Способ определения показаний к назначению антиоксидантной терапии при невынашивании беременности Российский патент 2023 года по МПК G01N33/50 

Изобретение относится к области медицины и позволяет оценить состояние процессов свободно-радикального окисления в тканях эндометрия с целью дифференцированного назначения антиоксидантной терапии у женщин с невынашиванием беременности на этапе предгравидарной подготовки.

Исследования последних лет показали, что оксидативный стресс (ОС) на ранних сроках беременности лежит в основе патогенеза многих акушерских осложнений (Aouache R., Biquard L., Vaiman D., Miralles F. Oxidative stress in preeclampsia and placental diseases // International Journal of Molecular Sciences. 2018. Vol.19, no. 5. P.1496- 1525. dol: 10.3390/ijmsl9051496. Perrone S., Laschi E., Buonocore G. Biomarkers of oxidative stress in the fetus and in the newborn // Free Radic Biol Med. 2019. Vol.142. P. 23-31. doi: 10.1016/j.freeradbiomed.2019.03.034).

Однако изменения прооксидантно-антиоксидантного баланса в органах малого таза, могут не отражаться нарушениями в организме в целом или напротив, та или иная соматическая патология изменяет исследуемые показатели периферической крови, что не позволяет давать объективную оценку изменений, происходящих на маточном уровне. В связи с этим возникает необходимость диагностики ОС на уровне локального гомеостаза. Исследования показали, что изучение изменений, происходящих в тканях, полученных в результате диагностического выскабливания стенок полости матки и аспирации, дают большую информацию для выявления причин и адекватного лечения пациенток с невынашиванием беременности (Сидельникова В.М. «Привычная потеря беременности». - М.: Триада - X, 2002, - 304 с).

Изменения баланса прооксидантно-антиоксидантной системы с активацией процессов перекисного окисления липидов (ПОЛ) на фоне снижения антиоксидантов, обусловливают аккумуляцию продуктов свободно-радикального окисления, обладающих крайне высокой реакционной способностью, вызывающих нарушение структуры липидов, белков и нуклепротеидов (Дубинина Е.Е., Бурмистров C.O., Ходов Д.А., Поротоев И.Г. // Вопросы медицинской химии, 1995, №1, с. 24-26). Инициация ПОЛ в следствии эндогенных или экзогенных факторов, в зависимости от используемых восстановителей, может проходить по двум путям -ферментативному или исходному (НАДФН - зависимому) с высоким сродством к эндогенному железу и неферментативному (аскорбатзависимому). Ферментативный путь ПОЛ осуществляется ферментами: липоксиоксигеназы, НАДФН-зависимые микросомальные оксигеназы, циклооксигеназы. Образование перекисей по ферментативному пути осуществляется преимущественно в эндоплазматическом ретикулуме. В случае неферментативного пути аскорбиновая кислота регенерирует ионы за счет обратного восстановления Fe3⁺ до Fe²⁺, активируемым металлами с переменной валентностью. По данному пути образование перекисей липидов происходит во всех мембранных структурах. Особенность неферментативного цепного окисления в биологических мембранах заключается в том, что оно практически не происходит в отсутствие металлов с переменной валентностью, в частности ионов двухвалентного железа. Резко выраженное прооксидантное действие Fe²⁺ на ненасыщенные жирные кислоты в биологических мембранах обусловлено разложением продуктов реакции гидроперекисей, в результате которого в системе появляются новые свободные радикалы, инициирующие новые цепи окисления (Владимиров Ю.А. Арчаков А.И. Перекисное окисление липидов в биомембранах / М.: Наука, 2003. - 272 с). В результате избыточного ПОЛ образуются цитотоксичные вторичные соединения такие, как малоновый диальдегид (МДА), который используются в качестве основного маркера для оценки повреждающего воздействия ОС (Узбеков М.Г. Перекисное окисление липидов и антиоксидантные системы при психических заболеваниях. Социальная и клиническая психиатрия. - 2014. - Т. 24., №4. - С.97-103). Являясь органическим соединением, МДА быстро и легко реагирует с тиобарбитуровой кислотой (ТБК), где продуктом реакции является так называемый триметиновый комплекс, имеющий

характерную розовую окраску (λ_макс.=532 нм). Благодаря этому свойству МДА часто используется, как надежный маркèр ОС в организме.

