Изобретение относится к фармакологии и медицинской диагностике, более конкретно, к противоопухолевому конъюгату на основе человеческого сывороточного альбумина, пригодного для визуализации и комбинированной терапии глиобластом.
Агрессивная и рецидивирующая природа глиобластомы (глиом) является многофакторной. Это объясняется биологической гетерогенностью глиобластомы, дисфункциональными метаболическими сигнальными путями, жестким гематоэнцефалическим барьером, присущей ей резистентностью к стандартной терапии. Последняя возникает из-за того, что клетки глиомы обладают свойствами стволовых клеток, глиома обладает иммуносупрессивным микроокружением, гипоксией и неоангиогенезом, которые очень хорошо организованы и создают собственную высокопротуморогенную среду опухоли. За последние несколько десятилетий было внедрено несколько методов лечения глиобластомы, однако существенного улучшения общей выживаемости не было достигнуто. В настоящее время используется комбинированный подход, включающий в себя ряд последовательных действий: максимальную резекцию, лучевую терапию и химиотерапию темозоламидом [1].
В настоящее время для лечения глиом перспективным методом считается бор-нейтронозахватная терапия (БНЗТ), при которой препараты, содержащие изотоп бора 10, накапливаются в опухолевых клетках с последующим их облучением пучком эпитермальных нейтронов. Этот метод имеет преимущество перед традиционной лучевой терапией, так как он позволяет более избирательно уничтожать опухолевые клетки, не оказывая существенного влияния на здоровые ткани. Эффективность лечения можно существенно повысить путем объединения в одной конструкции терапевтического агента и агента, стимулирующего физическое воздействия [2].
Таким образом, создание конструкций, сочетающих в себя компоненты, обеспечивающие визуализацию опухоли (условие, необходимое для максимальной резекции опухоли), бор-содержащий кластер, необходимый для БНЗТ и эффективный химиотерапевтический препарат, обеспечивающий подавление опухоли до и после лучевого воздействия, позволит повысить эффективность лечения, снизить общее токсическое воздействие на организм пациента, а также контролировать накопление препарата в опухоли, необходимое для определения оптимального времени применения лучевой терапии.
Препараты, объединяющие в рамках одной структуры три выше перечисленных компонента, в настоящее время не описаны.
Человеческий сывороточный альбумин (ЧСА) хорошо зарекомендовал себя как платформа для различных диагностических и терапевтических применений, в том числе как перспективный носитель для направленной доставки противоопухолевых препаратов [3].
Длительное время циркуляции терапевтических конструкций на основе альбумина дает возможность для пассивного накопления препарата в злокачественных опухолях благодаря сосудистым дефектам солидных опухолей. Феномен, известный как эффект повышенной проницаемости и удерживания (накопления) (EPR-эффект) [4]. Кроме того, накопление конъюгатов альбумина с лекарственным препаратом в опухолевых клетках может быть обусловлено трансцитозом в интерстициальное пространство опухоли, который инициируется связыванием альбумина с албондином (gp60 рецептор) с последующим взаимодействием с другим вектором -рецептором SPARC (Secreted Protein Acid and Rich in Cysteine, кислый секретируемый белок, богатый цистеином) [5].
Монометилауристатины Е и F являются производными природного продукта долостатина 10, которые ингибируют полимеризацию тубулина в делящихся клетках и тем самым индуцируют апоптоз [6]. Кроме того, ауристатины действуют как агенты, повреждающие уже сформировавшиеся сосуды опухоли. Их цитотоксичность примерно в 100-1000 раз выше, чем у доксорубицина - часто используемого ранее противоракового препарата [7].
В настоящее время известно более 30 разновидностей конъюгатов антител с ауристатинами, которые используют в клинических исследованиях [8].
В работе [9] было показано, что замена на альбумин антитела в составе коммерческого противоопухолевого препарата «Adcetris» (конъюгат антитела с монометилауристатином Е (ММАЕ), присоединенным к белку через расщепляемый катепсином валин-цитрулиновый линкер (VC)), привела к увеличению спектра действия препарата по сравнению с Adcetris.
