Способ получения аутологичного концентрата аспирата костного мозга Российский патент 2024 года по МПК A61K35/28 B01D21/26 C12N5/77 A61P19/02 

Изобретение относится к области медицины, а именно к травматологии и ортопедии, к способу получения аутологичного концентрата аспирата костного мозга и может быть использовано при лечении пациентов с ранними стадиями асептического некроза головки бедренной кости в условиях травматологических, ортопедических, хирургических и других стационарах.

Известен способ выделения мононуклеарных клеток из костного мозга человека, включающий проведение местной анестезии лидокаином области передне-верхней трети крыла подвздошной кости пациента, взятие аспирата костного мозга осуществляют в два шприца и отстаивают для осаждения эритроцитов, полученный раствор центрифугируют при 400g, затем собирают 2/3 клеточной взвеси, обедненной эритроцитами, и разводит в 2 раза гепаринизи-рованным фосфатно-забуференным физиологическим раствором с концентрацией гепарина 10ЕД/мл. и полученную смесь наслаивают на раствор HISTOPAQU1-1077 (SIGMA diagnostics) и центрифугируют в течение 10 минут с ускорением 400g, (патент РФ №2292895. МПК А 61К 35/28, 10.02.2007).

Известный способ при своем использовании обладает следующими недостатками:

- длительностью проведение процесса аспирации костного мозга,

- отсутствием информации о подсчете полученного количества жизнеспособных мононуклеарных клеток костного мозга для их использования в различных способах регенерационной клеточной терапии,

- необходимость использование дорогостоящего HISTOPAQU1-1077 (SIGMA diagnostics).

Известен способ получения костномозгового концентрата аспирацию костного мозга осуществляют из внутреннего мыщелка большеберцовой кости, осуществляют фильтрацию с помощью фильтра для гемотрансфузии, а центрифугирование проводят однократно, (см. патент РФ №2685687, МПК А61М, 22.04.2019).

Известный способ при своем использовании обладает следующими недостатками:

- использование крупнозернистого фильтра,

- травматичность для пациента места забора для аспирации костного мозга. Наиболее близким к заявляемому является известный способ получения ау-тологичного концентрата клеток костного мозга для лечения воспалительно-дегенеративных заболеваний в травматологии и ортопедии, включающий забор аспирата костного мозга путем выполнения доступа кзади от медиального гребня подвздошной кости, забор аспирата и его центрифугирование, (см. патент РФ №2763250, МПК А61В 17/56, 28.12.2021)

Недостатком известного способа при использовании является:

- получение аспирата с низким содержанием 0,01% жизнеспособных мононуклеарных клеток костного мозга,

- длительность процесса изготовления аспирата костного мозга,

- использование в процессе изготовления дорогостоящих материалов.

Задачей изобретения является создание способа получения аутологичного концентрата аспирата костного мозга.

Техническим результатом является увеличение количества клеток костного мозга в полученном концентрате аспирата, сокращение времени изготовления концентрата аспирата костного мозга, а также использование стандартного оборудования.

Технический результат при осуществлении изобретения достигается тем, что предложен способ получения аутологичного концентрата аспирата костного мозга, характеризующийся тем, что процедуру аспирации костного мозга выполняют в асептических условиях под местной или комбинированной анестезией из верхней задней ости подвздошной кости, после пальпации костных ориентиров заднего гребня подвздошной кости и крестцово-подвздошного сочленения производят проводят инфильтрацию мягких тканей и надкостницы верхнего заднего гребня подвздошной кости 0,5% раствором ропивакаина 20-25 мл, затем игольчатым скальпелем выполняют разрез кожного покрова длиной 0,3-0,4 см, через который вводят иглу для трепанобиопсии, предварительно промытую раствором гепарина, пройдя кортикальный слой на глубину 2-2,5 см, удаляют мандрен, присоединяют шприц, предварительно заполненный в качестве антикоагулянта раствором гепарина 500ЕД на 1 мл костного мозга, после чего осуществляют аспирацию костного мозга в объеме 80-200 мл, полученный костный мозг помещают в пробирки объемом 50 мл, после чего центрифугируют при 400g по 2 минуты от 2 до 6 раз с визуальным контролем разделения материала на фракции с оседанием эритроцитов до уровня 25-30 мл, после разделения костного мозга на фракции со дна каждой пробирки шприцем с длинной иглой 18G удаляют осадок эритроцитов объемом 20-25 мл, а оставшийся материал центрифугируют 10-15 минут при 700-1000g, шприцем с длинной иглой из каждой пробирки удаляют поверхностный слой плазмы, не допуская аспирации осадка, оставшийся концентрат аспирата костного мозга из пробирок собирают с помощью длинной иглы 18G в два 10 мл шприца объемом 5-7 мл в каждый шприц для последующего введения в очаг некроза.

