Способ получения полисахаридов из базидиомицетов Российский патент 2025 года по МПК A61K35/66 B01D11/02 

Изобретение относится к биотехнологии и касается способа получения биологически активных веществ (полисахаридов) из высших грибов - базидиомицетов.

Известен способ получения фракции полисахаридов из сухого порошка плодовых тел Вешенки обыкновенной (Pleurotus osteratus) с помощью облучения различными дозами (измеренными в Мрад) (Патент РФ 2657431, МПК А61К 36/06, опубл. 13.06.2018). Полисахариды выделяли посредством измельчения высушенных плодовых тел Pleurotus osteratus на мельнице и замораживания в течение 2-х часов при t=-15-20°C с последующим облучением потоком ускоренных электронов и смешивания с экстрагентом для отделения целевого продукта. Выход суммарных полисахаридов возрастал прямо пропорционально дозе облучения.

Недостатком данной технологии является использование для выделения биологически активных веществ (полисахаридов) облучения, усложняющего очистку готового продукта и повышающего экономические затраты.

Технической задачей изобретения является разработка нового экономичного и эффективного способа выделения водорастворимых полисахаридов, позволяющего получать целевые продукты высокого качества из грибного сырья.

Техническая задача решается тем, что происходит более эффективное использование грибного сырья и упрощение способа получения полисахаридов, не изменяя при этом биологически активных свойств полисахаридов.

Техническим результатом предлагаемого изобретения является полное извлечение целевого продукта из грибного сырья.

Технический результат достигается способом получения полисахаридов из грибов, включающем измельчение грибного сырья, смешивание и выдерживание его в течение времени при температуре, достаточной для наибольшего выхода биологически активных веществ из сырья, высушивание грибного сырья производится в сушилке, затем к сырью добавляется вода, и смесь помещается на магнитную мешалку на 3 часа при температуре 80°С. Далее смесь помещается на водяную баню на 3 часа и t=95°C, затем смесь центрифугируется при 3730g в течение 30 мин при t=6°C, полученный надосадок отделяется, а к осадку прибавляется вода, и снова смесь центрифугируется при прежних условиях, затем надосадки объединяются и ставятся на диализ на сутки, смена воды производится каждые 2 часа, снова смесь центрифугируется дважды: при 3730g - 30 мин, t=6°C, затем при 7500g - 20 мин, t=6°C, к полученному надосадку добавляется двойной объем этанола, и полученный раствор выдерживается при t=5°C в течение суток, затем центрифугируется при 3730g 40 мин при t=6°C, к полученному осадку добавляется дистиллированная вода в соотношении 1:75 и помещается на диализ на сутки при смене воды каждые 2 часа, полученный очищенный раствор концентрируется в роторном испарителе, замораживается жидким азотом и лиофильно высушивается.

Отличительной особенностью предлагаемого изобретения от прототипа является его универсальность, которая позволяет выделять полисахариды у различных видов базидиомицетов, а также быстрота, так как целевой продукт удается получить за относительно короткий временной срок. Экономичность способа заключается в минимальном использовании экстрагента и отсутствии этапа с облучением.

Заявленное техническое решение иллюстрируется таблицей, в которой представлены количественные и качественные показатели полисахаридов, полученных в примерах конкретной реализации.

Пример 1. Нет количественных параметров. Сырье предварительно измельчают с добавлением дистиллированной воды в соотношении 1:20 в гомогенизаторе. Затем сырье экстрагируют двойным объемом этилового спирта и помещают на сутки в холодильник. Затем отжимают и фильтруют через фильтровальную бумагу. Остаток сырья снова измельчают в гомогенизаторе с добавлением дистиллированной воды в соотношении 1:20, затем экстрагируют двойным объемом этилового спирта и помещают в холодильник (t=+5°C) на сутки. Затем отжимают и фильтруют через фильтровальную бумагу. Полученные смеси объединяют, помещают на диализ на сутки и лиофильно высушивают. Целевой выход из грибного сырья составляет 2-3% полисахаридов (глюкоза, манноза) (см. таблицу, граф. часть).

