N-бензил-N-(2-((2,3,4-триметоксибензил)амино)этан-1,2-диамины, обладающие кардиотропной активностью Российский патент 2025 года по МПК C07C211/27 A61K31/137 A61P9/10 

Изобретение относится к области химии и медицины, а именно к биологически активным соединениям, конкретно к N¹-бензил-N²-(2-((2,3,4-триметоксибензил)амино)этил)этан-1,2-диаминам общей формулы (I)

где R¹-R³ могут быть атомами водорода, метокси- или гидрокси-группами, при условии, что только один из заместителей R¹-R³ может являться метокси-группой, а также к физиологически приемлемым солям тригидрохлоридам общей формулы II (I*3НСl). Заявляемые соединения обладают кардиотропной активностью.

Сердечно-сосудистые заболевания (ССЗ) остаются наиболее распространенной причиной смерти во всем мире. Согласно результатам систематического мега-анализа «Global Burden of Disease Study», оценившего глобальную, региональную и национальную летальность по 282 причинам смерти в 195 странах мира за период 1980-2017 гг. ежегодная летальность от ССЗ в мире превышает 17 млн. случаев [Roth GA, et al. Lancet. 2019; 22(393): 10190]. Как следует из материалов этого анализа за десятилетие, предшествующее 2017 г., число людей, умирающих от ССЗ увеличилось на 21%, при этом на ишемическую болезнь сердца (ИБС) и инсульт приходится почти 50% и 35% смертей от ССЗ соответственно. В Европе от ССЗ ежегодно умирает около 4 млн. человек, что составляет примерно 45% от общей летальности, при этом на ИБС приходится 44% смертей от ССЗ, а цереброваскулярные болезни (в том числе инсульт) - 25% [Timmis А, Vardas Р, Townsend N, et al. Eur Heart J. 2022; 43(8): 716]. В РФ летальность от ССЗ также занимает первое место в структуре общей смертности. Однако в РФ за период 2017-2019 гг. отмечена тенденция к снижение летальности от ССЗ, так в 2019 г. летальность по сравнению с 2015 г. снизилась на 4,76% [Bezverkhov A, Ishchenko О. Norwegian Journal of development of the International Science. 2021; 54: 35-39] при этом на ИБС приходится 28,4% смертей от ССЗ, а на цереброваскулярные болезни (в том числе инсульт) - 14,4%. Экономический ущерб от ССЗ в РФ за период с 2015 по 2019 гг.составил 8,7 трлн. рублей, что составляет 9,2 ВВП. Ситуация резко обострилась в 2020 г. когда пандемия COVID-19 оказала разрушительное воздействие на заболеваемость и смертность во всем мире. По данным Минздрава РФ, за январь-октябрь 2020 г. летальность в России от ССЗ составила 620,7 случаев на 100 тыс.населения, что на 6,6% выше, чем за аналогичный период 2019 г., а больничная летальность от ССЗ возросла на 58,9% [Сон И.М, Стародубов В.И, Маношкина Е.М, Ступак В.С. Профилактическая медицина. 2021; 24(11):7]. Немаловажно и то, что рост заболеваемости и летальности от ССЗ происходит несмотря на повсеместное внедрение в широкую медицинскую практику самых эффективных на современном этапе лекарственных средств: ингибиторов ангиотензин-превращающего фермента (иАПФ), ингибиторов ренина, β-блокаторов, антагонистов альдостерона, антагонистов рецепторов альдостерона, неселективных антагонистов вазопрессиновых рецепторов и т.д. Следует учитывать и тот факт, что многие современные кардиотропные лекарственные средства обладают рядом, в том числе и существенных, побочных эффектов. Например, иАПФ взывают развитие тяжело переносимого сухого кашля, (который по данным различных источников у 20-30% пациентов требует отмены препарата) и ангионевротического отека резистентного в стандартной терапии, который составляет 30-40% от всех отеков Квинке, поступающих в приемный покой скорой помощи [Данцев И.С, Синицина И.И, Сычев Д,А. Фармакогенетика и фармакогеномика, 2015; 2: 94; Banerji AS, Blanda CM, LoVecchio F, et al. Ann Allergy Asthma Immunol. 2008; 100: 327], а подавляющее большинство из применяемых в клинике антиаритмических препаратов обладает проаритмическим действием [McCauley М, Vallabhajosyula S, Darbar D. Card Electrophysiol Clin. 2016; 8(2): 481; Mankad P, Kalahasty G. Med Clin North Am. 2019; 103(5): 821]. Естественно, что поиск и последующее внедрение в широкую клиническую практику отечественных инновационных лекарственных средств представляется актуальной задачей.

