Уровень техники
1. Область техники, к которой относится изобретение
Настоящее изобретение относится к иммуноонкотерапевтической композиции, включающей адъювант, включающий липопептиды и поли(I:C), в качестве активного ингредиента.
Настоящее изобретение также относится к иммуноонкотерапевтическая композиции, имеющей повышенную противоопухолевую иммунную активность в результате совместного введения адъюванта, включающего липопептиды и поли(I:C), с ингибитором иммунной контрольной точки или другими лигандами TLR.
2. Описание связанного Искусства
TLR (толл-подобный рецептор) представляет собой клеточный рецептор, который индуцирует врожденный иммунный ответ. Он распознает патоген-ассоциированный молекулярный паттерн (PAMP), который происходит из первичных патогенов и активирует врожденный иммунный защитный механизм через сигнальный путь, защищая, таким образом, от инвазии патогенной с самого начала. TLR также играет важную роль в иммунной системе, активируя дендритные клетки и активируя адаптивные иммунные ответы, например, T и В-клеток.
TLR, который, как известно, экспрессируется в большинстве иммунных клеток, как известно, также экспрессируется в различных раковых клетках (Непатентный источник 1, Cancer Microenvironment (2009) 2 (Suppl 1):S205-S214, Cancer Cells Expressing Toll-like Receptors and the Tumor Microenvironment).
Таблица 1
TLR, экспрессирующийся в раковых клетках, может усиливать иммунный ответ в микроокружении опухоли, индуцируя инфильтрацию иммунных клеток в раковые клетки посредством секреции цитокинов и хемокинов в раковых клетках.
Кроме того, имеются сообщения, что TLR-стимулирующие вещества (TLR-лиганды) вызывают гибель клеток при непосредственной обработке раковых клеток. TLR-лиганды вызывают апоптоз раковых клеток путем активации пути каспазы в раковых клетках, инициирующего гибель клеток, при этом IFN типа I, активируемый TLR-лигандами, также стимулирует апоптоз посредством активации иммунных клеток.
После гибели раковых клеток, вызванной воздействием TLR-лигандов, высвобождаются внутренние белки и иммуногенные маркеры клеточной смерти, которые активируют дендритные клетки, а затем NK-клетки и T-клетки, специфичные в отношении раковых клеток, убивают раковые клетки.
Кроме того, при уничтожении раковых клеток посредством TLR-лигандов, усиливается экспонирование раковых антигенов, происходящих из раковых клеток, и секреция DAMP (молекулярного паттерна, связанного с повреждением). Экспонированные раковые антигены могут индуцировать иммунный ответ, специфичный в отношении раковых антигенов, за счет адъювантного эффекта TLR-лигандов. Таким образом, ожидается, что TLR-лиганды можно разрабатывать в качестве иммуноонкологических средств, вызывающих гибель раковых клеток и индуцирующих иммунные ответы, специфические в отношении раковых антигенов.
Белки иммунных контрольных точек представляют собой белки клеточных мембран, которые ингибируют дифференцировку, пролиферацию и активность иммунных клеток, но при этом они экспрессируются не только в иммунных клетках, но и в раковых клетках. Известно, что белки иммунных контрольных точек, такие как PD-L1, экспрессируемые в раковых клетках, играют важную роль в защите раковых клеток от иммунной атаки T-клеток, вызывая инактивацию онкоспецифических T-клеток, запуская тем самым механизм ускользания рака от иммунного надзора. Благодаря ингибированию функции таких белков иммунных контрольных точек, ингибиторы иммунных контрольных точек помогают иммуноонкологическим средствам уничтожать раковые клетки.
Известно, что ингибиторы иммунных контрольных точек демонстрируют высокий терапевтический эффект примерно у 30% пациентов в случае монотерапии, но не вызывают терапевтического эффекта у остальных пациентов. Известно, что причиной ограниченной эффективности ингибиторов иммунных контрольных точек является низкая частота ответа и устойчивость к действию ингибиторов иммунных контрольных точек.
Низкий уровень ответа на ингибиторы иммунных контрольных точек обусловлен различными уровнями экспрессии белков иммунных контрольных точек в разных формах рака, при этом более низкий уровень ответа наблюдается при раке с низкой экспрессией. Кроме того, даже если механизм ускользания подавляется ингибиторами иммунных контрольных точек, специфичный в отношении раковой опухоли иммунный ответ, который может убивать раковые клетки, не индуцируется из-за низкого экспонирования раковых антигенов, что приводит к низкому уровню ответа. Следовательно, ограничения, связанные с ингибиторами иммунных контрольных точек, можно преодолеть только за счет комбинированного применения способов, которые могут увеличивать экспонирование раковых антигенов и усиливать иммунные ответы, специфичные в отношении раковых опухолей.
Устойчивость к действию ингибиторов иммунных контрольных точек возникает из-за того, что опухолеспецифичные иммунные клетки не способны проникать в раковую ткань, формирующей раннюю гипоиммуногенную среду без инфильтрации иммунных клеток в раковую ткань, что приводит к резистентности к иммунотерапии.
Чтобы преодолеть низкий уровень ответа и резистентность к ингибиторам иммунных контрольных точек, необходимо преобразовать низкоиммуногенную опухолевую среду в высокоиммуногенную опухолевую среду, что можно решить путем повышения иммуногенности с применением лигандов TLR-рецепторов.
Авторами настоящего изобретения в предыдущих исследованиях была разработана вакцинная композиция, включающая липопептид, который является лигандом TLR2, и поли(I:C), который является лигандом TLR3, при этом было подтверждено, что вакцинная композиция индуцирует сильный иммунный ответ (патент Кореи 10-0900837, патент Кореи 10-1501583), и вакцинная композиция была названа L-pampo.
В данном изобретении авторы обнаружили, что L-Pampo индуцирует сильный иммунный противораковый ответ, и осуществили настоящее изобретение, подтвердив, что L-Pampo, вводимый в опухолевые клетки, ингибирует рост раковых клеток, вызывает апоптоз и ингибирует метастазирование посредством противоракового эффекта изменения микроокружения опухоли и индукции иммунного ответа, специфичного в отношении раковых антигенов, а также то, что комбинация L-Pampo с другими лигандами TLR-рецепторов, сапонином или ингибиторами иммунных контрольных точек преодолевает иммунное ускользание раковых клеток и значительно повышает противораковую эффективность.
Сущность изобретения
Цель настоящего изобретения состоит в предоставлении фармацевтической композиции, включающей адъювант, включающий липопептиды и поли(I:C), в качестве активного ингредиента, для предупреждения или лечения рака.
