Способ получения аутопробиотика на основе базовых штаммов индигенной микрофлоры кишечника хозяина Российский патент 2025 года по МПК C12N1/20 A61K35/74 A23C9/12 

Изобретение относиться к биотехнологии, а более конкретно к ее разделу - микробиологии. Изобретение может быть использовано для получбения биологически активных добавок, содержащих аутопробиотики для стабилизации кишечной микробиоты человека и животных.

Кишечная микробиота является важным фактором поддержания гомеостаза живого организма. Микробиота выполняет ряд функций по защите организма хозяина от внешних агрессивных факторов, участвуют в формировании иммунитета хозяина, а также синтезируют ряд эсенциальных нутриентов для поддержания жизнеспособности хозяина.

Кишечная микробиота представлена широким спектром видов бактерий, обладающих различай эффективностью. Наиболее эффективными принято считать виды, присущие данному макроорганизму изначально. Такие виды принято определять как автохтонные (аборигентные) и индигенные (постоянно присущие хозяину), соответственно. Принято считать, что микробиота создает хозяину защитный барьер от неблагоприятных факторов внешней среды, как инфекционной, так и неинфекционной природы.

Микробиоценоз человека представляет собой чрезвычайно уязвимый объект в силу присущих ему авангардных барьерных функций. Его поддержание является важной задачей формирования комплексного гомеростаза человека. С целью восстановления базовой для хозяина микрофлоры широко используют препараты чистых живых культу, именуемые пробиотиками, вещества, стимулирующие рост микробиоты, именуемые пребиотиками, а также комплексные препараты, включающие пробиотики и пребиотики и именуемые симбиотиками. В качестве пробиотиков наиболее часто используют бифидобактерии и лактобациллы.

Однако представленные в пробиотике штаммы микроорганизмов являются чужеродными для организма потребителя и поэтому процесс их закрепления в кишечнике всегда затруднен. Как правило, микроорганизмы чужеродных штаммов транзитом выводятся из организма, не успевая, фактически сформировать достаточный объем биомассы. Учитывая, что эффективная жизнедеятельности микробиоты, как правило, формируется не менее, чем в третьей генерации, даже вводимое с пробиотиками значительное количество, измеряемое в концентрации не менее 10⁷ КОЕ бактерий в 1 дозе, не обеспечивают нормализацию кишечного микробиоцекоза.

С целью увеличения приживаемости микроорганизмов предложено использовать аутоштаммы бифидобактерий и лактобацилл [1].

Предложенный способ предполагает использование узкого перечня аутоштаммов, при этом микрообганизмы являются объектами с не доказанной этиологией.

Известен способ получения аутопробиотика, содержащего живые бифидобактерии и лактобациллы путем введения в биоматериал сыворотки крови того же индивидуума, у которого был взят образец аутогенной микрофлоры [2]. Несмотря на то, что полученный аутопробиотик с высокой вероятностью является аутентичным, его продуктивность и резистентность к патогенной флоре может оказаться незначительной. Как правило, аутогенная микрофлора хозяина, испытывающего потребность в укреплении микробиоциноза кишечника, представлены малопродуктивными, угнетенными и маложизнеспособными штаммами.

Цель изобретения - получение аутопробиотика на основе базовых штаммов индигенной микрофлоры кишечника хозяина, обладающих повышенной резистентность, антагонистической активностью в отношении вирулентных и устойчивых к антибиотикам бактериальных патогенов и повышенной продуктивностью.

Поставленная цель достигается тем, что в способе получения аутопробиотика на основе базовых штаммов индигенной микрофлоры кишечника хозяина, характеризующийся забором фекалий, посевом бактерий из фекалий пациента на селективную питательную среду и выращиванием культуры в селективной питательной среде, идентификацией и отбором типичных колоний, получением чистой культуры и уточнением видовой принадлежности и содержания факторов патогенности, отбором апатогенных клонов базовой микрофлоры, соответствующих стандартам генетической безопасности и физиологической функциональности, из которых готовят молочнокислую закваску:

- аутопробиотик получают на основе анаэробного консорциума бактерий, входящих в базовую микрофлору хозяина, выделенные штаммы подвергают предварительному культивированию в не менее чем в трех генерациях, в течение 4-5 суток каждая в анаэробных условиях на питательной среде, содержащей добавки - биоэкспрессоры для увеличения антагонистической активности против панрезистентной микрофлоры кишечника (культуры Klebsiella pneumonia) в количестве 50-500 ppm к массе питательной среды, при этом культивирование в рамках первой генерации проводят при температуре 36-37°С, второй генерации - при температуре 32-34°С, а третьей генерации - при температуре 28-32°С;

- в качестве штаммов базовой микрофлоры рассматривают три наиболее продуктивные штаммы молочнокислых бактерий Lactobacillus pentosus Lactobacillus johnsonii Lactobacillus fermentum по критерию их резистентности и продуктивности;

- в качестве добавки для регулирования антагонистической активности аутопробиотика используют биоэкспрессоры ресвиратрол, дигидрокверцетин, коэнзим Q 10 и селеновит, используемые отдельно или в смеси, взятые в соотношении: ресвиратрол : дигидрокверцетин : коэнзим Q 10:семновит, как 1:(1-1,2):(1-1,2):(2-2,5):(2-2,5), соответственно;

- в качестве селективной питательной среды используют энтерококк-агар.

Способ осуществляют следующим образом.

Выделение чистых линий персональных штаммов лактобактерий и бифидумбактерий проводили из исходного материала, не менее двух штаммов от каждого из 4 повторностей образцов кала (всего, не менее 8 штаммов, далее «Штаммы»). Методика приготовления питательной среды заключалась в следующем: На 500 мл дистиллированной воды добавляли 30 г сухой питательной среды MRS agar и после тщательной гомогенизации суспензию для стерилизации помещали в автоклав при 121°С на 15 мин. Далее суспензию охлаждали естественным путем до 50°С. В охлажденную суспензию массой 500 г вводили добавки растворов биоэкспрессоров в количестве 50-500 ppm к массе питательной среды. Биоэкспрессоры использовали в виде растворов отдельных препаратов, либо в виде их смеси, взятых в соотношении : ресвератрол : дигидрокверцетин : коэнзим Q 10: селеновит, как 1:(1-1,2):(1-1,2):(2-2,5):(2-2,5), соответственно.

Всего было получено 12 сред с различной концентрацией. Полученные среды разливали по чашкам Петри и размещали до полного застывания под ультрафиолетовыми лучами для повторной стерилизации.

Пример конкретного исполнения.

В качестве чистых линий были выделены следующие штаммы:

Исследуемый образец 3022 Lactobacillus pentosus

Исследуемый образец 253z21 Lactobacillus salivarius

Исследуемый образец 24 с23 Lactobacillus salivarius

Исследуемый образец 222 Lactobacillus pentosus

Исследуемый образец 8M15D Lactobacillus johnsonii

Исследуемый образец 515 Lactobacillus fermentum

Обоснование выбора панрезистентной культуры.

В качестве модельной панрезистентной культуры была выбрана культура Klebsiella pneumonia. Клебсиелла пневмонии (Klebsiella pneumoniae) и клебсиелла окситока (Klebsiella Oxytoca) считаются самыми распространенными и опасными для человека микроорганизмами. Эти бактерии при определенных условиях способны вызывать серьезные нозокомиальные (т.е. в условиях медицинского стационара) и внебольничные инфекции. У человека клебсиеллы чаще являются возбудителями заболеваний дыхательных путей (риносклерома, бронхит, пневмония, абсцесс легких). Позднее было установлено, что они могут быть причиной поражения слизистой оболочки век и мочеполовых органов, а также мозговой оболочки, суставов, вызывать перитонит, сепсис, острые кишечные инфекции у взрослых и детей, быть причиной гнойных послеоперационных осложнений, инфекции матки и влагалища. Проведение эксперимента заключалось в следующих операциях:

• Посев каждого из штаммов на 12 разных сред (всего 72 образца).

• Инкубация в течение 48 часов при 37°С и влажности 70% в инкубаторе.

• Оценка роста колоний (есть рост/нет роста, скудный рост/обильный рост).

• В случае обильного роста разводится 1 макфарленд штамма в чистом физ. растворе и подсевается на чашку для оценки антагонизма на среду MRS.

• Инкубируется 48 часов при 37°С и влажности 70% в инкубаторе.

• Подсев 1 макфарленд панрезистентных штаммов группы TSKAPE на среду TSA.

