Способ моделирования химического ожога роговицы у кроликов Российский патент 2025 года по МПК G09B23/28 A61K31/01 A61K31/167 A61K33/00 A61K33/14 A61P43/00 

Область техники, к которой относится изобретение

Изобретение относится к экспериментальной медицине, в частности к офтальмологии и может быть использовано для моделирования химического ожога роговицы у кроликов.

Заболевания роговицы занимают третье место по распространённости причиной слепоты во всём мире. [Experimental evaluation of the specific activity of the new Angiolin dosage form in the research corneal burn's condition / I. F. Bielenichev, L. I. Kucherenko, I. A. Mazur [et al.] // Запорожский медицинский журнал. – 2019. – Vol. 21, No. 6(117). – P. 815-819. – DOI 10.14739/2310-1210.2019.6.186626. – EDN KYTSUU.] Химические ожоги роговицы являются одними из самых тяжелых травм органа зрения. Для точного и обстоятельного изучения всех способов и методов лечения ожогов роговицы возникает потребность в проведении экспериментального моделирования поражений роговицы на лабораторных животных. В условиях целостного организма можно с полноценностью и высокой точностью отследить всю динамику взаимодействий различных клеток исследуемой структуры глазного яблока. Чаще всего химические ожоги вызываются детергентами кислотного или щелочного ряда. [Моделирования язвенных поражений роговицы химическими веществами / М. М. Горохова, А. Н. Шулунова, Н. В. Федота, А. Н. Квочко // Инновационные разработки - развитию агропромышленного комплекса: Материалы юбилейной международной научно-практической конференции ФГБНУ «Северо Кавказский ФНАЦ», ФГБНУ "Северо-Кавказский ФНАЦ", 22–23 сентября 2022 года. – Ставрополь: Общество с ограниченной ответственностью фирма "Ставрополь-сервис-школа", 2022. – С. 78-82. – EDN IDAJKA.]

Известно, что попадая на поверхность роговицы или в ее толщу, щелочи вызывают колликвационный некроз путем эмульгирования клеток эпителия. Кислоты при взаимодействии с белковыми компонентами тканей роговицы вызывают их немедленную денатурацию (коагуляционный некроз), что приводит к помутнению структуры. [Канюков В.Н., Стадников А.А., Трубина О.М. Экспериментальное моделирование травматических повреждений роговицы / В.Н. Канюков, А.А. Стадников, О.М. Трубина, О.М. Яхина // Вестник Оренбургского государственного университета. 2014. № 12 (173). С. 156-159.]

Известен способ моделирования щелочного ожога роговицы у кроликов по методу Obenberger J. [Obenberger, J. Paper strips and rings as simple tools for standardization of experimental eye injuries / J. Obenberger // Ophthalmic Research. – 1975. – Vol. 7, No 5. – P. 363–367. – URL: https://www.karger.com/Article/Abstract/264772]. Также известен метод воссоздания кислотного ожога [Экспериментальное моделирование травматических повреждений роговицы / В. Н. Канюков, А. А. Стадников, О. М. Трубина, О. М. Яхина // Вестник Оренбургского государственного университета. – 2014. – № 12 (173). – С. 156–159.]. Оба предложенных метода основаны на аппликации диска фильтровальной бумаги различного диаметра, пропитанного детергентами различной природы на поверхность роговицы. Данные способы универсальны, однако не позволяют добиться четкой ограниченности области поражения, поскольку детергенты распространяются из фильтровальной бумаги в толщу роговицы, превышая заданный диаметр поражения.

В доступных источниках литературы был обнаружен способ моделирования химического ожога роговицы, взятый нами за прототип. [Филатова Н.В. Создание экспериментальной стандартной модели неоваскуляризации роговицы / Н.В. Федорова // Вестник Российского государственного медицинского университета. 2011. № 6. С. 78-79.]. Для создания химического ожога роговицы автор использует трепан для пересадки роговицы, который набивали ватным тампоном, предварительно пропитанным 10% раствором соляной кислоты. Перед началом эксперимента всем животным промывали конъюнктивальную полость 0,02% раствором фурацилина и закапывали 10% раствор лидокаина. Через 2–3 минуты для удобства проведения дальнейших манипуляций животным, участвующим в эксперименте, оперативно удаляли третье веко. После этого в конъюнктивальную полость вновь закапывали 0,02% раствор фурацилина и 10% раствор лидокаина. Для проведения непосредственного моделирования поражения роговицы автор устанавливал трепан в околоцентральной зоне роговицы с экспозицией 20 секунд.