Другая цель настоящего изобретения состоит в предоставлении способа генерации иммунного ответа против рака у субъекта, включающего этап введения фармацевтической композиции, включающей адъювант, включающий липопептиды и поли(I:C), в качестве активного ингредиента, для предупреждения или лечения рака у субъекта, исключая человека.
Другая цель настоящего изобретения состоит в предоставлении комбинированного состава, включающего адъювант, включающий липопептиды и поли(I:C), и ингибитор иммунных контрольных точек в качестве активных ингредиентов, для предупреждения или лечения рака.
Другая цель настоящего изобретения состоит в предоставлении комбинированного состава, включающего адъювант, включающий липопептиды и поли(I:C), и лиганд TLR в качестве активных ингредиентов, для предупреждения или лечения рака.
Другая цель настоящего изобретения состоит в предоставлении комбинированного состава, включающего адъювант, включающий липопептиды и поли(I:C), и сапонин в качестве активных ингредиентов, для предупреждения или лечения рака.
Для достижения вышеуказанных целей в одном из аспектов настоящего изобретения предложена фармацевтическая композиция, включающая адъювант, включающий липопептиды и поли(I:C), в качестве активного ингредиента, для предупреждения или лечения рака.
В другом аспекте настоящего изобретения предложен способ генерации иммунного ответа против рака у субъекта, включающий этап введения фармацевтической композиции, включающей адъювант, включающий липопептиды и поли(I:C), в качестве активного ингредиента, для предупреждения или лечения рака у субъекта, исключая человека.
В другом аспекте настоящего изобретения предложен комбинированный состав, включающий адъювант, включающий липопептиды и поли(I:C), и ингибитор иммунной контрольной точки в качестве активных ингредиентов, для предупреждения или лечения рака.
В другом аспекте настоящего изобретения предложен комбинированный состав, включающий адъювант, включающий липопептиды и поли(I:C), и второй компонент, включающий лиганд TLR (толл-подобного рецептора) в качестве активных ингредиентов, для предупреждения или лечения рака.
В другом аспекте настоящего изобретения предложен комбинированный состав, включающий адъювант, включающий липопептиды и поли(I:C), и сапонин в качестве активных ингредиентов, для предупреждения или лечения рака.
ПОЛЕЗНЫЙ ЭФФЕКТ
Иммуноонкотерапевтическая композиция, содержащая в качестве активного ингредиента адъювант, включающий липопептиды и поли(I:C), предложенная в одном аспекте настоящего изобретения, может вызывать выраженный терапевтический эффект в отношении различных карцином и может эффективно применяться для противоопухолевой терапии благодаря значительному усилению противоопухолевых эффектов при комбинированном введении с обычными противоопухолевыми лекарственными средствами, такими как химические противоопухолевые средства, противораковые вакцины и ингибиторы иммунных контрольных точек, имеющие разные механизмы.
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ЧЕРТЕЖЕЙ
Фиг. 1 - график, подтверждающий активность каспазы-3 иммуноонкологического средства в линии клеток рака толстой кишки мыши.
Фиг. 2 - график, подтверждающий эффективность подавления опухоли иммуноонкологического средства в модели меланомы на мышах.
Фиг. 3 - график, подтверждающий эффективность подавления опухоли иммуноонкологического средства в модели рака толстой кишки на мышах.
Фиг. 4 - набор фотографий, демонстрирующих результаты анализа воздействия иммуноонкологического средства на инфильтрацию иммунных клеток в опухоль при использовании иммунофлуоресцентного окрашивания в модели рака толстой кишки на мышах.
Фиг. 5 - набор графиков, демонстрирующих результаты анализа воздействия иммуноонкологического средства на инфильтрацию иммунных клеток в опухоль при использовании проточной цитометрии в модели рака толстой кишки на мышах.
Фиг. 6 - набор фотографий и график, показывающие результаты анализа индукции опухолеспецифичных клеточных иммунных ответов иммуноонкологическим средством при использовании анализа ELISPOT в модели рака толстой кишки на мышах.
Фиг. 7 - набор диаграммы и графиков, показывающих результаты анализа абскопальной эффективности иммуноонкологического средства в модели рака толстой кишки на мышах.
Фиг. 8 - график, подтверждающий эффективность подавления опухоли иммуноонкологического средства в модели рака мочевого пузыря на мышах.
Фиг. 9 - график, подтверждающий эффективность подавлении опухоли иммуноонкологического средства в модели рака поджелудочной железы на мышах.
Фиг. 10 - набор графиков, подтверждающих эффективность иммуноонкологического средства в комбинации с ингибитором иммунной контрольной точки в модели рака толстой кишки на мышах.
Фиг. 11а - график, подтверждающий эффективность (размер опухоли) иммуноонкологического средства в комбинации с другими лигандами TLR или сапонином в модели рака толстой кишки на мышах.
Фиг. 11b - график, подтверждающий эффективность (масса опухоли) иммуноонкологического средства в комбинации с другими лигандами TLR или сапонином в модели рака толстой кишки на мышах.
ОПИСАНИЕ ПРЕДПОЧТИТЕЛЬНЫХ ВАРИАНТОВ ОСУЩЕСТВЛЕНИЯ
Далее настоящее изобретение будет описано подробно.
Варианты осуществления настоящего изобретения могут быть модифицированы в других различных формах, при этом объем настоящего изобретения не ограничивается вариантами осуществления, описанными ниже. Специалистам, обладающим средними знаниями в данной области, хорошо известно, что варианты осуществления настоящего изобретения представлены для более точного объяснения настоящего изобретения.
Кроме того, "включение" одного элемента в описание не исключает других элементов, но может включать другие элементы, за исключением случаев, когда прямо указано иное.
В одном из аспектов настоящего изобретения предложена фармацевтическая композиция, включающая адъювант, включающий липопептиды и поли(I:C), в качестве активного ингредиента, для предупреждения или лечения рака.
Липопептид представляет собой синтетический аналог липопептидов из бактерий и микоплазмы, и впервые был синтезирован Дж. Мецгером с соавт. (Metzger, J. et al., 1991, Synthesis of novel immunologically active tripalmitoyl-S-glycerylcysteinyllipopeptides as useful intermediates for immunogen preparations. Int. J. Peptide Protein Res. 37: 46-57). Молекулярная структура соединения, представленного следующей формулой (1), представляет собой N-пальмитоил-S-[2,3-бис(пальмитоилокси)-(2RS)-пропил]-[R]-цистеин-SKKKK (pam3Cys-SKKKK), при этом были синтезированы другие различные аналоги.
