ФАРМАЦЕВТИЧЕСКАЯ КОМПОЗИЦИЯ ДЛЯ ПРЕДОТВРАЩЕНИЯ ИЛИ ЛЕЧЕНИЯ РАКА, СОДЕРЖАЩАЯ WEISSELLA CIBARIA WIKIM28 В КАЧЕСТВЕ АКТИВНОГО ИНГРЕДИЕНТА Российский патент 2024 года по МПК A61K35/744 C12N1/20 A23L33/135 A23K10/16 A61P35/00 

[ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ]

Настоящее изобретение относится к композиции для предотвращения или лечения рака, содержащей Weissella cibaria WIKIM28 (идентификационный номер KCCM11879P), выделенный из кимчи, в качестве активного ингредиента.

[УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ]

Высокий показатель смертности от рака отмечается во всем мире, и рак является наиболее распространенной причиной смерти после сердечно-сосудистых заболеваний в западных странах. В частности, в результате вестернизации пищевых привычек потребление пищи с высоким содержанием жиров стало обычным явлением, и из-за быстрого увеличения количества загрязнителей окружающей среды и увеличения потребления алкоголя и тому подобного заболеваемость раком толстой кишки, раком груди, раком предстательной железы и тому подобными продолжает расти, и заболеваемость раком легких растет из-за увеличения доли курящего населения и загрязнения воздуха в дополнение к старению населения. В такой ситуации срочно требуется разработка противораковых веществ, которые могут способствовать укреплению здоровья человека, улучшению связанного со здоровьем качества жизни и улучшению здоровья человека путем обеспечения раннего предотвращения и лечения рака. Между тем молочнокислые бактерии широко распространены во рту, кишечнике, влагалище и экскрементах людей и животных, а также ферментированных пищевых продуктах, таких как кимчи, и тесно связаны со здоровьем людей и животных. Молочнокислые бактерии проявляют различные эффекты, способствующие укреплению здоровья, такие как регуляция кишечника, ингибирование вредных бактерий, иммунорегуляция, снижение холестерина в крови, противораковая активность и т.п.

На сегодняшний день в патенте Кореи №10-2009742 раскрыта противоопухолевая активность штамма Weissella cibaria, однако, в нем описаны только конкретные примеры профилактического или терапевтического действия на колоректальный рак, а конкретные экспериментальные примеры или варианты реализации не описаны для других видов карциномы.

[Описание]

[Техническая задача]

Задачей настоящего изобретения является обеспечение фармацевтической композиции для предотвращения или лечения рака, содержащей штамм Weissella cibaria в качестве активного ингредиента.

Кроме того, другой задачей настоящего изобретения является обеспечение пищевой композиции или композиции пищевой добавки для предотвращения или ослабления рака, содержащей новую молочнокислую бактерию из кимчи, штамм Weissella cibaria, в качестве активного ингредиента.

Кроме того, другой задачей настоящего изобретения является обеспечение кормовой композиции или композиции кормовой добавки для предотвращения или ослабления рака, содержащей новую молочнокислую бактерию из кимчи, штамм Weissella cibaria, в качестве активного ингредиента.

[ТЕХНИЧЕСКОЕ РЕШЕНИЕ]

Соответственно, авторы настоящего изобретения получили штамм Weissella cibaria WIKIM28 (идентификационный номер: KCCM11879P), депонированный в Корейском центре культур микроорганизмов, и попытались подтвердить профилактическое и терапевтическое действие на карциномы, отличные от колоректального рака. Это привело к созданию настоящего изобретения путем подтверждения профилактического и терапевтического действия на другие карциномы.

Для достижения указанных целей в настоящем изобретении предложена фармацевтическая композиция для предотвращения или лечения рака, содержащая Weissella cibaria WIKIM28 (идентификационный номер KCCM11879P) или его культуру в качестве активного ингредиента.

Кроме того, в настоящем изобретении предложена пищевая композиция или композиция пищевой добавки для предотвращения или ослабления рака, содержащая Weissella cibaria WIKIM28 (идентификационный номер KCCM11879P) или его культуру в качестве активного ингредиента.

Более того, в настоящем изобретении предложена кормовая композиция или композиция кормовой добавки для предотвращения или ослабления рака домашнего скота (livestock), содержащая Weissella cibaria WIKIM28 (идентификационный номер KCCM11879P) или его культуру в качестве активного ингредиента.

[Благоприятные эффекты]

Weissella cibaria WIKIM28 согласно настоящему изобретению демонстрирует превосходную противораковую активность против различных карцином, и поэтому он может быть с успехом применен в качестве композиции для применения для лечения, предотвращения или ослабления рака людей или животных.

