

<211> 18

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 325

ccaacaucaa ggaagaug 18

<210> 326

<211> 17

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 326

ccaacaucaa ggaagau 17

<210> 327

<211> 16

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 327

ccaacaucaa ggaaga 16

<210> 328

<211> 15

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 328

ccaacaucaa ggaag 15

<210> 329

<211> 27

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 329

caacaucaag gaagauggca uuucuag 27

<210> 330

<211> 26

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 330

caacaucaag gaagauggca uuucua 26

<210> 331

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 331

caacaucaag gaagauggca uuucu 25

<210> 332

<211> 24

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 332

caacaucaag gaagauggca uuuc 24

<210> 333

<211> 23

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 333

caacaucaag gaagauggca uuu 23

<210> 334

<211> 22

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 334

caacaucaag gaagauggca uu 22

<210> 335

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 335

caacaucaag gaagauggca u 21

<210> 336

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 336

caacaucaag gaagauggca 20

<210> 337

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 337

caacaucaag gaagauggc 19

<210> 338

<211> 18

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 338

caacaucaag gaagaugg 18

<210> 339

<211> 17

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 339

caacaucaag gaagaug 17

<210> 340

<211> 16

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 340

caacaucaag gaagau 16

<210> 341

<211> 15

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 341

caacaucaag gaaga 15

<210> 342

<211> 14

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 342

caacaucaag gaag 14

<210> 343

<211> 26

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 343

aacaucaagg aagauggcau uucuag 26

<210> 344

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 344

aacaucaagg aagauggcau uucua 25

<210> 345

<211> 24

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 345

aacaucaagg aagauggcau uucu 24

<210> 346

<211> 23

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 346

aacaucaagg aagauggcau uuc 23

<210> 347

<211> 22

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 347

aacaucaagg aagauggcau uu 22

<210> 348

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 348

aacaucaagg aagauggcau u 21

<210> 349

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 349

aacaucaagg aagauggcau 20

<210> 350

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 350

aacaucaagg aagauggca 19

<210> 351

<211> 18

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 351

aacaucaagg aagauggc 18

<210> 352

<211> 17

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 352

aacaucaagg aagaugg 17

<210> 353

<211> 16

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 353

aacaucaagg aagaug 16

<210> 354

<211> 15

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 354

aacaucaagg aagau 15

<210> 355

<211> 14

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 355

aacaucaagg aaga 14

<210> 356

<211> 13

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 356

aacaucaagg aag 13

<210> 357

<211> 25

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 357

acaucaagga agauggcauu ucuag 25

<210> 358

<211> 24

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 358

acaucaagga agauggcauu ucua 24

<210> 359

<211> 23

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 359

acaucaagga agauggcauu ucu 23

<210> 360

<211> 22

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 360

acaucaagga agauggcauu uc 22

<210> 361

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 361

acaucaagga agauggcauu u 21

<210> 362

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 362

acaucaagga agauggcauu 20

<210> 363

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 363

acaucaagga agauggcau 19

<210> 364

<211> 18

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 364

acaucaagga agauggca 18

<210> 365

<211> 17

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 365

acaucaagga agauggc 17

<210> 366

<211> 16

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 366

acaucaagga agaugg 16

<210> 367

<211> 15

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 367

acaucaagga agaug 15

<210> 368

<211> 14

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 368

acaucaagga agau 14

<210> 369

<211> 13

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 369

acaucaagga aga 13

<210> 370

<211> 12

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 370

acaucaagga ag 12

<210> 371

<211> 24

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 371

caucaaggaa gauggcauuu cuag 24

<210> 372

<211> 23

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 372

caucaaggaa gauggcauuu cua 23

<210> 373

<211> 22

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 373

caucaaggaa gauggcauuu cu 22

<210> 374

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 374

caucaaggaa gauggcauuu c 21

<210> 375

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 375

caucaaggaa gauggcauuu 20

<210> 376

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 376

caucaaggaa gauggcauu 19

<210> 377

<211> 18

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 377

caucaaggaa gauggcau 18

<210> 378

<211> 17

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 378

caucaaggaa gauggca 17

<210> 379

<211> 16

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 379

caucaaggaa gauggc 16

<210> 380

<211> 15

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 380

caucaaggaa gaugg 15

<210> 381

<211> 14

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 381

caucaaggaa gaug 14

<210> 382

<211> 13

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 382

caucaaggaa gau 13

<210> 383

<211> 12

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 383

caucaaggaa ga 12

<210> 384

<211> 11

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 384

caucaaggaa g 11

<210> 385

<211> 23

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 385

aucaaggaag auggcauuuc uag 23

<210> 386

<211> 22

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 386

aucaaggaag auggcauuuc ua 22

<210> 387

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 387

aucaaggaag auggcauuuc u 21

<210> 388

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 388

aucaaggaag auggcauuuc 20

<210> 389

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 389

aucaaggaag auggcauuu 19

<210> 390

<211> 18

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 390

aucaaggaag auggcauu 18

<210> 391

<211> 17

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 391

aucaaggaag auggcau 17

<210> 392

<211> 16

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 392

aucaaggaag auggca 16

<210> 393

<211> 15

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 393

aucaaggaag auggc 15

<210> 394

<211> 14

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 394

aucaaggaag augg 14

<210> 395

<211> 13

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 395

aucaaggaag aug 13

<210> 396

<211> 12

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 396

aucaaggaag au 12

<210> 397

<211> 11

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 397

aucaaggaag a 11

<210> 398

<211> 10

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<400> 398

aucaaggaag 10

<210> 399

<211> 18

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (9)..(9)