• Инкубация в термостате 24 часа при 37°С.

• Оценка результата.

Оценка результатов приводилась с помощью специальной линейки для измерения размеров колоний и зоны задержки роста, на черном фоне со специальной градуировкой, под искусственным освещением.

В целом была исследована антагонистическая активность в отношении микроорганизмов группы TSKAPE, состоящей из шести вирулентных и устойчивых к антибиотикам бактериальных патогенов: Enterococcus faecium, Staphylococcus aereus, Klebsiella pneumonia, Acinetobacter baumannii, Pseudomonas aeruginosa, Enterobacteriales -Esherichia coli.

Для расчета количества внесенных биоэкспрессоров использовали следующие соотношения:

2500 мкг к 500 г питательной среды - 5×10^-4%=500 ppm;

500 мкг к 500 г питательной среды - 1×10^-4%=100 ppm»

250 мкг к 500 г питательной среды - 0,5×10^-4%=50 ppm.

Результаты исследований приведены ниже (в скобках дан порядковый номер опыта, результаты которого приведены в таблице 1):

Исследуемый образец 3022 Lactobacillus pentosus не имел роста на питательной среде MRS с добавкой Дигидрокверцетина в концентрации 250 мкг (1), 500 мкг (2) и 2500 мкг (3), соответственно, не мог проявлять антагонистическую активность против панрезистентной группы микроорганизмов TSKAPE.

Исследуемый образец 3022 Lactobacillus pentosus не имел роста на питательной среде MRS с добавкой Коэнзим Q10 в концентрации 250 мкг (4), 500 мкг (5) и 2500 мкг (6), соответственно не мог проявлять антагонистическую активность против панрезистентной группы микроорганизмов TSKAPE.

Исследуемый образец 3022 Lactobacillus pentosus не имел роста на питательной среде MRS с добавкой Селеновит в концентрации 250 мкг (7), 500 мкг (8) и 2500 мкг (9), соответственно не мог проявлять антагонистическую активность против панрезистентной группы микроорганизмов TSKAPE.

Исследуемый образец 3022 Lactobacillus pentosus не имел роста на питательной среде MRS с добавкой Ресвератрол в концентрации 250 мкг (10), 500 мкг (11) и 2500 мкг (12), соответственно не мог проявлять антагонистическую активность против панрезистентной группы микроорганизмов TSKAPE.

Исследуемый образец 253z21 Lactobacillus salivarius не имел роста на питательной среде MRS с добавкой Дигидрокверцетин в концентрации 250 мкг (13), 500 мкг (14) и 2500 мкг (15), соответственно не мог проявлять антагонистическую активность против группы микроорганизмов TSKAPE.

Исследуемый образец 253z21 Lactobacillus salivarius не имел роста на питательной среде MRS с добавкой Коэнзим Q10 в концентрации 250 мкг (16), 500 мкг (17) и 2500 мкг (18), соответственно не мог проявлять антагонистическую активность против панрезистентной группы микроорганизмов TSKAPE.

Исследуемый образец 253z21 Lactobacillus salivarius не имел роста на питательной среде MRS с добавкой Селеновит в концентрации 250 мкг (19), 500 мкг (20) и 2500 мкг (21), соответственно не мог проявлять антагонистическую активность против панрезистентной группы микроорганизмов TSKAPE.

Исследуемый образец 253z21 Lactobacillus salivarius не имел роста на питательной среде MRS с добавкой Ресвератрол в концентрации 250 мкг (22), 500 мкг (23) и 2500 мкг( 24), соответственно не мог проявлять антагонистическую активность против панрезистентной группы микроорганизмов TSKAPE.

Исследуемый образец 24 с23 Lactobacillus salivarius имел рост на питательной среде MRS с добавкой Дигидрокверцетин в концентрации 250 мкг (25) и проявлял антагонистическую активность против панрезистентной группы микроорганизмов TSKAPE с зоной задержки роста 12 мм.

Исследуемый образец 24 с23 Lactobacillus salivarius не имел роста на питательной среде MRS с добавкой Дигидрокверцетин в концентрации 500 мкг (26) и 2500 мкг (27), соответственно не мог проявлять антагонистическую активность против панрезистентной группы микроорганизмов TSKAPE.