[Описание чертежей]

Фиг. 1 представляет собой диаграмму, демонстрирующую график определения скорости роста клеток (анализ жизнеспособности клеток) после обработки клеток немелкоклеточного рака легких клеточных линий Н1650 и А549 композицей согласно настоящему изобретению.

Фиг. 2 представляет собой диаграмму, демонстрирующую график определения скорости роста клеток (анализ жизнеспособности клеток) после обработки клеточной линии AsPC-1 рака поджелудочной железы композицией согласно настоящему изобретению.

Фиг. 3 представляет собой диаграмму, на которой представлен график определения скорости роста клеток (анализа жизнеспособности клеток) после обработки линии Т24 клеток рака мочевого пузыря композицией согласно настоящему изобретению.

Фиг. 4 представляет собой диаграмму, на которой представлен график определения скорости роста клеток (анализ жизнеспособности клеток) после обработки линий клеток меланомы B16-F10, А375Р и A375SM композицией согласно настоящему изобретению.

Фиг. 5 представляет собой диаграмму, на которой представлен график определения скорости роста клеток (анализа жизнеспособности клеток) после обработки линии здоровых клеток NIH/3T3 живыми клетками Weissella cibaria WIKIM28.

[Способ осуществления изобретения]

Далее настоящее изобретение будет более подробно описано с помощью примеров. Указанные примеры предназначены исключительно для более конкретной иллюстрации настоящего изобретения, и специалистам в данной области техники будет очевидно, что объем настоящего изобретения не ограничивается указанными примерами в соответствии с сущностью настоящего изобретения.

Композиция, содержащая Weissella cibaria WIKIM28 (Weissella cibaria, WIKIM28, идентификационный номер KCCM11879P) согласно настоящему изобретению или его культуру в качестве активного ингредиента, обладает профилактическим или терапевтическим действием в отношении рака и может применяться в качестве фармацевтической композиции.

Weissella cibaria WIKIM28 согласно настоящему изобретению представляет собой штамм молочнокислых бактерий, полученный из кимчи. Weissella cibaria WIKIM28 является пробиотиком и оказывает общее кишечное действие и иммуностимулирующее действие, характерное для молочнокислых бактерий. Хорошо известно, что молочнокислые бактерии рода Lactobacillus обладают эффектом усиления кишечного действия и иммуностимулирующим действием.

Weissella cibaria WIKIM28 характеризуется тем, что она имеет последовательность нуклеиновой кислоты, представленную в SEQ ID NO: 1.

Weissella cibaria WIKIM28 можно применять путем инокуляции в жидкой среде MRS в концентрации от 0,1 до 10% и культивирования при температуре от 25°С до 37°С в течение от 4 часов до 48 часов.

Способ культивирования предпочтительно представляет собой стационарный способ культивирования, но не ограничивается указанным. Используемый в настоящем описании термин «пробиотики» следует понимать как означающий живые микроорганизмы, которые оказывают положительное влияние на здоровье хозяина путем улучшения кишечной микробной среды хозяина в желудочно-кишечном тракте животных, включая людей. Пробиотики представляют собой живые микроорганизмы с пробиотической активностью и находятся в форме отдельных или комплексных штаммов, и при употреблении в форме высушенных клеток или ферментированных продуктов людьми или животными они могут оказывать положительное влияние на кишечную флору хозяина.

Рак может представлять собой любой рак, выбранный из группы, состоящей из рака мочевого пузыря, рака груди, меланомы, рака щитовидной железы, рака паращитовидной железы, рака прямой кишки, рака горла, рака гортани, рака пищевода, рака поджелудочной железы, рака желудка, рака языка, рака кожи, опухоли головного мозга, рака матки, рака желчного пузыря, рака полости рта, рака толстой кишки, рака анальной области, рака печени, рака легкого и колоректального рака, и предпочтительно он может представлять собой колоректальный рак, но не ограничивается указанными.

Weissella cibaria WIKIM28, содержащийся в композиции согласно настоящему изобретению, может быть представлен в виде живой клетки или мертвой клетки, и, кроме того, он может быть представлен в высушенной или лиофилизированной форме. Формы и способы получения молочнокислых бактерий, подходящих для включения в различные композиции, хорошо известны специалистам в данной области техники.

Указанная композиция может быть введена перорально или парентерально. В случае парентерального введения она может быть введена путем внутривенной инъекции, подкожной инъекции, внутримышечной инъекции, внутрибрюшинной инъекции, эндотелиального введения, местного введения, интраназального введения и ректального введения и тому подобного, и предпочтительно она может быть введена путем внутривенной инъекции, но не ограничивается указанными. Подходящая доза согласно настоящему изобретению может быть назначена различными способами в зависимости от таких факторов, как способ приготовления лекарственной формы, возраст пациента, масса тела, пол, патологическое состояние, диета, время введения, путь введения, скорость экскреции и чувствительность ответа.