Одна из современных концепций разработки эффективных и безопасных кардиопротекторных средств заключается в том, что такие препараты должны иметь мультитаргетный механизм действия [Davidson SM, Ferdinandy Р, Andreadou I, et al. J Am Coll Cardiol. 2019; 73: 89; Barman M. J Atr Fibrillation 2015; 8: 1091; Polak S, Pugsley MK, Stockbridge N, et al. Front Physiol. 2020; 11: 978]. Эта концепция находится в прямом соответствии с «мультитаргетным подходом к кардиопротекции», развиваемым в современном сообществе кардиологов [Hausenloy DJ, Garcia-Dorado D, B0tker HE, et al. Cardiovasc. Res. 2017; 113: 564; Davidson SM, 2019; Der Sarkissian S, Aceros H, Williams PM, et al. Br J Pharmacol. 2020; 177: 3378].

Действительно, многие стратегии кардиопротекции, основывавшиеся на использовании одноцелевого подхода, потерпели неудачу в клинических условиях, в то время как мультитаргетный подход, направленный на более чем одну молекулярную мишень или внутриклеточный сигнальный путь, заявил себя как более эффективная стратегия лечения ССЗ, особенно в случае наличия сопутствующих заболеваний. «Мультитаргетный эффект» может быть достигнут либо с помощью одной активной молекулы с комплексным механизмом действия [Der Sarkissian S, 2020], либо комбинацией соединений с разными механизмами действия [Hausenloy DJ, 2017].

Использование мультитаргетного подхода особенно актуально при разработке кардиопротекторных средств в группе блокаторов ионных каналов, что в первую очередь связано с тем, что потенциал действия (ПД) кардиомиоцитов является результатом сложного взаимодействия между большим количеством входящих и исходящих ионных токов. В частности, в то время как широко известно, что селективные ингибиторы hERG-каналов имеют высокий риск проаритмического действия, взаимодействие лекарств с входящим натриевым и кальциевым ионным током может сбалансировать эффект ингибирования исходящего калиевого тока и, следовательно, может ограничить вызванные селективной блокадой hERG-каналов негативные эффекты [Martin RL, McDermott JS, Salmen HJ, et al. J. Cardiovasc. Pharmacol. 2004; 43: 369; Mirams GR, Cui Y, Sher A, et al. Cardiovasc. Res. 2011; 91: 53].

Анализ современных и ранее используемых клинически эффективных лекарственных средств для лечения ССЗ, веществ с антиаритмической, противоишемической и другими видами кардиопротекторной активности в доклинических исследованиях, а также молекул, продемонстрировавших свой потенциал in vitro по отношению к различным мишеням, вовлеченным в механизмы кардиопротекторного действия, позволил выделить отдельную обширную группу соединений, соответствующих обобщенной фармакофорной модели [Mokrov GV. Arch. Pharm. 2022; 355: е2100428]. Эта модель имеет следующую структуру: молекула активного соединения содержит два ароматических цикла, соединенные линкером. Длина и структура линкера широко варьируются (5-15 связей), при этом в подавляющем большинстве случаев линкер содержит один или несколько гетероатомов.

Целью настоящего изобретения явилось создание соединений с высокой антиаритмической и антиишемической эффективностью и большой широтой терапевтического действия, с целью создания препарата для лечения нарушений сердечного ритма. В настоящем изобретении нами были сконструированы новые молекулы, потенциально обладающие кардиопротекторными свойствами: N¹-бензил-N²-(2-((2,3,4-триметоксибензил)амино)этил)этан-1,2-диамины I и их соли II.

Наиболее близкими прототипами новых соединений по химическому строению являются производные бис(метоксибензиламиноалкил)аминов [Патент РФ №2624438]. Заявляемые соединения отличаются от известных веществ общей строением ароматических групп.

Соединения I (N¹-бензил-N²-(2-((2,3,4-триметоксибензил)амино)этил)этан-1,2-диамины), и их соли II, обладающие кардиотропными свойствами, являются объектом притязаний настоящего изобретения.

Под кардиотропной и кардиопротекторной активностью в настоящем изобретении понимаются антиаритмическая и антиишемическая активности.

Техническим результатом настоящего изобретения является расширение арсенала лекарственных средств, способных эффективно предотвращать нарушения ритма сердца и ишемических нарушений сердца, обладающих высокой антиаритмической и антиишемической эффективностью и большой широтой терапевтического действия.

Соединения общей формулы I и II в специальной и патентной литературе не описаны.

В качестве примеров соединений формулы II настоящего изобретения без ограничений этими примерами объема притязаний можно назвать следующие:

тригидрохлорид N¹-бензил-N²-(2-((2,3,4-триметоксибензил)амино)этил)этан-1,2-диамина (IIa, АЛМ-864),

тригидрохлорид 2-метокси-5-(((2-((2-((2,3,4-триметоксибнезил)амино)этил)амино)-этил)амино)метил)фенола (IIб, АЛМ-868),

тригидрохлорид 2-метокси-4-(((2-((2-((2,3,4-триметоксибнезил)амино)этил)амино)-этил)амино)метил)фенола (IIв, АЛМ-869),

тригидрохлорид 2-метокси-6-(((2-((2-((2,3,4-триметоксибнезил)амино)этил)т-амино)этил)амино)метил)фенола (IIг, АЛМ-870),

тригидрохлорид N¹-(2-метоксибензил)-N²-(2-((2,3,4-триметоксибензил)амино)этил)-этан-1,2-диамина (IIд, АЛМ-871),

тригидрохлорид N¹-(3-метоксибензил)-N²-(2-((2,3,4-триметоксибензил)амино)этил)-этан-1,2-диамина (IIе, АЛМ-872),

тригидрохлорид N¹-(4-метоксибензил)-N²-(2-((2,3,4-триметоксибензил)амино)этил)-этан-1,2-диамина (IIж, АЛМ-873).

