Низкомолекулярный миметик нейротрофина-3 в качестве средства для снижения болевой реакции и восстановления чувствительности при периферической нейропатии Российский патент 2024 года по МПК A61K38/05 A61P29/02 A61P3/10 A61P25/00 

Изобретение относится к медицине, в частности, к фармакологии, и касается применения известных низкомолекулярных миметиков нейротрофина-3 в качестве средств для снижения болевой реакции и восстановления чувствительности при периферической нейропатии.

Диабетическая дистальная сенсомоторная полинейропатия, обычно называемая периферической диабетической нейропатией (ПДН), поражает около 50% пациентов с сахарным диабетом в США и является основной причиной инвалидизации [1]. Пациенты с ПДН часто описывают такие аномальные ощущения, как парестезии, аллодинии, гипералгезию и спонтанные боли [2]. Согласно данным медицинской статистики, распространенность боли колеблется от 40% до 50% у пациентов с диабетической нейропатией [3]. Прогрессирующая ПДН клинически проявляется повышением порогов реакции на механическое и термическое раздражение, которое нередко достигает полной потери чувствительности в сочетании с дегенерацией всех типов волокон в периферическом нерве. Диабетические нейропатии неоднородны, и в них по-разному вовлекаются крупные миелинизированные волокна, которые обеспечивают проприоцепцию, восприятие прикосновения/давления и двигательную иннервацию, а также мелкие, тонкие или немиелинизированные волокна, обеспечивающие восприятие температуры и боли наряду с вегетативной функцией.

За исключением двух патогенетических препаратов, ингибитора альдозоредуктазы эпалрестата, одобренного в Японии, и антиоксиданта липоевой кислоты, одобренного в нескольких странах, современные терапевтические возможности в отношении ПДН ограничены симптоматическим лечением трициклическими соединениями, селективными ингибиторами обратного захвата серотонина и норадреналина, противосудорожными средствами, опиатами, капсаицином и стабилизаторами мембран [4]. Недавно появилось несколько новых симптоматических препаратов, в частности, ингибитор обратного захвата серотонина и норадреналина дулоксетин и два противосудорожных средства, прегабалин и габапентин, которые одобрены для лечения диабетической нейропатической боли в Соединенных Штатах, однако их применение часто связано с такими проблемами, как недостаточная эффективность, развитие неблагоприятных побочных эффектов и высокая стоимость лечения.

При экспериментальном моделировании диабета у грызунов описаны одно или несколько проявлений аномальных ощущений и боли, а именно: 1) термическая гипералгезия как эквивалент клинического феномена, описанного при ранней ПДН [5, 6]; 2) термическая гипоалгезия, обычно присутствующая при прогрессирующей форме ПДН [7, 8]; 3) механическая гипералгезия, эквивалент боли при надавливании на ранней стадии ПДН [5, 9]; 4) механическая гипоалгезия, эквивалент потери чувствительности к механическим раздражителям при прогрессирующей форме ПДН [10, 11]; 5) тактильная аллодиния, болезненное восприятие легкого прикосновения [12]. У крыс и мышей со сформированным сахарным диабетом обычными являются проявления как болезненной, так и нечувствительной нейропатии (гипестезия), или только нечувствительной нейропатии (гипестезия).

При моделировании диабета в опытах in vivo наблюдается снижение доступности специфических нейротрофических факторов, их рецепторов или связывающих их белков, которые могут быть следствием метаболических нарушений. В настоящее время наиболее подробно изучен вопрос о роли дефицита нейротрофина-3 (NT-3), принадлежащего семейству нейротрофинов [13], в патогенезе диабетической нейропатии, для которой характерны дегенерация, демиелинизация и атрофия аксонов в сочетании с нарушением регенерации аксонов в крупных нервных волокнах [14]. В экспериментах на крысах на модели стрептозотоцинового (СТЗ) диабета отмечено снижение содержания NT-3 на 50% и экспрессии мРНК тирозинкиназного рецептора С-подтипа (TrkC) на 20% в седалищном нерве [15]. Снижение содержания NT-3 отмечено также в шванновских клетках нейронов на модели СТ3-диабета у мышей линии С57 В1/6 [16].

