ФАРМАЦЕВТИЧЕСКАЯ КОМПОЗИЦИЯ ДЛЯ ПРЕДОТВРАЩЕНИЯ ИЛИ ЛЕЧЕНИЯ РАКА, СОДЕРЖАЩАЯ WEISSELLA CIBARIA WIKIM28 В КАЧЕСТВЕ АКТИВНОГО ИНГРЕДИЕНТА Российский патент 2023 года по МПК A61K35/741 A61P35/00 A23L33/135 A23K10/18 

[ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ]

Настоящее изобретение относится к композиции для предотвращения или лечения рака, содержащей Weissella cibaria WIKIM28 (идентификационный номер KCCM11879P), выделенный из кимчи, в качестве активного ингредиента.

[УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ]

Высокий показатель смертности от рака отмечается во всем мире, и рак является наиболее распространенной причиной смерти после сердечно-сосудистых заболеваний в западных странах. В частности, в результате вестернизации пищевых привычек потребление пищи с высоким содержанием жиров стало обычным явлением, и из-за быстрого увеличения количества загрязнителей окружающей среды и увеличения потребления алкоголя и тому подобного заболеваемость раком толстой кишки, раком груди, раком предстательной железы и тому подобным продолжает расти, и заболеваемость раком легких растет из-за увеличения доли курящего населения и загрязнения воздуха в дополнение к старению населения. В указанной ситуации срочно требуется создание противораковых веществ, которые могут способствовать укреплению здоровья человека, улучшению связанного со здоровьем качества жизни и улучшению здоровья человека путем обеспечения раннего предотвращения и лечения рака.

Между тем молочнокислые бактерии широко распространены во рту, кишечнике, влагалище и экскрементах людей и животных, а также ферментированных пищевых продуктах, таких как кимчи, и тесно связаны со здоровьем людей и животных. Молочнокислые бактерии проявляют различные эффекты, способствующие укреплению здоровья, такие как регуляция кишечника, ингибирование вредных бактерий, иммунорегуляция, снижение холестерина в крови, противораковая активность и т.п.

В настоящее время в публикации корейской заявки на патент №10-2015-0068061 раскрыта противораковая активность Lactobacillus plantarum PNU (KССМ11352Р) или Lactobacillus mesenteroides PNU (KCCM11353P), и в корейском патенте №10-1287120 раскрыта фармацевтическая композиция для лечения рака, содержащая Lactobacillus plantarum DSR CK10 [идентификационный номер: KFCC-11433P] или Lactobacillus plantarum DSR M2 [идентификационный номер: KFCC-11432P] в качестве активного ингредиента, но о противораковой активности и превосходстве Weissella cibaria не сообщалось.

[ОПИСАНИЕ]

[ТЕХНИЧЕСКАЯ ПРОБЛЕМА]

Задачей настоящего изобретения является обеспечение фармацевтической композиции для предотвращения или лечения рака, содержащей штамм Weissella cibaria в качестве активного ингредиента.

Кроме того, другой задачей настоящего изобретения является обеспечение пищевой композиции или композиции пищевой добавки для предотвращения или ослабления рака, содержащей новую содержащуюся в кимчи молочнокислую бактерию, штамм Weissella cibaria, в качестве активного ингредиента.

Кроме того, другой задачей настоящего изобретения является обеспечение кормовой композиции или композиции кормовой добавки для предотвращения или ослабления рака, содержащей новую содержащуюся в кимчи молочнокислую бактерию, штамм Weissella cibaria, в качестве активного ингредиента.

[ТЕХНИЧЕСКОЕ РЕШЕНИЕ]

Соответственно, авторы настоящего изобретения попытались найти штамм молочнокислых бактерий, который проявляет превосходные эффекты в качестве пробиотика и демонстрирует эффекты предотвращения и лечения рака, из кимчи выделили и идентифицировали штамм молочнокислых бактерий, обладающий противораковой активностью, а именно Weissella cibaria WIKIM28, придя тем самым к настоящему изобретению.

Для достижения указанных задач в настоящем изобретении предложена фармацевтическая композиция для предотвращения или лечения рака, содержащая Weissella cibaria WIKIM28 (идентификационный номер KССМ11879Р) или его культуру в качестве активного ингредиента.

Кроме того, в настоящем изобретении предложена пищевая композиция или композиция пищевой добавки для предотвращения или ослабления рака, содержащая Weissella cibaria WIKIM28 (идентификационный номер KССМ11879Р) или его культуру в качестве активного ингредиента.