Прототип имеет некоторые недостатки:

1. Диаметр основания трепана для пересадки роговицы невозможно изменить, что не дает возможность исследователям выбирать величину поражения роговицы.

2. Оперативное удаление третьего века не влияет на проведение моделирования ожога роговицы, но усложняет его.

3. При воздействии раздражающих факторов на роговицу в естественной среде у животных наблюдается избыточная слезопродукция. Для её имитации считаем целесообразным сразу после моделирования промывание области роговицы большим количеством 0,9% раствора натрия хлорида в течение 15 минут.

4. Способ предполагает использования детергента только кислотной природы и не является универсальным.

5. Использование ваты в качестве тампона для воздействия детергента предполагает дополнительное механическое воздействие на ткани роговицы.

Раскрытие изобретения

Задачей предлагаемого изобретения является создание универсального, простого, удобного, с заранее заданными параметрами площади повреждения и экономичного способа моделирования химического ожога роговицы кроликов.

Технический результат, который может быть достигнут с помощью предлагаемого изобретения, сводится к оптимизации методики и повышению эффективности химического ожога роговицы.

Технический результат достигается с помощью способа моделирования химического ожога роговицы у кроликов, включающего закапывание в конъюнктивальную полость 0,4% раствора инокаина, перпендикулярную установку модифицированной с помощью ножниц и наждачной бумаги до 2 мм пипетки Пастера открытого типа расчетной вместимостью 1 мл, наполненной раствором 3% уксусной кислоты, в околоцентральную зону роговицы на необходимый промежуток времени, отличающийся тем, что непосредственно сразу после химического воздействия всем животным проводят промывание области роговицы большим количеством 0,9% раствора натрия хлорида комнатной температуры в течение 15 минут, после чего на 26 сутки формируется кислотный ожог роговицы.

Технический результат достигается с помощью способа моделирования химического ожога роговицы у кроликов отличающийся тем, что в качестве вещества, вызывающего ожег роговицы используют 2,5% гидроксид натрия, после чего на 35 сутки формируется химический ожог роговицы.

Осуществление изобретения

Стеклянную пипетку Пастера открытого типа расчетной вместимостью 1 мл с помощью ножниц обрезают и шлифуют наждачной бумагой таким образом, чтобы диаметр её нижней части составлял 2 мм. После в неё набирают нужное количество 3% раствора уксусной кислоты или 2,5% раствор гидроксида натрия. Далее всем кроликам закапывают в конъюнктивальную полость 2-3 капли 0,4% раствора инокаина и ждут 1 минуту. После кроликов поочередно фиксируют на столе на правой стороне и с помощью пальцев руки удерживают верхнее и нижнее веко левого глаза. Модифицированную до диаметра 2 мм пипетку Пастера, заполненную растворами 3% уксусной кислоты или 2,5% гидроксида натрия, строго перпендикулярно устанавливают в околоцентральной зоне роговицы и держат необходимый промежуток времени, в зависимости от заданной степени ожога. Непосредственно после воздействия область роговицы промывают струйно большим количеством 0,9% раствора натрия хлорида комнатной температуры в течение 15 минут.

Способ моделирования химического ожога роговицы у кроликов проводили в условиях кафедр и вивария института ветеринарии и биотехнологии Ставропольского государственного аграрного университета.

Пример 1

Кроликов массой 2-3 кг, в возрасте 1 года, в количестве 10 штук содержали на стандартном рационе питания при свободном доступе к пище и воде в условиях вивария Ставропольского ГАУ. Кролика поочередно фиксировали на столе на правой стороне и с помощью пальцев руки обездвиживали верхнее и нижнее веко левого глаза. Проводили закапывание в конъюнктивальную полость левого глаза 2-3 капель 0,4% раствора инокаина и ждали 1 минуту. Далее воспроизводили химический ожог роговицы путем установки в околоцентральной зоне роговицы, модифицированной до диаметра 2 мм пипетки Пастера, наполненной раствором 3% уксусной кислоты с временем экспозиции 60 секунд. Непосредственно после проведения моделирования ожога роговицы всем кроликам проводили промывание области роговицы большим количеством 0,9% раствора натрия хлорида комнатной температуры в течение 15 минут. Сразу после моделирования в области воздействия 3% раствора уксусной кислоты образовывался химический кислотный ожог правильной округлой формы.