Способ осуществляется следующим образом. Процедуру аспирации костного мозга выполняют в асептических условиях под местной или комбинированной анестезией из верхней задней ости подвздошной кости. После пальпации костных ориентиров заднего гребня подвздошной кости и крестцово-подвздошного сочленения производят инфильтрацию мягких тканей и надкостницы верхнего заднего гребня подвздошной кости 0,5% раствором ропива-каина 20-25 мл.

Игольчатым скальпелем выполняют разрез кожного покрова длиной 0,3-0,4 см, через который вводят иглу для трепанобиопсии, предварительно промытую раствором гепарина, пройдя кортикальный слой на глубину 2-2,5 см, удаляют мандрен, присоединяют шприц, предварительно заполненный в качестве антикоагулянта раствором гепарина 500ЕД на 1 мл костного мозга.

Осуществляют аспирацию костного мозга в объеме 80-200 мл. Полученный костный мозг помещают в пробирки объемом 50 мл, после чего центрифугируют при 400g по 2 минуты от 2 до 6 раз с визуальным контролем разделения материала на фракции с оседанием ритроцитов до уровня 25-30 мл.

После разделения костного мозга на фракции со дна каждой пробирки шприцем с длинной иглой 18G удаляют осадок эритроцитов объемом 20-25 мл. Оставшийся материал центрифугируют 10-15 минут при 700-1000g. Шприцем с длинной иглой из каждой пробирки удаляют поверхностный слой плазмы, не допуская аспирации осадка, оставшийся концентрат аспирата костного мозга из пробирок собирают с помощью длинной иглы 18G в два 10 мл шприца в объеме 5-7 мл в каждый шприц для последующего введения в очаг некроза.

Подсчет клеток осуществляли на гематологическом анализаторе SYSMEX XT-2000i. В качестве критериев оценки эффективности концентрирования были выбраны показатели общего количества лейкоцитов (WBC). а также, количества мононуклеарных клеток костного мозга как сумма количества лимфоцитов (LYMPH) и моноцитов (MONO).

Среди существенных признаков, характеризующий предложенный способ получения аутологичного получения концентрата аспирата костного мозга, отличительными являются:

- аспирацию костного мозга выполняют в асептических условиях под местной или комбинированной анестезией из верхней задней ости подвздошной кости.

- после пальпации костных ориентиров заднего гребня подвздошной кости и крестцово-подвздошного сочленения производят инфильтрацию мягких тканей и надкостницы верхнего заднего гребня подвздошной кости 0,5% раствором ропивакаина 20-25 мл,

- игольчатым скальпелем выполняют разрез кожного покрова длиной 0,3-0,4 см, через который вводят иглу для трепанобиопсии, предварительно промытую раствором гепарина,

- пройдя кортикальный слой на глубину 2-2,5 см, удаляют мандрен, присоединяют шприц, предварительно заполненный в качестве антикоагулянта раствором гепарина 500ЕД на 1 мл костного мозга,

- осуществляют аспирацию костного мозга в объеме 80-200 мл и полученный костный мозг помещают в пробирки объемом 50 мл, после чего центрифугируют при 400g по 2 минуты от 2 до 6 раз с визуальным контролем разделения материала на фракции с оседанием эритроцитов до уровня 25-30 мл,

- после разделения костного мозга на фракции со дна каждой пробирки шприцем с длинной иглой 18G удаляют осадок эритроцитов объемом 20-25 мл, а оставшийся материал центрифугируют 10-15 минут при 700-1000g.

