Изобретение относится к области клинической медицины и позволяет путем биохимических исследований диагностировать хронический воспалительный процесс матки на этапе предгравидарной подготовки у женщин с невынашиванием беременности в анамнезе.
Залог успешной беременности лежит в эффективной оценке готовности ткани эндометрия к имплантации. Прогнозирование и диагностика осложнений беременности еще на этапе предгравидарной подготовки является основой эффективной помощи и обуславливают актуальность предлагаемого способа.
В условиях демографического кризиса проблема невынашивание беременности (НБ) приобретает характер приоритетной и требует практических решения уже на этапе предгравидарной подготовки. Полиэтиологичность НБ, а также тот факт, что около 50% случаев остаются неуточненными (идиопа-тическими) обуславливает необходимость не только детального изучения этого осложнения беременности, но и поиск маркеров НБ высокой диагностической ценности с целью профилактики репродуктивных потерь.
Изучение этиопатогенеза НБ позволило предположить, что хронический воспалительный процесс является одной из основных причин прерывания беременности. Хронический эндометрит (ХЭ) частота которого достигает 66,3% представляет собой целый комплекс нейрогуморальных нарушений, приводящих к нарушению функционирования железистого аппарата матки и как следствие к НБ. На сегодняшний день воспалительный компонент изменений эндометрия считается первопричиной нарушения имплантации (Bruner-Tran KL, Herington JL, Duleba AJ, Taylor HS, Osteen KG. Medical management of endometriosis: emerging evidence linking inflammation to disease pathophysiology. Minerva Ginecol 2013; 65: 199-213). ХЭ патологический процесс при котором воспалительный инфильтрат представлен комплексом нейтрофилов, плазматических клеток, а также лимфоидными агрегатами или субэпителиальными кровоизлияниями как на поверхности, так и в глубине стромы эндометрия (Ross J.D. What is endometritis and does it require treatment? Sex Transm Infect. 2004 Aug;80(4):252-3. doi: 10.1136/sti.2004.009548. PMID: 15295119; PMCID: PMC 1744883). Однако диагностика ХЭ крайне трудна в связи с отсутствием клинической симптоматики, а также единых диагностических критериев этой патологии эндометрия.
В настоящее время с целью диагностики ХЭ используется иммуноги-стохимический метод (ИГХ) с помощью которого можно идентифицировать плазматические клетки (CD 138) в тканях эндометрия. Недостатками метода является его крайне высокая стоимость, а также несоответствие в отношении количества окрашенных CD138 клеток, которое требуется в строме эндометрия для постановки окончательного диагноза ХЭ. Рядом исследований было установлено, что CD138 определялись также у фертильных здоровых женщин (Гомболевская Н.А., Марченко Л.А. Современные критерии диагностики хронического эндометрита (обзор литературы) / Проблемы репродукции. - 2012.- №9. - С 42-46).
В патентной литературе описано множество способов диагностики хронического эндометрита, как при помощи гистологического исследования эндометрия (патенты РФ №247574 и №2674155), иммуногистохимического (ИГХ) исследования маркеров иммунокомпетентных клеток эндометрия (патенты РФ №2236013, №2236013 и №2587325, №2587325 С1), метод диагностики ХЭ по содержанию белков воспаления в менструальной крови (патент РФ №2108750, №2697195, №2697195 С1), а также метод оценки уровня экспрессии мРНК с помощью количественной полимеразной цепной реакции с предварительной стадией обратной транскрипции (ОТ-ПЦР) в режиме реального времени (патент РФ №2642621).