Более того, в настоящем изобретении предложена кормовая композиция или композиция кормовой добавки для предотвращения или ослабления рака домашнего скота (livestock), содержащая Weissella cibaria WIKIM28 (идентификационный номер KССМ11879Р) или его культуру в качестве активного ингредиента.

[ЭФФЕКТЫ, ОБЕСПЕЧИВАЮЩИЕ ПРЕИМУЩЕСТВА]

Weissella cibaria WIKIM28 согласно настоящему изобретению демонстрирует превосходную противораковую активность на стандартных моделях на животных и моделях на животных, которым трансплантированы раковые клетки человека, и поэтому он может быть с успехом применен в качестве композиции для применения для лечения, предотвращения или ослабления рака людей или животных.

[КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ЧЕРТЕЖЕЙ]

ФИГ. 1 представляет собой чертеж, на котором представлены фотографии опухолевой части мыши для наблюдения за тем, как размер опухолевых клеток изменяется с течением времени после введения путем внутривенной инъекции композиции согласно настоящему изобретению мышам с трансплантированными клетками СТ26.

ФИГ. 2 представляет собой чертеж, на котором представлен график определения изменения объема с течением времени после введения путем внутривенной инъекции композиции согласно настоящему изобретению мышам с трансплантированными клетками СТ26.

ФИГ. 3 представляет собой чертеж, на котором представлены фотографии опухолевой части мыши для наблюдения за тем, как размер опухолевых клеток изменяется с течением времени после введения путем внутривенной инъекции композиции согласно настоящему изобретению мышам с трансплантированными клетками МС38.

ФИГ. 4 представляет собой чертеж, на котором представлен график определения изменения объема с течением времени после введения путем внутривенной инъекции композиции согласно настоящему изобретению мышам с трансплантированными клетками МС38.

ФИГ. 5 представляет собой чертеж, на котором представлен график определения скорости роста объема опухолевых клеток с течением времени после введения путем внутривенной инъекции композиции согласно настоящему изобретению мышам с трансплантированными клетками МС38.

[ОСУЩЕСТВЛЕНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ]

Далее настоящее изобретение будет более подробно описано с помощью примеров. Указанные примеры предназначены исключительно для более конкретной иллюстрации настоящего изобретения, и специалистам в данной области техники будет очевидно, что объем настоящего изобретения не ограничивается указанными примерами в соответствии с сущностью настоящего изобретения.

Композиция, содержащая Weissella cibaria WIKIM28 (идентификационный номер KССМ11879Р) или его культуру в качестве активного ингредиента согласно настоящему изобретению, обладает эффектом предотвращения или лечения рака и может быть применена в качестве фармацевтической композиции.

Weissella cibaria WIKIM28 представляет собой полученную из кимчи молочнокислую бактерию. Несмотря на то, что Weissella cibaria WIKIM28 согласно настоящему изобретению выделяют и идентифицируют из кимчи, способы получения не ограничиваются указанным способом.

В результате секвенирования 16S рДНК для идентификации и классификации Weissella cibaria WIKIM28 показано, что он имеет нуклеотидную последовательность SEQ ID NO: 1.

Соответственно, микроорганизм согласно настоящему изобретению, который имеет последовательность 16S рДНК SEQ ID NO: 1, назван Weissella cibaria WIKIM28 и депонирован в Корейском центре культур микроорганизмов 8 октября 2015 года (идентификационный номер KCCM11879P).

Weissella cibaria WIKIM28 согласно настоящему изобретению обладает эффектом общей регуляции кишечника и иммуностимулирующим эффектом молочнокислых бактерий в качестве пробиотика. Хорошо известно, что молочнокислые бактерии Lactobacillus sp. обладают эффектом регуляции кишечника и иммуностимулирующим эффектом.

В настоящем описании подразумевается, что термин «пробиотики» означает живые микроорганизмы, которые оказывают положительное влияние на здоровье хозяина путем улучшения кишечной микробной среды в желудочно-кишечном тракте животных, включая людей. Пробиотики представляют собой живые микроорганизмы с пробиотической активностью и находятся в форме отдельных или смешанных штаммов, и при употреблении в форме высушенных клеток или ферментированных продуктов людьми или животными они могут оказывать положительное влияние на кишечную флору хозяина.