<223> 5-метил

<220>

<221> misc_feature

<222> (13)..(14)

<223> 5-метил

<220>

<221> misc_feature

<222> (18)..(18)

<223> 5-метил

<400> 399

gguaaguucu guccaagc 18

<210> 400

<211> 18

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (8)..(8)

<223> 5-метил

<220>

<221> misc_feature

<222> (12)..(13)

<223> 5-метил

<220>

<221> misc_feature

<222> (17)..(18)

<223> 5-метил

<400> 400

guaaguucug uccaagcc 18

<210> 401

<211> 18

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (4)..(4)

<223> 5-метил

<220>

<221> misc_feature

<222> (13)..(13)

<223> 5-метил

<220>

<221> misc_feature

<222> (17)..(18)

<223> 5-метил

<400> 401

agucgguaag uucugucc 18

<210> 402

<211> 18

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (1)..(1)

<223> 5-метил

<220>

<221> misc_feature

<222> (5)..(6)

<223> 5-метил

<220>

<221> misc_feature

<222> (10)..(12)

<223> 5-метил

<400> 402

cuguccaagc ccgguuga 18

<210> 403

<211> 15

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (7)..(7)

<223> 5-метил

<220>

<221> misc_feature

<222> (11)..(12)

<223> 5-метил

<400> 403

uaaguucugu ccaag 15

<210> 404

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (3)..(3)

<223> 5-метил

<220>

<221> misc_feature

<222> (7)..(8)

<223> 5-метил

<220>

<221> misc_feature

<222> (12)..(14)

<223> 5-метил

<400> 404

uucuguccaa gcccgguuga 20

<210> 405

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (3)..(3)

<223> 5-метил

<220>

<221> misc_feature

<222> (7)..(8)

<223> 5-метил

<220>

<221> misc_feature

<222> (12)..(14)

<223> 5-метил

<400> 405

uucuguccaa gcccgguug 19

<210> 406

<211> 18

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (3)..(3)

<223> 5-метил

<220>

<221> misc_feature

<222> (7)..(8)

<223> 5-метил

<220>

<221> misc_feature

<222> (12)..(14)

<223> 5-метил

<400> 406

uucuguccaa gcccgguu 18

<210> 407

<211> 17

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (3)..(3)

<223> 5-метил

<220>

<221> misc_feature

<222> (7)..(8)

<223> 5-метил

<220>

<221> misc_feature

<222> (12)..(14)

<223> 5-метил

<400> 407

uucuguccaa gcccggu 17

<210> 408

<211> 16

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (3)..(3)

<223> 5-метил

<220>

<221> misc_feature

<222> (7)..(8)

<223> 5-метил

<220>

<221> misc_feature

<222> (12)..(14)

<223> 5-метил

<400> 408

uucuguccaa gcccgg 16

<210> 409

<211> 15

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (3)..(3)

<223> 5-метил

<220>

<221> misc_feature

<222> (7)..(8)

<223> 5-метил

<220>

<221> misc_feature

<222> (12)..(14)

<223> 5-метил

<400> 409

uucuguccaa gcccg 15

<210> 410

<211> 14

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (3)..(3)

<223> 5-метил

<220>

<221> misc_feature

<222> (7)..(8)

<223> 5-метил

<220>

<221> misc_feature

<222> (12)..(14)

<223> 5-метил

<400> 410

uucuguccaa gccc 14

<210> 411

<211> 13

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (3)..(3)

<223> 5-метил

<220>

<221> misc_feature

<222> (7)..(8)

<223> 5-метил

<220>

<221> misc_feature

<222> (12)..(13)

<223> 5-метил

<400> 411

uucuguccaa gcc 13

<210> 412

<211> 12

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (3)..(3)

<223> 5-метил

<220>

<221> misc_feature

<222> (7)..(8)

<223> 5-метил

<220>

<221> misc_feature

<222> (12)..(12)

<223> 5-метил

<400> 412

uucuguccaa gc 12

<210> 413

<211> 11

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (3)..(3)

<223> 5-метил

<220>

<221> misc_feature

<222> (7)..(8)

<223> 5-метил

<400> 413

uucuguccaa g 11

<210> 414

<211> 10

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (3)..(3)

<223> 5-метил

<220>

<221> misc_feature

<222> (7)..(8)