Пример 2. Сырье предварительно измельчают, замораживают при t=-18°C, затем размораживают и высушивают в сушилке. Сухое сырье измельчают и замораживают при t=-18°C. Размораживают и добавляют дистиллированную воду в соотношении 1:50, выдерживают в сухожаровом шкафу 3 часа при t=80°C и 3 часа при t=98°C. Затем охлаждают и центрифугируют при 1500g в течение 20 мин. К надосадку добавляют двойной объем этилового спирта и помещают в холодильник на сутки. Затем центрифугируют при 1500g в течение 20 мин. Осадок высушивают в сушилке. Целевой выход из грибного сырья составляет 3-4% полисахаридов (манноза, галактоза) (см. таблицу, граф. часть). Примеры 1 и 2 иллюстрируют способ получения полисахаридов из грибного сырья по способам, аналогичным прототипу.

Заявленный способ реализуется на следующем примере 3. Грибное сырье высушивают в сушилке, затем к сухому грибному сырью добавляют дистиллированную воду в соотношении 1:20 и помещают в магнитную мешалку на 3 часа при температуре 80°С, после помещают на водяную баню на 3 часа при t=95°C, центрифугируют при 3730g в течение 30 мин, t=6°C, надосадок отделяют, прибавляют к осадку воду в соотношении 1:20 с последующим центрифугированием при прежних условиях, надосадки объединяют и помещают на диализ на сутки, центрифугируют дважды: при 3730g - 30 мин, t=6°C, затем при 7500g - 20 мин, t=6°C, добавляют двойной объем этанола к полученному раствору и выдерживают при t=5°C сутки, центрифугируют при 3730g в течение 40 мин при t=6°C, добавляют дистиллированную воду к полученному осадку в соотношении 1:75. Затем надосадки объединяют и ставят на диализ на сутки при смене воды каждые 2 часа, концентрируют полученный очищенный раствор в роторном испарителе, замораживают жидким азотом и лиофильного высушивают. Целевой выход из грибного сырья составляет 4% полисахаридов (глюкоза, манноза, галактоза) (см. таблицу, граф. часть).

Пример 4. Грибное сырье высушивают в сушилке, затем к сухому грибному сырью добавляют дистиллированную воду в соотношении 1:20 и помещают в магнитную мешалку на 3 часа при температуре 40°С, после помещают на водяную баню на 3 часа при t=95°C, центрифугируют при 3730g в течение 30 мин, t=6°C, надосадок отделяют, прибавляют к осадку воду в соотношении 1:20 с последующим центрифугированием при прежних условиях, надосадки объединяют и помещают на диализ на сутки, центрифугируют дважды: при 3730g - 30 мин, t=6°C , затем при 7500g - 20 мин, t=6°C, добавляют двойной объем этанола к полученному раствору и выдерживают при t=5°C сутки, центрифугируют при 3730g в течение 40 мин при t=6°C, добавляют дистиллированную воду к полученному осадку в соотношении 1:75. Затем надосадки объединяют и ставят на диализ на сутки при смене воды каждые 2 часа, концентрируют полученный очищенный раствор в роторном испарителе, замораживают жидким азотом и лиофильного высушивают. Целевой выход из грибного сырья составляет 3% полисахаридов (глюкоза, манноза, галактоза) (см. таблицу, граф. часть).

Пример 5. Грибное сырье высушивают в сушилке, затем к сухому грибному сырью добавляют дистиллированную воду в соотношении 1:20 и помещают в магнитную мешалку на 3 часа при температуре 60°С, после помещают на водяную баню на 3 часа при t=95°C, центрифугируют при 3730g в течение 30 мин, t=6°C, надосадок отделяют, прибавляют к осадку воду в соотношении 1:20 с последующим центрифугированием при прежних условиях, надосадки объединяют и помещают на диализ на сутки, центрифугируют дважды: при 3730g - 30 мин, t=6°C , затем при 7500g - 20 мин, t=6°C, добавляют двойной объем этанола к полученному раствору и выдерживают при t=5°C сутки, центрифугируют при 3730g в течение 40 мин при t=6°C, затем при 7500g - 20 мин, t=6°C, добавляют двойной объем этанола к полученному раствору и выдерживают при t=5°C сутки, центрифугируют при 3730g в течение 40 мин при t=6°C, добавляют дистиллированную воду к полученному осадку в соотношении 1:75. Затем надосадки объединяют и ставят на диализ на сутки при смене воды каждые 2 часа, концентрируют полученный очищенный раствор в роторном испарителе, замораживают жидким азотом и лиофильного высушивают. Целевой выход из грибного сырья составляет 3,5% полисахаридов (глюкоза, манноза, галактоза) (см. таблицу, граф. часть).

