СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ СТЕПЕНИ УСТОЙЧИВОСТИ КРЫС К ОСТРОЙ НОРМОБАРИЧЕСКОЙ ГИПОКСИЧЕСКОЙ ГИПОКСИИ Российский патент 2025 года по МПК A61B5/87 A61B5/113 G01N33/49 G09B23/28 

Изобретение относится к области медицины, в частности авиационной, космической, морской медицины, и может быть использовано в экспериментальных исследованиях в области биологии и водолазной медицины для повышения точности определения степени устойчивости крыс к острой нормобарической гипоксической гипоксии путем оценки динамики тяжести симптомов гипоксической гипоксии.

Известны способы определения индивидуальной устойчивости мелких лабораторных животных к гипобарической гипоксической гипоксии путем подъема на высоту до 9000 метров в барокамере. Такое определение основано на исследовании летальности животных при дыхании газовыми смесями со сниженным парциальным давлением кислорода на высотах и приводит к гибели большинства животных (Патент 2563059 С2 Российская Федерация, МПК G09B 23/28. Способ определения степени устойчивости к гипобарической гипоксии мелких лабораторных животных / Г.А. Байбурина, Е.А. Нургалеева, Д.З. Шибкова, С.А. Башкатов; №2014137731/14; заявл. 17.09.2014; опубл. 20.09.2015 // Изобретения. Полезные модели: офиц. бюл. - М.: ФИПС, 2015. - №26; Шустов Е.Б., Каркищенко Н.Н., Каркищенко В.Н., Семенов Х.Х. Анализ параметров индивидуальной устойчивости лабораторных животных к гипоксии в интересах биологического моделирования нейропротекторного и антигипоксического действия лекарственных средств // Биомедицина, 2013, №4, С. 149-157).

Адекватных и простых способов определения устойчивости мелких лабораторных животных к острой нормобарической гипоксической гипоксии без их гибели в настоящее время не существует. В то же время известны способы определения устойчивости мелких лабораторных животных к гипобарической гипоксии по содержанию форменных элементов крови (Кондашевская М.В., К.А. Артемьева К.А., Алексанкина В.В., Тихонова Н.Б., Болтовская М.Н. Индикаторы устойчивости к гипоксии, определяемые по клеточным элементам крови крыс // Журнал эволюционной биохимии и физиологии, 2021, Том 57, №6, с. 475-483). Данный способ сложен в использовании, требует заборов крови у животных и наличия диагностического оборудования. Известен также способ определения устойчивости мелких лабораторных животных к циркуляторной гипоксии при развитии декомпрессионной болезни (Патент 2449380 С2 Российская Федерация, МПК G09B 23/28. Способ определения степени устойчивости мелких лабораторных животных к циркуляторной гипоксии / А.Ю. Шитов, А.А. Мясников, Б.Л. Макеев; №2010122952/14; заявл. 04.06.2010; опубл.27.04.2012 // Изобретения. Полезные модели: офиц. бюл. - М.: ФИПС, 2012. - №12) или остановки кровообращения (Байбурина Г.А., Нургалеева Е.А., Аглетдинов Э.Ф., Самигуллин А.Ф. Влияние устойчивости к гипоксии на соотношение между показателями свободнорадикального окисления липидов и белков в почках крыс в постреанимационном периоде // Казанский медицинский журнал, 2017, Том 98, №6, с. 949-954). Другие методы предполагают совместное действие на животных гипоксии и гиперкапнии, что не способствует правильной методике проведения экспериментов (Патент 2251158 С1 Российская Федерация, МПК G09В 23/28. Способ моделирования гипоксии с гиперкапнией у животного / А.В. Евсеев, М.А. Евсеева; №2003133679/14; заявл. 18.11.2003; опубл. 27.04.2005 // Изобретения. Полезные модели: офиц. бюл. - М.: ФИПС, 2005. - №12).

