СПОСОБ ВОССТАНОВЛЕНИЯ ЦЕЛОСТНОСТИ КОЖНОГО ПОКРОВА ПРИ ОБШИРНЫХ ГЛУБОКИХ ОЖОГАХ Российский патент 2024 года по МПК A61B17/00 A61B17/03 A61K35/35 A61P17/02 A61N7/00 

Область техники, к которой относится изобретение

Изобретение относится к медицине, а именно к хирургии (комбустиологии) и может быть использовано для биотехнологического восстановления кожного покрова при обширных глубоких ожогах кожи III степени.

Заявленный способ предусматривает выполнение аутодермопластики расщепленным сетчатым кожным трансплантатом с перфорацией ячеек 1:6 и более, с комбинированной трансплантацией минимально манипулированных аутологичных клеток стромально-васкулярной фракции жировой ткани (СВФ ЖТ) после предварительной ультразвуковой обработки (УЗО) ожоговой (раневой) поверхности. Изобретение направлено на повышение эффективности хирургического лечения глубоких, обширных ожогов за счет оптимизации приживления пересаженных кожных аутотрансплантатов, иммунных и репаративных процессов в дерме, включая восстановление поврежденной в результате травмы сосудистой сети.

Уровень техники

Актуальность предлагаемого способа определяется сложностью и длительностью лечения пациентов с обширными глубокими ожогами и выраженным дефицитом неповрежденной кожи, которую можно использовать в качестве донорских участков, большим процентом осложнений и высокой летальностью в данной группе пациентов. Одним из важных факторов лечения данных пациентов является эффективное пластическое восстановление целостности кожного покрова при дефиците неповрежденной кожи, улучшение функциональных и эстетических результатов лечения тяжелообожженных.

В настоящее время основным методом оперативного лечения является некрэктомия с одномоментной или отсроченной аутодермопластикой свободным, расщепленным кожным трансплантатом, как правило, перфорированным (патент RU 2434595). Однако при выполнении аутодермопластики в комбинации с перфорированным трансплантатом 1:6 отмечается высокий процент послеоперационных осложнений (до 40%) в виде регресса трансплантата (Алексеев А.А., Попов С.В. Комбустиология, М, 1999), а травматичность операций, кроме того, не позволяет выполнять одномоментное иссечение некротизированных тканей и аутодермопластику на площади более 15% поверхности тела, что, в свою очередь, ведет к многоэтапным хирургическим вмешательствам.

Известен способ лечения раны (RU 2023424), основанный на том, что после хирургической обработки раны на ее поверхность наносят готовый трансплантат культуры клеток фибробластов человека. После приживления клеток фибробластов - образования монослоя на ране - производят аутодермопластику, для чего используют расщепленный сетчатый аутотрансплантат с перфорацией 1:6 и более. Несмотря на эффективность, данная методика имеет ограничения для применения, которые сопряжены с необходимостью культивирования клеток в течение длительного времени и невозможностью их применения в широкой клинической практике в настоящее время (ФЗ от 23.06.2016 № 180-ФЗ «О биомедицинских клеточных продуктах»).

Известен способ восстановления кожного покрова (RU 2148970), предусматривающий выделение и последующее культивирование кератиноцитов на полимерной пористой подложке из оптического прозрачного полимера со сквозными порами диаметром D=0,01-3,0 мкм и плотностью пор N=(103-109)1/см² до формирования монослоя кератиноцитов. Недостатками данного способа являются его сложность, необходимость культивирования клеточной культуры, высокий процент послеоперационных осложнений.

Одним из перспективных направлений в современной медицине является применение минимально манипулированных аутологичных клеток стромально-васкулярной фракции жировой ткани для стимуляции процессов регенерации и восстановления целостности кожного покрова. Клетки СВФ ЖТ, располагающиеся вдоль капилляров, являются мультипотентными мезенхимальными (стромальными) стволовыми клетками ADSC (Adipose Derived Stem Cells). Повышенный регенераторный потенциал обеспечивается за счет многообразия клеточных форм с возможностью высокой степени их дифференцировки и пролиферации:

- преадипоциты <10% (дифференцирование адипоцитов);

- эндотелиальные клетки <10% (ангиогенез);

- жировые стволовые клетки <10% (дифференцирование в различные виды клеток);

- фибробласты <5% (формирование экстрацеллюлярного матрикса);

- перициты <5% (стабилизация кровеносных сосудов);

- моноциты, макрофаги <40%;

- другие клетки – 20%.