Рак может представлять собой любой рак, выбранный из группы, состоящей из рака мочевого пузыря, рака груди, меланомы, рака щитовидной железы, рака паращитовидной железы, рака прямой кишки, рака горла, рака гортани, рака пищевода, рака поджелудочной железы, рака желудка, рака языка, рака кожи, опухоли головного мозга, рака матки, рака желчного пузыря, рака полости рта, рака толстой кишки, рака анальной области, рака печени, рака легкого и колоректального рака, и предпочтительно он может представлять собой колоректальный рак, но не ограничивается им.

Weissella cibaria WIKIM28, содержащийся в композиции согласно настоящему изобретению, может присутствовать в виде живой клетки или мертвой клетки, и, кроме того, он может присутствовать в высушенной или лиофилизированной форме. Формы и способы получения молочнокислых бактерий, подходящих для включения в различные композиции, хорошо известны специалистам в данной области техники.

Указанная композиция может быть введена перорально или парентерально. В случае парентерального введения она может быть введена путем внутривенной инъекции, подкожной инъекции, внутримышечной инъекции, внутрибрюшинной инъекции, эндотелиального введения, местного введения, интраназального введения и ректального введения и тому подобного, и предпочтительно она может быть введена путем внутривенной инъекции, но не ограничивается этим.

Подходящая доза согласно настоящему изобретению может быть назначена различными способами в зависимости от таких факторов, как способ приготовления, возраст пациента, масса тела, пол, патологическое состояние, пища, время введения, путь введения, скорость экскреции и чувствительность ответа.

Когда композицию согласно настоящему изобретению применяют в качестве фармацевтической композиции, фармацевтическая композиция согласно настоящему изобретению может быть получена с применением фармацевтически подходящего и физиологически приемлемого адъюванта наряду с активным ингредиентом, и в качестве адъюванта может быть применено вспомогательное вещество, разрыхляющий агент, подсластитель, связующий агент, покрывающий материал, расширяющий агент, смазывающий агент, вещество, способствующее скольжению, или ароматизатор или тому подобное.

Указанная фармацевтическая композиция может быть предпочтительно приготовлена в виде фармацевтической композиции путем дополнительного включения одного или более видов фармацевтически приемлемых носителей наряду с описанным активным ингредиентом для введения.

Например, для приготовления в форме таблетки или капсулы указанный активный ингредиент может быть связан с пероральным и нетоксичным фармацевтически приемлемым неактивным носителем, таким как этанол, глицерин, вода и т.п. Кроме того, при желании или необходимости в указанную смесь также могут быть включены подходящий связующий агент, смазывающий агент, разрыхляющий агент и красящий агент. Подходящий связующий агент включает, но не ограничивается ими, крахмал, желатин, натуральные сахара, такие как глюкоза или бета-лактоза, натуральную и синтетическую камедь, такую как кукурузный подсластитель, гуммиарабик, трагакант или олеат натрия, стеарат натрия, стеарат магния, бензоат натрия, ацетат натрия, хлорид натрия и т.п. Разрыхляющий агент включает, но не ограничивается ими, крахмал, метилцеллюлозу, агар, бентонит, ксантановую камедь и т.п. В качестве фармацевтически приемлемого носителя в композиции, которая должна быть приготовлена в виде жидкого раствора, могут быть применены солевой раствор, стерильная вода, раствор Рингера, забуференный солевой раствор, раствор альбумина для инъекций, раствор декстрозы, раствор мальтодекстрина, глицерин, этанол и смесь одного или более компонентов, выбранных из них, и при необходимости могут быть добавлены другие обычные добавки, такие как антиоксидант, буферный раствор, бактериостатический агент и т.п. Кроме того, она может быть приготовлена в виде состава для инъекций, такого как водный раствор, суспензия, эмульсия и т.д., пилюли, капсулы, гранулы или таблетки путем дополнительного добавления разбавителя, диспергирующего агента, поверхностно-активного вещества, связующего агента и смазывающего агента.

Кроме того, она предпочтительно может быть приготовлена в зависимости от каждого заболевания или компонента с применением способа, раскрытого в Remington's Pharmaceutical Science, Mack Publishing Company, Easton PA, в качестве подходящего способа в данной области техники.

Композиция, содержащая Weissella cibaria WIKIM28 (идентификационный номер KССМ11879Р) или его культуру в качестве активного ингредиента согласно настоящему изобретению, может быть применена в качестве пищевой композиции или композиции пищевой добавки для предотвращения или ослабления рака.