Недостатком существующих методов определения устойчивости животных к гипоксической гипоксии является их сложность и невысокая точность, а также необходимость использования большого количества животных в связи с высокой вероятностью их гибели и невозможностью повторного участия в экспериментах. Кроме того, большинство способов относятся к определению устойчивости животных к гипобарической гипоксии. В то же время явных прототипов способа определения устойчивости животных к нормобарической гипоксической гипоксии с использование гипоксических дыхательных газовых смесей в исследованной литературе обнаружено не было.

Так, ближайшими аналогами предлагаемого нами способа является способ, который предполагает определение устойчивости крыс к нормобарической гипоксической гипоксии с учетом исследования показателей цитохромоксидазы и супероксиддисмутазы (Марсянова Ю.А., Звягина В.И., Сучкова О.Н. Способ моделирования нормобарической хронической гипоксии у крыс самцов сток WISTAR // Наука молодых (Eruditio Juvenium), 2022. Т. 10, №2. С. 147-156), «Способ моделирования нормобарической хронической гипоксии» (Патент 2739675 С1 Российская Федерация, СПК G09B 23/28. Способ моделирования нормобарической хронической гипоксии / Марсянова Ю.А., Звягина В.И.; №2020123722; заявл. 17.07.2020; опубл. 28.12.2020 // Изобретения. Полезные модели: офиц. бюл. - М.: ФИПС, 2020. - №1) и «Способ определения степени устойчивости к гипобарической гипоксии мелких лабораторных животных» (Патент 2563059 С2 Российская Федерация, МПК G09B 23/28. Способ определения степени устойчивости к гипобарической гипоксии мелких лабораторных животных / Г.А. Байбурина, Е.А. Нургалеева, Д.З. Шибкова, С.А. Башкатов; №2014137731/14; заявл. 17.09.2014; опубл. 20.09.2015 // Изобретения. Полезные модели: офиц. бюл. - М.: ФИПС, 2015. - №26) Однако методики, представленные Марсяновой Ю.А. и соавторами, предназначены для моделирования хронической нормобарической гипоксической гипоксии, требуют проведения эвтаназии животных и наличия сложного оборудования для проведения биохимических исследований, а способ представленный Байбуриной Г.А. и соавторами требует «подъема» на большие высоты (до 9000 метров) и основан на определении сложных рефлексов, нарушающихся у животных при действии гипобарической гипоксической гипоксии. При этом во всех вышеперечисленных работах крыс делят на устойчивых, среднеустойчивых и низкоустойчивых к гипоксической гипоксии, не рассматривая другие возможные варианты устойчивости (например, крайне неустойчивые и высокоустойчивые), что также не способствует повышению точности исследований.

Целью изобретения является повышения точности определения степени устойчивости крыс к острой нормобарической гипоксической гипоксии.

Цель достигается тем, что используется Способ определения степени устойчивости крыс к острой нормобарической гипоксической гипоксии, включающий помещение крыс в термокамеру, герметизацию термокамеры, заполнение термокамеры гипоксической газовой смесью, содержащей 10% кислорода и 90% азота, выдерживание животных в этой атмосфере, оценку динамики тяжести симптомов гипоксической гипоксии, отличающийся тем, что крыс выдерживают в атмосфере термокамеры 90 минут, причем каждые 15 минут определяют выраженность и время наступления симптомов гипоксической гипоксии, а затем по формуле:

U=A+B+C+D+E+F,

где:

А - степень выраженности симптомов гипоксической гипоксии в течение первых 15-и минут нахождения в гипоксической дыхательной газовой среде;

при этом отсутствие симптомов гипоксической гипоксии оценивают в 1 балл;

изменения дыхания, в том числе учащение, прерывистость, участие в дыхании брюшной стенки оценивают в 14 баллов;

нарушения координации движений, падения на пол термокамеры оценивают в 20 баллов;

появление патологических типов дыхания и постоянное лежачее положение на полу термокамеры оценивают в 26 баллов;