<223> 5-метил

<400> 414

uucuguccaa 10

<210> 415

<211> 9

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (3)..(3)

<223> 5-метил

<220>

<221> misc_feature

<222> (7)..(8)

<223> 5-метил

<400> 415

uucugucca 9

<210> 416

<211> 8

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (3)..(3)

<223> 5-метил

<220>

<221> misc_feature

<222> (7)..(8)

<223> 5-метил

<400> 416

uucugucc 8

<210> 417

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (2)..(2)

<223> 5-метил

<220>

<221> misc_feature

<222> (6)..(7)

<223> 5-метил

<220>

<221> misc_feature

<222> (11)..(13)

<223> 5-метил

<400> 417

ucuguccaag cccgguuga 19

<210> 418

<211> 18

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (2)..(2)

<223> 5-метил

<220>

<221> misc_feature

<222> (6)..(7)

<223> 5-метил

<220>

<221> misc_feature

<222> (11)..(13)

<223> 5-метил

<400> 418

ucuguccaag cccgguug 18

<210> 419

<211> 17

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (2)..(2)

<223> 5-метил

<220>

<221> misc_feature

<222> (6)..(7)

<223> 5-метил

<220>

<221> misc_feature

<222> (11)..(13)

<223> 5-метил

<400> 419

ucuguccaag cccgguu 17

<210> 420

<211> 16

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (2)..(2)

<223> 5-метил

<220>

<221> misc_feature

<222> (6)..(7)

<223> 5-метил

<220>

<221> misc_feature

<222> (11)..(13)

<223> 5-метил

<400> 420

ucuguccaag cccggu 16

<210> 421

<211> 15

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (2)..(2)

<223> 5-метил

<220>

<221> misc_feature

<222> (6)..(7)

<223> 5-метил

<220>

<221> misc_feature

<222> (11)..(13)

<223> 5-метил

<400> 421

ucuguccaag cccgg 15

<210> 422

<211> 14

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (2)..(2)

<223> 5-метил

<220>

<221> misc_feature

<222> (6)..(7)

<223> 5-метил

<220>

<221> misc_feature

<222> (11)..(13)

<223> 5-метил

<400> 422

ucuguccaag cccg 14

<210> 423

<211> 13

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (2)..(2)

<223> 5-метил

<220>

<221> misc_feature

<222> (6)..(7)

<223> 5-метил

<220>

<221> misc_feature

<222> (11)..(13)

<223> 5-метил

<400> 423

ucuguccaag ccc 13

<210> 424

<211> 12

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (2)..(2)

<223> 5-метил

<220>

<221> misc_feature

<222> (6)..(7)

<223> 5-метил

<220>

<221> misc_feature

<222> (11)..(12)

<223> 5-метил

<400> 424

ucuguccaag cc 12

<210> 425

<211> 11

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (2)..(2)

<223> 5-метил

<220>

<221> misc_feature

<222> (6)..(7)

<223> 5-метил

<220>

<221> misc_feature

<222> (11)..(11)

<223> 5-метил

<400> 425

ucuguccaag c 11

<210> 426

<211> 10

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (2)..(2)

<223> 5-метил

<220>

<221> misc_feature

<222> (6)..(7)

<223> 5-метил

<400> 426

ucuguccaag 10

<210> 427

<211> 9

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (2)..(2)

<223> 5-метил

<220>

<221> misc_feature

<222> (6)..(7)

<223> 5-метил

<400> 427

ucuguccaa 9

<210> 428

<211> 8

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (2)..(2)

<223> 5-метил

<220>

<221> misc_feature

<222> (6)..(7)

<223> 5-метил

<400> 428

ucugucca 8

<210> 429

<211> 17

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (1)..(1)

<223> 5-метил

<220>

<221> misc_feature

<222> (5)..(6)

<223> 5-метил

<220>

<221> misc_feature

<222> (10)..(12)

<223> 5-метил

<400> 429

cuguccaagc ccgguug 17

<210> 430

<211> 16

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (1)..(1)

<223> 5-метил

<220>

<221> misc_feature

<222> (5)..(6)

<223> 5-метил

<220>

<221> misc_feature

<222> (10)..(12)

<223> 5-метил

<400> 430

cuguccaagc ccgguu 16

<210> 431

<211> 15

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (1)..(1)

<223> 5-метил

<220>

<221> misc_feature

<222> (5)..(6)

<223> 5-метил

<220>

<221> misc_feature

<222> (10)..(12)

<223> 5-метил

<400> 431

cuguccaagc ccggu 15

<210> 432

<211> 14

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (1)..(1)

<223> 5-метил

<220>

<221> misc_feature

<222> (5)..(6)

<223> 5-метил

<220>

<221> misc_feature

<222> (10)..(12)

<223> 5-метил

<400> 432

cuguccaagc ccgg 14

<210> 433

<211> 13

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (1)..(1)

<223> 5-метил

<220>

<221> misc_feature

<222> (5)..(6)