- шприцем с длинной иглой из каждой пробирки удаляют поверхностный слой плазмы, не допуская аспирации осадка,

- оставшийся концентрат аспирата костного мозга из пробирок собирают с помощью длинной иглы 18G в два 10 мл шприца в объеме 5-7 мл в каждый шприц для последующего введения в очаг некроза.

Клинические исследования предложенного способа получения аутологиче-ского концентрата аспирата костного мозга показали его высокую эффективность. Предложенный способ получения аутологического концентрата аспирата костного мозга обеспечил получение увеличенного количества клеток костного мозга в полученном концентрате аспирата при подсчете на гематологическом анализаторе. В результате среднее значение общего количества лейкоцитов в костном мозге до центрифугирования составило 31,84 10⁹/л, после - 151,16 10⁹/л, а среднее количество мононуклеарных клеток в костном мозге до центрифугирования составило 6,43 10⁹/л, а после - 31,87 10⁹/л, а достигнуто сокращение времени изготовления концентрата аспирата костного мозга, а также использование для изготовления аспирате костного мозга стандартного оборудования.

Изобретение поясняется чертежом, где на фиг.1 показано 1 - помещение аспирата нативного костного мозга 50 мл пробирки, 2- первое центрифугирование костного мозга с отделением эритроцитов, 3- аспирация эритроцитов с дна пробирок, 4- второе центрифугирование костного мозга с отделением плазмы, 5- аспирация поверхностного слоя плазмы в пробирки и 6- аспирация полученного концентрата для последующего введения пациенту.

Реализация предложенного способа получения аутологичного концентрата аспирата костного мозга иллюстрируется следующими клиническими примерами.

Пример 1. Пациент К. 38 лет, поступил в 13 травматолого-ортопедическое отделение ФГБУ «НМИЦ ТО им. Н.Н. Приорова» с диагнозом: «Идиопатический асептический некроз головок бедренных костей».

Выполнили лечение асептического некроза головки бедренной кости с введением концентрата костного мозга. Концентрат костного мозга приготовили с использованием предложенного способа. Процедуру аспирации костного мозга выполнили в асептических условиях под комбинированной анестезией из верхней задней ости подвздошной кости. После пальпации костных ориентиров заднего гребня подвздошной кости и крестцово-подвздошного сочленения произвели инфильтрацию мягких тканей и надкостницы верхнего заднего гребня подвздошной кости 0,5% раствором ропивакаина 25 мл.

Игольчатым скальпелем выполнили разрез кожного покрова длиной 0,4 см, через который ввели иглу для трепанобиопсии, предварительно промытую раствором гепарин. Пройдя кортикальный слой на глубину 2,5 см, удалили мандрен, присоединили шприц, предварительно заполненный в качестве антикоагулянта раствором гепарина 500ЕД на 1 мл костного мозга.

Осуществили аспирацию костного мозга в объеме 140 мл. Полученный костный мозг поместили в 3 пробирки объемом 50 мл, после чего центрифугировали при 400g по 2 минуты 4 раза с визуальным контролем разделения материала на фракции с оседанием эритроцитов до уровня 25 мл.

После разделения костного мозга на фракции со дна каждой пробирки шприцем с длинной иглой 18G удалили осадок эритроцитов объемом 20 мл. Оставшийся материал центрифугируют 10 минут при 1000g. Шприцем с длинной иглой из каждой пробирки удаляют поверхностный слой плазмы, не допуская аспирации осадка, оставшийся концентрат аспирата костного мозга из пробирок собирают с помощью длинной иглы 18G в два 10 мл шприца в объеме 5-7 мл в каждый шприц для последующего введения в очаг некроза.

Подсчет клеток осуществили на гематологическом анализаторе SYSMEX XT-2000L В качестве критериев оценки эффективности концентрирования были выбраны показатели общего количества лейкоцитов (WBC), которые составили 151,16 10⁹/л, количество мононуклеарных клеток костного мозга составило 30,12 10⁹/л.