Когда композицию согласно настоящему изобретению применяют в качестве фармацевтической композиции, фармацевтическая композиция согласно настоящему изобретению может быть получена с применением фармацевтически подходящего и физиологически приемлемого адъюванта наряду с активным ингредиентом, и в качестве адъюванта может использоваться вспомогательное вещество, разрыхлитель, подсластитель, связующий агент, покрывающий материал, расширяющая добавка, смазывающий агент, вещество, способствующее скольжению, или ароматизатор или тому подобное.

Указанная фармацевтическая композиция может быть предпочтительно приготовлена в виде фармацевтической композиции путем дополнительного включения одного или более видов фармацевтически приемлемых носителей наряду с описанным активным ингредиентом для введения.

Например, для приготовления в форме таблетки или капсулы указанный активный ингредиент может быть связан с пероральным и нетоксичным фармацевтически приемлемым неактивным носителем, таким как этанол, глицерин, вода и тому подобные. Кроме того, при желании или необходимости в указанную смесь также могут быть включены подходящий связующий агент, смазывающий агент, разрыхлитель и краситель. Подходящий связующий агент включает, но не ограничивается указанными, крахмал, желатин, натуральные сахара, такие как глюкоза или бета-лактоза, натуральную и синтетическую камедь, такую как кукурузный подсластитель, гуммиарабик, трагакант или олеат натрия, стеарат натрия, стеарат магния, бензоат натрия, ацетат натрия, хлорид натрия и тому подобные. Разрыхлитель включает, но не ограничивается указанными, крахмал, метилцеллюлозу, агар, бентонит, ксантановую камедь и тому подобные. В качестве фармацевтически приемлемого носителя в композиции, предназначенной для приготовления в виде жидкого раствора, могут быть использованы солевой раствор, стерильная вода, раствор Рингера, забуференный солевой раствор, раствор альбумина для инъекций, раствор декстрозы, раствор мальтодекстрина, глицерин, этанол и смесь одного или более компонентов, выбранных из них, и при необходимости могут быть добавлены другие обычно используемые добавки, такие как антиоксидант, буферный раствор, бактериостатический агент и тому подобные. Кроме того, композиция может быть приготовлена в виде лекарственной формы для инъекций, такой как водный раствор, суспензия, эмульсия и т.д., пилюли, капсулы, гранулы или таблетки путем дополнительного добавления разбавителя, диспергирующего агента, поверхностно-активного вещества, связующего агента и смазывающего агента. Кроме того, композиция предпочтительно может быть приготовлена в зависимости от каждого заболевания или компонента с применением способа, раскрытого в Remington's Pharmaceutical Science, Mack Publishing Company, Easton PA, в качестве подходящего способа в данной области техники.

Композиция, содержащая Weissella cibaria WIKIM28 (идентификационный номер KCCM11879P) или его культуру в качестве активного ингредиента согласно настоящему изобретению, может применяться в виде пищевой композиции или композиции пищевой добавки для предотвращения или ослабления рака.

Указанная пищевая композиция может быть представлена в форме оздоровительного функционального пищевого продукта.

Термин «оздоровительный функциональный пищевой продукт» означает пищевой продукт, полученный и обработанный с применением сырья или ингредиентов, обладающих полезными функциями для человеческого организма согласно Закону об оздоровительных функциональных пищевых продуктах (Health Functional Food Act) (статья 3, №1), и «функциональность» означает получение благоприятных эффектов для применения в целях поддержания здоровья, таких как регулирование питательных веществ или физиологические эффекты и тому подобные, исходя из структуры и функций человеческого организма (та же статья, №2).

Указанная пищевая композиция может дополнительно содержать пищевую добавку, и, если не указано иное, пригодность в качестве «пищевой добавки» должна определяться в соответствии со стандартами и критериями для соответствующего продукта согласно Общим правилам и Общим методикам исследований, приведенных в Кодексе о пищевых добавках (Food Additive Code), утвержденного Министерством безопасности пищевых продуктов и медикаментов (Ministry of Food and Drug Safety).