возникновение судорог, рвоты и наличие постоянного бокового положения на полу термокамеры оценивается в 34 балла;

потерю сознания и отсутствие реакции на различные раздражители, а также выраженное угнетение дыхания оценивают в 48 баллов;

В - степень выраженности симптомов гипоксической гипоксии с 16-й по 30-ю минуты нахождения в гипоксической дыхательной газовой среде, при этом отсутствие симптомов гипоксической гипоксии оценивают в 1 балл;

изменения дыхания, в том числе учащение, прерывистость, участие в дыхании брюшной стенки оценивают в 12 баллов;

нарушения координации движений, падения на пол термокамеры оценивают в 18 баллов;

появление патологических типов дыхания и постоянное лежачее положение на полу термокамеры оценивают в 22 балла;

возникновение судорог, рвоты и наличие постоянного бокового положения на полу термокамеры оценивают в 26 баллов;

потерю сознания и отсутствие реакции на различные раздражители, а также выраженное угнетение дыхания оценивают в 38 баллов;

С - степень выраженности симптомов гипоксической гипоксии с 31-й по 45-ю минуты в гипоксической дыхательной газовой среде; при этом отсутствие симптомов гипоксической гипоксии оценивают в 1 балл;

изменения дыхания, в том числе учащение, прерывистость, участие в дыхании брюшной стенки оценивают в 10 баллов;

нарушения координации движений, падения на пол термокамеры оценивают в 14 баллов;

появление патологических типов дыхания и постоянное лежачее положение на полу термокамеры оценивают в 16 баллов;

возникновение судорог, рвоты и наличие постоянного бокового положения на полу термокамеры оценивают в 22 балла;

потерю сознания и отсутствие реакции на различные раздражители, а также выраженное угнетение дыхания оценивают в 32 балла;

D - степень выраженности симптомов гипоксической гипоксии с 46-й по 60-ю минуты нахождения в гипоксической дыхательной газовой среде; при этом отсутствие симптомов гипоксической гипоксии оценивают в 1 балл;

изменения дыхания, в том числе учащение, прерывистость, участие в дыхании брюшной стенки оценивают в 8 баллов;

нарушения координации движений, падения на пол термокамеры оценивают в 10 баллов;

появление патологических типов дыхания и постоянное лежачее положение на полу термокамеры оценивают в 12 баллов;

возникновение судорог, рвоты и наличие постоянного бокового положения на полу термокамеры оценивают в 16 баллов;

потерю сознания и отсутствие реакции на различные раздражители, а также выраженное угнетение дыхания оценивают в 24 балла;

Е - степень выраженности симптомов гипоксической гипоксии с 61-й по 75-ю минуты нахождения в гипоксической дыхательной газовой среде; при этом отсутствие симптомов гипоксической гипоксии оценивают в 1 балл;

изменения дыхания, в том числе учащение, прерывистость, участие в дыхании брюшной стенки оценивают в 4 балла;

нарушения координации движений, падения на пол термокамеры оценивают в 6 баллов;

появление патологических типов дыхания и постоянное лежачее положение на полу термокамеры оценивают в 8 баллов;

возникновение судорог, рвоты и наличие постоянного бокового положения на полу термокамеры оценивают в 12 баллов;

потерю сознания и отсутствие реакции на различные раздражители, а также выраженное угнетение дыхания оценивают в 16 баллов;

F - степень выраженности симптомов гипоксической гипоксии с 76-й по 90-ю минуты нахождения в гипоксической дыхательной газовой среде; при этом отсутствие симптомов гипоксической гипоксии оценивают в 1 балл;

изменения дыхания, в том числе учащение, прерывистость, участие в дыхании брюшной стенки оценивают в 2 балла;

нарушения координации движений, падения на пол термокамеры оценивают в 4 балла;

появление патологических типов дыхания и постоянное лежачее положение на полу термокамеры оценивают в 6 баллов;