[Формула (1)]
Согласно H. Schild et al., при комбинированном введении Pam3Cys-Ser-Ser с T-клеточным эпитопом вируса гриппа мышам индуцировались вирусспецифичные цитотоксические T-лимфоциты (CTL). В общем, липопептиды известны как лиганды TLR2. Применение таких липопептидов не ограничивается Pam3Cys-SKKKK, причем липопептиды могут состоять из жирных кислот и нескольких аминокислот, связанных с молекулами глицерина. Конкретные примеры включают PHC-SKKKK, Ole2PamCys-SKKKK, Pam2Cys-SKKKK, PamCys(Pam)-SKKKK, Ole2Cys-SKKKK, Myr2Cys-SKKKK, PamDhc-SKKKK, PamCSKKKK, Dhc-SKKKK и т.д. Количество жирных кислот в молекуле может составлять одну или больше. Количество аминокислот в липопептиде может составлять одну или больше. Кроме того, жирные кислоты и аминокислоты могут быть химически модифицированы. Кроме того, липопептиды могут быть липопротеинами либо в виде части молекулы, либо в виде целой молекулы, происходящей из грамположительных или грамотрицательных бактерий или микоплазмы.
Кроме того, поли(I:C) использовался в качестве высокоактивного производного интерферона 1 типа в исследованиях in vitro и in vivo. Более того, известно, что поли(I:C) стабильно и зрело формирует дендритные клетки, наиболее эффективные антигенпрезентирующие клетки у млекопитающих (Rous, R. et al 2004. Poly(I:C) used for human dendritic cell maturation preserves their ability to secondarily secrete bioactive Il-12, International Immunol. 16: 767-773). Согласно этим предыдущим сообщениям, поли(I:C) является сильным индуктором IL-12, а IL-12 является важным цитокином, который способствует развитию Th1 и индуцирует клеточные иммунные ответы и образование IgG2a или IgG2b. Кроме того, известно, что поли(I:C) обладает сильной адъювантной активностью против пептидных антигенов (Cui, Z. and F. Qui. 2005. Synthetic double stranded RNA poly I:C as a potent peptide vaccine adjuvant: Therapeutic activity against human cervical cancer in a rodent model. Cancer Immunol. Immunotherapy 16: 1-13). Поли(I:C) известен как репрезентативный лиганд TLR3. Длина поли(I:C) может изменяться в пределах от 50 до 5000 пн, предпочтительно от 50 до 2000 пн и более предпочтительно от 100 до 500 пн, но не всегда ограничивается этими значениями.
Липопептид и поли(I:C) могут быть включены в фармацевтическую композицию в массовом отношении от 0,1 до 10:1, от 1,25 до 2:1, от 1,25 до 1,5:1 или 1,25:1, но не ограничиваются конкретно этими значениями и могут быть доведены до соответствующего уровня в зависимости от состояния пациента. Кроме того, фармацевтическая композиция может быть составом в форме водного раствора.
Фармацевтическая композиция может дополнительно включать по меньшей мере одно, выбранное из группы, состоящей из фармацевтически приемлемых носителей, разбавителей и адъювантов. Например, фармацевтическая композиция может включать фармацевтически приемлемый носитель и может быть изготовлена в форме, предназначенной для медицинского или ветеринарного применения, и введена различными путями. Путь введения может быть пероральным, внутрибрюшинным, внутривенным, внутримышечным, подкожным, внутрикожным и т.д. Предпочтительно ее изготавливают и вводят в виде инъекции. Препараты для инъекций могут быть изготовлены при использовании водных растворителей, таких как физиологический раствор и раствор Рингера, и неводных растворителей, таких как растительные масла, сложные эфиры высших жирных кислот (например, этилолеат и т.д.), спирты (например, этанол, бензиловый спирт, пропиленгликоль, глицерин и т.д.) и т.п., и могут содержать фармацевтические носители, такие как стабилизаторы для предотвращения разложения (например, аскорбиновую кислоту, бисульфит натрия, пиросульфит натрия, BHA, токоферол, ЭДТА и т.д.), эмульгаторы, буферы для регуляции pH и консерванты для подавления роста микроорганизмов (например, нитрат фенилртути, тимеросал, хлорид бензалкония, фенол, крезол, бензиловый спирт и т.д.). Фармацевтическую композицию можно вводить в фармацевтически эффективном количестве. В данном случае термин "фармацевтически эффективное количество" относится к количеству, достаточному для проявления иммунопротиворакового эффекта, но не достаточному, чтобы вызвать побочные эффекты или серьезный или избыточный иммунный ответ. Точная концентрация дозы зависит от вводимой композиции и может быть легко определена специалистами в данной области в зависимости от факторов, хорошо известных в области медицины, таких как возраст пациента, вес, состояние здоровья, пол, чувствительность пациента к лекарственному средству, путь введения и способ введения, и при этом ее можно вводить один или несколько раз.
В другом аспекте настоящего изобретения предложен способ генерации иммунного ответа против рака у субъекта, включающий этап введения фармацевтической композиции, содержащей адъювант, включающий липопептиды и поли(I:C), в качестве активного ингредиента, для предупреждения или лечения рака у субъекта, исключая человека.
При введении фармацевтической композиции человеку (пациенту), ее могут вводить в количестве, эффективном для стимуляции иммунного ответа in vivo, например, ее могут вводить человеку один или несколько раз, при этом такое количество может составлять 0,25-3,6 мг, более предпочтительно 0,45-1,8 мг, но не всегда ограничивается этими значениями.
В другом аспекте настоящего изобретения предложен комбинированный состав, включающий адъювант, включающий липопептиды и поли(I:C), и ингибитор иммунной контрольной точки в качестве активных ингредиентов, для предупреждения или лечения рака.
В данном случае ингибитором иммунной контрольной точки может быть по меньшей мере одно, выбранное из группы, состоящей из антитела против CTLA4, антитела против PD-L1 и антитела против PD-1.
В частности, ингибитор иммунной контрольной точки может быть выбран из группы, состоящей из антитела против CTLA4, его производного или его антигенсвязывающего фрагмента; антитела против PD-L1, его производного или его антигенсвязывающего фрагмента; антитела против LAG-3, его производного или его антигенсвязывающего фрагмента; антитела против OX40, его производного или его антигенсвязывающего фрагмента; антитела против TIM3, его производного или его антигенсвязывающего фрагмента; и антитела против PD-1, его производного или его антигенсвязывающего фрагмента. Например, в качестве ингибитора иммунной контрольной точки, направленно воздействующего на CTLA-4, может применяться Ервой (ипилимумаб); в качестве ингибитора иммунной контрольной точки, направленно воздействующего на PD-L1, может применяться Тецентрик (атезолизумаб), авелумаб (Бавенсио), Имфинзи (дурвалумаб) и т.п., отдельно или в комбинации; и в качестве ингибитора иммунной контрольной точки, направленно воздействующего на PD-1, может применяться Кейтруда (пембролизумаб), Опдиво (ниволумаб), Либтайо (цемиплимаб) и т.п., отдельно или в комбинации.