Продукты, перечисленные в «Кодексе о пищевых добавках», может включать, например, химические синтетические продукты, такие как кетоны, глицин, цитрат калия, никотиновую кислоту, коричную кислоту и т.д., натуральные добавки, такие как краситель из хурмы (Persimmon color), экстракт лакрицы, кристаллическая целлюлоза, гуаровая камедь и т.д., и смешанные составы, такие как составы L-глутамина натрия, щелочные агенты для приготовления лапши, составы консервантов, составы красителей из дегтя (tar color) и т.д. Пищевой продукт, содержащий активный ингредиент согласно настоящему изобретению, может включать, но не ограничивается указанными, кондитерские изделия, такие как хлеб, рисовые лепешки, сухари, конфеты, шоколад, жевательная резинка и джем, продукты, относящиеся к мороженому, такие как мороженое, лед и порошок для приготовления мороженого, молочные продукты, такие как молоко, молоко с пониженным содержанием жира, молоко с расщепленной лактозой, переработанное молоко, козье молоко, кисломолочный продукт, пахта (butter milk), сгущенное молоко, сливки (milk cream), натуральный сыр, плавленый сыр, сухое молоко и сыворотка, мясные продукты, такие как переработанные мясные продукты, обработанные яичные продукты и гамбургеры, продукты из мяса рыбы, такие как рыбные котлеты, ветчина, сосиски, бекон и т.д., лапшу, такую как рамен, сухая лапша, свежая лапша, жареная лапша быстрого приготовления, желатинизированная сухая лапша (gelatinized dried noodles), приготовленная лапша улучшенного качества (improved cooked noodles), замороженная лапша и макароны, напитки, такие как сокосодержащие фруктовые напитки (fruit juice beverages), овощные напитки, соевое молоко, напитки, содержащие молочнокислые бактерии, такие как йогурт, и т.д., и смешанные напитки, соусы, такие как соевый соус, соевая паста, паста из красного перца, паста из черных соевых бобов, смешанная паста и уксус, приправы к пище, такие как томатный кетчуп, карри и заправка, маргарин, кондитерский жир и пиццу. В дополнение к вышесказанному композиция согласно настоящему изобретению может содержать различные питательные вещества, витамины, электролиты, ароматизаторы, красящие агенты, пектиновую кислоту и ее соли, альгиновую кислоту и ее соли, органические кислоты, загустители, представляющие собой защитные коллоиды, агенты, регулирующие рН, стабилизаторы, консерванты, глицерин, спирты, карбонизирующие агенты, применяемые для газированных напитков и тому подобные. Более того, композиция согласно настоящему изобретению может содержать мякоть для производства натуральных фруктовых соков, сокосодержащих фруктовых напитков и овощных напитков. Указанные ингредиенты можно применять независимо или в комбинации. Композиция напитка, содержащая активный ингредиент согласно настоящему изобретению, не имеет особых ограничений в отношении других компонентов и, как обычные напитки, может содержать дополнительный компонент, такой как различные ароматизаторы или природные углеводы или тому подобные. Примером природных углеводов, описанных выше, являются обычные сахара, такие как моносахариды (например, глюкоза, фруктоза и т.д.); дисахариды (например, мальтоза, сахароза и т.д.) и полисахариды (например, декстрин, циклодекстрин и т.д.), и сахарные спирты, такие как ксилит, сорбит, эритрит и тому подобные. В качестве ароматизатора, отличного от ароматизаторов, описанных выше, могут быть успешно применяться природные ароматизаторы (тауматин, экстракты стевии (например, ребаудиозид А, глицирризин и т.д.)) и синтетические ароматизаторы (сахарин, аспартам и т.д.).

Кроме того, композиция, содержащая Weissella cibaria WIKIM28 (идентификационный номер KCCM11879P) или его культуру в качестве активного ингредиента, согласно настоящему изобретению может применяться в качестве кормовой композиции или композиции кормовой добавки для предотвращения или ослабления рака домашнего скота.

В случае, когда указанную композицию получают в качестве кормовой добавки, указанная композиция может быть получена в высококонцентрированной форме (20-90%) или в форме порошка или гранул. Указанная кормовая добавка может дополнительно содержать любую или одну или более из органических кислот, таких как лимонная кислота, фумаровая кислота, адипиновая кислота, молочная кислота, яблочная кислота и т.д., или фосфатов, таких как фосфат натрия, фосфат калия, кислый пирофосфат, полифосфат (полифосфат) и т.д., или природных антиоксидантов, таких как полифенол, катехин, альфа-токоферол, экстракт розмарина, витамин С, экстракт зеленого чая, экстракт лакрицы, кетокислота, дубильная кислота, фитиновая кислота и т.д. В случае, когда указанную композицию получают в качестве кормового продукта, указанная композиция может быть приготовлена в общепринятой форме кормовых продуктов и может содержать обычные компоненты кормовыъ продуктов.

Кормовой продукт и кормовая добавка могут дополнительно содержать зерно, например порошкообразную или дробленую пшеницу, овес, ячмень, кукурузу и рис; кормовой продукт на основе растительного белка, например кормовой продукт, содержащий рапс, бобы (bean) и подсолнечник в качестве основного компонента; кормовой продукт на основе животного белка, например порошковую кровь, мясную муку, костную пыль и рыбную муку; сахара и молочные продукты, например высушенные компоненты, состоящие из различных видов сухого молока и порошка молочной сыворотки, и тому подобные, и в дополнение к указанному выше могут дополнительно содержать пищевую добавку, усилитель пищеварения и всасывания, агент, стимулирующий рост, и тому подобные.