Впервые Siuciak J.A. et al. (1994) продемонстрировали антиноцицептивные свойства NT-3 и BDNF при внутримозговом введении у крыс на спинальном уровне (тест «отдергивание хвоста») [17]. В дальнейшем Malcangio М. et al (1997) показали способность NT-3 и NGF индуцировать изменение порога ноцицептивной реакции, связанной со снижением высвобождения субстанции Р в спинном мозге у крыс [18]. Известно, что NT-3 и фактор роста нервов (NGF) относятся к важнейшим регуляторами в сенсорных нейронах. Повышенная экспрессия РАСАР («полипептид, активирующий аденилатциклазу гипофиза») в поврежденных нейронах ослабляется вследствие инфузии NT-3, что позволяет предположить роль NT-3 в возвращении "поврежденного фенотипа" ноцицепторов обратно к "интактному фенотипу". Так, например, экзогенный NT-3 действует как антагонист по отношению к NGF в модуляции активности ноцицепторов в интактных нейронах и подавляет термическую гипералгезию, вызванную хроническим повреждением седалищного нерва [19]. В работе Wilson-Gerwing TD. et al. (2005) показана способность NT-3 при интратекальном введении подавлять термическую гипералгезию, ассоциированную с периферической нейропатической болью [20]. Предполагается, что терапия нейротрофическими факторами, специально нацеленная на различные популяции нервных волокон, может войти в арсенал средств для лечения диабетической полинейропатии (фиг. 1).

Учитывая трудности доставки полноразмерных нейротрофинов в ЦНС при системном введении, на основе кристаллической структуры NT-3 был разработан дизайн и осуществлен синтез димерных дипептидных миметиков 4-й петли NT-3, обладающих нейропротекторной, антидепрессантоподобной, анксиолитической, антидиабетической и антиаддиктивной активностями (Патент на изобретение №2800369 Бюл. №20 от 20.07.23) [22].

Целью изобретения явилась разработка новых средств с анальгетической активностью, не являющихся агонистами опиоидных рецепторов, для снижения болевой реакции и восстановления тактильной чувствительности (снижение гипестезии) до нормальных физиологических значений при периферической нейропатии. Данная цель была достигнута при использовании гексаметилендиамид бис-(N-моносукцинил-L-аспарагинил-L-аспарагина) (ГТС-301), гексаметилендиамид бис-(N-γ-оксибутирил-L-глутамил-L-аспарагина) (ГТС-302) и гексаметилендиамид бис-(N-моноглутарил-L-аспарагинил-L-аспарагина) (ГТС-304).

Сущность изобретения состоит в применении дипептидных миметиков 4-й петли NT-3 в качестве средств для снижения болевой реакции и восстановления чувствительности, в том числе при периферической нейропатии.

Техническим результатом изобретения является расширение арсенала средств для снижения болевой реакции, способных поддерживать и/или проявлять антиноцицептивное действие через 24 ч после однократного системного введения в широком диапазоне доз от 0.01 до 10 мг/кг. Спектр фармакологической активности миметика NT-3 включает способность к восстановлению тактильной чувствительности (снижение гипестезии) до нормальных физиологических значений при моделировании периферической диабетической нейропатии.

Ноцицепция - активность афферентных (чувствительных) нервных волокон периферической и центральной нервной системы, возбуждаемая стимулами разной модальности (механические, тепловые, химические).

Болевая (или ноцицептивная) реакция - восприятие стимулов (механических, тепловых, химических), вызывающих ощущение боли.

Гипералгезия - повышенная болевая чувствительность, при которой восприятие боли не соответствует силе вызывающего ее стимула.