В другом аспекте настоящего изобретения предложен комбинированный состав, включающий адъювант, включающий липопептиды и поли(I:C), и лиганд TLR (толл-подобного рецептора) в качестве активных ингредиентов, для предупреждения или лечения рака.
В данном случае лигандом TLR (толл-подобного рецептора) может быть один или более лигандов, выбранных из группы, состоящей из TLR-рецепторов 1-13. Например, может использоваться лиганд TLR7 (имиквимод и т.д.), лиганды TLR7/8 (имидазохинолин и т.д.) и лиганд TLR9 (CpG ODN и т.д.).
В другом аспекте настоящего изобретения предложен комбинированный состав, включающий адъювант, включающий липопептиды и поли(I:C), и сапонин в качестве активных ингредиентов, для предупреждения или лечения рака.
В настоящее время сапонин может быть выбран из группы, состоящей из QS21, Quil A, QS7, QS17 и их комбинаций.
Иммуноонкотерапевтическая композиция, включающая адъювант, включающий липопептиды и поли(I:C), в качестве активного ингредиента, предложенная в одном аспекте настоящего изобретения, может вызывать значимый терапевтический эффект в отношении различных карцином и может эффективно применяться для противоопухолевой терапии благодаря значительному усилению противоопухолевого эффекта при комбинированном введении с обычными противоопухолевыми средствами, такими как химические противоопухолевые средства, противораковые вакцины и ингибиторы иммунных контрольных точек, имеющие разные механизмы.
В частности, было подтверждено, что иммуноонкотерапевтическая композиция, включающая адъювант, включающий липопептиды и поли(I:C), согласно настоящему изобретению (далее именуемая L-pampo), вызывает апоптоз раковых клеток путем дальнейшей активации капспазы-3 каспазного пути в раковых клетках в большей степени, чем при отдельной обработке липопептидом или поли(I:C) (см. Фиг. 1). Таким образом, было подтверждено, что L-pampo наиболее сильно вызывает апоптоз клеток рака толстой кишки.
Кроме того, было подтверждено, что L-pampo уменьшает размер опухоли в модели меланомы на мышах (см. Фиг. 2). В модели рака толстой кишки на мышах L-pampo уменьшала размер опухоли, что позволяет предположить, что она обладает противораковой эффективностью (см. Фиг. 3). Кроме того, было подтверждено, что L-pampo согласно настоящему изобретению индуцирует иммунную активность, способную убивать опухоли, вызывающую инфильтрацию множества CD8 T-клеток в опухоли в модели рака толстой кишки на мышах, одновременно подавляя Treg+ клетки (см. Фиг. 4 и 5).
Кроме того, было подтверждено, что L-pampo согласно настоящему изобретению сильно индуцирует опухолеспецифичный клеточный иммунный ответ за счет увеличения секреции IFN-γ в модели рака толстой кишки на мышах (см. Фиг. 6). Также было подтверждено, что L-pampo согласно настоящему изобретению демонстрировал абскопальную эффективность, уменьшая размер опухолей, обработанных L-pampo, а также опухолей, не обработанных L-pampo (см. Фиг. 7).
Между тем, было подтверждено, что L-pampo уменьшает размер опухоли в модели рака мочевого пузыря на мышах (см. Фиг. 8). Также было подтверждено, что L-pampo уменьшает размер опухоли в модели рака поджелудочной железы на мышах (см. Фиг. 9). Представленные выше результаты указывают, что L-pampo согласно настоящему изобретению демонстрирует противоопухолевую активность при различных формах рака.
С другой стороны, было подтверждено, что при введении L-pampo согласно настоящему изобретению и антитела к PD-1, ингибитора иммунной контрольной точки, в комбинации размер опухоли значительно уменьшался по сравнению с введением по отдельности (см. Фиг. 10). Таким образом, было сделано предположение, что комбинированное лечение L-pampo и ингибиторами иммунных контрольных точек демонстрирует сильную противоопухолевую эффективность. Кроме того, было подтверждено, что когда L-pampo согласно настоящему изобретению вводили в комбинации с другим лигандом TLR (имиквимодом) или сапонином (QS-21), размер и масса опухоли значительно уменьшались по сравнению с отдельным введением (см. Фигуры 11a и 11b). Таким образом, было подтверждено, что комбинированное лечение иммуноонкотерапевтическим средством L-pampo согласно настоящему изобретению с другими лигандами TLR или сапонином оказывает синергический эффект и может демонстрировать сильную противоопухолевую эффективность.
L-pampo, содержащая липопептиды и поли(I:C) согласно настоящему изобретению, индуцировала специфичный в отношении рака клеточный иммунный ответ, вызывала инфильтрацию в опухоль большого количества CD8+ T-клеток и проявляла сильную противоопухолевую эффективность, сильно подавляя рост опухоли. Из представленных выше результатов было подтверждено, что внутриопухолевое введение иммуноонкотерапевтической композиции, содержащей L-pampo, может применяться в качестве иммунотерапевтического средства, которое убивает раковые клетки и демонстрирует сильную противоопухолевую эффективность посредством опухолеспецифичных иммунных ответов и внутриопухолевой инфильтрации иммунных клеток.
Далее настоящее изобретение будет подробно описано посредством следующих примеров и экспериментальных примеров.
Однако следующие примеры и экспериментальные примеры предназначены исключительно для иллюстрации настоящего изобретения, и содержание настоящего изобретения не ограничивается ими.
Пример 1: Анализ активности каспазы-3 иммуноонкологического средства, включающего липопептид и поли(I:C), в клетках MC38, линии клеток рака толстой кишки
<1-1> Посев клеток и стимуляция
Клетки MC38, линию клеток рака толстой кишки, сеяли в 12-луночный культуральный планшет при плотности 1,5×105 клеток/лунка. На следующий день планшет обрабатывали лигандом TLR2 (Pam3CSK4), лигандом TLR3 (Поли(I:C)) или L-pampo, смесью лигандов TLR2 (Pam3CSK4) и TLR3 (поли(I:C)), а затем культивировали в течение 24 часов. В этом случае L-pampo получали путем смешивания 50 мкл лиганда TLR2 (Pam3CSK4) и 40 мкл лиганда TLR3 (поли(I:C)).
<1-2> Получение клеточного экстракта
По истечении 24 часов стимуляции, клетки собирали, ресуспендировали примерно в 100 мкл лизисного буфера и культивировали на льду в течение 5 минут. После центрифугирования при 1000×g в течение 10 минут при 4°C, супернатант лизата переносили в новую пробирку e-tube (Эппендорф). После измерения концентрации каждого образца с помощью анализа BCA, выравнивали концентрацию всех образцов. Эти образцы клеточных экстрактов хранили при температуре 4°C для немедленного использования и при -20°C для длительного хранения.
