Способ определения содержания толперизона гидрохлорида в твердой дозированной лекарственной форме Российский патент 2024 года по МПК G01N33/15 

Изобретение относится к анализу органических химических соединений, а именно к способам количественного определения препаратов, содержащих толперизона гидрохлорида, используемым для контроля качества продукции, выпускаемой фармацевтическими производствами и изготавливаемой в аптеках, в частности для определения толперизона гидрохлорида в фармацевтической субстанции и препаратах (твердой дозированной форме).

Толперизон гидрохлорид (ТГХ) (2-метил-1-(4-метилфенил)-3-(1-пиперидил)пропан-1-он гидрохлорид) обладает уникальным свойством подавлять моно- и полисиннаптические рефлексы на уровне спинного мозга, обеспечивая релаксацию при отсутствии сопутствующей седации, не вызывая нарушения координации, спутанности сознания или явлений абстиненции [N. R. Pai, S. S. Sawant Development and validation of rp-hplc method for determining impurity profiling fortolperisone hydrochloride in tablet dosage form. J. Curr. Chem. Pharm. Sci. Vol. 3(4): 243-254, 2013]. Его миорелаксирующий эффект обеспечивается не только блокированием Na-АТФазы, но и посредством ограничения входа Са²⁺ через потенциалзависимые кальциевые каналы [М. Л. Кукушкин Результаты рандомизированного двойного слепого параллельного исследования эффективности и безопасности применения толперизона у пациентов с острой неспецифической болью в нижней части спины / М. Л. Кукушкин, В. Б. Брылев, Н. С. Ласков и др. // Журнал неврологии и психиатрии. № 117(11): 69-78, 2017; J.W. Bae, Y.S. Park, U. D. Sohn, C. S. Myung, B. K. Ryu, C. G. Jang, S. Y. Lee HPLC determination of tolperisone in human plasma. Arch Pharm Res. Vol. 29(4): 339-342, 2006; М.Л. Кукушкин Современный взгляд на механизм действия Мидокалма^®. Лечебное дело. № 2(30): 7-12, 2013], а проведенные клинические исследования [R. Kohne-Volland Клиническое исследование Мидокалма (толперизона гидрохлорида) / Качественная клиническая практика №1: 29-39, 2002]. Не смотря, на то, что в ТГХ внесен в реестр лекарственных средств Японии и Кореи [Q. K. Truong, X. L. Mai, D. H. Kim, J. K. Kim, J. S. Kang, M. H. Woo, D. H. Na, I. K. Chun, K. H. Kim Determination of the quantity of tolperisone hydrochloride in tablets by high performance liquid chromatography. J. Anal. Sci. & Tech. Vol. 30(1): 32-38, 2017, https://doi.org/10.5806/AST.2017.30.1.32; N.R. Pai, S.S. Sawant Development and validation of rp-hplc method for determining impurity profiling fortolperisone hydrochloride in tablet dosage form. J. Curr. Chem. Pharm. Sci. Vol. 3(4): 243-254, 2013; I. C. Nimila, P. Balan, N. Chiranjeevi, V. V. V. M. Kumar Development and validation of a reverse phase hplc method of simultaneous estimation of tolperisone hydrochloride and paracetamol in tablet dosage form. In. J. Pharm. and Pharm. Sci., Vol. 4(5), 84-88 (2012)] в Российской Федерации нет нормативных документов (ОФС), регламентирующих его содержание в лекарственных средствах (ЛС).

Согласно JP XV количественное определение ТГХ в таблетированной форме основанное на его ацидиметрическом титрование (потенциометрическое титрование) в неводной среде имеет ряд недостатков, среди которых следует выделить низкую селективность и длительность единичного определения, за счет необходимости проведения предварительной пробоподготовки [Q. K. Truong, X. L. Mai, D. H. Kim, J. K. Kim, J. S. Kang, M. H. Woo, D. H. Na, I. K. Chun, K. H. Kim Determination of the quantity of tolperisone hydrochloride in tablets by high performance liquid chromatography. J. Anal. Sci. & Tech. Vol. 30(1): 32-38, 2017, https://doi.org/10.5806/AST.2017.30.1.32; N. R. Pai, S. S. Sawant Development and validation of rp-hplc method for determining impurity profiling fortolperisone hydrochloride in tablet dosage form. J. Curr. Chem. Pharm. Sci. Vol. 3(4): 243-254, 2013; I. C. Nimila, P. Balan, N. Chiranjeevi, V. V. V. M. Kumar Development and validation of a reverse phase hplc method of simultaneous estimation of tolperisone hydrochloride and paracetamol in tablet dosage form. In. J. Pharm. and Pharm. Sci., Vol. 4(5), 84-88 (2012)].