<223> 5-метил

<220>

<221> misc_feature

<222> (10)..(12)

<223> 5-метил

<400> 433

cuguccaagc ccg 13

<210> 434

<211> 12

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (1)..(1)

<223> 5-метил

<220>

<221> misc_feature

<222> (5)..(6)

<223> 5-метил

<220>

<221> misc_feature

<222> (10)..(12)

<223> 5-метил

<400> 434

cuguccaagc cc 12

<210> 435

<211> 11

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (1)..(1)

<223> 5-метил

<220>

<221> misc_feature

<222> (5)..(6)

<223> 5-метил

<220>

<221> misc_feature

<222> (10)..(11)

<223> 5-метил

<400> 435

cuguccaagc c 11

<210> 436

<211> 10

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (1)..(1)

<223> 5-метил

<220>

<221> misc_feature

<222> (5)..(6)

<223> 5-метил

<220>

<221> misc_feature

<222> (10)..(10)

<223> 5-метил

<400> 436

cuguccaagc 10

<210> 437

<211> 9

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (1)..(1)

<223> 5-метил

<220>

<221> misc_feature

<222> (5)..(6)

<223> 5-метил

<400> 437

cuguccaag 9

<210> 438

<211> 8

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (1)..(1)

<223> 5-метил

<220>

<221> misc_feature

<222> (5)..(6)

<223> 5-метил

<400> 438

cuguccaa 8

<210> 439

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (4)..(4)

<223> 5-метил

<220>

<221> misc_feature

<222> (8)..(9)

<223> 5-метил

<220>

<221> misc_feature

<222> (13)..(15)

<223> 5-метил

<400> 439

guucugucca agcccgguug 20

<210> 440

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (4)..(4)

<223> 5-метил

<220>

<221> misc_feature

<222> (8)..(9)

<223> 5-метил

<220>

<221> misc_feature

<222> (13)..(15)

<223> 5-метил

<400> 440

guucugucca agcccgguu 19

<210> 441

<211> 18

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (4)..(4)

<223> 5-метил

<220>

<221> misc_feature

<222> (8)..(9)

<223> 5-метил

<220>

<221> misc_feature

<222> (13)..(15)

<223> 5-метил

<400> 441

guucugucca agcccggu 18

<210> 442

<211> 17

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (4)..(4)

<223> 5-метил

<220>

<221> misc_feature

<222> (8)..(9)

<223> 5-метил

<220>

<221> misc_feature

<222> (13)..(15)

<223> 5-метил

<400> 442

guucugucca agcccgg 17

<210> 443

<211> 16

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (4)..(4)

<223> 5-метил

<220>

<221> misc_feature

<222> (8)..(9)

<223> 5-метил

<220>

<221> misc_feature

<222> (13)..(15)

<223> 5-метил

<400> 443

guucugucca agcccg 16

<210> 444

<211> 15

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (4)..(4)

<223> 5-метил

<220>

<221> misc_feature

<222> (8)..(9)

<223> 5-метил

<220>

<221> misc_feature

<222> (13)..(15)

<223> 5-метил

<400> 444

guucugucca agccc 15

<210> 445

<211> 14

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (4)..(4)

<223> 5-метил

<220>

<221> misc_feature

<222> (8)..(9)

<223> 5-метил

<220>

<221> misc_feature

<222> (13)..(14)

<223> 5-метил

<400> 445

guucugucca agcc 14

<210> 446

<211> 13

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (4)..(4)

<223> 5-метил

<220>

<221> misc_feature

<222> (8)..(9)

<223> 5-метил

<220>

<221> misc_feature

<222> (13)..(13)

<223> 5-метил

<400> 446

guucugucca agc 13

<210> 447

<211> 12

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (4)..(4)

<223> 5-метил

<220>

<221> misc_feature

<222> (8)..(9)

<223> 5-метил

<400> 447

guucugucca ag 12

<210> 448

<211> 11

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (4)..(4)

<223> 5-метил

<220>

<221> misc_feature

<222> (8)..(9)

<223> 5-метил

<400> 448

guucugucca a 11

<210> 449

<211> 10

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (4)..(4)

<223> 5-метил

<220>

<221> misc_feature

<222> (8)..(9)

<223> 5-метил

<400> 449

guucugucca 10

<210> 450

<211> 9

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (4)..(4)

<223> 5-метил

<220>

<221> misc_feature

<222> (8)..(9)

<223> 5-метил

<400> 450

guucugucc 9

<210> 451

<211> 8

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (4)..(4)

<223> 5-метил

<220>

<221> misc_feature

<222> (8)..(8)

<223> 5-метил

<400> 451

guucuguc 8

<210> 452

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (5)..(5)

<223> 5-метил

<220>

<221> misc_feature

<222> (9)..(10)

<223> 5-метил

<220>

<221> misc_feature

<222> (14)..(16)

<223> 5-метил

<400> 452

aguucugucc aagcccgguu 20

<210> 453

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (5)..(5)