Гипоалгезия - пониженная реакция в ответ на болевое раздражение, которая проявляется снижением чувствительности и часто сочетается с нарушениями экстероцептивного восприятия - изменением реакции на холод, тепло, прикосновение.

Аллодиния - болевая реакция, возникающая при воздействии стимулов, которые в норме не вызывают боли.

Гипестезия - снижение тактильной чувствительности определенного участка кожи, при котором отсутствует реакция на легкие прикосновения и слабые болевые стимулы; наличие гипестезии указывает на нарушение проводимости нервного импульса по чувствительным волокнам.

Осуществление настоящего изобретения демонстрируется следующими примерами, не ограничивающими его объем.

Настоящее исследование выполнено на инбредных мышах-самцах линии С57 В1/6 с массой тела 20-22 г., беспородных белых крысах-самцах с массой тела 230-250 г. (ФГБНУ «Научный центр биомедицинских технологий Федерального медико-биологического агентства», филиал «Столбовая»). Крыс содержали по 8 особей в клетке в условиях вивария ФГБНУ «ФИЦ оригинальных и перспективных биомедицинских и фармацевтических технологий» (температура 21-23°С, относительная влажность воздуха 40-60%) при естественной освещенности и свободном доступе к воде и брикетированному корму в течение 10 суток до начала тестирования. Содержание животных соответствовало правилам надлежащей лабораторной практики при проведении доклинических исследований в РФ в соответствии с Решением Совета Евразийской экономической комиссии от 3 ноября 2016 г. N81 "Об утверждении Правил надлежащей лабораторной практики Евразийского экономического союза в сфере обращения лекарственных средств", межгосударственным стандартам серии «Руководство по содержанию и уходу за лабораторными животными» ГОСТ 33215-2014 и ГОСТ 33216-2014 (Приложение А к Европейской конвенции о защите Позвоночных животных, используемых в экспериментах и в других научных целях (ETS N123)). Проведение экспериментов одобрено Комиссией по биомедицинской этике ФГБНУ «ФИЦ оригинальных и перспективных биомедицинских и фармацевтических технологий».

В работе использовали соединения ГТС-301, ГТС-302 и ГТС-304, синтезированные в лаборатории пептидных биорегуляторов отдела химии лекарственных средств ФГБНУ «ФИЦ оригинальных и перспективных биомедицинских и фармацевтических технологий», как описано ранее (патент РФ №2800369), которые вводили внутрибрюшинно (в/б) в виде суспензии в 1% водном растворе Tween 80 в дозах 0,01-10 мг/кг однократно из расчета 0,1 мл/100 г веса крысы и 0,1 мл/10 г веса мыши. Животные контрольных групп получали воду для инъекций с Tween-80, в/б.

Для оценки реакции, возникающей в ответ на термическое раздражение ноцицепторов, использовали стандартный тест «горячая пластина», который позволяет оценить механизмы формирования болевой реакции на супраспинальном уровне. С помощью анальгезиметра «Ugo Basile» (Италия) регистрировали латентное время реакции (лизание задней лапы или прыжок) мыши на нагретой пластине (55±0.5°С). За 2 ч до начала опыта проводили отбор мышей по их базовой (фоновой) реактивности, исключая животных, у которых латентное время реакции было больше 10 с. Латентное время реакции в 20 с (максимальное время экспозиции) расценивали как 100% анальгезию. Фиксировали время появления реакции у мышей через 30, 60, 90 мин и 24 ч после однократного введения изучаемого соединения. Полученные результаты выражали в процентах (%) относительно соответствующего контроля [23].

