РАСТИТЕЛЬНЫЙ СБОР C АНТИОКСИДАНТНЫМ, АНТИКОАГУЛЯНТНЫМ И АНТИАГРЕГАНТНЫМ ДЕЙСТВИЯМИ Российский патент 2024 года по МПК A23L2/39 

Изобретение относится к фармацевтической промышленности, касается сбора лекарственных растений, которое может быть использовано как антиоксидантное, антикоагулянтное и антиагрегантное средство.

В настоящее время большое внимание уделяется использованию антиоксидантов для профилактики и лечения целого ряда заболеваний. Это обусловлено тем, что многие жизненно важные метаболические и физиологические процессы, протекающие в организме, тесно связаны со свободно-радикальным окислением. Снижение естественной антиоксидантной активности вызывает в организме значительные патологические изменения, которые являются причиной многих заболеваний, в том числе ишемических и гипоксических поражений кардиоваскулярной системы [Антиоксиданты - цитопротекторы в кардиологии / А.П. Голиков, В.Ю. Полумисков, В.П. Михин и др. // Кардиоваскулярная терапия и профилактика. - 2004. - №6, Часть 2. - С. 45-49.].

Кардиоваскулярные заболевания по данным Всемирной организации здравоохранения занимают одно из ведущих мест по распространенности и первое место по числу смертности среди населения [Профилактика хронических неинфекционных заболеваний: рекомендации / под. ред. С.А. Бойцова, А.Г. Чучалина. - М.: Государственный научно-исследовательский центр профилактической медицины, 2013. - 136 с]. Имеющийся клинический опыт и результаты экспериментальных исследований свидетельствуют о важной роли оксидантного стресса в формировании и прогрессировании сердечно-сосудистой патологии, необходимости ранней, планомерной и комплексной антиоксидантной коррекции [Свободнорадикальное окисление и сердечно-сосудистая патология: коррекция антиоксидантами / А.П. Голиков, С.А. Бойцов, В.П. Михин и др. // Лечащий Врач. - 2003. - №4.- С. 23-27.].

Также одним из направлений вторичной и первичной профилактики кардиоваскулярных заболеваний является проведение антиагрегантной и антикоагулянтной терапии, так как повышенная свертываемость крови является пусковым фактором развития инфарктов и инсультов.

В терапии сердечно-сосудистых заболеваний широко используются синтетические лекарственные средства. Однако, при выраженном терапевтическом эффекте, они имеют побочные действия, противопоказания и ограничения к применению, не всегда предотвращают развитие рецидива заболевания после их отмены.

Результаты отечественных и зарубежных научных работ доказывают целесообразность использования растительных антиоксидантных и антиагрегантных препаратов в комплексной терапии кардиоваскулярных заболеваний.

Преимуществом использования растительных многокомпонентных сборов является их малая токсичность, возможность длительного применения без побочного действия, широкий спектр фармакологического действия.

Известен сбор для профилактики первичного ишемического инсульта, содержащий корни солодки голой, плоды боярышника кроваво-красного, цветочные корзинки ромашки аптечной, цветки боярышника кроваво-красного, надземную часть герани луговой, надземную часть вероники длиннолистной, бутоны гвоздичного дерева, корневище аира болотного, корневище куркумы долгой, корень пиона уклоняющегося, корневище валерианы лекарственной, надземную часть донника белого, листья ивы белой, плоды тмина обыкновенного, надземную часть череды трехраздельной, надземную часть зверобоя продырявленного, надземную часть шалфея лекарственного, цветки лабазника вязолистного, надземную часть мяты полевой, надземную часть сушеницы болотной [патент RU 2542423, 2015]. Данный сбор обладает гиполипидемическим, антиагрегантным, вазопротективным и адаптогенным действием. Недостатками данного сбора является чрезмерная многокомпонентность (20 компонентов), которая увеличивает риск возникновения аллергических реакций и малая выраженность антиоксидантного действия.

Известен сбор, обладающий антигипоксическим и гипотензивным действиями, содержащий боярышника плоды, ромашки аптечной цветки, мяты перечной листья, шиповника плоды, аронии черноплодной плоды, лабазника вязолистного траву, клевера лугового цветки, манжетки обыкновенной листья и боярышника цветки [патент RU 2587722, 2016]. Недостатком данного сбора является то, что он в основном направлен только на снижение артериального давления.

