СОСТАВЫ НА ОСНОВЕ ПАРАТИРЕОИДНОГО ГОРМОНА (PTH) ЧЕЛОВЕКА И СПОСОБЫ ИХ ПОЛУЧЕНИЯ Российский патент 2024 года по МПК A61K38/29 A61K9/08 A61K47/18 A61K47/26 A61K47/12 A61K47/10 

Перечень последовательностей

[001] Настоящая заявка содержит перечень последовательностей в виде "бумажной копии" (файл PDF) и файла, содержащего референтные последовательности (SEQ ID NO: 1 - SEQ ID NO: 2), в машиночитаемой форме (формат текстового файла ST25), который представлен в данном документе. Перечень последовательностей показан с использованием стандартного трехбуквенного кода для аминокислот, как это определено в 37 C.F.R. 1.822.

Уровень техники

[002] Паратиреоидный гормон (РТН), также называемый паратгормоном или паратирином, представляет собой гормон, секретируемый паратиреоидными железами, который регулирует уровень кальция в сыворотке крови посредством своего воздействия на кости, почки и кишечник. РТН влияет на ремоделирование костей, что представляет собой постоянный процесс, при котором костная ткань поочередно резорбируется и восстанавливается с течением времени. РТН секретируется в ответ на низкие уровни кальция в сыворотке крови. РТН косвенно стимулирует активность остеокластов в костном матриксе, чтобы высвободилось больше ионов кальция в кровь для повышения низкого уровня кальция в сыворотке крови. Нарушения, при которых секретируется слишком мало или слишком много РТН, такие как гипопаратиреоидизм, гиперпаратиреоидизм и паранеопластические синдромы, могут вызывать заболевание костей, гипокальциемию и гиперкальциемию.

[003] РТН представляет собой полипептид, содержащий 84 аминокислоты, который является прогормоном. Он характеризуется молекулярной массой, составляющей приблизительно 9500 Да. Исследования, проведенные с участием людей с определенными формами РТН, продемонстрировали анаболический эффект в отношении костей и вызвали значительный интерес в его применении для лечения остеопороза и связанных поражений костей. С использованием N-концевых 34 аминокислоты бычьего и человеческого гормонов у людей было продемонстрировано, что паратиреоидный гормон усиливает рост костей, в частности при подкожном введении в импульсном режиме. Терипаратид (РТН 1-34) (FORTEO®) одобрен в Соединенных Штатах для лечения остеопороза у людей с высоким риском перелома, в том числе у женщин в постменопаузе, мужчин с первичным или гипогонадным остеопорозом и мужчин и женщин с остеопорозом, связанным с приемом глюкокортикоидов. Несколько иная форма РТН, РТН человека (1-38), продемонстрировала сходные результаты (Cusano NE et al., J Clin Endocrinol Metab., 98:137-144, 2013).

[004] К сожалению, подобно многим низкомолекулярным терапевтическим средствам РТН является чувствительным к деградации протеазами и нестабильным из-за деградации. В действительности он является более нестабильным, чем другие традиционные малые молекулы. РТН является высокочувствительным к дезамидированию, расщеплению связей, агрегации и окислению главным образом по N-концевым аминокислотам, например метиониновым остаткам в положениях 8 и 18, что приводит к образованию окисленных форм РТН. Кроме того, он может подвергаться дезамидированию по аспарагиновому остатку в положении 16. Существует вероятность усечения полипептидной цепи на N-конце и С-концах вследствие расщепления пептидной связи. Все такие реакции могут в значительной степени ограничивать биологическую активность данного белка.

[005] Особенно необходимы улучшенные составы РТН, которые служат для предупреждения данных нежелательных реакций.

Включение посредством ссылки

[006] Все публикации и патентные заявки, упоминаемые в данном описании, включены в данный документ посредством ссылки в той же степени, как если бы было указано, что каждая отдельная публикация или патентная заявка конкретно и отдельно включены посредством ссылки.

Сущность изобретения

[007] Целью настоящего изобретения является обеспечение фармацевтически применимого состава на основе РТН в форме стабилизированного жидкого раствора, содержащего паратиреоидный гормон (РТН) в терапевтически эффективном количестве. Раствор является стабильным при хранении и в стерильной форме может храниться во флаконах или картриджах, готовых для парентерального введения пациентам-людям.

[008] В различных вариантах осуществления стабильные жидкие составы содержат паратиреоидный гормон человека (huPTH) в концентрации, составляющей от приблизительно 100 до 2000 мкг/мл; ацетатный или цитратный буфер для поддержания показателя рН раствора в диапазоне от 3 до 7; стабилизирующее средство, выбранное из группы, состоящей из Сахаров, солей, поверхностно-активных веществ, белков, хаотропных средств, жиров и аминокислот; воду и необязательно приемлемый для парентерального введения консервант; где указанный раствор является стерильным и готовым для парентерального введения пациенту-человеку.