Тест «отдергивание хвоста» использовали для оценки ноцицептивной реакции на спинальном уровне согласно ранее описанной методике с помощью анальгезиметра «Ugo Basile» (Италия) [23]. Сначала определяли фоновый порог болевой реакции. Животных помещали на рабочую поверхность анальгезиметра, при этом нижняя треть хвоста животных находилась над нагреваемым инфракрасным излучателем диаметром 6 мм. Мощность излучателя установлена в приборе на величину, соответствующую латентному периоду реакции 3-5 с, что соответствует значениям излучателя 35-37 усл. ед. Максимальное значение времени реакции ограничено 20 с. Исходные средние показатели болевых порогов определяли на основании 4 измерений с интервалом в 10 мин, среднее значение болевого порога для каждой крысы (с) принимали за 100% [24].

При моделировании сахарного диабета у мышей линии С57В1/6 в качестве диабетогенного токсина использовали стрептозотоцин (СТЗ, Sigma Aldrich Co., St Louis, MO, USA) в дозе 110 мг/кг внутрибрюшинно.

Реакцию мышей на механические стимулы определяли с помощью монофиламентов фон Фрея (von Frey)(Ugo Basile, Италия) со спектром изгибающего усилия в диапазоне 0.008-6.0 г. Для оценки порогового уровня реакции использовали модифицированный метод «вверх-вниз» W.J. Dixon [25]. Тестирование начинали с филамента 0.16 г. При наличии реакции отдергивания лапы на этот филамент далее использовали более слабый; при отсутствии реакции применялся более сильный раздражитель. На основе сводных данных для каждого животного был рассчитан порог чувствительности Th (значение, выше которого животное всегда будет реагировать) по формуле:

где х_k вес выбранного филамента, x_k+1 вес филамента следующего за x_k; n_xk число раз, когда не было ответа на прикосновение филамента в выбранном x_k; n общее число раз, когда не было ответа на прикосновение филамента.

Оценку достоверности полученных результатов проводили с помощью дисперсионного анализа (ANOVA) и последующих попарных межгрупповых сравнений с помощью теста Дункана. Данные таблиц и графиков представлены в виде средних значений и стандартной ошибки средних значений Mean±SEM. Критический уровень значимости α=0,05.

Список литературы

1. Boulton AJ. Diabetologia. 2004; №47: 1343-53.

2. Calcutt NA. Int Rev Neurobiol. 2002; №50: 205-20.

3. Veves A, Backonja M, Malik RA. Pain Med. 2008; №9: 660-74.

4. Tesfaye S. Curr Opin Support Palliat Care. 2009; №3: 136-43.

5. Cameron NE, Tuck Z, McCabe L, Cotter MA. Diabetologia. 2001; №44: 1161-9.

6. Li F, Drel VR, Szabo C. et al. Diabetes. 2005; №54: 1514-22.

7. Obrosova IG, Xu W, Lyzogubov VV. et al. Free Radio Biol Med. 2008; №44: 972-81.

8. Drel VR, Mashtalir N, Ilnytska O. et al. Diabetes. 2006; №55: 3335-43.

9. Li F, Abatan OI, Kim H. et al. Neurobiol Dis. 2006; №22: 669-76.

10. Vareniuk I, Pavlov IA, Obrosova IG. Diabetologia. 2008; №51: 2126-33.

11. Drel VR, Pacher P, Vareniuk I. et al. Eur J Pharmacol. 2007; №569: 48-58.

12. Berti-Mattera LN, Kern TS, Siegel RE. et al. Diabetes. 2008; №57: 2801-08.

13. Hohn A, Leibrock J, Bailey K; Barde YA. Nature. 1990; №344: 339-41.

14. Pittenger G, Vinik A. Exp Diabesity Res. 2003; T4(4): 271-85.

15. Rodriguez-Pena A, Botana M, Gonzalez M. Requejo F. Neurosci Lett. 1995; T200(l): 37-40.

16. Dey I, MidhaN, Singh G. at al. Glia. 2013; T61(12): 1990-9.

17. Siuciak JA, Altar CA, Wiegand SJ, Lindsay RM. Brain Res. 1994; T633(l-2): 326-30.

18. Malcangio M, Garrett NE, Cruwys S, Tomlinson DR. J Neurosci. 1997'; T17(21): 8459-67.

19. Jongsma WH, Danielsen N, Johnston JM. at al. Eur J Neurosci. 2001; T14(2): 267-82.

20. Wilson-Gerwing TD, Dmyterko MV, Zochodne DW. et al. J Neurosci. 2005; T25(3): 758-67.

21. Vinik Al, Pittenger G, Stansberry K. at al. Neurotrophic factors. In: Textbook of Diabetic Neuropathy. 2003. P. 129-169.