Известен метод высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) в сочетание с УФ-детектированием при 260 нм, позволяющий оценивать содержание ТГХ в таблетировании форме в присутствие винилкетона [R. Pai, S. S. Sawant Development and validation of rp-hplc method for determining impurity profiling fortolperisone hydrochloride in tablet dosage form nandini J. Curr. Chem. Pharm. Sc. Vol. 3(4): 243-254, 2013]. Разделение компонентов препарата проводили на колонке Oyster ODS (300 x 4,6 мм, 5 мкм) в изократическом режиме смесью, состоящей из цитратно-фосфатного буферного раствора (рН 2,5) и ацетонитрила (45 : 55 % об./об.). Использование смеси 45 % метанола, 1 % ледяной уксусной кислоты и 0,05 % 1-гексансульфоновой кислоты в качестве подвижной фазы позволяет контролировать содержание ТГХ по внутреннему стандарту (хлорфенезин) в плазме крови на уровне 10 нг/мл [J. W. Bae, Y. S. Park, U. D. Sohn, C. S. Myung, B. K. Ryu, C. G. Jang, S. Y. Lee HPLC determination of tolperisone in human plasma. Arch Pharm Res Vol 29(4): 339-342, 2006]. Незначительное закисление подвижной фазы до 3,0 и разделение компонентов на колонке С18 в изократическом режиме смесью метанол : ацетонитрил : вода (60:30:10 об./об./об.) сопровождается батохромным сдвигом спектра поглощения (275 нм) позволяет снизить ПКО до 1 мкг/мл [N. R. Gohel, B. K. Patel, V. K. Parmar Chemometrics-assisted UV spectrophotometric and RP-HPLC methods for the simultaneous determination of tolperisone hydrochloride and diclofenac sodium in their combined pharmaceutical formulation. Sci. Pharm. Vol. 81(4): 983-1002, 2013, https://doi.org/10.3797/scipharm.1306-01 ]. Изменение состава подвижной фазы (ацетонитрила : вода (40 : 60 об./об.) (рН 3,0)) и разделение аналита на аналитической колонке Symmetry C18 позволяет проводить определение ТГХ в комбинации с парацетамолом [I. C. Nimila, P. Balan, N. Chiranjeevi, V. V. V. M. Kumar Development and validation of a reverse phase hplc method of simultaneous estimation of tolperisone hydrochloride and paracetamol in tablet dosage form. Int. J. Pharm. and Pharmac. Sci. Vol 4(5): 2012.]. Содержание действующего компонента оценивалось УФ-спектрометрически при 258 нм (изобестическая точка). Проводить совместное определение ТГХ и диклофенака натрия позволяет методика ОФ ВЭЖХ, где селективность достигалась пропусканием аналитической формы через колонку Agilent C 18 с последующим элюированием в изократическом режиме смесью ацетонитрила : фосфатного буферного раствора (рН 3,0) [G. Kumaraswamy, V. Swapna, D. S. Kumar RP-HPLC method for simultaneous determination of tolperisone hcl and diclofenac sodium in pharmaceutical dosage form. SOJ Pharm. & Pharmaceut. Sci. Vol. 4: 1-6, 2017, DOI:10.15226/2374-6866/4/3/00162]. Известна методика, где разделение компонентов проводилось на колонке Spherisorb ODS в изократическом режиме с использованием 5,5% триэтиламина в ацетонитрильно-водной среде (70 : 30), с последующей идентификацией и количественным определением при 254 нм, позволяющая снизить предел его обнаружения до 0,2 нг [S. Liawruangrath, B. Liawruangrath, P. Pibool Simultaneous determination of tolperisone and lidocaine by high performance liquid chromatography. J. Pharm. Biomed. Anal. Vol. 26(5-6):865-72, 2001, DOI: 10.1016/s0731-7085(01)00462-9.]. В варианте, разработанном авторами [M. J. Patel, R. Badmanaban, C. N. Patel Reversed phase-high performance liquid chromatographic method for simultaneous estimation of tolperisone hydrochloride and etodolac in a combined fixed dose oral formulations. Pharm. Methods. Vol. 2(2): 124–129, 2011, DOI: 10.4103/2229-4708.84458] разделение ТГХ и этодолака проводили на колонке Phenomenax С-18 в изократическом режиме смесью фосфатного буферного раствора (рН 5,5) : метанола : ацетонитрила : триэтиламина (40:40:20:1,5 об./об./об./об.) с последующим количественным определением УФ-детектором при 257 нм. Известен вариант ОФ-ВЭЖХ в сочетание с УФ-детектированием ТГХ при 261 нм, в котором разделение анализируемой смеси проводили на колонке С 18 SunFire в изократическом режиме смесью метанола и 1,0 % триэтиламина (рН 7,5) (60 : 40 об./об.), позволяющий определять действующее вещество в таблетированной форме и фармацевтической субстанции [U. K. Chhalotiya, K. K. Bhatt, D. A. Shah, S. L. Baldania, S. B. Patel Development of stability indicating lc method for the estimation of tolperisone in bulk and pharmaceutical dosage form. J Ap. Chem. Vol. 2013: 7, 2013, http://dx.doi.org/10.1155/2013/352984]. Известен вариант мицеллярной жидкостной хроматографии в сочетании с диодно-матричным детектированием при 210 нм, в котором разделение компонентов лекарственной формы (ТГХ, лидокаина гидрохлорид) проводилось на колонке С 18 додецилсульфатом натрия с небольшим содержанием изопропанола [N. Youngvises, B. Liawruangrath, S.Liaewruangrath Simultaneous micellar LC determination of lidocaine and tolperisone. J. Pharmac. Biomed. Anal. Vol. 31: 629-38, 2003, DOI: 10.1016/S0731-7085(02)00693-3.]. Возможности вышерассмотренным методик в первую очередь ограничиваются применением дорогостоящего оборудования, внутренних стандартов и реагентов особой степени очистки, что не всегда приемлемо при выполнении рутинного анализа.

Известна УФ-спектрофотометрическая методика в сочетание с хемометрическим подходом (классический метод наименьших или частичных наименьших квадратов, метод регрессии главных компонентов) обработки перекрывающихся спектров препаратов в спектральном диапазоне 220-280 нм позволяющая оценить содержание ТГХ в комбинации с парацетамолом [U. H. Ankita H. Jasani Chemometric assisted spectrophotometric methods for simultaneous determination of paracetamol and tolperisone hydrochloride in pharmaceutical dosage form. Euras. J. Anal. Chem. Vol. 12(3):211-222, 2017, DOI 10.12973/ejac.2017.00164a]. В исследование авторов [R. Badmanaban, M. J. Patel, C. N. Patel Estimation of tolperisone hydrochloride and etodolac in combined dosage form by UV-spectrophotometric methods. J. Pharm. and Tech. Vol. 4(7): 1151-1153б 2011.] в основу определения ТГХ легли результаты методов одновременных уравнений (содержание действующего вещества оценивалось при 256 нм) и производных первого порядка (основанный на измерение поглощения при нулевой точке пересечения другого препарата, для ТГХ- 246,7 нм). Однако рекомендованный подход достаточно сложен в исполнении, в связи, с чем все большее значение в аналитической практике приобретают хемилюминесцентные методики.