[009] В одном варианте осуществления стабильный жидкий состав содержит huPTH (1 мг/мл), 10 мМ цитрата натрия, 50 мМ L-Met, 10 мМ EDTA, 100 мМ NaCl, 0,01% полисорбата 20, при этом показатель рН составляет 5,0.

Краткое описание чертежей

[010] На фиг. 1 изображена хроматограмма, полученная с помощью SEC-HPLC, на которой сравнивается стандартный референтный образец huPTH (вверху) с образцом huPTH, который подвергали принудительному окислению (внизу).

[011] На фиг. 2 изображена хроматограмма, полученная с помощью RP-HPLC, на которой сравнивается стандартный референтный образец huPTH (вверху) с образцом huPTH, который подвергали принудительному окислению (внизу).

[012] На фиг. 3 изображена хроматограмма, полученная с помощью CEX-HPLC, на которой сравнивается стандартный референтный образец huPTH (вверху) с образцом huPTH, который подвергали принудительному окислению (внизу).

[013] На фиг. 4 изображена хроматограмма, полученная с помощью SEC-HPLC, на которой сравниваются разные составы на основе huPTH при 25°С (вверху) и 37°С (внизу).

[014] На фиг. 5 изображена хроматограмма, полученная с помощью RP-HPLC, на которой сравниваются разные составы на основе huPTH при 25°С (вверху) и 37°С (внизу).

[015] На фиг. 6 изображена хроматограмма, полученная с помощью CEX-HPLC, на которой сравниваются разные составы на основе huPTH при 25°С (вверху) и 37°С (внизу).

[016] На фиг. 7 изображена хроматограмма, полученная с помощью SEC-HPLC, на которой сравниваются разные составы на основе huPTH при 4°С.

[017] На фиг. 8 изображена хроматограмма, полученная с помощью RP-HPLC, на которой сравниваются разные составы на основе huPTH при 4°С.

[018] На фиг. 9 изображена хроматограмма, полученная с помощью RP-HPLC, на которой сравниваются разные составы на основе huPTH при 25°С (вверху) и 37°С (внизу).

[019] На фиг. 10 изображена хроматограмма, полученная с помощью RP-HPLC, на которой сравниваются разные составы на основе huPTH при 4°С.

[020] На фиг. 11 изображена хроматограмма, полученная с помощью SEC-HPLC, на которой сравниваются разные составы на основе huPTH при 25°С (вверху) и 37°С (внизу).

[021] На фиг. 12 изображена хроматограмма, полученная с помощью SEC-HPLC, на которой сравниваются разные составы на основе huPTH при 4°С.

[022] На фиг. 13 изображена хроматограмма, полученная с помощью CEX-HPLC, на которой сравниваются разные составы на основе huPTH при 25°С (вверху) и 37°С (внизу).

[023] На фиг. 14 изображена хроматограмма, полученная с помощью CEX-HPLC, на которой сравниваются разные составы на основе huPTH при 4°С.

[024] На фиг. 15 изображена хроматограмма, полученная с помощью RP-HPLC, на которой сравниваются разные составы на основе huPTH при 25°С (вверху) и 37°С (внизу).

[025] На фиг. 16 изображена хроматограмма, полученная с помощью RP-HPLC, на которой сравниваются разные составы на основе huPTH при 4°С.

[026] На фиг. 17 изображена хроматограмма, полученная с помощью SEC-HPLC, на которой сравниваются разные составы на основе huPTH при 25°С (вверху) и 37°С (внизу).

[027] На фиг. 18 изображена хроматограмма, полученная с помощью SEC-HPLC, на которой сравниваются разные составы на основе huPTH при 4°С.

[028] На фиг. 19 изображена хроматограмма, полученная с помощью CEX-HPLC, на которой сравниваются разные составы на основе huPTH при 25°С (вверху) и 37°С (внизу).

[029] На фиг. 20 изображена хроматограмма, полученная с помощью CEX-HPLC, на которой сравниваются разные составы на основе huPTH при 4°С.

[030] На фиг. 21 показана хроматограмма, полученная с помощью RP-HPLC, оценки

влияния Tween 20 по сравнению с Tween 80 на составы на основе huPTH при 37°С.

[031] На фиг. 22 представлена столбчатая диаграмма, демонстрирующая влияние Tween 20 по сравнению с Tween 80 на составы на основе huPTH при 37°С через 5 дней.

[032] На фиг. 23-25 представлены столбчатые диаграммы, демонстрирующие стабильность разных составов при 4°С, 25°С и 37°С через одну неделю.

[033] На фиг. 26-28 представлены столбчатые диаграммы, демонстрирующие оценку посредством RP-HPLC разных составов при 4°С, 25°С и 37°С.

[034] На фиг. 29-31 представлены столбчатые диаграммы, демонстрирующие оценку посредством CEX-HPLC разных составов при 4°С, 25°С и 37°С.