<223> 5-метил

<220>

<221> misc_feature

<222> (9)..(10)

<223> 5-метил

<220>

<221> misc_feature

<222> (14)..(16)

<223> 5-метил

<400> 453

aguucugucc aagcccggu 19

<210> 454

<211> 18

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (5)..(5)

<223> 5-метил

<220>

<221> misc_feature

<222> (9)..(10)

<223> 5-метил

<220>

<221> misc_feature

<222> (14)..(16)

<223> 5-метил

<400> 454

aguucugucc aagcccgg 18

<210> 455

<211> 17

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (5)..(5)

<223> 5-метил

<220>

<221> misc_feature

<222> (9)..(10)

<223> 5-метил

<220>

<221> misc_feature

<222> (14)..(16)

<223> 5-метил

<400> 455

aguucugucc aagcccg 17

<210> 456

<211> 16

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (5)..(5)

<223> 5-метил

<220>

<221> misc_feature

<222> (9)..(10)

<223> 5-метил

<220>

<221> misc_feature

<222> (14)..(16)

<223> 5-метил

<400> 456

aguucugucc aagccc 16

<210> 457

<211> 15

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (5)..(5)

<223> 5-метил

<220>

<221> misc_feature

<222> (9)..(10)

<223> 5-метил

<220>

<221> misc_feature

<222> (14)..(15)

<223> 5-метил

<400> 457

aguucugucc aagcc 15

<210> 458

<211> 14

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (5)..(5)

<223> 5-метил

<220>

<221> misc_feature

<222> (9)..(10)

<223> 5-метил

<220>

<221> misc_feature

<222> (14)..(14)

<223> 5-метил

<400> 458

aguucugucc aagc 14

<210> 459

<211> 13

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (5)..(5)

<223> 5-метил

<220>

<221> misc_feature

<222> (9)..(10)

<223> 5-метил

<400> 459

aguucugucc aag 13

<210> 460

<211> 12

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (5)..(5)

<223> 5-метил

<220>

<221> misc_feature

<222> (9)..(10)

<223> 5-метил

<400> 460

aguucugucc aa 12

<210> 461

<211> 11

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (5)..(5)

<223> 5-метил

<220>

<221> misc_feature

<222> (9)..(10)

<223> 5-метил

<400> 461

aguucugucc a 11

<210> 462

<211> 10

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (5)..(5)

<223> 5-метил

<220>

<221> misc_feature

<222> (9)..(10)

<223> 5-метил

<400> 462

aguucugucc 10

<210> 463

<211> 9

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (5)..(5)

<223> 5-метил

<220>

<221> misc_feature

<222> (9)..(9)

<223> 5-метил

<400> 463

aguucuguc 9

<210> 464

<211> 8

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (5)..(5)

<223> 5-метил

<400> 464

aguucugu 8

<210> 465

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (6)..(6)

<223> 5-метил

<220>

<221> misc_feature

<222> (10)..(11)

<223> 5-метил

<220>

<221> misc_feature

<222> (15)..(17)

<223> 5-метил

<400> 465

aaguucuguc caagcccggu 20

<210> 466

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (6)..(6)

<223> 5-метил

<220>

<221> misc_feature

<222> (10)..(11)

<223> 5-метил

<220>

<221> misc_feature

<222> (15)..(17)

<223> 5-метил

<400> 466

aaguucuguc caagcccgg 19

<210> 467

<211> 18

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (6)..(6)

<223> 5-метил

<220>

<221> misc_feature

<222> (10)..(11)

<223> 5-метил

<220>

<221> misc_feature

<222> (15)..(17)

<223> 5-метил

<400> 467

aaguucuguc caagcccg 18

<210> 468

<211> 17

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (6)..(6)

<223> 5-метил

<220>

<221> misc_feature

<222> (10)..(11)

<223> 5-метил

<220>

<221> misc_feature

<222> (15)..(17)

<223> 5-метил

<400> 468

aaguucuguc caagccc 17

<210> 469

<211> 16

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (6)..(6)

<223> 5-метил

<220>

<221> misc_feature

<222> (10)..(11)

<223> 5-метил

<220>

<221> misc_feature

<222> (15)..(16)

<223> 5-метил

<400> 469

aaguucuguc caagcc 16

<210> 470

<211> 15

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (6)..(6)

<223> 5-метил

<220>

<221> misc_feature

<222> (10)..(11)

<223> 5-метил

<220>

<221> misc_feature

<222> (15)..(15)

<223> 5-метил

<400> 470

aaguucuguc caagc 15

<210> 471

<211> 14

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (6)..(6)

<223> 5-метил

<220>

<221> misc_feature

<222> (10)..(11)

<223> 5-метил

<400> 471

aaguucuguc caag 14

<210> 472

<211> 13

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (6)..(6)

<223> 5-метил

<220>

<221> misc_feature

<222> (10)..(11)