Указанную кормовую добавку можно вводить животным отдельно или в комбинации с другой кормовой добавкой в пригодном в пищу носителе. Кроме того, указанная кормовая добавка может быть добавлена в виде подкормки (top-dressing) или непосредственно в кормовой продукт для животных, или без труда может быть введена животным в виде перорального состава, отдельно от кормового продукта. Как хорошо известно из уровня техники, в случае, когда указанную кормовую добавку вводят отдельно от корма для животных, она может быть получена в виде состава с немедленным или замедленным высвобождением в комбинации с фармацевтически приемлемым носителем, пригодным в пищу. Указанный носитель, пригодный в пищу, может быть твердым или жидким, например, может представлять собой кукурузный крахмал, лактозу, сахарозу, бобовые хлопья, арахисовое масло, оливковое масло, кунжутное масло и пропиленгликоль. В случае, когда применяют твердый носитель, указанная кормовая добавка может представлять собой таблетку, капсулу, порошок, троше, пастилку или недиспергированную форму подкормки. В случае, когда применяют жидкий носитель, указанная кормовая добавка может иметь форму мягкой желатиновой капсулы, или сиропа, или суспензии, эмульсии или раствора. Кроме того, кормовой продукт и кормовая добавка могут содержать добавку, например консервант, стабилизатор, смачивающий агент или эмульгатор, ускоритель растворения или тому подобные. Указанная кормовая добавка может применяться путем добавления к корму для животных посредством растворения (salivating), распыления или смешивания.

Кормовой продукт или кормовая добавка согласно настоящему изобретению может применяться со многими кормами для животных, включая млекопитающих, домашнюю птицу и рыбу.

Композицию можно применять для млекопитающих, таких как свиньи, коровы, овцы, козы, экспериментальные грызуны и домашние животные (например, собаки, кошки) наряду с экспериментальными грызунами и тому подобными, можно применять для домашней птицы, такой как куры, индейки, утки, гуси, фазаны и перепела, и тому подобные, и можно применять для рыбы, такой как форель и тому подобные, но не ограничиваясь указанными.

Пример 1. Культивирование штамма

1-1. Приготовление штаммов и культуральной среды

Полученный Weissella cibaria WIKIM28 инокулировали в количестве 1% в 30 мл жидкой среды MRS и стационарно культивировали при 37°С° в течение 6 часов. После культивирования проводили центрифугирование при 3500 об/мин в течение 10 минут для удаления культуральной среды, и клетки дважды промывали фосфатно-солевым буфером (PBS) для удаления оставшихся компонентов среды. Половину промытых клеток помещали в среду для культивирования клеток и стационарно культивировали в течение 4 часов при 37°С°, 5% CO₂ в термостате, а затем культуральную среду фильтровали через фильтр с диаметром пор 0,22 μмкм и обрабатывали клетки. Половину промытых клеток разбавляли в среде для культивирования клеток и обрабатывали живыми клетками.

1-2. Приготовление супернатанта мертвых клеток

Полученный Weissella cibaria WIKIM28 инокулировали в количестве 1% в 30 мл жидкой среды MRS и стационарно культивировали при° 37°С в течение 24 часов. После культивирования проводили центрифугирование при 3500 об/мин в течение 10 минут для удаления культуральной среды, и клетки дважды промывали фосфатно-солевым буфером (PBS) для удаления оставшихся компонентов среды. Клетки суспендировали в растворе PBS и подвергали термообработке при 90°С° в течение 30 минут.После термообработки клетки и супернатант (надосадочную жидкость), содержащий вещества, элюированные из бактериальных клеток, отделяли центрифугированием. Супернатант фильтровали через фильтр с диаметром пор 0,22 μмкм, а затем обрабатывали клетки.

Пример 2. Анализ эффективности противоракового действия in vitro

2-1. Получение линий клеток

Для наблюдения противоракового действия Weissella cibaria WIKIM28, скорость роста клеток (анализ жизнеспособности клеток) определяли с использованием набора для подсчета количества клеток Cell counting Kit-8. Клетки, используемые для исследования эффективности противоракового действия, представляли собой линии клеток немелкоклеточного рака легких Н1650 и А549, линию клеток рака поджелудочной железы AsPC-1, линию клеток рака мочевого пузыря Т24, линии клеток меланомы B16-F10, А375Р и A375SM и линию здоровых клеток NIH/3T3.