Известен противоопухолевый коньюгат на основе ЧСА, содержащий три терапевтических агента. Способ получения противоопухолевогого коньюгата, включает обработку раствора ЧСА смесью 5-фторурацила и медного комплекса тиосемикарбозид бензоилпиридина на первой стадии. За счет разной степени гидрофобности терапевтические агенты связываются в различных доменах (IIA и IB соответственно). На второй стадии образовавшийся комплекс ЧСА с двумя низкомолекулярными компонентами обрабатывают малеимидным производным терапевтического аптамера, что приводит к его ковалентному присоединению к свободной сульфгидрильной группе. В результате получают коньюгат на основе ЧСА, содержащий три терапевтических агента, один из которых (терапевтический аптамер) ковалентно присоединен к альбумину через сульфгидрильную группу, а два других (Cu(II) - тиосемикарбозид бензоилпиридина и 5-фторурацил) образуют не ковалентные комплексы с субдаменами IB и IIA [10].
Недостатком известного коньюгата на основе ЧСА является низкое качество целевого продукта, связанное с нестабильностью и быстрому разрушению конъюгата в крови и перераспределением терапевтических агентов от конъюгата к свободным молекулам ЧСА, имеющимся в большом количестве в биологических жидкостях.
Известен противоопухолевый коньюгат на основе рекомбинантного альбумина, содержащий терапевтический или контрастирующий агент. Коньюгат получают путем последовательной модификации альбумина, при этом на первой стадии осуществляют синтез рекомбинантного белка, содержащего по С- и/или N-концу альбумина пептид, включающий несколько остатков цистеина, а на второй стадии проводят конъюгацию малеимидных производных флуоресцеина или малеимидных производных терапевтического агента по свободным сульфгидрильным группам цистеин содержащего пептида. Количество вводимого контрастирующего или терапевтического агента регулируется на первой стадии путем получения рекомбинантного белка, содержащего необходимое число остатков цистеина (патентная заявка US 20100310468 А1, опубл. 09.12.2010).
Недостатками известного коньюгата являются низкое качество из-за сложности выделения рекомбинантного белка с чистотой, необходимой для последующего создания на его основе терапевтического или контрастирующего препарата, и как следствие, его высокая цена, а также недостаточные функциональные возможности, поскольку он содержит один терапевтический и один контрастирующий агент.
На данный момент не известен противоопухолевый коньюгат на основе человеческого сывороточного альбумина, включающий сигнальную флуоресцентную метку, борный кластер, необходимый для БНЗТ и химиотерапевтический агент.
Наиболее близким к заявляемому противоопухолевому конъюгату - прототипом, является противоопухолевый коньюгат на основе человеческого сывороточного альбумина, содержащий две сигнальные молекулы и остаток гемцитабина, модифицированный клозо-додекабораном по азотистому основанию [11]. Известный коньюгат получают последовательной модификацией структуры альбумина, заключающейся в следующем: на первой стадии проводят присоединение флуоресцентной метки по Cys-34 белка через взаимодействие с соответствующим малеимидным реагентом. На второй стадии полученный продукт обрабатывают тиолактоном N-трифторацетилгомоцистеина. Третья стадия заключается в обработке итогового продукта второй стадии малеимидным производным гемцитабина, содержащим клозо-додекаборат, присоединенный по азотистому основанию.
Недостатком известного противоопухолевого коньюгата является достаточно низкая цитотоксичность химиотерапевтической части конъюгата (аналога гемцитабина) в отношении клеток глиомы: не более 30% понижения выживаемости клеток глиомы T98G при 0,03 мМ концентрации прототипа. Кроме этого, необходимо увеличение количества атомов бора в составе конъюгата, что может способствовать большему накоплению бора в опухолевой клетке при уменьшении дозировки препарата.
Задачей изобретения является создание тераностических конъюгатов двойного действия на основе ЧСА, имеющих флуоресцентную метку, химиотерапевтический агент, а также кластеры бора, необходимые для проведения БНЗТ и последующей химиотерапии глиобластом человека.
Технический результат: расширение функциональных возможностей и повышение качества целевого продукта за счет получения противоопухолевого коньюгата на основе ЧСА заданного строения, имеющего контрастирующий и бор-содержащий агенты, а так же химиотерапевтический агент, присоединенный к конструкции через расщепляемый линкер.