возникновение судорог, рвоты и наличие постоянного бокового положения на полу термокамеры оценивают в 10 баллов;

потерю сознания и отсутствие реакции на различные раздражители, а также выраженное угнетение дыхания оценивают в 12 баллов;

затем суммированием определяют индекс устойчивости крыс к острой нормобарической гипоксической гипоксии U в баллах;

животных, набравших U менее 8 баллов, относят к группе высокоустойчивых, 8-52 баллов - к группе устойчивых, с 53-109 баллов - к группе среднеустойчивых, 110-160 балла - к группе низкоустойчивых, а получивших более 160 баллов - к группе крайне неустойчивых к острой нормобарической гипоксической гипоксии, при этом животные, у которых отмечается летальный исход от острой нормобарической гипоксической гипоксии в независимости от сроков его наступления признаются крайне неустойчивыми к ней.

Способ реализуется следующим образом:

Используется способ определения степени устойчивости крыс к острой нормобарической гипоксической гипоксии, включающий помещение крыс в термокамеру, герметизацию термокамеры, заполнение термокамеры гипоксической газовой смесью, содержащей 10% кислорода и 90% азота, выдерживание животных в этой атмосфере, оценку динамики тяжести симптомов гипоксической гипоксии, отличающийся тем, что крыс выдерживают в атмосфере термокамеры 90 минут, причем каждые 15 минут определяют выраженность и время наступления симптомов гипоксической гипоксии, а затем по формуле:

U=A+B+C+D+E+F,

где:

А - степень выраженности симптомов гипоксической гипоксии в течение первых 15-и минут нахождения в гипоксической дыхательной газовой среде;

при этом отсутствие симптомов гипоксической гипоксии оценивают в 1 балл;

изменения дыхания, в том числе учащение, прерывистость, участие в дыхании брюшной стенки оценивают в 14 баллов;

нарушения координации движений, падения на пол термокамеры оценивают в 20 баллов;

появление патологических типов дыхания и постоянное лежачее положение на полу термокамеры оценивают в 26 баллов;

возникновение судорог, рвоты и наличие постоянного бокового положения на полу термокамеры оценивается в 34 балла;

потерю сознания и отсутствие реакции на различные раздражители, а также выраженное угнетение дыхания оценивают в 48 баллов;

В - степень выраженности симптомов гипоксической гипоксии с 16-й по 30-ю минуты нахождения в гипоксической дыхательной газовой среде при этом отсутствие симптомов гипоксической гипоксии оценивают в 1 балл;

изменения дыхания, в том числе учащение, прерывистость, участие в дыхании брюшной стенки оценивают в 12 баллов;

нарушения координации движений, падения на пол термокамеры оценивают в 18 баллов;

появление патологических типов дыхания и постоянное лежачее положение на полу термокамеры оценивают в 22 балла;

возникновение судорог, рвоты и наличие постоянного бокового положения на полу термокамеры оценивают в 26 баллов;

потерю сознания и отсутствие реакции на различные раздражители, а также выраженное угнетение дыхания оценивают в 38 баллов;

С - степень выраженности симптомов гипоксической гипоксии с 31-й по 45-ю минуты в гипоксической дыхательной газовой среде; при этом отсутствие симптомов гипоксической гипоксии оценивают в 1 балл;

изменения дыхания, в том числе учащение, прерывистость, участие в дыхании брюшной стенки оценивают в 10 баллов;

нарушения координации движений, падения на пол термокамеры оценивают в 14 баллов;

появление патологических типов дыхания и постоянное лежачее положение на полу термокамеры оценивают в 16 баллов;

возникновение судорог, рвоты и наличие постоянного бокового положения на полу термокамеры оценивают в 22 балла;

потерю сознания и отсутствие реакции на различные раздражители, а также выраженное угнетение дыхания оценивают в 32 балла;

D - степень выраженности симптомов гипоксической гипоксии с 46-й по 60-ю минуты нахождения в гипоксической дыхательной газовой среде;