Наиболее близким к заявленному изобретению является методика УФ-спектрофотометрическая методика, основанная на измерении поглощения водного извлечения препарата при 260 нм в таблетированной форме [B. B. Koladiya, V. M.Vaghela UV spectrophotometric method: a quantitativeestimation of tolperisone hydrochloride in bulkand pharmaceutical dosage form. Int. J. Pharm. Tech. Res. Vol. 4(3): 1317-1322, 2012]. Основным ограничением рекомендованного метода является завышение результатов определения, за счет поглощения при данной длине волны основной примеси – пиперидина гидрохлорида. Введение в анализ этапа хемометрической обработки спектров или их дериватизация, рекомендованная авторами [V. K. Redasani, P. R. Patel, D. Y. Marathe, S. R. Chaudhari, A. A. Shirkhedkar, S. J. Surana A review on derivative UV-spectrophotometry analysis of drugs in pharmaceutical formulations and biological samples review J. Chil. Chem. Soc. Vol. 63(3), 2018], не только усложняет определение, увеличивает время единичного определения, но требует работы с токсичными растворителями.

Задачей настоящего изобретения является разработка экспрессного, простого, не требующего дорогостоящего оборудования и удобного автоматизированного способа определения содержания ТГХ в фармацевтической субстанции и препаратах пригодного для его использования в условиях обычной контрольно-аналитической лаборатории.

Технический результат заявленного изобретения состоит в упрощении способа определения за счет применения электрохимического (амперометрическое титрование с двумя поляризованными электродами) и способа фиксирования точки эквивалентности (в том числе за счет фотогенерации титранта, что исключает необходимость его стандартизации), повышении чувствительности определения, снижении пределов количественного определения (ПКО) и обнаружения (ПО), при сохранении показателей точности и воспроизводимости.

Технический результат достигается тем, что способ определения содержания толперизона гидрохлорида в твердой дозированной лекарственной форме включает предварительный перевод анализируемого препарата в раствор, помещение пробы анализируемого препарата, переведённую в водную фазу, вводится в поглотительную ячейку, содержащую фотогенерированный йод, полученный в результате облучения при 572 нм светодиодом желто-зеленого свечения присутствии кислорода воздуха вспомогательного раствора, содержащего 0,5 М раствор йодида калия, 0,01% раствора смеси сенсибилизаторов эозинат натрия : флуоресцеин натрия_, взятых в молярном соотношении 1:2, и ацетатный буферный раствор с рН 5,5, причем генерирование йода осуществляют со скоростью 2,9⋅10^-8 моль/с до его содержания 5,72⋅10^-6 моль, фиксирование уменьшения количества йода, осуществляемое амперометрически с двумя поляризованными электродами посредством фиксирования показаний гальванометра после стабилизации силы тока в цепи амперометрической установки, с последующим облучением поглотительного раствора при 572 нм светодиодом желто-зеленого свечения в присутствии кислорода воздуха и измерением времени генерации йода, необходимого для восполнения убыли йода до первоначального количества, и определение содержания толперизона гидрохлорида в твердой дозированной форме, осуществляемое по формулам:

по : ;

по :

где Ц.д. − цена деления установки: 2,9·10^-8 моль/мА и 1,27⋅10^-8 моль/с, рассчитанная по силе тока и времени генерации титранта соответственно; М- молярная масса ТГХ, 281,82 г/моль; − изменение силы тока с учетом постановки холостого опыта, мА; – время генерации титранта с учетом постановки холостого опыта, с; − ёмкость мерной колбы, мл; − объем аликвотной части, мл; - масса навески препарата ТГХ, г; - средняя масса таблетки, г; 3 - количество моль титранта, вступившего в реакцию.

Сущность заявленного изобретения состоит в том, что в ячейке в результате облучения при 572 нм светодиодом желто-зеленого свечения вспомогательного раствора в присутствии кислорода воздуха (предварительно генерации поглотительный раствор продували воздухом в течение 1-2 минут), содержащего в качестве сенсибилизатора смесь эозината натрия (Э-Na), флуоресцеина натрия (Ф-Na) (в молярном соотношении 1:2) протекает фотогенерация йода, содержание которого контролировалось вольтамперометрическим методом. В результате взаимодействия ТГХ с титрантом наблюдается уменьшение количества последнего в ячейке, что приводит к уменьшению силы тока в амперометрической цепи. После достижения постоянства силы тока в амперометрической цепи поглотительный раствор вновь продувают воздухом в течение 1-2 мин, облучают при 572 нм светодиодом желто-зеленого свечения и измеряют время генерации, пошедшее на восполнение убыли йода. Поглотительный раствор в ячейке заменяют после выполнения 20-30 анализов. Количество ТГХ в исследуемых образцах рассчитывают по формулам. Правильность полученных результатов контролировали методом добавок и арбитражным [N. R. Pai, S. S. Sawant Development and validation of rp-hplc method for determining impurity profiling fortolperisone hydrochloride in tablet dosage form. J. Curr. Chem. Pharm. Sci. Vol. 3(4): 243-254, 2013].

Предложенная для фотогенерации титранта смесь сенсибилизатор позволяет снизить скорость фотогенерации титранта, а, следовательно, и пределы количественного определения и обнаружения.

Предложенный способ автоматизирован, что исключает наличие визуальной ошибки, не требует дорогостоящего оборудования, что позволяет использовать его в условиях обычной контрольно-аналитической лаборатории.

Определение содержания ТГХ в фармацевтической субстанции и препаратах осуществляют следующим способом: навеску пробы, количественно переводили в жидкую фазу, путем растворения навески пробы в 10 мл 0,1 М раствора нитрата натрия, переведением образца в мерную колбу и доведением до метки деионизированной водой. Приготовленные растворы хранили при комнатной температуре не более недели.