<1-3> Анализ активности каспазы-3 в клетках
Анализ проводили в соответствии с инструкциями набора для анализа активности каспазы-3 в клетках (Millipore, #235419). Пустой контроль, отрицательный контроль (клеточный экстракт, обработанный ингибитором каспазы-3), положительный контроль (очищенную каспаза-3) и клеточный экстракт каждого образца подвергали реакции с субстратом каспазы (Ac-DEVD-pNA), и измеряли OD450 по проявлению цвета в интервалах от 5 до 10 минут в течение минимум 30 минут и максимум 120 минут. При использовании стандарта субстрата вычисляли коэффициент преобразования, преобразовывали активность каждого образца и выражали в пмоль/мин.
<1-4> Сравнительный анализ активности каспазы-3
Активность каспазы-3 сравнивали и анализировали в образцах клеточных экстрактов, обработанных отрицательным контролем, положительным контролем, лигандом TLR2, лигандом TLR3 и L-pampo.
Результаты показаны на Фиг. 1. Фиг. 1 представляет собой график, подтверждающий активность каспазы-3 иммуноонкологического средства в линии клеток рака толстой кишки мыши.
Как показано на Фиг. 1, было подтверждено, что активность каспазы-3 была индуцирована на относительно более высоком уровне в экспериментальной группе, получавшей L-pampo, по сравнению с экспериментальной группой, получавшей лиганд TLR2 или лиганд TLR3. Таким образом, было подтверждено, что L-pampo наиболее сильно вызывает апоптоз клеток MC38, линии клеток рака толстой кишки.
Пример 2. Подтверждение эффективности иммуноонкологического средства, включающего липопептид и поли(I:C), в модели меланомы на мышах.
<2-1> Создание модели меланомы на мышах
Образование опухолей у мышей вызывали путем подкожной инъекции 2×105 клеток мышиной меланомы B16F10 в правый бок 7-недельных самок мышей C57BL/6 (OrientBio, Korea).
<2-2> Получение и введение иммуноонкологического средства
Иммуноонкологическое средство L-pampo получали путем смешивания 50 мкл Pam3CSK4 и 40 мкл поли(I:C). Группу, которой вводили буфер, использовали в качестве группы отрицательного контроля, и когда размер опухоли у мышей в модели меланомы, созданной в Примере <2-1> выше, достигал примерно 100 мм3, в опухоль три раза вводили 90 мкл/доза L-pampo с 3-дневными интервалами.
<2-3> Анализ эффективности супрессии опухоли
Размеры опухолей во всех экспериментальных группах измеряли раз в два-три дня. Опухоли измеряли по длинной и короткой оси, и размер опухоли вычисляли как [1/2×размер по длинной оси×(размер по короткой оси)2]. Противоопухолевую эффективность иммуноонкологического средства анализировали по вычисленному размеру опухолей.
Результаты показаны на Фиг. 2. Фиг. 2 представляет собой график, подтверждающий эффективность супрессии опухоли иммуноонкологического средства в модели меланомы на мышах.
Как показано на Фиг. 2, в экспериментальной группе, получавшей иммуноонкологическое средство L-pampo, было подтверждено, что размер опухоли уменьшился приблизительно на 52,8% в день 22, через 12 дней после начала введения, по сравнению с группой отрицательного контроля, в которой вводили буфер, что демонстрирует то, что иммуноонкологическое средство обладает ингибирующей активностью в отношении меланомы.
Пример 3: Подтверждение эффективности иммуноонкологического средства, содержащего липопептид и поли(I:C), в модели рака толстой кишки на мышах
<3-1> Создание модели на мышах
Опухоли создавали у мышей путем подкожной инъекции 5×104 раковых клеток толстой кишки мыши MC38 в правый бок 7-недельных самок мышей C57BL/6 (OrientBio, Korea).
<3-2> Получение и введение иммуноонкологического средства
Иммуноонкологическое средство L-pampo получали путем смешивания 100 мкл Pam3CSK4 и 80 мкл поли(I:C). Группу, которой вводили буфер, использовали в качестве группы отрицательного контроля, и когда размер опухоли у мышей в модели рака толстой кишки, созданной в Примере <3-1> выше, достигал примерно 50 мм3, в опухоль вводили 180 мкл/доза L-pampo четыре раза с 3-дневными интервалами.
<3-3> Анализ эффективности супрессии опухоли
Размеры опухолей во всех экспериментальных группах измеряли каждые три дня. Опухоли измеряли по длинной и короткой оси, а размер опухоли вычисляли как [1/2×размер по длинной оси×(размер по короткой оси)2]. Эффективность супрессии опухоли иммуноонкологического средства анализировали на основе вычисленного размера опухоли.
Результаты показаны на Фиг. 3. Фиг. 3 представляет собой график, подтверждающий эффективность супрессии опухоли иммуноонкологического средства в модели рака толстой кишки на мышах.
Как показано на Фиг. 3, в экспериментальной группе, которой вводили иммуноонкологическое средство L-pampo, было подтверждено, что размер опухоли уменьшался приблизительно на 85,2% в день 19, через 12 дней после начала введения, по сравнению с группой отрицательного контроля, которой вводили буфер, что демонстрирует то, что иммуноонкологическое средство обладает сильной противоопухолевой эффективностью. Это демонстрирует, что иммуноонкологическое средство L-pampo может сильно подавлять рост рака толстой кишки.
<3-4> Анализ внутриопухолевой инфильтрации иммунных клеток
Опухоли у всех мышей собирали в день 19, через 12 дней после начала введения, и исследовали внутриопухолевую инфильтрацию иммунных клеток с использованием иммунофлуоресцентного окрашивания и анализа методом проточной цитометрии.
Для проведения иммунофлуоресцентного окрашивания собранные опухоли мышей фиксировали в 1% параформальдегиде, а затем обезвоживали с использованием 20% раствора сахарозы. Опухолевые ткани замораживали в среде OCT (от англ. optimal cutting temperature - оптимальная температура получения среза), и замороженные опухолевые ткани разрезали с получением срезов толщиной 50 мкм при использовании криотома и фиксировали на предметных стеклах. Опухолевые ткани, зафиксированные на предметных стеклах, подвергали реакции с блокирующим раствором в течение 1 часа. Антитело к CD8 и антитело к CD31 разводили в соотношении 1:200 и подвергали реакции с опухолевыми тканями в течение 24 часов при 4°C. После реакции опухолевые ткани промывали PBST, а затем подвергали реакции с флуоресцентным антителом и DAPI в течение 2 часов при комнатной температуре. После подготовки препаратов флуоресцентные изображения исследовали с помощью конфокального микроскопа.