Соединения общей формулы I и II можно получить согласно общей схеме, по примеру синтеза тригидрохлоридов соединений I:

N¹-(2-Аминоэтил)-N²-(2,3,4-триметоксибензил)этан-1,2-диамин (V, АЛМ-848) может быть получен путем каталитического гидрирования продуктов взаимодействия 2,3,4-триметоксибензальдегида (III) с избытком диэтилентриамина (IV), в растворах низших спиртов с использованием катализаторов гидрирования, например, палладий на угле.

N¹-бензил-N²-(2-((2,3,4-триметоксибензил)амино)этил)этан-1,2-диамины (I) могут быть получены путем восстановления продуктов взаимодействия N¹-(2-аминоэтил)-N²-(2,3,4-триметоксибензил)этан-1,2-диамина (V) с незамещенным или замещенными бензальдегидами (VI) в растворах низших спиртов с использованием катализаторов гидрирования, например, палладий на угле.

Для получения гидрохлоридов II N¹-бензил-N²-(2-((2,3,4-триметоксибензил)амино)этил)этан-1,2-диамины (I) вводят во взаимодействие с соляной кислотой.

Соединения I представляют собой густые масла растворимые в органических растворителях.

Гидрохлориды (II) представляют собой высокоплавкие белые кристаллические вещества, хорошо растворимые в воде и нерастворимые в эфирах, например диэтиловом эфире, и ароматических растворителях, например, бензоле, толуоле.

Строение веществ общей формулы I и II подтверждено данными спектров ЯМР ¹Н, а их чистота - данными элементного анализа.

Пример 1. Тригидрохлорид N¹-бензил-N²-(2-((2,3,4-триметоксибензил)амино)этил)этан-1,2-диамина (IIa, АЛМ-864).

1.1. N¹-Аминоэтил)-N²-(2,3,4-триметоксибензил)этан-1,2-диамин

К раствору 30,95 г (0,3 моль) диэтилентриамина в 200 мл спирта добавляют 19,62 г (0,1 моль) 2,3,4-триметоксибензальдегида. Смесь перемешивают в течение 1 ч, к ней добавляют 1 г палладиевого катализатора (PdO/C, 10% Pd) и гидрируют до поглощения теоретического количества водорода. Смесь фильтруют от катализатора и упаривают досуха. Остаток растворяют в 50 мл воды и добавляют концентрированную соляную кислоту до рН 1. Водный раствор экстрагируют хлористым метиленом (3 раза по 50 мл), подщелачивают 40%-ным раствором гидроксида натрия до рН 10-11 и снова экстрагируют хлористым метиленом (3 раза по 50 мл). Органический экстракт высушивают безводным Na₂SO₄ и упаривают досуха, получая светло-желтое масло. Выход 21,7 г (77%). Спектр ЯМР ¹H (DMSO, δ, м.д., J/Гц): 1.98 (с, 4Н, 2NH+NH₂), 2.65-2.78 (м, 8Н, 2 СН₂СН₂), 3.71 (с, 2Н, CH₂Ar), 3.83, 3.85, 3.89 (3с, по 3Н, 3 ОМе), 6.62 (д, J=8.5, 2Н, H_Ar-5), 6.92 (д, J=8.5, 2Н, H_Ar-6).

1.2. Тригидрохлорид N¹-бензил-N²-(2-((2,3,4-триметоксибензил)амино)этил)этан-1,2-диамина (IIa, АЛМ-864)

Раствор 1.8 г (4.6 ммоль) N¹-(2-аминоэтил)-N²-(2,3,4-триметоксибензил)этан-1,2-диамина и 0,53 г (5,5 ммоль) бензальдегида в 30 мл спирта выдерживают в течении 1 часа при комнатной температуре. К раствору прибавляют 0,2 г палладиевого катализатора (PdO/C, 10%) Pd) и гидрируют при перемешивании при атмосферном давлении и комнатной температуре до полного поглощения водорода. Катализатор отфильтровывают, фильтрат упаривают досуха. Остаток растворяют в 40 мл хлористого метилена. Раствор промывают 2 раза по 20 мл водного раствора карбоната натрия, после чего высушивают и упаривают досуха. Остаток растворяли в 30 мл ацетона, и к раствору прибавляли концентрированную соляную кислоту до кислой реакции. Осадок отфильтровывали и перекристаллизовывали из изопропанола и высушивали, получая продукт в виде белого порошка. Выход 83%. Т. пл. 190-195°С (с разл.) (из изопропанола). Найдено, %: С, 52.44; Н, 7.01; Cl, 22.31; N, 8.85. C₂₁H₃₄Cl₃N₃O₃. Вычислено, %: С, 52.24; Н, 7.10; Cl, 22.02; N, 8.70. Спектр ЯМР ¹Н (DMSO, δ, м.д., J/Гц): 3.27-3.47 (м, 8Н, 2 СН₂СН₂); 3.77, 3.82, 3.90 (три с, по 3Н, 3 ОМе); 4.11 и 4.21 (два с, по 2Н, CH₂Ar и CH₂Ph); 6.86 и 7.30 (оба д, по 1Н, 2 ArH, J³=8.7); 7.39-7.42 и 7.58-7.64 (два м, 3Н и 2Н, PhH); 9.80 (уш.с, 3Н, 3 NH).