Предварительно в поглотительную ячейку для фотохимического титрования помещают 40 мл 0,5 М раствора йодида калия, 10 мл смеси сенсибилизаторов (приготовленной из 0,01% растворов, взятых в молярном соотношении n_Э-Na : n_Ф-Na = 1:2) и 20 мл ацетатного буферного раствора (рН 5,5). Ячейку продували воздухом и облучали при 572 нм светодиодом желто-зеленого свечения в течение 1- 2 минут. Йод генерируют со скоростью 2,9⋅10^-8 моль/с до его содержания 5,72⋅10^-6 моль (пороговое значение). После достижения порогового значения отключают источник облучения и вводят 0,1÷0,3 мл рабочего раствора. Так как содержание титранта контролируют амперометрически с двумя поляризованными электродами, взаимодействие ТГХ с последним сопровождается уменьшением количества титранта в ячейке, а, следовательно, и силы тока в амперометрической цепи. После стабилизации силы тока в цепи амперометрической установки и фиксирования показаний гальванометра, поглотительный раствор вновь облучают при 572 нм светодиодом желто-зеленого свечения, генерируя титрант, и измеряют время, необходимое для восполнения его убыли (время генерации). Один и тот же поглотительный раствор позволяет проводить 10-20 определений. Содержание ТГХ в лекарственной форме рассчитывают согласно следующим формулам:

по : ;

по :

где Ц.д. − цена деления установки: 2,9·10^-8 моль/мА и 1,27⋅10^-8 моль/с, рассчитанная по силе тока и времени генерации титранта соответственно; М- молярная масса ТГХ, 281,82 г/моль; − изменение силы тока с учетом постановки холостого опыта, мА; – время генерации титранта с учетом постановки холостого опыта, с; − ёмкость мерной колбы, мл; − объем аликвотной части, мл; - масса навески препарата ТГХ, г; - средняя масса таблетки, г; 3 - количество моль титранта, вступившего в реакцию.

Для подтверждения результатов определения ТГХ в препарате методом добавок и при исследовании влияния третьего компонента на результаты его фотохимического определения используют стандартный раствор (2 мг/мл) для получения которого навеску субстанции (0,010 г) количественно переносят в мерную колбу емкостью 50 мл, содержащую 10 мл 0,1 М раствора нитрата натрия, и доводят деионизированной водой до метки (срок хранения при комнатной температуре не более недели).

Выбор светодиода осуществляли согласно устойчивости ТГХ к исследуемому диапазону облучения, для чего его водное извлечение облучали в присутствии кислорода воздуха светодиодами в широком диапазоне спектра 360÷940 нм. Содержание ТГХ в растворе определяли согласно методике, рекомендованной [Q. K. Truong, X.L. Mai, D. H. Kim, J. K. Kim, J. S. Kang, M. H. Woo, D. H. Na, I. K. Chun, K. H. Kim Determination of the quantity of tolperisone hydrochloride in tablets by high performance liquid chromatography. J. Anal. Sci. & Tech. Vol. 30(1): 32-38, 2017, https://doi.org/10.5806/AST.2017.30.1.32]. Для определения использовали хроматограф LC 2010 Shimadzu оснащенный спектрофотометрическим детектором Shimadzu SPD-M20. Разделение проводили на аналитической колонке Oyster ODS (300 мм x 4,6 мм) смесью ацетонитрил : буфер (рН 2,5) (к 95 мл 0,1 М раствора лимонной кислоты прибавили 5 мл 0,2 М дигидрофосфата натрия, 10 г лаурилсульфата натрия и разбавили до 1000 мл деинизированной водой; до заданного значения рН доводили ортофосфорной кислотой) в объемном соотношении 55 : 45. Содержание действующего вещества контролировали при 260 нм по площади пика.

На основании полученных данных можно заключить, что в диапазоне длин волн 360÷455 нм и 617÷940 нм происходит фотоокисление (разложение) действующего вещества. Не смотря на то, что ТГХ устойчив в диапазоне длин волн 470÷590 нм дальнейшую разработку методики проводили при длине волны 572 нм, облучая раствор светодиодом желто-зеленого свечения, так как наблюдали практически 100 % выход от теоретически введенного содержания.

Известно, что на скорость фотогенерации титранта, а, следовательно, и чувствительность значительное влияние оказывает кислотность поглотительного раствора и природа сенсибилизатора. Исследование кинетики взаимодействия ТГХ с титрантом в диапазоне рН 1,52÷9,20 в присутствии 0,01 % растворов сенсибилизаторов (Э-Na, Ф-Na) проводили на фармацевтической субстанции, удовлетворяющей требованиям НД 42-11633-01. Результаты определения приведены в табл. 2.

Анализ данных результатов определения, представленных в табл. 2 позволяет установить молярное соотношение, в котором реагируют ТГХ с титрантом (:= 3,00:1,00). Согласно данным (табл. 2) наибольший выход реакции наблюдается при использовании в качестве сенсибилизатора смеси, состоящей из 0,01% растворов Э-Na и Ф-Na, взятых в молярном соотношении 1:2.

На рис. 1 приведена зависимость выхода реакции (отношение количества найденного ТГХ к теоретически введенному, %) от кислотности поглотительного раствора.

Таблица 1

Результаты устойчивости ТГХ (τ_{облучения}= 10 мин, m_ТГХ = 10 мг, n= 5, р=0,98)

Область излучения, нм 360-370 400-410 455 470 505-530 572 590 617 627 940 Найдено, мг 7,8±0,03
(3,85) 8,4±0,03
(3,57) 9,1±0,03
(3,30) 9,8±0,03
(3,06) 9,8±0,03
(3,06) 10,0±0,03
(3,00) 9,9±0,03
(3,03) 9,0±0,03
(3,33) 8,6±0,03
(3,49) 5,1±0,02
(3,92) η_{от теор} 78,0 84,0 91,0 98,0 98,0 100,0 99,0 90,0 86,0 51,0

Таблица 2.