Установлено, что in vitro ADSC могут дифференцироваться непосредственно в эпителиальные клетки или в фибробласты и могут секретировать факторы роста, которые вызывают пролиферацию и миграцию кератиноцитов, фибробластов и эндотелиальных клеток. (Купша Е.И., Кочина Е.В., Гордейко Т.А. Актуальные аспекты применения стволовых клеток жировой ткани в регенеративной медицине; Медицинская Академия имени С. И. Георгиевского ФГАОУ ВО КФУ им. В. И. Вернадского, 2018).

Известен способ биотехнологического восстановления кожного покрова аллогенными стволовыми клетками человека при обширных глубоких ожогах кожи (RU 2687007). Пациенту проводят первичную обработку раны (ожога), инфузионно-трансфузионную, антибактериальную, десенсибилизирующую терапию. При стабилизации состояния пациента выполняют некрэктомию раны с одновременным забором отрезка здоровой кожи пациента нужного размера. Субфасциально, внутримышечно и по периметру ожога в зону глубокого ожога кожи вводят суспензию мезенхимальных стволовых клеток и проводят аутодермопластику раны. Суспензию, содержащую 1 млн клеток в 1 мл суспензии, вводят инъекционно внутрикожно и внутримышечно после выполнения ранней некрэктомии и одномоментной аутодермопластики (на 2-3 сутки после травмы), дозировка составляет до 0,5 мл на 1 см². Инъекции осуществляют по периметру раны и субфасциально под пересаженный трансплантат. Предлагаемый способ может быть воспроизведен с применением суспензии аллогенных мезенхимальных стволовых клеток, полученной из жировой ткани доноров.

Однако использование аллогенного материала может сопровождаться развитием иммунологических реакций и потребовать проведения иммуносупрессивной терапии, что зачастую недопустимо у пациентов с тяжелой ожоговой травмой. Кроме того, получение и использование тканевой суспензии сопряжено с действующим Российским законодательством, которое ограничивает применение аллогенных клеток. С целью возможности создания безопасной клеточной суспензии из аллогенного материала необходимо проведение культивирования клеток, что также в настоящее время ограниченно действующим законодательством (ФЗ от 23.06.2016 № 180-ФЗ «О биомедицинских клеточных продуктах»). Кроме того, субфасциальное и внутримышечное введение предложенной суспензии с содержанием аллогенных адипогенных мезенхимальных стволовых клеток в большей степени оказывает паракринный эффект в области введения (мышечная ткань и субфасциальное пространство) и не объясняет, каким образом качественное и количественное содержание клеток влияет на стимуляцию репаративных процессов в зоне пересаженных аутотрансплантатов у больных с обширными глубокими ожогами.

Наиболее близким к заявленному решению является способ лечения пациентов с глубокими термическими ожогами в комплексной терапии (RU 2668801), включающий использование клеток стромально-васкулярной фракции жировой ткани. Во время проведения плановых хирургических обработок ожоговых поверхностей проводят забор жировой ткани в нижней трети передней брюшной стенки шприцевой липосакцией, из полученного липоаспирата выделяют стромально-васкулярную фракцию жировой ткани путем ферментативной обработки и непосредственно во время хирургической процедуры (аутодермопластики) полученную суспензию в количестве 15×10⁶ или 10×10⁶ в объеме 2-4 мл жизнеспособных клеток стромально-васкулярной фракции жировой ткани вводят в 10-15 точек вокруг каждой раневой поверхности, что улучшает результат операции. Однако данный способ основан на использовании для аутодермопластики неперфорированных кожных трансплантатов, что делает его неприменимым для лечения пациентов с обширными глубокими термическими ожогами и выраженным дефицитом донорских участков (неповрежденной кожи). Ферментативное выделение аутологичных клеток стромально-васкулярной фракции из липоаспирата требует добавления дорогостоящих специальных ферментативных растворов с необходимостью их последующей деактивации, что увеличивает длительность процесса выделения клеток. Кроме того, обкалывание раневых дефектов по периферии при обширных ожогах не позволяет добиться стимуляции репаративного процесса, ангиогенеза на всей площади раневой (ожоговой) поверхности, где была выполнена аутодермопластика.

