Косметическая активная противомикробная композиция для личной гигиены Российский патент 2024 года по МПК A61K8/18 A61K8/49 A61K8/97 A61K8/73 A61Q19/00 

Изобретение относится к медицине и фармацевтике и касается косметической активной композиции, предназначенной для личной гигиены, в основном для профилактики и лечения микробной инфекции кожи или слизистой ткани у млекопитающего, в частности бактериального вагиноза, включающего нанесение на инфицированную область указанного млекопитающего терапевтически эффективного количества  этой композиции.

Бактериальный вагиноз (БВ) является наиболее общей причиной вагинальной инфекции, известной как вагинит. Обычно он не относится к инфекциям передаваемым половым путем. Бактериальным вагинозом страдают от 20% до 70% женщин. Сильный запах и патологические выделения из влагалища являются наиболее распространенными симптомами заболевания, помимо зуда и жжения. Вагинальный кандидоз представляет собой инфекцию слизистой оболочки влагалища с участием чрезмерного роста дрожжей или грибка, известного как Candida. Этот грибок обычно присутствует в полости рта, кишечника и влагалища, как и ряд других организмов. Процесс становится патологическим и возникает чрезмерно быстрый рост, если баланс микроорганизмов нарушается, как это может произойти при принятии антибиотиков широкого спектра действия, гормональных колебаниях и при других условиях.

Вагинальный кандидоз, часто упоминается как "дрожжевая инфекция", является общей проблемой, затрагивающей около 75% взрослых женщин в течение их жизни. Также связанными с вагинальным воспалением являются С. glabrata и C. tropicalis; герпес и Streptococcus группы B. Состояния изменяются и могут ухудшаться в связи с потерей Lactobacillus spp, природного симбионта, который действует как защитный барьер в отношении условно-патогенных микроорганизмов. Поэтому использование противомикробных комплексов, описанных в настоящем документе, для подавления индикативных микроорганизмов, например, но этим не ограничиваясь, в лубрикантах, может оказывать эффективную помощь в качестве средств женской гигиены.

Заявленное изобретение касается профилактика рецидивов бактериального вагиноза (БВ), с последующим восстановлением (нормализацией) собственной микрофлоры влагалища за счет естественных процессов колонизации слизистой оболочки.

Применяются препараты, способствующие формированию адекватного рН во влагалище и восстановлению пула собственных лактобацилл. Принято считать, что основным механизмом действия препаратов для лечения бактериального вагиноза  является элиминация облигатных анаэробов и синтез  биосурфактантов и коллаген-связывающих белков, что ведет к снижению адгезии патогенных бактерий. Для эффективного лечения БВ рекомендуется использовать препараты, оказывающие протеолитическое действие, стимулирующие созревание коллагеновых структур, способных расщеплять клеточные оболочки анаэробных микроорганизмов и создаваемые ими биопленки. Для этого может быть иcпользован препарат,  содержащий комплекс биоактивных полисахаридов «3S - Фарм-Синтез». Благодаря воздействию «3S - Фарм-Синтез» комплекса полисахаридов препарат способствует блокированию механизма прикрепления патогенных бактерий, сохранению естественной микрофлоры влагалища, улучшению состояния слизистой оболочки и восстановлению оптимального рН. Снижение рН влагалища сопровождается подавлением роста анаэробных бактерий, разрушением «биопленок» и восстановлением пула собственных лактобацилл.

Причины бактериального вагиноза весьма разнообразны. К ним можно отнести как банальные нарушения интимной гигиены, так и более сложные ситуации.

К факторам, влияющим на микрофлору и способствующим возникновению болезни можно отнести:

• травмы при родах;

• различные операции на промежности;

• хирургический аборт;

• нарушения менструального цикла;

• нерациональное применение антибиотиков и даже местных антисептиков.

Для устранения бактериального вагиноза используют антисептические средства и различные комбинированные препараты. В настоящее время доказана эффективность двухэтапной схемы лечения бактериального вагиноза: первый этап заключается в применении антисептических средств, а второй — в восстановлении микрофлоры влагалища.

Существует достаточно много как зарубежных, так и российских рекомендаций и схем лечения данного заболевания. В соответствии с Евразийскими клиническими рекомендациями по рациональному применению антимикробных средств в амбулаторной практике, при устранении бактериального вагиноза следует использовать следующие препараты (https://probolezny.ru/bakterialnyy-vaginoz/):

Средства терапии первой линии:

• крем "Клиндамицин" 2 %;

• гель "Метронидазол" 0,75 %;

• "Метронидазол" 0,5 г (для приёма внутрь);

• "Орнидазол" 0,5 г (для приёма внутрь).