Линии клеток Н1650, А549, AsPC-1 и линии клеток Т24 и B16-F10, А375Р, A375SM и NIH/3T3, соответственно, субкультивировали в условиях 5% СО₂ и 37°С° с использованием среды RPMI и среды DMEM, в которую добавляли 10% FBS (фетальной бычьей сыворотки) и 1% антибиотиков (пенициллина/стрептомицина), и для эксперимента использовали клетки, находящиеся в фазе роста. Культивируемые клетки обрабатывали 0,25% раствором трипсина-ЭДТА в термостате при 37°С° в течение 3 минут для отделения клеток, и затем их дважды промывали DPBS и готовили до 80% конфлюэнтности в 96-луночном планшете.

2-2. Результат определения скорости роста клеток (анализа жизнеспособности клеток)

Согласно настоящему изобретению клетки рака легких (2 типа), рака поджелудочной железы (1 тип), рака мочевого пузыря (1 тип), меланомы (3 типа) и здоровые клетки (1 тип) культивировали, а затем обрабатывали клетками Weissella cibaria WIKIM28, культуральной средой с живыми клетками или супернатантом с мертвыми клетками, полученным в примере 1, для определения роста клеток (жизнеспособности клеток).

Что касается скорости роста клеток (анализа жизнеспособности клеток), клетки обрабатывали клетками Weissella cibaria WIKIM28 в концентрации MOI 50 или 100, культуральной средой с живыми клетками или супернатантом с мертвыми клетками в концентрации 5% (об./об.), а затем культивировали в течение 24, 48 или 72 часов. После культивирования клетки обрабатывали набором для подсчета количества клеток Cell counting Kit-8, и затем измеряли оптическую плотность (ОП 450 нм). Исходя из оптической плотности клеток (контрольных), не обработанных клетками Weissella cibaria WIKIM28, культуральной средой с живыми клетками или супернатантом с мертвыми клетками, принятой за 100%, вычисляли скорость роста клеток, обработанных клетками Weissella cibaria WIKIM28, культуральной средой с живыми клетками или супернатантом с мертвыми клетками, и результат эксперимента описан ниже.

Линии клеток немелкоклеточного рака легкого Н1650 и А549 обрабатывали клетками Weissella cibaria WIKIM28, культуральной средой с живыми клетками или супернатантом с мертвыми клетками, полученным в примере 1, и измеряли скорость роста клеток. Результаты показаны на фиг. 1.

Согласно фиг. 1, было продемонстрировано, что скорости роста клеток линии клеток H1650 после обработки клетками Weissella cibaria WIKIM28, культуральной средой с живыми клетками или супернатантом снижались на 32,9%, 66,8% и 17,8%, соответственно, а скорости роста клеток линии клеток А549 после обработки клетками Weissella cibaria WIKIM28, культуральной средой с живыми клетками или супернатантом снижались на 92,5%, 65,3% и 24,7%, соответственно. Можно утверждать, что штамм Weissella cibaria WIKIM28 обладает превосходной противораковой активностью против рака легких.

Кроме того, линию клеток рака поджелудочной железы AsPC-1 обрабатывали клетками Weissella cibaria WIKIM28, питательной средой с живыми клетками или супернатантом с мертвыми клетками, полученным в примере 1, и измеряли скорость роста клеток. Результаты показаны на фиг. 2.

Согласно фиг. 2, было продемонстрировано, что скорость роста клеток линии клеток рака поджелудочной железы AsPC-1 после обработки клетками Weissella cibaria WIKIM28, культуральной средой с живыми клетками или супернатантом с мертвыми клетками снижалась на 75,7%, 33,7% и 12,8%, соответственно. Можно утверждать, что штамм Weissella cibaria WIKIM28 обладает превосходной противораковой активностью против рака поджелудочной железы.

Кроме того, линию клеток рака мочевого пузыря Т24 обрабатывали клетками Weissella cibaria WIKIM28, питательной средой с живыми клетками или супернатантом с мертвыми клетками, и измеряли скорость роста клеток.

Результаты показаны на фиг. 3.

Согласно фиг. 3, было продемонстрировано, что скорость роста клеток линии клеток рака мочевого пузыря Т24 после обработки клетками Weissella cibaria WIKIM28, культуральной средой с живыми клетками или супернатантом с мертвыми клетками была снижена на 61,2%, 62,7% и 20,5%, соответственно. Можно утверждать, что штамм Weissella cibaria WIKIM28 обладает превосходной противораковой активностью против рака мочевого пузыря.

Кроме того, линии клеток меланомы B16-F10, А375Р и A375SM обрабатывали клетками Weissella cibaria WIKIM28, питательной средой с живыми клетками или супернатантом с мертвыми клетками, и измеряли скорость роста клеток. Результаты показаны на фиг. 4.