Пример 2

Кроликов массой 2-3 кг, в возрасте 1 года, в количестве 10 штук содержали на стандартном рационе питания при свободном доступе к пище и воде в условиях вивария Ставропольского ГАУ. Кролика поочередно фиксировали на столе на правой стороне и с помощью пальцев руки обездвиживали верхнее и нижнее веко левого глаза. Затем проводили закапывание в конъюнктивальную 2-3 капель 0,4% раствора инокаина и ждали 1 минуту. Далее воспроизводили химический ожог роговицы путем установки в околоцентральной зоне роговицы, модифицированной до диаметра 2 мм пипетки Пастера, наполненной раствором 2,5% гидроксида натрия с временем экспозиции 60 секунд. Непосредственно после проведения моделирования ожога роговицы всем кроликам проводили промывание области роговицы большим количеством 0,9% раствора натрия хлорида комнатной температуры в течение 15 минут. Сразу после моделирования в области воздействия 2,5% раствор гидроксида натрия на роговицу оставался химический щелочной ожог правильной округлой формы.

На протяжении 35 суток всем животным проводили ежедневный офтальмологический осмотр и кератоскопию.

У животных с моделированием химического ожога по Примеру 1 был сформирован кислотный ожог роговицы. На 26 сутки в месте воздействия наблюдалось помутнение роговицы с образованием рубца.

У животных с моделированным химическим ожогом роговицы по Примеру 2 был сформирован щелочной ожог роговицы. На 35 сутки на месте воздействия сильное помутнение роговицы с образованием рубца.

Предложенный способ моделирования является универсальным, экономичным и не требует дорогостоящих инструментов. Во всех случаях после нанесения ожога была получена адекватная модель химического ожога роговицы, что подтверждалось клиническим течением ожогов.

По сравнению с прототипом и другими известными техническими решениями предлагаемое изобретение имеет ряд преимуществ:

- Универсальность – возможность использования детергента как кислотной, так и щелочной природы;

- Низкая стоимость комплектующих;

- Возможность изменить диаметр основания пробирки Пастера с помощью ножниц и наждачной бумаги от … до 7 мм;

- Получение моделированного химического ожога роговицы в условиях, приближенных к естественным.

Изобретение относится к экспериментальной медицине, а именно к офтальмологии. Кроликам в конъюктивальную полость закапывают 2-3 капли 0,4% раствора инокаина. Обрезают пипетку Пастера открытого типа расчетной вместимостью 1 мл с помощью ножниц и шлифуют её наждачной бумагой так, чтобы диаметр нижней части пипетки составлял 2 мм. Пипетку наполняют раствором 3% уксусной кислоты и закапывают кислоту в околоцентральную зону роговицы - время экспозиции составляет 60 секунд. Сразу после химического взаимодействия всем животным проводят промывание области роговицы 0,9% раствором натрия хлорида комнатной температуры в течение 15 минут. После воздействия уксусной кислотой 3% в области взаимодействия образуется химический кислотный ожог правильной округлой формы. Способ позволяет оптимизировать и повысить эффективность моделирования химического ожога, что, в свою очередь, позволяет получить модель химического ожога роговицы в условиях, максимально приближенным к естественным. 2 пр.

Способ моделирования химического ожога роговицы у кроликов, включающий закапывание в конъюнктивальную полость 2-3 капель 0,4% раствора инокаина, обрезку пипетки Пастера открытого типа расчетной вместимостью 1 мл с помощью ножниц и ее шлифование наждачной бумагой таким образом, чтобы диаметр нижней части пипетки составлял 2 мм, далее пипетку Пастера наполняют раствором 3% уксусной кислоты с временем экспозиции 60 секунд в околоцентральную зону роговицы, непосредственно сразу после химического воздействия всем животным проводят промывание области роговицы 0,9% раствором натрия хлорида комнатной температуры в течение 15 минут, сразу после моделирования в области воздействия 3% раствора уксусной кислоты образуется химический кислотный ожог правильной округлой формы.