22. Гудашева ТА, Сазонова HM, Тарасюк АВ. с соавт.Доклады Российской академии наук. Науки о жизни. 2022; Т505(1): 303-9.

23. Le Bars D, Gozariu M, Cadden SW. Pharmacol Rev. 2001; T53(4): 597-652.

24. Гудашева ТА, Константинопольский MA, Тарасюк АВ. с соавт.// Доклады Академии наук. 2019; Т485(3): 366-9.

25. Dixon WJ. Аппи Rev Pharmacol Toxicol. 1980; №20 Р: 441-62.

26. Ягубова СС, Чернышевская МА, Островская РУ. с соавт. Доклады Академии наук. 2023; Т.2(1): 417-21.

Пример 1.

Влияние миметиков нейротрофина-3 на порог болевой реакции при термической стимуляции в тесте «горячая пластина» у мышей

Эксперименты выполнены на инбредных мышах-самцах линии С57 В1/6 (n=150).

Показано, что ГТС-301 в дозах 1.0 и 10 мг/кг после однократного системного введения через 90 мин повышал порог болевой реакции на 25% и на 20% соответственно по сравнению с контрольной группой (р<0.05) при термической стимуляции ноцицепторов на супраспинальном уровне (фиг. 2А). Другой миметик NT-3 ГТС-302 значительно повышал порог болевой реакции уже через 30 мин после введения в низких дозах: в дозе 0.01 мг/кг - на 35% (р<0.01), в дозе 0.1 мг/кг - на 25% (р<0.05) по сравнению с контрольной группой (фиг. 2Б). Миметик NT-3 ГТС-304 только в дозе 1 мг/кг через 60 мин после введения повышал латентное время реакции на стимуляцию ноцицепторов на 48% (р<0.01) по сравнению с контрольной группой (фиг. 2 В).

При определении антиноцицептивного действия миметиков NT-3 через 24 ч после однократного введения установлено, что фармакологическая активность в отношении ослабления болевой реакции у ГТС-301 и ГТС-304 проявлялась во всех изученных дозах в диапазоне 0.01-10 мг/кг (фиг. 2А и 2В), у ГТС-302 - только в низких дозах 0.01-0.1 мг/кг (фиг. 2Б), при этом наиболее выраженный эффект через 24 ч после введения регистрировали при использовании миметиков NT-3 в наименьшей эффективной дозе 0.01 мг/кг, в частности, увеличение латентного периода реакции на 38.8%, 30.3% и 39.6% для ГТС-301, ГТС-302 и ГТС-304 соответственно.

Пример 2.

Влияние миметиков нейротрофина-3 на порог болевой реакции при термической стимуляции в тесте «отдергивание хвоста» у крыс

Эксперименты выполнены на беспородных крысах-самцах (n=80).