[035] На фиг. 32-34 представлены столбчатые диаграммы, демонстрирующие оценку посредством SEC-HPLC разных составов при 4°С, 25°С и 37°С.

[036] На фиг. 35-37 представлены столбчатые диаграммы, демонстрирующие оценку посредством RP-HPLC разных составов при 4°С, 25°С и 37°С.

[037] На фиг. 38-40 представлены столбчатые диаграммы, демонстрирующие оценку посредством CEX-HPLC разных составов при 4°С, 25°С и 37°С.

[038] На фиг. 41-43 представлены столбчатые диаграммы, демонстрирующие оценку посредством SEC-HPLC разных составов при 4°С, 25°С и 37°С.

Подробное описание

[039] Все цифровые обозначения, например, показателя рН, температуры, времени, концентрации и молекулярной массы, включая диапазоны, являются примерными значениями, которые варьируются (+) или (-) с приращениями в 0,1. Следует понимать, что всем цифровым обозначениям предшествуют выражение "приблизительно", хотя об этом и не всегда указывается прямо. Выражение "приблизительно" также включает точное значение "X" в дополнение к минимальным приращениям "X", таким как "Х+0,1", "Х-0,1". Также следует понимать, что реагенты, описанные в данном документе, являются лишь иллюстративными и их эквиваленты известны из уровня техники, хотя об этом не всегда указывается прямо.

[040] Используемые в данном документе определенные термины характеризуются следующими определенными значениями.

[041] Используемое в данном документе выражение "содержащий" предназначено для обозначения, что составы и способы включают перечисленные элементы, но при этом не исключаются другие элементы. Выражение "состоящий по сути из" при использовании для определения составов и способов означает исключение других компонентов любой существенной значимости в комбинации при использовании по назначению. Таким образом, композиция, состоящая по сути из компонентов, определенных в данном документе, не будет исключать микропримеси, образующиеся в ходе использования способа выделения и очистки и фармацевтически приемлемых носителей, таких как фосфатно-буферный солевой раствор, консерванты и т.п. Выражение "состоящий из" означает исключение лишних микропримесей других ингредиентов и значимых стадий способа введения составов по настоящему изобретению. Варианты осуществления, определенные посредством каждого из данных переходных терминов, находятся в пределах объема настоящего изобретения.

[042] Используемый в данном документе термин "водный фармацевтический состав" или "жидкий фармацевтический состав" относятся к составу, который содержит терапевтически эффективное количество активного ингредиента в воде, подходящему для введения пациенту.

[043] В различных вариантах осуществления активный ингредиент фармацевтического состава представляет собой биологически активный hPTH, выбранный из группы, включающей hPTH (1-34), hPTH (1-37), hPTH (1-38), hPTH (1-41) и hPTH (1-84). В различных вариантах осуществления жидкий состав может включать полноразмерную форму паратиреоидного гормона из 84 аминокислот, в частности, человеческую форму hPTH (1-84) (SEQ ID NO: 1),

SVSEIQLMHNLGKHLNSMERVEWLRKKLQDVHNFVALGAPLAPRDAGSQRPRKKEDN VLVESHEKSLGEADKADVNVLTKAKSQ (SEQ ID NO: 1),

полученную либо рекомбинантно посредством синтеза пептидов, либо посредством экстракции из тканевой жидкости организма человека (см., например, патент США №5208041, включенный в данный документ посредством ссылки).

[044] В различных вариантах осуществления фрагменты РТН включают по меньшей мере первые 34 N-концевых остатка, такие как РТН (1-37), РТН (1-38), РТН (1-41) и РТН (1-34) (SEQ ID NO: 2), SVSEIQLMHNLGKHLNSMERVEWLRKKLQDVHNF (SEQ ID NO: 2).

[045] Альтернативы в форме вариантов РТН включают от 1 до 5 аминокислотных замен, которые улучшают стабильность РТН и период полужизни, таких как замещение метиониновых остатков в положениях 8 и/или 18 на лейцин или другую гидрофобную аминокислоту, которая улучшает стабильность РТН в отношении окисления, и замещение аминокислот в участке 25-27 на нечувствительные к трипсину аминокислоты, такие как гистидин, или на другую аминокислоту, которая улучшает стабильность РТН в отношении протеаз. Данные формы РТН охвачены термином "паратиреоидный гормон", используемым обобщенно в данном документе. Гормоны можно получать посредством известных рекомбинантных способов или способов синтеза, как, например, описанных в патенте США №4086196, включенном в данный документ посредством ссылки.

[046] В различных вариантах осуществления фармацевтический состав, как правило, содержит от приблизительно 0,01 мг/мл до приблизительно 5 мг/мл РТН, от приблизительно 0,1 мг/мл до приблизительно 2,5 мг/мл РТН или от приблизительно 0,5 мг/мл до приблизительно 1 мг/мл РТН. В различных вариантах осуществления фармацевтический состав содержит приблизительно 0,25 мг/мл РТН, приблизительно 0,5 мг/мл РТН, приблизительно 1 мг/мл РТН или приблизительно 2 мг/мл РТН. В различных вариантах осуществления фармацевтический состав содержит от 0,1 мг/мл до 1 мг/мл РТН. В одном варианте осуществления фармацевтический состав содержит 1 мг/мл РТН.