Указанная пищевая композиция может находиться в форме оздоровительного функционального пищевого продукта.

Термин «оздоровительный функциональный пищевой продукт» означает пищевой продукт, произведенный и обработанный с применением сырья или ингредиентов, обладающих полезными функциями для человеческого организма согласно Закону об оздоровительной функциональной пищевой продукции (Health Functional Food Act) (статья 3, №1), и «функциональность» означает получение полезных эффектов для применений в целях поддержания здоровья, таких как регулирование питательных веществ или физиологические эффекты и т.п. исходя из структуры и функций человеческого организма (та же статья, №2).

Указанная пищевая композиция может дополнительно содержать пищевую добавку, и, если не указано иное, пригодность в качестве «пищевой добавки» должна определяться в соответствии со стандартами и критериями для соответствующего наименования согласно Общим правилам и Общим методам испытаний Кодекса о пищевых добавках (Food Additive Code), утвержденного Министерством безопасности пищевых продуктов и медикаментов (Ministry of Food and Drug Safety).

Наименование, указанное в «Кодексе о пищевых добавках», может включать, например, химические синтетические продукты, такие как кетоны, глицин, цитрат калия, никотиновая кислота, коричная кислота и т.д., натуральные добавки, такие как краситель из хурмы (Persimmon color), экстракт лакрицы, кристаллическая целлюлоза, гуаровая камедь и т.д., и смешанные составы, такие как составы L-глутамина натрия, щелочные агенты для лапши, составы консервантов, составы красителей из дегтя (tar color) и т.д.

Пищевой продукт, содержащий активный ингредиент согласно настоящему изобретению, может включать, но не ограничивается ими, кондитерские изделия, такие как хлеб, рисовые лепешки, сушеные лепешки, конфеты, шоколад, жевательная резинка и джем, продукты, относящиеся к мороженому, такие как мороженое, лед и порошок для приготовления мороженого, молочные продукты, такие как молоко, молоко с пониженным содержанием жира, молоко с расщепленной лактозой, переработанное молоко, козье молоко, кисломолочный продукт, пахта (butter milk), сгущенное молоко, молочный крем (milk cream), пахта (butter milk), натуральный сыр, плавленый сыр, сухое молоко и сыворотка, мясные продукты, такие как переработанные мясные продукты, обработанные яичные продукты и гамбургеры, продукты из мяса рыбы, такие как рыбные лепешки, ветчина, колбаса, бекон и т.д., лапша, такая как рамен, сушеная лапша, свежая лапша, жареная лапша быстрого приготовления, желатинизированная сушеная лапша (gelatinized dried noodles), вареная лапша улучшенного качества (improved cooked noodles), замороженная лапша и макароны, напитки, такие как сокосодержащие фруктовые напитки (fruit juice beverages), овощные напитки, соевое молоко, напитки, содержащие лактобациллы, такие как йогурт, и т.д., и смешанные напитки, соусы, такие как соевый соус, соевая паста, паста из красного перца, паста из черных соевых бобов, смешанная паста и уксус, приправы к пище, такие как томатный кетчуп, карри и заправка, маргарин, кондитерский жир и пиццу.

В дополнение к этому композиция согласно настоящему изобретению может содержать различные питательные вещества, витамины, электролиты, ароматизаторы, красящие агенты, пектиновую кислоту и ее соли, альгиновую кислоту и ее соли, органические кислоты, загустители, представляющие собой защитные коллоиды, агенты, регулирующие рН, стабилизаторы, консерванты, глицерин, спирты, карбонизирующие агенты, применяемые для газированных напитков и т.п. Более того, композиция согласно настоящему изобретению может содержать мякоть для производства натуральных фруктовых соков, сокосодержащих фруктовых напитков и овощных напитков. Указанные ингредиенты могут быть применены независимо или в комбинации.

Композиция напитка, содержащая активный ингредиент согласно настоящему изобретению, не имеет особых ограничений в отношении других компонентов и, как обычные напитки, может содержать дополнительный компонент, такой как различные ароматизаторы или натуральные углеводы или т.п. Примером натуральных углеводов, описанных выше, являются обычные сахара, такие как моносахариды (например, глюкоза, фруктоза и т.д.); дисахариды (например, мальтоза, сахароза и т.д.) и полисахариды (например, декстрин, циклодекстрин и т.д.), и сахарные спирты, такие как ксилит, сорбит, эритрит и т.п. В качестве ароматизатора, отличного от ароматизаторов, описанных выше, могут быть успешно применены натуральные ароматизаторы (тауматин, экстракты стевии (например, ребаудиозид А, глицирризин и т.д.)) и синтетические ароматизаторы (сахарин, аспартам и т.д.).