Исследуемый образец 24 с23 Lactobacillus salivarius имел рост на питательной среде MRS с добавкой Коэнзим Q10 в концентрации 500 мкг (29) и проявлял антагонистическую активность против панрезистентной группы микроорганизмов TSKAPE с зоной задержки роста 12 мм.

Исследуемый образец 24 с23 Lactobacillus salivarius не имел роста на питательной среде MRS с добавкой Коэнзим Q10 в концентрации 250 мкг (28) и 2500 мкг(30), соответственно не мог проявлять антагонистическую активность против панрезистентной группы микроорганизмов TSKAPE.

Исследуемый образец 24 с23 Lactobacillus salivarius имел рост на питательной среде MRS с добавкой Селеновит в концентрации 500 мкг (32), но не проявлял антагонистическую активность против панрезистентной группы микроорганизмов TSKAPE.

Исследуемый образец 24 с23 Lactobacillus salivarius не имел роста на питательной среде MRS с добавкой Селеновит в концентрации 250 мкг (31) и 2500 мкг, соо (33)тветственно не мог проявлять антагонистическую активность против панрезистентной группы микроорганизмов TSKAPE.

Исследуемый образец 24 с23 Lactobacillus salivarius имел рост на питательной среде MRS с добавкой Ресвератрол в концентрации 250 мкг (34) и 500 мкг (35), но не проявлял антагонистическую активность против панрезистентной группы микроорганизмов TSKAPE.

Исследуемый образец 24 с23 Lactobacillus salivarius не имел роста на питательной среде MRS с добавкой Ресвератрол в концентрации 2500 мкг (36), соответственно не мог проявлять антагонистическую активность против панрезистентной группы микроорганизмов TSKAPE.

Исследуемый образец 222 Lactobacillus pentosus имел рост на питательной среде MRS с добавкой Дигидрокверцетин в концентрации 250 мкг (37) и проявлял антагонистическую активность против панрезистентной группы микроорганизмов TSKAPE с зоной задержки роста 30 мм.

Исследуемый образец 222 Lactobacillus pentosus имел рост на питательной среде MRS с добавкой Дигидрокверцетин в концентрации 500 мкг (38) и проявлял антагонистическую активность против панрезистентной группы микроорганизмов TSKAPE с зоной задержки роста 30 мм.

Исследуемый образец 222 Lactobacillus pentosus имел рост на питательной среде MRS с добавкой Дигидрокверцетин в концентрации 2500 (39) мкг и проявлял антагонистическую активность против панрезистентной группы микроорганизмов TSKAPE с зоной задержки роста 40 мм.

Исследуемый образец 222 Lactobacillus pentosus имел рост на питательной среде MRS с добавкой Коэнзим Q10 в концентрации 250 мкг (40) и проявлял антагонистическую активность против панрезистентной группы микроорганизмов TSKAPE с зоной задержки роста 40 мм.

Исследуемый образец 222 Lactobacillus pentosus имел рост на питательной среде MRS с добавкой Коэнзим Q10 в концентрации 500 мкг (41) и проявлял антагонистическую активность против панрезистентной культуры Klebsiella pneumonia с зоной задержки роста 27 мм.

Исследуемый образец 222 Lactobacillus pentosus имел рост на питательной среде MRS с добавкой Коэнзим Q10 в концентрации 2500 мкг (42), но не проявлял антагонистическую активность против панрезистентной культуры Klebsiella pneumonia.

Исследуемый образец 222 Lactobacillus pentosus имел рост на питательной среде MRS с добавкой Семновит в концентрации 250 мкг (43) и проявлял антагонистическую активность против панрезистентной группы микроорганизмов TSKAPE с зоной задержки роста 40 мм.

Исследуемый образец 222 Lactobacillus pentosus имел рост на питательной среде MRS с добавкой Селеновит в концентрации 500 мкг (44) и проявлял антагонистическую активность против панрезистентной группы микроорганизмов TSKAPE с зоной задержки роста 25 мм.

Исследуемый образец 222 Lactobacillus pentosus имел рост на питательной среде MRS с добавкой Селеновит в концентрации 2500 мкг (45) и проявлял антагонистическую активность против панрезистентной группы микроорганизмов TSKAPE с зоной задержки роста 40 мм.