[047] Фармацевтические составы, как правило, составлены надлежащим образом для немедленного применения. В различных вариантах осуществления, если фармацевтический состав не подлежит немедленному введению, РТН можно составлять в виде состава, подходящего для хранения. Один такой состав представляет собой лиофилизированный состав, содержащий РТН вместе с подходящим стабилизатором. В качестве альтернативы РТН можно составлять для хранения в растворе с одним или несколькими подходящими стабилизаторами. Без ограничения можно использовать любой такой стабилизатор, который известен специалисту в данной области техники. В различных вариантах осуществления стабилизаторы, подходящие для лиофилизированных препаратов, включают без ограничения сахара, соли, поверхностно-активные вещества, белки, хаотропные средства, жиры и аминокислоты. В различных вариантах осуществления стабилизаторы, подходящие для жидких препаратов, включают без ограничения сахара, соли, поверхностно-активные вещества, белки, хаотропные средства, жиры и аминокислоты.

[048] Используемые в данном документе термины "буфер" или "буферный раствор" относятся, как правило, к водному раствору, содержащему смесь кислоты (обычно слабой кислоты, например, уксусной кислоты, лимонной кислоты, имидазолиевой формы гистидина) и основания, сопряженного с соответствующей кислотой (например, соли уксусной кислоты или лимонной кислоты, например, ацетата натрия, цитрата натрия или гистидина), или в качестве альтернативы смесь основания (обычно слабого основания, например, гистидина) и кислоты, сопряженной с соответствующим основанием (например, протонированной гистидиновой солью). Показатель рН "буферного раствора" изменится очень незначительно при добавлении небольшого количества сильной кислоты или сильного основания за счет "буферизующего эффекта", создаваемого "буферным средством". Фраза "буферная система" означает смесь, содержащую по меньшей мере два буфера. В различных вариантах осуществления настоящего изобретения буферное средство, включенное в фармацевтический состав, включает любую комбинацию кислоты или соли, которая является фармацевтически приемлемой и способной поддерживать показатель рН водного раствора в диапазоне от 3 до 7. В различных вариантах осуществления буфер поддерживает показатель рН на уровне от приблизительно 3,0 до приблизительно 7,0. В различных вариантах осуществления буфер поддерживает показатель рН, составляющий приблизительно 3,0, приблизительно 4,0, приблизительно 5,0, приблизительно 6,0 или приблизительно 7,0.

[049] Любой буфер, который способен поддерживать показатель рН состава с любым показателем рН или в любом диапазоне показателей рН, представленном выше, является подходящим для применения в фармацевтических составах по настоящему изобретению, при условии, что он не вступает в реакцию с другими компонентами данного состава, приводя к образованию видимых осадков или приводя иным образом к химической дестабилизации активного ингредиента. Примеры подходящих буферов известны из литературы (см., например, Allen Jr., Loyd V., ed. (2012) Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 22nd ed., Pharmaceutical Press). В различных вариантах осуществления буфер, используемый в фармацевтическом составе, содержит компонент, выбранный из группы, состоящей из сукцината, цитрата, малата, эдентата, гистидина, ацетата, адипината, аконитата, аскорбата, бензоата, карбоната, бикарбоната, малеата, глутамата, лактата, фосфата и тартрата или смеси данных буферов.

[050] Концентрация буфера выбрана такой, чтобы обеспечить стабилизацию показателя рН, а также достаточную буферную емкость. В различных вариантах осуществления буферные системы представляют собой источники ацетата или цитрата. В различных вариантах осуществления буферные системы представляют собой источник цитрата. В различных вариантах осуществления буфер присутствует в концентрации, составляющей приблизительно 5 мМ, приблизительно 10 мМ, приблизительно 15 мМ или приблизительно 20 мМ. В других вариантов осуществления буфер присутствует в составе в концентрации, составляющей от 0,5 до 100 мМ, от 0,75 до 50 мМ, от 1 до 20 мМ или от 10 до 20 мМ. В одном варианте осуществления буфер присутствует в концентрации, составляющей приблизительно 10 мМ. В одном варианте осуществления буфер представляет собой цитрат, присутствующий в концентрации 10 мМ.