при этом отсутствие симптомов гипоксической гипоксии оценивают в 1 балл;

изменения дыхания, в том числе учащение, прерывистость, участие в дыхании брюшной стенки оценивают в 8 баллов;

нарушения координации движений, падения на пол термокамеры оценивают в 10 баллов;

появление патологических типов дыхания и постоянное лежачее положение на полу термокамеры оценивают в 12 баллов;

возникновение судорог, рвоты и наличие постоянного бокового положения на полу термокамеры оценивают в 16 баллов;

потерю сознания и отсутствие реакции на различные раздражители, а также выраженное угнетение дыхания оценивают в 24 балла;

Е - степень выраженности симптомов гипоксической гипоксии с 61-й по 75-ю минуты нахождения в гипоксической дыхательной газовой среде; при этом отсутствие симптомов гипоксической гипоксии оценивают в 1 балл;

изменения дыхания, в том числе учащение, прерывистость, участие в дыхании брюшной стенки оценивают в 4 балла;

нарушения координации движений, падения на пол термокамеры оценивают в 6 баллов;

появление патологических типов дыхания и постоянное лежачее положение на полу термокамеры оценивают в 8 баллов;

возникновение судорог, рвоты и наличие постоянного бокового положения на полу термокамеры оценивают в 12 баллов;

потерю сознания и отсутствие реакции на различные раздражители, а также выраженное угнетение дыхания оценивают в 16 баллов;

F - степень выраженности симптомов гипоксической гипоксии с 76-й по 90-ю минуты нахождения в гипоксической дыхательной газовой среде; при этом отсутствие симптомов гипоксической гипоксии оценивают в 1 балл;

изменения дыхания, в том числе учащение, прерывистость, участие в дыхании брюшной стенки оценивают в 2 балла;

нарушения координации движений, падения на пол термокамеры оценивают в 4 балла;

появление патологических типов дыхания и постоянное лежачее положение на полу термокамеры оценивают в 6 баллов;

возникновение судорог, рвоты и наличие постоянного бокового положения на полу термокамеры оценивают в 10 баллов;

потерю сознания и отсутствие реакции на различные раздражители, а также выраженное угнетение дыхания оценивают в 12 баллов;

затем суммированием определяют индекс устойчивости крыс к острой нормобарической гипоксической гипоксии U в баллах;

животных, набравших U менее 8 баллов, относят к группе высокоустойчивых, 8-52 баллов - к группе устойчивых, с 53-109 баллов - к группе среднеустойчивых, 110-160 балла - к группе низкоустойчивых, а получивших более 160 баллов - к группе крайне неустойчивых к острой нормобарической гипоксической гипоксии, при этом животные, у которых отмечается летальный исход от острой нормобарической гипоксической гипоксии в независимости от сроков его наступления признаются крайне неустойчивыми к ней.

Например, необходимо определить устойчивость 3-х крыс к острой нормобарической гипоксической гипоксии. Для этого крыс помещают в термокамеру, герметизируют ее, заполняют гипоксической газовой смесью, содержащей 10% кислорода и 90% азота и выдерживают животных 90 минут в этой атмосфере. Во время нахождения крыс в термокамере наблюдают за их состоянием и каждые 15 минут определяют выраженность и время наступления симптомов гипоксической гипоксии.

У крысы №1 до 78-й минуты симптомы гипоксической гипоксии отсутствовали на 79-й минуте нахождения в термокамере отмечались изменения дыхания (учащение, прерывистость), которые отмечались до окончания выдержки в термокамере. При этом животное выжило. Используя формулу, получаем:

Следовательно, такое животное мы отнесем к группе высокоустойчивых к циркуляторной гипоксии.