Кроме того, композиция, содержащая Weissella cibaria WIKIM28 (идентификационный номер KCCM11879P) или его культуру в качестве активного ингредиента согласно настоящему изобретению, может быть применена в качестве кормовой композиции или композиции кормовой добавки для предотвращения или ослабления рака домашнего скота.

Когда указанную композицию получают в качестве кормовой добавки, указанная композиция может быть произведена в виде сильного (20-90%) концентрата или в форме порошка или гранул. Указанная кормовая добавка может дополнительно содержать любую или одну или более из органических кислот, таких как лимонная кислота, фумаровая кислота, адипиновая кислота, молочная кислота, яблочная кислота и т.д., или фосфатов, таких как фосфат натрия, фосфат калия, кислый пирофосфат, полифосфат (полифосфат) и т.д., или природных антиоксидантов, таких как полифенол, катехин, альфа-токоферол, экстракт розмарина, витамин С, экстракт зеленого чая, экстракт лакрицы, кетокислота, дубильная кислота, фитиновая кислота и т.д. При получении в качестве корма указанная композиция может быть приготовлена в обычной форме кормов и может содержать обычные компоненты кормов.

Корм и кормовая добавка могут дополнительно содержать зерно, например порошкообразную или дробленую пшеницу, овес, ячмень, кукурузу и рис; корм с растительным белком, например корм, содержащий рапс, фасоль (bean) и подсолнечник в качестве основного компонента; корм с животным белком, например порошкообразную кровь, мясную муку, костную пыль и рыбную муку; сахара и молочные продукты, например высушенные компоненты, состоящие из различных видов сухого молока и порошка молочной сыворотки, и т.п., и в дополнение к этому могут дополнительно содержать пищевую добавку, усилитель пищеварения и всасывания, агент, стимулирующий рост, и т.п.

Указанная кормовая добавка может быть введена животным отдельно или в комбинации с другой кормовой добавкой в съедобном носителе. Кроме того, указанная кормовая добавка может быть смешана в виде подкормки (top-dressing) или непосредственно с кормом для животных или легко введена животным в виде перорального состава, отдельного от корма. Когда указанную кормовую добавку вводят отдельно от корма для животных, как хорошо известно из уровня техники, она может быть произведена в виде состава с немедленным или замедленным высвобождением в комбинации с фармацевтически приемлемым съедобным носителем. Указанный съедобный носитель может быть твердым или жидким, например кукурузным крахмалом, лактозой, сахарозой, бобовыми хлопьями, арахисовым маслом, оливковым маслом, кунжутным маслом и пропиленгликолем. Когда применяют твердый носитель, указанная кормовая добавка может представлять собой таблетку, капсулу, порошок, троше, пастилку или недиспергированную форму подкормки. Когда применяют жидкий носитель, указанная кормовая добавка может представлять собой состав мягкой желатиновой капсулы или сироп или суспензию, эмульсию или раствор.

Кроме того, корм и кормовая добавка могут содержать добавку, например консервант, стабилизатор, смачивающий агент или эмульгатор, ускоритель растворения или т.п. Указанная кормовая добавка может быть применена путем добавления к корму для животных посредством растворения (salivating), распыления или смешивания.

Корм или кормовая добавка согласно настоящему изобретению может быть применена со многими кормами для животных, включая млекопитающих, домашнюю птицу и рыбу.

Она может быть применена для свиней, коров, овец, коз, экспериментальных грызунов и домашних животных (например, собак, кошек) наряду с экспериментальными грызунами и т.п. в качестве млекопитающих, может быть применена для кур, индеек, уток, гусей, фазанов и перепелов и т.п. в качестве домашней птицы и может быть применена для форели и т.п. в качестве рыбы, но не ограничиваясь ими.

Кроме того, композиция, содержащая Weissella cibaria WIKIM28 (идентификационный номер KССМ11879Р) или его культуру в качестве активного ингредиента согласно настоящему изобретению, может быть применена в качестве закваски молочнокислых бактерий для ферментации.