К ферментам, защищающим клетки от воздействия активных форм кислорода, относят супероксиддисмутазу (СОД), изоферменты которой находятся в цитозоле и в митохондриях и являются первой линией защиты. В нормальных условиях у человека содержание ферментных антиоксидантов постоянно и мало зависит от пола, возраста, массы тела и других параметров (Guemori L., 1991). СОД являясь индуцируемым ферментом резко увеличивается при активации ПОЛ. Поэтому важным является не только оценка баланса между прооксидантами и антиоксидантами, но определение путей активации процессов ПОЛ, с целью персонализированного подбора антиоксидантной терапии. Однако, в настоящее время практическое использование изучаемых маркеров ОС с целью определения показаний к выбору и назначению антиоксидантной терапии и контроль за их эффективностью ограничен.

В практической медицине известен способ определения показаний для проведения антиоксидантной терапии у детей при инфекционной патологии (Иванова В.В., Говорова Л.В., Вершинина Е.Н. Патент RU 2282188 от 20.08.2006), позволяющий определять интенсивность процессов свободно-радикального окисления в иммунокомпетентных клетках крови и целенаправленно проводить лечение антиоксидантами.

Известен способ определения показания антиоксидантной терапии при лечении воспалительных заболеваний внутренних женских половых органов (Согикян А.С, Лебедева Е. А. Беляевская М.С. Патент RU 2442163 от 10.02.2012), суть которого заключается в определении хемилюминесцентным методом в относительных единицах исходных и контрольных значений показателей, характеризующих скорость протекания свободно-радикальных процессов, в организме больной. Недостатком предлагаемого метода является сложность технического исполнения, низкая специфичность и необходимость наличия дорогостоящего оборудования.

Цель предлагаемого изобретения заключается в повышении достоверности и информативности способа, позволяющего определять показания к проведению антиоксидантной терапии у женщин с невынашиванием беременности на этапе предгравидарной подготовки.

Технический результат предлагаемого изобретения достигается тем, что в тканях эндометрия, полученных путем пайпель-биопсии на 16 - 18 день менструального цикла определяют уровень малонового диальдегида при спонтанной, ферментативной и неферментативной реакции перекисного окисления липидов и показатель активности супероксиддисмутазы, при показателях уровня малонового диальдегида при спонтанной реакции перекисного окисления липидов не менее 5,72 нм/ч, при ферментативной реакции перекисного окисления липидов не менее 4,61 нм/ч, при неферментативной реакции перекисного окисления липидов не менее 13,56 нм/ч, показателя активности супероксиддисмутазы не менее 121,5 нг/мл показано назначение антиоксидантной терапии при невынашивании беременности в анамнезе.

Использование данного способа позволяет с высокой степенью точности не только определить фактор прерывания беременности, определить показания к назначению антиоксидантной терапии, но и оценить эффективность проводимого лечения. Достоверность и информативность предлагаемого способа, повышается за счет комплексной оценки биомаркеров ОС с различными патогенетическими характеристикам.

Способ осуществляется следующим образом: ткань эндометрия получают путем пайпель-биопсии с использованием пайпе ль-катетера в объем не менее 9 куб. мм. Биоптат эндометрия трижды отмывают в физиологическом растворе, гомогенизируют и центрифугируют 15 мин при 3000-5000 об/мин. В полученном супернатанте одномоментно определяют концентрацию малонового диальдегида (МДА) по способности тиобарбитуровой кислоты (ТБК) реагировать с МДА в биологических субстратах по методике И. Д. Стальной, Т.Г. Гаришвили (1977), в модификации Е.А. Строева, Е.Г. Макарова (1986): ферментативного (исходного) ПОЛ, спонтанного ПОЛ и неферментативного (аскорбатзависимого) ПОЛ, активность супероксиддисмутазы (СОД) определяют количественным методом с помощью прямого иммуноферментного анализа с использованием микропланшетного фотометра Stat Fax 4200 (США).