Таким образом, поиск новых способов лечения обширных и глубоких ожогов, в т.ч. с использованием аутологичных клеток стромально-васкулярной фракции жировой ткани, с разработкой комплекса параметров и характеристик, включая количество, формы и режимы введения клеток, обеспечивающих максимальный лечебный эффект, остается актуальной задачей.

Технической проблемой, решаемой заявленным изобретением, является разработка высокоэффективного способа биотехнологического восстановления кожного покрова при обширных глубоких ожогах кожи с достижением адекватного косметического и функционального результата.

Раскрытие сущности изобретения

Техническим результатом является сокращение сроков эпителизации пересаженных перфорированных аутотрансплантатов при введении в ожоговую рану аутологичных клеток СВФ ЖТ в процессе выполнения аутодермопластики в количестве от 15 млн. жизнеспособных клеток в 10-20 мл раствора с обработкой до 20% поверхности тела (до 3600 см² площади ожоговой раны).

Изобретение позволяет значительно сократить сроки восстановления целостности кожного покрова у пациентов с обширными ожогами и дефицитом донорских участков: начало эпителизации в перфорированных ячейках кожных трансплантатов в соотношении 1:6 и более отмечается к 3,4±1,6 суткам, а окончательное приживление трансплантата – к 9,8±1,4 суткам после операции.

Аутодермопластика расщепленным кожным трансплантатом перфорированным в соотношении 1:6 и более с комбинированным использованием аутологичных минимально манипулированных клеток жировой ткани с предварительной ультразвуковой обработкой ожоговых ран позволяет сократить сроки эпителизации пересаженных кожных трансплантатов, уменьшить число выполняемых аутодермопластик и процент послеоперационных осложнений, улучшить функциональные и эстетические результаты операции.

Технический результат достигается способом биотехнологического восстановления целостности кожного покрова у пациентов с обширными глубокими ожогами, включающим хирургическую обработку ожоговой раны с использованием ультразвукового воздействия (кавитации), аутодермопластику расщепленным перфорированным кожным трансплантатом и трансплантацию выделенных аутологичных клеток стромально-васкулярной фракции (СВФ) жировой ткани (ЖТ).

Отличием заявленного способа от наиболее близкого является:

- выполнение аутодермопластики расщепленным кожным трансплантатом толщиной 0,2-0,3 мм с перфорацией ячеек в соотношении 1:6 и более;

- получение, для трансплантации аутологичных клеток стромально-васкулярной фракции, не менее 100 мл липоаспирата жировой ткани, с последующим получением раствора в объеме не менее 10 мл (предпочтительно от 10 мл до 20 мл) с содержанием аутологичных клеток стромально-васкулярной фракции жировой ткани в количестве не менее 10×10⁶ (предпочтительно более 50×10⁶) и жизнеспособностью не менее 80%,

- последовательность обработки раневой поверхности раствором, содержащим аутологичные клетки СВФ ЖТ: сначала вводят часть раствора (примерно ¹/₂) в ожоговую рану посредством обкалывания раневой поверхности непосредственно через перфорационные ячейки расщепленного кожного трансплантата в пределах грануляционной ткани на глубину 0,5-1,0 мм с частотой не менее 1 инъекции на 2-3 см², объемом каждой инъекции не менее 0,05мл; и аэрозольное распыление оставшейся части раствора поверх пересаженного расщепленного перфорированного аутотрансплантата перед закрытием пересаженных аутотрансплантатов атравматическими повязками.

Ультразвуковое воздействие на ожоговую рану проводят с частотой ультразвуковых колебаний 25 кГц в течение времени из расчета: 30 сек воздействия на раневую поверхность площадью 350 см². Обкалывание раневой поверхности через перфорационные ячейки расщепленного аутотрансплантата производят инсулиновым шприцем с иглой 0,45 мм*12 мм 26 Gx¹/₂. Аэрозольное распыление раствора производят с использованием «флакона пульверизатора» с покрытием площади раневой поверхности до 3600 см².