Установлено, что ГТС-301 дозо-зависимо повышал порог болевой реакции после однократного системного введения. В наименьшей изученной дозе 0.01 мг/кг ГТС-301 статистически значимо увеличивал порог реакции на 21% по сравнению с контрольной группой только через 60 мин после введения (р<0.01). Наиболее эффективной оказалась доза 0.1 мг/кг, в которой ГТС-301 статистически значимо повышал порог болевой реакции через 60 и 90 мин (увеличение на 31% и 22% соответственно) после введения по сравнению с контрольной группой (р<0.01, р<0.05 соответственно). В дозе 1.0 мг/кг антиноцицептивный эффект не наблюдался, однако, при увеличении дозы пептидного миметика NT-3 до 10 мг/кг отмечали статистически значимое повышение латентного периода реакции на 27% (р<0.01), на 24% (р<0.05) и 17% (р<0.05) соответственно через 30, 60 и 90 мин после введения по сравнению с контрольной группой. При определении антиноцицептивного действия миметика NT-3 через 24 ч после однократного введения установлено, что фармакологическая активность в отношении ослабления болевой реакции на спинальном уровне у ГТС-301 проявляется во всех изученных дозах (повышение болевого порога от 11% до 19%) (фиг. 3А).

При оценке влияния ГТС-304 на порог болевой реакции показано, что в дозах 0.01 мг/кг и 10 мг/кг миметик NT-3 статистически значимо (р<0.05) на 14% и 12% соответственно увеличивал латентный период реакции только через 24 ч после однократного введения; через 30 и 60 мин после введения ГТС-304 в дозах 0.01-1.0 мг/кг способность к повышению болевого порога была на уровне тенденции (фиг. 3Б).

Пример 3.

Влияние гексаметилендиамид бис-(N-моносукцинил-L-аспарагинил-L-аспарагина) (ГТС-301) на изменение порога механической чувствительности при индуцированном сахарном диабете у мышей

Эксперименты выполнены на инбредных мышах-самцах линии С57В1/6 (n=46).

Дизайн эксперимента. Было сформировано 4 группы:

Группа 1 «Контроль» (n=12),

Группа 2 «Диабет» (n=12),

Группа 3 «Диабет+ГТС-301, 0.1 мг/кг» (n=11),

Группа 4 «Диабет+ГТС-301, 0.5 мг/кг» (n=11).

Сахарный диабет моделировали однократным введением СТЗ в дозе ПО мг/кг, в/б, которая была выбрана, основываясь на результатах предварительно проведенных экспериментов. Применялся свежеприготовленный раствор СТЗ на холодном цитратном буфере (рН 4,5). Группе «Контроль» на протяжении всего срока наблюдения (32 дня) вводили дистиллированную воду (ДВ) или раствор Tween 80+ДВ (растворитель). Группе «Диабет» вводили ДВ или раствор Tween 80+ДВ (растворитель) в течение 14 дней, на 15-й день - СТЗ, а затем продолжали введение ДВ или раствора Tween 80+ДВ (растворитель) в течение последующих 17 дней. ГТС-301 в растворе Tween 80+ДВ (растворитель) вводили в дозах 0.1 и 0.5 мг/кг в течение 14 дней до введения СТЗ и в течение 17 дней после введения СТЗ. Исследуемые дозы ГТС-301 были выбраны исходя из предварительных экспериментов [26]. Тестирование с помощью филаментов фон Фрея проводили перед введением СТЗ для оценки фонового уровня чувствительности к механическому воздействию, а затем раз в неделю с 3 по 15 недели после индукции диабета, согласно дизайну эксперимента (фиг. 4).

Соединение ГТС-301 при введении в дозах 0.1 и 0.5 мг/кг в течение 14 дней здоровым животным не оказал влияния на уровень механической чувствительности мышей в тесте фон Фрея. В течение первых 4-х недель после введения СТЗ порог реакции на механические раздражители не различался во всех экспериментальных группах. Как следует из данных, представленных в таблице, в группе «Диабет», начиная с 5-й недели после введения СТЗ, отмечали повышение порога механической чувствительности по сравнению с животными из группы «Контроль». Это повышение достигало максимума на 7-й неделе после индукции диабета, а с 8-й недели порог механической чувствительности начинал постепенно уменьшаться, не восстанавливаясь полностью даже к концу регистрации (15 недель).

