Способ получения лейкопитарного бета @ -гликопротеида Советский патент 1986 года по МПК G01N33/48 

Изобретение относится к медицинской биохимии, а именно к препаратив- :ности технологической биохимии,, и касаетсяполучения биологически активного белкового продукта - лейкоци- тарного бета -гликопротеида, необходимого для получения моноспецифических антисывороток, и определения это

го белка, а также для тестирования его биологической активности.

Целью изобретения является увеличение чистоты целевого продукта.

Способ поясняется следующими примерами .

Пример 1. 500 мл женского но лока смешивают с 500 мл влажной двуокиси алюминия, инкубируют 20 мин на магнитной мешалке, после чего трижды .отмывают двуокись алюминия 1 л дистиллированной воды, постоянно отделя сорбент при помопда центрифугирования К отмытой двуокиси алюминия добавляю 400 мл (50% насыщения) насьщенного раствора сернокислого аммония, оставляют на 24 ч при 4°С, центрифугируют при 80002 в течение 30 мин, надоса- док удаляют, а осадок растворяют в 40 мл дистиллированной воды и диали- эуют против дистиллированной воды при .

Полученную после диализа фракцию смешивают с 20 мл влажного SP-сефа- декса С-50 (приготовленного путем предварительного замачивания дистиллированной водой), инкубируют в тече ние 20 мин при постоянном помешивании, центрифугируют, надосадок удаляют, а сефадекс с сорбированными бел- Kaj4H трижды отмывают 1 л дистиллированной воды, удаляя воду при помощи центрифугирования. К отмытому сефа- дексу добавляют 20 мл 8%-ного раствора хлористого натрия, инкубируют при перемешивании 20 мин, осадок отделяют центрифугированием, а надоса- дочную жидкость диализуют против дистиллированной воды и лиофилизируют, Таким образом получают препарат лейкоцитарного бета,-гликопротеида с чистотой выхода 80%, выход белка составляет 30%.

5

0

0

5

0

35

0

45

50

Пример2.- 500 мл женского молока смешивают с 500 мл влажной двуокиси алюминия, дальнейшую обработку проводят как описано в примере 1. К отмытой двуокиси алюминия добавляют 400 мл насьш1енного раствора гидрофосфата натрия, в дальнейшем проводят обработку, как в примере 1, к полученному надосадку добавляют 480 мл (60%) насьш;енного раствора сернокислого аммония, обработка в дальнейшем проводится как в примере 1. Элюацию сефадекса проводят 12%-ным раствором хлористого натрия с дальнейшей обра-, боткой, как в примере 1. Таким образом, получают препарат лейкоцитарного бета., -гликопротеида с чистотой выхода препарата 75%, выходом белка 35%.

Применение адсорбционной хроматографии с двуокисью алюминия в качестве сорбента приводит к меньшему количеству примесей тл большей чистоте препарата по сравнению с аналогом ( и 80% соответственно). Выбранные параметры представлены таблицей.

Таким образом, приведенная таблица свидетельствует, что выбранные параметры являюfcя оптимальными, повышают чистоту и выход препарата по сравнению с прототипом.

Формула изобретения

Способ получения лейкоцитарного бет -гликопротеида путем фракционирования женского молока, отличающийся тем, что, с целью увеличения чистоты целевого продукта, фракционирование осуществляют путем . адсорбционной хроматографии на двуокиси алюминия, элюции насыщенным раствором двузамещенного гидрофосфата натрия, центрифугирования, осаждения надосадка сернокислым аммонием при 50-60% насыщения с последующей ионообменной хроматографией растворённого осадка на катионитном сильно основном сефадексе зернистости и элюцией 8-1 2%-ным раствором поваренной соли.

40 50-60

70

50-60 50-60 50-60

Редактор А.Долинич

.Заказ 7062/50Тираж 778 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР

по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-полиграфическое предприятие, г. Ужгород, ул. Проектная, 4

15 35 55 20 35 40

75 80 60 70 80 55

Составитель П.Бонарцев

Техред В.Кадар Корректор Е.Рошко

Изобретение относится к медицинской биохимии, может быть применено при получении биологически активного белкового продукта - лейкоцитарного бета -гликопротеида для получения моноспецифических антисывороток, определения этого белка, а также для тестирования его биологической активности. Цель изобретения - увеличение чистоты целевого продукта путем фрак(56) № 7, ционирования женского молока. Для этого женское молоко смешивают с двуокисью алюминия, инкубируют 20 мин, трижды отмывают двуокись алюминия дистиллированной водой, всякий раз отделяя сорбент центрифугированием. К отмытой двуокиси алюминия добавляют 50-60%-ньй насьщенный раствор сер- но-кислого аммония, оставляя на сутки при 4°С, центрифугируют, надосадок, удаляют, а осадок диализуют против дистиллированной воды при 4°С. Затем фракцию смешивают с влажным SP-ce- фадексом G-50, инкубируют, центрифугируют, надосадок удаляют, а сефа- декс с сорбированными белками трижды отмывают в литре дистиллированной воды, всякий раз удаляя воду центрифугированием. Далее к отмытому сефадек- су добавляют 8-12%-ный раствор NaCl, инкубируют, осадок отделяют центрифугированием. Надосадочную жидкость диализуют против дистиллированной воды и лиофилизуют. Таким образом получают препарат лейкоцитарного бета, -гликопротеида. 1 табл. (Л to 00 о СП 4 о