Поставленная задача достигается полученным коньюгатом человеческого сывороточного альбумина с контрастирующим, борсодержащим и химиотератевтическим агентами, имеющим структуру, описанную формулами I или II:
где: ЧСА представляет собой человеческий сывороточный альбумин, Су5 - контрастирующий агент, НсуСо(В9С2Н11)2 - бор-содержащий агент, MMAE/MMAF - химиотерапевтический агент, присоединенный к ЧСА через линкер, расщепляемый в лизосоме опухолевой клетки
Схема синтеза заявляемого коньюгата представлена на фиг. 1
Способ синтеза коньюгата заключается в следующем.
На первой стадии проводят присоединение флуоресцентной метки по Cys-34 белка через взаимодействие с соответствующим малеимидным реагентом. На второй стадии полученный продукт обрабатывают тиолактоном гомоцистеина, содержащим бис-дикарболид кобальта, присоединенный по аминогруппе тиолактона. На третьей стадии проводят обработку промежуточного продукта второй стадии малеимидным производным монометил ауристатина, выбранного из группы: монометилауристатин Е, монометилауристатин F. При этом, монометилауристатин присоединен к структуре конъюгата через линкер, имеющий валин-цитруллиновый дипептидный и саморазрушающийся n-аминобензоильный фрагменты. Таким образом, химиотерапевтический агент может быть отсоединен от общей конструкции в лизосоме раковой клетки.
В результате получают противоопухолевый коньюгат на основе ЧСА, имеющий структуру HSA-Cy5-HcyCo(B9C2H11)2-MMAE, где ММАЕ представляет собой монометилауристатин Е со структурной формулой I.
Или HSA-Cy5-HcyCo(B9C2H11)2-MMAF, где MMAF представляет собой монометилауристатин F со структурной формулой II.
Предлагаемый противоопухолевый конъюгат отличается от прототипа наличием в 2-4 раза более цитотоксичного, чем химически модифицированный гемцитабин, химиотерапевтического агента (монометилауристатина). Предлагаемый конъюгат имеет большую среднюю степень модификации химиотерапевтического агента (2 против 1,5) и большее количество атомов бора в своей структуре (36 атомов бора в составе двух присоединенных остатков бис-дикарболида против 18 атомов бора в составе и 1,5 остатков клозо-додекаботата в среднем присоединенного к одной молекуле белка). Кроме этого, предлагаемый конъюгат отличается тем, что химиотерапевтический агент и бор-содержащий остаток внедрены в его структуру на разных стадиях процесса, что удобнее для контроля соотношения химиотерапевтическое средство / борный кластер в составе конъюгата.
Полученный противоопухолевый коньюгат на основе ЧСА обладает более высокой цитотоксической активностью, а также расширенными функциональными возможностями за счет контрастирующего агента, позволяющего визуализировать опухоль и бор-содержащего агента, позволяющего использовать коньюгат для БНЗТ. Заявляемый противоопухолевый коньюгат относится к тераностикам нового поколения, поддерживающим двойную стратегию уничтожения раковой опухоли.
Изобретение иллюстрируется следующими примерами.
Пример 1. Синтез противоопухолевого коньюгата HSA-Cy5-НсуСо(В9С2Н11)2-ММАЕ, имеющего формулу I.
HSA-Cy5. Синтез HSA-Cy5 был адаптирован согласно [12]. Для этого 1 мМ раствор ЧСА в фосфатном буфере PBS (буфер содержит 10 мМ Na2HPO4, 2 мМ KH2PO4, 137 мМ NaCl, 2,7 мМ KCl рН 7,4) смешивали с растворенным в диметилсульфоксиде (ДМSO) малеимидным производным красителя сульфо-Су5. При этом в реакционной смеси соблюдалось молярное соотношение сульфо-Су5 / HSA, равное 0,5 и объемное соотношение DMSO / PBS, равное 0,05. Реакционную смесь аккуратно перемешивали в течение 18 ч при 37°С. Очистку итогового белкового конъюгата проводили на центрифужных фильтрах (Amicon Centriprep YM30, Millipore, Bedford, MA) имеющих пропускную способность для веществ с массой ниже 3000 Да. При этом проводили промывку реакционной смеси 10 порциями того же объема 10% DMSO в PBS (v/v), и, далее, 10 порциями PBS.