Результаты показаны на Фиг. 4.
Фиг. 4 представляет собой набор фотографий, демонстрирующих результаты анализа влияния иммуноонкологического средства на инфильтрацию иммунных клеток в опухоль при использовании иммунофлуоресцентного окрашивания в модели рака толстой кишки на мышах.
Как показано на Фиг. 4, в экспериментальной группе, которой вводили L-pampo, в опухоль инфильтрировало значительно больше CD8+ T-клеток (зеленая флуоресценция), чем в экспериментальной группе, получавшей буфер, то есть в группе отрицательного контроля. Это демонстрирует, что L-pampo может вызывать супрессию опухоли иммунными клетками, вызывая инфильтрацию множества CD8 T-клеток в опухоль.
Для проведения проточной цитометрии собранные мышиные опухоли разрезали на небольшие фрагменты, которые обрабатывали коллагеназой D и ДНКазой I и оставляли для реакции на 1 час при 37°C. Реактант фильтровали через клеточный фильтр с ячейками 70 мкм, эритроциты лизировали, и затем снова фильтровали через нейлоновую сетку. Суспензию отдельных клеток блокировали антителами к CD16/32, а затем окрашивали прижизненным красителем для клеток. После окрашивания конъюгированными с флуоресцентными красителями CD45, CD3, CD8, CD4, Foxp3 и CD25, реактант измеряли с помощью проточного цитометра CytoFLEX. Результаты измерений количественно сравнивали и анализировали с использованием программы FlowJo.
Результаты показаны на Фиг. 5.
Фиг. 5 представляет собой набор графиков, демонстрирующих результаты анализа влияния иммуноонкологического средства на инфильтрацию иммунных клеток в опухоль при использовании проточной цитометрии в модели рака толстой кишки на мышах.
Как показано на Фиг. 5, в экспериментальной группе, которой вводили L-pampo, в опухоль инфильтрировало значительно больше CD8+ T-клеток, чем в экспериментальной группе, которой вводили буфер, то есть в группе отрицательного контроля. Кроме того, было подтверждено, что экспериментальная группа, которой вводили L-pampo, имела значительно меньшее количество Treg+ клеток, которые подавляют активность T-клеток в опухоли, по сравнению с группой отрицательного контроля. Это указывает, что L-pampo может индуцировать иммунную активность, которая может убивать опухоль в результате инфильтрации в опухоль множества CD8+ T-клеток и супрессии Treg+ клеток.
<3-5> Анализ опухолеспецифичной клеточной иммунной активности
В день 19, через 12 дней после начала введения, селезенки всех мышей собирали и опухолеспецифичную иммунную активность исследовали с помощью анализа ELISPOT.
Для проведения опухолеспецифичного анализа ELISPOT собранные селезенки протирали через клеточный фильтр, отделяли клетки селезенки и удаляли мертвые клетки. Спленоциты и клетки рака толстой кишки MC39 смешивали в соотношении 10:1 и культивировали вместе в 96-луночном планшете, покрытом мышиным IFN-γ. Клетки культивировали с детектирующим антителом в течение 2 часов при комнатной температуре, а затем культивировали со стрептавидином-ALP в течение 1 часа при комнатной температуре. После культивирования окрашенные лунки (пятна) подтверждали при добавлении раствора субстрата. Окрашенные лунки анализировали с помощью программы Image J.
Результаты показаны на Фиг. 6.
Фиг. 6 представляет собой набор фотографий и график, на которых показаны результаты анализа индукции опухолеспецифичных клеточных иммунных ответов иммуноонкологическим средством при использовании анализа ELISPOT в модели рака толстой кишки на мышах.
Как показано на фиг. 6, в экспериментальной группе, которой вводили L-pampo, было индуцировано значительно больше пятен IFN-γ по сравнению с экспериментальной группой, которой вводили буфер, то есть группой отрицательного контроля. На основе представленных выше результатов было подтверждено, что внутриопухолевое введение иммуноонкологического средства L-pampo сильно индуцирует опухолеспецифичный клеточный иммунный ответ.
<3-6> Анализ абскопальной эффективности в модели рака толстой кишки на мышах
Для создания абскопальной модели, 5×104 клеток рака толстой кишки мыши MC38 вводили подкожно в правый бок 7-недельным самкам мышей C57BL/6 (OrientBio, Korea), а через 4 дня 5×104 клеток рака толстой кишки MC38 вводили подкожно в левый бок мышей для образования опухолей на обоих боках. L-pampo, полученную в Примере <3-2> выше, вводили в количестве 180 мкл/доза только в опухоль, образовавшуюся на правой стороне. Размер опухолей, образовавшихся на обеих сторонах, измеряли с 3-дневными интервалами для анализа эффективности супрессии опухоли.
Результаты показаны на Фиг. 7.
Фиг. 7 представляет собой набор схем и графиков, на которых показаны результаты анализа абскопальной эффективности иммуноонкологического средства в модели рака толстой кишки на мышах.
Как показано на Фиг. 7, в отличие от экспериментальной группы, которой вводили буфер, группы отрицательного контроля, экспериментальная группа, которой вводили L-pampo, показала значительное уменьшение размера не только опухоли, в которую вводили иммуноонкологическое средство L-pampo (правая сторона), но также и опухоли, в которую его не вводили (левая сторона). Таким образом, было подтверждено, что когда в опухоль вводили иммуноонкологическое средство L-pampo, L-pampo не только убивал раковые клетки, но и убивал опухоль, не обработанную L-pampo, в результате индукции сильную опухолеспецифичной иммунной активности, что указывает на то, что иммуноонкологическое средство L-pampo также может устранять метастазировавшие раковые клетки.
Пример 4. Подтверждение эффективности иммуноонкологического средства, содержащего липопептид и поли(I:C), в модели рака мочевого пузыря на мышах
<4-1> Создание модели рака мочевого пузыря на мышах
Опухоли у мышей формировали путем подкожной инъекции 5×105 клеток рака мочевого пузыря мыши MB49 в правый бок 7-недельных самок мышей C57BL/6 (OrientBio, Korea).
<4-2> Получение и введение иммуноонкологического средства
Иммуноонкологическое средство L-pampo получали путем смешивания 100 мкл Pam3CSK4 и 80 мкл поли(I:C). Группу, которой вводили буфер, использовали в качестве группы отрицательного контроля, и когда размер опухоли у мышей в модели рака мочевого пузыря, созданно в Примере <4-1> выше, достигал примерно 50 мм3, в опухоль четыре раза вводили 180 мкг/доза L-pampo с 3-дневными интервалами.