В примерах 1 и 2 был меньший выход продукта, и выявлено 2 углевода, а в примерах 4 и 5 выявлено 3 углевода, но был меньший выход продукта (см. таблицу, граф. часть). Увеличение температуры до 80°С (пример 3) вместо 40°С и 60°С при первоначальном перемешивании на магнитной мешалке в течение 3 часов приводит к значительному увеличению выхода целевого продукта до 4% и выявлению 3 углеводов (глюкоза, манноза, галактоза), что свидетельствует о полном извлечении целевого продукта из грибного сырья, обуславливающего высокое качество продукта.

Изобретение относится к биотехнологии и касается способа получения биологически активных веществ (полисахаридов) из высших грибов - базидиомицетов. Способ получения полисахаридов из грибов, включающий измельчение сухого грибного сырья, смешивание и выдерживание его в течение времени при температурах, достаточных для наибольшего выхода целевых биологически активных веществ из сырья, при этом высушивание грибного сырья производится в сушилке, затем к высушенному сырью добавляют дистиллированную воду в соотношении 1:20, смесь помещается в магнитную мешалку на 3 часа при температуре 80°С, далее смесь помещается на водяную баню на 3 часа при температуре 95°С, далее смесь центрифугируют при 3730g в течение 30 мин, t=6°C, полученный надосадок отделяется, а к осадку прибавляется вода в соотношении 1:20, и снова смесь центрифугируется при прежних условиях, затем надосадки объединяются и ставятся на диализ на сутки, смена воды производится каждые 2 часа, снова смесь центрифугируется дважды: при 3730g - 30 мин, t=6°C, затем при 7500g - 20 мин, t=6°C, к полученному надосадку добавляется двойной объем этанола и выдерживается при t=5°C в течение суток, затем повторно центрифугируется при 3730g в течение 40 мин при t=6°C, к полученному осадку добавляют дистиллированную воду в соотношении 1:75, затем надосадки объединяют и ставят на диализ на сутки при смене воды каждые 2 часа, полученный очищенный раствор концентрируется в роторном испарителе, замораживается жидким азотом и лиофильно высушивается. Вышеописанный способ позволяет полностью извлечь целевой продукт из грибного сырья. 1 табл., 5 пр.

Способ получения полисахаридов из грибов, включающий измельчение сухого грибного сырья, смешивание и выдерживание его в течение времени при температурах, достаточных для наибольшего выхода целевых биологически активных веществ из сырья, отличающийся тем, что высушивание грибного сырья производится в сушилке, затем к высушенному сырью добавляют дистиллированную воду в соотношении 1:20, смесь помещается в магнитную мешалку на 3 часа при температуре 80°С, далее смесь помещается на водяную баню на 3 часа при температуре 95°С, далее смесь центрифугируют при 3730g в течение 30 мин, t=6°C, полученный надосадок отделяется, а к осадку прибавляется вода в соотношении 1:20, и снова смесь центрифугируется при прежних условиях, затем надосадки объединяются и ставятся на диализ на сутки, смена воды производится каждые 2 часа, снова смесь центрифугируется дважды: при 3730g - 30 мин, t=6°C, затем при 7500g - 20 мин, t=6°C, к полученному надосадку добавляется двойной объем этанола и выдерживается при t=5°C в течение суток, затем повторно центрифугируется при 3730g в течение 40 мин при t=6°C, к полученному осадку добавляют дистиллированную воду в соотношении 1:75, затем надосадки объединяют и ставят на диализ на сутки при смене воды каждые 2 часа, полученный очищенный раствор концентрируется в роторном испарителе, замораживается жидким азотом и лиофильно высушивается.