У крысы №2 до 17-й минуты выдержки в термокамере симптомы гипоксической гипоксии отсутствовали, на 18-й минуте появились изменения в дыхании, на 41-й минуте появилась нарушения координации движений, на 48-й минуте появились патологические типы дыхания, на 65 минуте развился судорожный приступ, появилась рвота, судороги и рвота сохранялись до 90 минуты наблюдения. При этом животное выжило. Используя формулу, получаем:

Следовательно, такое животное мы отнесем к группе среднеустойчи-вых к острой нормобарической гипоксической гипоксии.

У крысы №3 до 8-й минуты выдержки в термокамере симптомы гипоксической гипоксии отсутствовали, на 9-й минуте выдержки появились изменения в дыхании, на 17-й минуте наблюдались нарушения координации движений, на 35 минуте появились патологические типы дыхания, на 40 минуте развились судороги, на 44 минуте зарегистрированы периодические потери сознания с отсутствием чувствительности на раздражители, которые регистрировались до конца наблюдения. Используя формулу, получаем:

При этом животное выжило после проведения эксперимента. Следовательно, такое животное мы отнесем к группе низкоустойчивых к острой нормобарической гипоксической гипоксии.

Проведенные нами экспериментальные исследования на 235 животных убедительно доказали надежность использования данной формулы и высокую точность определения устойчивости крыс к нормобарической гипоксической гипоксии (Шитов А.Ю. Способ прогнозирования тяжести гипоксического состояния в водолазной практике // А.Ю. Шитов / Усовершенствование способов и аппаратуры, применяемых в учебном процессе, медико-биологических исследованиях и клинической практике. Сборник изобретений и рационализаторских предложений. Выпуск 40. - СПб., ВМедА, 2009. - С. 161.; Старовойт А.В. Влияние умеренной гипобарии на перекисное окисление липидов и компоненты антиоксидантной системы крови лабораторных животных // А.В. Старовойт, А.А. Мясников, А.Ю. Шитов / Современные подходы к метаболической коррекции в профилактике и терапии. Материалы межрегиональной конференции с международным участием. - СПб.: СПБГ-МА им. И.И. Мечникова, 2009. - С. 116-120.; Старовойт А.В. Клинико-лабораторная оценка метаболических нарушений при воздействии повышенного и пониженного давления / Старовойт А.В., Мясников А.А., Пастушенков В.Л., Шитов А.Ю., Лустин С.И. // Баротерапия в комплексном лечении раненых, больных и пораженных. Материалы VIII Всеармейской научно-практической конференции / Под ред. А.А. Мясникова. - СПб.: ВМедА, 2012. - С. 95-96.). Если проводить сравнение с ближайшим аналогом - методикой, предложенной Байбуриной Г.А. с соавторами (Патент 2563059 С2 Российская Федерация, МПК G09B 23/28. Способ определения степени устойчивости к гипобарической гипоксии мелких лабораторных животных / Г.А. Байбурина, Е.А. Нургалеева, Д.З. Шибкова, С.А. Башкатов; №2014137731/14; заявл. 17.09.2014; опубл. 20.09.2015 // Изобретения. Полезные модели: офиц. бюл. - М.: ФИПС, 2015. - №26), то при использовании нашего способа, точность определения устойчивости крыс к нормобарической гипоксической гипоксии повысилась на 12%. Об этом свидетельствуют результаты проведенных нами экспериментов. Так, при проведении исследований Байбуриной Г.А. с соавторами (Патент 2563059 С2 Российская Федерация, МПК G09B 23/28. Способ определения степени устойчивости к гипобарической гипоксии мелких лабораторных животных / Г.А. Байбурина, Е.А. Нургалеева, Д.З. Шибкова, С.А. Башкатов; №2014137731/14; заявл. 17.09.2014; опубл. 20.09.2015 // Изобретения. Полезные модели: офиц. бюл. - М.: ФИПС, 2015. - №26), при определении степени тяжести гипоксической гипоксии у 220 крыс было выявлено 4 группы крыс: неустойчивые (14%), низкоустойчивые (38%), среднеустойчивые (30%), высокоустойчивые (18%).

