СПОСОБ СТИМУЛЯЦИИ ЗАЖИВЛЕНИЯ ОБШИРНЫХ ОЖОГОВ Российский патент 2025 года по МПК A61F2/10 A61K35/16 A61K35/28 A61P17/02 

Изобретение относится к области медицины, хирургии, в т.ч. комбустиологии, и может применяться при оказании медицинской помощи пострадавшим с обширными поверхностными, пограничными и глубокими ожогами кожи изолированно или в сочетании с аутодермотрансплантацией.

Известен способ клеточной терапии обширных ожогов путем трансплантации на ожоговую рану культуры культивированных клеток (пат. РФ №2230500).

Его недостатками являются:

1. необходимость заготовки клеточных линий для последующей их культивации и трансплантации;

2. необходимость изготовления специализированных синтетических или биодеградируемых подложек/носителей;

3. необходимость специализированного высокотехнологичного оборудования и расходных компонентов, используемых в процессе культивации и транспортировки;

4. отсутствие возможности одномоментного интраоперационного применения аутологичной клеточной культуры;

5. юридические ограничения возможности применения данного способа в связи с трансплантацией аллогенной клеточной популяции.

Известен способ лечения глубоких ожоговых ран с применением культивируемых аллогенных фибробластов эмбрионов животного на губчатой композиции 2% раствора ацетата коллагена и хитозана (пат. РФ №2372922).

Основным недостатком данного способа является использование клеточной культуры фибробластов эмбрионов животных, которая является аллогенной для человека в связи с видовыми различиями организмов. При этом возникает необходимость в изготовлении биодеградируемого носителя для последующей транспортировки и трансплантации. Возможности использования данного способа имеют юридические ограничения, так как используется аллогенный материал.

Известен способ восстановления целостности кожного покрова у тяжелообожженных с использованием культивируемых культур аллогенных кератиноцитов животных (пат. РФ №2010028).

Основным недостатком данного способа также является необходимость в культивации клеточной культуры и, как следствие, наличии специализированного оборудования и персонала. Также данный способ имеет юридические ограничения в связи с применением аллогенного материала.

Наиболее близким к заявляемому является способ биотехнологического восстановления кожного покрова аллогенными стволовыми клетками человека (пат. РФ №2687007).

Недостатком способа, выбранного в качестве прототипа, является необходимость культивации аллогенной культуры и ее транспортировки, а также возможность транслокации вирусов/микроорганизмов от донора. Также возможности применения данной методики имеют существенные юридические ограничения ввиду применения аллогенного материала.

Задачей настоящего изобретения является снижение затрат и ускорение процедуры при профилактике аутоиммунного ответа и риска осложнений.

Технический результат поставленной задачи достигается тем, что в способе стимуляции заживления обширных ожогов, заключающемся в стимуляции процесса эпителизации аутологичными материалами, осуществляют липоаспирацию жировой ткани пациента, центрифугируют содержимое шприца в течение 4 минут при 2500 об/мин для получения жировой ткани, производят ее механическую деструкцию путем проведения через коннектор до образования гомогенной массы, центрифугируют в течение 2 минут при 3000 об/мин и получают две фракции, центрифугируют цельную венозную кровь пациента в течение 10 минут при 2600 об/мин для получения плазмы, нижнюю фракцию центрифугированной гомогенной массы соединяют с плазмой крови пациента и полученную клеточную смесь трансплантируют на раневую поверхность.

Липоаспирация не требует специализированных навыков, а объем получаемого липоаспирата достаточен для проведения процедуры клеточной терапии.

Ускорение заживления ожоговой раны при трансплантации клеток стромально-васкулярной фракции в комбинации с аутоплазмой на ожоговую рану изолированно или в комбинации с аутодермотрансплантацией расщепленным перфорированным лоскутом достигается за счет выраженного паракринного эффекта данных популяций клеток и высокой концентрации биологически активных веществ (эпидермальный фактор роста, трансформирующий фактор роста и т.д.), способствующих стимуляции процессов репаративной регенерации в зоне дефекта и как следствие, повышению эффективности кожной пластики.

Все манипуляции с тканями и клетками пациента осуществляются в операционной во время хирургического вмешательства. При этом отсутствует необходимость в закупки дорогостоящих питательных сред и ферментативных препаратов, а также донорском материале.

При центрифугировании липоаспирата менее 4 минут и 2500 об/мин не происходит необходимого разделения содержимого на фракции. При этом сохраняющийся незначительный объем раствора для инфильтрации отрицательно влияет на жизнеспособность живых клеток в суспензии. Увеличение указанного параметра не приводит повышению эффективности манипуляции, но значительно удлиняет ее длительность. Понижение скорости центрифугирования не обеспечивает достаточного уровня фракционирования жировой ткани, тогда как ее увеличение повышает нагрузку на оборудование и не влияет на окончательный результат.

Оптимальная скорость центрифугирования составляет 3000 об/мин. Увеличение указанного параметра не приводит повышению эффективности манипуляции, но повышает изнашиваемость оборудования. Понижение скорости центрифугирования снижает абсолютное число регенераторных клеток в конечном продукте. На втором этапе с учетом установленной нами скорости центрифугирования, равной 3000 об/мин, выполнена оценка наиболее эффективной длительности манипуляции. Исходя из полученных данных оптимальным временем центрифугирования является 2 минуты. Его увеличение не дает значимого прироста абсолютного числа регенераторных клеток, а в некоторых популяциях приводит к его уменьшению. При этом удлиняется продолжительность манипуляции и повышается изнашиваемость оборудования. Снижение времени менее двух минут уменьшает абсолютное число регенераторных клеток.