Согласно фиг. 4, после обработки клетками Weissella cibaria WIKIM28, питательной средой с живыми клетками или супернатантом клетками измеряли скорость роста клеток. В результате было продемонстрировано, что скорости роста клеток клеточной линии B16-F10 снижались на 84,5 и 53,3% посредством воздействия клеток или культуральной среды с клетками, соответственно, скорости роста клеток клеточной линии А375Р клетками снижались на 35,8%, 70,4% и 42,4%, посредством воздействия клеток, культуральной среды с живыми клетками или супернатанта с мертвыми клетками, соответственно, а скорости роста клеток клеточной линии A375SM посредствлм воздействия клеток, культуральной среды с живыми клетками или супернатанта с мертвыми клетками снижались на 24,9%, 79,6% и 37,2%, соответственно.

По результатам можно утверждать, что штамм Weissella cibaria WIKIM28 обладает превосходной противораковой активностью против меланомы и рака кожи.

В отличие от приведенного выше эксперимента, здоровые клеточные линии NIH/3T3 обрабатывали клетками Weissella cibaria WIKIM28, полученными в примере 1, и результаты измерения скорости роста клеток показаны на фиг. 5.

Согласно фиг. 5, было продемонстрировано, что скорость роста клеток линии здоровых клеток NIH/3T3 увеличивалась на 75,9% по сравнению с контролем, не обработанным клетками Weissella cibaria WIKIM28, что указывает на отсутствие токсичности для линии здоровых клеток.

[Идентификационный номер]

Наименование депозитарного учреждения: Корейский центр культур микроорганизмов (за рубежом)

[Идентификационный номер] KCCM11879P

Дата депонирования: 20151008

<110> LISCure Biosciences Inc.