Способ предусматривает выполнение аутодермопластики расщепленным кожным трансплантатом с перфорацией 1:6 и более с комбинированной трансплантацией минимально манипулированных аутологичных клеток стромально-васкулярной фракции жировой ткани после ультразвуковой обработки (УЗО) ожоговой (раневой) поверхности.

Согласно заявленному способу хирургическую обработку ожоговых ран (реципиентных участков), в качестве подготовительного этапа перед оперативным лечением - пересадкой аутотрансплантатов, проводят с использованием ультразвуковой кавитации при определенных режимах. В частности, при использовании ультразвукового аппарата SONOCA® выбирают режимы 2-3, соответствующие 60-80% мощности, и частоту ультразвуковых колебаний 25 кГц. Использование данных режимов является необходимым и достаточным для очищения раневых поверхностей от сохранившихся фокусов некроза, фибрина, удаления гипертрофически измененной грануляции, улучшения микроциркуляции в ране и окружающих тканях, при этом достигается декантаминация ожоговых поверхностей и профилактика развития в послеоперационном периоде инфекционных осложнений пересаженных аутотрансплантатов с перфорацией 1:6 и более (лизис, отторжение, ишемия аутотрансплантатов). За счет непосредственного бактерицидного эффекта удается добиться значимого уменьшения микробной обсемененности ожоговых ран. Воздействие низкочастотного ультразвука механически разрушает некротизированные ткани, дезинтегрирует и инактивирует макромолекулы протеаз на поверхности язв и гнойных ран, разрушает клетки микроорганизмов, улучшает микроциркуляцию посредством микромассажа тканей в зоне воздействия. Эффект ультразвуковой обработки обеспечивается за счет улучшения микроциркуляции, снижения бактериальной обсемененности и повышения местных защитных сил (активация фагоцитоза).

Кроме того, во время выполнения аутодермопластики расщепленным, перфорированным кожным трансплантатом в соотношении 1:6 и более, производят комбинированную трансплантацию выделенных аутологичных клеток стромально-васкулярной фракции жировой ткани: сначала инъекционным методом - через перфорационные ячейки интрадермально вводят от 0,05 до 0,1 мл раствора СВФ на 2-3 см² в объеме от 5 мл, и методом аэрозольного распыления минимально манипулированных аутологичных клеток СВФ ЖТ подготовленным раствором в объеме от 5 мл, содержащим не менее 10х10⁶ жизнеспособных клеток, что дает возможность произвести покрытие (обработку) до 20% п.т. ожоговых ран (приблизительно 3000 - 3600 см²). Соблюдение последовательности выполнения трансплантации аутологичных клеток СВФ ЖТ обеспечивает возможность предварительной адаптации и первичного моделирования пересаженного кожного трансплантата относительно раневого дефекта и здоровых тканей с фиксацией последнего к подлежащим тканям, что также позволяет контролировать и оптимизировать расход аутологичных клеток СВФ ЖТ.

Использование комбинированной (инъекционной и аэрозольной) методики трансплантации выделенных аутологичных клеток СВФ жировой ткани в сочетании с предварительной ультразвуковой обработкой раневой поверхности и аутодермопластикой расщепленным перфорированным кожным трансплантатом толщиной 0,2-0,3 мм с перфорацией в соотношении 1:6 и более, позволяет добиться эффективного снижения воспалительного процесса за счет паракринного эффекта в подлежащих тканях, обеспечивает максимальную стимуляцию регеративной функции дериватов кожи, сохранившихся как в структуре раневой поверхности, так и в пересаженных кожных трансплантатах, усиливает пролиферацию эндотелиальных клеток и стимуляцию функции ангиогенеза. Перечисленные эффекты обеспечивают более эффективное приживление перфорированных аутотрансплантатов с сокращением сроков восстановления целостности кожного покрова у пациентов с обширными глубокими ожогами при выраженном дефиците неповрежденной кожи.

Осуществление изобретения

Способ реализуют следующим образом.

Лечение заявленным способом начинают с момента стабилизации пациента и выхода из ожогового шока. Не более чем за 24 часа до запланированного оперативного лечения (аутодермопластики) производят забор жировой ткани путем шприцевой липосакции. Данная манипуляция может быть выполнена под местной анестезией в условиях перевязочной, либо под внутривенным наркозом. Выполняют небольшой (не более 0,5 см) разрез или прокол через анестезированную кожу и в подкожное пространство вводят увлажняющий раствор (раствор Кляйна, с добавлением лидокаина для местной анестезии и адреналина для сужения сосудов). Через 10 минут посредством 3-миллиметровой аспирационной канюли производят вакуумную (шприцевую) липоаспирацию. Объем аспирируемой жировой ткани составляет от 100 мл до 300 мл.