Средства терапии второй линии:

• свечи от бактериального вагиноза "Клиндамицин" 0,1 г;

• "Клиндамицин" 0,3 г (для приёма внутрь);

• "Метронидазол" 2,0 г (для приёма внутрь).

Продолжительность и кратность приёма этих средств определяется врачом индивидуально. Кроме того, существует значительное количество комбинированных препаратов.

Известны косметические композиции для личной гигиены, например для лечения вагинита, бактериального вагиноза включающие экстракты алоэ-вера.

Например, из патента RU 2712152, 2020.01.24 известна композиция для личной гигиены, содержащая от 2 до 40 весовых процентов активного ингредиента антиперспиранта в комбинации с экстрактом алоэ и таурином, где общее количество экстракта алоэ составляет от 0,01 до 5 весовых процентов и общее количество таурина составляет от 0,01 до 5 весовых процентов, в косметически приемлемом носителе, все в пересчете на общий вес композиции, где активный ингредиент антиперспиранта представляет собой металлсодержащий активный ингредиент антиперспиранта.

При этом, косметически приемлемый носитель содержит один или более ингредиентов, выбранных из водорастворимых спиртов; гликолей; глицеридов; органических кислот с длиной цепи от средней до длинной, спиртов и сложных эфиров; поверхностно-активных веществ; дополнительных аминокислот; структурообразователей; смягчающих веществ; отдушек и красителей. композиция представляет собой антиперспирант и/или дезодорант.

Композиция для личной гигиены представляет собой средство для мытья тела, гель для душа, брусковое мыло, очищающее средство для лица, лосьон, шампунь или кондиционер для волос. Для уничтожения бактерий, уменьшения количества пота и/или неприятного запаха тела, уменьшения раздражения на коже композицию наносят на кожу.

Экстракт алоэ представляет собой природный продукт, экстрагируемый из листьев и других частей растения алоэ вера, Aloe barbadensis Mill., или аналогичных разновидностей алоэ, которые являются общеизвестными зарослеобразующими вечнозелеными растениями-суккулентами. Экстракт алоэ, также известный как сок из листьев алоэ барбадосского, является коммерчески доступным в виде порошка от разных поставщиков, в том числе в виде высушенного сублимацией порошка алоэ вера 200:1, доступного от Mexialoe Laborotorios, S.A. de C.V., Кампаче, Мексика.

Для измерения раздражения кожи под воздействием активных ингредиентов антиперспиранта авторы настоящего изобретения проводили эксперименты in vitro с использованием моделей кожи 3D EpiDerm (модель раздражения кожи SIT 200, MatTek Corporation, Ашленд, Массачусетс 01721). In vitro образцы кожи обрабатывали местно с помощью испытуемого соединения в течение 1 часа в инкубаторе для тканевой культуры. После инкубирования образцы кожи промывали с помощью PBS и помещали в культуральную среду и продолжали инкубировать в течение 24 часов. Для количественного анализа высвобождения IL-1α собирали клеточную культуральную среду. Чем выше значение высвобождения IL-1a, тем выше потенциал раздражения. Высвобождение IL-1α анализировали с помощью набора для количественного анализа ELISA (Invitrogen, Гранд-Айленд, Нью-Йорк 14072) и (R&D Systems, Миннеаполис, Миннесота 55413).

Однако, данная композиция не предназначена для лечения таких микробных инфекций как  лечение бактериального вагиноза. 

В RU2 405 535  10.12.2010 описано средство для ухода за кожей стоп, и преимущественно направлено на профилактику возникновения и устранение трещин, сухости и шелушения кожи, грибковых заболеваний, запаха и потливости стоп, на повышение эластичности и тургора кожи, нормализацию кровоснабжения стоп. Средство представляет собой многокомпонентную композицию, включающий косметическую основу с эфтидермом, настойку календулы, эфирное масло можжевеловое, фурацилин, эфирное масло мяты, отличающийся тем, что в качестве настойки календулы используют пропиленгликолевый экстракт календулы, дополнительно он содержит масло виноградных косточек, масло жожоба, масло зародышей пшеницы, пропиленгликолевый экстракт алоэ, бисаболол, пропиленгликолевый экстракт каланхоэ, пропиленгликолевый экстракт каштана конского, пропиленгликолевый экстракт ромашки, лимонную кислоту, эфирное масло шалфея, ионы цинка и меди, витамин В2.