Выход HSA-Cy5 ~ 95%. Электронная спектроскопия (PBS, рН 7,4): λmax 278 нм (ε=(3.70±0.1) × 104), λmax 650 нм (ε=(6.80±0.1) × 104). Масс спектрометрия (MALDI-TOF) m/z: измеренное среднее значение М для HSA-Су5 66692 Да соответствует 0,25% модификации ЧСА с помощью сульфо-Су5 (рассчитанное значение М для сульфо-Су5 766 Да).
HSA-Cy5-HcyCo(B9C2H11)2. Раствор HSA-Cy5 в буфере PBS (2,235 мл, 8,4 × 10-4 М, 1.88 мкмоль) смешивали с Со(В9С2Н11)2-HTL растворенном в DMSO (118 мкл, 12.2 мкмоль). При этом в реакционной смеси соблюдалось молярное соотношение Со(В9С2Н11)2-HTL / HSA равное 6,5 и объемное соотношение DMSO / PBS равное 0,05. Реакционную смесь аккуратно перемешивали в течение 42 ч при 37°С. Очистку итогового белкового конъюгата проводили на центрифужных фильтрах (Amicon Centriprep YM30, Millipore, Bedford, MA) имеющих пропускную способность для веществ с массой ниже 3000 Да. При этом проводили промывку реакционной смеси 10 порциями того же объема 10% DMSO в PBS (v/v), и, далее, 10 порциями PBS.
Выход HSA-Cy5-HcyCo(B9C2H11)2 ~ 66%. Электронная спектроскопия (PBS, рН 7,4): λmax 268 нм (ε=(10.45±0.1) × 104), λmax 313 нм (ε=(8.22±0.2) × 104), λmax 652 нм (ε=(6.64±0.1) × 104). Масс спектрометрия (MALDI-TOF) m/z: измеренное среднее значение М для HSA-Cy5-HcyCo(B9C2H11)2 67982 Да соответствует присоединению двух остатков НсуСо(В9С2Н11)2 на одну молекулу HSA (рассчитанное значение М для НсуСо(В9С2Н11)2 647 Да). Эмиссионная спектроскопия с индуктивно-связанной плазмой: 1,99±0,08 м.д. бора найдено при количестве исследуемого образца 0,035 мкмоль, что соответствует 2,01±0,05 остатков НсуСо(В9С2Н11)2 на молекулу альбумина.
HSA-Cy5-HcyCo(B9C2H11)2-MMAE. Очищенный конъюгат HSA-Cy5-HcyCo(B9C2H11)2 в буфере PBS (524 мкл, 0,7 × 10-3 М, 0,37 мкмоль) был смешан с mc-vc-pub-MMAE, который был растворен в DMSO (52,4 мкл, 2.8 мкмоль). Молярное соотношение модифицирующий малеимидный компонент / конъюгат в реакционной смеси составляло 7,5, и объемное соотношение DMSO / PBS было равно 0,1. Реакционная смесь аккуратно перемешивалась в течение 18 ч при 37°С. Очистка итогового конъюгата была проведена таким же образом, как и в случае HSA-Cy5-HcyCo(B9C2H11)2.
Выход коньюгата HSA-Cy5-HcyCo(B9C2H11)2-MMAE (I) ~ 86,77%. Электронная спектроскопия (PBS, рН 7,4): λmax 255 нм(ε=(15.0±0.1) × 104), λmax 313 нм (ε=(8.22±0.2) × 104), λmax 654 нм (ε=(6.64±0.1) × 104). Масс спектрометрия (MALDI-TOF) m/z: среднее измеренное значение Мдля HSA-Су5-НсуСо(В9С2Н11)2-ММАЕ 70615 Да соответствует присоединению двух остатков ММАЕ на одну молекулу белка (рассчитанное М для НсуСо(В9С2Н11)2 647 Да, рассчитанное М для mc-vc-pub-MMAE 1316 Да).