<120> ФАРМАЦЕВТИЧЕСКИЕ КОМПОЗИЦИИ ДЛЯ ПРЕДОТВРАЩЕНИЯ ИЛИ ЛЕЧЕНИЯ РАКА,

СОДЕРЖАЩИЕ WEISSELLA CIBARIA WIKIM28 В КАЧЕСТВЕ АКТИВНОГО ИНГРЕДИЕНТА

<130> WIKIM28

<160> 1

<170> KoPatentIn 3.0

<210> 1

<211> 1508

<212> ДНК

<213> Weissella cibaria WIKIM28

<400> 1

ggatgacgct ggcggcgtgc ctaatacatg caagtcgaac gctttgtggt tcaactgatt 60

tgaagagctt gctcagatat gacgatggac attgcaaaga gtggcgaacg ggtgagtaac 120

acgtgggaaa cctacctctt agcaggggat aacatttgga aacagatgct aataccgtat 180

aacaatagca accgcatggt tgctacttaa aagatggttc tgctatcact aagagatggt 240

cccgcggtgc attagttagt tggtgaggta atggctcacc aagacgatga tgcatagccg 300

agttgagaga ctgatcggcc acaatgggac tgagacacgg cccatactcc tacgggaggc 360

agcagtaggg aatcttccac aatgggcgaa agcctgatgg agcaacgccg cgtgtgtgat 420

gaagggtttc ggctcgtaaa acactgttgt aagagaagaa tgacattgag agtaactgtt 480

caatgtgtga cggtatctta ccagaaagga acggctaaat acgtgccagc agccgcggta 540

atacgtatgt tccaagcgtt atccggattt attgggcgta aagcgagcgc agacggttat 600

ttaagtctga agtgaaagcc ctcagctcaa ctgaggaatt gctttggaaa ctggatgact 660

tgagtgcagt agaggaaagt ggaactccat gtgtagcggt gaaatgcgta gatatatgga 720

agaacaccag tggcgaaggc ggctttctgg actgtaactg acgttgaggc tcgaaagtgt 780

gggtagcaaa caggattaga taccctggta gtccacaccg taaacgatga gtgctaggtg 840

tttgagggtt tccgccctta agtgccgcag ctaacgcatt aagcactccg cctggggagt 900

acgaccgcaa ggttgaaact caaaggaatt gacggggacc cgcacaagcg gtggagcatg 960

tggtttaatt cgaagcaacg cgaagaacct taccaggtct tgacatccct tgacaactcc 1020

agagatggag cgttcccttc ggggacaagg tgacaggtgg tgcatggttg tcgtcagctc 1080

gtgtcgtgag atgttgggtt aagtcccgca acgagcgcaa cccttattac tagttgccag 1140

catttagttg ggcactctag tgagactgcc ggtgacaaac cggaggaagg tggggatgac 1200

gtcaaatcat catgcccctt atgacctggg ctacacacgt gctacaatgg cgtatacaac 1260

gagttgccaa cccgcgaggg tgagctaatc tcttaaagta cgtctcagtt cggattgtag 1320

gctgcaactc gcctacatga agtcggaatc gctagtaatc gcggatcagc acgccgcggt 1380

gaatacgttc ccgggtcttg tacacaccgc ccgtcacacc atgagagttt gtaacaccca 1440

aagccggtgg ggtaaccttc gggagccagc cgtctaaggt gggacagatg attagggtga 1500

agtctaca 1508

Изобретение относится к применению композиции, содержащей эффективное количество штамма Weissella cibaria WIKIM28 с идентификационным номером KCCM11879P или его культуру в качестве активного ингредиента, для предотвращения или лечения рака, выбранного из группы, состоящей из рака легких, рака поджелудочной железы, рака мочевого пузыря, рака кожи или меланомы. Изобретение может быть эффективно применено в предотвращении или лечении рака, выбранного из группы, состоящей из рака легких, рака поджелудочной железы, рака мочевого пузыря, рака кожи или меланомы, у людей или животных. 5 н. и 9 з.п. ф-лы, 5 ил., 2 пр.

1. Применение фармацевтической композиции для предотвращения или лечения рака, выбранного из группы, состоящей из рака легких, рака поджелудочной железы, рака мочевого пузыря, рака кожи или меланомы, содержащей эффективное количество штамма Weissella cibaria WIKIM28 с идентификационным номером KCCM11879P или его культуру в качестве активного ингредиента и одно или более фармацевтически приемлемых вспомогательных веществ.

2. Применение по п. 1, отличающееся тем, что Weissella cibaria WIKIM28 имеет нуклеотидную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 1.

3. Применение по п. 1, отличающееся тем, что указанная композиция может быть введена способом перорального введения или парентерального введения.

4. Применение по п. 3, отличающееся тем, что указанный способ парентерального введения представляет собой внутривенную инъекцию, подкожную инъекцию, внутримышечную инъекцию, внутрибрюшинную инъекцию, эндотелиальное введение, местное введение, интраназальное введение, внутрилегочное введение или ректальное введение.

5. Применение по п. 1, отличающееся тем, что Weissella cibaria WIKIM28 представлена в форме живой или мертвой клетки.

6. Применение по п. 1, отличающееся тем, что культура представляет собой культуральную среду с живыми клетками или супернатант с мертвыми клетками.

7. Применение по п. 5, отличающееся тем, что мертвую клетку культивируют при температуре от 25°C до 37°C в течение от 4 часов до 48 часов.

8. Применение пищевой композиции для предотвращения или ослабления рака, выбранного из группы, состоящей из рака легких, рака поджелудочной железы, рака мочевого пузыря, рака кожи или меланомы, содержащей эффективное количество штамма Weissella cibaria WIKIM28 с идентификационным номером KCCM11879P или его культуру в качестве активного ингредиента и одно или более вспомогательных веществ.

9. Применение по п. 8, где пищевой продукт представляет собой оздоровительный функциональный пищевой продукт.

10. Применение по п. 8, отличающееся тем, что пищевой продукт представляет собой любой пищевой продукт, выбранный из группы, состоящей из хлеба, рисовой лепешки, конфеты, шоколада, жевательной резинки, мороженого, молока, сыра, переработанных мясных продуктов, переработанных продуктов из мяса рыбы, кимчи, соевого соуса, соевой пасты, пасты из красного перца, черной соевой пасты, чонгукджана, уксуса, кетчупа, карри, заправки, напитка и кисломолочного продукта.

11. Применение композиции пищевой добавки для предотвращения или ослабления рака, выбранного из группы, состоящей из рака легких, рака поджелудочной железы, рака мочевого пузыря, рака кожи или меланомы, содержащей эффективное количество штамма Weissella cibaria WIKIM28 с идентификационным номером KCCM11879P или его культуру в качестве активного ингредиента и одно или более вспомогательных веществ.

12. Применение кормовой композиции для предотвращения или ослабления рака, выбранного из группы, состоящей из рака легких, рака поджелудочной железы, рака мочевого пузыря, рака кожи или меланомы у животного, выбранного из домашнего скота, домашних животных, домашней птицы и рыбы, содержащей эффективное количество штамма Weissella cibaria WIKIM28 с идентификационным номером KCCM11879P или его культуру в качестве активного ингредиента и одно или более вспомогательных веществ.

13. Применение по п. 12, отличающееся тем, что указанное животное представляет собой любое животное, выбранное из группы, состоящей из свиньи, коровы, лошади, овцы, кролика, козы, крысы, хомяка, морской свинки, собаки, кошки, курицы, индейки, утки, гуся, фазана, перепела, карпа, золотого карася и форели.

14. Применение композиции кормовой добавки для предотвращения или ослабления рака, выбранного из группы, состоящей из рака легких, рака поджелудочной железы, рака мочевого пузыря, рака кожи или меланомы у животного, содержащей эффективное количество штамма Weissella cibaria WIKIM28 с идентификационным номером KCCM11879P или его культуру в качестве активного ингредиента и одно или более вспомогательных веществ.