Пропиленгликолевый (ПГ) экстракт алоэ вера - адаптоген, уменьшает зуд, раздражение кожи, появление гнойничков и пятен, рассасывает рубцовые элементы, улучшает вид кожи. Обладает противовоспалительным, ранозаживляющим, противомикробным и рассасывающим действием.

Однако данное средство не используется в качестве средства для лечения бактериального вагиноза.

В патенте RU2 559 126  10.08.2015 описаны абсорбирующие изделия, содержащие многофункциональный гель.

Раскрываются улучшенные адгезивные по отношению к коже композиции для прикрепления подложки, такой как абсорбирующее изделие, к коже, включают косметические и фармацевтические ингредиенты, в общем применяемые в области ухода за кожей, в частности лечебные средства для лечения бактериального вагиноза , например, пантенол и его производные, алоэ вера , пантотеновая кислота и ее производные, аллантоин, бисаболол, дикалия глицирризинат Абсорбирующее изделие, содержащее непроницаемую для жидкости подложку, имеет обращенную к телу поверхность и обращенную к одежде поверхность. На обращенной к телу поверхности имеется композиция адгезивного по отношению к коже и абсорбирующего геля для прикрепления подложки непосредственно к пользователю и для абсорбции жидкостей тела. Композиция адгезивного по отношению к коже и абсорбирующего геля включает гидрогель, причем гидрогель переплетен с волокнистым материалом и отношение гидрогеля к волокнистому материалу составляет от 30:1 до 100:1. Обеспечивается повышение задержания жидкости и защита от протеканий в ходе периодов повышенной активности или движения пользователя.

В WO03055918,  2003.07.10 предлагается новая композиция вещества, включающая отрицательно заряженные полисахариды, которые могут быть получены из Алоэ вера, и способ получения этой композиции вещества субфракционированием экстракта Алоэ вера, пропусканием образовавшейся субфракции через положительно заряженную колонку и элюированием ее солью. Необязательно, Алоэ вера предварительно очищают на колонке с Сефадексом G-25.

Эта композиция вещества, а также содержащий ее экстракт, который образуется после предварительной очистки, можно использовать в качестве пищевой добавки или диетического питания, для использования в средствах личной гигиены и в косметике, особенно для предотвращения заражения Helicobacter pylori.

Таким образом, является актуальным создание средств для личной гигиены, предназначенных для лечения бактериального вагиноза.

Технической задачей заявленного изобретения является расширение арсенала антимикробных средств для личной гигиены и создание активной косметической композиции для личной гигиены для лечения микробной инфекции кожи или слизистой ткани у млекопитающего, в частности бактериального вагиноза на основе Алоэ-вера геля .

В соответствии с поставленной технической задачей техническим результатом заявленного изобретения является расширение арсенала эффективных антимикробных средств для личной гигиены на основе Алоэ-вера геля для лечения бактериального вагиноза.

Поставленная техническая задача и технический результат достигаются косметической активной противомикробной композиции для личной гигиены, включающей Алоэ-вера гель, арабиногалактан, консервант Sharomix DMР на основе смеси, включающей диазолидинил мочевину, метилпарабен, пропилпарабен, пропиленгликоль, косметический премикс продукт Гликолифт на основе смеси, включающей биосахаридную смолу-4, воду, альфа-глюкан олигосахарид, пропандиол, натрия альгинат, феноксиэтанол при следующих соотношениях косметической активной противомикробной композиции в масс.%:

Арабиногалактан - (0,97–1,03)

Вышеуказанный консервант Sharomix DMP - (0,97–1,03)

Вышеуказанный продукт Гликолифт - (48,00–51,00)

Алоэ-вера гель - остальное до 100%

Заявленная активная косметическая композиция для личной гигиены представляет собой препарат,  содержащий комплекс биоактивных полисахаридов «3S - Фарм-Синтез». Благодаря воздействию «3S - Фарм-Синтез» комплекса полисахаридов препарат способствует блокированию механизма прикрепления патогенных бактерий, сохранению естественной микрофлоры влагалища, улучшению состояния слизистой оболочки и восстановлению оптимального рН. Снижение рН влагалища сопровождается подавлением роста анаэробных бактерий, разрушением «биопленок» и восстановлением пула собственных лактобацилл.

Композиция представляет собой однородную гелеобразную массу без посторонних включений от светло-желтого до коричневого цвета.

Было проведено тестирование косметической композиции и изучено воздействие активной композиции «3S-Фарм-Синтез» для личной гигиены на изменение величины трансэпителиального электрического сопротивления кератиноцитов человека in vitro.