Пример 2. Синтез противоопухолевого коньюгата HSA-Cy5-HcyCo(B9C2H11)2-MMAF, имеющего формулу II.
HSA-Cy5. Синтез HSA-Cy5 проводили аналогично примеру 1.
HSA-Cy5-HcyCo(B9C2H11)2. Синтез HSA-Cy5-HcyCo(B9C2H11)2 проводили аналогично примеру 1.
HSA-Cy5-HcyCo(B9C2H11)2-MMAF. Очищенный конъюгат HSA-Cy5-НсуСо(В9С2Н11)2 в буфере PBS (524 мкл, 0,7 × 10-3 М, 0,37 мкмоль) был смешан с mc-vc-pub-MMAF, который был растворен в DMSO (52,4 мкл, 2.8 мкмоль). Молярное соотношение модифицирующий малеимидный компонент / конъюгат в реакционной смеси в каждом из трех случаев составляло 7,5, и объемное соотношение DMSO / PBS было равно 0,1. Реакционную смесь аккуратно перемешивали течение 18 ч при 37°С. Очистка итогового конъюгата была проведена таким же образом, как и в случае HSA-Cy5-HcyCo(B9C2H11)2.
Выход коньюгата HSA-Cy5-HcyCo(B9C2H11)2-MMAF ~ 84.8%. Электронная спектроскопия (PBS, рН 7,4): λmax 255 нм (ε=(16.25±0.1) × 104), λmax 313 нм (ε=(8.22±0.2) × 104) 654 нм (ε=(6.64±0.1) × 104). Масс-спектрометрия (MALDI-TOF) m/z: среднее измеренное значение М для HSA-Cy5-HcyCo(B9C2H11)2-MMAF 70643 Да соответствует присоединению двух остатков MMAF на одну молекулу HSA (рассчитанное значение М для НсуСо(В9С2Н11)2 647 Да, рассчитанное значение М для mc-vc-pub-MMAF 1330 Да).
Пример 3
Определение цитотоксичности коньюгатов I и II в отношении клеток глиобластомы человека.
Влияние соединений I и II на клеточные линии глиомы человека (U87 и T98G) проводили с помощью МТТ-анализа [13]. Клетки выращивали до фазы экспоненциального роста и затем высевали в 96-луночные планшеты. Концентрация клеток составляла 2000 клеток на лунку. Перед обработкой клетки инкубировали в течение 72 часов. После этого их обрабатывали средой, содержащей альбумин и его конъюгаты (HSA, HSA-Cy5 HcyCo(B9C2H11)2, HSA-Cy5-HcyCo(B9C2H11)2-MMAF, HSA-Cy5-HcyCo(B9C2H11)2-MMAE, HSA + mc-vc-pub-MMAF, HSA + mc-vc-pub-MMAE). Концентрации конъюгатов находились в диапазоне от 0,02 до 30 мкМ по содержанию белка. Обработку проводили при 37°С в течение 72 часов. После этого добавляли МТТ до концентрации 0,5 мг/мл. После инкубации при 37°С в течение 2 ч среду удаляли и в каждую лунку добавляли по 100 мкл изопропанола для растворения кристаллов образовавшегося формазана. Планшет анализировали с использованием микропланшетного ридера Multiscan FC (Thermo Fisher Scientific Corporation) с пиком поглощения при 570 нм. В качестве базовой линии использовали интенсивность поглощения при 620 нм. Для каждого образца белка было проведено три независимых теста. Данные представлены как средние значения со стандартными отклонениями.
На фиг.2 показана цитотоксичность коньюгатов I и II в отношении клеток глиомы человека U87 и T98G со сверхэкспрессией катепсина В и проведено сравнение с цитотоксичностью частичной конструкции, не содержащей химиотерапевтически полезной нагрузки и смешанных точек (нековалентно связанные химиотерапевтические молекулы ММАЕ и MMAF с HSA).
В таблице 1 показаны данные IC50 коньюгатов I и II и контролей (нековалентно связанные химиотерапевтические молекулы ММАЕ и MMAF с HSA), полученные с использованием клеточных линий T98G и U87.