Результаты титрования ТГХ (m_ТГХ = 10,0 мг, V_к= 50,0 мл, V_а.ч.=0,3 мл, n_ТГХ= 1,42⋅10^-7 моль, n= 5, р= 0,98, λ= 572 нм)

Сенсибилизатор Найдено по Ц.д. ·10⁸, моль/мА , мА ⋅10⁷, моль : , мг S_r, % η_{от теор.} % Ц.д. ·10⁸, моль/с , с ⋅10⁸, моль : , мг S_r, % η_{от теор.} % рН= 1,52; 1,89; 2,96 Э-Na 3,2 12,5 4,00 2,80:1,00 9,4±0,2 2,04 94,0 1,32 31,0 4,09 2,80:1,00 9,6±0,2 2,08 96,0 Ф-Na¹ 4,0 9,6 3,84 2,80:1,00 9,0±0,2 2,22 90,0 1,37 28,0 3,84 2,80:1,00 9,0±0,2 2,22 90,0 Ф-Na² 3,5 11,0 3,85 2,79:1,00 9,1±0,2 2,20 91,0 1,35 29,0 3,92 2,80:1,00 9,2±0,2 2,17 92,0 Э-Na : Ф-Na³ 3,7 10,6 3,92 2,80:1,00 9,2±0,2 2,17 92,0 1,36 28,5 3,88 2,81:1,00 9,1±0,2 2,20 91,0 Ф-Na⁴ 3,7 10,6 3,92 2,80:1,00 9,2±0,2 2,17 92,0 1,36 28,5 3,88 2,81:1,00 9,1±0,2 2,20 91,0 Э-Na : Ф-Na⁵ 3,0 14,0 4,20 2,82:1,00 9,8±0,2 2,04 98,0 1,29 32,0 4,13 2,81:1,00 9,7±0,2 2,06 97,0 рН= 3,57; 4,47; 5,09 Э-Na 3,2 12,5 4,0 2,79:1,00 9,4±0,2 2,13 94,0 1,32 31,0 4,09 2,80:1,00 9,6±0,2 2,08 96,0 Ф-Na¹ 4,1 9,5 3,90 2,83:1,00 9,1±0,2 2,20 91,0 1,38 28,0 3,86 2,80:1,00 9,1±0,2 2,20 91,0 Ф-Na² 3,6 11,0 3,96 2,81:1,00 9,3±0,2 2,15 93,0 1,36 29,5 4,01 2,80:1,00 9,4±0,2 2,13 94,0 Э-Na : Ф-Na³ 3,7 10,6 3,92 2,80:1,00 9,2±0,2 2,17 92,0 1,37 30,0 4,11 2,91:1,00 9,3±0,2 2,15 93,0 Ф-Na⁴ 3,9 10,0 3,90 2,79:1,00 9,2±0,2 2,17 92,0 1,37 29,0 3,97 2,81:1,00 9,3±0,2 2,15 93,0 Э-Na : Ф-Na⁵ 2,9 14,0 4,06 2,82:1,00 9,5±0,2 2,11 95,0 1,28 32,0 4,10 2,81:1,00 9,6±0,2 2,08 96,0 рН= 5,55; 5,42; 5,63 Э-Na 3,0 13,5 4,05 2,81:1,00 9,5±0,2 2,11 95,0 1,30 31,0 4,03 2,80:1,00 9,5±0,2 2,11 95,0 Ф-Na¹ 4,2 9,5 3,99 2,79:1,00 9,4±0,2 2,13 94,0 1,39 29,0 4,03 2,80:1,00 9,5±0,2 2,11 95,0 Ф-Na² 3,1 13,0 4,03 2,82:1,00 9,4±0,2 2,13 94,0 1,35 30,0 4,05 2,81:1,00 9,5±0,2 2,11 95,0 Э-Na : Ф-Na³ 3,7 11,0 4,07 2,79:1,00 9,6±0,2 2,08 96,0 1,37 29,5 4,04 2,81:1,00 9,5±0,2 2,11 95,0 Ф-Na⁴ 3,5 11,6 4,06 2,82:1,00 9,5±0,2 2,11 95,0 1,35 30,0 4,05 2,81:1,00 9,5±0,2 2,11 95,0 Э-Na : Ф-Na⁵ 2,9 14,5 4,21 2,81:1,00 9,9±0,2 2,02 99,0 1,27 32,5 4,13 2,81:1,00 9,7±0,2 2,06 97,0 рН= 6,03; 6,69 Э-Na 3,3 12,5 4,13 2,81:1,00 9,7±0,2 2,06 97,0 1,32 31,0 4,09 2,80:1,00 9,6±0,2 2,08 96,0 Ф-Na¹ 4,1 9,5 3,90 2,85:1,00 9,1±0,2 2,20 91,0 1,38 28,1 3,88 2,81:1,00 9,1±0,2 2,20 91,0 Ф-Na² 3,5 11,0 3,85 2,79:1,00 9,1±0,2 2,20 91,0 1,36 28,5 3,88 2,81:1,00 9,1±0,2 2,20 91,0 Э-Na : Ф-Na³ 3,7 10,5 3,89 2,82:1,00 9,1±0,2 2,20 91,0 1,37 28,0 3,84 2,80:1,00 9,0±0,2 2,22 90,0 Ф-Na⁴ 3,8 10,1 3,84 2,80:1,00 9,0±0,2 2,22 90,0 1,37 28,0 3,84 2,80:1,00 9,0±0,2 2,20 90,0 Э-Na : Ф-Na⁵ 3,0 13,6 4,08 2,79:1,00 9,6±0,2 2,08 96,0 1,30 32,1 4,17 2,80:1,00 9,8±0,2 2,04 98,0 рН= 7,38; 7,87 Э-Na 3,4 13,0 4,42 2,83:1,00 10,3±0,3 2,88 103,0 1,36 33,5 4,56 2,80:1,00 10,7±0,3 2,80 107,0 Ф-Na¹ 4,6 10,0 4,60 2,80:1,00 10,8±0,3 2,78 108,0 1,45 32,0 4,64 2,80:1,00 10,9±0,3 2,75 109,0 Ф-Na² 3,9 11,6 4,52 2,81:1,00 10,6±0,3 2,83 106,0 1,40 32,5 4,55 2,80:1,00 10,7±0,3 2,80 107,0 Э-Na : Ф-Na³ 3,9 11,5 4,49 2,81:1,00 10,5±0,3 2,86 105,0 1,39 33,0 4,59 2,80:1,00 10,8±0,3 2,78 108,0 Ф-Na⁴ 4,4 11,0 4,40 2,73:1,00 10,6±0,3 2,83 106,0 1,43 34,0 4,86 2,99:1,00 10,7±0,3 2,80 107,0 Э-Na : Ф-Na⁵ 3,4 13,5 4,59 2,80:1,00 10,8±0,3 2,78 108,0 1,35 34,0 4,59 2,80:1,00 10,8±0,3 2,78 108,0 рН= 8,12; 8,94; 9,20 Э-Na 3,9 13,0 5,07 2,80:1,00 11,9±0,3 2,52 119,0 1,41 36,0 5,08 2,81:1,00 11,9±0,3 2,52 119,0 Ф-Na¹ 5,0 10,5 5,25 2,79:1,00 12,4±0,3 2,42 124,0 1,48 34,5 5,11 2,80:1,00 12,0±0,3 2,50 120,0 Ф-Na² 4,6 11,0 5,06 2,80:1,00 11,9±0,3 2,52 119,0 1,46 35,0 5,11 2,80:1,00 12,0±0,3 2,50 120,0 Э-Na : Ф-Na³ 4,7 11,0 5,17 2,81:1,00 12,1±0,3 2,48 121,0 1,48 34,5 5,11 2,80:1,00 12,0±0,3 2,50 120,0 Ф-Na⁴ 4,8 11,5 5,52 3,00:1,00 12,1±0,3 2,48 121,0 1,47 38,0 5,59 2,99:1,00 12,3±0,3 2,44 123,0 Э-Na : Ф-Na⁵ 3,7 14,0 5,18 2,79:1,00 12,2±0,3 2,46 122,0 1,39 37,0 5,14 2,80:1,00 12,1±0,3 2,48 121,0