Носитель Наименование:

Питательная среда DMEM жидкая, с L-глутамином, глюкозой 1 г/л (5,6 мМ).

Состав на 100 мл: питательная среда DMEM жидкая, с L-глутамином, глюкозой 1 г/л (5,6 мМ) (серия ДМ1-22-10/1 HS, ООО «Биолот», Россия) – 100 мл.

Реактивы и среды.

В исследовании были использованы следующие культуральные среды, добавки, химические реактивы, а также ИФА-наборы для определения фосфорилированного рецептора инсулина и количественного определения образованного гликогена: − Эмбриональная бычья сыворотка (FBS) (HyClone, Австрия, кат. номер SV30160.XX, серия RG20210007, годен до 09.2026); − Раствор Трипсина-Версена (1:1) (ООО «Биолот», Россия, кат. номер 1.2.7.1., серия 23-03, годен до 23.03.24 при температуре -20℃); − Раствор Дальбекко (DPBS) стерильный, без Ca2+ и Mg2+ (ООО «Биолот», Россия, кат. номер 1.2.4.7, серия 22-05, годен до 28.10.2024); − Фосфатно-солевой буфер (Phosphate-Buffered Saline (PBS), Servicebio, Китай, кат. номер G4207-500 ML, лот GA230100 .

− Антибиотики: пенициллин-стрептомицин (Пенициллин G – 50000 МЕ/фл., стрептомицин – 50 мг/фл., сухой, стерильный, для культур клеток, ООО «Биолот», Россия, кат. номер 1.3.18., серия 22-01, годен до 01.02.2024); − Среда DMEM, содержащая 1 г/л (5,6 мМ) глюкозы (Набор реагентов «Питательная среда DMEM жидкая (Low Gl), с L-глутамином», ООО «Биолот», Россия, кат. номер 1.3.6, серия ДМ1-22-10/1 HS, годен до 11.10.2023); − HEPES раствор, 1М (ООО «Биолот», Россия, кат. номер 1.2.6.1, серия 22-01, годен до

18.03.2024); − Диметилсульфоксид (ДМСО, ООО «Биолот», Россия, кат. номер 1.4.7., серия 22- 04, годен до 18.11.2024); − Тиазолил серия 22- 04, годен до 18.11.2024); − Тиазолил синий тетразолий бромид (МТТ, ООО «Диаэм), Россия, кат. Номер D298931, партия 48469, годен до 05.12.2024). Информация по качеству культуральных сред, добавок, химических реактивов.

Тест-система Клеточная линия: Human Epidermal Keratinocytes (HEK) Происхождение: Клетки млекопитающих

Морфология: Эпидермальные клетки

Эпидермальные кератиноциты человека представляют собой широко распространенную модель для изучения эпителиальной функции и заболеваний, биологии кожи, токсикологии и вируса папилломы человека (ВПЧ) [4-9]. При выращивании на вставках и наличии интерфейса «жидкость/воздух» они дифференцируются в многослойный плоский эпителий, образуя физиологическую трехмерную ткань. Применение данной модели является общепринятым количественным методом измерения целостности барьера (плотность межклеточных контактов) в моделях клеточных культур эндотелиальных и эпителиальных монослоев.

Методология

Общие положения Эпидермальные кератиноциты человека (HEK) представляют собой широко распространенную модель для изучения эпителиальной функции и заболеваний, биологии кожи, токсикологии и вируса папилломы человека (ВПЧ) [4-9]. При выращивании на вставках и наличии интерфейса «жидкость/воздух» они дифференцируются в многослойный плоский эпителий, образуя физиологическую трехмерную ткань. HEK составляют 90% всех клеток эпидермиса, самого наружного слоя кожи, где они производят барьер из промежуточных кератиновых филаментов. Измерение трансэпителиального сопротивления in vitro осуществляется в лунке культурального планшета, и представляет собой разницу между сопротивлением в апикальном компартменте, сформированным монослоем клеток, выращенных на полупроницаемой мембране, и базальном компартменте, где сопротивление формируется только культуральной средой. Полупроницаемая мембрана является перегородкой для апикального (верхнего) и базолатерального (нижнего) отсеков. Пористость мембраны такова, что позволяет формировать клеточный монослой в апикальном отсеке без миграции клеток.

Измерение трансэпителиального сопротивления осуществляется с помощью ВольтОм-метра Millicell® ERS-2 (Millipore, США) с двумя электродами, один из которых помещается в верхнем отделе, а второй – в нижнем, благодаря чему электроды разделяются клеточным монослоем.

