СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ВЛИЯНИЯ КРОВООСТАНАВЛИВАЮЩИХ СРЕДСТВ НА ОБРАЗОВАНИЕ СГУСТКА КРОВИ Российский патент 2024 года по МПК G01N33/86 G01N1/30 

Изобретение относится к медицине, а именно к изучению влияния кровоостанавливающих средств на образование сгустка крови.

Наиболее близким к предлагаемому способу является «Способ сравнительного изучения влияния хирургических материалов на процесс образования сгустка крови in vitro» (Патент РФ № 2700165 C1 от 10.07.2018). Способ заключается в том, что для оценки гемостатических свойств кровоостанавливающих средств используется метод электрокоагулометрии после рекальцификации донорской крови. Основными недостатками предлагаемого способа является отсутствие возможности оценки гемостатической эффективности кровоостанавливающего средства в виде порошка, в которую путем измельчения можно перевести любую твердую форму гемостатического средства: губку, мембрану и т.д. Помимо этого, описанный способ позволяет оценить влияние тестируемых средств на образование сгустка крови засчет совокупности физико-механических характеристик (величина пор кровоостанавливающей губки, соотношения строма-поры и т.д.) и химического компонента (состава губки). Это не позволяет оценить гемостатические свойства отдельных компонентов средства для дальнейшей его доработки.

Техническим результатом изобретения является разработка способа изучения влияния кровоостанавливающих средств в форме порошков (в которую могут быть переведены все твердые формы гемостатических средств) на образование сгустка крови, обладающего технической простотой, высокой точностью, возможностью использования для объективной оценки гемостатической активности твердых видов кровоостанавливающих средств, с разным химическим составом.

Технический результат достигается тем, что для изучения влияния кровоостанавливающих средств на образование сгустка крови используется метод электрокоагулометрии стабилизированной раствором цитрата натрия донорской крови, рекальцифицированной для активации процессов коагуляции, а в качестве объекта исследования выступает предварительно измельченный до состояния порошка образец кровоостанавливающего средства или собственно порошкообразное кровоостанавливающее средство.

Способ осуществляется следующим образом

В стерильных условиях кровь доноров-добровольцев с их письменного согласия, соблюдая правила асептики и антисептики, для исследования забирают из локтевой вены в вакутайнер, содержащий 3,2% раствор цитрата натрия – Na₃C₆H₅O₇. Соотношение объемов крови и цитрата натрия – 9:1. Перемешивание крови с антикоагулянтом производят аккуратным переворачиванием вакутайнера 3 раза.

На аналитических весах предварительно взвешивают исследуемое порошкообразное гемостатическое средства или предварительно измельченную до состояния порошка твердую форму кровоостанавливающего средства. Соотношение массы крови и тестируемого образца – 1:650, такая масса порошкообразного кровоостанавливающего средства не влияет на вязкость крови и не вызывает образования сгустка в пробирке. Переносят из вакутайнера кровь донора в мерный стеклянный стакан, который затем помещают на платформу магнитной мешалки. После чего в него постепенно течение 30 секунд засыпают указанную массу тестируемого порошкообразного кровоостанавливающего средства для наиболее полного контакта всех его частиц с кровью донора, перемешивают в течение 3-х минут при 1000 об/мин.

В кювету коагулометра помещают стальной шарик, добавляют с помощью микропипетки 100 мкл тромбопластин-кальциевой смеси для рекальцификации стабилизированной цитратом крови, после чего сюда же вносят 100 мкл цитратной крови донора, смешанной с исследуемым порошкообразным кровоостанавливающим средством или предварительно измельченной до состояния порошка твердой формой кровоостанавливающего средства.

Запуск таймера коагулометра производят вручную или автоматически (в зависимости от модели аппарата). Образование сгустка фиксирует коагулометр по остановке движущегося в исследуемой пробе стального шарика. За время образования сгустка в исследуемой пробе принимают промежуток времени с момента рекальцификации до момента остановки шарика. Момент остановки шарика электрокоагулометр определяет механическим способом по обработанному микропроцессорной схемой сигналу с датчика, который возникает при изменении реологических свойств пробы. О влиянии порошкообразного кровоостанавливающего средства на процесс образования сгустка крови судят по разнице изменения времени свертывания в исследуемой и контрольной пробе.

Пример конкретного использования

Исследование проводили под наблюдением регионального этического комитета при ФГБОУ ВО КГМУ Минздрава России согласно действующим международным этическим нормам. Каждый донор-доброволец подписывал информированное добровольное согласие на медицинское вмешательство. В стерильных условиях операционного блока лаборатории экспериментальной хирургии и онкологии научно-исследовательского института экспериментальной медицины ФГБОУ ВО КГМУ Минздрава России в утренние часы, натощак у 10 здоровых доноров-добровольцев (юноши 20-23 лет), не имеющих в анамнезе патологии системы гемостаза забирали кровь из кубитальной вены 4,2 мл.

Предварительно взвешивали 0,006 г (соотношение массы пробирки крови и тестируемого образца – 1:650) исследуемого порошкообразного кровоостанавливающего средства собственного производства с разной химической основой. Переносили из вакутайнера кровь донора в мерный стеклянный стакан, который затем помещали на платформу магнитной мешалки (RH basic 2 IKAMAG, IKA, Германия), постепенно засыпали указанную массу порошка для полного контакта частиц порошка с кровью в течение 30 секунд, перемешивали в течение 3-х минут при 1000 об/мин. В кювету коагулометра АПГ2-02-П (производитель – ООО ЭМКО, г. Москва, Россия) помещали стальной шарик, добавляли с помощью микропипетки 100 мкл тромбопластин-кальциевой смеси (реагент для определения протромбинового времени, кампании НПО «Ренам», Россия) для рекальцификации стабилизированной цитратом крови, после чего сюда же вносили 100 мкл цитратной крови, смешанной с исследуемым образцом порошкообразного кровоостанавливающего средства. Запуск таймера (время начала исследования) производили вручную.