Примечание: ^* - содержание увеличено в 2 раза; ¹ - раствор сенсибилизатора, приготовленный согласно (патент RU 2 477 284, опубликовано: 10.03.2013 Бюл. № 7); ² - раствор сенсибилизатора, приготовленный согласно (Басова Е. М. Возможности спектрофлуориметра «Флюорат-02-панорама» в анализе смеси флуоресцентных красителей / Е. М. Басова, В. М. Иванов, О. К. Апендеева / ВЕСТН. МОСК. УН-ТА. СЕР. 2. ХИМИЯ. - 2014. - Т. 55. - № 5. - С. 281-295); ³ - раствор смеси сенсибилизаторов с молярным соотношением 1:1; ⁴ - растворы ¹ и ² в молярном соотношении 1:1; ⁵ - раствор смеси сенсибилизаторов с молярным соотношением 1:2.

На рис. 2. приведена зависимость выхода реакции (отношение количества найденного ТГХ к теоретически введенному, %) при рН: 1- 1,52; 2- 5,5; 3- 6,03; 4- 7,38 от времени выдержки.

Анализ зависимости выхода реакции окисления ТГХ от кислотности среды (рис. 2) свидетельствует о количественном протекание реакции в интервале рН 1,52÷5,50. Завышение результатов определения ТГХ по сравнению с теоретически вводимым в ячейку, в слабощелочной среде скорее связано с окислением продуктов его гидролитического разложения (рис. 1).

На основании зависимости выхода реакции окисления ТГХ (рис. 2) установлена его устойчивость в течение 30 мин в интервале рН 1,52÷5,50, что достаточно для проведения серии анализов. В данном диапазоне рН ТГХ взаимодействует с раствором йода в молярном соотношение 1 : 3. Дальнейшую разработку методики проводили при рН 5,50.

Согласно результатам титрования модельных растворов (табл. 1) установлено, что применение смеси приготовленной из 0,01% растворов, взятых в молярных соотношениях
n_Э-Na : n_Ф-Na = 1:2 в качестве сенсибилизатора в данном диапазоне облучения позволяет проводить анализ из меньших навесок, при сохранении показателей точности и воспроизводимости методики.

При определении содержания ТГХ в препарате, навеску массой 0,100 г (точная навеска, ) порошка растертых таблеток ТГХ, количественно переносили в мерную колбу емкостью 25 мл, содержащую 10 мл 0,1 М раствора нитрата натрия и доводили до метки деионизированной водой. Полученный раствор отфильтровывали, отбрасывая первые 10 мл фильтрата.

Согласно инструкции в состав препарата «Мидокалм^®» в качестве вспомогательных веществ вводят лактозу моногидрат (ЛМГ) (48,5/ 145,5 мг), крахмал кукурузный (КК) (29,77/ 89,31 мг), кремния диоксид коллоидный безводный (0,8/ 2,4 мг), лимонную кислоту моногидрат (ЛКМ) (0,73/ 2,19 мг), стеариновую кислоту (СК) (1,7/ 5,1 мг), тальк (4,5/ 13,5 мг), целлюлозу микрокристаллическую (14,0/ 42,0 мг) и оболочки: гипромеллозу (4,5/ 13,5 мг), макрогол 6000 (0,392/ 0,785 мг), титана диоксид (0,244/0,487 мг), лактозу моногидрат (0,392/ 0,785 мг) для дозировки 50 и 150 мг соответственно. При исследовании влияния третьего компонента (ЛМГ, ЛКМ, СК; выбор основывался на влияние рН поглотительного раствора) в ячейку вводили анализируемый раствор, содержащий 10,0 мг ТГХ и определенное количество данного компонента, и фиксировали изменение силы тока в цепи амперометрической установки, после его стабилизации (). Затем поглотительный раствор продували кислородом воздуха, облучали и фиксировали время генерации титранта, необходимое для восполнения его убыли в растворе (). На основании результатов титрования рассчитывали содержание ТГХ в растворе.