Величина трансэпителиального электрического сопротивления характеризует стабильность барьера, создаваемого межклеточными плотными контактами. Электрическое сопротивление клеточного монослоя, измеряемое в омах, является количественной мерой целостности барьера.

Данный показатель активно применяется в научных исследованиях и медицинской диагностике. Он позволяет оценить функции эпителиальных барьеров, определить их уязвимости и возможные нарушения в работе.

Культивирование клеток линии HEK: Клетки линии HEK (эпидермальные кератиноциты человека) культивировали в ростовой среде, состоящей из модифицированной по способу Дальбекко среды Игла (DMEM) с содержанием 1 г/л (5,6 мМ) глюкозы (ООО «Биолот», Россия) и антибиотиков (100 МЕ пенициллина и 100 мкг стрептомицина на 1 мл среды, ООО «Биолот», Россия) при температуре 37°С в атмосфере 5% СО2 (СО2-инкубатор Binder CB150, Binder, Германия). Культивирование проводили в пластиковых флаконах с площадью поверхности 25-225 см² . Смена среды производилась раз в 2-3 дня. Клетки субкультивировались по достижении ими 70-80% монослоя. Конфлюэнтность монослоя оценивали с использованием инвертированного микроскопа «Микромед-И» (ООО «ЛОМО-Элтем», Россия). Для постановки экспериментов клетки диссоциировали путем инкубации их монослоя с раствором трипсина-версена (1:1) (ООО «Биолот», Россия) в течение 2-5 19 минут до момента открепления клеток от поверхности культурального флакона, после чего полученную суспензию клеток помещали в одинаковом объеме путем суспендирования в питательной среде.

Подбор исследуемых разведений. До проведения основного этапа осуществляли подбор концентраций тестируемого объекта. Для чего в 96-луночные планшеты высевали клетки, в концентрации 10х105 клеток на лунку. На следующий день, после прикрепления клеток в лунки вносили тестируемый объект, приготовленный в среде для культивирования HEK (M-20/23) в разведениях 1:2; 1:4; 1:5; 1:10 и 1:20.

Через 24 часа после внесения тестируемого объекта в исследуемых разведениях оценивали жизнеспособность клеток с помощью МТТ-теста. В основе теста лежит реакция превращения бледно-желтого красителя – 3-(4,5- диметилтиазолин-2)-2,5 дифенилтетразолия бромида (МТТ) в формазан фиолетового цвета под действием фермента сукцинатдегидрогеназы [14]. Сукцинатдегидрогеназа – флавинадениндинуклеотид зависимый фермент, прочно связанный с мембраной митохондрий, обладающий высокой субстратной специфичностью. Он является одним из ферментов, обеспечивающих цикл трикарбоновых кислот, в частности катализирует обратимое окисление янтарной кислоты (сукцината) до фумаровой кислоты.

Нанесение на человеческую кожу тестируемого объекта позволит увеличить ее барьерные и защитные свойства.

Эпидермальный слой кожи выполняет важную функцию защитного барьера от внешних воздействий. Преобладающим типом клеток в эпидермисе являются кератиноциты, и они присутствуют в многослойном плоском эпителии. Прогениторы кератиноцитов находятся и делятся в базальном слое эпидермиса. Затем они дифференцируются, мигрируют к поверхности эпидермиса и, в конечном итоге, навсегда выходят из клеточного цикла. Пролиферация, дифференцировка и запрограммированная клеточная гибель кератиноцитов являются сложными и тщательно спланированными процессами. Помимо своих защитных функций, эпидермальные кератиноциты человека экспрессируют молекулы адгезии и цитокины, что также указывает на участие во врожденном иммунитете кожи, гомеостазе тканей, заживлении ран, развитии рака и генной терапии кожи [1].

В настоящем исследовании планируется изучение трансэпителиального сопротивления с помощью коммерческого набора эпидермальных кератиноцитов человека (Human Epidermal Keratinocytes, HEK) [2] после обработки тестируемым объектом. Величина трансэпителиального электрического сопротивления характеризует стабильность барьера, создаваемого межклеточными плотными контактами. Электрическое сопротивление клеточного монослоя, измеряемое в омах, является количественной мерой целостности барьера [13].

