СПОСОБ РАЗБАВЛЕНИЯ СПЕРМЫ ЖЕРЕБЦОВ ДЛЯ ХРАНЕНИЯ В ОХЛАЖДЕННОМ И ЗАМОРОЖЕННОМ СОСТОЯНИИ С УЧЕТОМ ИНДИВИДУАЛЬНЫХ ОСОБЕННОСТЕЙ ЭЯКУЛЯТА Российский патент 2024 года по МПК A61D19/02 

ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ,

К КОТОРОЙ ОТНОСИТСЯ ИЗОБРЕТЕНИЕ

Изобретение относится к области животноводства, в частности, к коневодству, способ может быть использован для искусственного осеменения лошадей.

УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ

Аналогом заявляемого способа разбавления спермы жеребцов для хранения в охлажденном и замороженном состоянии является способ разбавления спермы лактозо-желточной (ЛЖ) средой, состоящей из двух компонентов (Платов Е.М. Замораживание спермы в лактозо-желточном разбавителе с двумя процентами глицерина [Текст] / Е.М. Платов, С.М. Ромбе / Животноводство. 1961, 8, 84.)

К сожалению, разбавление спермы жеребцов ЛЖ средой обеспечивает ее сохранность только в течение суток и низкую сохранность после замораживания-оттаивания. Что является одним из недостатков этого способа разбавления. Второй недостаток состоит в том, что среда не приводит к изменению рН спермы, которая является щелочной, что не желательно для длительного хранения.

Наиболее близким аналогом (прототипом) заявляемого способа разбавления спермы жеребцов для хранения в охлажденном и замороженном состоянии является способ разбавления спермы лактозо-хелато-цитратно-желточной (ЛХЦЖ) средой (Среда лактозо-хелато-цитратно-желточная (ЛХЦЖ) для хранения спермы жеребцов. / ГОСТ 24163-80. - ТУ. Москва.: Изд-во стандартов. - 1980. - 6 с).

Сущность этого способа заключается в следующем. Свежеполученную сперму разбавляют с учетом исходной концентрации спермиев: чем выше концентрация, тем выше степень разбавления. Концентрация спермиев у жеребцов обычно колеблется в пределах 100-500 млн/мл. При концентрации спермиев менее 200 млн/мл разбавление ЛХЦЖ средой проводят в соотношении 1:2; при концентрации спермиев в пределах 200-400 млн/мл - в соотношении 1:3; при концентрации спермиев выше 400 млн/мл - в соотношении 1:4. (Науменков А.И., Романькова Н.К. Влияние степени разбавления спермы различной концентрации на показатели ее живучести // - Достижения физиологии и их применение в коневодстве / Сб. науч. тр. ВНИИК. - 1984. - С. 124 - 129).

ЛХЦЖ среда изменяет щелочную реакцию свежеполученной спермы до слабокислой реакции в широких пределах рН от 6,0 до 7,0, что является недостатком этого способа. Большие индивидуальные колебания биохимического состава спермоплазмы и ее буферных элементов приводят к неодинаковым показателям рН в результате разбавления. В зависимости от того, какие элементы преобладают в выделенном эякуляте, происходят определенные изменения рН после разбавления.

Разбавление с учетом только концентрации спермиев, без учета оптимального значения кислотности (рН), не всегда приводит к ожидаемому результату. Это мешает широкому использованию способа криоконсервации в практике.

В основу заявленного изобретения положена задача снижения влияния индивидуального фактора, связанного с колебаниями показателя водородных ионов (рН) в сперме жеребцов, определения его оптимального уровня после разбавления спермы и способа корректировки рН с целью удлинения времени хранения половых клеток в охлажденном и замороженном состоянии. Наш способ отличается тем, что разбавление проводится с доведением рН до оптимального уровня (установленного в сравнительных опытах) за счет дополнительного прибавления корректирующих компонентов с контролем рН.

Техническим результатом заявленного изобретения является снижение влияния фактора, связанного с колебаниями показателя водородных ионов в сперме жеребцов за счет дополнительного прибавления корректирующих компонентов с контролем рН.

РАСКРЫТИЕ СУЩНОСТИ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Для решения этой задачи были проведены опыты по установлению оптимального значения рН спермы после разбавления (Отчет НИР / ФГБНУ «ВНИИ коневодства» / Дивово. - 2022. - Рег. №123013100005-2).

В наших опытах свежеполученная сперма жеребцов имела слабощелочную реакцию в пределах рН 7,0-8,0 в среднем 7,45. Концентрация водородных ионов (рН) ЛХЦЖ среды находится в пределах 6,1-6,2.

В опытах по установлению оптимального значения рН разбавленной спермы определяли значение рН, при котором время выживаемости спермиев находится на максимальном уровне. Для этого делали ряд разбавлений в диапазоне значений рН от 6,0 до 6,9 (с интервалом 0,1-0,2) за счет корректировки разбавителя с помощью добавок бикарбоната натрия (щелочной компонент) или хелатона (кислый компонент). При разбавлении спермы средой в соотношении 1:2 (при концентрации спермиев менее 200 млн/мл) оптимум рН лежал в пределах 6,3-6,5 (фиг. 1).

При разбавлении спермы в соотношении 1:3 и 1:4 (при концентрации спермиев более 200 млн/мл) оптимум рН разбавленной спермы лежал в пределах 6,1-6,4 (фиг. 2).

В любом случае, выживаемость спермы, разбавленной до оптимальных значений рН была выше на 5-20% в сравнении с другими значениями рН (фиг. 1, фиг. 2).