Исследования проводили в следующих группах:

⎯ контрольная: исследуемые образцы порошкообразных кровоостанавливающих средств не вносили в кювету коагулометра;

⎯ первая экспериментальная группа: измельченная до состояния порошка губка кровоостанавливающая на основе натриевой соли карбоксиметиллцеллюлозы (Na-КМЦ) с добавлением 15% коллагена от массы Na-КМЦ;

⎯ вторая экспериментальная группа: измельченная до состояния порошка губка кровоостанавливающая на основе Na-КМЦ с добавлением 25% коллагена от массы Na-КМЦ;

⎯ третья экспериментальная группа: измельченная до состояния порошка губка кровоостанавливающая на основе Na-КМЦ с добавлением 50% коллагена от массы Na-КМЦ.

С кровью каждого донора производили по пять опытов согласно количеству экспериментальных групп. В каждой экспериментальной группе выполняли по 10 коагулометрических исследований (согласно числу доноров). Каждое исследование включало в себя оценку времени свертывания в двух кюветах коагулометра одновременно согласно правилам выполнения подобных тестов.

Согласно полученным результатам исследования, которые представлены в таблице, можно сделать вывод о том, что наибольшее значение среднего времени свертывания крови характерно для первой экспериментальной группы – 13,68 секунд, наименьшее – для второй экспериментальной группы – 12,82 секунд, для третьей – 13,425 секунд против значений контрольной группы – 15,795 секунд. Среднее время свертывания крови в 1 экспериментальной группе на 2,115 сек меньше, чем в контрольной, а во 2 экспериментальной группе на 2,975 сек меньше по сравнению с контрольной группой, в 3 – 2,37 сек. Указанные различия были статистически значимы (р≤0,05). Таким образом, время свертывания крови изменяется при внесении в кровь порошкообразных кровоостанавливающих средств.

Время свертывания (t), сек. № Контрольная группа Группа № 1 Группа № 2 Группа № 3 М 15,795 13,68 12,82 13,4 Ме 15,675 13,45 13,05 13,425 0,25-квантиль 14,96 12,06 10,74 12,33 0,75-квантиль 16,29 15,5 14,78 14,45 p - р₁ = 0,07 р₂ = 0,004* р₃ = 0,011*

Примечание: * – статистически значимые значения (p≤0,05);

р₁ – достоверность отличий значений группы № 1 и группы № 2;

р₂ ‒ достоверность отличий значений группы № 1 и группы № 3;

р₃ – достоверность отличий значений группы № 1 и группы № 4;

Таким образом, разработан способ изучения влияния кровоостанавливающих средств на образование сгустка крови, обладающего технической простотой, высокой точностью, возможностью использования для объективной оценки гемостатической активности твердых видов кровоостанавливающих средств, с разным химическим составом).

Изобретение относится к медицине, а именно к гематологии, и может быть использовано для определения влияния кровоостанавливающих средств на образование сгустка крови. Проводят определение времени свертывания рекальцифицированной донорской крови методом электрокоагулометрии. В качестве объекта исследования используют порошкообразные кровоостанавливающие средства или предварительно измельченные твердые формы кровоостанавливающих средств, соотношение массы тестируемого образца и массы крови с учетом массы пробирки 1:650, которые помещают в стеклянный стакан со стабилизированной цитратом кровью донора и перемешивают с помощью магнитной мешалки. В кювету коагулометра помещают стальной шарик, добавляют с помощью микропипетки 100 мкл тромбопластинкальциевой смеси для рекальцификации стабилизированной цитратом крови. Сюда же вносят 100 мкл цитратной крови, смешанной с исследуемым средством. Регистрируют время свертывания крови в соответствии с инструкцией к коагулометру. Способ обеспечивает возможность изучения влияния кровоостанавливающих средств в форме порошков, в которую могут быть переведены все твердые формы гемостатических средств, на образование сгустка крови, обладающего технической простотой, высокой точностью, возможностью использования для объективной оценки гемостатической активности твердых видов кровоостанавливающих средств с разным химическим составом, за счет использования метода электрокоагулометрии стабилизированной раствором цитрата натрия донорской крови, рекальцифицированной для активации процессов коагуляции, а в качестве объекта исследования выступает предварительно измельченный до состояния порошка образец кровоостанавливающего средства или собственно порошкообразное кровоостанавливающее средство. 1 табл., 1 пр.

Способ определения влияния кровоостанавливающих средств на образование сгустка крови, включающий определение времени свертывания рекальцифицированной донорской крови методом электрокоагулометрии, отличающийся тем, что в качестве объекта исследования используют порошкообразные кровоостанавливающие средства или предварительно измельченные твердые формы кровоостанавливающих средств, соотношение массы тестируемого образца и массы крови с учетом массы пробирки 1:650, которые помещают в стеклянный стакан со стабилизированной цитратом кровью донора и перемешивают с помощью магнитной мешалки, после чего в кювету коагулометра помещают стальной шарик, добавляют с помощью микропипетки 100 мкл тромбопластинкальциевой смеси для рекальцификации стабилизированной цитратом крови, а затем сюда же вносят 100 мкл цитратной крови, смешанной с исследуемым средством, а затем регистрируют время свертывания крови в соответствии с инструкцией к коагулометру.