Пример 2. Пациент В. 30 лет, поступил в 13 травматолого-ортопедическое отделение ФГБУ «НМИЦ ТО им. Н.Н. Приорова» с диагнозом «Идиопатический асептический некроз с поражением головок бедренных костей».

Выполнили лечение асептического некроза головки бедренной кости с введением концентрата костного мозга. Концентрат костного мозга приготовили с использованием предложенного способа. Процедуру аспирации костного мозга выполнили в асептических условиях под местной анестезией из верхней задней ости подвздошной кости. После пальпации костных ориентиров заднего гребня подвздошной кости и крестцово-подвздошного сочленения произвели инфильтрацию мягких тканей и надкостницы верхнего заднего гребня подвздошной кости 0,5% раствором ропивакаина 20 мл.

Игольчатым скальпелем выполнили разрез кожного покрова длиной 0,3 см, через который ввели иглу для трепанобиопсии, предварительно промытую раствором гепарина. Пройдя кортикальный слой на глубину 2,0 см, удалили мандрен, присоединили шприц, предварительно заполненный в качестве антикоагулянта раствором гепарина 500ЕД на 1 мл костного мозга.

Осуществили аспирацию костного мозга в объеме 80 мл. Полученный костный мозг поместили в 2 пробирки объемом 50 мл, после чего центрифугировали при 400g по 2 минуты 6 раз с визуальным контролем разделения материала на фракции с оседанием эритроцитов до уровня 27 мл.

После разделения костного мозга на фракции со дна каждой пробирки шприцем с длинной иглой 18G удалили осадок эритроцитов объемом 22 мл. Оставшийся материал центрифугируют 13 минут при 850g. Шприцем с длинной иглой из каждой пробирки удаляют поверхностный слой плазмы, не допуская аспирации осадка, оставшийся концентрат аспирата костного мозга из пробирок собирают с помощью длинной иглы 18G в два 10 мл шприца в объеме 5-7 мл в каждый шприц для последующего введения в очаг некроза.

Подсчет клеток осуществили на гематологическом анализаторе SYSMEX XT-2000i. В качестве критериев оценки эффективности концентрирования были выбраны показатели общего количества лейкоцитов (WBC), которые составили 144,86 10⁹/л, количество мононуклеарных клеток костного мозга составило 29,7 10⁹/л.

Пример 3. Пациентка В. 32 года, поступила в 13 травматолого-ортопе-дическое отделение ФГБУ «НМИЦ ТО им. Н.Н. Приорова» с диагнозом «Идиопатический асептический некроз головок бедренных костей»

Выполнили лечение асептического некроза головки бедренной кости с введением концентрата костного мозга. Концентрат костного мозга приготовили с использованием предложенного способа. Процедуру аспирации костного мозга выполнили в асептических условиях под местной анестезией из верхней задней ости подвздошной кости. После пальпации костных ориентиров заднего гребня подвздошной кости и крестцово-подвздошного сочленения произвели инфильтрацию мягких тканей и надкостницы верхнего заднего гребня подвздошной кости 0,5% раствором ропивакаина 23 мл.

Игольчатым скальпелем выполнили разрез кожного покрова длиной 0,35 см, через который ввели иглу для трепанобиопсии, предварительно промытую раствором гепарина. Пройдя кортикальный слой на глубину 2,3 см, удалили мандрен, присоединили шприц, предварительно заполненный в качестве антикоагулянта раствором гепарина 500ЕД на 1 мл костного мозга.

Осуществили аспирацию костного мозга в объеме 200 мл. Полученный костный мозг поместили в 4 пробирки объемом 50 мл, после чего центрифугировали при 400g по 2 минуты 2 раз с визуальным контролем разделения материала на фракции с оседанием эритроцитов до уровня 30 мл.

После разделения костного мозга на фракции со дна каждой пробирки шприцем с длинной иглой 18G удалили осадок эритроцитов объемом 25 мл. Оставшийся материал центрифугируют 15 минут при 700g. Шприцем с длинной иглой из каждой пробирки удаляют поверхностный слой плазмы, не допуская аспирации осадка, оставшийся концентрат аспирата костного мозга из пробирок собирают с помощью длинной иглы 18G в два 10 мл шприца в объеме 5-7 мл в каждый шприц для последующего введения в очаг некроза.