Исследуемый образец 222 Lactobacillus pentosus имел рост на питательной среде MRS с добавкой Ресвератрол в концентрации 250 мкг (46) и проявлял антагонистическую активность против панрезистентной группы микроорганизмов TSKAPE с зоной задержки роста 22 мм.

Исследуемый образец 222 Lactobacillus pentosus имел рост на питательной среде MRS с добавкой Ресвератрол в концентрации 500 мкг (47), но не проявлял антагонистическую активность против панрезистентной группы микроорганизмов TSKAPE.

Исследуемый образец 222 Lactobacillus pentosus имел рост на питательной среде MRS с добавкой Ресвератрол в концентрации 2500 мкг (48) и проявлял антагонистическую активность против панрезистентной группы микроорганизмов TSKAPE с зоной задержки роста 40 мм.

Исследуемый образец 8M15D Lactobacillus johnsonii имел рост на питательной среде MRS с добавкой Дигидрокверцетин в концентрации 250 мкг (49) и проявлял антагонистическую активность против панрезистентной группы микроорганизмов TSKAPE с зоной задержки роста 40 мм.

Исследуемый образец 8M15D Lactobacillus johnsonii имел рост на питательной среде MRS с добавкой Дигидрокверцетин в концентрации 500 мкг (50) и проявлял антагонистическую активность против панрезистентной группы микроорганизмов TSKAPE с зоной задержки роста 24 мм.

Исследуемый образец 8M15D Lactobacillus johnsonii имел рост на питательной среде MRS с добавкой Дигидрокверцетин в концентрации 2500 мкг (51) и проявлял нтагонистическую активность против панрезистентной группы микроорганизмов TSKAPE с зоной задержки роста 40 мм.

Исследуемый образец 8M15D Lactobacillus johnsonii имел рост на питательной среде MRS с добавкой Коэнзим Q10 в концентрации 250 мкг (52), но не проявлял антагонистическую активность против панрезистентной группы микроорганизмов TSKAPE.

Исследуемый образец 8M15D Lactobacillus johnsonii имел рост на питательной среде MRS с добавкой Коэнзим Q10 в концентрации 500 мкг (53) и проявлял антагонистическую активность против панрезистентной группы микроорганизмов TSKAPE с зоной задержки роста 22 мм.

Исследуемый образец 8M15D Lactobacillus johnsonii имел рост на питательной среде MRS с добавкой Коэнзим Q10 в концентрации 2500 мкг (54), но не проявлял антагонистическую активность против панрезистентной группы микроорганизмов TSKAPE.

Исследуемый образец 8M15D Lactobacillus johnsonii имел рост на питательной среде MRS с добавкой Селеновит в концентрации 250 мкг (55), но не проявлял антагонистическую активность против панрезистентной группы микроорганизмов TSKAPE.

Исследуемый образец 8M15D Lactobacillus johnsonii имел рост на питательной среде MRS с добавкой Селеновит в концентрации 500 мкг (56), но не проявлял антагонистическую активность против панрезистентной группы микроорганизмов TSKAPE.

Исследуемый образец 8M15D Lactobacillus johnsonii имел рост на питательной среде MRS с добавкой Селеновит в концентрации 2500 мкг (57) и проявлял антагонистическую активность против панрезистентной группы микроорганизмов TSKAPE с зоной задержки роста 40 мм.

Исследуемый образец 8M15D Lactobacillus johnsonii имел рост на питательной среде MRS с добавкой Ресвератрол в концентрации 250 мкг (58) и проявлял антагонистическую активность против панрезистентной группы микроорганизмов TSKAPE с зоной задержки роста 25 мм.

Исследуемый образец 8M15D Lactobacillus johnsonii имел рост на питательной среде MRS с добавкой Ресвератрол в концентрации 500 мкг (59) и проявлял антагонистическую активность против панрезистентной группы микроорганизмов TSKAPE с зоной задержки роста 25 мм.

Исследуемый образец 8M15D Lactobacillus johnsonii имел рост на питательной среде MRS с добавкой Ресвератрол в концентрации 2500 мкг (60) и проявлял антагонистическую активность против панрезистентной группы микроорганизмов TSKAPE с зоной задержки роста 30 мм.