С целью выделения аутологичных регенеративных клеток из жировой ткани применялся механический (капиллярный) способ «очистки». Выделенную жировую ткань (липоаспират) подвергают первичному центрифугированию в течение пяти минут при 680g (2407 об/мин). В результате в шприцах образуется три фракции верхняя – представлена фрагментами разрушенных адипоцитов, средняя – жизнеспособными, интактными жировыми клетками, и нижняя – инфильтрационным раствором. Первую и третью фракции удаляют, а вторую пропускают через эмульсификатор. Для достижения гомогенной субстанции, между двумя шприцами объемом 10 мл или 20 мл устанавливают специальный капиллярный коннектор диаметром 1,4 мм и далее со скоростью примерно 10 мл/с осуществляют порядка 20 перегонов жира из одного шприца в другой. Полученную взвесь вновь центрифугируют при 2000g (4128 об/мин) оборотов в минуту в течение пяти минут. В результате повторного центрифугирования удается сформировать две фракции – верхнюю, представленную разрушенными адипоцитами, и нижнюю, представленную СВФ жировой ткани, которую переносят в отдельный шприц для дальнейшего применения.

В условиях операционной под наркозом первым этапом осуществляют ультразвуковую обработку ожоговых ран контактным методом (ультразвуковая кавитация), например, с применением ультразвукового аппарата SONOCA®. Выбирают режимы, соответствующие 60-80% мощности, с частотой ультразвуковых колебаний 25 кГц. Среднее время воздействия на 350 см² раневой поверхности составляет 30 сек. Таким образом, общая длительность процедуры при обработке глубоких обширных ожоговых ран не превышает 15-20 мин. При ультразвуковой обработке предпочтительным является использование насадки «копытце» со скоростью орошения рабочего раствора 1-2 капля в секунду. Данный режим обеспечивает очищение раневых поверхностей от сохранившихся фокусов некроза, фибрина, удаление гипертрофически измененной грануляции и стимулирование регенерационных процессов. При этом расход рабочего раствора антисептика (0,02% лавасепта) на 100 см² раневой поверхности составляет 5-10 мл (1-2 капли в сек.).

Вторым этапом производят закрытие раневой поверхности расщепленным (толщиной 0,2-0,3 мм) кожным аутотрансплантантом перфорированным в соотношении 1:6 и более с расправлением и адаптацией аутотрансплантата относительно краев раневого дефекта и последующей его фиксацией к подлежащим тканям, например, кожным степлером или подшиванием. После фиксации аутотрансплантата производят обкалывание раневой поверхности непосредственно через перфорационные ячейки в пределах грануляционной ткани на глубину 0,5-1,0 мм с частотой 1 инъекция на 2-3 см². Объем каждой инъекции составляет 0,05-0,1 мл. Инъекции производятся инсулиновым шприцем с иглой 0,45мм*12мм 26 Gx¹/₂, с помощью которой вводят раствор с содержанием жизнеспособных аутологичных клеток стромально-васкулярной фракции жировой ткани от 10х10⁶ до 200х10⁶. Следующий этап - трансплантация выделенных аутологичных клеток стромально-васкулярной фракции жировой ткани аэрозольным методом при помощи флакона с пульверизатором поверх пересаженного аутотрансплантата не менее 5 мл (5-10 мл). С целью закрытия расщепленного трансплантата используют атравматические раневые повязки. После чего накладывают фиксирующую повязку.