Пример 2: Тригидрохлорид 2-метокси-5-(((2-((2-((2,3,4-триметоксибензил)амино)этил)амино)этил)амино)метил)фенола (IIб, АЛМ-868).

Получают аналогично п. 1.2. примера 1 из N¹-(2-аминоэтил)-N²-(2,3,4-триметоксибензил)этан-1,2-диамина и 3-гидрокси-4-метоксибензальдегида. Выход 81%. Белый порошок. Т. пл. 125-127°С (с разл.) (из изопропанола). Найдено, %: С, 49,77; Н, 6,78; Cl, 20,15; N, 7,84. C₂₂H₃₆Cl₃N₃O₅. Вычислено, %: С, 49,96; Н, 6,86; Cl, 20,11; N, 7,94. Спектр ЯМР ¹Н (DMSO, δ, м.д., J/Гц): 3.31, 3.39 (два уш.с, по 4 Н, 2 СН₂СН₂), 3.76, 3.77, 3.81, 3.90 (четыре с, по 3 Н, 4 ОМе); 4.04, 4.11 (два с, по 2 Н, 2 CH₂Ar); 6.86 (д, 1 Н, J=8.6, H_Ar-5), 6.93-7.00 (м, 3 Н, H_Ar-2',5',6'); 7.31 (д, 1 Н, J=8.6, H_Ar-6), 9.18, 9.69, 10.11 (три уш. с, по 1 Н, 3 NH).

Пример 3: Тригидрохлорид 2-метокси-4-(((2-((2-((2,3,4-триметоксибензил)амино)этил)амино)этил)амино)метил)фенола (IIв, АЛМ-869).

Получают аналогично п. 1.2. примера 1 из N¹-(2-аминоэтил)-N²-(2,3,4-триметоксибензил)этан-1,2-диамина и 4-гидрокси-3-метоксибензальдегида. Выход 73%. Белый порошок. Т. пл. 157-159°С (с разл.) (из изопропанола). Найдено, %: С, 49,99; Н, 6,68; Cl, 20,09; N, 7,91. C₂₂H₃₆Cl₃N₃O₅. Вычислено, %: С, 49,96; Н, 6,86; Cl, 20,11; N, 7,94. Спектр ЯМР ¹Н (DMSO, δ, м.д., J/Гц): 3.31, 3.40 (два уш.с, по 4 Н, 2 СН₂СН₂), 3.76, 3.79, 3.81, 3.90 (четыре с, по 3 Н, 4 ОМе); 4.08, 4.11 (два с, по 2 Н, 2 CH₂Ar); 6.79-6.94 (м, 4 Н, H_Ar-5,5',6'), 7.29-7.32 (м, 2 Н, H_Ar-2',6); 9.30, 9.71, 10.14 (три уш. с, по 1 Н, 3 NH).

Пример 4: Тригидрохлорид 2-метокси-6-(((2-((2-((2,3,4-триметоксибензил)амино)этил)амино)этил)амино)метил)фенола (IIг, АЛМ-870).

Получают аналогично п. 1.2. примера 1 из N¹-(2-аминоэтил)-N²-(2,3,4-триметоксибензил)этан-1,2-диамина и 2-гидрокси-3-метоксибензальдегида. Выход 83%. Белый порошок. Т. пл. 177-179°С (с разл.) (из изопропанола). Найдено, %: С, 49,80; Н, 7,02; Cl, 20,11; N, 7,84. C₂₂H₃₆Cl₃N₃O₅. Вычислено, %: С, 49,96; Н, 6,86; Cl, 20,01; N, 7,91. Спектр ЯМР ^lH (DMSO, δ, м.д., J/Гц): 3.31, 3.39 (два уш.с, по 4 Н, 2 СН₂СН₂), 3.76, 3.77, 3.81, 3.90 (четыре с, по 3 Н, 4 ОМе); 4.10, 4.15 (два с, по 2 Н, 2 CH₂Ar); 6.80-6.88 (м, 2Н, H_Ar-5,4'), 7.01-7.08 (м, 2Н, H_Ar-5',6'); 7.08 (д, 1 Н, J=8.6, H_Ar-6); 9.63-10.14 (уш. с, 3 Н, 3NH).