В группах с индуцированным диабетом мышам, которым вводили ГТС-301 в дозах 0.1 или 0.5 мг/кг, порог механической чувствительности восстанавливался до значений животных из группы «Контроль». Эффект ГТС-301 в дозе 0.5 мг/кг был более выражен, чем в дозе 0.1 мг/кг, особенно на 9-й неделе после индукции диабета.

Статистические отличия групп (однофакторный ANOVA с последующими попарными межгрупповыми сравнениями с помощью теста Дункана при нормальном распределении данных; критерий Краскела-Уоллиса с последующим использованием критерия множественных сравнений в случае, когда данные не были нормально распределены, р≤0.05): * - от группы «Контроль»; +- от группы «Диабет»; х - от группы «Диабет+ГТС-301, 0.1 мг/кг». Учитывая наличие групп с нормальным и ненормальным распределением для возможности сравнения, все данные представлены в виде средних значений по группе с указанием стандартной ошибки среднего (М±SEM).

Таким образом, экспериментально доказана зависимая от дозы активность миметика NT-3 в отношении восстановления тактильной чувствительности (снижение гипестезии) при моделировании периферической диабетической нейропатии у мышей С57В1/6.

Описание чертежей:

Фиг. 1. Пути повреждения нейронов при диабете, тип вовлеченных нервных волокон и потенциал нейропротекции с помощью нейрональных факторов роста, интегринов и цитокинов [21 с адаптацией].

Фиг. 2. Действие миметиков NT-3 при однократном введении на латентный период реакции мышей С57В1/6 в тесте «горячая пластина».

2А. ГТС-301

2Б. ГТС-302

2В. ГТС-304

По оси абсцисс - время развития эффекта после введения миметика NT-3 (ч).

По оси ординат - относительные единицы, %.

Экспериментальные группы (дозы, мг/кг):

1 - «0.0» - белый столбец (контрольная группа);

2 - «0.01» - светло-серый столбец;

3 - «0.1» - серый столбец;

4 - «1»- темно-серый столбец;

5 - «10» - черный столбец.

Примечание: * - р<0.05, ** - р<0.01, *** - р<0.001 - статистически значимо по отношению к соответствующей контрольной группе согласно критерию Дункана. Число животных в группах n=10. Данные представлены в процентах

Фиг. 3. Действие миметиков NT-3 при однократном введении на латентный период реакции у крыс в тесте «отдергивание хвоста».

3А. ГТС-301

3Б. ГТС-304

По оси абсцисс - время развития эффекта после введения миметика NT-3 (ч).

По оси ординат - относительные единицы, %.

Экспериментальные группы (дозы, мг/кг):

1 - «0.0» - белый столбец (контрольная группа);

2 - «0.01» - светло-серый столбец;

3 - «0.1» - серый столбец;

4 - «1» - темно-серый столбец;

5 - «10» - черный столбец.

Примечание: * - р<0.05, ** - р<0.01 - статистически значимо по отношению к соответствующей контрольной группе согласно критерию Дункана.

Число животных в группах n=8. Данные представлены в процентах относительно контроля в виде M±SEM.

Фиг. 4. Дизайн эксперимента по моделированию индуцированной сахарным диабетом периферической нейропатии у мышей С57В1/6.

Изобретение относится к медицине, в частности к фармакологии, и касается применения низкомолекулярного миметика нейротрофина-3 гексаметилендиамида бис-(N-моносукцинил-L-аспарагинил-L-аспарагина) (ГТС-301) в качестве средства для снижения болевой реакции и восстановления тактильной болевой чувствительности до нормальных физиологических значений при периферической нейропатии. Использование изобретения позволяет эффективно снижать болевую реакцию и восстанавливать тактильную болевую чувствительность до нормальных физиологических значений при периферической нейропатии. 4 ил., 1 табл., 3 пр.

Применение гексаметилендиамида бис-(N-моносукцинил-L-аспарагинил-L-аспарагина) в качестве средства для снижения болевой реакции и восстановления тактильной болевой чувствительности до нормальных физиологических значений при периферической нейропатии.