[051] В различных вариантах осуществления по настоящему изобретению стабилизирующее средство, включенное в фармацевтический состав, выбрано из группы, состоящей из Сахаров, солей, поверхностно-активных веществ, белков, хаотропных средств, липидов и аминокислот. В различных вариантах осуществления стабилизирующее средство выбрано из группы, состоящей из полиола, который включает сахарид, предпочтительно моносахарид или дисахарид, например, маннит, глицин, глицерин, сорбит или инозитол, и многоатомного спирта, такого как глицерин или пропиленгликоль или их смесей; хелатирующего средства, выбранного из группы, включающей EDTA, DTPA или EGTA; аминокислоты (аминокислот), выбранной (выбранных) из группы, включающей пролин, аланин, аргинин, аспарагин, аспарагиновую кислоту, цистеин, глутамин, глутаминовую кислоту, глицин, гистидин, изолейцин, лейцин, лизин, метионин, фенилаланин, серии, треонин, триптофан, тирозин и валин. Примеры подходящих стабилизирущих средств подробно описаны в уровне техники (см., например, Allen Jr, Loyd V, ed. (2012) Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 22nd ed., Pharmaceutical Press).

[052] В различных вариантах осуществления настоящего изобретения стабилизирующее средство, включенное в фармацевтический состав, представляет собой поверхностно-активное вещество. Используемый в данном документе термин "поверхностно-активное вещество" относится к амфифильному соединению, т.е. соединению, содержащему как гидрофобные группы, так и гидрофильные группы, которые снижают поверхностное натяжение (или межфазное натяжение) между двумя жидкостями или между жидкостью и твердым веществом. "Неионогенное поверхностно-активное вещество" характеризуется отсутствием заряженных групп в его голове. Примеры "неионогенных поверхностно-активных веществ" представляют собой, например, простые алкиловые эфиры полиоксиэтиленгликоля, такие как простой монододециловый эфир октаэтиленгликоля, простой монододециловый эфир пентаэтиленгликоля; простые алкиловые эфиры полиоксипропиленгликоля; простые алкиловые эфиры гликозида, такие как децилглюкозид, лаурилглюкозид, октилглюкозид; простые октилфеноловые эфиры полиоксиэтиленгликоля, такие как тритон Х-100; простые ал кил феноловые эфиры полиоксиэтиленгликоля, такие как ноноксинол-9; сложные алкиловые эфиры глицерина, такие как глицериллаурат; сложные алкиловые эфиры сорбитана и полиоксиэтиленгликоля, такие как полисорбат; сложные алкиловые эфиры сорбитана, такие как спаны; кокамид МЕА, кокамид DEA, додецилметиламиноксид; блок-сополимеры полиэтиленгликоля и полипропиленгликоля, такие как полоксамеры; и полиэтоксилированный талловый амин (РОЕА). В различных вариантах осуществления фармацевтические составы по настоящему изобретению могут содержать одно или несколько из указанных поверхностно-активных веществ в комбинации. В различных вариантах осуществления неионогенные поверхностно-активные вещества, предназначенные для применения в фармацевтических составах, выбраны из группы, состоящей из полисорбатов, таких как полисорбат 20, 40, 60 или 80, и при этом концентрация неионогенного поверхностно-активного вещества находится в диапазоне от 0,01 до 0,08% (вес/об.), от 0,015 до 0,06% (вес/об.) или от 0,02 до 0,04% (вес/об.) по отношению к суммарному объему состава. В одном варианте осуществления неионогенное поверхностно-активное вещество представляет собой полисорбат 20 (т. е. Tween 20) в концентрации, составляющей 0,01% (вес/об.) по отношению к суммарному объему состава.

[053] В различных вариантах осуществления настоящего изобретения хелатирующее средство, включенное в стабильный жидкий состав, выбрано из группы, состоящей из EDTA, DTPA или EGTA. В различных вариантах осуществления хелатирующее средство представляет собой EDTA в концентрации, составляющей 10 мМ.

[054] В различных вариантах осуществления по настоящему изобретению аминокислота, включенная в стабильный жидкий состав, выбрана из группы, состоящей из пролина, аланина, аргинина, аспарагина, аспарагиновой кислоты, цистеина, глутамина, глутаминовой кислоты, глицина, гистидина, изолейцина, лейцина, лизина, метионина, фенилаланина, серина, треонина, триптофана, тирозина и валина. В различных вариантах осуществления аминокислота представляет собой L-метионин в концентрации, составляющей 50 мМ.

[055] В различных вариантах осуществления настоящего изобретения состав по настоящему изобретению содержит физиологически приемлемый регулятор тоничности. Фраза "регулятор тоничности" означает фармацевтически приемлемое инертное вещество, которое можно добавлять к составу для регуляции тоничности состава. Регуляторы тоничности, подходящие для настоящего изобретения, включают без ограничения хлорид натрия, хлорид калия, маннит, сахарозу, декстрозу, сорбит, глицерин и другой фармацевтически приемлемый регулятор тоничности. При наличии регулятора тоничности он предпочтительно присутствует в количестве, достаточном для получения жидкого состава, который является примерно изотоническим с физиологическими жидкостями (т.е. от приблизительно 270 до приблизительно 300 мОсм/л) и подходящим для парентеральной инъекции млекопитающему, такому как субъект-человек, в кожу, подкожно, или внутримышечно, или в/в. Изотоничность можно измерить, например, с применением парофазного осмометра или осмометра по точке замерзания.