Эпидермальные кератиноциты человека (HEK) представляют собой широко распространенную модель для изучения эпителиальной функции и заболеваний, биологии кожи, токсикологии и вируса папилломы человека (ВПЧ) [3-8]. При выращивании на вставках и наличии интерфейса «жидкость/воздух» они дифференцируются в многослойный плоский эпителий, образуя физиологическую трехмерную ткань. HEK составляют 90% всех клеток эпидермиса, самого наружного слоя кожи, где они производят барьер из промежуточных кератиновых филаментов.

Объекты в исследовании.

Тестируемый объект с условным названием: 3S-Фарм-Синтез для личной гигиены.

Форма выпуска:

Косметическая композиция

Описание:

Однородная гелеобразная масса без посторонних включений от светло-желтого до коричневого цвета Состав: Алоэ-вера гель – 48,50%; продукт Sharomix DMP (Diazolidinyl Urea, Methylparaben, Propylparaben, Propylene Glycol) – 1,00%; Арабиногалактан – 1,00%; продукт Glycolift (Biosaccharide Gum-4, Aqua, Alpha-Glucan Oligosaccharide, Propanediol, Algin) – 49,50%

Тест-системы

Выбор биологической тест-системы

Линии кератиноцитов широко используют для создания моделей кожи человека in vitro, с помощью которых оценивают противовоспалительные и ранозаживляющие свойства косметических или лекарственных средств.

HEK также используются для изучения агрессивности фенотипов рака при исследовании соединений для потенциального местного лечения меланомы и для разработки терапии малыми интерферирующими РНК (siRNA), нацеленной на онкогены [3-7].

Кроме того, HEK помогает раскрыть онкогенный потенциал вируса папилломы человека и протестировать подходы к лечению вызванных им поражений [8]. В настоящем исследовании планируется изучение трансэпителиального сопротивления с помощью коммерческого набора эпидермальных кератиноцитов человека (Human Epidermal Keratinocytes, HEK) [2].

Применение данной модели является общепринятым количественным методом измерения целостности барьера (плотность межклеточных контактов) в моделях клеточных культур эндотелиальных и эпителиальных монослоев [9-12].

Методология

Общие положения

Измерение трансэпителиального сопротивления in vitro осуществляется в лунке культурального планшета, дно которой формирует монослой ранее посеянных клеток, выращенный на полупроницаемой фильтрующей вставке, которая является перегородкой для апикального (верхнего) и базолатерального (нижнего) отсеков. Пористость мембраны такова, что позволяет формировать клеточный монослой в апикальном отсеке без миграции клеток на базальную сторону вставки, а также обеспечивать кератиноциты необходимыми питательными веществами из культуральной среды, содержащейся в базолатеральном отсеке. Для электрических измерений используются два электрода, один из которых помещается в верхнем отделе, а второй - в нижнем, благодаря чему электроды разделяются клеточным монослоем.

Культивирование клеток.

Клетки HEK культивировали в среде для роста кератиноцитов, входящий в состав набора, при температуре 37°С, в атмосфере 5% СО2 в пластиковых флаконах с площадью поверхности 25-870 см². Смена среды производилась раз в 2-3 дня. Клетки субкультивировали при достижении ими 70-80% монослоя. Конфлюентность монослоя оценивали с использованием инвертированного микроскопа «Микромед-И».

Измерение трансэпителиального сопротивления

Эффективность композиции в отношении усиления межклеточных плотных контактов определяется следующим образом:

1. В лунки 12-луночного планшета помещают вкладыши со специальной полупроницаемой мембраной (производитель Jet Bio-Filtration Co., Ltd, Китай);

2. В каждую лунку вносят 500 мкл среды для культивирования содержащей 0,8- 1,0×105 клеток HEK так, чтобы она находилась снаружи вкладыша (апикальный отсек). В наружный отсек вносят 1500 мкл среды и переносят в инкубатор на 24 часа при температуре 37°С и 5% СО2;

3. Через сутки осуществляют измерение трансэпителиального сопротивления (исходный уровень) с помощью вольтметра-омметра Millicell ERS-2 и далее проводят обработку тестируемым объектом в 2 концентрациях, в 9 повторах каждой.

После внесения рабочих концентраций, планшеты далее инкубировали в соответствующих условиях. Измерение сопротивления осуществляют из 3-х разных мест каждой лунки.

Последующее измерение трансэпителиального сопротивления проводят ежедневно, примерно в одно и то же время, в течение 7 дней; Опыт ежедневно, примерно в одно и то же время, в течение 7 дней; Опыт

заканчивается добавлением гипохлорита натрия для безопасного удаления клеток. Для каждой исследуемой концентрации будет использован свой 12-лучноный планшет.