На основании результатов титрования установлено незначительное занижение содержания ТГХ при введении в ячейку более 5,0 ммоль ЛМГ (5,0 мл 1 М), по 3,0 ммоль Na-КМЦ и Mg-СТ (3,0 мл 1 М) (табл. 3), что превышает количеству, вводимому в препарат. Тем не менее, при выполнении серии анализов, данное влияние необходимо учитывать. Остальные компоненты таблеточной массы не мешали определению.

Таблица 3

Результаты определения ТГХ в присутствии третьего компонента (n= 7, р= 0,98)

Введено, ммоль рН Ц.д.·10⁸, моль/мА Найдено по , мг Ц.д.·10⁸, моль/с Найдено по , мг ЛМГ ЛКМ СК S_r, % η_{от теор.}, % S_r, % η_{от теор.}, % 0,000 - - 5,50 2,90 9,79±0,24 2,45 97,9 1,27 9,76±0,24 2,46 97,6 0,500 - - 5,50 2,90 9,71±0,24 2,47 97,1 1,27 9,70±0,23 2,31 97,0 1,500 - - 5,50 2,90 9,70±0,24 2,47 95,0 1,27 9,69±0,23 2,37 96,9 5,000 - - 5,49 2,91 9,64±0,24 2,49 96,4 1,28 9,65±0,23 2,38 96,5 10,000 - - 5,49 2,93 9,59±0,24 2,50 95,9 1,28 9,60±0,23 2,40 96,0 - 0,000 - 5,50 2,90 9,77±0,24 2,45 97,7 1,27 9,78±0,23 2,35 97,8 - 0,040 - 5,50 2,90 9,75±0,24 2,46 97,5 1,27 9,70±0,23 2,37 97,0 - 1,000 - 5,50 2,90 9,74±0,24 2,47 97,4 1,27 9,75±0,23 2,37 97,5 - 2,000 - 5,50 2,90 9,68±0,24 2,48 96,8 1,27 9,66±0,23 2,41 96,6 - 6,000 - 5,51 2,91 9,58±0,24 2,51 95,8 1,27 9,56±0,23 2,41 95,6 - - 0,000 5,50 2,90 9,77±0,24 2,46 97,7 1,27 9,75±0,23 2,36 97,5 - - 0,050 5,50 2,90 9,70±0,24 2,47 97,0 1,27 9,69±0,23 2,37 96,9 - - 0,100 5,50 2,90 9,67±0,24 2,48 96,7 1,27 9,70±0,24 2,47 97,0 - - 1,500 5,52 2,91 9,65±0,24 2,49 96,5 1,28 9,63±0,23 2,39 96,3 - - 3,000 5,53 2,92 9,60±0,24 2,46 96,0 1,28 9,58±0,23 2,40 95,8

Анализ данных, представленных в табл. 4, свидетельствует о сходимости результатов определения ТГХ вольтамперометрическим (по изменению силы тока и времени генерации) и арбитражным методами. Найденное содержание ТГХ (49,0÷49,9) мг входит в интервал, рекомендованный ОФС.1.4.2.0009.15 (47,5÷52,5) мг, что свидетельствует о соответствии его качества препарата требованиям, изложенным в НД.

Таблица 4

Результаты определения ТГХ в препарате «Мидокалм^®», ОАО «Гедеон Рихтер», Россия (n= 7, р= 0,98*).

Серия, срок годности, , г Введено, мг Найдено по по ¹ , мкг S_r, % в ЛФ, мг S_r, % , мкг S_r, % в ЛФ, мг S_r, % в ЛФ, мг S_r, % 1811220, до 12.2023; 0,1581 0,0 128,1±3,7 2,88 50,6±1,4 2,77 127,8±3,6 2,82 50,5±1,4 2,77 50,9±1,3 2,55 10,0 151,8±4,4 2,90 50,0±1,4 2,80 151,1±4,2 2,78 49,7±1,3 2,62 3010920, до 09.2023; 0,1579 0,0 125,7±3,7 2,94 49,6±1,4 2,82 126,2±3,6 2,85 49,8±1,3 2,1 50,5±1,3 2,57 10,0 150,6±4,4 2,92 49,5±1,4 2,83 150,6±4,2 2,79 49,5±1,3 2,63 770321, до 03.2024; 0,4912 0,0 123,3±3,7 3,00 151,5±4,1 2,71 123,1±3,4 2,76 151,1±3,8 2,51 153,0±3,5 2,29 10,0 163,7±4,5 2,75 151,0±4,1 2,72 163,6±4,0 2,44 150,9±3,8 2,52 236032, до 03.2024; 0,4903 0,0 123,3±3,7 3,00 151,2±4,1 2,71 123,6±3,4 2,75 151,5±3,8 2,51 152,4±3,5 2,30 10,0 163,7±4,5 2,75 150,6±4,1 2,72 164,1±4,4 2,68 151,2±3,8 2,51 880321, до 03.2023; 0,4915 0,0 122,2±3,7 3,03 150,1±4,1 2,73 121,5±3,4 2,80 149,3±3,8 2,55 150,3±3,5 2,33 10,0 162,5±4,5 2,77 149,6±4,1 2,74 162,6±4,0 2,46 149,7±3,8 2,54 7100621, до 06.26; 0,1357 г 0,0 123,3±3,7 3,00 151,0±4,1 2,72 123,1±3,4 2,76 150,7±3,8 2,52 152,8±3,5 2,29 10,0 163,7±4,5 2,75 150,4±4,1 2,73 164,1±4,4 2,68 151,0±3,8 2,52 7150921, до 09.26; 0,1374 г 0,0 122,2±3,7 3,03 149,0±4,1 2,75 122,6±3,4 2,77 149,5±3,8 2,54 149,8±3,5 2,34 10,0 163,7±4,5 2,75 149,6±4,1 2,74 164,1±4,4 2,68 150,2±3,8 2,53 7160921, до 09.26; 0,1415 г 0,0 122,2±3,7 3,03 150,0±4,1 2,73 121,5±3,4 2,80 149,2±3,8 2,55 151,6±3,5 2,31 10,0 162,5±4,5 2,77 149,5±4,1 2,74 162,6±4,0 2,46 149,6±3,8 2,54

Примечание: n – количество измерений; p- доверительная вероятность 98 %; установлена согласно ОФС.1.4.2.0009.15

¹– N. R. Pai, S. S. Sawant Development and validation of rp-hplc method for determining impurity profiling fortolperisone hydrochloride in tablet dosage form. J. Curr. Chem. Pharm. Sci. Vol. 3(4): 243-254, 2013.