Оба соединения показали улучшенное ингибирование клеточного роста клеток обеих линий по сравнению с борсодержащим альбумином, что указывает на то, что химиотерапевтические агенты могут высвобождаться и ингибировать пролиферацию раковых клеток глиомы. На линии T98G коньюгат I, по сравнению с коньюгатом II, продемонстрировал увеличение эффективности в 4-4,5 раза. Однако было обнаружено, что этот конъюгат убивает клетки U87 менее эффективно, чем клетки T98G, со значениями IC50 0,97 мкМ (таблица 1). Кроме того, принимая во внимание значения IC50 нековалентно связанных ММАЕ и MMAF, видно, что свободный ММАЕ также более цитотоксичен, чем MMAF.
Пример 4. Исследование проникновения коньюгатов I и II в клетки глиобластомы человека.
Клетки глиобластомы человека T98G (105 клеток/мл, 100 мкл) в IMDM среде, содержащей 10% FBS, пенициллин и стрептомицин, высевали в 96-луночные планшеты с оптическим дном с основанием для покровного стекла (Thermo Scientific™ Nunc™ Micro Well™). После преинкубации в течение 17 ч во влажной атмосфере, содержащей 5% СО2, среду заменяли свежей, содержащей конъюгаты HSA-Cy5-HcyCo(B9C2H11)2-MMAE, или HSA-Cy5-HcyCo(B9C2H11)2-MMAF (20 мкМ). После этого клетки инкубировали при 37°С в течение 3 часов, промывали 3 раза буфером PBS. Далее клетки фиксировали в 4% формальдегиде в PBS при комнатной температуре в течение 20 мин, дважды промывали PBS и докрашивали DAPI (Fluoroshield™ с DAPI, Sigmaaldrich). Внутриклеточную локализацию конъюгатов ЧСА оценивали с помощью сканирующей флуоресцентной микроскопии (микроскоп OLYMPUS IX83P2ZF, Olympus, Япония, красная флуоресценция Су5 λех=633 нм, λem=699 нм). Внутриклеточное распределение ядер, окрашенных DAPI, наблюдали методом сканирования, флуоресцентная микроскопия (DAPI: λех=405 нм, λem=425-475 нм). Изображения обрабатывали в программе Image J.
На фиг. 3 (А, Б) показаны результаты конфокальной микроскопии клеток T98G, обработанных коньюгатами I (панель А) и II (панель Б). Светло-серый цвет на слайдах 2, 3 и 4 - флуоресценция коньюгатов I и II, темно-серый цвет на слайдах 2, 3 и 4 - флуоресценция DAPI. Масштабные линейки: 20 мкм. Слайд 1 - изображение живой клетки, 2 - флуоресценция DAPI, 3 - флуоресценция конъюгата, 4 - объединенные слайды 2 и 3.
На фиг. 4 (А, Б) показана галерея объединенных изображений, полученных вдоль оси z клеток T98G окрашенных DAPI и обработанных коньюгатами I (панель А) и II (панель Б). Светло-серый цвет - флуоресценция соединений I и II, темно-серый цвет - флуоресценция DAPI. Каждое последующее изображение было снято на 0,41 мкм выше предыдущего. Масштабные линейки: 20 мкм.
Согласно результатам фиг. 3 (А, Б) и фиг. 4 (А, Б) видно, что коньюгаты I и II накапливаются в цитоплазме клеток.
Предлагаемый противоопухолевый конъюгат на основе человеческого сывороточного альбумина, содержащий борный кластер, химиотерапевтический агент и флюоресцентный краситель, обладает более высокой цитотоксичностью, увеличенным содержанием атомов бора в структуре, обладает способностью одновременно обеспечивать визуализацию и комбинированную терапию глиобластом.
Источники информации
1. Asija S, Chatterjee A, Yadav S, Chekuri G, Karulkar A, Jaiswal AK, Goda JS, Purwar R. Combinatorial approaches to effective therapy in glioblastoma (GBM): Current status and what the future holds. // Int Rev Immunol. - 2022 - Vol. 41. - N. 6. - P. 582-605.