<223> 5-метил

<400> 472

aaguucuguc caa 13

<210> 473

<211> 12

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (6)..(6)

<223> 5-метил

<220>

<221> misc_feature

<222> (10)..(11)

<223> 5-метил

<400> 473

aaguucuguc ca 12

<210> 474

<211> 11

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (6)..(6)

<223> 5-метил

<220>

<221> misc_feature

<222> (10)..(11)

<223> 5-метил

<400> 474

aaguucuguc c 11

<210> 475

<211> 10

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (6)..(6)

<223> 5-метил

<220>

<221> misc_feature

<222> (10)..(10)

<223> 5-метил

<400> 475

aaguucuguc 10

<210> 476

<211> 9

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (6)..(6)

<223> 5-метил

<400> 476

aaguucugu 9

<210> 477

<211> 8

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (6)..(6)

<223> 5-метил

<400> 477

aaguucug 8

<210> 478

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (7)..(7)

<223> 5-метил

<220>

<221> misc_feature

<222> (11)..(12)

<223> 5-метил

<220>

<221> misc_feature

<222> (16)..(18)

<223> 5-метил

<400> 478

uaaguucugu ccaagcccgg 20

<210> 479

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (7)..(7)

<223> 5-метил

<220>

<221> misc_feature

<222> (11)..(12)

<223> 5-метил

<220>

<221> misc_feature

<222> (16)..(18)

<223> 5-метил

<400> 479

uaaguucugu ccaagcccg 19

<210> 480

<211> 18

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (7)..(7)

<223> 5-метил

<220>

<221> misc_feature

<222> (11)..(12)

<223> 5-метил

<220>

<221> misc_feature

<222> (16)..(18)

<223> 5-метил

<400> 480

uaaguucugu ccaagccc 18

<210> 481

<211> 17

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (7)..(7)

<223> 5-метил

<220>

<221> misc_feature

<222> (11)..(12)

<223> 5-метил

<220>

<221> misc_feature

<222> (16)..(17)

<223> 5-метил

<400> 481

uaaguucugu ccaagcc 17

<210> 482

<211> 16

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (7)..(7)

<223> 5-метил

<220>

<221> misc_feature

<222> (11)..(12)

<223> 5-метил

<220>

<221> misc_feature

<222> (16)..(16)

<223> 5-метил

<400> 482

uaaguucugu ccaagc 16

<210> 483

<211> 14

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (7)..(7)

<223> 5-метил

<220>

<221> misc_feature

<222> (11)..(12)

<223> 5-метил

<400> 483

uaaguucugu ccaa 14

<210> 484

<211> 13

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (7)..(7)

<223> 5-метил

<220>

<221> misc_feature

<222> (11)..(12)

<223> 5-метил

<400> 484

uaaguucugu cca 13

<210> 485

<211> 12

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (7)..(7)

<223> 5-метил

<220>

<221> misc_feature

<222> (11)..(12)

<223> 5-метил

<400> 485

uaaguucugu cc 12

<210> 486

<211> 11

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (7)..(7)

<223> 5-метил

<220>

<221> misc_feature

<222> (11)..(11)

<223> 5-метил

<400> 486

uaaguucugu c 11

<210> 487

<211> 10

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (7)..(7)

<223> 5-метил

<400> 487

uaaguucugu 10

<210> 488

<211> 9

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (7)..(7)

<223> 5-метил

<400> 488

uaaguucug 9

<210> 489

<211> 8

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (7)..(7)

<223> 5-метил

<400> 489

uaaguucu 8

<210> 490

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (8)..(8)

<223> 5-метил

<220>

<221> misc_feature

<222> (12)..(13)

<223> 5-метил

<220>

<221> misc_feature

<222> (17)..(19)

<223> 5-метил

<400> 490

guaaguucug uccaagcccg 20

<210> 491

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (8)..(8)

<223> 5-метил

<220>

<221> misc_feature

<222> (12)..(13)

<223> 5-метил

<220>

<221> misc_feature

<222> (17)..(19)

<223> 5-метил

<400> 491

guaaguucug uccaagccc 19

<210> 492

<211> 17

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (8)..(8)

<223> 5-метил

<220>

<221> misc_feature

<222> (12)..(13)

<223> 5-метил

<220>

<221> misc_feature

<222> (17)..(17)

<223> 5-метил

<400> 492

guaaguucug uccaagc 17

<210> 493

<211> 16

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (8)..(8)

<223> 5-метил

<220>

<221> misc_feature

<222> (12)..(13)

<223> 5-метил

<400> 493

guaaguucug uccaag 16

<210> 494

<211> 15

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (8)..(8)

<223> 5-метил

<220>

<221> misc_feature

<222> (12)..(13)

<223> 5-метил

<400> 494

guaaguucug uccaa 15

<210> 495

<211> 14

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (8)..(8)

<223> 5-метил

<220>

<221> misc_feature

<222> (12)..(13)