Наиболее близким аналогом изобретения является сбор лекарственных растений, содержащий листья барвинка малого, листья мяты перечной, листья подорожника большого, плоды боярышника, плоды шиповника, плоды рябины обыкновенной, траву полыни обыкновенной, траву донника, траву сушеницы топяной, цветки ромашки аптечной, корни солодки голой, который обладает антигипоксическим, антиоксидантным, антиагрегантным и антикоагулянтным действиями [патент RU 2338550, 2008]. Недостатком лекарственного растительного сбора, выбранного в качестве прототипа, является содержание в своем составе листьев барвинка малого, содержащего алкалоиды и являющегося сильнодействующим.

Задачей изобретения является расширение арсенала отечественных лекарственных растительных средств путем создания растительного сбора с антиоксидантными, антиагрегантными, антикоагулянтными свойствами.

Технический результат при использовании изобретения - усиление лечебного действия за счет синергического эффекта 13 видов сырья.

Предлагаемый лекарственный растительный сбор содержит плоды боярышника, листья мяты перечной, листья подорожника большого, цветки ромашки аптечной, траву сушеницы топяной, плоды рябины обыкновенной, плоды шиповника, корни солодки голой, траву полыни обыкновенной, побеги боярышника, траву люцерны посевной, траву рукколы, луковицы чеснока при их массовом соотношении соответственно: 10:10:10:10:10:10:10:10:10:10:10:10:1.

Предлагаемый сбор обладает антиоксидантным действием, способен инактивировать продукты перекисного окисления липидов и восстанавливать клеточный метаболизм в сердце и сосудах за счет группы флавоноидов, преобладающих в сборе (гиперозид и рутин) и витамина С. Тиетановые производные, эфирные масла, полисахариды, сапонины, кумарины, фенолкислоты и флавоноиды обуславливают антикоагулянтные, антиагрегантные, спазмолитические, антиатеросклеротические свойства.

Предлагаемое соотношение входящих в сбор видов лекарственного сырья подобрано опытным путем и представляет собой наиболее целесообразное количественное сочетание компонентов.

Сбор получают путем механического смешивания предварительно высушенных и измельченных листьев мяты перечной, листьев подорожника большого, травы сушеницы, корней солодки, травы полыни обыкновенной, побегов боярышника, травы люцерны, травы рукколы, порошка луковиц чеснока и цельных цветков ромашки, плодов рябины обыкновенной, плодов шиповника, плодов боярышника. Травы, побеги и листья измельчают до частиц размером не более 5 мм. Корни и луковицы измельчают до частиц размером не более 3 мм. Во всех случаях измельченную пыль отсеивают сквозь сито с диаметром отверстий 0,18-0,2 мм.

Предлагаемый растительный сбор используют в виде водного извлечения - настоя. Настой из сбора готовят в соотношении 1:50. Для этого 4,0 г сбора заливают 210 мл воды (с учетом коэффициента водопоглощения 2,5) и нагревают на кипящей водяной бане 15 минут, затем выдерживают при комнатной температуре 45 минут, процеживают и доводят водой до первоначального объема. Настой принимают по 1/2 стакана 3-4 раза в день за 15-20 минут до еды в течение 21 дня.

Пример 1.