Пример 5: Тригидрохлорид N¹-(2-метоксибензил)-N²-(2-((2,3,4-триметоксибензил)амино)этил)этан-1,2-диамина (IIд, АЛМ-871).

Получают аналогично п. 1.2. примера 1 из N¹-(2-аминоэтил)-N²-(2,3,4-триметоксибензил)этан-1,2-диамина и 2-метоксибензальдегида. Выход 74%. Белый порошок. Т. пл. 172-174°С (с разл.) (из изопропанола). Найдено, %: С, 51,37; Н, 7,23; Cl, 20,53; N, 8,11. C₂₂H₃₆Cl₃N₃O₄. Вычислено, %: С, 51,52; Н, 7,08; Cl, 20,74; N, 8,19. Спектр ЯМР ¹Н (DMSO, δ, м.д., J/Гц): 3.32, 3.39 (два уш.с, по 4 Н, 2 СН₂СН₂), 3.76, 3.81, 3.85, 3.90 (четыре с, по 3 Н, 4 ОМе); 4.11, 4.18 (два с, по 2 Н, 2 CH₂Ar); 7.00 (дд, 1 Н, J₁=7.1, J₂=7.4, H_Ar-5'), 7.10 (д, 1 Н, J=8.2, H_Ar-3'), 7.30 (д, 1 Н, J=8.5, H_Ar-6), 7.42 (дд, 1 Н, J₁=7.1, J₂=7.6, H_Ar-4'), 7.51 (д, 1 Н, J=7.1, H_Ar-6'), 9.91-10.13 (уш. с, 3 Н, 3 NH).

Пример 6: Тригидрохлорид N¹-(3-метоксибензил)-N²-(2-((2,3,4-триметоксибензил)амино)этил)этан-1,2-диамина (IIе, АЛМ-872).

Получают аналогично п. 1.2. примера 1 из N¹-(2-аминоэтил)-N²-(2,3,4-триметоксибензил)этан-1,2-диамина и 3-метоксибензальдегида. Выход 71%. Белый порошок. Т. пл. 174-176°С (с разл.) (из изопропанола). Найдено, %: С, 51,71; Н, 7,10; Cl, 20,55; N, 8,09. C₂₂H₃₆Cl₃N₃O₄. Вычислено, %: С, 51,52; Н, 7,08; Cl, 20,74; N, 8,19. Спектр ЯМР ¹H (DMSO, δ, м.д., J/Гц): 3.32, 3.40 (два уш.с, по 4 Н, 2 СН₂СН₂), 3.76, 3.78, 3.81, 3.90 (четыре с, по 3 Н, 4 ОМе); 4.11, 4.18 (два с, по 2 Н, 2 CH₂Ar); 6.86 (д, 1 Н, J=8.4, H_Ar-5), 6.97 (д, 1 Н, J=7.6, H_Ar-4'), 7.13 (д, 1 Н, J=7.6, H_Ar-6'), 1.29-136 (м, 3 Н, H_Ar-2',5',6), 9.90 (уш. с, 3 Н, 3 NH).

Пример 7: Тригидрохлорид N¹-(4-метоксибензил)-N²-(2-((2,3,4-триметоксибензил)амино)этил)этан-1,2-диамина (IIж, АЛМ-873).

Получают аналогично п. 1.2. примера 1 из N¹-(2-аминоэтил)-N²-(2,3,4-триметоксибензил)этан-1,2-диамина и 4-метоксибензальдегида. Выход 79%. Белый порошок. Т. пл. >200°С (с разл.) (из изопропанола). Найдено, %: С, 51,50; Н, 7,01; Cl, 20,70; N, 8,12. C₂₂H₃₆Cl₃N₃O₄. Вычислено, %: С, 51,52; Н, 7,08; Cl, 20,74; N, 8,19. Спектр ЯМР ¹H (DMSO, δ, м.д., J/Гц): 3.29, 3.36 (два уш.с, по 4 Н, 2 СН₂СН₂), 3.77, 3.81, 3.85, 3.90 (четыре с, по 3 Н, 4 ОМе); 4.11, 4.13 (два с, по 2 Н, 2 CH₂Ar); 6.87 (д, 1 Н, J=8.5, H_Ar-5), 6.99 (д, 2 Н, J=8.3, H_Ar-3',5'), 7.28 (д, 1 Н, J=8.5, H_Ar-6), 7.52 (д, 2 Н, J=8.3, H_Ar-2',6'), 9.99 (уш. с, 3 Н, 3 NH).

Фармакологические свойства заявляемых соединений

Эксперименты выполнены на самцах беспородных альбиносах мышей и крыс. Животные содержались в стандартных условиях вивария ФГБНУ «НИИ фармакологии имени В.В. Закусова» при контролируемом освещении (12 ч - свет/12 ч - темнота) и постоянной температуре (+21 - +23°С) со свободным доступом к воде и брикетированному корму в течение 10 суток до начала тестирования. Условия содержания соответствовали ГОСТ 33215-2014 «Руководство по содержанию и уходу за лабораторными животными. Правила оборудования помещений и организации процедур» (Переиздание) и ГОСТ 33216-2014 «Руководство по содержанию и уходу за лабораторными животными. Правила содержания и ухода за лабораторными грызунами и кроликами» (Переиздание). Все работы с лабораторными животными были выполнены в соответствии с общепринятыми нормами обращения с животными, на основе стандартных операционных процедур, принятых в НИИ фармакологии имении В.В. Закусова, международными правилами (European Communities Council Directive of November 24, 1986 (86/609/EEC), а также в соответствии с протоколом, утвержденным биоэтической комиссией института.