Исследуемый образец 515 Lactobacillus fermentum имел рост на питательной среде MRS с добавкой Дигидрокверцетин в концентрации 250 мкг (61) и 500 мкг (62), но не проявлял антагонистическую активность против панрезистентной группы микроорганизмов TSKAPE.

Исследуемый образец 515 Lactobacillus fermentum имел рост на питательной среде MRS с добавкой Дигидрокверцетин в концентрации 2500 мкг (63) и проявлял антагонистическую активность против панрезистентной группы микроорганизмов TSKAPE с зоной задержки роста 40 мм.

Исследуемый образец 515 Lactobacillus fermentum имел рост на питательной среде MRS с добавкой Коэнзим Q10 в концентрации 250 мкг (64), 500 мкг 65) и 2500 мкг (б6), но не проявлял антагонистическую активность против панрезистентной группы микроорганизмов TSKAPE.

Исследуемый образец 515 Lactobacillus fermentum имел рост на питательной среде MRS с добавкой Селеновит в концентрации 250 мкг (67), 500 мкг (68) и 2500 мкг (69), но не проявлял антагонистическую активность против панрезистентной группы микроорганизмов TSKAPE.

Исследуемый образец 515 Lactobacillus fermentum имел рост на питательной среде MRS с добавкой Ресвератрол в концентрации 250 мкг (70), 500 мкг (71) и 2500 мкг (72), но не проявлял антагонистическую активность против панрезистентной группы микроорганизмов TSKAPE.

Результаты исследований приведены в таблице 1 и 2 и на фигурах 1 и 2.

Одновременно с некоторыми опытами были параллельно засеяны питательные среды с добавлением смеси биоэкспрессоров. Такие чашки были пронумерованы с добавлением индекса «mix».Результаты таких опытов приведены в таблице 2.

Как видно из данных таб. 2 смесь биоэкспрессоров также оказывает положительное вличяние на рост резистентности и антагонистической активности в отношении вирулентных и устойчивых к антибиотикам бактериальных патогенов и высокой продуктивностью обладают молочно кислые бактерии Lactobacillus pentosus Lactobacillus johnsonii Lactobacillus fermentum.

Эффективность резистентности штамма предложено оценивать при помощи показателя «Интегральный показатель антагонистической активности штамм» (К _{Ин.Ан.Ак.Шт.}), который рассчитывали, как сумму двух коэффициентов K₁ и К₂:

К_{Ин.Ан.Ак.Шт.}=K₁+К₂.

Коэффициент Ki указывает на активность штамма. При K₁=1 - штамм на данной среде имел рост, но не проявлял антагонистическую активность. Коэффициент К₂ показывает резистентную эффективность штамма. К₂=Н_фак./Н_мин., где Н_фак. фактическая ширина зоны задержки роста панрезистентной культуры, мм; Н_мин - ширина минимальной, но значимой зоны задержки роста панрезистентной культуры из исследованной линейки штаммов, мм.

На Фиг. 1 приведены сведения о влиянии биоэкспрессоров на антагонистическую активность против панрезистентной культуры Klebsiella pneumonia при их подсеве на питательную среду MRS образцов персонализированных пробиотиков - семейства лактобацилл:

по ординате - концентрация биоэкспрессора в питательной среде, ррь ×10²: ДГК -дигидрокверцитин; Q10 - коензим Q10; Se- семновит; РВ - ресвиратрол; по абсциссе - размер зоны задержки роста, мм.

На Фиг. 2 приведены сведения о влиянии биоэкспрессоров на антагонистическую активность против панрезистентной культуры Klebsiella pneumonia при их подсеве на питательную среду MRS образцов персонализированных пробиотиков - семейства лактобацилл:

по ординате - концентрация биоэкспрессора в питательной среде, ppm×10²: ДГК - дигидрокверцитин; Q10 - коензим Q10; Se- Селеновит; РВ - ресвиратрол;

по абсциссе - интегральный показатель антагонистической активности штамма,

рассчитанный, как сумма коэффициентов K₁ и К₂:

где:

K₁=1 - штамм на данной среде имел рост, но не проявлял антагонистическую активность;

К₂=Н_фак./Н_мин., где Н_фак. фактическая ширина зоны задержки роста панрезистентной культуры, мм; Н_мин - ширина минимальной, но значимой зоны задержки роста панрезистентной культуры из исследованной линейки штаммов, мм.