Антиагрегантная активность

Антиагрегантную активность настоя из сбора определяли по модифицированному методу Борна. Использовался анализатор тромбоцитов АТ-02, подключенный к компьютеру и оснащенный оригинальной программой производителя AT-02.EXE для регистрации результатов. Агрегацию тромбоцитов проводили под влиянием аденозиндифосфата (АДФ). Для оценки антиагрегантной активности растительного сбора в виде настоя 1:50 вносили в плазму крови из расчета 5% от объема реакционной смеси. В качестве препаратов сравнения использовали ацетилсалициловую кислоту (Производитель фармацевтическая фабрика Шандонг Ксинхуа Фармасьютикал Ко., ЛТД, Китай) и растительный сбор, взятый за прототип [патент RU 2338550, 2008]. Антиагрегационная активность ацетилсалициловой кислоты представлена для концентрации 2×10-3 М/л [Ураков А.Л., Самородов А.В., Камилов Ф.Х., Халиуллин Ф.А. Полирегионарная агрегатометрия крови пациентов с острым тромбозом, как потенциальная модель доклинических исследований новых корректоров системы гемостаза ex vivo // Регионарное кровообращение и микроциркуляция. - 2017. - Т. 16, №1 (61). - С. 65-71.]. Результаты исследования обработаны с применением статистического пакета Statistica 10,0 (StatSoft Inc, США). Проверку на нормальность распределения фактических данных выполняли с помощью критерия Шапиро-Уилка. Выявлено, что вид распределения полученных данных отличается от нормального, поэтому при дальнейшей работе использовались непараметрические методы. Дисперсионный анализ проводили с помощью критерия Краскела-Уоллиса. Критический уровень значимости р для статистических критериев принимали равным 0,05.

О воздействии настоя из сбора на процесс агрегации эритроцитов судили по влиянию на максимальную амплитуду агрегации, скорость агрегации (табл.1).

Согласно полученным данным настой из сбора уменьшает максимальную амплитуду и скорость агрегации, что говорит о его антиагрегантной активности.

В результате анализа влияния настоя из сбора на максимальную амплитуду и скорость агрегации установлено, что настой из сбора показал результат антиагрегантной активности выше, чем ацетилсалициловая кислота и сбор-прототип.

Пример 2.

Антикоагулянтная активность

Антикоагулянтную активность растительного сбора в виде настоя 1:50 определяли по протромбиновому времени, которое является наиболее чувствительным тестом для оценки образования тромбина [Гаранина Е.Н., Авдеева Н.А. Стандартизация и контроль качества исследований протромбинового времени (обзор литературы). Клиническая лабораторная диагностика. - 1994.- №6. - С.23-25.]. Использовался набор реагентов для определения протромбинового времени (Техпластин-тест) (ООО фирма «Технология-Стандарт», г. Барнаул). Для исследования использовали бедную тромбоцитами плазму, которая не должна иметь сгустки, гемолиз, избыток натрия цитрата. В качестве препаратов сравнения использовали гепарин в дозе 1 ЕД/мл [Синтез, противомикробная, антиагрегационная и антикоагуляционная активность новых производных изатина, содержащих гетероаннелированный имидазольный фрагмент. Богданов А.В., Сиразиева A.Р., Волошина А.Д., Абзалилов Т.А., Самородов А.В., Миронов B.Ф. Журнал органической химии. 2022. Т. 58. №3. С. 317-325.] и растительный сбор, взятый за прототип [патент RU 2338550, 2008]. Результаты исследования обработаны с применением статистического пакета Statistica 10,0 (StatSoft Inc, США). Проверку на нормальность распределения фактических данных выполняли с помощью критерия Шапиро-Уилка. Выявлено, что вид распределения полученных данных отличается от нормального, поэтому при дальнейшей работе использовались непараметрические методы. Данные представлены в виде медианы, 25 и 75 процентилей. Дисперсионный анализ проводили с помощью критерия Краскела-Уоллиса. Критический уровень значимости р для статистических критериев принимали равным 0,05 (табл. 2).

Таблица 2

Влияние сбора на факторы протромбинового комплекса (n=6)

Из результатов, представленных в таблице, видно, что настой из сбора достоверно снижает свертываемость крови, показатель которого выше чем у гепарина и сбора-прототипа.

Пример 3.

Антиоксидантная активность (метод 1)

Метод определения антиоксидантной активности основан на способности антиоксидантов ингибировать аутоокисление адреналина in vitro и тем самым предотвращать образование активных форм кислорода [Сирота, Т.В. Способ определения антиоксидантной активности супероксиддисмутазы и химических соединений / Т.В. Сирота. - Заявка №99103192 (003673), приоритет от 24.02.1999.].