Пример 1. Выделение и культивирование штамма

Weissella cibaria WIKIM28 (идентификационный номер KССМ11879Р) был предоставлен из Банка микроорганизмов и генов Всемирного института кимчи для осуществления эксперимента.

Отдельную колонию предоставленного Weissella cibaria WIKIM28 субкультивировали в агаризованной среде, содержащей агар для культивирования лактобактерий по Ману, Рогозе и Шарпу (MRS), при 30°С в течение 48 часов, и затем отдельную колонию культуры культивировали при 37°С в течение 24 часов при 200 об/мин после инокуляции в 10 мл жидкой среды, содержащей агар MRS. После культивирования клетки штамма центрифугировали при 8000 об/мин в течение 5 минут для удаления культурального раствора и три раза промывали ФСБ (фосфатно-солевым буфером) для удаления оставшихся компонентов среды.

Пример 2. Условия содержания экспериментальных животных (мышей)

В качестве экспериментальных животных, использованных для эксперимента, обеспечивали самцов мышей BALB/c (Orient Bio, Корея) и C57BL/6 в возрасте 5 недель, которых выращивали в течение периода проведения эксперимента после периода стабилизации, составлявшего 1 неделю, в помещении для разведения животных в свободной от патогенной флоры среде, где поддерживали комнатную температуру 20±2°С и влажность 55±15%. В качестве образца обеспечивали общий образец гранул (pellet) без антибиотика, и вода была доступна для частого приема внутрь. В ходе эксперимента всех животных выращивали, подвергали экспериментальным процедурам и эвтаназии в соответствии с протоколом, одобренным Этическим комитетом в области исследований на животных Всемирного института кимчи. Наблюдение за изменением размера опухоли осуществляли путем измерения объема (мм³) опухоли с использованием уравнения 3,14 × (длина × высота × площадь)/6.

Пример 3. Получение моделей на животных с трансплантированными клетками колоректального рака мыши СТ26 и МС38

3-1. Культура клеток

Были приобретены и использованы клетки колоректального рака мыши СТ26 (Корейский банк клеточных линий, Корея), и были обеспечены и использованы клетки колоректального рака мыши МС38 (Национальный университет Чоннам, Медицинский колледж). Указанные клетки колоректального рака мыши СТ26 и МС38 культивировали в условиях 5% СО₂ и 37°С в среде DMEM (Hyclone, США), содержащей 10% фетальной бычьей сыворотки и 1% пенициллина-стрептомицина.

3-2. Получение модели рака на животных с трансплантированными клетками

Для получения модели на животных с трансплантированными клетками СТ26 для эксперимента применяли мышей BALB/c в возрасте 6 недель (18-21 г), а для получения модели на животных с трансплантированными клетками МС38 применяли мышей C57BL/6 в возрасте 6 недель (18-21 г). Культивируемые клетки колоректального рака мыши СТ26 и МС38 вводили путем подкожной инъекции в правое бедро мышей после сбора в количестве 1×10⁵ клеток, соответственно, и ресуспендирования в 50 мкл ФСБ.

Пример 4. Анализ противоопухолевого эффекта Weissella cibaria WIKIM28

4-1. Анализ противоопухолевого эффекта у моделей на животных с трансплантированными клетками СТ26

Weissella cibaria WIKIM28 вводили путем внутривенной инъекции в хвост мышам с трансплантированными клетками СТ26, у которых образовалась опухоль объемом примерно 80~100 мм³. Weissella cibaria WIKIM28 готовили путем обеспечения количества бактерий, составляющего 1×10¹⁰ КОЕ/мл, с применением ФСБ, и 0,1 мл (1×10⁹ КОЕ) вводили путем внутривенной инъекции экспериментальному животному, и группе отрицательного контроля вводили ФСБ. Результат, подтверждающий изменение размера опухоли колоректального рака, определяемое невооруженным глазом, с течением времени у мышей с трансплантированными клетками СТ26, показан на ФИГ. 1.

Как показано на ФИГ. 1, было обнаружено, что количество опухолевых клеток уменьшалось до такой степени, что это могло быть видно невооруженным глазом, через 12 дней в случае введения Weissella cibaria WIKIM28 путем внутривенной инъекции по сравнению с группой отрицательного контроля (ФСБ).

Кроме того, на ФИГ. 2 показан результат определения изменения объема опухоли с течением времени у мышей с трансплантированными клетками СТ26.