В последние годы активно проводятся исследования по изучению биохимических маркеров из независимых патологических путей, способных адекватно отражать нарушение метаболических и биохимических процессов, приводящих к НБ (Бушмелева Н.Н., Вахрушеа Ю.Н. Этиопатогенетический аспект ранних репродуктивных потерь при совершенствовании организации медицинской помощи женщинам (аналитический обзор) // Социальные аспекты здоровья населения Электронное издание. - 2020. - №66 (5). - Режим доступа: http://vestnik.mednet.ru/content/view/1199/30/lang,ru/. - Дата обращения: 05.12.2021). Эластаза и ее ингибиторы представляют большой практический интерес, как активные участники развития различных заболеваний, особенно инфекционного генеза. В организме протеолитическая система играет большое значение для оценки различных изменений в связи с тем, что протеиназы учавствуют во многих как физиологических, так и патологических процессах. Баланс эластаза-ингибиторной системы строго сбалансирован и в условиях развития какого-либо патологического процесса сдвигается в сторону протео-литических ферментов, способствуя повреждению тканей. Лейкоцитарная эластаза (ЛЭ) локализуется в азурофильных гранулах полиморфноядерных лейкоцитах и секретируется в межклеточное пространство как регулятор воспаления, причем в разных ситуациях она может выступать и как воспалительный, и как противовоспалительный агент (Состояние эластаза-ингибитороной системы у детей в норме и при отдельных патологических состояниях: монография/Н.С. Парамонова, Л.Н. Турина, О.А. Волкова, А.А. Карчевский, Л.Н. Синица; под редакцией Н.С. Парамоновой. - Гродно: ГрГМУ, 2017. - 132 с.). На основании исследований установлено, что ЛЭ можно использовать, как маркер «скрытой» инфекции репродуктивной системы (Wang Q, Que С, Chen G. Effects of leukocyte elastase in semen on sperm quality. Medicine (Baltimore). 2022 Oct 14;101(41): е31111. doi: 10.1097/MD.0000000000031111). Активность ЛЭ находится как под контролем протеиназных ингибиторов плазмы, так и тканевых ингибиторов - протеиназного ингибитора альфа 2-макроглобулина (а - 2МГ) и секреторного ингибитора протеиназы лейкоцитов (SLPI). Необходимым условием для диагностики патогенетических механизмов является оценка уровня протеаза-ингибиторной активности крови, которая может служить объективным чувствительным критерием оценки течения и прогнозирования беременности.
За прототип предлагаемого изобретения был взят способ определения показаний к назначению антиоксидантной терапии при невынашивании беременности (патент РФ №2797680 С1), где в тканях эндометрия путем иммуно-ферментного анализа определяли маркеры оксидативного стресса. Недостатками метода является неспецифичность в отношении ХЭ.
Цель предлагаемого изобретения заключается в повышении точности и информативности диагностики ХЭ у женщин с невынашиванием беременности в анамнезе на этапе предгравидарной подготовки.
Технический результат предлагаемого изобретения достигается тем, что в тканях эндометрия, полученных путем пайпель-биопсии на 16-18 день менструального цикла, путем иммуноферментного анализа, одномоментно определяют уровень лейкоцитарной эластазы, альфа 2 - макроглобулина и уровень секреторного ингибитора протеиназы лейкоцитов, при значениях уровня эластазы более 45,4 нг/мл, уровня альфа 2 - макроглобулина более 6,2 нг/мл и уровня секреторного ингибитора протеиназы лейкоцитов не более 54 пг/мл диагностируют хронический эндометрит.
Способ осуществляется следующим образом. Ткань эндометрия получают путем пайпель-биопсии с использованием пайпель-катетера в объем не менее 9 куб. мм. Биоптат эндометрия трижды отмывают в физиологическом растворе, гомогенизируют и центрифугируют 15 мин при 3000-5000 об/мин. В полученном супернатанте одномоментно определяют уровень лейкоцитарной эластазы количественным методом с помощью прямого иммуноферментного анализа с использованием микропланшетного фотометра Stat Fax 4200 (США), аналитического набора Human Elastase НК 319 (BioVender, Чехия) версия 04-04 с диапазоном измерения: 0.39-25 нг/мл и чувствительностью: 0.39 нг/мл. Альфа 2 - макроглобулин определяют количественным методом с помощью прямого иммуноферментного анализа с использованием микропланшетного фотометра Stat Fax 4200 (США), аналитического набора Imunodiagnostik а 2 -Macroglobulin ELISA Kit (BioVender, Чехия) с диапазоном измерения: от 16,13 до 297,07 нг/мл. Уровень секреторного ингибитора протеиназы лейкоцитов (SLPI) определяют количественным методом с помощью прямого иммуноферментного анализа с использованием микропланшетного фотометра Stat Fax 4200 (США), аналитического набора Human SLPI НК 316 (BioVender, Чехия) с диапазоном измерения: 20-5000 пг/мл, чувствительность 20 пг/мл.
Предлагаемый способ был успешно апробирован в отделениях ГБУЗ АО «Клинический родильный дом» г. Астрахань, АО ГБУЗ АМОКБ г. Астрахань, женской консультации «Клинического родильного дома» г. Астрахани в 2020 - 2022 гг.
Обследовано 46 женщин, из которых 21 пациентка с диагнозом хронический эндометрит, невынашивание беременности в анамнезе составили основную группу исследования. В группу контроля были включены 25 практически здоровых женщины без репродуктивных потерь в анамнезе.
Результаты апробации приводятся ниже.