<223> 5-метил

<400> 495

guaaguucug ucca 14

<210> 496

<211> 13

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (8)..(8)

<223> 5-метил

<220>

<221> misc_feature

<222> (12)..(13)

<223> 5-метил

<400> 496

guaaguucug ucc 13

<210> 497

<211> 12

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (8)..(8)

<223> 5-метил

<220>

<221> misc_feature

<222> (12)..(12)

<223> 5-метил

<400> 497

guaaguucug uc 12

<210> 498

<211> 11

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (8)..(8)

<223> 5-метил

<400> 498

guaaguucug u 11

<210> 499

<211> 10

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (8)..(8)

<223> 5-метил

<400> 499

guaaguucug 10

<210> 500

<211> 9

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (8)..(8)

<223> 5-метил

<400> 500

guaaguucu 9

<210> 501

<211> 8

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (8)..(8)

<223> 5-метил

<400> 501

guaaguuc 8

<210> 502

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (9)..(9)

<223> 5-метил

<220>

<221> misc_feature

<222> (13)..(14)

<223> 5-метил

<220>

<221> misc_feature

<222> (18)..(20)

<223> 5-метил

<400> 502

gguaaguucu guccaagccc 20

<210> 503

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (9)..(9)

<223> 5-метил

<220>

<221> misc_feature

<222> (13)..(14)

<223> 5-метил

<220>

<221> misc_feature

<222> (18)..(19)

<223> 5-метил

<400> 503

gguaaguucu guccaagcc 19

<210> 504

<211> 17

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (9)..(9)

<223> 5-метил

<220>

<221> misc_feature

<222> (13)..(14)

<223> 5-метил

<400> 504

gguaaguucu guccaag 17

<210> 505

<211> 16

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (9)..(9)

<223> 5-метил

<220>

<221> misc_feature

<222> (13)..(14)

<223> 5-метил

<400> 505

gguaaguucu guccaa 16

<210> 506

<211> 15

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (9)..(9)

<223> 5-метил

<220>

<221> misc_feature

<222> (13)..(14)

<223> 5-метил

<400> 506

gguaaguucu gucca 15

<210> 507

<211> 14

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (9)..(9)

<223> 5-метил

<220>

<221> misc_feature

<222> (13)..(14)

<223> 5-метил

<400> 507

gguaaguucu gucc 14

<210> 508

<211> 13

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (9)..(9)

<223> 5-метил

<220>

<221> misc_feature

<222> (13)..(13)

<223> 5-метил

<400> 508

gguaaguucu guc 13

<210> 509

<211> 12

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (9)..(9)

<223> 5-метил

<400> 509

gguaaguucu gu 12

<210> 510

<211> 11

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (9)..(9)

<223> 5-метил

<400> 510

gguaaguucu g 11

<210> 511

<211> 10

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (9)..(9)

<223> 5-метил

<400> 511

gguaaguucu 10

<210> 512

<211> 9

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (9)..(9)

<223> 5-метил

<400> 512

gguaaguuc 9

<210> 513

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (1)..(1)

<223> 5-метил

<220>

<221> misc_feature

<222> (10)..(10)

<223> 5-метил

<220>

<221> misc_feature

<222> (14)..(15)

<223> 5-метил

<220>

<221> misc_feature

<222> (19)..(20)

<223> 5-метил

<400> 513

cgguaaguuc uguccaagcc 20

<210> 514

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (1)..(1)

<223> 5-метил

<220>

<221> misc_feature

<222> (10)..(10)

<223> 5-метил

<220>

<221> misc_feature

<222> (14)..(15)

<223> 5-метил

<220>

<221> misc_feature

<222> (19)..(19)

<223> 5-метил

<400> 514

cgguaaguuc uguccaagc 19

<210> 515

<211> 18

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (1)..(1)

<223> 5-метил

<220>

<221> misc_feature

<222> (10)..(10)

<223> 5-метил

<220>

<221> misc_feature

<222> (14)..(15)

<223> 5-метил

<400> 515

cgguaaguuc uguccaag 18

<210> 516

<211> 17

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (1)..(1)

<223> 5-метил

<220>

<221> misc_feature

<222> (10)..(10)

<223> 5-метил

<220>

<221> misc_feature

<222> (14)..(15)

<223> 5-метил

<400> 516

cgguaaguuc uguccaa 17

<210> 517

<211> 16

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (1)..(1)

<223> 5-метил

<220>

<221> misc_feature

<222> (10)..(10)

<223> 5-метил

<220>

<221> misc_feature

<222> (14)..(15)

<223> 5-метил

<400> 517

cgguaaguuc ugucca 16

<210> 518

<211> 15

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (1)..(1)

<223> 5-метил

<220>

<221> misc_feature

<222> (10)..(10)

<223> 5-метил

<220>

<221> misc_feature

<222> (14)..(15)

<223> 5-метил

<400> 518

cgguaaguuc ugucc 15

<210> 519

<211> 14

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (1)..(1)