Как показано на ФИГ. 2, было подтверждено, что противоопухолевые эффекты в отношении размера опухоли при колоректальном раке у мышей с трансплантированными клетками СТ26, когда вводили путем инъекции Weissella cibaria WIKIM28, через 16 дней были примерно в 2,4 раза лучшими по сравнению с группой отрицательного контроля.

Пример 5. Исследование биораспределения после введения путем инъекции Weissella cibaria WIKIM28

Weissella cibaria WIKIM28 вводили путем внутривенной инъекции в хвост мышам с трансплантированными клетками СТ26, у которых образовалась опухоль объемом примерно 80~100 мм³. Weissella cibaria WIKIM28 готовили путем обеспечения количества бактерий, составляющего 1×10¹⁰ КОЕ/мл, с применением ФСБ, и 0,1 мл (1×10⁹ КОЕ) вводили путем внутривенной инъекции в хвост экспериментальному животному, и группе отрицательного контроля вводили ФСБ. Результат, подтверждающий изменение размера опухоли колоректального рака, определяемое невооруженным глазом, с течением времени у мышей с трансплантированными клетками МС38, показан на ФИГ. 3.

Как показано на ФИГ. 3, можно было наблюдать, что количество опухолевых клеток уменьшалось до такой степени, что это могло быть видно невооруженным глазом, в случае введения Weissella cibaria WIKIM28 путем внутривенной инъекции по сравнению с группой отрицательного контроля (ФСБ). Было подтверждено, что через 15 дней опухоль уменьшалась до такой степени, что она не могла быть видна невооруженным глазом.

Кроме того, на ФИГ. 4 и ФИГ. 5 показан результат определения изменения объема опухоли и скорости роста объема с течением времени у мышей с трансплантированными клетками МС38.

Как показано на ФИГ. 4 и ФИГ. 5, может быть подтверждено, что объем опухоли при колоректальном раке и скорость роста у мышей с трансплантированными клетками МС38 быстро уменьшались, когда Weissella cibaria WIKIM28 вводили путем инъекции, по сравнению с группой отрицательного контроля, и может быть определено, что через 12 дней противоопухолевые эффекты были примерно в 16,3 раза лучшими.

На основании результатов экспериментов авторы настоящего изобретения подтвердили, что противоопухолевые эффекты Weissella cibaria WIKIM28 являются превосходными, и, следовательно, ценность изобретения, раскрытого в настоящей заявке, в качестве композиции для предотвращения, ослабления и лечения рака высока.