[056] В различных вариантах осуществления настоящего изобретения фармацевтический состав будет содержать регулятор тоничности, выбранный из группы, состоящей из хлорида калия, хлорида кальция, хлорида натрия, фосфата натрия, фосфата калия и бикарбоната натрия, и при этом концентрация будет находиться в диапазоне от 10 до 200 мМ, от 20 до 150 мМ или от 30 до 100 мМ. В одном варианте осуществления регулятор тоничности представляет собой хлорид натрия в концентрации, составляющей 100 мМ.

[057] В различных вариантах осуществления настоящего изобретения стабильный жидкий состав также может включать приемлемый для парентерального введения консервант, выбранный из группы, состоящей из крезолов, бензилового спирта, фенола, хлорида бензалкония, хлорида бензетония, хлорбутанола, фенилэтилового спирта, метилпарабена, пропил пар абена, тимеросала и нитрата, и ацетата фенилртути.

[058] Используемые в данном документе термины "стерильная воды" или "вода для инъекций" относится к стерильному апирогенному приготовлению воды для инъекций, которая не содержит бактериостатическое средство, противомикробное средство или добавленный буфер. В целом, осмолярная концентрация добавок в итоге составляет по меньшей мере 112 мОсм/л (две пятых нормальной осмолярности внеклеточной жидкости 280 мОсм/л).

[059] Фармацевтические составы по настоящему изобретению являются подходящими для парентерального введения. Используемый в данном документе термин "парентеральное введение" фармацевтического состава включает любой путь введения, характеризующийся физическим нарушением ткани у субъекта и введением фармацевтического состава через повреждение в ткани, что таким образом приводит к непосредственному введению в кровоток, в мышцы или во внутренний орган. Таким образом, парентеральное введение включает без ограничения введение фармацевтического состава путем инъекции состава, путем нанесения состава через хирургический разрез, путем нанесения состава через проникающую в ткань нехирургическую рану и т.п. В частности, предполагается, что парентеральное введение включает без ограничения подкожную инъекцию, внутрибрюшинную инъекцию, внутримышечную инъекцию, внутригрудинную инъекцию, внутривенную инъекцию, внутриартериальную инъекцию, внутриоболочечную инъекцию, внутрижелудочковую инъекцию, внутриуретральную инъекцию, внутричерепную инъекцию, внутрисуставную инъекцию или инфузии; или инфузионные методики почечного диализа. Настоящее изобретение относится к стабильному водному фармацевтическому составу для применения в предварительно заполненных шприце, флаконе, картридже или ручке.

[060] Фармацевтические составы, как правило, составляют стерильными, по сути изотоническими и полностью соответствуют всем правилам Надлежащей производственной практики (GMP) Управления по санитарному надзору за качеством пищевых продуктов и медикаментов США. Предпочтительно терапевтически эффективная доза составов на основе полипептида, описанных в данном документе, будет обеспечивать терапевтический эффект, не вызывая значительной токсичности.

[061] В одном варианте осуществления стабильный жидкий состав содержит huPTH (1 мг/мл), 10 мМ цитрата натрия, 50 мМ L-Met, 10 мМ EDTA, 100 мМ NaCl, 0,01% полисорбата 20, при этом показатель рН составляет 5,0.

[062] Приведенные далее примеры являются иллюстративными для настоящего изобретения и не предназначены для ограничения.

Пример 1

Разработка способа оценки стабильности состава

[063] В разработке способа оценки стабильности тестируемый состав на основе huPTH (1 мг/мл РТН) подвергали принудительному окислению с использованием 0,01% Н202, а затем подвергали анализу посредством SEC-HPLC, RP-HPLC и CEX-HPLC согласно описанному в разделе "Дополнительные способы" ниже.

[064] Результаты анализа посредством SEC-HPLC показаны на фиг. 1. На фиг. 1 показано, что пик основного вещества в SEC смещается в сторону более раннего времени элюирования, указывая на агрегацию, вызванную принудительным окислением. Результаты анализа посредством SEC-HPLC показаны на фиг. 2. На фиг. 2 показано, что пик основного вещества в RP разделяется на четыре элюируемых пика, что указывает на присутствие более гидрофильной формы РТН, образование которой вызвано принудительным окислением. Результаты анализа посредством CEX-HPLC показаны на фиг. 3. На фиг. 3 показано, что пик основного вещества смещается в сторону более раннего времени элюирования, что указывает на присутствие формы с меньшим положительным зарядом, такой как дезамидиро ванная форма, образование которой вызвано принудительным окислением.