ПРИМЕР № 1

Пострадавший Ш. 36 лет. Через 24 дня от момента травмы переведен в ожоговый центр ФГБУ «НМИЦ хирургии им. А.В. Вишневского» с диагнозом: Ожоги пламенем волосистой части головы, шеи, туловища и верхних конечностей I-II-III степени 55% поверхности тела (III ст – 18% п.т.). Общее состояние пациента при поступлении тяжелое. Проведено комплексное обследование и назначена плановая терапия (антибактериальная, инфузионно-трансфузионная терапия, десенсибилизирующая терапия, антикоагулянты, дезогреганты, витаминотерапия). На 3 сутки после поступления (на 27 после травмы) пациенту в условиях перевязочной под внутривенным наркозом произведен забор липоаспирата в объеме 230 мл путем вакуумной (шприцевой) липоаспирации с целью последующей ферментативной обработки и выделения аутологичных клеток стромально-васкулярной фракции жировой ткани с получением раствора аутологичных клеток СВФ ЖТ в объеме 60 мл, содержащего жизнеспособные (87%) аутологичные клетки стромально-васкулярной фракции жировой ткани в количестве 63,4×10⁶. Подсчет количества клеток стромально-васкулярной фракции жировой ткани проводили с помощью автоматического счетчика клеток Counterss Invitrogen. Иммунологическую оценку (иммунофенотип) и жизнеспособность определяли методом проточной цитофлюориметрии. На 4 сутки после поступления в стационар (на 28 после травмы) в условиях операционной под наркозом произведена ультразвуковая обработка ожоговых ран (рабочий раствор 0,02% раствор левасепта) затем выполнена аутодермопластика расщепленным аутотрансплантатом толщиной 0,3 мм с перфорацией ячеек 1:6 на площади 19% (3500 см²) поверхности тела. Следующим этапом произведена инъекционная трансплантация выделенных аутологичных клеток стромально-васкулярной фракции жировой ткани (в растворе объемом 55 мл) - произведено обкалывание раневой поверхности (общей площадью 3400 см²) непосредственно через перфорационные ячейки в пределах грануляционной ткани на глубину 0,5 мм с частотой 1 инъекция на 3 см². Объем каждой инъекции составил 0,05 мл. Инъекция производилась инсулиновым шприцем с иглой 0,45мм*12мм 26 Gx¹/₂. Далее была произведена аэрозольная трансплантация оставшейся части выделенных аутологичных клеток стромально-васкулярной фракции жировой ткани поверх пересаженного аутотрансплантата на площади 19% поверхности тела (объем раствора для аэрозольной трансплантации составил 5мл). Проведено закрытие аутотрансплантата атравматическим покрытием (гразолинд), наложение фиксирующей повязки. На первой перевязке на 3 сутки отмечалась фиксация пересаженного аутотрансплантата с признаками краевой эпителизации в ячейках. На 6 сутки отмечена эпителизация пересаженного аутотрансплантата на 60%, на 9 сутки - восстановление целостности кожного покрова на 97%.

ПРИМЕР № 2

Пациент Г, 27 лет с ожогом левой и нижней конечностей пламенем I-II-III степени 40% п.т. (III ст. – 30% п.т.) На 14-е сутки после травмы, на фоне комплексного лечения выполнена хирургическая некрэктомия ожоговых ран. На 30-е сутки после травмы произведен забор липоаспирата в объеме 145 мл для получения стромально-васкулярной фракции. На 31-е сутки произведена ультразвуковая обработка гранулирующих ран нижних конечностей с одномоментной аутодермопластикой расщепленным трансплантатом толщиной 0,2 мм с коэффициентом перфорации 1:6 на площади 16% п.т. При этом на левой нижней конечности выполнялась аутодермопластика с комбинированным инъекционным и аэрозольным методом трансплантации аутологичных клеток стромально-васкулярной фракции (содержащиеся в 25 мл раствора, жизнеспособные 87%, в количестве 86,8 млн клеток в 25 мл) на площади 8% п.т.: инъекционная трансплантация выделенных аутологичных клеток СВФ ЖТ (в растворе объемом 20 мл) - произведено обкалывание раневой поверхности (общей площадью 1440 см²) непосредственно через перфорационные ячейки в пределах грануляционной ткани на глубину 0,5 мм с частотой 1 инъекция на 3 см². Объем каждой инъекции составил 0,05 мл. Инъекция производилась инсулиновым шприцем с иглой 0,45мм*12мм 26 Gx¹/₂. Далее была произведена аэрозольная трансплантация оставшейся части выделенных аутологичных клеток стромально-васкулярной фракции жировой ткани поверх пересаженного аутотрансплантата на площади 8% поверхности тела (объем раствора для аэрозольной трансплантации составил 5 мл). На правой нижней конечности для сравнительного изучения также на площади 8% п.т. выполнена традиционная аутодермопластика расщепленным кожным трансплантатом 1:6 без введения СВФ ЖТ. В первом случае, появление эпителизации в ячейках зафиксировано на 3-е сутки, тогда как на сравнительном участке начало эпителизации отмечалось на 4-е сутки. Полное приживление аутотрансплантата с эпителизацией перфорированных ячеек на участке с комбинированной трансплантацией СВФ отмечалась на 7-е сутки, тогда как во втором случае - на 11-е сутки. Послеоперационных осложнений (инфицирования и лизиса) отмечено не было.