Результаты апробации.

Предлагаемый способ был успешно апробирован в женской консультации ГБУЗ АО «Клинический родильный дом» г. Астрахани в 2017-2021 гг.

Обследовано 46 женщин, из которых 21 пациентка с диагнозом невынашивание беременности составили основную группу исследования. В группу контроля были включены 25 практически здоровых женщины без репродуктивных потерь в анамнезе.

Результаты апробации приводятся ниже.

Пример №1

Пациентка Ф., 1985 года рождения, обратилась к врачу женской консультации 25/04/21 г. с целью предгравидарной подготовки.

Анамнез не отягощен. В анамнезе 1 срочные роды 2018 годы.

Жалоб при поступлении не предъявляет.

Менструальная и репродуктивная функции: менструации с 13 лет по 4 дня, регулярные, умеренные, цикл 28 дней. Последние менструации10/04/21 г.

Объективно:

P.V. Наружные половые органы развиты правильно, слизистая влагалища не изменена. Тело матки не увеличено плотное, безболезненное. Придатки с обеих сторон без особенностей. Параметрии свободны. Выделения -слизистые.

УЗИ органов малого таза - матка размерами 54×46×48 мм, контуры четкие, ровные, структура неоднородная. М эхо 12 мм, Правый яичник 30×21 мм, левый яичник - 18×25 мм.

Проведено полное клинико-лабораторное обследование согласно приказу МЗ РФ от 20.10.2020 №1130н "Об утверждении Порядка оказания медицинской помощи по профилю "акушерство и гинекология". Отклонений от нормы в результатах исследования не выявлено. Пациентке предложено обследование заявляемым способом.

Забор материала: ткань эндометрия из полости матки, учитывая 16 день цикла получили путем пайпель-биопсии. Работа с полученным материалом велась согласно ранее представленным методикам. В результате были получены следующие показатели, исследуемых маркеров ОС:

уровень МДА при ферментативной реакции ПОЛ равен 1,23 нмоль/ч; уровень МДА при спонтанной реакции ПОЛ равен 0,67 нмоль/ч; уровень МДА при неферментативной реакции ПОЛ равен 3,67 нмоль/ч;

показатель активности СОД равен 45,5 нг/мл

Учитывая низкий показатель уровня маркеров ОС, пациентке проводилась стандартная предгравидарная подготовка согласно клиническим рекомендациям. В дальнейшем, в 2022 году, наступившая беременность завершилась неосложненными срочными родами.

Пример №2

Пациентка Р., 1982 года рождения, обратилась к врачу женской консультации 15\10\21 г. с диагнозом:

Привычное невынашивание идиопатического генеза. Хронический салышнгоофорит в стадии ремиссии. Из анамнеза известно, что в 2015 г. и в сентябре 2021 года на сроке 8 недель выполнялось прерывание беременности в связи с гибелью плодного яйца. Пациентке проводилось обследование, направленное на выявление причин осложнения беременности, включающие генетическое исследование хориона, скрининг на инфекционный фактор, антифосфолипидный синдром, эндокринные и тромбофилические нарушения. В результате установлена идиопатическая форма невынашивания беременности. Жалоб при поступлении не предъявляет.

Менструальная и репродуктивная функции: менструации с 13 лет по 4 дня, регулярные, умеренные, цикл 30 дней. Последние менструации 10\10\21 г.

Репродуктивная функция: неразвивающаяся беременность -2

Сопутствующая патология: хронический сальпингоофорит в стадии ремиссии.

Соматический анамнез не отягощен.

Объективно:

P.V. Наружные половые органы развиты правильно, слизистая влагалища не изменена. Тело матки не увеличено плотное, безболезненное. Придатки с обеих сторон без особенностей. Параметрии свободны. Выделения -слизистые.