2. Yu X, Zhu W, Di Y, Gu J, Guo Z, Li H, Fu D, Jin C. Triple-functional albumin-based nanoparticles for combined chemotherapy and photodynamic therapy of pancreatic cancer with lymphatic metastases. // Int. J. Nanomed. - 2017 - Vol. 12. - P. 6771-6785.
3. Cho H, Jeon SI, Ann C-H, Shim MK, Kim K. Emerging albumin-binding anticancer drugs for tumor-targeted drug delivery: current understandings and clinical translation. Pharmaceutics. // - 2022 - Vol. 14. - P. 728-756.
4. Maeda, H.; Wu, J.; Sawa, Т.; Matsumura, Y.; Hori, K. Tumor vascular permeability and the EPR effect in macromolecular therapeutics: a review // J. Control. Release. - 2000. - Vol. 65. - N. 1-2. - P. 271-284.
5. Sleep D. Albumin and its application in drug delivery // Expert Opin. Drug Deliv. - 2015. - Vol. 12. - N. 5. - P. 793-812.
6. Doronina SO, Toki BE, Torgov MY, Mendelsohn BA, Cerveny CG, Chace DF, DeBlanc RL, Gearing RP, Bovee TD, Siegall CB, Francisco JA, Wahl AF, Meyer DL, Senter PD. Development of potent monoclonal antibody auristatin conjugates for cancer therapy. // Nat Biotechnol. - 2003 - Vol. 21. - P. 778-84.
7. Bajjuri KM, Liu Y, Liu C, Sinha SC. The legumain protease-activated auristatin prodrugs suppress tumor growth and metastasis without toxicity. Chem Med Chem. // - 2011 - Vol. 6. - P. 54-59.
8. Maderna A, Leverett CA. Recent advances in the development of new auristatins: structural modifications and application in antibody drug conjugates. Mol Pharmaceutics. - 2015 - Vol. 12. - N. 6. - P. 1798-1812.
9. Liu X, Mohanty RP, Maier EY, Peng X, Wulfe S, Looney AP, Aung KL, Ghosh D. Controlled loading of albumin-drug conjugates ex vivo for enhanced drug delivery and antitumor efficacy. J Control Release. - 2020 - Vol. 328. - P. 1-12.
10. Qi J, Zhang Y, Gou Y, et. al. Multidrug Delivery Systems Based on Human Serum Albumin for Combination Therapy with Three Anticancer Agents. // Mol Pharm. - 2016 - Vol. 13. - P. 3098-105
11. Raskolupova VI, Wang M, Dymova MA, Petrov GO, Shchudlo IM, Taskaev SY, Abramova TV, Godovikova TS, Silnikov VN, Popova TV. Design of the new closo-dodecarborate-containing gemcitabine analogue for the albumin-based theranostics composition. // Molecules. - 2023 - Vol. 28. - P. 2672-2689.
12. Chubarov AS, Zakharova OD, Koval OA, Romaschenko AV, Akulov AE, Zavjalov EL, Razumov IA, Koptyug IV, Knorre DG, Godovikova TS. Design of protein homocystamides with enhanced tumor uptake properties for 19F magnetic resonance imaging. Bioorg Med Chem. // - 2015 - Vol. 23. - N. 21. - P. 6943-6954.
13. Mosmann T. Rapid colorimetric assay for cellular growth and survival-application to proliferation and cyto-toxicity assays. // J. Immunol. Methods. - 1983 -Vol. 65. - P. 55-63.