При проведении нами экспериментов на 235 животных, по нашему способу выявлялось 5 групп крыс: высокоустойчивые - 10%, устойчивые -20%, среднеустойчивые - 18%, неустойчивые - 35%, крайне неустойчивые -11%. По сравнению со способом Бабуриной Г.А. произошло уменьшение группы среднеустойчивых на 12%, за счет появления новой группы - устойчивых к действию острой нормобарической гипоксической гипоксии крыс. При этом количество неустойчивых и низкоустойчиивых крыс как в наших исследованиях, так и в исследованиях Бабуриной Г.А. было почти одинаковым. Следовательно, точность определения устойчивости крыс к нормобарической гипоксической гипоксии повысилась на 12%.

Таким образом, используя способ определения устойчивости крыс к нормобарической гипоксической гипоксии, путем оценки динамики тяжести симптомов данного заболевания, лицо, проводящее исследования в области водолазной медицины, сможет повысить точность определения устойчивости, а значит возрастет точность всего экспериментального исследования.

Изобретение относится к экспериментальной медицине, а именно к клинической диагностике. Крыс помещают в термокамеру, герметизируют ее, заполняют гипоксической газовой смесью, содержащей 10% кислорода и 90% азота, и выдерживают животных 90 минут в этой атмосфере. Во время нахождения крыс в термокамере наблюдают за их состоянием и каждые 15 минут определяют выраженность и время наступления симптомов гипоксической гипоксии. Опираясь на полученнные данные, определяют степень устойчивости крыс к острой нормобарической гипоксической гипоксии (U) по оригинальной формуле. Способ позволяет повысить точность определения степени устойчивости крыс к острой нормобарической гипоксической гипоксии, что в свою очередь дает возможность использовать полученные данные для дальнейших экспериментальных исследований в области биологии и водолазной медицины. 3 пр.

Способ определения степени устойчивости крыс к острой нормобарической гипоксической гипоксии, включающий помещение крыс в термокамеру, герметизацию термокамеры, заполнение термокамеры гипоксической газовой смесью, содержащей 10% кислорода и 90% азота, выдерживание животных в этой атмосфере, оценку динамики тяжести симптомов гипоксической гипоксии, отличающийся тем, что крыс выдерживают в атмосфере термокамеры 90 минут, причем каждые 15 минут определяют выраженность и время наступления симптомов гипоксической гипоксии, а затем по формуле:

U=A+B+C+D+E+F,

где:

А - степень выраженности симптомов гипоксической гипоксии в течение первых 15-ти минут нахождения в гипоксической дыхательной газовой среде;

при этом отсутствие симптомов гипоксической гипоксии оценивают в 1 балл;

изменения дыхания, в том числе учащение, прерывистость, участие в дыхании брюшной стенки, оценивают в 14 баллов;

нарушения координации движений, падения на пол термокамеры оценивают в 20 баллов;

появление патологических типов дыхания и постоянное лежачее положение на полу термокамеры оценивают в 26 баллов;

возникновение судорог, рвоты и наличие постоянного бокового положения на полу термокамеры оценивается в 34 балла;

потерю сознания и отсутствие реакции на различные раздражители, а также выраженное угнетение дыхания оценивают в 48 баллов;

В - степень выраженности симптомов гипоксической гипоксии с 16-й по 30-ю минуты нахождения в гипоксической дыхательной газовой среде, при этом отсутствие симптомов гипоксической гипоксии оценивают в 1 балл;

изменения дыхания, в том числе учащение, прерывистость, участие в дыхании брюшной стенки, оценивают в 12 баллов;

нарушения координации движений, падения на пол термокамеры оценивают в 18 баллов;

появление патологических типов дыхания и постоянное лежачее положение на полу термокамеры оценивают в 22 балла;

возникновение судорог, рвоты и наличие постоянного бокового положения на полу термокамеры оценивают в 26 баллов;