УЗИ органов малого таза - матка размерами 54×46×48 мм, контуры четкие, ровные, структура неоднородная. М эхо 5 мм, Правый яичник 30×21 мм, левый яичник - 18×25 мм.

Проведено полное клинико-лабораторное обследование согласно приказа МЗ РФ от 20.10.2020 №1130н "Об утверждении Порядка оказания медицинской помогли по профилю "акушерство и гинекология". Отклонений от нормы в результатах исследования не выявлено. Пациентке предложено обследование заявляемым способом.

Забор материала: ткань эндометрия из полости матки на 16 день менструального цикла. Работа с полученным материалом велась согласно ранее представленным методикам. В результате были получены следующие показатели, исследуемых маркеров ОС:

уровень МДА при ферментативной реакции ПОЛ равен 4,61 нмоль/ч; уровень МДА при спонтанной реакции ПОЛ равен 5,72 нмоль/ч; уровень МДА при неферментативной реакции ПОЛ равен 13,56 нмоль/ч; показатель активности СОД равен 121,5 нг/мл Уровень маркеров свидетельствовал о развитии ОС.

Пациентке проводилась предгравидарная подготовка с учетом выявленных нарушений, путем назначения антиоксидантов в комбинации альфа - токоферола ацетата (300 мг в сутки), ретинола 10000 МЕ/сутки и аскорбиновой кислоты 0,3 грамма в сутки в течении 14 дней, курсом 2 месяца. После проведенной терапии вновь проводили исследование эндометрия, заявленным способом.

При достижении показателя уровня МДА при ферментативной реакции ПОЛ равном 1,8 нмоль/ч; МДА при спонтанной реакции ПОЛ равном 0,28 нмоль/ч; МДА при неферментативной реакции ПОЛ равном 3,2 нмоль/ч, показателя активности СОД равном 21,5 нг/мл было предложено планировать беременность согласно клиническим рекомендациям. В результате наступила беременность, которая в августе 2022 года завершилась срочными родами.

Пример №3

Пациентка Б., 1991 года рождения, обратилась к врачу женской консультации 01\01\22 г. с диагнозом: Привычное невынашивание.

Хронический сальпингоофорит в стадии ремиссии с целью предгравидарной подготовки.

Из анамнеза известно, что в 2017 г., 2019, 2021 года самопроизвольный выкидыш на сроках 6,7 и 9 недель. Пациентке проводилось обследование, направленное на выявление причины осложнения, включающие генетическое исследование хориона, скрининг на инфекционный фактор, антифосфолипидный синдром и тромбофилические и эндокринные нарушения. В результате установлена идиопатическая форма невынашивания беременности.

Жалоб при поступлении не предъявляет.

Менструальная и репродуктивная функции: менструации с 11 лет по 7 дней,

регулярные, умеренные, цикл 30 дней. Последние менструации 23/12/21 г.

Репродуктивная функция: самопроизвольный выкидыш -3

Сопутствующая патология: хронический сальпингоофорит в стадии ремиссии.

Соматический анамнез не отягощен.

Объективно:

P.V. Наружные половые органы развиты правильно, слизистая влагалища не изменена. Тело матки не увеличено плотное, безболезненное. Придатки с обеих сторон без особенностей. Параметрии свободны. Выделения из половых путей слизистые.

УЗИ органов малого таза - матка размерами 51×42×40 мм, контуры четкие, ровные, структура неоднородная. М эхо 7 мм, Правый яичник 35×24 мм, левый яичник - 28×25 мм.

Проведено полное клинико-лабораторное обследование согласно приказу МЗ РФ от 20.10.2020 №1130н "Об утверждении Порядка оказания медицинской помощи по профилю "акушерство и гинекология". Отклонений от нормы в результатах исследования не выявлено. Пациентке предложено обследование заявляемым способом.