По результатам проведенных опытов доказано, что повышенной резистентностью и антагонистической активности в отношении вирулентных и устойчивых к антибиотикам бактериальных патогенов и высокой продуктивностью обладают молочнокислые бактерии Lactobacillus pentosus Lactobacillus johnsonii Lactobacillus fermentum, которые культивировались на питательных средах, содержащих дигидрокверцитин, ресвиратрол, коэнзим Q 10 и селеновит, используемые отдельно или в смеси, взятые в соотношении: ресвиратрол: дигидрокверцетин: коэнзим Q 10: селеновит, как 1:(1-1,2):(1-1,2):(2-2,5):(2-2,5), соответственно;

Штамм Lactobacillus salivarius был выбран в качестве примера - типичного штамма, не относящегося к указанным в отличительной части формулы изобретения. При этом штамм Lactobacillus salivarius не способен приобретать подобных свойств при тех же условиях культивирования.

Таким образом, предложен способ получения аутопробиотика на основе естественных микробиоценозов бифидобактерий и лактобацилл толстой кишки человека и животных. Пробиотик может быть использован для лечения дисбактериоза и заболеваний, связанных с нарушениями нормальной микрофлоры кишечника, как у человека, так и у ценных экземпляров животных и птиц.

Список литературы:

1. Авторское свидетельство СССР N1286212, А61К 35/74, 30.01.87.

2. Патент РФ №RU 2139070 С1, А61К 35/74 C12N 1/20, 1999 г.

Изобретение относится к биотехнологии. Предложен способ получения аутопробиотика на основе базовых штаммов индигенной микрофлоры кишечника хозяина, включающий забор пробы нативного материала из фекалий пациента, посев на селективную питательную среду для выделения микроорганизмов, идентификацию, отбор типичных колоний, получение чистой культуры, из которых готовят молочнокислую закваску, при этом в качестве базовой микрофлоры используют Lactobacillus pentosus, Lactobacillus johnsonii, Lactobacillus fermentum, которые подвергают предварительному культивированию в не менее чем в трех генерациях в течение 4-5 сут каждая в микроаэрофильных условиях на питательной среде, содержащей добавки - биоэкспрессоры в количестве 50-500 ррm к массе питательной среды, при этом культивирование первой генерации проводят при температуре 36-37°С, второй генерации - при температуре 32-34°С, третьей генерации - при температуре 28-32°С, в качестве добавки для регулирования антагонистической активности аутопробиотика используют биоэкспрессоры ресвератрол, дигидрокверцетин, коэнзим Q10 и селеновит, используемые отдельно, а в качестве селективной питательной среды используют среду для лактобацилл MRS-aгap. Изобретение обеспечивает расширение арсенала аутопробиотиков на основе естественных микробиоценозов бактерий толстой кишки хозяина. 2 ил., 2 табл.

Способ получения аутопробиотика на основе базовых штаммов индигенной микрофлоры кишечника хозяина, характеризующийся забором пробы нативного материала, посевом бактерий из фекалий пациента на селективную питательную среду для выделения микроорганизмов, выращиванием культуры в селективной питательной среде, идентификацией и отбором типичных колоний, получением чистой культуры, идентификацией видовой принадлежности и содержания факторов патогенности, отбором апатогенных микроорагнизмов индигенной микрофлоры, соответствующих стандартам генетической безопасности и физиологической функциональности, из которых готовят молочнокислую закваску, отличающийся тем, что аутопробиотик получают на основе бактерий, входящих в базовую микрофлору хозяина, в качестве базовой микрофлоры используют Lactobacillus pentosus, Lactobacillus johnsonii, Lactobacillus fermentum, которые подвергают предварительному культивированию в не менее чем в трех генерациях в течение 4-5 сут каждая в микроаэрофильных условиях на питательной среде, содержащей добавки - биоэкспрессоры в количестве 50-500 ррm к массе питательной среды, при этом культивирование первой генерации проводят при температуре 36-37°С, второй генерации - при температуре 32-34°С, третьей генерации - при температуре 28-32°С, в качестве добавки для регулирования антагонистической активности аутопробиотика используют биоэкспрессоры ресвератрол, дигидрокверцетин, коэнзим Q10 и селеновит, используемые отдельно, а в качестве селективной питательной среды используют среду для лактобацилл MRS-aгap.