Пример 2

Скрининговые исследования влияния показателя рН и буферов

[065] В данном примере демонстрируется влияние показателя рН и варьируемых буферных условий на стабильность жидких составов на основе huPTH. Рекомбинантный huPTH (1 мг/мл) с аминокислотной последовательностью, изложенной под SEQ ID NO: 2, использовали в качестве активного ингредиента в составах. В таблице 1 представлена сводная информация о составах, которые тестировали в данном примере.

[066] Результаты анализов посредством SEC-HPLC, RP-HPLC и CEX-HPLC, выполненных при 25°С и 37°С, показаны на фиг. 4-6. Результаты анализов посредством SEC-HPLC и RP-HPLC, выполненных при 4°С, показаны на фиг. 7-8. Данные, полученные в ходе испытания стабильности методом "ускоренного старения" при 25°С и 37°С, демонстрируют, что huPTH может характеризоваться наилучшим профилем стабильности при рН 5.

Пример 3

Скрининговое исследование влияния вспомогательных веществ и поверхностно-активных веществ при оптимизированном диапазоне показателей рН

[067] В данном примере демонстрируется влияние различных вспомогательных веществ и поверхностно-активных веществ на стабильность жидких составов на основе huPTH при рН 5,0. Рекомбинантный huPTH (1 мг/мл) с аминокислотной последовательностью, изложенной под SEQ ID NO: 2, использовали в качестве активного ингредиента в составах. Фиксированными параметрами состава являлись рН 5,0 и 1,0 мг/мл huPTH.

[068] Для скрининга влияния различных вспомогательных веществ готовили десять разных составов, которые хранили в стеклянных флаконах типа 1 с пробками из TFE. Анализ стабильности (RP-HPLC, CEX-HPLC и SEC-HPLC, показатель рН, осмолярность, UV-VIS) выполняли при 4°С, 25°С, 37°С в недели 0, 1,2, 4, 8, 12. В таблице 2 представлена сводная информация о составах, которые тестировали в данном примере.

[069] Результаты анализов посредством SEC-HPLC, RP-HPLC и CEX-HPLC, выполненных при 4°С, 25°С и 37°С, показаны на фиг. 9-14. Первичные испытания стабильности методом "ускоренного старения" при 25°С и 37°С демонстрируют, что стабильность huPTH при рН 5 можно дополнительно повысить за счет присутствия в составе определенных вспомогательных веществ. Используя ZnCl в качестве стандарта, три вспомогательных вещества для указанного состава обеспечивают наилучший профиль стабильности для huPTH в водных растворах, при этом данные, полученные в анализах SEC-HPLC, RP-HPLC и CEX-HPLC, демонстрируют, что составы #1, #2, #3, #5, #6, #9 и #10 являются наиболее стабильными в стрессовых условиях испытания стабильности методом "ускоренного старения".

[070] Для скрининга влияния различных поверхностно-активных веществ готовили двенадцать разных составов, которые хранили в стеклянных флаконах типа 1 с пробками из TFE. Анализ стабильности (RP-HPLC, CEX-HPLC и SEC-HPLC, показатель рН, осмолярность, UV-VIS) выполняли при 4°С, 25°С, 37°С в недели 0, 1, 2, 4, 8, 12. В таблице 3 представлена сводная информация о составах, которые тестировали в данном примере.

[071] Результаты анализов посредством SEC-HPLC, RP-HPLC и CEX-HPLC, выполненных при 4°С, 25°С и 37°С, показаны на фиг.15-20. Данные анализов посредством RP-HPLC (25°С) демонстрируют, что составы #1, #3, #4, #5, #6, #7, #9, #10 и #11 являются наилучшими в стрессовых условиях испытания стабильности методом "ускоренного старения", тогда как составы #2, #8 и #12 являются нестабильными. Данные анализа посредством SEC-HPLC (25°С) демонстрируют, что все составы, за исключением #8 и #12, являются стабильными. Данные анализа посредством CEX-HPLC демонстрируют, что все составы, за исключением #2, #8 и #12, являются стабильными.

[072] Таким образом, было продемонстрировано, что L-Met, пропиленгликоль и полисорбат-80 в комбинации могут обеспечивать надлежащую стабильность для huPTH при показателе рН 5,0. При этом, за исключением составов #2, #8 и #12, все составы стабильны в течение двух недель. Указанное влияние L-Met на стабильность huPTH представляет собой принципиально новый факт.

Пример 4

Влияние Tween 20 и Tween 80 на стабильность huPTH

[073] В данном примере оценивали влияние Tween 20 (Т20) и Tween 80 (Т80) на стабильность разных составов, протестированных в примерах 1-3. В таблице 4 представлена сводная информация о составах, которые первично испытывали в данном примере.

[074] Результаты анализа посредством RP-HPLC, выполненного при 37°С, показаны на фиг. 21. Стабильность составов при 37°С после 5 дней показана на фиг. 22. Результаты продемонстрировали, что Tween 80 вызывал большую степень деградации РТН, чем Tween 20. В действительности добавление 0,01% (об./об.) Tween 80 приводило к большей деградации, чем 0,1% (об./об.) Tween 20. Наблюдаемые виды деградации главным образом представляют собой окисления.