Проведенное исследование влияния активной композиции «3S-Фарм-Синтез» для личной гигиены на усиление барьерных свойств кожи in vitrо позволило сделать вывод о том, что тестируемый объект обладает влиянием на трансэпителиальное электрическое сопротивление кератиноцитов человека в обоих исследуемых разведениях, которое было достоверно выше начиная с 3-го дня после обработки клеток в разведении 1:2 и с 4-го дня при использовании разведения 1:10.

Таким образом, тестируемый объект активная композиция «3S-Фарм-Синтез» для личной гигиены в проведенном исследовании оказал положительное влияние на показатель трансэпителиального электрического сопротивления на клетках линии HEK, увеличение которого составило ≈3,5-4% при его применении в разведении 1:10 и 8-11% при использовании объекта в разведении 1:2. Тем не менее, не смотря на то, что изучаемый показатель отражает стабильность кожного барьера и позволяет оценить его целостность, предполагаемая эффективность, основанная на результатах в исследовании in vitro, может отличаться при исследовании на животных моделях in vivo и при дальнейшем клиническом применении.

Указанные в таблице пределы количественного содержания компонентов композиции, как было отмечено выше, даны в узком интервале значений с учетом ошибки опыта (эксперимента) и обеспечивают достижение указанного технического результата во всем заявленном интервале, что не требует приведения дополнительных примеров для подтверждения осуществления заявленного изобретения во всем интервале количественного содержания компонентов композиции.

Пример.

Композицию по изобретению получают следующим образом, смешивая в реакторе последовательно компоненты композиции (фазы А-С), указанные в нижеследующей таблице.

Активная композиция «3S - Фарм-Синтез» для личной гигиены

Таблица

Фаза Наименование сырья Параметры ввода % ввода Торговое INCI А Алоэ-вера гель Aloe Barbadensis Leaf Juice Поочередно
добавить в реактор До 100 Продукт Sharomix DMP Diazolidinyl Urea, Methylparaben, Propylparaben, Propylene Glycol 1,00
(0,97–1,03) В Арабиногалактан Galactoarabinan Добавить в реактор 1,00
(0,97–1,03) С Продукт Glycolift Biosaccharide Gum-4, Aqua, Alpha-Glucan Oligosaccharide, Propanediol, Algin Добавить в реактор 49,50
(48,00–51,00)

1. В реактор поочередно добавляют компоненты фазы А. После этого включают мешалку (20 оборотов/мин) и осуществляют нагрев до 60С.

2. Вносят Фазу В.

3. Оставляют на 10 мин до полного растворения.

4. Вносят фазу С.

5. Оставляют на 10 мин до полной гомогенизации.

6. Включают охлаждение.

7. Когда температура опустится до 25°С отбирают пробу для проведения приемо-сдаточных испытаний.

8. После прохождения приемо-сдаточных испытаний передают партию для дальнейшего использования.

Данные по составу продукта Sharomix DMP: Диазолидинил мочевина 30%, Метидпарабен 11%, Пропилпарабен 3%, Пропиленгликоль 56% (Консервант  Sharomix DMP — брендированная смесь консервантов на основе парабенов производства израильской компании Sharon Labs https://www.sharon-labs.com/preservatives/paraben-blends/.

Данных по количественному составу продукта Glycolift в открытых источниках нет, есть только качественный состав: Биосахаридная смола-4, Вода, Альфа-глюкан олигосахарид, Пропандиол, Натрия альгинат, Феноксиэтанол (1,5%).

Продукт Glycolift — это косметический премикс французской косметической компании :

Solabiа Group  https://www.solabia.com/cosmetics/en/product/glycolift/: Биосахаридная  смола-4 (Biosaccharide gum-4, CAS Number:   283602-75-5) — деацетилированный разветвленный полимер, состоящий из повторяющихся звеньев L-фукозы, 2-D-глюкозы и глюкуроновой кислоты.

Продукт Sharomix ™ DMP

Это жидкое средство широкого спектра действия, которое защищает от грамотрицательных и грамположительных бактерий, дрожжей и плесени. Смесь является идеальной консервирующей системой для шампуней, кондиционеров для волос и эмульсионных продуктов.

Композицию по изобретению применяют — для изготовления медицинских изделий и косметических средств для применения на коже и слизистых поверхностях тканей.