Пример №1
Пациентка В., 26 лет, обратилась с жалобами на тянущие боли внизу живота (ВАШ 36), периодические сукровичные выделения из половых путей. В анамнезе 2 самопроизвольных выкидыша, в 2019 году была диагностирована неразвивающаяся беременность в сроке 8 недель, после хирургического прерывания беременности путем вакуум-аспирации, осложнившаяся острым эндометритом. Проведено полное клинико-лабораторное обследование согласно приказа МЗ РФ от 20.10.2020 №1130н "Об утверждении Порядка оказания медицинской помощи по профилю "акушерство и гинекология". При осмотре по данным УЗИ, эхо-признаки хронического эндометрита.
На основании данных клинико-лабораторного исследования установлен диагноз хронический эндометрит, который подтвержден патогистохимическим исследовании тканей эндометрия, где уровень белка CD 138 плазматических клеток составил до 80% поля зрения.
Произведен забор биоптата эндометрия согласно заявленной методике.
В результате были получены следующие показатели, исследуемых маркеров:
показатель уровня эластазы 69,1 нг/мл
показатель уровня альфа 2 - макроглобулина 10,2 нг/мл
показатель уровня секреторного ингибитора протеиназы лейкоцитов 34,2
пг/мл, что характерно для хронического эндометрита.
Пример №2
Пациентка С, 34 года, обратилась с жалобами периодические сукровичные выделения из половых путей, нарушение менструального цикла. В анамнезе 1 медикаментозный аборт в сроке 6 недель гестации. Проведено полное клинико-лабораторное обследование согласно приказа МЗ РФ от 20.10.2020 №1130н "Об утверждении Порядка оказания медицинской помощи по профилю "акушерство и гинекология". При осмотре по данным УЗИ, эхо-признаки полипа тела матки. Произведен забор биоптата эндометрия согласно заявленной методике.
В результате были получены следующие показатели, исследуемых маркеров:
показатель уровня эластазы 25,1 нг/мл
показатель уровня альфа 2 - макроглобулина 3,8 нг/мл
показатель уровня секреторного ингибитора протеиназы лейкоцитов 101,2 пг/мл, что не характерно для хронического эндометрита.
Патогистохимическое исследование тканей эндометрия показало уровень белка CD 138 плазматических клеток составил до 10% поля зрения. При гистероскопическом исследовании визуализировался полип тела матки, который был удален и подтвержден гистологическим исследованием.
Пример №3
Пациентка М., 41 год, обратилась с целью проведения предгравидарной подготовки к программе экстракорпарального оплодотворения. В анамнезе 1 медикаментозный аборт в сроке 10 недель гестации, дважды прерывание беременности в сроках 16 и 14 недель. В течении 6 лет бесплодие. Проведено полное клинико-лабораторное обследование согласно приказа МЗ РФ от 20.10.2020 №11 ЗОн "Об утверждении Порядка оказания медицинской помощи по профилю "акушерство и гинекология". При осмотре по данным УЗИ, эхо-признаки хронического сальпингоофорита.
Выполнена офисная гистероскопия и забор биоптата эндометрия согласно заявленной методике. По данным гистероскопии признаки хронического эндометрита. Патогистохимическое исследование тканей эндометрия показало уровень белка CD 138 плазматических клеток составил до 75% поля зрения. В результате исследования биоптата эндометрия были получены следующие показатели, исследуемых маркеров:
показатель уровня эластазы 73,3 нг/мл
показатель уровня альфа 2 - макроглобулина 9,2нг/мл
показатель уровня секреторного ингибитора протеиназы лейкоцитов 28,1 пг/мл, что характерно для хронического эндометрита.
Таким образом, заявленный способ позволяет в короткие сроки, на малом объеме биологического материала диагностировать ХЭ, а также проводить динамическое наблюдение и оценивать эффективность лечения. Комбинированный выбор маркеров из независимых патогенетических путей позволит в дальнейшем разработать персонализированный подход к лечению и профилактике ХЭ особенно у женщин с невынашиванием беременности в анамнезе.
Заявляемый способ отличается малой инвазивностью, технической простотой выполнения, является информативным и достоверным для диагностики ХЭ, легко выполним в условиях женской консультации, стационарных ЛПУ.