Пример 8. LD₅₀ заявляемых соединений.

Острую токсичность (LD₅₀) соединений изучали на мышах массой 23-28 г. Острую токсичность каждого соединения определяли в пяти различных дозах, количество животных в каждой группе равнялось 6. Заявляемые соединения вводили внутрибрюшинно, в качестве растворителя использовали изотонический 0,9% раствор натрия хлорида для инфузий. Летальность животных в группах оценивали через 24 часа после введения соединений. По методу Литчфилда-Вилкоксона рассчитывали LD₁₆, LD₅₀ и LD₈₄ с их доверительными 95% интервалами (табл. 1).

Как следует из полученных данных, заявляемые соединения относятся к IV классу токсичности, то есть являются малотоксичными веществами (табл. 1).

Пример 9. Изучение антиишемической активности заявляемых соединений на модели субэндокардиальной ишемии, вызываемой изопротеринолом.

Эксперимент проводили на беспородных альбиносах крысах - самцах массой тела 213-274 г. Животные были рандомизировано разделены на 2 контрольные группы и группы, получавшие исследуемые заявляемые соединения. Количество животных в группах составляло от 10 до 32 (табл. 2).

Животных наркотизировали уретаном (1300 мг/кг, в/б). Острую субэндокардиальную ишемию миокарда вызывали по методу, описанному S. Yamamoto с соавторами [Yamamoto S, et al. J Cardiovasc Pharmacol. 2002; 39(2): 234-41]. Для этой цели животным с помощью инъектора «Линеомат» (Россия) внутривенно (далее - в/в) со скоростью 20 мкг/кг/мин вводили неселективный агонист β-адренорецепторов изопротеренол. Об интенсивности ишемического повреждения судили по величине депрессии сегмента ST на ЭКГ (II стандартное отведение) через 5 минут от момента начала инфузии изопротеренола. В качестве регистратора использовали компьютерный электрокардиограф «Полиспектр 8/ЕХ» (Нейрософт, Россия).

Все исследуемые соединения вводили внутривенно за 2 мин до начала инфузии изопротеренола в 0,3 мл изотонического раствора натрия хлорида. Животные контрольной группы получали эквивалентный объем изотонического раствора натрия хлорида.

Полученные результаты обрабатывали статистически. Нормальность распределения оценивали с помощью критерия Шапиро-Уилка, гомогенность дисперсий - по критерию Левена. Так как результаты имели нормальное распределение и выборочные дисперсии были гомогенны, для определения значимости различий использовали однофакторный дисперсионный анализ с последующей обработкой методом множественных сравнений по Даннету. Различия считали значимыми при Р≤0,05, критерий двухсторонний. Расчетные данные выражали в виде среднего арифметического и его стандартной ошибки.

Результаты изучения антиишемической активности заявленных соединений представлены в таблице 2. Как следует из полученных данных, все исследованные соединения (АЛМ-864, АЛМ-868, АЛМ-870, АЛМ-871, АЛМ-872 и АЛМ-873) при внутривенном введении проявляют статистически значимую антиишемическую активность.

Пример 10. Изучение антиаритмической активности заявляемых соединений на модели аконитиновой аритмии.

Эксперимент проводили на беспородных альбиносах крысах - самцах массой тела 197-223 г. Животные были рандомизированы на 6 контрольных групп и группы, получавшие исследуемые соединения. Количество животных в группах составляло от 6 до 11 (табл. 3).

Эксперименты проводили в условиях наркоза уретаном (1300 мг/кг в/б). Животным контрольной группы вводили аконитин, а животным основных групп - изучаемые соединения и аконитин. Животным основных групп за 2 минуты до инъекции аконитина в/в вводили (в 0,2-0,3 мл апирогенной воды для инъекций) исследуемые соединения. Контрольным животным по аналогичной схеме вводили 0,3 мл апирогенной воды для инъекций. Наркотизированных животных (уретан 1300 мг/кг, в/б) фиксировали в положении на спине на подогреваемом операционном столике (Kent Scientific Corporation, США). Левую бедренную вену катетеризировали для введения аконитина гидрохлорида и изучаемых соединений. Перед началом эксперимента у животных регистрировали ЭКГ (стандартные отведения, калибровочный сигнал 20 мВ, скорость записи 50 мм/сек, продолжительность записи 60 секунд). В качестве регистратора использовали компьютерный электрокардиограф «Поли-Спектр 8/В» (Россия). Затем подбирали дозу аконитина гидрохлорида, которая во всех экспериментах в пределах 1-2 минут после окончания его введения вызывает политопную предсердно-желудочковую экстрасистолию; величина подобранной дозы 30 мкг/кг. После подбора дозы аконитина гидрохлорида, во всех сериях экспериментов изучаемые соединения вводили в/в (в 0,2-0,3 мл) за 2 минуты до введения аконитина гидрохлорида. Непрерывную регистрацию ЭКГ начинали за 2 минуты до начала введения аконитина гидрохлорида или исследуемых соединений и продолжали в течение 20 минут от момента окончания в/в введения аконитина гидрохлорида. Перед началом каждой из серии экспериментов в тестовом режиме на 3-5 животных оценивали (подтверждали) ранее выбранную аритмогенную дозу аконитина гидрохлорида - 0,2 мг/кг.