--->

Перечень последовательностей

<110> Korea Food Research Institute

<120> Фармацевтическая композиция для предотвращения или лечения рака,

содержащая Weissella cibaria WIKIM28 в качестве активного ингредиента

<130> WIKIM28

<160> 1

<170> KoPatentIn 3.0

<210> 1

<211> 1508

<212> ДНК

<213> Weissella cibaria WIKIM28

<400> 1

ggatgacgct ggcggcgtgc ctaatacatg caagtcgaac gctttgtggt tcaactgatt 60

tgaagagctt gctcagatat gacgatggac attgcaaaga gtggcgaacg ggtgagtaac 120

acgtgggaaa cctacctctt agcaggggat aacatttgga aacagatgct aataccgtat 180

aacaatagca accgcatggt tgctacttaa aagatggttc tgctatcact aagagatggt 240

cccgcggtgc attagttagt tggtgaggta atggctcacc aagacgatga tgcatagccg 300

agttgagaga ctgatcggcc acaatgggac tgagacacgg cccatactcc tacgggaggc 360

agcagtaggg aatcttccac aatgggcgaa agcctgatgg agcaacgccg cgtgtgtgat 420

gaagggtttc ggctcgtaaa acactgttgt aagagaagaa tgacattgag agtaactgtt 480

caatgtgtga cggtatctta ccagaaagga acggctaaat acgtgccagc agccgcggta 540

atacgtatgt tccaagcgtt atccggattt attgggcgta aagcgagcgc agacggttat 600

ttaagtctga agtgaaagcc ctcagctcaa ctgaggaatt gctttggaaa ctggatgact 660

tgagtgcagt agaggaaagt ggaactccat gtgtagcggt gaaatgcgta gatatatgga 720

agaacaccag tggcgaaggc ggctttctgg actgtaactg acgttgaggc tcgaaagtgt 780

gggtagcaaa caggattaga taccctggta gtccacaccg taaacgatga gtgctaggtg 840

tttgagggtt tccgccctta agtgccgcag ctaacgcatt aagcactccg cctggggagt 900

acgaccgcaa ggttgaaact caaaggaatt gacggggacc cgcacaagcg gtggagcatg 960

tggtttaatt cgaagcaacg cgaagaacct taccaggtct tgacatccct tgacaactcc 1020

agagatggag cgttcccttc ggggacaagg tgacaggtgg tgcatggttg tcgtcagctc 1080

gtgtcgtgag atgttgggtt aagtcccgca acgagcgcaa cccttattac tagttgccag 1140

catttagttg ggcactctag tgagactgcc ggtgacaaac cggaggaagg tggggatgac 1200

gtcaaatcat catgcccctt atgacctggg ctacacacgt gctacaatgg cgtatacaac 1260

gagttgccaa cccgcgaggg tgagctaatc tcttaaagta cgtctcagtt cggattgtag 1320

gctgcaactc gcctacatga agtcggaatc gctagtaatc gcggatcagc acgccgcggt 1380

gaatacgttc ccgggtcttg tacacaccgc ccgtcacacc atgagagttt gtaacaccca 1440

aagccggtgg ggtaaccttc gggagccagc cgtctaaggt gggacagatg attagggtga 1500

agtctaca 1508

<---

Группа изобретений относится к композициям, содержащим штамм Weissella cibaria WIKIM28 (идентификационный номер KCCM11879P). Предлагается фармацевтическая композиция для предотвращения или лечения колоректального рака, содержащая Weissella cibaria WIKIM28 (идентификационный номер KCCM11879P) или его культуру в качестве активного ингредиента. Предлагаются также пищевая композиция, композиция пищевой добавки, кормовая композиция и композиция кормовой добавки, содержащие Weissella cibaria WIKIM28 (идентификационный номер KCCM11879P) или его культуру в качестве активного ингредиента. Композиция, содержащая Weissella cibaria WIKIM28 (идентификационный номер KCCM11879P), демонстрирует превосходную противораковую активность на моделях на животных, которым трансплантированы раковые клетки, и поэтому может быть с успехом применена для лечения, предотвращения или ослабления колоректального рака у людей или животных. 5 н. и 7 з.п. ф-лы, 5 ил.

1. Фармацевтическая композиция для предотвращения или лечения колоректального рака, содержащая Weissella cibaria WIKIM28 (идентификационный номер KCCM11879P) или его культуру в качестве активного ингредиента.

2. Фармацевтическая композиция по п. 1,

где Weissella cibaria WIKIM28 имеет нуклеотидную последовательность SEQ ID NO: 1.

3. Фармацевтическая композиция по п. 1,

где указанная композиция может быть введена способом перорального введения или парентерального введения.

4. Фармацевтическая композиция по п. 3,

где указанный способ парентерального введения представляет собой введение путем внутривенной инъекции.

5. Фармацевтическая композиция по п. 1,

где указанная композиция представлена в форме живой клетки.

6. Пищевая композиция, содержащая Weissella cibaria WIKIM28 (идентификационный номер KCCM11879P) или его культуру в качестве активного ингредиента.

7. Пищевая композиция по п. 6,

где указанный пищевой продукт представляет собой оздоровительный функциональный пищевой продукт.

8. Пищевая композиция по п. 6,

где указанный пищевой продукт представляет собой любой пищевой продукт, выбранный из группы, состоящей из кимчи, соевого соуса, соевой пасты, пасты из красного перца, напитков и кисломолочного продукта.

9. Композиция пищевой добавки, содержащая Weissella cibaria WIKIM28 (идентификационный номер KCCM11879P) или его культуру в качестве активного ингредиента.

10. Кормовая композиция, содержащая Weissella cibaria WIKIM28 (идентификационный номер KCCM11879P) или его культуру в качестве активного ингредиента.

11. Кормовая композиция по п. 10,

где указанный домашний скот представляет собой любой домашний скот, выбранный из группы, состоящей из свиньи, коровы, лошади, овцы, кролика, козы, мыши, хомяка, морской свинки, собаки, кошки, курицы, индейки, утки, гуся, фазана, перепела, карпа, золотого карася и форели.

12. Композиция кормовой добавки, содержащая Weissella cibaria WIKIM28 (идентификационный номер KCCM11879P) или его культуру в качестве активного ингредиента.