На практике при разбавлении спермы ЛХЦЖ средой рН не всегда изменяется на оптимально желаемую величину. В 50% случаев кислотность (рН) сдвигается больше или меньше от оптимального значения. Это происходит по причине попадания в эякулят секретов придаточных половых желез в разных пропорциях. При этом возникает необходимость индивидуально корректировать кислотность среды, доводя ее рН до оптимального значения, с помощью добавок буферных компонентов: бикарбоната натрия (щелочной компонент) или хелатона (кислотный компонент) (таблица 1).

Если показания рН меньше оптимального значения (т.е. закислены), то проводят добавление щелочного компонента - раствора бикарбоната натрия под контролем рН-метрии до уровня оптимального показания.

Если показания рН больше оптимального значения (т.е. имеют сдвиг в щелочную сторону), то проводят капельное добавление кислотного компонента - раствора хелатона под контролем рН-метрии до оптимальных показаний.

ОСУЩЕСТВЛЕНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Для осуществления изобретения, необходимо проделать следующие действия:

1. Разбавление свежеполученной спермы жеребца с целью ее хранения в охлажденном или замороженном состоянии проводят ЛХЦЖ средой в соответствии с концентрацией:

а) при концентрации спермиев менее или равной 200 млн/мл разбавление проводят ЛХЦЖ средой в соотношении 1:2;

б) при концентрации спермиев в пределах 200-400 млн/мл разбавление проводят средой в соотношении 1:3;

в) при концентрации спермиев выше 400 млн/мл - разбавляют в соотношении 1:4.

2. Определяют рН разбавленной спермы с помощью прибора с функцией рН-метра, т.е. измерения показателя водородных ионов (рН), характеризующего активность ионов водорода в растворах с точностью определений 0,01.

3. Если показания рН отличаются от оптимальных значений, то проводят добавление буферных компонентов:

а) при концентрации спермиев менее или равной 200 млн/мл оптимум рН лежит в пределах 6,3-6,5. Если показания рН меньше значения 6,3, то проводят капельное добавление 4,2% раствора бикарбоната натрия под контролем рН-метрии до оптимального значения. Обычно для сдвига рН на 0,1 единицы достаточно 1-2 мл раствора бикарбоната натрия на 100 мл разбавленной спермы.

Если показания рН больше значения 6,5, то проводят капельное добавление 2% р-ра хелатона под контролем рН до оптимального значения. Для сдвига рН на 0,1 единицы расходуется около 2-4 мл данного раствора на 100 мл разбавленной спермы.

б) при концентрации спермиев более 200 млн/мл оптимум рН разбавленной спермы лежит в пределах 6,1-6,4. Если показания рН меньше значения 6,1, то проводят капельное добавление 4,2% р-ра бикарбоната натрия под контролем рН-метрии до оптимального значения. Если показания рН больше значения 6,4, то проводят капельное добавление 2% р-ра хелатона под контролем рН до оптимального значения.

5. После выполнения всех выше перечисленных процедур разбавленную сперму переносят в холодильник для хранения или последующего замораживания в жидком азоте.

Таким образом, заявляемое изобретение позволяет снять влияние фактора, связанного с колебаниями показателя водородных ионов в сперме разных жеребцов, корректировать рН разбавленной спермы, тем самым оптимизировать условия хранения спермиев с достижением максимального времени их сохранности вне организма в охлажденном и замороженном состоянии.

Изобретение относится к сельскому хозяйству и животноводству и представляет собой способ разбавления спермы жеребцов для хранения в охлажденном и замороженном состоянии. Способ включает разбавление свежеполученной спермы жеребца ЛХЦЖ средой с учетом концентрации спермиев и измерение показателя концентрации водородных ионов (рН) в разбавленной сперме. При концентрации спермиев менее или равной 200 млн/мл показатель рН должен находиться в пределах 6,3-6,5, при концентрации спермиев выше 200 млн/мл показатель рН должен находиться в пределах 6,1-6,4. Если показатель рН меньше оптимального значения, то проводят капельное добавление 4,2% раствора бикарбоната натрия, под контролем рН-метрии, до оптимального значения, а если показатель рН больше оптимального значения, то проводят капельное добавление 2% раствора хелатона, под контролем рН-метрии, до оптимального значения. Способ позволяет оптимизировать условия хранения спермиев с достижением максимального времени их сохранности вне организма. 2 ил., 2 табл.

Способ разбавления спермы жеребцов для хранения в охлажденном и замороженном состоянии, включающий разбавление свежеполученной спермы жеребца лактозо-хелато-цитратно-желточной средой, причем при концентрации спермиев менее или равной 200 млн/мл разбавление проводят ЛХЦЖ средой в соотношении 1:2, при концентрации спермиев в пределах 200-400 млн/мл разбавление проводят ЛХЦЖ средой в соотношении 1:3, при концентрации спермиев выше 400 млн/мл - в соотношении 1:4 и дальнейшее измерение показателя концентрации водородных ионов в разбавленной сперме, причем при концентрации спермиев менее или равной 200 млн/мл оптимум рН лежит в пределах 6,3-6,5, при концентрации спермиев выше 200 млн/мл оптимум рН лежит в пределах 6,1-6,4, при этом если измеренный показатель рН меньше оптимального значения, то проводят капельное добавление 4,2% раствора бикарбоната натрия под контролем рН-метрии, до оптимального значения; если измеренный показатель рН больше оптимального значения, то проводят капельное добавление 2% раствора хелатона под контролем рН-метрии до оптимального значения.