<4-3> Анализ эффективности супрессии опухоли
Размеры опухолей во всех экспериментальных группах измеряли каждые три дня. Опухоли измеряли по длинной и короткой оси, а размер опухоли вычисляли как [1/2×размер по длинной оси×(размер по короткой оси)2]. Эффективность супрессии опухоли иммуноонкологического средства анализировали на основе вычисленного размера опухоли.
Результаты показаны на Фиг. 8. Фиг. 8 представляет собой график, подтверждающий эффективность супрессии опухолей иммуноонкологического средства в модели рака мочевого пузыря на мышах.
Как показано на Фиг. 8, в экспериментальной группе, которой вводили иммуноонкологическое средство L-pampo, было подтверждено, что размер опухоли уменьшался приблизительно на 60,3% в день 24, через 18 дней после начала введения, по сравнению с группой отрицательного контроля, которой вводили буфер, что указывает, что иммуноонкологическое средство обладает сильной противоопухолевой эффективностью. Это демонстрирует, что иммуноонкологическое средство L-pampo может сильно подавлять рост рака мочевого пузыря.
Пример 5: Подтверждение эффективности иммуноонкологического средства, содержащего липопептид и поли(I:C), в модели рака поджелудочной железы на мышах
<5-1> Создание модели рака поджелудочной железы на мышах
Опухоли у мышей создавали путем подкожной инъекции 5×105 клеток рака поджелудочной железы мыши KPC в правый бок 8-недельных самок мышей C57BL/6 (OrientBio, Korea).
<5-2> Получение и введение иммуноонкологического средства
Иммуноонкологическое средство L-pampo получали путем смешивания 100 мкл Pam3CSK4 и 80 мкл поли(I:C). Группу, которой вводили буфер, использовали в качестве группы отрицательного контроля, и когда размер опухоли у мышей в модели рака поджелудочной железы, созданной в Примере <5-1> выше, достигал примерно 50 мм3, в опухоль четыре раза вводили 180 мкл/доза L-pampo с 3-дневными интервалами.
<5-3> Анализ эффективности супрессии опухоли
Размеры опухолей во всех экспериментальных группах измеряли каждые три дня. Опухоли измеряли по длинной и короткой оси, а размер опухоли вычисляли как [1/2×размер по длинной оси×(размер пл короткой оси)2]. Эффективность супрессии опухоли иммуноонкологического средства анализировали на основе вычисленного размера опухоли.
Результаты показаны на Фиг. 9.
Фиг. 9 представляет собой график, подтверждающий эффективность супрессии опухоли иммуноонкологического средства в модели рака поджелудочной железы на мышах.
Как показано на Фиг. 9, в экспериментальной группе, которой вводили иммуноонкологическое средство L-pampo, было подтверждено, что размер опухоли уменьшался приблизительно на 82,9% в день 21, через 13 дней после начала введения, по сравнению с группой отрицательного контроля, которой вводили буфер, что указывает, что иммуноонкологическое средство обладает сильной противоопухолевой эффективностью. Это демонстрирует, что иммуноонкологическое средство L-pampo может сильно подавлять рост рака поджелудочной железы.
Пример 6: Подтверждение эффективности иммуноонкологического средства, содержащего липопептид и поли(I:C), в комбинации с ингибитором иммунной контрольной точки, в модели рака толстой кишки на мышах
<6-1> Создание модели рака толстой кишки на мышах
Опухоли у мышей создавали путем подкожной инъекции 1×105 клеток рака толстой кишки мыши MC38 в правый бок 8-недельных самок мышей C57BL/6 (OrientBio, Korea).
<6-2> Получение и введение иммуноонкологического средства L-pampo
Иммуноонкологическое средство L-pampo получали путем смешивания 27,8 мкл Pam3CSK4 и 22,2 мкл поли(I:C). Группу, которой вводили буфер, использовали в качестве группы отрицательного контроля, и когда размер опухоли у мышей в модели рака толстой кишки, созданной в Примере <6-1> выше, достигал приблизительно 50 мм3, в опухоль четыре раза вводили 50 мкг/доза L-pampo с 3-дневными интервалами.
<6-3> Введение ингибитора иммунной контрольной точки
Мышиное антитело к PD-1, которое является ингибитором иммунной контрольной точки, было приобретено у BioXCell. Группа, получавшая только мышиное антитело к PD-1, была установлена в качестве контрольной группы комбинированного введения. Группа комбинированного введения получала 200 мкл/доза мышиного антитела к PD-1, которое вводили внутрибрюшинно 4 раза с 3-дневными интервалами во время внутриопухолевого введения L-pampo.
<6-4> Анализ эффективности супрессии опухоли
Размеры опухолей во всех экспериментальных группах измеряли каждые три дня. Опухоли измеряли по длинной и короткой оси, и размер опухоли вычисляли как [1/2×размер по длинной оси×(размер по короткой оси)2]. Эффективность супрессии опухоли анализировали на основе вычисленного размера опухоли.
Результаты показаны на Фиг. 10.
Фиг. 10 представляет собой набор графиков, подтверждающих эффективность иммуноонкологического средства в комбинации с ингибитором иммунной контрольной точки в модели рака толстой кишки на мышах.
Как показано на Фиг. 10, в экспериментальной группе, которой вводили антитело к PD-1, было подтверждено, что размер опухоли уменьшался приблизительно на 19,2% в день 19, через 12 дней после начала введения, по сравнению с группой отрицательного контроля, получавшей буфер. С другой стороны, в экспериментальной группе, которой вводили иммуноонкологическое средство L-pampo, было подтверждено, что размер опухоли уменьшался приблизительно на 60,3% в день 19, что указывает на то, что иммуноонкологическое средство L-pampo демонстрирует более сильный эффект супрессии опухоли, чем ингибитор иммунной контрольной точки, антитело к PD-1. Кроме того, было подтверждено, что в экспериментальной группе, которой одновременно вводили иммуноонкологическое средство L-pampo и ингибитор иммунной контрольной точки, антитело к PD-1, размер опухоли уменьшался приблизительно на 80,7% в день 19, причем у одного из восьми животных опухоль полностью исчезла. На основе представленных выше результатов было подтверждено, что комбинированное лечение иммуноонкологическим средством L-pampo и ингибитором иммунной контрольной точки может демонстрировать сильную противоопухолевую эффективность.
Пример 7: Подтверждение эффективности иммуноонкологического средства, содержащего липопептид и поли(I:C), в комбинации с другими лигандами TLR или сапонином, в модели рака толстой кишки на мышах
<7-1> Создание модели рака толстой кишки на мышах
Опухоли у мышей создавали путем подкожной инъекции 1×105 клеток рака толстой кишки мыши MC38 в правый бок 8-недельных самок мышей C57BL/6 (OrientBio, Korea).