Забор материала: ткань эндометрия из полости матки на 16 день менструального цикла. Работа с полученным материалом велась согласно ранее представленным методикам. В результате были получены следующие показатели, исследуемых маркеров:

Показатель уровня МДА при ферментативной реакции ПОЛ равен 8,9 нмоль/ч; уровень МДА при спонтанной реакции ПОЛ равен 7,2 нмоль/ч; уровень МДА при неферментативной реакции ПОЛ равен 21,5 нмоль/ч Показатель активности СОД 301 нг/мл

Пациентке проводилась предгравидарная подготовка с учетом выявленных нарушений, путем назначения антиоксидантов в комбинации альфа -токоферола ацетата (300 мг в сутки), ретинола 10000 МЕ\сутки и аскорбиновой кислоты 0,3 грамма в сутки в течении 14 дней, курсом 2 месяца. После проводимой антиоксидантной терапии вновь проводили исследование ткани эндометрия заявленным способом.

Показатель уровня МДА при ферментативной реакции ПОЛ 5,2 нмоль/ч; уровня МДА при спонтанной реакции ПОЛ 6,1 нмоль/ч; уровня МДА при неферментативной реакции ПОЛ равен 13,8 нмоль/ч

Показатель активности СОД 105,9 нг/мл, пациентке было предложено повторный курс подготовки с применением антиоксидатной терапии, от которого она отказалась. В результате наступила беременность, которая в сроке 8 недель гестации завершилась самопроизвольным выкидышем.

Таким образом, предлагаемое изобретение позволяет выявлять нарушения баланса прооксидантной - антиоксидантной системы в тканях эндометрия и определять показания для проведения антиоксидантной терапии у женщин с невынашиванием беременности, в том числе идиопатического генеза на этапе предгравидарной подготовки, проводить оценку и эффективность антиоксидантной терапии, что позволит улучшить репродуктивные исходы. Такой персонализированный подход поможет определить эффективную стратегию ведения пациенток с невынашиванием беременности, с том числе идиопатического генеза в анамнезе.

Заявляемый способ отличается малой инвазивностью, технической простотой, доступностью выполнения в условиях женской консультации, стационарных ЛПУ.

Изобретение относится к медицине, а именно к акушерству, гинекологии и репродуктологии, и может быть использовано для определения показаний к назначению антиоксидантной терапии у женщин с невынашиванием беременности. В тканях эндометрия, полученных путем пайпель-биопсии на 16-18 день менструального цикла, определяют уровень малонового диальдегида при спонтанной, ферментативной и неферментативной реакции перекисного окисления липидов и показатель активности супероксиддисмутазы. При показателях уровня малонового диальдегида при спонтанной реакции перекисного окисления липидов не менее 5,72 нм/ч, при ферментативной реакции перекисного окисления липидов не менее 4,61 нм/ч, при неферментативной реакции перекисного окисления липидов не менее 13,56 нм/ч, при показателе активности супероксиддисмутазы не менее 121,5 нг/мл показано назначение антиоксидантной терапии при невынашивании беременности в анамнезе. Способ позволяет определить показания к проведению антиоксидантной терапии у женщин с невынашиванием беременности на этапе предгравидарной подготовки за счет оценки совокупности наиболее значимых показателей. 3 пр.

Способ определения показаний к назначению антиоксидантной терапии при невынашивании беременности, заключающийся в том, что в тканях эндометрия, полученных путем пайпель-биопсии на 16-18 день менструального цикла, определяют уровень малонового диальдегида при спонтанной, ферментативной и неферментативной реакции перекисного окисления липидов и показатель активности супероксиддисмутазы, при показателях уровня малонового диальдегида при спонтанной реакции перекисного окисления липидов не менее 5,72 нмоль/ч, при ферментативной реакции перекисного окисления липидов не менее 4,61 нмоль/ч, при неферментативной реакции перекисного окисления липидов не менее 13,56 нмоль/ч, при показателе активности супероксиддимутазы не менее 121,5 нг/мл показано назначение антиоксидантной терапии при невынашивании беременности в анамнезе.