С целью доказательства отсутствия систематической ошибки разработанной методики использовался метод добавок. Стандартный раствор ТГХ добавляли к навеске препарата «Мидокалм^®» (серия: 3010920) непосредственно в ходе его растворения (табл. 5). Согласно полученным результатам, ошибка определения в опытах с добавками не превысила относительную ошибку единичного определения предлагаемой методики и имеет отклонения в сторону как положительных, так и отрицательных значений, что свидетельствует об отсутствии систематической ошибки. Пределы обнаружения (ПО) и определения (ПКО) ТГХ рассчитаны на основании уравнений градуировочных графиков. Основные аналитические характеристики методики представлены в таблице 5.

Таблица 5

Метрологические характеристики вольтамперометрической методики определения ТГХ (р= 0,98)

Содержание (/), мг Добавка, мг Найдено ТГХ по , мА по , с мг % мг % 49,3/ 49,2 2,0 50,5 98,44 51,0 99,61 4,0 52,6 98,69 52,3 98,31 49,5/ 49,4 2,0 50,8 97,88 51,1 99,22 4,0 52,6 98,32 52,6 98,50 49,8/ 49,7 2,0 51,0 98,46 52,0 100,58 4,0 54,6 101,49 53,5 99,63 Метрологические характеристики = 98,88
= 0,5333
ε = 1,81
Δ= 1,79
S_r = 0,02 = 99,31
= 0,3401
ε = 1,15
Δ= 1,14
S_r = 0,01 Диапазон определения, мг 8,0÷20,00 Аналитическая область, мг 8,0÷20,0 Параметры линейной зависимости y= bx + a b = 1,1310
a = 0,3357
R² = 0,9971 b = 2,6250
a = 0,4500
R² = 0,9955 ПО, мг 0,57 0,57 ПКО, мг 1,73 1,74

Таким образом, разработанный способ определения содержания ТГХ в твердой дозированной лекарственной форме, основанный на переведении препарата в аналитическую форму и титровании полученного раствора фотогенерированным йодом, прост в исполнении и не требует дорогостоящего оборудования. Найденное в препаратах содержание ТГХ соответствует заявленному в нормативных документах. Рассчитанные ПО и ПКО составили 0,57 мг и (1,73; 1,74) мг по изменению силы тока и времени генерации соответственно.

Изобретение относится к анализу органических химических соединений. Раскрыт способ определения содержания толперизона гидрохлорида в твердой дозированной лекарственной форме, включающий предварительный перевод анализируемого препарата в раствор, помещение его в поглотительную ячейку, содержащую фотогенерированный йод, полученный в результате облучения при 572 нм светодиодом желто-зеленого свечения в присутствии кислорода воздуха вспомогательного раствора, содержащего 0,5 М раствор йодида калия, 0,01% раствора смеси сенсибилизаторов эозинат натрия : флуоресцеин натрия, взятых в молярном соотношении 1:2, и ацетатный буферный раствор с рН 5,5, причем генерирование йода осуществляют со скоростью 2,9⋅10^-8 моль/с до его содержания 5,72⋅10^-6 моль, фиксирование уменьшения количества йода, осуществляемое амперометрически с двумя поляризованными электродами посредством фиксирования показаний гальванометра после стабилизации силы тока в цепи амперометрической установки, с последующим облучением поглотительного раствора при 572 нм светодиодом желто-зеленого свечения в присутствии кислорода воздуха и измерением времени генерации йода, необходимого для восполнения убыли йода до первоначального количества, и определение содержания толперизона гидрохлорида в твердой дозированной лекарственной форме по математической формуле. Изобретение обеспечивает упрощение способа определения, повышение чувствительности, снижение пределов количественного определения и обнаружения при сохранении показателей точности и воспроизводимости. 2 ил., 5 табл.

Способ определения содержания толперизона гидрохлорида (ТГХ) в твердой дозированной лекарственной форме, включающий предварительный перевод анализируемого препарата в раствор, помещение его в поглотительную ячейку, содержащую фотогенерированный йод, полученный в результате облучения при 572 нм светодиодом желто-зеленого свечения в присутствии кислорода воздуха вспомогательного раствора, содержащего 0,5 М раствор йодида калия, 0,01% раствора смеси сенсибилизаторов эозинат натрия : флуоресцеин натрия, взятых в молярном соотношении 1:2, и ацетатный буферный раствор с рН 5,5, причем генерирование йода осуществляют со скоростью 2,9⋅10^-8 моль/с до его содержания 5,72⋅10^-6 моль, фиксирование уменьшения количества йода, осуществляемое амперометрически с двумя поляризованными электродами посредством фиксирования показаний гальванометра после стабилизации силы тока в цепи амперометрической установки, с последующим облучением поглотительного раствора при 572 нм светодиодом желто-зеленого свечения в присутствии кислорода воздуха и измерением времени генерации йода, необходимого для восполнения убыли йода до первоначального количества, и определение содержания толперизона гидрохлорида в твердой дозированной лекарственной форме, осуществляемое по формулам:

по : ;

по :

где Ц.д. − цена деления установки: 2,9⋅10^-8 моль/мА и 1,27⋅10^-8 моль/с, рассчитанная по силе тока и времени генерации титранта соответственно; М - молярная масса ТГХ, 281,82 г/моль; − изменение силы тока с учетом постановки холостого опыта, мА; − время генерации титранта с учетом постановки холостого опыта, с; − ёмкость мерной колбы, мл; − объем аликвотной части, мл; - масса навески препарата ТГХ, г; - средняя масса таблетки, г; 3 - количество моль титранта, вступившего в реакцию.