<7-2> Получение и введение иммуноонкологического средства L-pampo
Иммуноонкологическое средство L-pampo получали путем смешивания 25 мкл Pam3CSK4 и 20 мкл поли(I:C). Группу, которой вводили буфер, использовали в качестве группы отрицательного контроля, и когда размер опухоли у мышей в модели рака толстой кишки, созданной в Примере <7-1> выше, достигал примерно 50 мм3, в опухоль четыре раза вводили 45 мкл/доза L-pampo с 3-дневными интервалами.
<7-3> Приготовление и введение совместно вводимой субстанции иммуноонкологического средства L-pampo
Субстанцию для совместного введения приготавливали путем смешивания на вортексе 45 мкл/доза иммуноонкологического средства L-pampo, полученного в Примере <7-2> выше, с 10 мкл/доза QS21 (Creative biolabs) или 10 мкл/доза имиквимода (Invivogen) соответственно. Ее вводили в опухоль четыре раза с 3-дневными интервалами.
<7-4> Анализ эффективности супрессии опухоли
Размеры опухолей во всех экспериментальных группах измеряли каждые три дня. Опухоли измеряли по длинной и короткой оси, и размер опухоли рассчитывали как [1/2×размер по длинной оси×(размер по короткой оси)2]. Эффективность супрессии опухоли анализировали на основе вычисленного размера опухоли.
Результаты показаны на Фиг. 11.
Фиг. 11 представляет собой набор графиков, подтверждающих эффективность иммуноонкологического средства в комбинации с другими лигандами TLR или сапонином в модели рака толстой кишки на мышах.
Как показано на фиг. 11а, в экспериментальной группе, которой вводили имиквимод (лиганд TLR 7), другой лиганд TLR, было подтверждено, что размер опухоли уменьшался приблизительно на 39% в день 20, через 12 дней после начала введения, по сравнению с группой отрицательного контроля, которой вводили буфер. Кроме того, в экспериментальной группе, которой вводили сапонин QS-21, было подтверждено, что размер опухоли уменьшался приблизительно на 57% в день 20. С другой стороны, было подтверждено, что в экспериментальной группе, которой вводили L-pampo, размер опухоли уменьшался приблизительно на 78% в день 20, демонстрируя самый сильный эффект ингибирования роста опухоли среди групп, которым вводили отдельно. Также было подтверждено, что размер опухоли уменьшался более чем на 84% в день 20 во всех экспериментальных группах, которым вводили иммуноонкологическое средство L-pampo в комбинации с имиквимодом или QS-21 соответственно. Как показано на Фиг. 11b, аналогичная тенденция к уменьшению размера опухоли подтверждалась в результатах измерения веса опухоли в каждой экспериментальной группе в день 20. Таким образом, было подтверждено, что комбинированное введение иммуноонкологического средства L-pampo с другими лигандами TLR или сапонином может проявлять синергический эффект и сильную противоопухолевую эффективность.
Изобретение относится к области фармацевтики и может быть использовано для лечения рака. Фармацевтическая комбинация для предупреждения или лечения рака содержит в качестве активных ингредиентов: (а) липопептиды и поли(I:C) и (b) по меньшей мере одно средство, выбранное из группы, состоящей из ингибитора иммунных контрольных точек, лиганда TLR (toll-подобного рецептора) и сапонина. При этом ингибитор иммунной контрольной точки представляет собой по крайней мере одно, выбранное из группы, состоящей из антитела против CTLA и антитела против PD-1. Лиганд TLR (toll-подобного рецептора) представляет собой TLR7, и сапонин представляет собой QS-21. Предложенная комбинация оказывает сильный терапевтический эффект в отношении различных форм карцином и может эффективно применяться для противоопухолевой терапии благодаря значительному улучшению противоопухолевых эффектов. 7 з.п. ф-лы, 11 ил., 1 табл., 7 пр.
1. Фармацевтическая комбинация для предупреждения или лечения рака, содержащая (a) липопептиды и поли(I:C) и (b) по меньшей мере одно средство, выбранное из группы, состоящей из ингибитора иммунных контрольных точек, лиганда TLR (toll-подобного рецептора) и сапонина в качестве активных ингредиентов, где ингибитор иммунной контрольной точки представляет собой по крайней мере одно, выбранное из группы, состоящей из антитела против CTLA4 и антитела против PD-1, где лиганд TLR (toll-подобного рецептора) представляет собой лиганд TLR7, и сапонин представляет собой QS-21.
2. Фармацевтическая комбинация по п.1, где фармацевтическая комбинация предупреждает или лечит рак посредством активации Т-клеточного иммунного ответа.
3. Фармацевтическая комбинация по п.1, где липопептид представляет собой по меньшей мере один, выбранный из группы, состоящей из Pam3Cys-SKKKK, PHC-SKKKK, Ole2PamCys-SKKKK, Pam2Cys-SKKKK, PamCys(Pam)-SKKKK, Ole2Cys-SKKKK, Myr2Cys-SKKKK, PamDhc-SKKKK, PamCSKKKK и Dhc-SKKKK.
4. Фармацевтическая комбинация по п.1, где липопептид и поли(I:C) включены в массовом соотношении от 0,1 до 10:1.
5. Фармацевтическая комбинация по п.1, где липопептид и поли(I:C) находятся в водном растворе.
6. Фармацевтическая комбинация по п.1, состоящая из (a) липопептидов и поли(I:C) и (b) ингибитора иммунных контрольных точек в качестве активных ингредиентов, где ингибитор иммунной контрольной точки представляет собой по меньшей мере один, выбранный из группы, состоящей из антитела против CTLA4 и антитела против PD-1.
7. Фармацевтическая комбинация по п.1, состоящая из (а) липопептидов и поли(I:C) и (b) лиганда TLR7 (toll-подобный рецептор 7) в качестве активных ингредиентов.
8. Фармацевтическая комбинация по п.1, состоящая из (a) липопептидов и поли(I:C) и (b) сапонина в качестве активных ингредиентов, где сапонин представляет собой QS21.
| US 20170333542 A1, 23.11.2017 | |||
| WO 2008153541 A1, 18.12.2008 | |||
| WO 2009072767 A2, 11.06.2009 | |||
| ЩЕБЛЯКОВ Д.В | |||
| и др | |||
| Толл-подобные рецепторы (TLR) и их значение в опухолевой прогрессии | |||
| Acta Naturae, т.2, N3(6), 2010, с.28-37 | |||
| Приспособление для точного наложения листов бумаги при снятии оттисков | 1922 |
|
SU6A1 |
| / гл | |||
| ред | |||
| В.И | |||
| Покровский | |||
| М.: Медицина, 1996, т | |||
| Кипятильник для воды | 1921 |
|
SU5A1 |
| Рак | |||
| ШУБНИКОВА Е.В | |||