| название | год | авторы | номер документа |
|---|---|---|---|
| Способ получения противоопухолевого коньюгата на основе человеческого сывороточного альбумина, содержащего терапевтические и контрастирующий агенты | 2016 |
|
RU2644280C1 |
| Способ получения контрастирующего препарата на основе человеческого сывороточного альбумина для визуализации опухолевых тканей | 2016 |
|
RU2629844C1 |
| КОНЪЮГАТЫ АНТИТЕЛ С ЛЕКАРСТВЕННЫМИ АГЕНТАМИ, ОБЛАДАЮЩИЕ УЛУЧШЕННОЙ СТАБИЛЬНОСТЬЮ, И ИХ ПРИМЕНЕНИЕ | 2014 |
|
RU2670748C9 |
| МОДИФИЦИРОВАННЫЕ АНТИТЕЛА, С КОТОРЫМИ СВЯЗАН МОТИВ, ВКЛЮЧАЮЩИЙ ОСТАТОК ЦИСТЕИНА, КОНЪЮГАТЫ ЭТИХ МОДИФИЦИРОВАННЫХ АНТИТЕЛ С ЛЕКАРСТВЕННЫМИ ВЕЩЕСТВАМИ И СПОСОБ ИХ ПОЛУЧЕНИЯ | 2013 |
|
RU2582259C2 |
| Конъюгаты "антитело-лекарственное средство" | 2012 |
|
RU2624141C2 |
| Способ модификации поверхности биоразлагаемых полимерных материалов | 2018 |
|
RU2699045C1 |
| КОНЪЮГАТ ФЛУОРЕСЦЕНТНОГО КРАСИТЕЛЯ С ВЕЩЕСТВОМ ПЕПТИДНОЙ ПРИРОДЫ, ВКЛЮЧАЮЩИМ ПСМА-СВЯЗЫВАЮЩИЙ ЛИГАНД НА ОСНОВЕ ПРОИЗВОДНОГО МОЧЕВИНЫ ДЛЯ ВИЗУАЛИЗАЦИИ КЛЕТОК, ЭКСПРЕССИРУЮЩИХ ПСМА, СПОСОБ ЕГО ПОЛУЧЕНИЯ И ПРИМЕНЕНИЯ | 2019 |
|
RU2713151C1 |
| АНТИ-CD79b АНТИТЕЛА И ИММУНОКОНЪЮГАТЫ И СПОСОБЫ ИХ ПРИМЕНЕНИЯ | 2008 |
|
RU2511410C2 |
| АНТИ-CD79b АНТИТЕЛА И ИММУНОКОНЪЮГАТЫ И СПОСОБЫ ИХ ПРИМЕНЕНИЯ | 2009 |
|
RU2553566C2 |
| Конъюгаты "антитело - лекарственное средство" с высокой лекарственной нагрузкой | 2015 |
|
RU2674979C2 |
Настоящее изобретение относится к области биотехнологии и может быть применимо в медицине. Изобретение раскрывает противоопухолевый конъюгат на основе человеческого сывороточного альбумина со структурной формулой HSA-Cy5-HcyCo(B9C2H11)2-MMAE или HSA-Су5-НсуСо(В9С2Н11)2-MMAF, имеющий в своем составе контрастирующий и борсодержащий агенты, а также химиотерапевтический агент (ММАЕ или MMAF), присоединенный к ЧСА через линкер, расщепляемый в лизосоме опухолевой клетки. Изобретение может быть использовано при диагностике и лечении глиобластом человека. 4 ил., 1 табл., 4 пр.
Противоопухолевый конъюгат на основе человеческого сывороточного альбумина, пригодный для визуализации и комбинированной терапии глиобластом, имеющий в своем составе контрастирующий и борсодержащий агенты, а также химиотерапевтический агент, присоединенный через расщепляемый линкер, описанный структурной формулой I или II:
,
где: ЧСА - человеческий сывороточный альбумин, Су5 - контрастирующий агент, HcyCo(B9C2H11)2 - борсодержащий агент, MMAE/MMAF - химиотерапевтический агент, присоединенный к ЧСА через линкер, расщепляемый в лизосоме опухолевой клетки.
| RASKOLUPOVA V.I | |||
| et al.: "Design of the new closo-dodecarborate-containing gemcitabine analogue for the albumin-based theranostics composition", Molecules, 2023, v | |||
| Видоизменение прибора с двумя приемами для рассматривания проекционные увеличенных и удаленных от зрителя стереограмм | 1919 |
|
SU28A1 |
| Способ получения формальдегида пропусканием смеси паров; метилового спирта с воздухом через трубки с нагретым контактом из металлических сеток | 1916 |
|
SU2672A1 |
| YI CE et al.: "Guanidine-modified albumin-MMAE conjugates with enhanced endocytosis ability", Drug Delivery, 2023, v | |||
| Способ обработки медных солей нафтеновых кислот | 1923 |
|
SU30A1 |
| POPOVA T | |||
| et al.: | |||