<223> 5-метил

<220>

<221> misc_feature

<222> (10)..(10)

<223> 5-метил

<220>

<221> misc_feature

<222> (14)..(14)

<223> 5-метил

<400> 519

cgguaaguuc uguc 14

<210> 520

<211> 13

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (1)..(1)

<223> 5-метил

<220>

<221> misc_feature

<222> (10)..(10)

<223> 5-метил

<400> 520

cgguaaguuc ugu 13

<210> 521

<211> 12

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (1)..(1)

<223> 5-метил

<220>

<221> misc_feature

<222> (10)..(10)

<223> 5-метил

<400> 521

cgguaaguuc ug 12

<210> 522

<211> 11

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (1)..(1)

<223> 5-метил

<220>

<221> misc_feature

<222> (10)..(10)

<223> 5-метил

<400> 522

cgguaaguuc u 11

<210> 523

<211> 10

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (1)..(1)

<223> 5-метил

<220>

<221> misc_feature

<222> (10)..(10)

<223> 5-метил

<400> 523

cgguaaguuc 10

<210> 524

<211> 9

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (1)..(1)

<223> 5-метил

<400> 524

cgguaaguu 9

<210> 525

<211> 8

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (1)..(1)

<223> 5-метил

<400> 525

cgguaagu 8

<210> 526

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (2)..(2)

<223> 5-метил

<220>

<221> misc_feature

<222> (11)..(11)

<223> 5-метил

<220>

<221> misc_feature

<222> (15)..(16)

<223> 5-метил

<220>

<221> misc_feature

<222> (20)..(20)

<223> 5-метил

<400> 526

ucgguaaguu cuguccaagc 20

<210> 527

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (2)..(2)

<223> 5-метил

<220>

<221> misc_feature

<222> (11)..(11)

<223> 5-метил

<220>

<221> misc_feature

<222> (15)..(16)

<223> 5-метил

<400> 527

ucgguaaguu cuguccaag 19

<210> 528

<211> 18

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (2)..(2)

<223> 5-метил

<220>

<221> misc_feature

<222> (11)..(11)

<223> 5-метил

<220>

<221> misc_feature

<222> (15)..(16)

<223> 5-метил

<400> 528

ucgguaaguu cuguccaa 18

<210> 529

<211> 17

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (2)..(2)

<223> 5-метил

<220>

<221> misc_feature

<222> (11)..(11)

<223> 5-метил

<220>

<221> misc_feature

<222> (15)..(16)

<223> 5-метил

<400> 529

ucgguaaguu cugucca 17

<210> 530

<211> 16

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (2)..(2)

<223> 5-метил

<220>

<221> misc_feature

<222> (11)..(11)

<223> 5-метил

<220>

<221> misc_feature

<222> (15)..(16)

<223> 5-метил

<400> 530

ucgguaaguu cugucc 16

<210> 531

<211> 15

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (2)..(2)

<223> 5-метил

<220>

<221> misc_feature

<222> (11)..(11)

<223> 5-метил

<220>

<221> misc_feature

<222> (15)..(15)

<223> 5-метил

<400> 531

ucgguaaguu cuguc 15

<210> 532

<211> 14

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (2)..(2)

<223> 5-метил

<220>

<221> misc_feature

<222> (11)..(11)

<223> 5-метил

<400> 532

ucgguaaguu cugu 14

<210> 533

<211> 13

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (2)..(2)

<223> 5-метил

<220>

<221> misc_feature

<222> (11)..(11)

<223> 5-метил

<400> 533

ucgguaaguu cug 13

<210> 534

<211> 12

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (2)..(2)

<223> 5-метил

<220>

<221> misc_feature

<222> (11)..(11)

<223> 5-метил

<400> 534

ucgguaaguu cu 12

<210> 535

<211> 11

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (2)..(2)

<223> 5-метил

<220>

<221> misc_feature

<222> (11)..(11)

<223> 5-метил

<400> 535

ucgguaaguu c 11

<210> 536

<211> 10

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (2)..(2)

<223> 5-метил

<400> 536

ucgguaaguu 10

<210> 537

<211> 9

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (2)..(2)

<223> 5-метил

<400> 537

ucgguaagu 9

<210> 538

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (3)..(3)

<223> 5-метил

<220>

<221> misc_feature

<222> (12)..(12)

<223> 5-метил

<220>

<221> misc_feature

<222> (16)..(17)

<223> 5-метил

<400> 538

gucgguaagu ucuguccaag 20

<210> 539

<211> 19

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (3)..(3)

<223> 5-метил

<220>

<221> misc_feature

<222> (12)..(12)

<223> 5-метил

<220>

<221> misc_feature

<222> (16)..(17)

<223> 5-метил

<400> 539

gucgguaagu ucuguccaa 19

<210> 540

<211> 18

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Антисмысловой олигонуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (3)..(3)

<223> 5-метил

<220>

<221> misc_feature

<222> (12)..(12)

<223> 5-метил