Изобретение относится к медицине, а именно к хирургии, комбустиологии, и может быть использовано для биотехнологического восстановления кожного покрова при обширных глубоких ожогах кожи III степени. Ожоговую рану обрабатывают с помощью ультразвукового воздействия. Затем выполняют аутодермопластику расщепленным перфорированным кожным трансплантатом, толщиной 0,2-0,3 мм с перфорацией ячеек в соотношении 1:6 и более. Выполняют трансплантацию аутологичных клеток стромально-васкулярной фракции жировой ткани (СВФ ЖТ), с содержанием аутологичных клеток стромально-васкулярной фракции жировой ткани в количестве не менее 10×10⁶ и жизнеспособностью не менее 80%. Одну часть раствора вводят в перфорированные ячейки трансплантата на глубину 0,5-1,0 мм с частотой не менее 1 инъекции на 2-3 см², в дозе не менее 0,05 мл на инъекцию. Вторую часть раствора аэрозольно распыляют поверх трансплантата. Способ обеспечивает более эффективное приживление перфорированных аутотрансплантатов, что, в свою очередь, позволяет сократить сроки эпителизации пересаженных перфорированных аутотрансплантатов при введении в ожоговую рану аутологичных клеток СВФ ЖТ в процессе выполнения аутодермопластики, а также избежать послеоперационных осложнений. 4 з.п. ф-лы, 2 пр.

1. Способ биотехнологического восстановления целостности кожного покрова у пациентов с обширными глубокими ожогами, включающий хирургическую обработку ожоговой раны с использованием ультразвукового воздействия, аутодермопластику расщепленным перфорированным кожным трансплантатом и трансплантацию выделенных аутологичных клеток стромально-васкулярной фракции жировой ткани (СВФ ЖТ), отличающийся тем, что

аутодермопластику выполняют расщепленным кожным трансплантатом толщиной 0,2-0,3 мм с перфорацией ячеек в соотношении 1:6 и более, с его адаптацией относительно краев раневого дефекта и фиксацией к подлежащим тканям;

для трансплантации аутологичных клеток стромально-васкулярной фракции получают не менее 100 мл липоаспирата жировой ткани, с последующим получением раствора в объеме не менее 10 мл с содержанием аутологичных клеток стромально-васкулярной фракции жировой ткани в количестве не менее 10х10⁶ и жизнеспособностью не менее 80%, при этом часть раствора вводят в ожоговую рану посредством обкалывания раневой поверхности непосредственно через перфорационные ячейки расщепленного кожного трансплантата в пределах грануляционной ткани на глубину 0,5-1,0 мм с частотой не менее 1 инъекции на 2-3 см² объемом каждой инъекции не менее 0,05 мл; оставшуюся часть раствора аэрозольно распыляют поверх пересаженного расщепленного перфорированного кожного трансплантата.

2. Способ по п.1, отличающийся тем, что получают раствор с содержанием аутологичных клеток стромально-васкулярной фракции жировой ткани в количестве более 50х10⁶.

3. Способ по п.1, отличающийся тем, что обкалывание раневой поверхности через перфорационные ячейки расщепленного аутотрансплантата производят инсулиновым шприцем с иглой 0,45мм*12мм 26 Gx¹/₂.

4. Способ по п.1, отличающийся тем, что ультразвуковое воздействие на ожоговую рану проводят с частотой ультразвуковых колебаний 25 кГц в течение времени из расчета: 30 сек воздействия на раневую поверхность площадью 350 см².

5. Способ по п.1, отличающийся тем, что аэрозольное распыление раствора производят с использованием «флакона-пульверизатора» с покрытием площади раневой поверхности до 3600 см².