потерю сознания и отсутствие реакции на различные раздражители, а также выраженное угнетение дыхания оценивают в 38 баллов;

С - степень выраженности симптомов гипоксической гипоксии с 31-й по 45-ю минуты в гипоксической дыхательной газовой среде; при этом отсутствие симптомов гипоксической гипоксии оценивают в 1 балл;

изменения дыхания, в том числе учащение, прерывистость, участие в дыхании брюшной стенки, оценивают в 10 баллов;

нарушения координации движений, падения на пол термокамеры оценивают в 14 баллов;

появление патологических типов дыхания и постоянное лежачее положение на полу термокамеры оценивают в 16 баллов;

возникновение судорог, рвоты и наличие постоянного бокового положения на полу термокамеры оценивают в 22 балла;

потерю сознания и отсутствие реакции на различные раздражители, а также выраженное угнетение дыхания оценивают в 32 балла;

D - степень выраженности симптомов гипоксической гипоксии с 46-й по 60-ю минуты нахождения в гипоксической дыхательной газовой среде; при этом отсутствие симптомов гипоксической гипоксии оценивают в 1 балл;

изменения дыхания, в том числе учащение, прерывистость, участие в дыхании брюшной стенки, оценивают в 8 баллов;

нарушения координации движений, падения на пол термокамеры оценивают в 10 баллов;

появление патологических типов дыхания и постоянное лежачее положение на полу термокамеры оценивают в 12 баллов;

возникновение судорог, рвоты и наличие постоянного бокового положения на полу термокамеры оценивают в 16 баллов;

потерю сознания и отсутствие реакции на различные раздражители, а также выраженное угнетение дыхания оценивают в 24 балла;

Е - степень выраженности симптомов гипоксической гипоксии с 61-й по 75-ю минуты нахождения в гипоксической дыхательной газовой среде; при этом отсутствие симптомов гипоксической гипоксии оценивают в 1 балл;

изменения дыхания, в том числе учащение, прерывистость, участие в дыхании брюшной стенки, оценивают в 4 балла;

нарушения координации движений, падения на пол термокамеры оценивают в 6 баллов;

появление патологических типов дыхания и постоянное лежачее положение на полу термокамеры оценивают в 8 баллов;

возникновение судорог, рвоты и наличие постоянного бокового положения на полу термокамеры оценивают в 12 баллов;

потерю сознания и отсутствие реакции на различные раздражители, а также выраженное угнетение дыхания оценивают в 16 баллов;

F - степень выраженности симптомов гипоксической гипоксии с 76-й по 90-ю минуты нахождения в гипоксической дыхательной газовой среде; при этом отсутствие симптомов гипоксической гипоксии оценивают в 1 балл;

изменения дыхания, в том числе учащение, прерывистость, участие в дыхании брюшной стенки, оценивают в 2 балла;

нарушения координации движений, падения на пол термокамеры оценивают в 4 балла;

появление патологических типов дыхания и постоянное лежачее положение на полу термокамеры оценивают в 6 баллов;

возникновение судорог, рвоты и наличие постоянного бокового положения на полу термокамеры оценивают в 10 баллов;

потерю сознания и отсутствие реакции на различные раздражители, а также выраженное угнетение дыхания оценивают в 12 баллов;

затем суммированием определяют индекс устойчивости крыс к острой нормобарической гипоксической гипоксии U в баллах;

животных, набравших U менее 8 баллов, относят к группе высокоустойчивых, 8-52 баллов - к группе устойчивых, с 53-109 баллов - к группе среднеустойчивых, 110-160 балла - к группе низкоустойчивых, а получивших более 160 баллов - к группе крайне неустойчивых к острой нормобарической гипоксической гипоксии, при этом животные, у которых отмечается летальный исход от острой нормобарической гипоксической гипоксии в независимости от сроков его наступления, признаются крайне неустойчивыми к ней.