Подсчет клеток осуществили на гематологическом анализаторе SYSMEX XT-2000i. В качестве критериев оценки эффективности концентрирования были выбраны показатели общего количества лейкоцитов (WBC), которые составили 148,28 10⁹/л, количество мононуклеарных клеток костного мозга составило 32,56 10⁹/л.

Изобретение относится к области медицины, а именно к способу получения аутологичного концентрата аспирата костного мозга. Способ получения аутологичного концентрата аспирата костного мозга характеризуется тем, что процедуру аспирации костного мозга выполняют в асептических условиях под местной или комбинированной анестезией из верхней задней ости подвздошной кости, после пальпации костных ориентиров заднего гребня подвздошной кости и крестцово-подвздошного сочленения производят инфильтрацию мягких тканей и надкостницы верхнего заднего гребня подвздошной кости 0,5% раствором ропивакаина 20-25 мл, затем игольчатым скальпелем выполняют разрез кожного покрова длиной 0,3-0,4 см, через который вводят иглу для трепанобиопсии, предварительно промытую раствором гепарина, пройдя кортикальный слой на глубине 2-2,5 см, удаляют мандрен, присоединяют шприц, предварительно заполненный в качестве антикоагулянта раствором гепарина 500 ЕД на 1 мл костного мозга, после чего осуществляют аспирацию костного мозга в объеме 80-200 мл, полученный костный мозг помещают в пробирки объемом 50 мл, после чего центрифугируют при 400g по 2 минуты от 2 до 6 раз с визуальным контролем разделения материала на фракции с оседанием эритроцитов до уровня 25-30 мл, после разделения костного мозга на фракции со дна каждой пробирки шприцем с длинной иглой 18G удаляют осадок эритроцитов объемом 20-25 мл, а оставшийся материал центрифугируют 10-15 минут при 700-1000g, шприцем с длинной иглой из каждой пробирки удаляют поверхностный слой плазмы, не допуская аспирации осадка, оставшийся концентрат аспирата костного мозга из пробирок собирают с помощью длинной иглы 18G в два 10-мл шприца в объеме 5-7 мл в каждый шприц для последующего введения в очаг некроза. Вышеописанный способ позволяет получать концентрат аспирата костного мозга с увеличенным количеством клеток костного мозга и сократить время изготовления концентрата аспирата костного мозга. 1 ил., 3 пр.

Способ получения аутологичного концентрата аспирата костного мозга, характеризующийся тем, что процедуру аспирации костного мозга выполняют в асептических условиях под местной или комбинированной анестезией из верхней задней ости подвздошной кости, после пальпации костных ориентиров заднего гребня подвздошной кости и крестцово-подвздошного сочленения производят инфильтрацию мягких тканей и надкостницы верхнего заднего гребня подвздошной кости 0,5% раствором ропивакаина 20-25 мл, затем игольчатым скальпелем выполняют разрез кожного покрова длиной 0,3-0,4 см, через который вводят иглу для трепанобиопсии, предварительно промытую раствором гепарина, пройдя кортикальный слой на глубине 2-2,5 см, удаляют мандрен, присоединяют шприц, предварительно заполненный в качестве антикоагулянта раствором гепарина 500 ЕД на 1 мл костного мозга, после чего осуществляют аспирацию костного мозга в объеме 80-200 мл, полученный костный мозг помещают в пробирки объемом 50 мл, после чего центрифугируют при 400g по 2 минуты от 2 до 6 раз с визуальным контролем разделения материала на фракции с оседанием эритроцитов до уровня 25-30 мл, после разделения костного мозга на фракции со дна каждой пробирки шприцем с длинной иглой 18G удаляют осадок эритроцитов объемом 20-25 мл, а оставшийся материал центрифугируют 10-15 минут при 700-1000g, шприцем с длинной иглой из каждой пробирки удаляют поверхностный слой плазмы, не допуская аспирации осадка, оставшийся концентрат аспирата костного мозга из пробирок собирают с помощью длинной иглы 18G в два 10-мл шприца в объеме 5-7 мл в каждый шприц для последующего введения в очаг некроза.