В спектрофотометрическую кювету к 2 мл фосфатного буфера, рН 10,0, при комнатной температуре (не ниже 15°С), добавляют 100 мкл 0,1% раствора адреналина (230 мкМ). Происходит быстрое (в течение нескольких минут) аутоокисление адреналина, которое регистрируют не по образованию адренохрома, а по ранее появляющемуся продукту окисления адреналина, поглощающему при длине волны 347 нм. Далее в кюветы добавляется 0,01 мл исследуемого настоя и через 10 мин наблюдается изменение оптической плотности. Для учета влияния собственной окраски экстрактов, которые поглощают определенную длину волны в видимой части спектра, в качестве контрольной пробы использовали буферированный раствор настоя, без адреналина. В качестве препаратов сравнения использовали 5% раствор аскорбиновой кислоты и 0,05% раствор рутина. Расчет антиоксидантной активности проводят по формуле:

АОА=((До-Д)*100)/До; где

До - оптическая плотность раствора без экстракта;

Д - оптическая плотность с экстрактом.

Величина более 10% свидетельствует об имеющейся антиоксидантной активности (табл.3).

Исследуемый настой из сбора снижал аутокисление адреналина и образование свободных форм кислорода в исследуемых концентрациях от 66% до 73% (табл. 3), что свидетельствует об антиоксидантной активности предлагаемого сбора, превышающего эффект рутина (от 47 до 56%) и уступающего раствору аскорбиновой кислоты (от 79% до 81%).

Пример 4.

Антиоксидантная активность (метод 2)

Антиоксидантную активность определяли in vitro методом хемилюминесценции [Исследование антиоксидантной активности сбора «Кардиофит» хемилюминесцентным методом / А.П. Потанина, С.Р. Хасанова, Н.В. Кудашкина, P.P. Фархутдинов // Традиционная медицина. - 2013. - №5, Т.8. - С. 75-77.]. В качестве препаратов сравнения использовали 5% раствор аскорбиновой кислоты и 0,05% раствор рутина. Настой из сбора по 0,01; 0,1 и 0,5 мл вносили в разные модельные системы, в которых генерировалось образование активных форм кислорода и протекали реакции перекисного окисления липидов -наиболее распространенные процессы свободно-радикального окисления. В качестве модельной системы использовали 20 мл фосфатного буфера с добавлением цитрата натрия и люминола (рН=7,5). В качестве инициатора окисления добавляли 1 мл 50 мМ раствора железа (II) сульфата. Окисление солей железа ведет к появлению кислородных радикалов и сопровождается хемилюминесценцией, усиливающейся в присутствии люминола. Регистрацию свечения проводили в течение 5 минут.

В качестве контроля использовали модельные системы без добавления исследуемого сырья. Регистрацию свечения проводили на приборе «ХЛМ-003». Антиокислительную активность оценивали по уменьшению интенсивности свечения. В качестве препаратов сравнения использовали 5% раствор аскорбиновой кислоты и 0,05%) раствор рутина.

Согласно полученным данным (табл.4) настой из сбора снижал светосумму свечения в дозе 0,01 мл - 69,3%, в дозе 0,1 мл - 81,69, в дозе 0,5 мл - 88,1%), что не уступает активности аскорбиновой кислоте (от 50,1% до 90,7%) и выше, чем у рутина (55,6% до 85,5%).

Изобретение относится к биотехнологии. Предложен сбор лекарственных растений, обладающий антиоксидантным, антиагрегантным и антикоагулянтным действиями, содержащий плоды боярышника, листья мяты перечной, листья подорожника большого, цветки ромашки аптечной, траву сушеницы топяной, плоды рябины обыкновенной, плоды шиповника, корни солодки голой, траву полыни обыкновенной. Дополнительно содержит побеги боярышника, траву люцерны посевной, траву рукколы и луковицы чеснока. Изобретение направлено на получение продукта, обладающего антиоксидантным, антиагрегантным и антикоагулянтным действиями. 4 табл., 4 пр.

Сбор лекарственных растений, обладающий антиоксидантным, антиагрегантным и антикоагулянтным действиями, содержащий плоды боярышника, листья мяты перечной, листья подорожника большого, цветки ромашки аптечной, траву сушеницы топяной, плоды рябины обыкновенной, плоды шиповника, корни солодки голой, траву полыни обыкновенной, отличающийся тем, что дополнительно содержит побеги боярышника, траву люцерны посевной, траву рукколы, луковицы чеснока при массовом соотношении компонентов соответственно: 10:10:10:10:10:10:10:10:10:10:10:10:1.