Таким образом, композиция по изобретению способствует блокированию механизма прикрепления патогенных бактерий, сохранению естественной микрофлоры влагалища, улучшению состояния слизистой оболочки и восстановлению оптимального рН. Снижение рН влагалища сопровождается подавлением роста анаэробных бактерий, разрушением «биопленок» и восстановлением пула собственных лактобацилл.

Литература

1. McGrath J. A., Eady R. A. J., Pope F. M. Anatomy and organization of human skin //Rook’s textbook of dermatology. – 2004. – Vol. 1. – P. 3.2-3.80.

2. General Instructions for Culturing Human Epidermal Keratinocytes (HEK) – URL: https://www.cellapplications.com/sites/default/files/documents/instructions/Instructions%20HEK.pdf (дата обращения 10.2023).

3. Benson, K.; Cramer, S.; Galla, H. J. Impedance-Based Cell Monitoring: Barrier Properties and Beyond. Fluids Barriers CNS. – 2013, – Vol. 10, – 5 p.

4. Tanihara, M., K. Takaichi, M. Maeda, T. Mitsui, K. Yamamoto and A. Hirano. 2016. Retinol-modified collagen, method for producing same, and external composition for skin containing same. Patent US 9238688 B2. – URL: https://patents.google.com/patent/US9238688B2/en (дата обращения 10.2023).

5. Jie L. G. et al. Role of cysteine rich angiogenic inducer 61 in fibroblast like synovial cell proliferation and invasion in rheumatoid arthritis //Molecular medicine reports. – 2015. – Vol. 11, No 2. – P. 917-923.

6. Hsiao Y. P. et al. Triggering apoptotic death of human epidermal keratinocytes by malic Acid: Involvement of endoplasmic reticulum stress-and mitochondria-dependent signaling pathways //Toxins. – 2015. – Vol. 7, No. 1. – P. 81-96.

7. Kubat N. J., Moffett J., Fray L. M. Effect of pulsed electromagnetic field treatment on programmed resolution of inflammation pathway markers in human cells in culture //Journal of inflammation research. – 2015. – P. 59-69.

8. Yan Y. et al. Shikonin promotes skin cell proliferation and inhibits nuclear factor-κB translocation via proteasome inhibition in vitro //Chinese medical journal. – 2015. – Vol. 128, No. 16. – P. 2228-2233.

9. Togtema M. et al. The human papillomavirus 16 European-T350G E6 variant can immortalize but not transform keratinocytes in the absence of E7 //Virology. – 2015. – Vol. 485. – P. 274-282.

10. Руководство по проведению доклинических исследований лекарственных средств. Часть первая / под ред. А.Н. Миронов. – М.: Гриф и К, 2012 – 944 с. (ФГБУ НЦЭСМП Министерства здравоохранения РФ).

11. Решение Совета ЕЭК №81 «Об утверждении правил надлежащей лабораторной практики Евразийского экономического союза в сфере обращения лекарственных средств» от 03.11.2016 г.

12. Meyle J. et al. Transepithelial electrical resistance and tight junctions of human gingival keratinocvtes //Journal of periodontal research. – 1999. – Vol. 34, No 4. – P. 214-222.

13. Srinivasan B. et al. TEER measurement techniques for in vitro barrier model systems //Journal of laboratory automation. – 2015. – Vol. 20, No. 2. – P. 107-126.

14. Seligman A.M., Rutenburg A.M. The Histochemical Demonstration of Succinic Dehydrogenase// Science. – 1951. – Vol.113. – P. 317-320.

Изобретение относится к личной гигиене. Косметическая активная противомикробная композиция для личной гигиены включает в масс.%: арабиногалактан - 0,97–1,03, консервант Sharomix DMP - 0,97–1,03, продукт Гликолифт - 48,00–51,00, Алоэ-вера гель - остальное до 100%. Изобретение обеспечивает блокирование механизма прикрепления патогенных бактерий. 1 табл., 1 пр.

Косметическая активная противомикробная композиция для личной гигиены, включающая Алоэ-вера гель, арабиногалактан, консервант Sharomix DMР на основе смеси, включающей диазолидинил мочевину, метилпарабен, пропилпарабен, пропиленгликоль, косметический премикс продукт Гликолифт на основе смеси, включающей биосахаридную смолу-4, воду, альфа-глюкан олигосахарид, пропандиол, натрия альгинат, феноксиэтанол при следующих соотношениях косметической активной противомикробной композиции в масс.%:

Арабиногалактан 0,97-1,03 Вышеуказанный консервант Sharomix DMP 0,97-1,03 Вышеуказанный продукт Гликолифт 48,00-51,00 Алоэ-вера гель остальное до 100%