Рекомендуемые параметры 10 минут при 2600 об/мин, заявляемые для изготовления необходимого объема аутоплазмы, являются рациональными с точки зрения трудозатрат и обеспечивают полное разделение биологической жидкости на фракции. Уменьшение длительности процедуры, как и скорости центрифугирования, не обеспечивает необходимого уровня фракционирования, тогда как их увеличение не влияет на окончательный результат.

Способ осуществляется следующим образом. Определяем анатомическую область пациента для проведения липоаспирации (передняя поверхность брюшной полости, бедра и т.д.). Присоединяем инфильтрационную канюлю к шприцу. После линейного разреза кожи до подкожно-жировой клетчатки подготовленной канюлей проводим ее инфильтрацию физиологическим раствором (NaCl 0,9%) с адреналином из расчета 100 мл физиологического раствора на 0,1 мл адреналина.

Объем инфильтрации должен составлять не более 150 мл для одной зоны. Присоединяем канюлю аспирационную к шприцу и выполняем липоаспирацию до максимального объема. Шприцы с липоаспиратом центрифугируются в течение 4 минут при 2500 об/мин. После первого этапа центрифугирования содержимое шприца разделяется на три фракции: верхняя - фрагменты разрушенных адипоцитов, средняя - жизнеспособные, интактные жировые клетки, нижняя - инфильтрационный раствор. Первая и последняя утилизируются.

Оба шприца с сохранившейся средней фракцией (жировая ткань) соединяются через коннектор диаметром 1,4 мм. Далее выполняется механическая деструкция содержимого шприцов путем переноса жировой ткани через коннектор до формирования гомогенной массы. Весь полученный состав переносится в один шприц и повторно центрифугируется в течение 2 минут при 3000 об/мин, в результате чего происходит разделение его содержимого на 2 фракции: верхняя (разрушенная жировая ткань) и нижняя (клетки стромально-васкулярной фракции). Первая утилизируется, тогда как вторая, объемом около 1,5 мл, остается в шприце и используется для объединения с плазмой пациента..

Третий шприц заполняется венозной кровью пациента и центрифугируется с использованием новых параметров - 10 минут при 2600 об/мин. Далее из него удаляются форменные элементы крови (красная фракция), а полученная плазма объединяется с центрифугированной клеточной суспензией. Полученная клеточная взвесь трансплантируется на рану под аутодермотрансплантат в случае комбинации данного метода с кожной пластикой или изолированно на рану.

Пример. Пациент А., 48 л., поступил в СПб НИИ СП им. И.И. Джанелидзе 24.03.2022 с диагнозом «Ожоговая болезнь. Ожог пламенем 37%(21%)/II-Ш степени туловища, верхних и нижних конечностей. Ожоговый шок I степени». На 31-е сутки лечения пациенту выполнена этапная аутодермопластика заявляемым способом. На первой перевязке (5-е сутки после операции) констатировано полное приживление аутодермотрансплантатов.

Заявляемый способ позволяет стимулировать самостоятельную эпителизацию ожоговых ран, повысить эффективность кожной пластики, выполнять аутодермотрансплантацию с коэффициентом перфорации 1 к 4 и выше, ускорить восстановление донорских ресурсов у тяжелообожженных, снизить частоту лизиса/отторжения трансплантатов в раннем послеоперационном периоде, снизить затраты на оказание медицинской помощи пациентам с ожогами кожи.

Способ не требует специальных навыков и оборудования.

Изобретение относится к медицине, а именно хирургии и комбустиологии, и может быть использовано для стимуляции заживления обширных ожогов. Осуществляют липоаспирацию жировой ткани, центрифугируют содержимое шприца в течение 4 минут при 2500 об/мин, забирают среднюю фракцию. Проводят её механическую деструкцию путем проведения через коннектор до образования гомогенной массы. Центрифугируют в течение 2 минут при 3000 об/мин и получают две фракции. Центрифугируют цельную венозную кровь пациента в течение 10 минут при 2600 об/мин. Нижнюю фракцию центрифугированной гомогенной массы соединяют с плазмой крови пациента и полученную клеточную смесь трансплантируют на раневую поверхность. Способ позволяет стимулировать самостоятельную эпителизацию ожоговых ран, повысить эффективность кожной пластики, ускорить восстановление донорских ресурсов, снизить частоту лизиса и отторжения трансплантатов в раннем послеоперационном периоде за счет совокупности применения наиболее оптимальных параметров жирового липоаспирата и плазмы крови. 1 пр.

Способ стимуляции заживления обширных ожогов, заключающийся в стимуляции процесса эпителизации аутологичными материалами, отличающийся тем, что осуществляют липоаспирацию жировой ткани пациента, центрифугируют содержимое шприца в течение 4 минут при 2500 об/мин, забирают среднюю фракцию, проводят её механическую деструкцию путем проведения через коннектор до образования гомогенной массы, центрифугируют в течение 2 минут при 3000 об/мин и получают две фракции, центрифугируют цельную венозную кровь пациента в течение 10 минут при 2600 об/мин для получения плазмы, нижнюю фракцию центрифугированной гомогенной массы соединяют с плазмой крови пациента и полученную клеточную смесь трансплантируют на раневую поверхность.