Статистическую обработку данных, измеренных в бинарной шкале, проводили с помощью метода точной вероятности Фишера с учетом множественности сравнений.

Результаты изучения антиаритмической активности представлены в таблице 3. Как следует из полученных данных, выраженную антиаритмическую активность на данной модели, патогомоничной для антиаритмиков I класса по классификации Vaughan Williams, проявляли при внутривенном введении соединения АЛМ-868 (3 мг/кг), АЛМ-870 (3 мг/кг), АЛМ-871 (2,5 мг/кг), АЛМ-872 (4,5 мг/кг) и АЛМ-873 (4 мг/кг). Активные соединения предотвращали нарушения ритма сердца крыс в 75-100% случаях. Во всех используемых контрольных группах нарушения ритма наблюдались у 100%) животных.

Пример 11. Изучение антиаритмической активности заявляемых соединений на модели хлоридкальциевой аритмии.

Эксперимент проводили на беспородных альбиносах крысах - самцах массой тела 230-260 г. Животные были рандомизированы на 5 контрольных группы и группы, получавшие исследуемые соединения. Количество животных в группах составляло от 6 до 12 (табл. 4).

Эксперименты проводили в условиях наркоза уретаном (1300 мг/кг в/б). Животным контрольной группы вводили хлорид кальция, а животным основных групп - изучаемые соединения и хлорид кальция. Животным основных групп за 2 минуты до инъекции хлорида кальция в/в вводили (в 0,2-0,3 мл апирогенной воды для инъекций) исследуемые соединения. Контрольным животным по аналогичной схеме вводили 0,3 мл апирогенной воды для инъекций.

Наркотизированных животных (уретан 1300 мг/кг, в/б) фиксировали в положении на спине на подогреваемом операционном столике (Kent Scientific Corporation, США). Левую бедренную вену катетеризировали для введения хлорида кальция и изучаемых соединений. Перед началом эксперимента у животных регистрировали ЭКГ (стандартные отведения, калибровочный сигнал 20 мВ, скорость записи 50 мм/сек, продолжительность записи 60 секунд). В качестве регистратора использовали компьютерный электрокардиограф «Поли-Спектр 8/В» (Россия). Затем подбирали дозу хлорида кальция, которая во всех экспериментах в пределах 1-2 минут после окончания его введения вызывает фибрилляцию желудочков сердца; величина подобранной дозы - 200-250 мг/кг. После подбора дозы хлорида кальция во всех сериях экспериментов изучаемые соединения вводили в/в (в 0,2-0,3 мл апирогенной воды для инъекций) за 2 минуты до введения хлорида кальция. Непрерывную регистрацию ЭКГ начинали за 2 минуты до начала введения хлорида кальция или исследуемых соединений и продолжали в течение 20 минут от момента окончания в/в введения хлорида кальция.

Статистическую обработку полученных данных проводили с помощью метода точной вероятности Фишера с учетом множественности сравнений.

Результаты изучения антиаритмической активности представлены в таблице 4. Выраженную антиаритмическую активность на хлоридкальциевой модели, патогомоничной для антиаритмиков I и IV класса по классификации Vaughan Williams, проявляли соединения АЛМ-864 (2 мг/кг), АЛМ-868 (3 мг/кг), АЛМ-870 (3 мг/кг), АЛМ-871 (2,5 мг/кг), АЛМ-872 (4,5 мг/кг), АЛМ-873 (4 мг/кг). Изученные соединения предотвращали гибель 83-100% животных при 100%-ой гибели животных в контрольных группах.

Пример 12. Изучение антиаритмической активности заявляемых соединений на модели реперфузионных нарушений ритма сердца у крыс.