название | год | авторы | номер документа |
---|---|---|---|
Способ диагностики протеолитических нарушений при невынашивании беременности | 2023 |
|
RU2820653C1 |
Способ оценки имплантационной состоятельности эндометрия при повторных неудачах имплантации, ассоциированных с хроническим эндометритом | 2021 |
|
RU2746644C1 |
Способ прогнозирования эндометриопатии у женщин с репродуктивными нарушениями | 2016 |
|
RU2646473C1 |
Способ определения показаний к назначению антиоксидантной терапии при невынашивании беременности | 2022 |
|
RU2797680C1 |
СПОСОБ ОЦЕНКИ ГОТОВНОСТИ ЖЕНЩИН С ХРОНИЧЕСКИМ ЭНДОМЕТРИТОМ К ЭКСТРАКОРПОРАЛЬНОМУ ОПЛОДОТВОРЕНИЮ | 2015 |
|
RU2617061C1 |
Способ прогнозирования рецидива неразвивающейся беременности у пациенток с персистентной вирусной инфекцией | 2021 |
|
RU2753582C1 |
СПОСОБ ОЦЕНКИ ЭФФЕКТИВНОСТИ ПРЕДГРАВИДАРНОЙ ПОДГОТОВКИ ЖЕНЩИН К БЕРЕМЕННОСТИ С НЕВЫНАШИВАНИЕМ ГОРМОНАЛЬНОГО ГЕНЕЗА В АНАМНЕЗЕ | 2003 |
|
RU2242009C1 |
ПРИМЕНЕНИЕ ЛИПОСОМАЛЬНОЙ ЭМУЛЬСИИ С ДИГИДРОКВЕРЦЕТИНОМ "ФЛАМЕНА" ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ ХРОНИЧЕСКИХ ЭНДОМЕТРИТОВ С АУТОИММУННЫМИ НАРУШЕНИЯМИ ПРИ БЕСПЛОДИИ | 2015 |
|
RU2622024C2 |
СПОСОБ ОЦЕНКИ ЛОКАЛЬНОГО ИММУНИТЕТА ЭНДОМЕТРИЯ | 2012 |
|
RU2519125C2 |
СПОСОБ ПРОГНОЗИРОВАНИЯ НЕРАЗВИВАЮЩЕЙСЯ БЕРЕМЕННОСТИ | 2013 |
|
RU2531084C1 |
Изобретение относится к медицине, а именно к гинекологии, и может быть использовано для диагностики хронического эндометрита путем биохимического исследования тканей. В тканях эндометрия, полученных путем пайпель-биопсии на 16-18 день менструального цикла методом иммуноферментного анализа, одномоментно определяют уровень лейкоцитарной эластазы, альфа 2-макроглобулина и уровень секреторного ингибитора протеиназы лейкоцитов. При значениях уровня эластазы более 45,4 нг/мл, уровня альфа 2-макроглобулина более 6,2 нг/мл и уровня секреторного ингибитора протеиназы лейкоцитов не более 54 пг/мл диагностируют хронический эндометрит. Способ обеспечивает возможность повышения точности и информативности диагностики хронического эндометрита у женщин с невынашиванием беременности в анамнезе на этапе предгравидарной подготовки за счет биохимического исследования тканей эндометрия. 3 пр.
Способ диагностики хронического эндометрита путем биохимического исследования тканей, отличающийся тем, что в тканях эндометрия, полученных путем пайпель-биопсии на 16-18 день менструального цикла методом иммуноферментного анализа, одномоментно определяют уровень лейкоцитарной эластазы, альфа 2-макроглобулина и уровень секреторного ингибитора протеиназы лейкоцитов, при значениях уровня эластазы более 45,4 нг/мл, уровня альфа 2-макроглобулина более 6,2 нг/мл и уровня секреторного ингибитора протеиназы лейкоцитов не более 54 пг/мл диагностируют хронический эндометрит.
Способ диагностики хронического эндометрита у женщин с бесплодием | 2022 |
|
RU2794331C1 |
СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ ХРОНИЧЕСКОГО ЭНДОМЕТРИТА У ЖЕНЩИН С АНОМАЛЬНЫМИ МАТОЧНЫМИ КРОВОТЕЧЕНИЯМИ | 2014 |
|
RU2587720C1 |
СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ ХРОНИЧЕСКОГО ЭНДОМЕТРИТА У ЖЕНЩИН В ПОСТМЕНОПАУЗАЛЬНОМ ПЕРИОДЕ | 2009 |
|
RU2404433C1 |
WO 2010069335 A2, 24.06.2010 | |||
СМИРНОВА Д.В | |||
и др | |||
Значение маркеров менструальной крови для диагностики хронического эндометрита у пациенток с бесплодием | |||
Российский вестник акушера-гинеколога | |||
Электромагнитный прерыватель | 1924 |
|
SU2023A1 |
КОЛМЫК В.А | |||
Клинико-морфологическая |
Авторы
Даты
2024-06-07—Публикация
2023-08-30—Подача