[075] Во втором исследовании оценивали составы, перечисленные в таблице 5.

[076] Стабильность составов при 4°С, 25°С и 37°С на неделе 1 показана на фиг. 23-25. Результаты анализов посредством RP-HPLC, CEX-HPLC и SEC-HPLC, выполненных при 4°С, 25°С и 37°С, показаны на фиг. 26-34. Данные результаты демонстрируют, что концентрацию L-Met необходимо повышать от 10 мМ до 50-100 мМ, чтобы предупредить индуцированное Tween 80 окисление, то есть повышение концентрации L-Met обусловливает защитный эффект в отношении стабильности huPTH и при концентрации, превышающей 50 мМ, защитный эффект L-Met, по-видимому, оказывается максимальным.

Пример 5

Оценка комбинаций L-Met и EDTA в отношении стабильности huPTH

[077] В данном примере оценивали влияние различных комбинаций L-Met и EDTA в отношении стабильности huPTH. В таблице 6 представлена сводная информация о составах, которые первично испытывали в данном примере.

[078] Результаты анализов посредством RP-HPLC, CEX-HPLC и SEC-HPLC, выполненных при 4°С, 25°С и 37°С, показаны на фиг. 35-43. Данные результаты демонстрируют, что оптимальный состав содержит 10 мМ цитрата натрия, 50 мМ L-Met, 10 мМ EDTA, рН 5,0, 100 мМ NaCl, 0,01% полисорбата 20. И неожиданно оказалось, что комбинация сорбита и EDTA может стабилизировать huPTH при 25°С. На основе полученных результатов, описанных в данном документе, эффективные параметры технологического процесса могут быть следующими: разбавление полисорбата 20 в буфере для состава с получением 10% (об./об.) концентрации; выполнение диализа huPTH против буфера для состава с получением действующего вещества (DS); добавление 10% (об./об.) полисорбата 20 в действующее вещество (DS) с получения лекарственного препарата (DP).

Дополнительные способы

SEC-HPLC

Колонка для SEC: колонка Phenomenex Yarra 3 мкм SECd200 LC, 300 × 4,6 мм, №продукта H15d152245.

Подвижная фаза: 0,3 М NaCl, 50 мМ NaH₂PO₄, рН 7,0.

Скорость потока: 0,3 мл/мин. Детектор: 220 нм.

Температура колонки: 25±3°С. Автодозатор: 5±2°С.

Объем вводимой пробы: 20 мкл 1 мг/мл белка.

RP-HPLC

Колонка для RP: Phenomenex Jupiter 5 г С18 300А, колонка 250 × 4,6 мм, № продукта 172611.

Подвижная фаза А: 0,1% TFA, 99,9% ddH₂O.

Подвижная фаза В: 0,1% TFA, 99,9% ACN.

Скорость потока: 0,5 мл/мин.

Детектор: 220 нм.

Температура колонки: 25±3°С.

Автодозатор: 5±20°С.

Объем вводимой пробы: 20 мкл 1 мг/мл белка.

CEX-HPLC

Колонка для СЕХ: TOSOH Bioscience, колонка LLC TSKgel SP-NPR, 4,6 ID × 3,5 см, 2,5 мкм, № продукта K0054-81C.

Подвижная фаза A: 38,75 мМ NaAc, 22,5% ACN, рН 5,5.

Подвижная фаза В: 46,25 мМ NaAc, 277,5 мМ NaCl, 7,5% ACN, рН 5,1.

Скорость потока: 0,3 мл/мин.

Детектор: 220 нм.

Температура колонки: 25±3°С.

Автодозатор: 5±2°С.

Объем вводимой пробы: 20 мкл 1 мг/мл белка.

Изобретение относится к стабильным жидким фармацевтическим составам, содержащим паратиреоидный гормон человека. В различных вариантах осуществления стабильные жидкие фармацевтические составы содержат паратиреоидный гормон человека (huPTH), буферное средство для поддержания показателя рН раствора в диапазоне от 3 до 6, одно или несколько стабилизирующих средств, выбранных из группы, состоящей из сахаров, солей, поверхностно-активных веществ, белков, хаотропных средств, жиров и аминокислот, регулятор тоничности, воду и консервант, приемлемый для парентерального введения; и при этом указанный раствор является стерильным и готовым для парентерального введения пациенту-человеку. 43 ил., 6 табл., 5 пр.

Водный состав для парентерального введения пациенту-человеку, содержащий 1 мг/мл паратиреоидного гормона (РТН) человека, имеющего аминокислотную последовательность, изложенную под SEQ ID NO: 2, 10 мМ цитрата натрия, 50 мМ L-Met, 10 мМ EDTA, 100 мМ NaCl, 0,01% полисорбата 20, где состав характеризуется показателем рН, составляющим приблизительно 5,0.