Эксперименты проводили на беспородных белых крысах-самцах с массой тела 230-260 г. Животные были рандомизированы на 2 контрольные группы, группы, получавшие исследуемые заявляемые соединения, и группы, получавшие препараты сравнения триметазидин и ранолазин. Количество животных в группах составляло от 8 до 16 (табл.5). Наркотизированных животных (уретан 1300 мг/кг, в/б) фиксировали на операционном подогреваемом столике Surgi Suite (Kent Scientific Corporation, США) в положении на спине. Для введения изучаемых соединений катетеризировали бедренную вену. Затем животных переводили на искусственное дыхание, вентиляцию осуществляли аппаратом искусственной вентиляции легких для мелких животных (Ugo Basele, Италия). Далее производили тороко- и перикардотомию и под левую нисходящую коронарную артерию сразу же после ее выхода из-под ушка подводили лавсановую лигатуру. Ишемию миокарда вызывали одномоментной перевязкой коронарной артерии. Через 7 минут лигатуру снимали. Оценивали наличие/отсутствие фибрилляции желудочков сердца в течение 3-х минут от момента начала реперфузии. Животные, у которых не происходило восстановления кровотока в ишемизированной зоне, исключались из эксперимента. Регистрацию ЭКГ начинали за минуту до перевязки коронарного сосуда и продолжали в течение всего эксперимента. Для мониторинга, регистрации и обработки ЭКГ использовали компьютерный электрокардиограф «Полиспектр 8/ЕХ» (Нейрософт, Россия).

Животным контрольных групп за 5 минут до начала реперфузии внутривенно вводили эквивалентный объем (1 мл/кг) изотонического 0,9% раствора натрия хлорида, а животные опытных групп по аналогичной схеме внутривенно получали исследуемые соединения или препарат сравнения.

Для оценки антиаритмического эффекта в каждой группе подсчитывали количество животных, у которых развивались и у которых отсутствовали жизнеугрожающие аритмии (желудочковая тахикардия, фибрилляция желудочков).

Результаты изучения антиаритмической активности представлены в таблице 5. Выраженную антиаритмическую активность на модели реперфузионных аритмий проявляли соединения АЛМ-870 (3 мг/кг) и АЛМ-872 (4,5 мг/кг). Они статистически значимо снижали количество фибрилляций у животных в сравнении с контрольной группой. Соединение АЛМ-870 также значимо снижало количество жизнеугрожающих аритмий. Препарат сравнения триметазидин в дозе 25 мг/кг не обладал значимым эффектом в данной модели, а ранолазин в дозе 10 мг/кг снижал количество жизнеугрожающих аритмий и фибрилляций.

Предметом настоящего изобретения являются N¹-бензил-N²-(2-((2,3₅4-триметоксибензил)амино)этил)этан-1,2-диамины (I), и их соли II, обладающие кардиотропными свойствами. Заявляемые соединения обладают антиаритмической активностью в моделях аконитиновой и хлоридкальциевой аритмий, реперфузионных аритмий, а также обладают антиишемической активностью в модели изопротереноловой ишемии.

Изобретение относится к области химии и медицины, а именно к N¹-бензил-N²-(2-((2,3,4-триметоксибензил)амино)этил)этан-1,2-диаминам формулы I и их тригидрохлоридам. В формуле I R¹-R³ могут быть атомами водорода, метокси- или гидрокси-группами, при условии, что только один из заместителей R¹-R³ может являться метокси-группой. Соединения формулы I проявляют кардиотропную (антиишемическую и антиаритмическую) активность. 6 з.п. ф-лы, 5 табл., 12 пр.

1. Соединения N¹-бензил-N²-(2-((2,3,4-триметоксибензил)амино)этил)этан-1,2-диамины общей формулы I

где R¹-R³ могут быть атомами водорода, метокси- или гидрокси-группами, при условии, что только один из заместителей R¹-R³ может являться метокси-группой, а также их физиологически приемлемые соли тригидрохлориды общей формулы II (I×3HCl).

2. Соединение по п. 1, представляющее собой тригидрохлорид N¹-бензил-N²-(2-((2,3,4-триметоксибензил)амино)этил)этан-1,2-диамина (IIа, АЛМ-864), обладающее кардиотропной активностью.

3. Соединение по п. 1, представляющее собой тригидрохлорид 2-метокси-5-(((2-((2-((2,3,4-триметоксибензил)амино)этил)амино)этил)амино)метил)фенола (IIб, АЛМ-868), обладающее кардиотропной активностью.

4. Соединение по п. 1, представляющее собой тригидрохлорид 2-метокси-6-(((2-((2-((2,3,4-триметоксибнезил)амино)этил)амино)этил)амино)метил)фенола (IIг, АЛМ-870), обладающее кардиотропной активностью.

5. Соединение по п. 1, представляющее собой тригидрохлорид N¹-(2-метоксибензил)-N²-(2-((2,3,4-триметоксибензил)амино)этил)этан-1,2-диамина (IIд, АЛМ-871), обладающее кардиотропной активностью.

6. Соединение по п. 1, представляющее собой тригидрохлорид N¹-(3-метоксибензил)-N²-(2-((2,3,4-триметоксибензил)амино)этил)этан-1,2-диамина (IIе, АЛМ-872), обладающее кардиотропной активностью.

7. Соединение по п. 1, представляющее собой тригидрохлорид N¹-(4-метоксибензил)-N²-(2-((2,3,4-триметоксибензил)амино)этил)этан-1,2-диамина (IIж, АЛМ-873), обладающее кардиотропной активностью.